Nos últimos anos, um importante destaque tem sido dado aos linfócitos Th17 para o desenvolvimento e manutenção da inflamação associada à autoimunidade. A esclerose múltipla é uma doença autoimune desmielinizante do SNC, cuja patogênese está associada à resposta do padrão Th17. Evidências têm demonstrado que estas células são submetidas a uma reprogramação metabólica após serem ativadas, sendo essa adequação essencial para sua completa diferenciação e aquisição de funções efetoras. A enzima Piruvato Quinase M2 (PKM2) participa da etapa final da glicólise convertendo fosfoenolpiruvato em piruvato. Estudos recentes demonstraram que a fosforilação de PKM2 a torna capaz de translocar para o núcleo, onde adquire um papel no controle da expressão gênica. Nesse sentido, o objetivo deste estudo foi avaliar o envolvimento da PKM2 na diferenciação de linfócitos Th17, bem como sua participação no desenvolvimento da encefalomielite autoimune experimental (EAE), um modelo animal de esclerose múltipla. Observou-se que durante o processo de diferenciação, os linfócitos Th17 aumentam a expressão gênica de PKM2 bem como a sua forma fosforilada (Y105). De forma interessante, tanto a inibição farmacológica como a deleção gênica da PKM2 especificamente em linfócitos T promoveram uma redução da diferenciação e expansão da subpopulação Th17, que foi associada com diminuição na expressão de moléculas efetoras e fatores de transcrição chave para o estabelecimento do fenótipo Th17. Em um contexto de resposta autoimune, notou-se que PKM2 é superexpressa nos órgãos linfóides periféricos e sistema nervoso central de animais com EAE, sendo correlacionada com o infiltrado de células inflamatórias. Corroborando com os dados in vitro, a deficiência de PKM2 em linfócitos T promoveu redução dos sinais clínicos da EAE, acompanhada de baixa frequência de linfócitos Th17 e menor expressão de moléculas inflamatórias do perfil Th17. Adicionalmente, o tratamento farmacológico com o inibidor da PKM2 atenuou a progressão e gravidade da EAE. Portanto, esses achados implicam um importante papel para PKM2 em doenças autoimunes por regular o desenvolvimento e função de linfócitos Th17. / Over the past few years, an important highlight has been given to Th17 lymphocytes for the development and maintenance of autoimmunity-associated inflammation. Multiple sclerosis is a CNS demyelinating autoimmune disease that is associated to Th17-mediated response. Some evidences have demonstrated that those cells undergo metabolic reprogramming after being activated, which is essential for their complete differentiation and acquisition of effector functions. The enzyme Pyruvate kinase M2 (PKM2) participates at the final step of glycolysis by converting phosphoenolpyruvate into pyruvate. Recent studies have demonstrated that PKM2 phosphorylation allows its translocation into the nucleus, where it plays a role in controlling gene expression. Thus, the aim of this study was to evaluate the involvement of PKM2 in Th17 lymphocytes differentiation, as well as its role in experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE), an animal model for multiple sclerosis. It was perceived that during differentiation process, Th17 lymphocytes increase PKM2 gene expression, and also its phosphorylated form (Y105). Interestingly, both pharmacological inhibition and T-lymphocyte-specific PKM2 gene deletion promoted a reduction in differentiation and expansion of Th17 subpopulation, being associated to diminished expression of effector molecules and key transcription factors for the establishment of Th17 phenotype. In the context of an autoimmune response, it was noticed that PKM2 is overexpressed in peripheral lymphoid organs and central nervous system of EAE-bearing mice, which was correlated with the inflammatory cell infiltration. Corroborating with in vitro data, the deficiency of PKM2 in T lymphocytes led to a reduction of EAE clinical score along with low Th17 frequency and diminished expression of Th17-related inflammatory molecules. Additionally, pharmacological treatment with the PKM2 inhibitor attenuated EAE progression and severity. Therefore, these findings imply an important role for PKM2 in autoimmune diseases by regulating the development and function of Th17 lymphocytes.

Orientador: Liana Maria Cardoso Verinaud / Texto em português e inglês / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-25T08:26:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Thome_Rodolfo_D.pdf: 18503134 bytes, checksum: f4906f6cd7d52ca62d211efbbca1732a (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A malária permanece como a maior doença infecciosa do mundo, sendo que metade da população mundial se encontra em risco de ser infectada. A destruição do agente causador, protozoários do gênero Plasmodium, é essencial para a resolução da moléstia e é mediada pela atuação coordenada entre linfócitos T e B. Foi noticiado a presença de auto-anticorpos em pacientes portadores de malária, e em alguns casos o agravamento de doenças autoimunes como o lúpus e, possivelmente, a esclerose múltipla. Estudos conduzidos em nosso laboratório demonstraram que a infecção por P. berghei NK65 em camundongos promoveu atrofia do timo e subsequente migração de células T CD4+CD8+ (DP) para órgãos linfoides secundários. Tendo em vista que o timo é o órgão linfoide primário responsável pela maturação e desenvolvimento de linfócitos T, desempenhando um papel primordial em gerar a tolerância central, o presente estudo teve por objetivo investigar o efeito da infecção por P. berghei sobre a evolução clínica da Encefalomielite Autoimune Experimental (EAE) e também sobre o perfil de ativação de células dendríticas. Os resultados obtidos mostraram que camundongos curados da malária apresentaram quadro clínico exacerbado de EAE quando comparados com animais que não entraram em contato com o plasmódio. A piora no quadro clínico de EAE se associou com a migração precoce de células T-DP para o Sistema Nervoso Central (SNC) e pela produção de citocinas inflamatórias por tais células. Camundongos resistentes a EAE desenvolveram a doença após a infecção por plasmódio, indicando que a atrofia tímica induzida pela infecção é capaz de alterar a susceptibilidade ao desenvolvimento de doenças autoimunes. Por outro lado, o tratamento de células dendríticas (DCs) com extratos derivados do plasmódio modificou seu estado de maturação/ativação para um perfil tolerogênico. A transferência adotiva de células dendríticas moduladas com extratos de plasmódio foi capaz de reduzir a EAE, bem como a neuro-inflamação do SNC pela supressão da resposta imune celular a neuro-antígenos. Tomados em conjunto, os resultados obtidos neste estudo mostram que a infecção por Plasmodium berghei NK65 promove alterações significativas no sistema imune que auxiliam na exacerbação da neuro-inflamação autoimune. Por outro lado, a utilização de extratos do plasmódio pode se tornar uma alternativa inovadora na modulação da inflamação por meio da transferência adotiva de células dendríticas tornadas tolerogênicas com tais extratos / Abstract: Malaria remains as the most frequent infectious disease in the world, where half of the world population is at risk. Destruction of the causative agent, protozoan of the Plasmodium gender, is essential for the resolution of the disease and this is mediated by the coordinated action of both T and B lymphocytes. It has been demonstrated that malaria-bearing patients possess auto-antibodies, e in some cases, the worsening of autoimmune diseases such as lupus and multiple sclerosis. Studies, conducted by our group, have shown that P. berghei NK65 infection promoted thymic atrophy and the subsequent migration of CD4+CD8+ (DP) T cells towards the peripheral immune system. Since the thymus is the primary lymphoid organ responsible for the generation and maturation of T cells, playing a major role in the shaping of T cells repertoire, the present study aimed to investigate the influence of P. berghei infection in the clinical course of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE), the mouse model for multiple sclerosis, and also over the maturation/activation status of dendritic cells. Results showed that malaria-cured mice developed a more severe EAE clinical course compared with control mice. The worsening in EAE score was related to the migration of DP-T cells towards the Central Nervous System (CNS), where these cells produced high amounts of inflammatory cytokines. Interestingly, EAE-resistant BALB/c mice developed the disease after plasmodia infection, indicating that the thymic atrophy induced by the infection is able to alter the susceptibility to autoimmune diseases. On the other hand, treatment of dendritic cells (DCs) with P.berghei extracts (PbX) modified their activation/maturation status towards a tolerogenic profile. The adoptive transfer of DC-PbX was able to suppress the development of EAE, as well as neuro-inflammation, through the reduction in cellular immune responses towards neuro-antigens. Taken together, the results collected in this study show that Plasmodium berghei NK65 infection promotes significant alterations in the immune system that aid the development of autoimmune neuro-inflammation. On the other hand, the use of plasmodia extracts may become an interesting approach to modulate inflammation through the adoptive transfer of tolerogenic dendritic cells / Doutorado / Imunologia / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Orientador: Vitor Baranauskas, Walkyria Mara Gonçalves Volpini / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Elétrica e de Computação / Made available in DSpace on 2018-08-23T06:56:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Camilo_DanielaFranchiPereiradaSilva_M.pdf: 7402339 bytes, checksum: 4a71443f20b4e716e5328394cdea307b (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Os nanotubos de carbono (NTC) têm sido utilizados em larga escala com finalidades industriais e avaliados, por sua estrutura e propriedades, como ferramenta para aplicação biomédica. Tanto a manipulação humana direta na produção industrial como a perspectiva do uso em medicina suscitaram amplas pesquisas para avaliar seu risco na saúde humana e o impacto ambiental. O presente trabalho teve como objetivo determinar os efeitos em longo prazo da administração sistêmica de nanotubos de parede múltipla (MWNTC) não funcionalizados na evolução do diabetes autoimune espontâneo do camundongo "Non Obese Diabetic" (NOD). O protocolo consistiu do tratamento de fêmeas NOD/Uni, de 6 semanas de vida, com uma única injeção intraperitoneal de MWNTC (100 ?g/animal) ou do veículo Pluronic (grupo controle) e do estudo longitudinal de parâmetros clínicos, histológicos e de resposta imunológica, até 24 semanas após administração. Os dados histológicos demonstraram que o MWNTC não funcionalizado foi absorvido da cavidade peritoneal e permaneceu retido em células fagocitárias de linfonodos peri-pancreáticos, baço e fígado, onde causou uma resposta inflamatória granulomatosa, e também em parede de ductos pancreáticos, tendo confirmada sua identificação estrutural in situ, dentro de fagolisossomos de macrófago e no epitélio ductal, por microscopia eletrônica de transmissão (HRTEM). Apesar de não ter havido diferenças na frequência de desenvolvimento do diabetes clínico ou das características morfológicas da insulite pancreática, as fêmeas NOD tratadas com MWNTC apresentaram flutuação média de glicemias significativamente maior em relação ao grupo controle, até o final do estudo (p<0,0001; Wilcoxon), com tendência a antecipação do aparecimento do diabetes clínico. Neste estudo, foi analisado um perfil de citocinas pró e anti-inflamatórias previamente avaliadas no laboratório, em fase aguda após a exposição à MWNTC. Foi focada a expressão evolutiva destas citocinas em linfonodos peri-pancreáticos, sítio de ativação de células T auto-reativas contra antígenos da célula ? pancreática. O MWNTC induziu uma resposta Th1 mais acentuada nos animais tratados, entre a 14ª e a 20ª semana de vida (momento de insulite extensa), com aumento da expressão de INF? e aumento da relação INF?/TGF? e INF?/IL10. Esta relação permanece elevada na 30ª semana de vida das fêmeas NOD tratadas, com reduzida expressão de TGF?. Nossos dados compreendem um dos mais longos seguimentos in vivo após administração sistêmica de MWNTC, demonstrando que o MWNTC não funcionalizado pode ser transportado e retido no sistema reticulo-endotelial e persistir no corpo por longo tempo, como detectado, neste estudo, em células fagocitárias de linfonodos regionais peri-pancreáticos de animais tratados, mesmo 6 meses após sua administração. Os nanotubos comerciais utilizados em diversos campos da tecnologia moderna são partículas não modificadas. Mesmo compreendendo a necessidade de se modificar a nanoestrutura para vislumbrar sua aplicação em medicina, relevância deve ser dada para o risco da exposição humana e ambiental ocorrendo neste momento. Uma resposta inflamatória crônica, com aumento da relação entre citocinas pró/antiinflamatórias, pode ser associada à maior gravidade de doenças autoimunes em organismos suscetíveis / Abstract: Carbon nanotubes (CNT) have been used in large scale for industrial purposes and evaluated for its structure and properties as a tool for biomedical application. Both the direct human manipulation in industrial production as the prospect of use in medicine attracted extensive research to assess their risk to human health and environmental impact. This study aims to determine the long-term effects of systemic administration of multi-wall carbon nanotubes (MWCNT) not functionalized in the evolution of spontaneous autoimmune diabetes in "Non Obese Diabetic" mice (NOD). The protocol consisted of the treatment of 6 weeks female NOD/Uni, with a single intraperitoneal injection of MWCNT (100 ?g/animal) or vehicle Pluronic (control group) with longitudinal study of clinical and histological parameters and immunological response until 24 weeks after administration. The histologic data demonstrated that non-functionalized MWCNT was absorbed from the peritoneal cavity and was retained on phagocytic cells of peripancreatic lymph nodes, spleen and liver, where it caused a granulomatous inflammatory response, and also in the wall of the pancreatic ducts, and their structural identification in situ was confirmed within macrophage phagolysosomes and ductal epithelium by transmission electron microscopy (HRTEM). Although there were no differences in the frequency of development of overt diabetes or morphological characteristics of pancreatic insulitis, MWCNT treated NOD females had average blood glucose fluctuation significantly higher than control group until the end of the study (p<0,0001; Wilcoxon), with a tendency to anticipate the onset of clinical diabetes. In this study we analyzed a profile of previously evaluated pro-inflammatory and antiinflammatory in the acute phase after exposure to MWCNT. We focused on the evolutive expression of these cytokines in peri-pancreatic lymph nodes, site of activation of T cells reactive against pancreatic ? cell antigens. MWCNT induced a stronger Th1 response in treated animals, between the 14th and 20th weeks of life (time of extensive insulitis), with increased expression of IFN? and increased ratio of INF?/TGF? and INF?/IL10. This ratio remains high at treated NOD females aged 30 weeks, with reduced expression of TGF?. Our data comprise one of the longest in vivo follow-up after systemic administration of MWCNT, demonstrating that nonfunctionalized MWCNT can be transported and retained in the reticulo-endothelial system and persist in the body for long time, as detected in this study, in phagocytic cells of peri-pancreatic regional lymph nodes, even six months after its administration. The nanotubes used in various commercial fields of modern technology are unmodified. Even comprising the need to modify the nanostructure to effective its application in medicine, importance should be given to the risk of human and environmental exposure occurring at this time. A chronic inflammatory response, with an increased ratio of pro/anti-inflammatory cytokines may be associated with greater severity of autoimmune diseases in susceptible organisms / Mestrado / Eletrônica, Microeletrônica e Optoeletrônica / Mestra em Engenharia Elétrica

Orientadores: Simone Appenzeller, Lilian Teresa Lavras Costallat / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-19T20:43:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Postal_Mariana_M.pdf: 2371381 bytes, checksum: f17ddfd3643881ea1b2d3482a2de1cb8 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Lúpus Eritematoso Sistêmico (LES) é uma doença autoimune, crônica e mutissistêmica, caracterizada por períodos de atividade e remissão. O interesse em identificar biomarcadores que se correlacionem com a atividade sistêmica do LES e que possam predizer um envolvimento orgânico futuro é crescente. O presente estudo, de característica transversal, teve como objetivo avaliar os níveis de interferon alfa (INF-?) e fator de necrose tumoral alfa (TNF-?) em pacientes com LES juvenil (LESj) (início da doença?16 anos), familiares de primeiro grau e indivíduos sadios não aparentados e elucidar sua associação com a atividade da doença, dados laboratoriais e de tratamento. Foram selecionados pacientes consecutivos com LESj acompanhados na Unidade de Reumatologia Pediátrica da UNICAMP entre 2009/2010. Manifestações clínicas, laboratoriais e medicação em uso foram avaliadas. A atividade da doença [SLE Disease Activity Index (SLEDAI)], dano cumulativo [Lupus International Collaborating Clinics/American College of Rheumatology Damage Index (SDI)] foi determinado para cada paciente no dia da coleta de sangue. Os transtornos de humor foram determinados através dos inventários de Depressão (BDI) e Ansiedade (BAI) de Beck. A dosagem das citocinas foi realizada por ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay). Níveis séricos de INF-? e TNF-? estavam aumentados no LESj quando comparado a familiares de primeiro grau e indivíduos sadios não aparentados. Níveis séricos de INF-? e de TNF-? foram significativamente maiores em pacientes com doença ativa (p=0,031; p=0,014, respectivamente). INF-? (r=0,33; p=0,012) e TNF-? (r=0,39; p=0,002) correlacionaram-se com SLEDAI. INF-? foi significativamente maior em pacientes com anti-dsDNA positivo (p=0,011), pacientes com vasculite cutânea (p=0,001), pacientes com rash malar (p=0,032) e em pacientes sem medicação (p=0,035). Níveis séricos de INF-? correlacionaram-se com níveis de C3 (r=0,34; p=0,032) e idade (r=-0,17; p=0,025). Níveis séricos de TNF-? foram significativamente maiores em pacientes com nefrite (p=0,009) e em pacientes com depressão (p=0,001). De acordo com nossos resultados, INF-? e TNF-? estiveram associados com a atividade da doença e poderiam ser considerados biomarcadores para avaliar atividade, porém estudos longitudidinais são necessários para determinar se o aumento dessas citocinas pode prever períodos de atividade em pacientes com LESj / Abstract: Systemic lupus erythematosus (SLE) is a chronic, multisystemic, relapsing and remitting autoimmune disease. The interest in identifying biomarkers that correlate with the SLE systemic activity and that can predict a future organ involvement is growing. The present cross-sectional study aimed to assess the levels of interferon alpha (IFN-?) and tumor necrosis factor alpha (TNF-?) in pediatric SLE patients (disease onset ?16 years), first-degree relatives and healthy unrelated controls and to elucidate its association with the activity disease, laboratory data and treatment. We selected consecutive pediatric SLE patients followed at the Pediatric Rheumatology Unit of UNICAMP between 2009/2010. Clinical, laboratory, disease activity [SLE Disease Activity Index (SLEDAI)], cumulative damage [Systemic Lupus International Collaborating Clinics / American College of Rheumatology Damage Index (SDI)] and current drug exposure were evaluated. Mood disorders were determined through the Depression (BDI) and Anxiety (BAI) Becks Inventory. The measurement of cytokines was performed by ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay). Serum levels of INF-? and TNF-? were increased in pediatric SLE patients (p?0.05) when compared to first-degree relatives and unrelated healthy controls. Serum levels of INF-? and TNF-? were significantly higher in patients with active disease (p=0.031; p=0,014, respectively). INF-? (r=0.33; p=0.012) and TNF-? (r=0.39; p=0.002) correlated with SLEDAI. INF-? was significantly higher in patients with positive anti-dsDNA (p=0.011), patients with cutaneous vasculitis (p=0.001), patients with malar rash (p=0.032) and patients without medication (p=0.035). Serum levels of IFN-? correlated with C3 levels (r=0.34; p=0.032) and age (r=-0.17; p=0.025). Serum levels of TNF-? were significantly higher in patients with nephritis (p=0.009) and in patients with depression (p=0.001). According to our results, IFN-? and TNF-? were associated with disease activity and could be considered biomarkers to assess disease activity in pediatric SLE patients, however longitudinal studies are needed to determine if increase of these cytokines may predict flares in pediatric SLE patients / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Orientador: Mary Luci de Souza Queiroz / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-20T01:29:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rocha_MichelleCorreada_D.pdf: 2565699 bytes, checksum: 3dabd7316dedec270c4ab7d36e55bdb7 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A sílica cristalina, ou quartzo, é um mineral abundante na areia, rochas e solo, cuja exposição crônica predispõe a lesões pulmonares, proliferação de fibroblastos e produção excessiva de colágeno no pulmão causando silicose, uma forma de fibrose pulmonar. A exposição ocupacional à sílica cristalina também tem sido considerada um fator predisponente a doenças autoimunes como artrite reumatóide, esclerodermia e lúpus eritematoso sistêmico. Neste sentido, a sílica tem mostrado agir como adjuvante, aumentando os níveis de imunocomplexos e imunoglobulinas de forma inespecífica, podendo estar relacionado ao desenvolvimento de doença autoimune. Porém, a relação entre exposição à sílica e o desenvolvimento de autoimunidade não está clara devido à falta de conhecimento dos mecanismos envolvidos. Não se sabe se a silicose constitui apenas um marcador de exposição a altos níveis de sílica em pó ou se é uma patologia que pode predispor à doença autoimune. Assim, uma investigação mais acurada de indicadores de autoimunidade em indivíduos com silicose é necessária. Nossos resultados apresentam evidências de alterações compatíveis com autoimunidade nos indivíduos expostos à sílica comparado com a população controle ao demonstrar ativação da resposta imune humoral e celular, além de alterações funcionais nos linfócitos T (LT). Isto foi verificado pelos níveis elevados de fator anti-núcleo, fator reumatóide e anticorpos anti-células endoteliais; pelo aumento da resposta proliferativa de células mononucleares do sangue periférico, dos níveis séricos de Fas ligante solúvel, do número de células Natural Killer e alteração dos níveis das citocinas IFN-_, TNF-_, IL-1_, IL-2, IL-6, IL-10 e TGF-_ bem como alterações funcionais nos LT pela menor expressão das moléculas regulatórias CTLA-4 e PD-1. Além disso, nosso estudo sugeriu uma influência genética na expressão do receptor PD-1 pela menor expressão deste na superfície das células T CD4+ em indivíduos com o genótipo GG no estudo do polimorfismo PD1.3 e também demonstrou que a autoimunidade pode ocorrer anteriormente às manifestações clínicas de silicose / Abstract: Crystalline silica, or quartz, is a mineral abundant in sand, rock and soil which chronic exposure is known to predispose to pulmonary lesions, fibroblasts proliferation and excessive collagen production in the lungs that leads to silicosis, a form of pulmonary fibrosis. Occupational exposure to crystalline silica dust has been examined as a possible risk factor with respect to several autoimmune diseases, such as rheumatoid arthritis, scleroderma and systemic lupus erythematosus. In this regard, silica has been known to have an adjuvant effect on immunocomplexes and immunoglobulins production in a nonspecific manner, thus reinforcing its relation with the appearance of autoimmunity. However, the relationship between silica exposure and the development of autoimmunity remains to be elucidated because the mechanisms underlying this association are unknown. It is unclear whether silicosis is only a marker for high-level silica dust exposure or whether it represents a pathologic process that may predispose some individuals to the development of autoimmune disease. Therefore, an accurate investigation of the autoimmunity indicators in silicotic individuals is required. Our results present evidences of alterations compatible with autoimmunity in silica-exposed individuals as compared to the control population by demonstrating an activation of humoral and cellular immune responses as well as functional alterations in T lymphocytes (LT). It was shown by the increased levels of antinuclear antibodies, rheumatoid factor and anti-endothelial cell antibodies, by the increased proliferative response of peripheral blood mononuclear cells, augmented levels of serum soluble Fas ligand, number of Natural Killer cells and alterations of IFN-_, TNF-_, IL-1_, IL-2, IL-6, IL-10 and TGF-_ cytokine levels as well as by functional LT alterations by thelower expression of CTLA-4 and PD-1 regulatory molecules. In addition, our study suggested a genetic influence in the expression of PD-1 receptor by its lower expression in the surface of T CD4+ cells in individuals carrying GG genotype in the study of PD1.3 polymorphism and also demonstrated that autoimmunity can occur before the clinical manifestations of silicosis / Doutorado / Farmacologia / Doutor em Farmacologia

Syftet med studien var att fånga in hur trötthet och smärta påverkar vardagen för unga vuxna med reumatisk sjukdom. Metoden är kvalitativ och för datainsamlingen gjordes semistrukturerade intervjuer. Materialet transkriberades transkriberades i sin helt och när det var klart påbörjades analysering av det som framkommit. I analysen sökte vi efter meningsbärande enheter och försökte ordna dem i kategorier och underkategorier. Resultatet visar att sjukdomen har en stor påverkan på våra informanters liv, men att de också har bra strategier för att kunna leva med sjukdomen. Det visar också på att även om strategierna är bra och de vet hur de ska hantera sjukdomen så stöter de på hinder, till exempel har skolgången blivit negativt påverkad för de flesta av informanterna. Något som visat sig vara extra viktigt har varit vännerna och det sociala nätverket. Alla informanter har på ett eller annat sätt verkligen understrykt betydelsen av vänner som är förstående och som på det sättet hjälper till att hitta det positiva med livet. Slutsatsen som kan dras utifrån detta arbete är att vara ung och ha en reumatisk sjukdom är något som påverkar hela livet. Vi har sett på informanterna i studien att trots detta flyter livet på och de lyckas i de flesta fall att få balans mellan aktivitet och vila. Just denna balans är mycket viktig.

Abstract Previous scientific data suggest that beta-cell destruction in type 1 diabetes is mediated by an autoimmune process. This work was aimed at expanding existing knowledge of humoral autoimmunity by analysing antibodies against the intracellular part of the IA-2 protein (IA-2A) in 1200 patients with the disease, 750 siblings and more than 370 non-diabetic controls. IA-2A were present at the time of diagnosis in the overwhelming majority of patients with type 1 diabetes, and were associated with human leucocyte antigen (HLA) DR4 and DQB1*0302, but not with gender. Humoral autoimmunity was more marked in patients diagnosed when younger than 20 years of age than in older ones, but no noticeable association was observed between IA-2A and age under the age of 20 years. IA-2A in combination with antibodies to GAD65 (GADA) identified a higher proportion of patients younger than 15 years of age at the time of diagnosis than did islet cell antibodies (ICA) alone. The levels of IA-2A and the proportions of antibody-positive patients decreased with increasing duration of type 1 diabetes, although more than half of the patients still tested positive for IA-2A after 10 years of clinical disease. IA-2A, GADA, insulin autoantibodies (IAA) and ICA were detected with individual fluctuations in 8-14% of the siblings of children with type 1 diabetes monitored from the time of diagnosis of the proband, and the fluctuations were modified by HLA-defined genetic susceptibility, age of the siblings, family size and total number of detectable autoantibodies. IA-2A positivity detected at the time of diagnosis of the proband increased the risk of future disease in the siblings. The positive predictive value increased with increasing IA-2A levels, although individual risk assessment appeared to be a complex matter. In conclusion, IA-2 appears to be an important autoantigen in type 1 diabetes, since IA-2A is associated with the HLA haplotype that most strongly predisposes subjects to the disease and have the highest positive predictive value for future disease out of the four autoantibodies used for risk assessment purposes.

La tolérance des lymphocytes TCD8+ est essentielle pour empêcher l'apparition d'auto-immunité mais représente un obstacle pour le développement de réponses cytotoxiques contre les tumeurs. La lymphodéplétion est utilisée comme adjuvant pour l'immunothérapie par transfert adoptif de cellules T cytotoxiques car elle améliore leur efficacité en favorisant la rupture de la tolérance périphérique. En condition lymphopénique aiguë, les lymphocytes T naïfs prolifèrent en absence apparente de stimulation antigénique et vont acquérir un phénotype et une fonctionnalité semblable aux cellules mémoires (LIP pour Lymphopenia Induced Proliferation). Les cellules mémoires ayant un seuil d'activation inférieur cellules naïves, il a été proposé que la différentiation des cellules TCD8+ potentiellement autoréactives en cellules de type mémoire dans des conditions lymphopéniques pouvait conduire à la rupture de la tolérance. Pendant ma thèse, j'ai étudié si la LIP est nécessaire pour la rupture de la tolérance croisée des cellules TCD8+ chez des souris transgéniques irradiées exprimant un antigène modèle dans les cellules β du pancréas. De manière surprenante, nous avons constaté que le blocage de la LIP ne permet pas d'inhiber l'apparition d'auto-réactivité : les lymphocytes TCD8+ qui ne transitent pas par un stade de différenciation de type mémoire parviennent à se différencier en cellules effectrices suite à la présentation croisée de l'antigène et à migrer vers le pancréas. Néanmoins, la LIP est requise pour induire de l'auto-réactivité lorsque la fréquence de lymphocytes T CD8+ est faible ; non pas à cause du déséquilibre de la population de cellules T régulatrices, mais dû à une nette augmentation du nombre de cellules TCD8+ autoréactives. Ainsi, bien que la LIP améliore les réponses auto- réactives des cellules TCD8+, la différentiation en cellules de type mémoire n'est pas indispensable pour la rupture de la tolérance croisée en condition lymphopénique induite par irradiation. / The immune system has evolved multiple mechanisms of peripheral tolerance to control CD8+ T cell responses and to prevent autoimmunity. However, they also represent a barrier for the development of cytotoxic responses against tumors. Lymphodepleting protocols are currently used as adjuvants for adoptive cytotoxic T cell immunotherapy because they enhance their potency. These protocols are thought to promote the breakdown of peripheral CD8+ T cell tolerance. Under acute lymphopenic conditions, naive T cells proliferate, in the apparent absence of antigenic stimulation at least in part due to a greater availability of the cytokine IL-7. Proliferating CD8+ T cells acquire a phenotype and functionality that is similar to memory cells and are termed memory-like cells. Since memory cells have a lower activation threshold than naïve cells, it has been proposed that differentiation of potentially autoreactive CD8+ T cells into memory-like cells under lymphopenic conditions could drive the breakdown of peripheral tolerance. Here we studied whether lymphopenia induced proliferation and differentiation are required for the breakdown of CD8+ T cell cross-tolerance in irradiated transgenic mice expressing a model antigen in the beta cells of the pancreas. Surprisingly, we found that blocking lymphopenia-induced proliferation and differentiation into memory-like cells did not prevent self-reactivity. CD8+ T cells that did not differentiate into memory-like cells still became effectors upon antigen cross-presentation and migrated to the site of antigen expression. Nonetheless, LIP did enhance CD8+ T cell mediated self-reactivity at low T cell frequencies. This effect could not be explained by a Treg imbalance but by a net increase in autoreactive CD8+ T cell numbers. Thus, although LIP enhances CD8+ T cell anti-self responses, differentiation into memory-like cells is not essential for the breakdown of cross-tolerance under the lymphopenic conditions provided by irradiation.

As the principal antigen-presenting cells to T cells, dendritic cells (DCs) have a key role in the balance of immunity and autoimmunity. They are essential in two major, converse roles - eliciting T cell immune responses to pathogenic material, and maintaining peripheral tolerance to self-tissue by inhibiting self-reactive T cells. These functions involve the processing of pathogenic or self antigens and subsequent presentation of antigenic peptides on MHC to antigen-specific T cells. DC recognition of conserved pathogenic markers induces a mature phenotype that governs immunogenic presentation to T cells and, consequently, the adaptive immune response. In contrast, DC recognition of self tissue suppresses maturation, instead inducing a tolerogenic phenotype that induces self antigen-specific T cell to die, become anergised, or converted to T regulatory cells. Apoptotic cells are the major source of self-antigen for the maintenance of peripheral tolerance, and their defective clearance by DCs is implicated in autoimmunity. Apoptotic cells are thought to actively suppress maturation of DCs and inhibit the possible immune responses promoted by proinflammatory mediators released from necrotic cells. However, the immune function of apoptotic cells and their relative influence over necrotic cells are highly contested, partially due to the complex nature of immunogenicity arising from the sourcing and generation of apoptotic cells. In this investigation, various methods of inducing apoptosis and necrosis are evaluated. Definitive methods of inducing well-characterised cell death are then employed to compare the effects of apoptotic and necrotic cells on dendritic cells and in vitro and in vivo immune responses. Reported here are in vitro findings that support previous reports of the anti-inflammatory response of DCs to apoptotic cells, and the inflammatory response of DCs to necrotic cells. The previously-reported inhibitory effect of apoptotic cells on LPS-induced secretion of Th1 cytokines is supported here, but the inhibitory effect of apoptotic cells on LPS-induced upregulation of co-stimulatory molecules is contested. Novel findings describe the upregulation of DC expression of co-inhibitory molecules induced by both apoptotic cells and necrotic cells. Apoptotic cells, but not necrotic cells, had a suppressive effect on CpG-induced upregulation of co-stimulatory molecules and pro-inflammatory cytokines. Apoptotic cells suppressed the capacity of untreated and CpG-treated, but not LPS-treated, DCs to elicit IFNγ production by T cells. Apoptotic cells, but not necrotic cells, induced regulatory T cells and partially restored their CpG-suppressed induction. Finally, apoptotic cell-modulation of DCs inhibited the induction of autoimmunity in a novel modification of an in vivo model of diabetes. Interestingly, novel evidence for the possibility of necrotic cell-induced tolerance by means of direct T cell killing is addressed.

Orientadores: Denise Engelbrecht Zantut Wittmann, Sarah Monte Alegre / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-28T02:28:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Botelho_IlkaMaraBorges_M.pdf: 1340793 bytes, checksum: 6ef5a41b67a7eddca52fc55dea2f96d4 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Introdução: Vitamina D tem sido apontada como importante regulador da resposta imune. Estudos tem demonstrado haver relação entre insuficiência de vitamina D e presença de doenças autoimunes como Tireoidite de Hashimoto (TH). É possível que o processo autoimune na TH seja inibido em diferentes estágios pela vitamina D em sua forma ativa. Nossos objetivos foram estudar a prevalência de insuficiência de vitamina D e a relação de suas concentrações séricas com marcadores de função e autoimunidade tireoideana. Material e Métodos: Amostras de sangue foram coletadas de 54 pacientes com TH e 54 indivíduos saudáveis sem diagnóstico de TH com idade entre 18 e 75 anos. Foram realizadas dosagens séricas de vitamina D (25OHD), TSH, T4 livre, cálcio, fósforo, paratormônio (PTH), anticorpos anti-tireoperoxidase (AcTPO), anti-tireoglobulina (AcTG) e anti-receptor de TSH (TRAb). Volume tireoideano foi estimado por ultrassonografia. Foram coletados dados demográficos, de peso, altura, índice de massa corporal (IMC) e tempo de diagnóstico. Pacientes e indivíduos do grupo de controle foram pareados por idade e sexo. O nível de significância estatística adotado foi 5%. Resultados: Prevalência de insuficiência de vitamina D foi encontrada em 68.5% dos pacientes e em 38.9% dos indivíduos do grupo de controle (p =0,002). Houve uma correlação positiva entre níveis de AcTPO e maior volumetireoideano nos pacientes (r = 0,319; p= 0.019). Não houve correlação entre concentração de vitamina D, TSH, T4livre,TRAb, AcTGe volume tireoideano. Conclusões: Demonstramosmaior prevalência deinsuficiência de vitamina Dem pacientescom tireoidite de Hashimotoem relaçãoa indivíduos de um grupo controlesaudável, não havendo correlaçãocom o estado hormnal tireoideanooumarcadores séricos deautoimunidadeda tireóide.Por sua vez, maior volume da tireóidese associou a maior grau de infiltração inflamatóriaautoimune,refletido pelacorrelaçãocom maiores concentrações AcTPO / Abstract: Introduction: Vitamin D has been pointed out as an important immune response regulator. Studies have shown a relationship between vitamin D insufficiency and the presence of autoimmune diseases such as Hashimoto's Thyroiditis (HT). It's possible that the autoimmune process in HT is inhibited in its different stages by vitamin D on its active form .Our aims were to study the prevalence of vitamin D insufficiency and relationship of the serum concentrations with thyroid function and autoimmunity markers. Material and Methods: Blood samples were collected from 54 patients with HT and 54 healthy individuals without a diagnosis of HT, aged 18 to 75 years. We conducted serum 25OH vitamin D, TSH, free T4, calcium, phosphorus, PTH, TPOAb, TgAb and TRAb. Thyroid volume was estimated by ultrasound. Data on demographic, weight, height, body mass index and time since diagnosis were collected. Patients and control subjects were matched by sexand age. The significance level for statistical analysis was 5%. Results: Prevalence of vitamin D insufficiency was found in 68.5% of patients and in 38.9% of subjects in the control group (p= 0.002). There was a positive correlation between TPOAb and volume in patients (p= 0.019). There was no correlation between vitamin D concentration and thyroid volume, TRAb, TgAb, TSH or free T4. Conclusions: We demonstrated a higher prevalence of vitamin D insufficiency in patients with Hashimoto's thyroiditis compared to individuals of a healthy control group, no correlation with thyroid state hormonal or serum markers of thyroid autoimmunity. In turn, greater thyroid volume was associated with a higher degree of autoimmune inflammatory infiltration, reflected by the correlation with higher concentrations AcTPO / Mestrado / Clinica Medica / Mestra em Ciências