Orientador: Pedro de Oliva Neto / Banca: Derlene Attili de Angelis / Banca: Lucinéia dos Santos / Resumo: O tratamento das infecções micóticas, incluindo as dermatofitoses, tem sido motivo de muita preocupação em todo o mundo. Esse fato é justificado pelo aumento da prevalência dessas doenças no cenário mundial, pela necessidade de ampliação dos poucos antifúngicos hoje disponíveis, e pelo aparecimento de cepas resistentes aos antifúngicos empregados na terapêutica clínica. No presente estudo visou-se testar a atividade antifúngica do precipitado, parte sólida proveniente da centrifugação do suco extraído da mucilagem, resíduo obtido do desfibramento da folha do sisal (Agave sisalana). A mucilagem foi processada por prensagem ou trituração e o suco obtido foi submetido a diferentes técnicas de purificação através de extrações por solventes orgânicos. O precipitado foi avaliado quanto à atividade antimicrobiana tanto em sua forma úmida como seca; que após secagem, este foi reidratado em água para a obtenção de um concentrado. Com esses tipos de tratamentos, foram realizados testes de Concentração Inibitória Mínima (CIM) pela técnica de macrodiluição em tubos, a fim de determinar ação antifúngica contra os micro-organismos descritos. Para o precipitado obtido da centrifugação do suco proveniente da prensagem da mucilagem, a CIM foi de: 98 μg/mL para Candida albicans, 783 μg/mL para Tricophyton mentagrophytes e 3125 μg/mL para Malassezia pachydermatis; resultados expressos em base seca. Para o precipitado obtido da centrifugação do suco resultante da trituração e filtração da mucilagem, a CIM foi de 128 μg/mL para C. albicans, 512 μg/mL para T. mentagrophytes e 2965 μg/mL M. pachydermatis, resultados em base seca. Na segunda etapa os precipitados secos após fracionamento com os solventes orgânicos foram reidratados em água e avaliados para os testes de CIM. A fração hexânica do precipitado do suco... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The treatment of fungal infections, including dermatophytosis, has been the subject of intense concern worldwide. This fact is explained by the increased prevalence of these diseases on the global stage, the need for expansion of the few antifungal drugs available today, and the emergence of strains resistant to antifungal agents used in clinical therapy. The present study aimed to test the antifungal activity of the precipitate, the solid part from the centrifugation of the juice extracted mucilage residue obtained from shredding the leaf of sisal (Agave sisalana). The mucilage was processed by pressing or crushing and the juice obtained was subjected to various purification techniques using extractions by organic solvents. The wet and dried precipitate were evaluated for antimicrobial activity both in the wet and dry, which, after drying, this was rehydrated in water to obtain a concentrate. After these treatments, tests of Minimum Inhibitory Concentration (MIC) were performed by the macrodilution technique in tubes, in order to determine antifungal action against the microorganisms described. The precipitate obtained by centrifuged juice from the pressing of mucilage, showed MIC = 98 μg/mL for Candida albicans, 783 μg/mL for Trichophyton mentagrophytes and 3125 μg/mL for Malassezia pachydermatis, results expressed on dried basis. The precipitate obtained by centrifuged juice from the crushing and filtration of mucilage, the MIC was 128 μg/mL for C albicans, 512 μg/mL for T. mentagrophytes and 2965 μg/mL for M. pachydermatis results on dried basis. In a second step, the new precipitates obtained from the fractionation of the dried precipitate with organic solvents were rehydrated in water and evaluated for MIC testing. The hexane fraction of the precipitate juice obtained from the pressing of mucilage had a remarkable... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Luis Vitor Silva do Sacramento / Banca: Fernanda de Freitas Anibal / Banca: Tais Maria Bauab / Resumo: Azadirachta indica Azadirachta indica Azadirachta indica Azadirachta indica Azadirachta indica Azadirachta indica A. Juss A. JussA. JussA. Juss . popularmente conhecida como ni . popularmente conhecida como ni . popularmente conhecida como ni . popularmente conhecida como ni. popularmente conhecida como ni. popularmente conhecida como ni . popularmente conhecida como ni. popularmente conhecida como ni . popularmente conhecida como ni. popularmente conhecida como ni . popularmente conhecida como ni m ou margosa, m ou margosa, m ou margosa, m ou margosa, m ou margosa, m ou margosa, pertence à pertence à pertence à pertence à pertence à pertence à pertence à famí famí lia Meliacea lia Meliacealia Meliacealia Meliacea lia Meliacea lia Meliacealia Meliacealia Meliacealia Meliaceae, tendotendotendo propriedades propriedades propriedadespropriedadespropriedades inseticida s e pesticidae pesticidae pesticida e pesticida e pesticidae pesticida s, sendosendosendo que que outros estudos outros estudos outros estudos outros estudos outros estudos comprovam sua eficácia como anticomprovam sua eficácia como anti comprovam sua eficácia como anti comprovam sua eficácia como anti comprovam sua eficácia como anticomprovam sua eficácia como anticomprovam sua eficácia como anti comprovam sua eficácia como anticomprovam sua eficácia como anticomprovam sua eficácia como anticomprovam sua eficácia como anticomprovam sua eficácia como anticomprovam sua eficácia como anticomprovam sua eficácia como anti comprovam sua eficácia como anticomprovam sua eficácia como anti fúngico, anti fúngico, antifúngico, anti fúngico, antifúngico, antifúngico, antifúngico, anti -inflamatório, cica inflamatório, cica inflamatório, cica inflamatório, cicainflamatório, cica trizante, antiviral, trizante, antiviral, trizante, antiviral, trizante, antiviral, trizante, antiviral, trizante, antiviral, trizante, antiviral, dentreentre outras atividades outras... / Abstract: Azadirachta indica Azadirachta indica Azadirachta indica Azadirachta indica Azadirachta indica Azadirachta indica A. Juss A. JussA. Juss, popularly known as neem or margosa, belongs to the family, popularly known as neem or margosa, belongs to the family, popularly known as neem or margosa, belongs to the family, popularly known as neem or margosa, belongs to the family, popularly known as neem or margosa, belongs to the family, popularly known as neem or margosa, belongs to the family, popularly known as neem or margosa, belongs to the family, popularly known as neem or margosa, belongs to the family, popularly known as neem or margosa, belongs to the family, popularly known as neem or margosa, belongs to the family, popularly known as neem or margosa, belongs to the family, popularly known as neem or margosa, belongs to the family, popularly known as neem or margosa, belongs to the family, popularly known as neem or margosa, belongs to the family, popularly known as neem or margosa, belongs to the family, popularly known as neem or margosa, belongs to the family, popularly known as neem or margosa, belongs to the family, popularly known as neem or margosa, belongs to the family, popularly known as neem or margosa, belongs to the family, popularly known as neem or margosa, belongs to the family, popularly known as neem or margosa, belongs to the family, popularly known as neem or margosa, belongs to the family, popularly known as neem or margosa, belongs to the family, popularly known as neem or margosa, belongs to the family, popularly known as neem or margosa, belongs to the family, popularly known as neem or margosa, belongs to the family, popularly known as neem or margosa, belongs to the family, popularly known as neem or margosa, belongs to the family, popularly known as neem or margosa, belongs to the family, popularly known as neem or margosa, belongs to the family, popularly known as neem or ... / Mestre

Orientador: Ana Marisa Fusco-Almeida / Coorientador: Paulo César Gomes / Banca: Claudia Vianna Maurer Morelli / Banca: Valeria Valente / Resumo: A criptococose é uma infecção fúngica sistêmica e oportunista, causada pelas leveduras capsuladas das espécies Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii, afetando tanto pacientes imunocompetentes quanto imunocomprometidos. Uma propriedade importante do gênero Cryptococcus é a capacidade de formação de biofilmes. A resistência dos biofilmes aos agentes antifúngicos traz a necessidade da busca de novas terapias. Desta forma, o nosso grupo vem trabalhando com moléculas antifúngicas derivadas de fontes naturais, como as chalconas, onde foi verificado que C. neoformans é sensível a algumas destas moléculas. Assim, o objetivo desse trabalho foi testar a 3'- chalcona como antifúngico contra C. gattii em situação planctônica e biofilme, como também a eficiência e toxicidade em modelos animais alternativos como Danio rerio (Zebrafish) e Galleria mellonella, propondo uma nova alternativa para o tratamento. In vitro, os resultados para a forma planctônica do fungo mostraram que a 3'- chalcona foi mais eficaz para a cepa 118, com concentração inibitória mínima (CIM) de 0,96 µg/mL e para a cepa 56990 de C. gattii, a molécula mostrou ação potente com CIM entre 1,95 e 3,90 µg/mL. No ensaio de formação do biofilme com as duas cepas, observou-se uma atividade metabólica crescente até 72 horas e uma biomassa e matriz extracelular que alcançou seu máximo nas 48 horas. Em seguida, foi feita a avaliação da atividade da 3'- chalcona contra a formação do biofilme maduro após 48 horas, apresenta... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Criptococose is a fungal, systemic and opportunistic infection mainly caused by capsulated yeast of the species Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii, affecting immunocompetent and immunocompromised patients. An important property of the genus Cryptococcus is the biofilm formation, which can be considered a virulence factor and resistance. The resistance of biofilms to antifungal agents brings the need to search new therapies. Thus, our group has been working with antifungal molecules derived from natural sources such as chalcones, where it was found that C. neoformans is sensitive to some of these molecules. For this fact, the objective of this study was to test the 3'- chalcone as antifungal against C. gattii in planktonic and biofilm forms, as well as efficiency and toxicity in alternative animal models like Danio rerio (Zebrafish) and Galleria mellonella, proposing a new alternative for treatment. In vitro, the results for the planktonic form of the fungus showed that the 3'- chalcone was more effective for the 118 strain, the minimum inhibitory concentration (MIC) was 0.96 µg/mL. For the strain 56990 of C. gattii the molecule showed potent activity with MIC values between 1.95 and 3.90 µg/mL. Biofilm formation assay for both strains had an increased metabolic activity within 72 hours and a biomass and extracellular matrix which reached its maximum in 48 hours. Then, the evaluation of the activity of the 3'-chalcone against the formation of mature biofilm was made after 48 hours, showing inhibition at a concentration of 62.5 µg/mL for ATCC strain and 31.2 µg/mL against the isolated 118. Also, the growth of biofilm against to amphotericin B (AmB) was evaluated, obtained as a result of inhibition at all concentrations for the two strains and against fluconazole were resistant. In vivo, the results of toxicity in zebrafish embryos revealed... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Graziella Nuernberg Back Brito / Banca: Adolfo José da Mota / Banca: Ricardo Sérgio Couto de Almeida / Banca: Renata Falchete do Prado / Banca: Samira Esteves Afonso Camargo / Resumo: Candida albicans é um fungo oportunista capaz de causar infecções superficiais e até sistêmicas. A maioria das infecções é mediada pela formação de biofilme que confere resistência aos agentes antifúngicos e ao sistema imune, porém os mecanismos de desenvolvimento do biofilme e patogenicidade ainda não foram completamente elucidados. No presente estudo foram selecionados 9 genes de C. albicans com função desconhecida, dentre 34 cepas mutantes que apresentaram fenótipo alterado para formação de biofilme. Os biofilmes foram formados em placas de 96 poços ou discos de poliestireno e avaliados em diferentes tempos de desenvolvimento. A seguir foram construídas 4 cepas complementadas que foram avaliadas quanto à susceptibilidade a agentes estressantes, crescimento sob limitação de nutrientes e testes de filamentação. A arquitetura dos biofilmes foi analisada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os biofilmes também foram avaliados quanto à quantidade de β-1,3-glucana e quitina. Para os modelos de infecção, células epiteliais bucais (TR-146) foram utilizadas para análise de aderência, invasão e dano. A patogenicidade das cepas foi avaliada em ovos embrionados de galinha durante 7 dias, após a inoculação das cepas. Células planctônicas e biofilmes foram submetidos a testes antifúngicos com os agentes fluconazol, anfotericina B e caspofungina. A reação em cadeia da polimerase quantitativa foi realizada para verificar a expressão dos genes MRV8 e NDT80 em células fúngicas em interação com células epiteliais e MRV8, MRV1 e MRV6 em células crescidas em biofilme. Os resultados foram analisados por teste t de Student, ANOVA, Tukey e testes de Log-rank (Mantel-Cox) (p < 0,05). Foram construídas 4 cepas complementadas para os genes selecionados ORF19.823, ORF19.7170, ORF19.6847 e MRV8. A função de ORF19.823 ainda permanece desconhecida, pois nãofoi observado fenótipo msignificativo para a cepa.... / Abstract: Candida albicans is an opportunistic fungi capable of causing superficial and systemic infections. Most of infections are mediated by biofilm formation which confers resistance to antifungal agents and immune system, but the mechanisms of biofilm development and pathogenicity were not thoroughly elucidated yet. In the presente study, 9 unknown function genes of C. albicans were selected among 34 mutant strains that presented altered phenotype for biofilm formation. The biofilms were formed on 96-well microtitle plates or on polystyrene disks and evaluated in different time intervals. Next, 4 complemented strains were constructed and evaluated for susceptibility to stressor agents, growth under nutrient limitation and filamentation tests. The biofilm architecture was analyzed by scanning electron microscopy (SEM). The biofilms were also assessed as the quantity of β-1,3-glucan and chitin. For the infection models, buccal epithelial cells (TR-146) were used for adherence, invasion and damage assays. The pathogenicity of the strains was evaluated in embrionated chicken eggs for 7 days, after inoculation of the strains. Planktonic cells and biofilms were submitted to antifungal tests with fluconazole, amphotericin B, and caspofungin. Quantitative polymerase chain reaction was performed to verify the expression of MRV8 and NDT80 genes in fungal cells in interaction with epithelial cells and MRV8, MRV1, and MRV6 genes in cells grown in biofilm. The results were submitted to the Student t test, ANOVA, Tukey's test, and Log-rank test (Mantel-Cox) (p < 0.05). Four complemented strains were constructed for the selected genes ORF19.823, ORF19.7170, ORF19.6847, and MRV8. The function of the ORF19.823 is still unknown, because the mutant strain did not show any significative phenotype for the tests performed. The mutant strain for the ORF19.7170 caused less damage on epithelial cells, but the result was not significant and the gene was dispensable... / Doutor

Orientador: Iguatemy Lourenço Brunetti / Coorientador: Ana Cláudia Pavarina / Banca: Livia Nordi Dovigo / Banca: Cristina Kurachi / Resumo: Nos últimos anos o aumento na incidência da candidose superficial ou invasiva causada por espécies emergentes e resistentes aos medicamentos tem sido atribuído a disseminação do uso de antibióticos e/ou agentes imunossupressores. A candidose é considerada uma doença oportunista de alta incidência em pacientes que utilizam medicamentos imunossupressores após transplante de órgãos, antibióticos de amplo espectro, terapias antineoplásicas e nos que possuem imunossupressão relacionada à síndrome da imunodeficiência adquirida. A Terapia Fotodinâmica (Photodynamic Therapy ou PDT) utiliza a combinação de luz (visível) e um composto fotossensível. A maior aplicação da PDT ocorre no tratamento de câncer, entretanto, a técnica está difundindo-se para o tratamento de outras doenças como infecções microbianas. O objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito da PDT mediada pela Curcumina, na ausência e na presença do surfactante brometo de cetiltrimetilamônio (CTAB), com uma fonte de luz do tipo LED, sobre suspensões planctônicas de isolados clínicos das espécies C. albicans e C. glabrata fluconazol-resistentes, bem como de cepas ATCC. Após a PDT, foram obtidas diluições seriadas de cada amostra e alíquotas foram plaqueadas para a contagem das células viáveis (ufc/mL). O metabolismo celular para todas as condições experimentais também foi avaliado por meio do ensaio de redução do 2,3-bis[2-methoxy-4-nitro-5-sulphophenyl]2H-tetrazolium-carboxanilida (XTT). Também foi avaliada a capacidade de adesão/formação de biofilme dessas cepas após a PDT. Para isso, amostras obtidas da fase de adesão e da fase madura dos biofilmes foram monitoradas pela contagem de células viáveis (ufc/mL). Os resultados permitem observar que a utilização da PDT com curcumina em micelas de CTAB em suspensões planctônicas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In recent years the increase in the incidence of superficial or invasive candidiasis caused by species emerging drug-resistant and has been attributed to widespread use of antibiotics and/or immunosuppressive agents. Candidiasis is considered an opportunistic disease of high incidence in patients taking immunosuppressive drugs after organ transplantation, broad-spectrum antibiotics, anticancer therapies and who has immunosuppression related to acquired immunedeficiency syndrome. Photodynamic Therapy (PDT) uses a combination of (visible) light and a photosensitive compound. The largest application of PDT occurs in the treatment of cancer, however, the technique is diffusing in the treatment of other diseases such microbial infections. The aim of this study was to evaluate the effect of PDT mediated by Curcumin, in the absence and presence of surfactant cetyltrimethylammonium bromide (CTAB) with a light source type LED on planktonic suspensions of clinical isolates of the species C. albicans and C. glabrata Fluconazole-resistant strains as well as strains ATCC. After PDT, serial dilutions were collected and aliquots of each sample were plated for viable cell count (cfu/ml). Cellular metabolism for all experimental conditions was also assessed by reduction assay of 2,3-bis [2-methoxy-4-nitro-5-sulphophenyl]-2H-tetrazolium carboxanilide (XTT). It was also evaluated the ability of adhesion/biofilm formation of these strains after PDT. For this, samples of the accession and the mature phase biofilms were monitored by viable cell count (cfu/mL). The results allow to observe that the use of PDT with curcumin in CTAB micelles in planktonic suspensions was able to decrease metabolism (XTT) strains of C. albicans and C. glabrata susceptible and resistant to fluconazole, however, the reduction in viable cell count... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Ana Claudia Pavarina / Resumo: O fungo Candida albicans, em situações de desequilíbrio imunológico no hospedeiro, pode se tornar um patógeno oportunista e provocar infecções. Tendo em vista a resistência que os microrganismos desenvolveram a fármacos convencionais, a Terapia Fotodinâmica Antimicrobiana (aPDT) vem apresentando resultados promissores como uma terapia alternativa. O objetivo deste estudo foi avaliar o potencial que aPDT possuiu em desenvolver resistência, tolerância ou susceptibilidade em C. albicans em associação com o Photodithazine (PDZ- 25 µg/L; 660 nm; 18 J/cm2) e Curcumina (CUR- 40 µg/L; 455 nm; 18 J/cm2) plaqueados em meio sem e com suplementação de Fluconazol (8 µg/L). C. albicans (ATCC 90028) em culturas planctônicas e biofilme foram submetidas à aplicações sucessivas de aPDT (10 aplicações), como também, a ciclos de recuperação e re-cultivo das colônias que sobreviveram ao tratamento até o momento que não houvesse mais células viáveis para a recuperação e continuação das aplicações. O plaqueamento foi realizado em placas de Ágar Sabourand Dextrose suplementadas ou não com Fluconazol, e os valores das unidades formadoras de colônia por mililitro (UFC/mL) foram determinados. O teste de produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) foi realizado nos primeiros e últimos ciclos de aPDT. O perfil biomolecular das células sobrevivetes as aplicações 1, 4 e 7 de aPDT mediada por PDZ foi investigado através do teste de RT-qPCR. Foi observado no grupo tratamento de aPDT (P+L+) mediada por P... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The fungus Candida albicans, in situations of immune imbalance in the host, can become an opportunistic pathogen and cause infections. Because of the resistance that microorganisms have developed to conventional drugs, Antimicrobial Photodynamic Therapy (aPDT) has shown promising results as an alternative therapy. The main goal of this study was to evaluate the potential of aPDT to develop resistance in C. albicans in association with Photodithazine (PDZ-25 µg/L; 660 nm; 18 J/cm2) and Curcumin (CUR-40 µg/L; 455 nm; 18 J/cm2) grown with and without Fluconazole (8 µg/L). C. albicans (ATCC 90028), in planktonic and biofilm cultures, were submitted to successive applications of aPDT (10 applications), as well as cycles of recovery and re-cultivation of colonies that survived treatment until no longer viable cells were present for application recovery and continuation. Plating was performed on Sabourand Dextrose Agar plates supplemented or not with Fluconazole, and values of colony forming units per milliliter (CFU/mL) were determined. The reactive oxygen species (ROS) production test was performed in the first and last cycles of aPDT. The biomolecular profile of surviving cells as applications 1, 4 and 7 of PDZ-mediated aPDT was investigated using the RT-qPCR test. PDZ-mediated treatment of aPDT (P+L+) was observed to reduce approximately 6.8 log10 in planktonic cultures and approximately 6.2 log10 in C. albicans biofilm in both methodologies used. In the aPDT (C+L+) treatment gr... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Margarete Teresa Gottardo de Almeida / Resumo: A esporotricose é uma micose de distribuição mundial, decorrente da implantação traumática do fungo Sporothrix. Atualmente, é considerada uma zoonose emergente, de impactos à saúde pública, sendo os gatos os principais animais afetados e associados à transmissão aos humanos. O estudo objetivou identificar casos de esporotricose em gatos no município de São José do Rio Preto/SP, com identificação da espécie circulante, além de analisar os fatores clínicos e epidemiológicos, e de suscetibilidade aos antifúngicos. Amostras de secreções e/ou biópsias de animais com lesões e sintomas da doença foram analisadas por técnicas micológicas, fenotípicas e moleculares de identificação do fungo. O método de microdiluição em caldo foi utilizado para identificar o perfil de suscetibilidade aos antifúngicos. Os aspectos clínicos e epidemiológicos foram avaliados com base em informações contidas nas fichas de investigação. No período estudado, foram coletadas 245 amostras de gatos sintomáticos à esporotricose, sendo o fungo Sporothrix isolado em 189 (77, 2%) amostras. Na análise fenotípica, para todos os isolados, foi encontrado padrão morfofisiológico compatível com a espécie S. brasiliensis, sendo esse achado confirmado por técnica molecular. Na análise de suscetibilidade aos antifúngicos, em geral, a terbinafina foi o fármaco com melhor desempenho de atividade antifúngica, seguido pelo cetoconazol e itraconazol. A população de felinos domésticos analisada era composta, em sua maioria, por ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Sporotrichosis is a worldwide mycosis, resulting from the traumatic implantation of the fungus Sporothrix. It is currently considered an emerging zoonosis with public health impact, and cats are the main animals affected and associated with transmission to humans. The aim of this study was to assess the cases of feline sporotrichosis in São José do Rio Preto, Brazil, to identify the circulating species, to analyze clinical and epidemiological factors, and evaluate the susceptibility to antifungal drugs. Secretion and/or biopsies samples from animals with lesions and sporotrichosis symptoms were analyzed by mycological procedures, and the isolates were identified by phenotypic and molecular techniques. The broth microdilution method was used to identify the antifungal susceptibility profiles. Clinical and epidemiological aspects were evaluated based on information contained in the research sheets. During the studied period, 245 samples of cats symptomatics of sporotrichosis were collected, and Sporothrix was isolated in 189 (77.2%) samples. According to the phenotypic analysis, all isolates exhibited the morphophysiological pattern of S. brasiliensis, this finding was confirmed by molecular technique. Regarding the antifungal susceptibility testing, terbinafine was, in general, the antifungal which exhibited the best activity, followed by ketoconazole and itraconazole. The domestic feline population analyzed was mostly male (180; 73.5%), adults (236; 96.3%), street (131; 53.5%... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Luciane Dias de Oliveira / Banca: Cristiane Aparecida Pereira / Resumo: O número de espécies bacterianas resistentes aos antimicrobianos tem atingido níveis elevados. Com isso, torna-se necessária a realização de pesquisas que avaliem os efeitos de métodos terapêuticos alternativos. Os objetivos desse trabalho foram avaliar a citotoxicidade do extrato glicólico de Zingiber officinale em macrófagos de camundongos e queranócitos humanos, atividade antimicrobiana sobre biofilmes monotípicos (micro-organismos aeróbios: Candida albicans, Staphylococcus aureus, Streptococcus mutans, Pseudomonas aeruginosa, e anaeróbios: Porphyromonas gingivalis, Porphyromonas endodontalis, Prevotella intermedia) e biofilmes heterotípicos (associação: C. albicans e bactérias aeróbias). Para ação citotóxica, as células foram cultivadas em meio DMEM, semeadas (2 x 104 células/poço) na placa de 96 poços. Após aderência inicial, foi adicionado o extrato em diluição seriada (5 min e 24 h), e realizado o teste de MTT. Para avaliar a ação antimicrobiana, a Concentração Inibitória Mínina (CIM) e Concentração Microbicida Mínima (CMM) foram determinadas segundo as normas do CLSI. Para biofilmes, foram adicionados 100 µL meio de cultura e 100 µL suspensão microbiana (107 UFC/mL) em placas de 96 poços, nos heterotípicos foram utilizados 50 µL de cada micro-organismo. As placas foram incubadas (37ºC), por 48 h (aeróbios) ou por 7 dias (anaeróbios). Aplicou-se o extrato (5 min e 24 h), nas concentrações efetivas pré-determinadas (CMM) e duas superiores, depois os biofilmes foram desa... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The number of bacterial species resistant to antimicrobials has reached high levels. Thus, it is necessary to perform research that evaluates the alternative therapeutic methods, such as ginger. The present study was to evaluate the cytotoxicity of the Zingiber officinale glycolic extract in human and mouse macrophages, antimicrobial activity on monotypic biofilms (aerobic microorganisms: Candida albicans, Staphylococcus aureus, Streptococcus mutans, Pseudomonas aeruginosa, and anaerobes: Porphyromonas gingivalis, Porphyromonas endodontalis, Prevotella intermedia) and heterotypic biofilms (association: C. albicans and aerobic bacteria). To cytotoxic action, the cells have been cultivated in DMEM medium, seeded (2x104 cells/well) in the 96-well plate. After initial adhesion, the extract has been added to serial dilution (5 min and 24 h), and the MTT tests were performed. In order to assess the antimicrobial action, Minimal Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Microbicidal Concentration (MMC) were determined in according to CLSI standards. In the biofilms case, 100 μL culture medium and 100 μL microbial suspension (107 CFU / mL) were added to 96-well plates, 50 μL of each microorganism was used in the heterotypics. The plates were incubated (37°C) for 48 h period (aerobic) or for 7 days (anaerobic). The extract (5 min and 24 h) was applied at the pre-determined effective concentrations (MMC) and two higher concentrations, after which the biofilms were disaggregated and se... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Anselmo Gomes de Oliveira / Banca: Rosemeire Cristina Linhari Rodrigues Pietro / Banca: Thalita Pedroni Formariz Pilon / Banca: Clovis Augusto Ribeiro / Banca: Francisco Benedito Teixeira Pessine / Resumo: 2-(2-nitrovinil)furano (G-0) apresenta atividade antiprotozoária, antibacteriana e antifúngica frente a elevado número de patógenos porém, a capacidade de sublimação, baixa velocidade de dissolução em meio aquoso, problemas de compatibilidade com excipientes e fotodegradação, tem limitado sua incorporação em formas farmacêuticas para uso humano e/ou veterinário. O propósito do presente trabalho foi avaliar duas alternativas para a estabilização do candidato a fármaco, através da formação de complexos de inclusão liofilizados (FD) com hidroxipropil-β-ciclodextrina e sulfobutiléter-β-ciclodextrina sódica e utilizando a microencapsulação com etilcelulose pelo método de emulsificação/evaporação do solvente. Uma vez formados e previamente caracterizados, os complexos foram submetidos ao ensaio de estabilidade acelerada a 40°C/75 %HR e ensaios de fotoestabilidade acelerada. A câmara de fotoestabilidade também foi utilizada para confirmar o perfil de degradação dos complexos. Os fotoprodutos foram isolados em coluna analítica e o maioritário foi caracterizado por espectroscopia de RMN. Foi avaliada também a volatilidade do G-0 na forma de complexos comparado com misturas físicas equivalentes através de TGA e CG-HS-FID, complementando assim um estudo desenvolvido anteriormente no modo isotérmico. As propriedades biofarmacêuticas da substância livre e na forma complexada foram estudadas em relação ao comportamento de dissolução em Fluido Vaginal Simulado e a permeação/retenção em muco... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: 2-(2-nitrovinyl)furan (G-0) has antiprotozoal, antibacterial and antifungal activity against a large number of pathogens, although the sublimation, low dissolution rate in aqueous medium, low compatibility with excipients and photodegradation, have hindered the incorporation in pharmaceutical dosage forms, to use in human and/or veterinary medicine. The aim of this work was to evaluate two alternatives for the stabilization of the drug candidate through freeze-drying inclusion complex formation (FD) with hydroxypropyl-β-cyclodextrin and sulfobutylether-β-cyclodextrin sodium salt and through microencapsulation with ethylcellulose by mean of emulsion/solvent evaporation method. Once the complexes were prepared and fully characterized previously, they were subjected to an accelerated stability study at 40°C/75 %RH, and a photostability assay under forced irradiation conditions. A photostability chamber was also used in order to confirm the degradation profile for the complexes. Photoproducts were isolated in analytical column and the main degradation product was characterized aided by NMR. Drug volatility was also evaluated when G-0 was complexed, and compared with equivalent physical mixtures through TGA and GC-HS-FID. Biopharmaceutical properties of free drug and in the complexes were studied in terms of dissolution rate in Simulated Vaginal Fluid and permeation/retention in bovine vaginal mucosa. Finally, the influence of both complexes on the "in vitro" antifungal activity a... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Criptococose é uma doença causada pelo fungo C. neoformans que têm grande importância atualmente, devido ao aumento da população imunocomprometida,. Além disso, existem poucas opções terapêuticas contra micoses profundas. Neste trabalho foi avaliado se a via de biossíntese do triptofano seria um bom alvo para o desenvolvimento de novos antifúngicos. Com o uso da tecnologia de RNA de interferência, concluiu-se que esta via de síntese é essencial para a sobrevivência desta levedura, sendo, portanto, um ótimo alvo. Ainda neste estudo, demonstrou-se que a letalidade decorre da baixa captação de triptofano pelas permeases de aminoácidos, as quais sofrem repressão catabólica pela fonte de nitrogênio e efeito negativo da temperatura. Foram testados dois inibidores específicos que atuam sobre a antranilato sintase e a triptofano sintase, duas enzimas cruciais para a conversão do corismato em triptofano. Ambos compostos causaram inibição do crescimento de C. neoformans e C. gattii. / Cryptococcosis is a disease caused by C. neoformans, currently of great importance due to the increase in immunocompromised population. Furthermore, there are few therapeutic options for treating this disease. This study evaluated the tryptophan biosynthetic pathway as a possible target for the antifungal development. By using RNA interference technology we concluded that this metabolic pathway is essential for the survival of this yeast, and, therefore, it is a good target. In the same study, it was demonstrated that lethality results from the low uptake of the tryptophan amino acid by permeases, which undergo nitrogen catabolite repression and negative effect of temperature. Two specific inhibitors acting on the anthranilate synthase and tryptophan synthase, two key enzymes for the conversion of chorismate into tryptophan were tested. Both compounds caused growth inhibition of C. neoformans and C. gattii.