IIntrodução A utilização excessiva de antimicrobianos na medicina humana, veterinária e agricultura resultou no aparecimento da resistência bacteriana. Este fenômeno gera problemas de saúde pública que podem resultar na reemergência de doenças infecciosas. O uso de antibióticos, principalmente de forma profilática, tornou-se prática na aquicultura, como ocorre no Brasil, onde a regulamentação para o uso de medicamentos veterinários é ineficiente. Além disso, há evidências da transferência de organismos resistentes para humanos por meio do consumo de produtos de origem animal, quando, durante a fase de criação e produção destes foram administrados antibióticos. Objetivo Pesquisar a ocorrência de genes de resistência a antibióticos em filés de tilápia comercializados em supermercados do município de São Paulo SP. Material e Métodos Foram coletadas 10 amostras de filé de tilápia e realizada a pesquisa de coliformes termotolerantes como indicadores das condições higiênico-sanitárias do alimento. Em seguida, as amostras foram inoculadas em Caldo Lúria 0,5 por cento e o DNA total das bactérias cultivadas nesse meio foi extraído por meio de choque térmico para pesquisa de genes de resistência aos antibióticos -lactâmicos e tetraciclinas pela PCR. Os genes identificados pela PCR foram confirmados pelo sequenciamento. Resultados Em 100 por cento das amostras analisadas o resultado para coliformes termotolerantes foi < 3 NMP.g-1. Na pesquisa de genes de resistência a -lactâmicos, o gene blaOXY-5 foi detectado em 90 por cento das amostras, blaTEM-1b em 20 por cento , blaLEN-16 em 10 por cento , blaSHV-28 em 10 por cento , blaKPC-2 em 20 por cento , blaMOX-6 em 10 por cento e blaCphA em 60 por cento . Os genes de resistência a tetraciclinas identificados foram tetB em 10 por cento das amostras, tetC em 20 por cento , tetD em 80 por cento , tetE em 50 por cento , tetG em 60 por cento , tetO e tetS em 10 por cento cada e tetW em 20 por cento . Conclusões Em 90 por cento das amostras foi identificada a presença de genes de resistência aos antibióticos -lactâmicos e tetraciclinas, demonstrando uma grande circulação de resistência bacteriana na aquicultura e verificando a necessidade de legislação e fiscalização mais atuantes no controle do uso de antibióticos na aquicultura / IIntroduction The excessive use of antimicrobials in human medicine, veterinary medicine and agriculture has resulted in the emergence of bacterial resistance. This phenomenon creates public health problems that may result in the re-emergence of infectious diseases. The use of antibiotics, mainly prophylactically, has become a practice in aquaculture, including Brazil, where the legislation for the use of veterinary drugs is inefficient. Furthermore, there is evidence of transmission of resistant organisms to humans through consumption of animal products, especially when the antibiotics have been administered during the raising and production of these animals. Objective To search for the occurrence of antibiotics resistance genes in tilapia fillets commercialized in supermarkets in São Paulo city - SP. Material and Methods 10 tilapia fillet samples were collected and submitted to fecal coliform search as an indicator of the sanitary conditions of the food. Then, the samples were inoculated into Luria broth 0,5 per cent and the total DNA was extracted from growing bacteria by thermal shock for the search of resistance genes to -lactam and tetracyclines antibiotics by PCR. The genes identified by PCR were confirmed by sequencing. Results In 100 per cent of samples the result was < 3 NMP.g-1 for fecal coliform organisms. In the study of -lactam resistance genes, blaOXY-5 gene was detected in 90 per cent of samples, blaTEM-1b in 20 per cent , blaLEN-16 in 10 per cent , blaSHV-28 in 10 per cent , blaKPC-2 in 20 per cent , blaMOX-6 in 10 per cent and blaCphA in 60 per cent . The tetracyclines resistance genes identified were tetB in 10 per cent of samples, tetC in 20 per cent , tetD in 80 per cent , tetE in 50 per cent , tetG in 60 per cent , tetO and tetS in 10 per cent each and tetW in 20 per cent . Conclusions 90 per cent of the samples showed the presence of -lactam and tetracyclines resistance genes, demonstrating a high circulation of bacterial resistance in aquaculture and verifying the need for more active law and surveillance in controlling the use of antibiotics in aquaculture.

Au cours des dernières décennies, une augmentation non négligeable du phénomène de résistance aux antibiotiques des bactéries a été observée. Ces bactéries possèdent plusieurs mécanismes de résistance parmi lesquels l’utilisation de transporteurs de type MDR (MultiDrug Resistance) dont certains appartiennent à la famille des transporteurs ABC (ATP-Binding Cassette). Les transporteurs ABC sont des protéines membranaires et ubiquitaires qui possèdent une topologie commune avec deux domaines transmembranaires et deux domaines cytoplasmiques. Les transporteurs ABC de type exportateur permettent le transport de molécules à l’extérieur de la cellule en utilisant l’énergie fournie par l’hydrolyse de l’ATP. PatA-PatB est un transporteur ABC de Streptococcus pneumoniae, un pathogène humain responsable de pneumonies et de méningites. Cette protéine est impliquée dans la résistance de ce pathogène à des antibiotiques de types fluoroquinolones. Pour étudier son mécanisme moléculaire, nous avons optimisé la surexpression fonctionnelle de ce transporteur chez Escherichia coli. Ainsi, nous avons pu caractériser son activité de transport de drogues et son activité d’hydrolyse de nucléotides. Ces expériences ont révélé que PatA-PatB a la particularité d’utiliser préférentiellement le GTP comme source d’énergie, contrairement aux autres membres de cette famille. Afin d’identifier l’origine de cette propriété au niveau moléculaire, des expériences de mutagénèse dirigée ont été effectuées et nous avons ainsi identifié deux simples mutants qui transportent les drogues aussi bien avec du GTP que de l’ATP / The excessive use of antibiotics during the past decades led to the amplification of multidrug resistance in pathogenic bacteria. Bacteria have developed several mechanisms of antibiotic resistance. One of them involves the antibiotic efflux by MDR (MultiDrug Resistance) transporters, some of which belong to the ABC (ATP-Binding Cassette) transporter family. ABC transporter are ubiquitous membrane proteins with a conserved topology comprising four domains : two «TransMembrane Domain» and two cytoplasmic domains named « Nucleotide-Binding Domain ». ABC exporters expel drugs outside the bacteria using the energy of ATP hydrolysis. PatA-PatB is an ABC transporter from Streptococcus pneumoniae, a human pathogen bacterium responsible for pneumonia and meningitis. This protein is involved in S. pneumoniae resistance against fluoroquinolone antibiotics. To study the molecular mechanism, we optimized the functional expression of this transporter in Escherichia coli. Then, we characterized its drug transport activity and its nucleotide hydrolysis activity. These experiments showed that PatA-PatB, in contrast to other members of the ABC superfamily, preferentially uses GTP as energy supply. To identify the origin of this property at a molecular level, mutagenesis experiments were performed and we identified two mutants capable of an even drug transport with ATP and GTP

O uso de antibióticos para reduzir a infecção pós-operatória em cirurgia de terceiro molar permanece controverso. O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia da terapêutica com Amoxicilina em múltiplas doses para a prevenção de infecção em pacientes submetidos à extração de terceiro molar inferior com posição 2B (classificação de Pell & Gregory). O estudo foi prospectivo, cego, randomizado, duplo, controlado por placebo, com 32 pacientes. Cada paciente atuou como seu próprio controle usando a técnica de boca dividida. Um terceiro molar inferior foi retirado sob a cobertura de antibióticos no pós-operatório (500 mg de amoxicilina a cada 8 horas durante 7 dias) e o outro foi removido sem cobertura antibiótica pós-operatória (cápsulas de placebo a cada 8 horas durante 7 dias), mas em ambas cirurgias foi administrada dose única no pré-operatório de 1 g de amoxicilina. Os seguintes parâmetros foram avaliados no pré-operatório, no quarto e sétimo dias pós-operatórios: trismo, edema facial, temperatura corporal, linfadenopatia, infecção, disfagia e dor. Não houve diferença estatisticamente significativa nos parâmetros avaliados entre os pacientes operados (p> 0,05). Resultado do estudo mostrou que a administração de amoxicilina em dose única pré-operatória e em doses múltiplas pós-operatórias não se mostrou mais eficaz do que a administração somente em dose única pré-operatória com relação aos parâmetros clínicos avaliados nas exodontias de terceiros molares inferiores. / The use of antibiotics to reduce postoperative infection in third molar surgery remains controversial. The goal of this study was to evaluate the efficacy of multi-dose Amoxicilina therapy for the prevention of infection in patients undergoing lower third molar extraction with position 2B (Pell & Gregory classification). The study was a prospective, randomized, double blind, placebo-controlled trial with 32 patients. Each patient acted as their own control using the split-mouth technique. One lower third molar were removed under antibiotic cover postoperative (500 mg amoxicillin 8 hourly for 7 days) and the other were removed without antibiotic cover postoperative (placebo capsules 8 hourly for 7 days), but both surgery was administered preoperatively single dose of 1g of amoxicillin. The following parameters were evaluated on the preoperative and fourth, seventh days postoperative: trismus, facial swelling, body temperature, Lymphadenopathy, infection, dysphagia and pain. There was no statistically significant difference in the parameters evaluated between patients operated (p > 0.05). Results of the study showed that administration of amoxicillin single dose preoperative and postoperative multiple doses was not more effective than single dose administration only pre-operative with respect to clinical parameters evaluated in the lower third molar extractions.

INTRODUÇÃO: As Aeromonas são bactérias distribuídas predominantemente em meio aquático. São consideradas patógeno emergente, podendo causar doenças em peixes como também no homem. Os problemas mais comuns são a gastrenterite no homem e morte em peixes. OBJETIVO: Este estudo foi desenvolvido para comparar a identificação fenotípica com a genotípica, e também para conhecer o perfil de resistência aos antibióticos em Aeromonas caviae, A. aquariorum, e A. sanarellii isoladas do ambiente aquático e a presença de genes de virulência e resistência. MATERIAL E MÉTODOS: O DNA das 24 cepas em estudo foi extraído por choque térmico e purificado utilizando CTAB. Foram realizadas as PCRs para a detecção dos genes de virulência e dos genes de resistência, após a realização do antibiograma. RESULTADOS: Foram identificadas 4 A. caviae das quais 3(75,0 por cento) apresentaram pelo menos um dos genes act, ast ou alt. Das 3 A. aquariorum, 1(33,3 por cento) apresentaram positividade para os genes act e ast. Entre os 5 isolados de A. sanarellii 1(50,0 por cento) possuíam os genes alt e ast. Seis isolados não foram posicionados taxonomicamente entre as espécies descritas de Aeromonas, e dentre essas um exemplar apresentou o gene alt. Em relação às enzimas MBL e AmpC foram obtidos respectivamente: 3(100 por cento) e 3(100 por cento) em A. aquariorum; 2(50,0 por cento) e 4(100 por cento) em A. caviae; 3(75,0 por cento) e 5(100 por cento) em Aeromonas spp.; 1(20 por cento) e 5(100 por cento) A. sanarellii; Nenhum isolado apresentou resultado positivo, no teste fenotípico, para a produção de ESBL. Com a realização da PCR foi detectada a presença de 5 amostras com gene tipo blaMOX, 21blaCPHA , 17 tipo blaTEM e 2 cepH. CONCLUSÃO: Os resultados sugerem que os isolados podem servir potencialmente como reservatórios de resistência aos antimicrobianos e ainda, que os isolados podem ser considerados patógeno emergentes e significativos para a saúde pública / INTRODUCTION: Aeromonas spp. is predominantly distributed in the aquatic environment. They are regarded as emerging pathogen, causing disease in fish but also in man. The most common problems are gastroenteritis in humans and death in fish. OBJECTIVE: This study was designed to compare phenotypic with genotypic identification, and also to know the profile of antibiotic resistance in Aeromonas caviae, A. aquariorum, and A. sanarellii isolated from aquatic environment and the presence of virulence genes and resistance. MATERIAL AND METHODS: DNA from 24 strains under study was extracted by thermal shock and purified using CTAB. PCR reactions were performed for the detection of virulence and resistance genes, after the completion of the antibiotic resistance test. RESULTS: We identified four A. caviae from which 3(75.0per cent) had at least one of the genes act, ast or alt. From 3 A. aquariorum, 1(33.3per cent) was positive for the genes act and ast. Among the five isolated A. sanarellii, 1(50.0per cent) had the alt and ast genes Six isolates were not positioned within taxonomically described species of Aeromonas, and among these only one strain presented the alt gene. Regarding the MBL and AmpC it was obtained respectively: 3(100per cent) and 3(100per cent) isolates from A. aquariorum; 2(50.0per cent) and 4(100per cent) isolates from A. caviae; 4(66.7per cent) and 3(50.0per cent) isolates from Aeromonas spp.; and 1(20per cent) and 5 (100per cent) isolates from A. sanarellii. None of the isolates showed positive results in the phenotypic test for ESBL production. The PCR reaction detected the presence of 5 strains with blaMOX-like gene; 21 with blaCPHA gene; 17 with blaTEM-like gene and 2 with cepH gene. CONCLUSION: These findings suggest that the isolates may serve as potential reservoirs of antimicrobial resistance and also that the isolates could be considered emerging pathogens of public health significance

Estudos sobre profilaxia antibiótica em pacientes imunossuprimidos submetidos a procedimentos cruentos odontológicos são bastante escassos, no entanto já existe um consenso de que estes pacientes são sabidamente de risco para infecção de sítio cirúrgico odontológico e que, portanto, necessitam de profilaxia antibiótica. Não é definido, no entanto, o regime profilático ideal para estes pacientes. O objetivo deste estudo é comparar a duração de antibioticoprofilaxia através de dois esquemas para prevenção de infecção após procedimentos odontológicos cruentos em pacientes imunossuprimidos transplantados renais ou hepáticos e em pacientes imunossuprimidos por quimioterapia. Este ensaio clínico foi randomizado e avaliou pacientes consecutivos com neoplasia e que fizeram uso de quimioterapia anti-neoplásica no último mês e pacientes transplantados de órgãos sólidos com medicação imunossupressora anti-rejeição, que necessitavam de exodontia e/ou raspagem periodontal como tratamento odontológico. O atendimento foi realizado na Divisão de Odontologia do Hospital das Clínicas da Faculdade Medicina da Universidade de São Paulo e foram incluídos pacientes da rotina do ambulatório que atendiam aos critérios de inclusão para participarem do protocolo da pesquisa e que concordaram em participar, assinando o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido. Os pacientes foram randomizados para um dos dois grupos de regime profilático (grupo 1 - uma cápsula de 500mg de amoxicilina duas horas antes do procedimento odontológico; grupo 2 duas cápsulas de 500mg de amoxicilina, sendo a primeira duas horas antes do procedimento e a segunda oito horas após a primeira) e realizaram exame de sangue para avaliação da cultura hematológica após a realização do procedimento, sendo acompanhados durante um mês. A amostra calculada foi de 414 pacientes, sendo 207 em cada grupo. Os dados foram analisados através do programa SPSS Windows (versão 13.0, Chicago IL) e a partir daí foi obtida uma tabela descritiva e utilizado o teste qui-quadrado para comparação das variáveis entre os dois grupos. O nível de significância foi de p< ou = 0,05. Foi realizada também uma análise multivariada. A amostra foi analisada durante o período de novembro de 2006 a novembro de 2007. Não ocorreram os seguintes desfechos: infecção do sítio cirúrgico, antibiótico introduzido pelo médico no pós-operatório em até 30 dias após o procedimento odontológico e morte até o 15º dia após o procedimento odontológico. Os desfechos encontrados foram: necessidade de tomar analgésico após o 3º dia e até o 15º dia após o procedimento (3 no grupo 1 e 1 no grupo 2) e internação hospitalar até o 15º dia após o procedimento (2 no grupo 1 e 1 no grupo 2). A análise multivariada não alterou os resultados. Este estudo não demonstrou uma diferença entre utilizar uma ou duas doses de amoxicilina como profilaxia em procedimentos invasivos dentários em pacientes imunosuprimidos / Studies about antibiotic prophylaxis in immunosuppressed patients submitted to odontological invasive procedures are scarse, however there is already a consensus that these patients are in risk for post-operative infection in dentistry and that, therefore, they need antibiotic prophylaxis. It is not defined, however, the best prophylactic regimen for these patients. The aim of this study was to compare two regimens of antimicrobial prophylaxis in dental invasive procedures in immunosuppressed patients by chemotherapy for cancer or solid organ transplants. This is a randomized controlled study and it evaluated consecutive patients with cancer and that were submitted to chemotherapy in the last month and solid organ transplanted patients who needed exodontia or periodontal scaling and root planning as odontological treatment. This study was done in the Divisão de Odontologia of Hospital das Clínicas of Faculdade Medicina of the Universidade de São Paulo and it was included patients from the routine of the ambulatory who presented all the inclusion criteria and signed the informed consent. Patients were randomly assigned to one of the groups of prophylactic regimens (group 1 amoxicillin 500mg administered orally two hours before the procedure; group 2 amoxicillin 500mg administered orally two hours before the procedure and a second dose eight hours later) and had blood sample collected for culture immediately after the procedure, being followed up for one month. The total sample size was of 414 patients, being 207 in each group. Data were analyzed using the software SPSS Windows (version 13.0, Chicago IL). The characteristics of the patients of the 2 groups were compared using the chi-square test. The two groups were compared as to each outcome. A multivariate analysis was performed evaluating the groups as to the occurrence of any of the outcomes, by multiple logistic regression. The sample was evaluated between november of 2006 and november of 2007. The following outcomes did not occur: surgical site infection; systemic use of an antimicrobial drug within 30 days after the procedure and death by any reason within 15 days after the procedure. The other outcomes were: use of medication against pain after 3rd day after the procedure (three in group 1 and one in group 2) and hospitalization for any reason within 15 days after the procedure (two in group 1 and one in group 2). The multivariate analyses did not alter the results. This study did not demonstrate a difference between using one or two doses of amoxicillin as prophylaxis in invasive odontological procedures in immunosuppressed patients

Made available in DSpace on 2017-07-24T19:38:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Elementos pre-textuais.pdf: 283140 bytes, checksum: 3b59ced863de33023026b439f3c52714 (MD5) Previous issue date: 2009-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The use of biomaterials comes from old times and recently bioceramics have been deeply investigated as a source of material for bone implant. Amongst the different biomaterials, hydroxyapatite (HA) has great importance for being one of the compounds which forms the bone mineral phase. Therefore, HA has been largely studied, mainly due to the fact that it is a bioactive compound. Calcium phosphate synthesis via precipitation presents great advantages such as low cost and simplicity, but most procedures described in literature regard the formation of non stoichiometric products and phase mixture. This work studied the HA synthesis by analyzing the influence of gelatin concentration in the precipitation means on the characteristics of the hydroxyapatite obtained. Gentamicin was also incorporated to the HA samples and antimicrobial activity was analyzed. The hydroxyapatite was obtained through precipitation in aqueous and gelatin means, being later on dried, sieved and calcined at 700ºC. Gelatin concentrations of 1, 6, 10 and 60 g.L-1 were used. Then, gentamicin sulfate was added, 1% in mass. Samples were characterized through Xray diffraction, specific superficial area through the BET method, thermal analysis, infrared spectroscopy and transmission and scanning electronic microscopy. The Xray diffraction revealed the presence of HA phase in all samples; and by refining through the Rietveld method, it could be seen, in the gelatin free sample, the presence of calcium carbonate and pure HA, for the sample prepared in gelatin, indicating that the presence of gelatin made the hydroxyapatite phase stable. XRF and EDS indicated that Ca/P ratio was slightly above what had been expected to obtain stoichiometric hydroxyapatite. The granulometric distribution analysis and superficial area through the BET method indicated differences in the average size of agglomerates and the superficial area of the material in relation to the synthesis and samples preparation process to receive the antibiotic, which was processed through milling in a ball mill. SEM and TEM revealed morphological and structural aspects characteristic of the hydroxyapatite with the formation of nanometric crystal agglomerates. Samples microbial activity evaluation with human saliva showed that pure HA has the effect of inhibiting microbial growth; CFU counting was observed to reduce. For the samples with antibiotic there was a CFU equal zero proving that the process used for gentamicin incorporation to the HA kept the antibiotic property of the material, and that the same was released during the tests. / A utilização de biomateriais remonta à antiguidade e recentemente as biocerâmicas têm sido fortemente investigadas como material para implantes ósseos. Dentre os diferentes biomateriais a hidroxiapatita (HA) possui grande importância por ser um dos compostos que forma a fase mineral óssea. Assim, a HA tem sido amplamente estudada, especialmente pelo fato de ser um composto bioativo. A síntese de fosfatos de cálcio via precipitação apresenta vantagens como baixo custo e simplicidade, mas a maioria dos procedimentos descritos na literatura apresenta formação de produtos não estequiométricos e mistura de fases. Neste trabalho foi estudada a síntese de HA analisando a influência da concentração de gelatina no meio de precipitação nas características da hidroxiapatita obtida. Também foi realizada a incorporação de gentamicina às amostras de HA obtidas e a análise do efeito antimicrobiano. A hidroxiapatita foi obtida através de precipitação em meio aquoso e gelatinoso, sendo posteriormente secada, peneirada e calcinada a 700ºC. Foram utilizadas as concentrações de gelatina de 1, 6, 10 e 60 g.L-1. Em seguida, foi efetuada a adição de sulfato de gentamicina na proporção de 1% em massa. As amostras foram caracterizadas por difração de raios X, distribuição do tamanho de partícula, área superficial específica pelo método BET, análise térmica,espectroscopia no infravermelho e microscopia eletrônica de varredura e transmissão. A análise de DRX revelou a presença da fase de HA em todas as amostras e através do refinamento pelo método de Rietveld, verificou-se, para amostra obtida sem adição de gelatina, a presença de carbonato de cálcio, e HA pura para amostra preparada em meio gelatinoso, indicando que a presença de gelatina estabilizou da fase hidroxiapatita. As análises FRX e EDS indicaram que a razão Ca/P ficou ligeiramente acima da esperada para obtenção de hidroxiapatita estequiométrica. A análise de distribuição granulométrica e área superficial pelo método BET indicaram diferenças no tamanho médio de aglomerados e na área superficial do material relativas à síntese e ao processo de preparação das amostras para receber o antibiótico, o qual se processou com moagem em moinho de bolas. As análises de MEV e MET revelaram aspectos morfológicos e estruturais característicos da hidroxiapatita, observando-se formação de aglomerados de cristais nanométricos. A avaliação da atividade microbiológica das amostras frente à saliva humana mostrou que a HA possui efeito inibidor no crescimento microbiano, tem sido observada redução na contagem de UFC. Para as amostras com a adição do antibiótico obteve-se contagem UFC igual a zero comprovando que o processo utilizado para incorporação da gentamicina na HA manteve a propriedade antibiótica do material, e que o mesmo foi liberado durante os testes.

The environment is increasingly recognised as a key player in the emergence and mobilisation of antibiotic resistance, which negatively impacts human health, healthcare systems, and farming practices worldwide. Recent work has demonstrated concentrations of antibiotics in the natural environment may select for resistance in situ, but a scarcity of meaningful data has prevented rigorous environmental risk assessment of antibiotics. Without such data, mitigation strategies, such as improved antibiotic stewardship or environmental discharge limits, cannot be effectively designed or implemented. This thesis designed and developed two methods for determining effect concentrations of antibiotics in complex microbial communities, thereby generating a significant amount of data to address this knowledge gap. Minimal selective concentrations (MSCs) were determined in long term selection experiments for four classes of antibiotic at concentrations as low as 0.4 μg/L, which is below many measured environmental concentrations. Lowest observed effect concentrations were determined using a short term, growth based assay which were highly predictive of MSCs. A novel finding was significant selection for cefotaxime resistance occurred at a wide range of antibiotic concentrations, from 125 μg/L - 64 mg/L, which has important clinical implications. Determination of MSC in single species assays was also shown to be a poor predictor of MSC in a complex microbial community. Co-selection for antimicrobial resistance was demonstrated in selection experiments and through improved understanding of class 1 integron evolution, assessing selective effects on resistance gene acquisition using a novel PCR method and next-generation sequencing. In the final study, a novel resistance determinant (UDP-galactose 4-epimerase) conferring cross-resistance to biocides and antibiotics was discovered, providing a target for further study. These findings indicate selection and co-selection for antimicrobial resistance is likely to occur in the environment, and provides the means to rapidly generate further data to aid in the development of appropriate mitigation strategies.

Orientador: José Moacir Marin / Banca: Angela Cleusa de Fátima Banzatto de Carvalho / Banca: Maria da Penha Longo Mortatti Catanozi / Banca: Rubens Toshio Fukuda / Banca: Alessandra Aparecida Medeiros / Resumo: Escherichia coli Shigatoxigênica (STEC) tem sido implicada como agente causador de severas doenças humanas. Amostras de carne moída, moedor de carne e mãos de manipuladores de 23 estabelecimentos comerciais foram testadas para o isolamento de E. coli usando métodos microbiológicos padronizados. Um total de 287 cepas de E. coli isoladas destes diferentes locais foram submetidas ao PCR para detecção de genes stx 1, stx 2 e eae. As cepas positivas para o gene stx foram analisadas verificando se pertenciam ao sorogrupo 0157. Quatro cepas de STEC foram isoladas, sendo 2 de carne moída e 2 de moedor de carne, todas possuíam o gene stx 2, sendo negativas para a presença do gene eae e o sorogrupo 0157. Todas as E. coli isoladas, incluindo as 4 STEC, foram pesquisadas para sua resistência a 12 antibióticos. Altos níveis de resistência frente aos diferentes agentes antimicrobianos foram detectados; as resistências maiores foram observadas para a tetraciclina (76,6%), amoxicilina (64,1 %) e cefalotina (58,8%). Os altos níveis de resistência antimicrobiana salientam a necessidade para a utilização racional destes agentes em bovinos. Foram observadas índices elevados de sensibilidade frente a associação amoxicilina + ácido clavulânico (96,6%), ceftriaxona (92,7%) e gentamicina (90,3%). / Abstract: Shiga toxigenic Escherichía colí (STEC) has been implicated as the causative agent of several human diseases. Samples from 23 retail meat stores (ground beef, grinding-machine and human hand) were assayed for E. calí isolation using microbiological standard methods. A total of 287 E. colí isolates from these different origins were submitted to polymerase chain reaction for the detection of stx 1, stx 2 and eae genes. The isolates positives for stx gene were serotyped for 0157. Four STEC isolates were recovered, 2 from ground beef and 2 from grinding-machine; ali harbored the stx 2 gene and were negative for the presence of the eae gene and the serogroup 0157. Ali E. colí isolates including the four STEC were screened for antibiotic resistance. High levels of resistance against different antimicrobial agents were detected; those most commonly observed were to tetracycline (76.6%), amoxicillin (64.1 %) and cephalothin (58.8%). Such high levels of antimicrobial agents' resistance highlight the need for a more rational use of these agents in cattle. Susceptibility was high for amoxicillin + clavulanic acid (96,6%), ceftriaxone (92,7%) and gentamicin (90,3%). / Doutor

Aim: This thesis aims to explore and investigate the level and process of adoption of Antimicrobial Stewardship Programmes (ASPs) and factors influencing their implementation in Saudi Ministry of Health (MOH) hospitals. The findings of this study will provide hospitals and policy makers with evidence-based recommendations on how barriers to ASPs adoption can be overcome, which will ultimately improve antimicrobial use and reduce antimicrobial resistance (AMR). Method: A mixed method approach was carried out using both qualitative and quantitative research methods. Semi-structured interviews were conducted with healthcare professionals in three Saudi hospitals to explore the enablers and barriers to their adoption of ASPs. A survey was then developed based on these findings to investigate the level of hospitals' adoption of ASPs and factors influencing their implementation at a national level. Further, a case study using in-depth interviews was utilised to understand the process of ASP adoption in a Saudi hospital, and how adoption challenges were addressed. Finally, a self-administered questionnaire was used to examine patients' knowledge and perceptions of antimicrobial use and resistance, and to evaluate the institutional role of patient education on antimicrobial use in two Saudi hospitals. The overall methodology of the research is summarised in Figure I. Results: Despite the introduction of a national ASP strategy, adoption of ASPs in Saudi MOH hospitals remains low. Organisational barriers such as the lack of senior management support, lack of supportive IT infrastructure and the shortage of ASP team members hinder hospitals' efforts to adopt ASPs. Further barriers relate to the lack of formal enforcement by MOH and the physicians fears of patients' complications and clinical liability. Patients admitted to Saudi hospitals lack knowledge and perceptions of AMR, and the adoption of ASPs may improve hospitals' role in patients' education. Conclusions: Despite the established benefits of ASPs, their adoption in Saudi MOH hospitals remains low. Urgent action is needed to address the strategies priorities associated with AMR, including access to antimicrobials, antimicrobial stewardship and education and research. Policy makers are urged to consider making ASPs adoption in hospitals a regulatory requirement supported by national guidelines and surveillance programmes. It is essential to increase the provision of ID and infection control residency and training programmes to meet the extreme shortage of ID physicians, pharmacists, microbiologists and infection control practitioners. Higher education institutions and teaching hospitals are required to introduce antimicrobial prescribing and stewardship competencies into undergraduate Medical, Pharmacy, Dental, Nursing and Veterinary curriculum, as well as introduction of AMR topics in order to increase knowledge and awareness of ASPs and AMR. Collaboration between ASPs adopting and non-adopting hospitals is essential to share implementation experience, strategies and solutions to overcome barriers. Healthcare specialised associations are needed to be part of AMR conversation and guide healthcare professionals' training and accreditation. Multiple stakeholders should be actively part of the conversations around tacking AMR. Primary care, secondary care, community pharmacies and policy makers should strive to create a shared culture of responsibility among all healthcare partners to improve antimicrobial therapy and reduce risks of AMR.

Introdução - Vibrio metschnikovii é um bacilo gram-negativo, potencialmente patogênico, amplamente distribuído e isolado de ecossistemas aquáticos e raramente de amostras clínicas de humanos. Na triagem laboratorial para espécies do gênero Vibrio, Vibrio metschnikovii é descartado por ser oxidase negativa, característica que o diferencia das demais espécies patogênicas. Em relação à pesquisa do perfil de suscetibilidade a antibióticos, esta é pouco realizada com isolados de origem ambiental. Objetivos - Isolar e identificar genotipicamente Vibrio metschnikovii de amostras ambientais e caracterizar seu perfil de suscetibilidade a antibióticos. Métodos - Um total de dez amostras foram obtidas de Março a Agosto de 2009, sendo uma de molusco (vôngole), três de peixe (pescada, sardinha e tainha) e seis de esgoto (três de esgoto bruto e três de esgoto tratado). O isolamento foi inicialmente realizado em meio seletivo para Vibrio (ágar TCBS) e a confirmação da espécie foi feita com iniciadores específicos através da PCR utilizando o DNA extraído pela técnica de choque térmico. O antibiograma foi realizado com base no documento M45-A CLSI 2006, seguindo a técnica de disco difusão, empregando quinze antibióticos. Foi realizada a pesquisa de genes de resistência a beta-lactâmicos e aminoglicosídeos. Resultados - De 123 isolados com características típicas para a espécie, 70 foram confirmados como Vibrio metschnikovii através da PCR, sendo 43 de amostras de molusco e peixes e 27 de esgoto. Um total de 66 isolados foi resistente a pelo menos um antibiótico, mas nenhum gene de resistência foi detectado. Conclusões - Os resultados indicam que Vibrio metschnikovii pode ser isolado de diferentes amostras de origem ambiental, demonstrando que esses microrganismos podem ter distribuição mais ampla que o descrito na literatura. A PCR foi uma ferramenta fundamental para superar a fragilidade da identificação da espécie segundo o método fenotípico. Além disso, a resistência observada mostra que Vibrio metschnikovii pode atuar como um reservatório de genes de resistência que podem ser facilmente transferidos entre microrganismos em um mesmo ambiente. O perfil de suscetibilidade a antibióticos pode ser utilizado como referência na caracterização clínica deste patógeno em potencial, auxiliando na conduta terapêutica em casos de ocorrência de doentes acometidos pelo microrganismo em questão / Introduction - Vibrio metschnikovii is a gram-negative bacillus, potentially pathogenic, widely distributed and isolated from aquatic ecosystems and rarely from human clinical samples. At laboratorial screening for the species of the Vibrio genus, Vibrio metschnikovii is discarded for being oxidase negative, characteristic that differentiates it from the others pathogenic species. With regard to the research of antibiotic susceptibility profile, this is seldom done with environmental isolates. Objectives - To isolate and genotypically identify Vibrio metschnikovii from environmental samples and characterize the antibiotic susceptibility profile. Method - A total of ten samples were obtained from March to August 2009, with one of them originated from mussel (vongole), tree of fish (whitefish, sardine and mullet) and six from sewage (three from raw sewage and three from treated sewage). The isolation was initially performed in a selective medium for Vibrio (TCBS agar) and the specie confirmation was done with specific primers through PCR using DNA extracted by the thermal shock technique. The antibiogram was performed according to the document M45-A from CLSI 2006, following the technique of disk diffusion, using fifteen antibiotics. The research for beta-lactams and aminoglycosides resistance genes was also performed. Results Seventy out of 123 isolates, with typical characteristics for the specie, were confirmed as Vibrio metschnikovii by PCR, with 43 originated from mussel and fish and 27 from sewage. A total of 66 isolates were resistant to at least one antibiotic, however no resistance gene was detected. Conclusions The results indicate that Vibrio metschnikovii can be isolated from different samples of ambient origin, demonstrating that these microorganisms can have wider distribution than the described in literature. The PCR was a fundamental tool to overcome the fragility of the specie identification according to the phenotypic method. Furthermore, the resistance found shows that Vibrio metschnikovii can act as a reservoir of resistance genes that can easily be transferred between microorganisms in the same environment. The antibiotic susceptibility profile can be used as reference at the clinical characterization of this potential pathogen, assisting therapeutic management in cases of patients affected by this microorganism