Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-08-13T19:56:16Z No. of bitstreams: 1 473453 - Texto Parcial.pdf: 147318 bytes, checksum: 8b1be3dea81a4df762bc1507d7a4fe9a (MD5) / Made available in DSpace on 2015-08-13T19:56:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 473453 - Texto Parcial.pdf: 147318 bytes, checksum: 8b1be3dea81a4df762bc1507d7a4fe9a (MD5) Previous issue date: 2015-07-17 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico - CNPq / Introduction: Adversities faced during the prenatal period can be related to the onset of diseases in adulthood. However, little is known about its effects on the respiratory system. Aims: To assess the effects of restraint prenatal stress, in two different moments of pregnancy, on pulmonary function and inflammatory profile in male and female mice exposed to a ovalbumin (OVA) induced asthma model. Methods: Male and female BALB/c mice were divided into 3 groups: control (CON), prenatal stress from the second week of pregnancy (PNS1) and prenatal stress on the last week of pregnancy (PNS2). Pups were weighted on 3 different moments (days 1, 10 and 21). As adults, the fear/anxiety behavior was evaluated in the open field (between days 50? and 54?). The ovalbumin-induced asthma model was performed at day 56, followed by the analysis of lung function (airway resistance, tissue damping and elastance), collection of bronchoalveolar lavage fluid, total and differential cell count and inflammatory cytokines evaluation. The left lung was removed and processed for histological analysis. Results: There was a significant decrease (p<0.05) in the number of entries and time spent in the central quadrant only in PNS1 group compared to controls. Females (PNS1) also presented an improvement in the lung function, measured as airway resistance, tissue damping and pulmonary elastance (p<0.05). When female differential cell count was analyzed, PNS1 group showed a significant increase in the percentage of neutrophils (p<0.01), lymphocytes (p<0.05) and a significant decrease of eosinophils (p<0.05) when compared to the control group. There was also a decrease in the BAL inflammatory cytokines, including a significant reduction in IL-5 and IL-13 in males of PNS1 (p<0.001 and p<0.01) and PNS2 (p<0.01 and p<0.01) when compared to controls. In females, a significant reduction in the secretion of IL-4, IL-5 and IL-13 in both PNS1 (p<0.05, p<0.001 and p<0.01) and PNS2 (p<0.01, p<0.001 and p<0.05) were demonstrated. Conclusion: The results of this study indicate that prenatal stress, from the second week of pregnancy (PNS1), reduces the impact of asthma development in adult female mice, showing an improved pulmonary function and a lower allergic inflammatory response in the lungs. / Introdu??o: Adversidades enfrentadas no per?odo pr?-natal podem estar implicadas na programa??o fetal e no surgimento de doen?as na vida adulta. No entanto, pouco se sabe sobre os efeitos do estresse neste per?odo sobre o sistema respirat?rio. Objetivos: Avaliar os efeitos do estresse pr?-natal por conten??o, em dois diferentes momentos da prenhez, sobre a fun??o pulmonar e o perfil inflamat?rio em camundongos machos e f?meas, expostos a um modelo de asma induzida por ovalbumina (OVA). Materiais e m?todos: Foram utilizados camundongos BALB/c machos e f?meas divididos em tr?s diferentes grupos controle (CON), estresse pr?-natal a partir da 2? semana (PNS1) e estresse pr?-natal na ?ltima semana (PNS2). A pesagem da prole foi feita em 3 diferentes momentos (dias 1, 10 e 21). Quando adultos, foi avaliado o comportamento de medo/ansiedade no campo aberto (entre o 50? e 54? dia). No 56? dia foi realizada a aplica??o do modelo de asma por ovalbumina com posterior an?lise do teste de fun??o pulmonar (resist?ncia das vias a?reas, amortecimento do tecido e elast?ncia), al?m da coleta de lavado broncoalveolar para contagem total e diferencial de c?lulas e avalia??o de citocinas inflamat?rias. O pulm?o esquerdo foi retirado e processado para an?lise histol?gica. Resultados: Houve diminui??o significativa (p<0,05) do n?mero de entradas e tempo despendido no quadrante central somente no grupo PNS1 quando comparado aos controles. Melhora na fun??o pulmonar das f?meas nos par?metros de resist?ncia das vias a?reas, amortecimento do tecido e elast?ncia pulmonar (p<0,05). Na contagem diferencial de c?lulas das f?meas, o grupo PNS1 apresentou um aumento percentual significativo dos neutr?filos (p<0,01) e linf?citos (p<0,05) e uma diminui??o significativa de eosin?filos (p<0,05), quando comparados ao grupo controle. Tamb?m houve diminui??o das citocinas inflamat?rias com redu??o significativa na secre??o de IL-5 e IL-13 no LBA dos machos do grupo PNS1 (p<0,001 e p<0,01) e PNS2 (p<0,01 e p<0,01), quando comparados com o grupo controle. Nas f?meas houve uma redu??o significativa na secre??o de IL-4, IL-5 e IL-13 nos grupos PNS1 (p<0,05, p<0,001 e p<0,01) e PNS2 (p<0,01, p<0,001 e p<0,05) Conclus?o: Os resultados deste estudo indicam que o estresse pr?-natal, a partir da segunda semana de prenhez (PNS1), reduziu o impacto do desenvolvimento da asma em camundongos f?meas na idade adulta, mostrando uma melhor fun??o pulmonar e menor resposta inflamat?ria al?rgica no pulm?o.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-08-13T20:17:59Z No. of bitstreams: 1 473456 - Texto Parcial.pdf: 768622 bytes, checksum: 552f69a1d4c4b1b7e4906070b478b964 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-08-13T20:17:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 473456 - Texto Parcial.pdf: 768622 bytes, checksum: 552f69a1d4c4b1b7e4906070b478b964 (MD5) Previous issue date: 2015-03-31 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Introduction: Asthma is a disease that affects most children, characterized by inflammation and airway hyperresponsiveness. Asthma has two main phenotypes depending on the presence of atopy. In addition to Th2 cells, Th17 cells, Th1 and Treg cells are involved in disease pathology by secreting cytokines. CD4 T cells have plasticity, which are influenced by environmental and genetic factors. Aim: To assess the phenotypic profile of CD4 T cells in asthmatic children of school age, with or without the presence of atopy and healthy controls and correlate the data with disease severity. In addition, analyze cells expressing more than one transcription factor in the blood of atopic asthmatic children to D.pteronyssinus stimulating mononuclear cells with DerP1 protein. Methods: This was a cross-sectional case-control study, where 8-14 years-old asthmatic and healthy children were recruited of public schools in Porto Alegre/RS. Mononuclear cells were isolated by Histopaque peripheral blood of children and cultured with anti-CD3/CD28 or DerP1 protein. After 24 hours the cells were stained with antibodies specific for transcription factors for analysis of Th2, Th17, Th1 and Treg cells by flow cytometry. Moreover, it was analyzed in plasma allergen-specific IgE specific. Results: The results showed that children with asthma have a higher frequency of CD4+ GATA-3+ compared to controls. Frequency of CD4+GATA-3+ROR?t+ cells correlated with disease severity, except with severe therapy resistant asthma (STRA). Atopic patients showed a higher proportion of co-expressing more than one transcription factor cells compared to non-atopic individuals. Stimulation with DerP1 protein enhances the frequency of CD4 + Foxp3 +ROR?t+ compared with the control and stimulation with anti-CD3/ CD28. Conclusion: In general, the results presented in this thesis allowed us to conclude that the allergens play an important role in the development of cells expressing more than one transcription factor in atopic patients. In addition, our study was the first to demonstrate that STRA children have a distinct expression profile of regulatory transcription factors of CD4 T cells Th1, Th2, Th17 and Treg compared to other severity levels of the disease. / Introdu??o: A asma ? uma doen?a prevalente em crian?as, tendo como principal caracter?stica a inflama??o e hiperresponsividade das vias a?reas. Al?m das c?lulas Th2, as c?lulas Th17, Th1 e Treg s?o envolvidas na patologia da doen?a pela fun??o que elas e as citocinas por elas secretadas exercem. A asma apresenta dois fen?tipos principais, os quais dependem da presen?a de atopia. As c?lulas TCD4 apresentam plasticidade, que s?o influenciadas por fatores ambientais e gen?ticos. Objetivos: Avaliar o perfil fenot?pico de c?lulas TCD4 de crian?as em idade escolar asm?ticas, com ou sem a presen?a de atopia e de controles saud?veis. Correlacionar os dados obtidos com a severidade da doen?a. Al?m disso, avaliar as c?lulas que co-expressam mais de um fator de transcri??o no sangue de crian?as asm?ticas at?picas para D.pteronyssinus estimulando as c?lulas com a prote?na Derp1. Materiais e m?todos: Este foi um estudo transversal caso-controle, onde crian?as de 8 a 14 anos foram recrutadas de escolas p?blicas de Porto Alegre/RS, asm?ticas e controles. As c?lulas mononucleares foram isoladas por Histopaque do sangue perif?rico destas crian?as e colocadas em cultura com anti-CD3/CD28 ou com prote?na Derp1. Ap?s 24hs as c?lulas foram marcadas com anticorpos espec?ficos para os fatores de transcri??o para an?lise do perfil Th2, Th17, Th1 e Treg por citometria de fluxo. Al?m disto, foi analisado no plasma a IgE espec?fica para um painel de alergenos. Resultados: Os resultados obtidos mostraram que as comparado com os controles. As c?lulas duplo-positivas CD4+GATA-3+ROR?t+ correlacionaram com o grau de severidade da doen?a, exceto com asma severa de dif?cil controle (ADC). Pacientes at?picos apresentaram uma propor??o maior de c?lulas co-expressando mais de um fator de transcri??o comparados com indiv?duos n?o-at?picos. Estimula??o de c?lulas provenientes de pacientes at?picos com a prote?na Derp1 aumenta a frequ?ncia de c?lulas CD4+Foxp3+ROR?t+ quando comparados com o controle e estimula??o com anticorpos anti-CD3 e anti-CD28. Conclus?o: De uma maneira geral, os resultados apresentados nesta tese nos permitem concluir que os al?rgenos desempenham um papel importante no desenvolvimento das c?lulas que expressam mais de um fator de transcri??o em pacientes at?picos. Al?m disso, nosso estudo foi o primeiro a demonstrar que crian?as com ADC apresentam um perfil distinto de express?o de fatores de transcri??o reguladores de c?lulas TCD4 do tipo Th1, Th2, Th17 e Treg quando comparado com crian?as com doen?a menos severa.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:32:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 345712.pdf: 381673 bytes, checksum: f46720431db9aea2549d541ee2d0091d (MD5) Previous issue date: 2006-01-24 / Introdu??o: estudos epidemiol?gicos t?m auxiliado no entendimento dos diferentes fen?tipos cl?nicos de sibil?ncia. Apesar de ser de amplo conhecimento que a asma ? altamente prevalente em v?rias regi?es brasileiras, existem poucos estudos buscando o entendimento dos mecanismos associados com a sua express?o cl?nica. Hiper-reatividade br?nquica e atopia s?o marcadores importantes associados ? asma em popula??es de pa?ses desenvolvidos. Em popula??es de baixa renda h? poucos relatos descrevendo como ocorre a rela??o entre HRB, atopia e sibil?ncia e tamb?m de que modo infec??es comuns, como as parasitoses, est?o associadas ? HRB. Objetivos: verificar a associa??o entre hiper-reatividade br?nquica e sibil?ncia nos ?ltimos doze meses em uma popula??o de escolares na cidade de Uruguaiana/RS. M?todos: foi realizado teste de broncoprovoca??o com solu??o salina hipert?nica (4,5%) e realizados testes de fun??o pulmonar em cada um dos sujeitos, medindo a ocorr?ncia de queda de 15% (definido como HRB positiva) na fun??o pulmonar basal em dois grupos de escolares, divididos de acordo com a presen?a ou aus?ncia de sibil?ncia nos ?ltimos doze meses. Outros fatores foram avaliados com o uso de question?rios padronizados, com testes cut?neos para avalia??o de atopia e testes parasitol?gicos em amostras de fezes. Resultados: 97 pacientes foram inclu?dos no estudo, sendo que 17 destes apresentaram queda maior que 15% nos valores do volume expirat?rio for?ado no primeiro segundo (VEF1). N?o houve diferen?a estat?stica significativa em rela??o ? HRB entre os grupos de pacientes sibilantes e n?o-sibilantes (p=0,3) assim como atopia (p=0,2) e parasitose em geral (p=0,6). Escolares com alta carga de helmintos apresentaram risco cinco vezes maior de hiper-reatividade br?nquica quando comparados ?s crian?as n?o infectadas ou com n?veis baixos de infec??o (OR 5,0; IC95% 1,1-21,3). Infec??o por Giardia lamblia mostrou ser marginalmente protetora de HRB (OR 0,8; IC95% 0,7-0,9)Conclus?es: o estudo n?o detectou uma rela??o significativa ente HRB e sibil?ncia atual na popula??o testada. Este achado pode significar que a defini??o de sibil?ncia atrav?s de question?rio neste tipo de popula??o talvez apresente baixa especificidade. Outra possibilidade ? que sibil?ncia nesta popula??o poderia representar um fen?tipo atenuado de doen?a, n?o ligado ? HRB. A rela??o positiva entre alta carga de helmintos e HRB poderia explicar a sibil?ncia entre estas crian?as, por mecanismo n?o mediado por alergia. Parece haver um papel protetor da giard?ase em rela??o ? HRB.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:32:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 330616.pdf: 817278 bytes, checksum: debfd8dfb87d752ef3e191579a8625a3 (MD5) Previous issue date: 2006-01-19 / Objetivo: determinar os fatores de risco associados ? sibil?ncia em crian?as escolares de Uruguaiana, RS. - M?todo: Estudo transversal, realizado em escolares de terceira e quarta s?ries do ensino b?sico fundamental, moradores da zona urbana de uma cidade do interior do RS, Brasil, com baixa renda. Uma amostra representativa desta popula??o, de crian?as foi selecionada aleatoriamente e seus pais ou familiares responderam um question?rio aplicado por entrevistadores, com perguntas sobre asma, sibil?ncia e fatores de risco pessoais, familiares e ambientais (baseado no question?rio ISAAC International Study of Asthma and Allergies in Childhood). Um sub-grupo de crian?as, tamb?m escolhido aleatoriamente, coletou amostras de fezes para realiza??o de diagn?stico parasitol?gico (3 amostras de fezes/crian?a com os m?todos de Ritchie, Kato-Katz e Baermann) e realizou testes cut?neos para alergenos ambientais comuns (6 alergenos, com testes ALK, Espanha). Resultados: As crian?as amostradas (n=1982), com idade m?dia de 10,1 anos, apresentaram preval?ncia de sibil?ncia ativa (nos ?ltimos 12 meses) de 25,7% e de 12,6% para asma alguma vez na vida. Quase 90% da popula??o vivia em ?rea pobre da cidade, com baixo n?vel de escolaridade materna (75,7% com no m?ximo prim?rio completo), sendo um ter?o da popula??o exposta ? m?e fumante. Contato com animais foi freq?ente no primeiro ano de vida das crian?as, ou ? ?poca das entrevistas. Os fatores significativamente associados ? sibil?ncia ativa na an?lise bivariada foram: hist?ria materna de asma (OR= 3,3 95%IC 2,4 - 4,7), eczema diagnosticado antes dos dois anos de idade (OR= 2,5 95% IC 1,4 - 4,7), prematuridade (OR= 1,7 95% IC 1,2 - 2,3), m?e fumante na gravidez (OR= 1,5 95% IC 1,2 - 1,9), m?e fumante atualmente (OR= 1,4 95% 1,1 - 1,7), casa com umidade (OR= 2,0 95% IC 1,6 - 2,4), hist?ria de verminose (OR= 1,7 95% IC 1,4 - 2,0) e ter gato atualmente (OR= 1,2 95% 1,0 - 1,5). Viver em zona pobre (OR= 0,7 95% IC 0,5 - 0,9) estava associado negativamente com sibil?ncia ativa, assim como haver tido contato com cachorro no primeiro ano de vida (OR= 0,895% IC 0,7 - 1,0). Na an?lise multivariada, hist?ria materna de asma, eczema antes dos 2 anos de idade, prematuridade, hist?ria de verminose, casa com mofo ou umidade, m?e fumante e contato atual com gato mantiveram-se associadas significante e independentemente associadas ? sibil?ncia ativa. Viver em ?rea pobre da cidade manteve-se associado independente e negativamente ? sibil?ncia (OR= 0,6 95% IC 0,5 -0,9). Na subamostra testada (n= 411), 11,7% das crian?as apresentou ao menos um teste cut?neo positivo e 49,6% ao menos uma prova diagn?stica positiva para parasitas intestinais. Um total de 33,3% das crian?as apresentaram testes positivos para helmintos ou gi?rdia. Conclus?es: Hist?ria familiar de asma, eczema nos primeiros anos de vida, prematuridade, hist?ria de verminose, ter m?e fumante, casa com mofo ou umidade, ou contato com gato foram fatores de risco associados com sibil?ncia ? idade m?dia de 10 anos nos escolares de Uruguaiana, RS. O fato de viver em ?rea mais pobre da cidade conferiu prote??o ao desenvolvimento de sibil?ncia aos 10 anos. Estes achados e mais o fato de que um percentual muito reduzido de crian?as apresenta testes cut?neos al?rgicos positivos sugere que sibil?ncia nesta popula??o est? relacionada a uma gama de fatores de risco. A preval?ncia de atopia ? muito baixa na popula??o testada, e embora n?o tenha sido poss?vel comprovar a hip?tese de que atopia n?o estivesse associada significativamente ? sibil?ncia, podemos sugerir que asma nessa popula??o de baixo n?vel s?cio-econ?mico esteja relacionada a v?rios est?mulos ambientais (alguns diferentes dos encontrados em pa?ses mais desenvolvidos) al?m de uma hist?ria de predisposi??o familiar para asma. Fatores que possam proteger o desenvolvimento de sibil?ncia ou asma, ou ainda atopia dever?o ser estudados mais detalhadamente no futuro. Moradia em zona pobre conferiu prote??o para sibil?ncia aos 10 anos indicando que em pr?ximos estudos dever?amos coletar informa??es mais detalhadas com rela??o a estes fatores.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:32:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 412451.pdf: 927067 bytes, checksum: ec73648f4eb167d149ba89190dcd21c2 (MD5) Previous issue date: 2009-04-28 / Introdu??o: Resultados de estudos epidemiol?gicos s?o controversos em rela??o ao desenvolvimento de asma ap?s a exposi??o por helmintos. Ainda n?o est? claro se diferentes parasitas t?m efeitos distintos na resposta imune em asma. Objetivo: Analisar o efeito de diferentes extratos parasit?rios na resposta pulmonar al?rgica em um modelo animal murino. M?todos: Extrato de tr?s diferentes parasitas (Angiostrongylus costaricensis, Angiostrongylus cantonensis e Ascaris lumbricoides) foram injetados intraperitonealmente em camundongos f?meas adultas BALB/c. A sensibiliza??o com ovalbumina intraperitoneal e pulmonar foi realizada sete dias ap?s a sensibiliza??o com extrato parasit?rio. BALB/c sem extrato parasit?rio fizeram parte do grupo controle. No lavado broncoalveolar (LBA) foram analisados: n?mero total de c?lulas, c?lulas diferenciais, IL-5, IL-10 e INF-U. Resultados: O n?mero total de c?lulas, eosin?filos e linf?citos foram suprimidos pelos extratos dos parasitas Angiostrongylus cantonensis e Ascaris lumbricoides quando comparado ao grupo controle (p=0.001, p=0.001 e p<0.001, respectivamente) no LBA. Extratos de A. lumbricoides e Angiostrongylus costaricensis tamb?m induziram uma marcada redu??o de IL-5 no lavado broncoalveolar (p<0.001). N?veis de INF- U no lavado broncoalveolar n?o foram diferentes nos grupos estudados. Exposi??o ? A. lumbricoides levou a um aumento dos n?veis de IL-10 no pulm?o de camundongos (p<0.001). Conclus?o: Diferentes helmintos apresentam respostas imunes distintas em camundongos sensibilizados com OVA intrapulmonar. Nossos achados sugerem que controv?rsias publicadas em estudos epidemiol?gicos podem ser explicadas pelas diferen?as nas respostas imunes induzidas pelos diferentes parasitas na popula??o humana.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:32:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 415392.pdf: 471057 bytes, checksum: aec7072cceb7d2aa9b9353192f0e87d4 (MD5) Previous issue date: 2009-01-20 / OBJETIVO: Investigar a rela??o entre aleitamento materno e introdu??o da alimenta??o complementar com o desenvolvimento de asma em uma popula??o de baixa renda do Sul do Brasil. M?TODOS. Foi realizado um estudo transversal com uma amostra de 908 adolescentes de Uruguaiana, RS, com idade entre 10 e 16 anos. Asma e sintomas relacionados foram definidos atrav?s do question?rio ISAAC-phase II (International Study of Asthma and Allergies in Childhood). As vari?veis de desfecho foram asma, asma grave, sibil?ncia e atopia. O consumo alimentar na primeira inf?ncia foi avaliado atrav?s do question?rio de consumo alimentar no primeiro ano de vida. RESULTADOS: Foram estudados 908 adolescentes, sendo 50% (n = 454) do sexo feminino. A m?dia de idade foi de 12,58 anos. O aleitamento materno foi exclusivo por quatro meses em 11,6% da popula??o estudada. Em rela??o ? introdu??o da alimenta??o complementar, 84,6% das crian?as j? haviam consumido ch? aos 4 meses de idade. As frutas tamb?m foram introduzidas precocemente em 75,9% das crian?as. O desfecho de maior preval?ncia foi a sibil?ncia com 33,8%, seguido de atopia (13,7%), asma (13,0%) e por fim asma grave (9,4%). A an?lise bruta e ajustada referente ? associa??o entre alimenta??o no primeiro ano de vida e os desfechos cl?nicos n?o demonstrou nenhuma associa??o significativa entre aleitamento materno e sintomas respirat?rios ou atopia. Utilizando os desfechos asma e atopia n?o houve diferen?a entre as vari?veis de exposi??o. Em rela??o ao desfecho sibil?ncia, a introdu??o da alimenta??o s?lida antes dos quatro meses de idade, representou prote??o, com odds ratio de 0,67 (IC = 0,47 0,97). CONCLUS?ES. Nesta popula??o de baixa renda, n?o foi evidenciada associa??o protetora do aleitamento materno exclusivo ou do per?odo da introdu??o da alimenta??o complementar em rela??o a sintomas respirat?rios na inf?ncia e adolesc?ncia.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:32:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 423252.pdf: 3176835 bytes, checksum: f047be27c11502eb5aa36cd715f80816 (MD5) Previous issue date: 2009-10-29 / Introdu??o: Pesquisas sobre novas terapias em asma deveriam ter como alvo a mudan?a na resposta imune antes da express?o da doen?a, com f?rmacos ou subst?ncias capazes de modificar os fen?tipos das c?lulas T no in?cio da vida. O melhor momento para interven??es terap?uticas em asma, com este objetivo, ainda n?o est? claro e estabelecido. Objetivos: analisar o efeito da exposi??o de extrato parasit?rio de Angiostrongylus cantonensis em diferentes momentos do modelo murino de resposta pulmonar al?rgica a ovalbumina. M?todos: Extrato de Angiostrongylus cantonensis foi injetado por via intraperitoneal (i.p) em camundongos BALB/c adultos, em 3 diferentes momentos do protocolo de resposta pulmonar al?rgica a ovalbumina (OVA): 3 semanas antes (interven??o precoce; per?odo neonatal), 1 semana antes (pr?-sensibiliza??o), e 3 semanas depois do in?cio do protocolo de OVA (p?s-sensibiliza??o). Foram mensuradas a contagem total e diferencial de c?lulas no lavado broncoalveolar (LBA), os n?veis de peroxidase eosinof?lica (EPO) e altera??es histol?gicas no tecido pulmonar. Resultados: No grupo com interven??o neonatal houve redu??o significativa da contagem total de c?lulas (p=0,01), de neutr?filos (p=0,015) e linf?citos (p=0,01) no LBA e de EPO no tecido pulmonar (p=0,008). A an?lise histol?gica demonstrou uma redu??o do infiltrado pulmonar eosinof?lico peribr?nquico e perivascular mais acentuada no grupo com interven??o precoce. Conclus?es: O per?odo neonatal foi o momento onde o extrato parasit?rio foi mais eficaz em inibir a resposta pulmonar al?rgica em camundongos. O melhor momento para testar novas terapias imunomoduladoras em asma de origem at?pica parece ser os primeiros meses de vida.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:32:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 431554.pdf: 1140347 bytes, checksum: 1a8e9f1d9a303deab64243aa1e2049fe (MD5) Previous issue date: 2011-03-31 / Introdu??o: V?rias limita??es t?m sido levantadas em estudos de asma utilizando modelos murinos agudos sensibilizados com ovalbumina (OVA), mas este modelo ? ainda amplamente usado, ainda mantendo sua import?ncia em estudos pr?-cl?nicos. Algumas limita??es encontradas s?o o uso de adjuvante e os longos per?odos de sensibiliza??o. Objetivos: Testar se a sensibiliza??o com OVA em um per?odo curto, sem adjuvante, induziria uma resposta pulmonar eosinof?lica em camundongos similar aos protocolos j? previamente estabelecidos. M?todos: F?meas adultas de camundongos BALB/c foram utilizadas e divididas em grupos de acordo com o n?mero de sensibiliza??es com OVA (uma ou duas vezes, OVA: 20 &#956;g) e o n?mero(duas ou tr?s vezes)/dosagem(40 &#956;g e 100 &#956;g) de desafios intranasais. O protocolo mais curto (10 dias) consistiu de uma sensibiliza??o subcut?nea e tr?s desafios com OVA (100 &#956;g). Contagem total (CTC) e diferencial de c?lulas no lavado broncoalveolar (LBA), ensaio da peroxidase eosinof?lica (EPO) do tecido pulmonar e histopatologia (HE) dos pulm?es foram realizados 24 horas ap?s o ?ltimo desafio com OVA. Resultados: Contagem celular do LBA, EPO do tecido pulmonar e altera??es inflamat?rias da histologia pulmonar n?o foram diferentes entre os grupos estudados. O protocolo mais curto induziu uma resposta eosinof?lica pulmonar ? OVA semelhante ao grupo controle, ocorrendo o mesmo com os outros grupos. Conclus?o: O uso de sensibiliza??o subcut?nea com OVA, sem adjuvante, resulta em uma significativa resposta pulmonar al?rgica, permitindo sua utiliza??o em protocolos de dura??o mais curta. Nossos achados sugerem que este protocolo pode ser utilizado como teste pr?-cl?nico de primeira linha para pesquisa de novos f?rmacos, reduzindo custo, tempo e uso de adjuvante.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:33:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 451963.pdf: 1054634 bytes, checksum: 22a1a79881824872b314b26c9cf9ec20 (MD5) Previous issue date: 2013-03-04 / Introduction: Asthma is a disease with predominant presence of CD4 Th2 cells that affects children. The disease main characteristics is inflammation and airway hyperreactivity. Asthma has two main phenotypes depending on the presence of atopy. It was not yet fully described in asthmatic children of school age the presence of different profiles of Th1, Th2, Th17 and Treg cells in peripheral blood, which may be related to the pathogenesis of the disease. Aims: To analyze the phenotypic of CD4 T cells in asthmatics children in Porto Alegre/RS. Methods: This was a croos-sectional study when it was recruited children between 9 to 15 years old, asthmatics and controls. The PBMCs were isolated using Ficoll and the cells were cultured with anti-CD3/CD28antibodies, Derp1 or left unstimulated. After 24hs the cells were stained with antibodies specifics for transcription factors in order to analyze Th1, Th2, Treg and Th17 cells by flow cytometry and the supernatant was collected for cytokine analysis by CBA assay. Plasma was used to perform analysis of specific IgE. Results: It was analyzed 104 patients, 12 controls and 92 asthmatics. Atopic asthmatic patients presented higher frequency of Th2 cells compared with non-atopic and atopic controls. When we analyzed cells expressing more than one transcription factor it was observed that atopic asthmatics patients have a higher frequency of CD4+GATA3+FOXP3+, CD4+ROR&#947;T+GATA3+ and CD4+GATA3+Tbet+ compared with non-atopic patients and controls atopic. Analyzing the asthma severity it was seen a higher frequency of CD4+ROR&#947;T+GATA3+ in patients with moderate asthma compared with patients with mild asthma. Stimulating the cells from atopic asthma patients with anti-CD3 and anti-CD28 induced more Th1 profile while stimulating with DerP1 protein changed the profile of the cells mainly to Th17 and Treg cells. Conclusion: This is the first study in children that analyzes Th1, Th2, Treg and Th17 cells using the tag transcription factor by flow cytometry in asthmatic or atopic and non-atopic controls. We found a Th2 profile in atopic asthmatic children according to the literature. Interestingly non-atopic children showed no predominant profile. Children with moderate asthma have a profile that expresses both the transcription factor GATA3 and ROR&#947;T. Depending on the stimulus used it was induced different phenotypes in the cells of this group of patients with asthma. / Introdu??o: A asma ? uma doen?a com predomin?ncia da presen?a das c?lulas T CD4 do tipo Th2, que afeta das crian?as e tem como principais caracter?sticas a inflama??o e hiperreatividade das vias a?reas. A asma apresenta dois fen?tipos principais dependendo da presen?a de atopia. Ainda n?o foi totalmente descrito em crian?as asm?ticas com idade escolar a presen?a dos diferentes perfis de c?lulas Th1, Th2, Th17 e Treg no sangue perif?rico, que podem estar relacionados com a patog?nese da doen?a. Objetivo: Avaliar o perfil fenot?pico de c?lulas T CD4 em pacientes asm?ticos escolares do munic?pio de Porto Alegre/RS. M?todos: Este foi um estudo transversal realizado com o recrutamento de crian?as com 09 a 15 anos de idade, asm?ticas e controles. O sangue perif?rico foi coletado e as c?lulas mononucleares foram separadas utilizando Ficoll e colocadas em cultura com anticorpos anti-CD3/CD28. Ap?s 24hs as c?lulas foram marcadas com anticorpos espec?ficos para fatores de transcri??o para an?lise do perfil Th1, Th2, Th17 e Treg por citometria de fluxo e o sobrenadante foi recolhido para analise de citocinas por CBA. No plasma foi realizada a an?lise de IgE espec?ficas. Resultados: Foram analisados 104 pacientes, sendo 12 controles e 92 asm?ticos. Os pacientes asm?ticos at?picos apresentaram um perfil Th2 mais acentuado, comparado com os n?o-at?picos e controles at?picos. Quando analisamos as c?lulas que expressam mais de um fator de transcri??o foi observado que os pacientes asm?ticos at?picos apresentam maior frequ?ncia de c?lulas T CD4 positivas GATA3+FOXP3+, ROR&#947;T+GATA3+, GATA3+Tbet+ comparada com pacientes n?o-at?picos e controles at?picos. Analisando a severidade foi observado uma frequencia maior de c?lulas T CD4+ ROR&#947;T+ GATA3+ em pacientes com asma moderada comparado com pacientes com asma leve. O est?mulo com anti-CD3 e anti-CD28 nas c?lulas dos pacientes asm?ticos at?picos induziu mais um perfil Th1 enquanto que est?mulo com DerP1 mudou o perfil de algumas c?lulas principalmente de c?lulas Tregs e Th17. Conclus?o: Este ? o primeiro estudo em crian?as que analisa o perfil Th1, Th2, Th17 e Treg utilizando a marca??o de fatores de transcri??o por citometria de fluxo em crian?as asm?ticas at?picas ou n?o-at?picas e controles. Encontramos um perfil mais Th2 em crian?as asm?ticas at?picas de acordo com a literatura. Interessantemente as crian?as n?o-at?picas n?o apresentaram nenhum perfil predominante. As crian?as com asma moderadas apresentam um perfil que expressa ao mesmo tempo o fator de transcri??o RORgT e GATA3. Dependendo do estimulo s?o induzidas diferentes fen?tipos nas c?lulas deste grupo de pacientes com asma.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:33:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 457790.pdf: 3390024 bytes, checksum: 41c896c778956a74d409b1c1d99f687a (MD5) Previous issue date: 2014-03-05 / Introduction: The present work included two originals articles about asthma, which is an airway chronic disease characterized by bronchial hiperresponssivenes and variable airway limitation. House dust mites are a major aeroallergen, responsible to trigger chronic inflammation in humans. In recent years there has been a substantial increase in the prevalence of allergic diseases around the world, with regional differences, which has raised many questions about the environmental factors that are involved in the development of allergic response, and especially protective factors in this response, particularly in relation to the effect of infections. Some authors suggest that helminth infections act as a protective factor to allergic diseases. Murine models are widely used, but there is still a need for approaches with protocols more similar to the disease in humans. Objectives: The aim of the first article was develop a experimental model of pulmonary allergic disease using a house dust mite extract produced in a research laboratory with a more simple and economic way and to evaluate their capacity to induce an inflammatory response similar to the ones of established protocols. Methods: In the first article, female adult BALB/C mice were used, exposed acutely and chronically to house dust mite extract (HDM), with group controls. In the second article, C57BL/6 e C57BL/6 TRL4-/- female mice were exposed in early life to Angiostrongylus cantonensis extract, with control groups. At the adult age, animals were submitted to asthma ovalbumin protocol. Results: In the first article, animals exposed to HDM (acute and chronic) had a significant increase in the absolute counts of eosinophils in bronchoalveolar lavage fluid when compared to the negative control (p<0.001 and p=0.002), and showed histological changes consistent with the disease, with increased peribronchovascular infiltrate and mucus secretion, and collagen deposition around the airway. In the second article, animals that received worm extract had a significant increase in total and eosinophil cell counts in both strains, presenting histological changes compatible with these findings, with increased cellular infiltration, goblet cell hyperplasia and increased collagen deposition in the airway. Conclusion: The non-commercial mite extract in the article 1 has shown to be effective to induce an acute and chronic allergic inflammatory response in a murine model. In the second article, the Angiostrongylus cantonensis extract when administered subcutaneously did not inhibit ovalbumin-induced pulmonary allergic disease. / Esta disserta??o de Mestrado contemplou dois artigos originais sobre asma, que ? uma doen?a cr?nica das vias a?reas, caracterizada por hiperresponsividade br?nquica e limita??o vari?vel do fluxo a?reo. Os ?caros da poeira dom?stica s?o um dos principais aeroalergenos respons?veis por desencadear esta doen?a em humanos. Nos ?ltimos anos observou-se um crescimento substancial da preval?ncia de doen?as al?rgicas ao redor do mundo, com diferen?as regionais, que tem levantado diversos questionamentos a respeito dos fatores ambientais que est?o envolvidos no desenvolvimento da resposta al?rgica, e principalmente nos fatores protetores dessa resposta, particularmente em rela??o ao efeito de infec??es. Alguns autores sugerem que as infec??es helm?nticas funcionam como um fator de prote??o a doen?as al?rgicas. Modelos murinos s?o amplamente utilizados, por?m ainda existe a necessidade de aproxim?-los ainda mais da realidade em humanos. O objetivo do primeiro artigo foi desenvolver um modelo experimental de doen?a pulmonar al?rgica utilizando um extrato de ?caro da poeira dom?stica produzido em laborat?rio de pesquisa de maneira mais simples e econ?mica e avaliar a sua capacidade de induzir uma resposta inflamat?ria semelhante ? encontrada em protocolos j? estabelecidos. O segundo artigo teve como objetivo avaliar o efeito protetor do extrato de Angiostrongylus cantonensis administrado por via subcut?nea em animais rec?m desmamados num modelo de doen?a pulmonar al?rgica induzida por ovalbumina. No primeiro artigo foram utilizadas f?meas adultas da linhagem BALB/C, com grupos expostos agudamente e cronicamente a extrato de ?caro (HDM) e grupos controles. No segundo artigo, foram utilizados camundongos f?meas das linhagens C57BL/6 e C57BL/6 TLR4-/-, expostos precocemente a extrato de Angiostrongylus cantonensis, com grupos controles. Na idade adulta, os animais foram submetidos ao protocolo de indu??o de asma pela ovalbumina. No artigo 1, os animais expostos ao extrato de ?caro (agudo e cr?nico) apresentaram aumento significativo na contagem de eosin?filos no lavado broncoalveolar em rela??o ao controle negativo (p<0,001 e p=0,002), bem como apresentaram histologia compat?vel ? doen?a, com aumento de infiltrado peribroncovascular, na secre??o de muco e no dep?sito de col?geno ao redor da via a?rea. No artigo 2, os animais que receberam o extrato de verme tiveram um aumento significativo nas contagens total e de eosin?filos em ambas as linhagens, al?m de apresentar histologia compat?vel com esses achados, com aumento de infiltrado celular, hiperplasia de c?lulas caliciformes e aumento na deposi??o de col?geno na via a?rea. O extrato de ?caro n?o comercial produzido no artigo 1 demonstrou ser eficaz em induzir uma resposta inflamat?ria al?rgica aguda e cr?nica em modelo murino. No artigo 2, o extrato de Angiostrongylus cantonensis, quando administrado por via subcut?nea, n?o inibiu o desenvolvimento de doen?a pulmonar al?rgica induzida por ovalbumina.