A esclerose sistêmica (ES) é uma doença difusa do tecido conjuntivo caracterizada por anormalidades fibróticas, imunológicas e vasculares. O fator nuclear-kB (NF-kB), como um fator de transcrição essencial envolvido na regulação de respostas imunitárias, parece ser um bom candidato para estudos sobre a patogênese de doenças autoimunes, bem como a interleucina-10 (IL-10) e as quimiocinas, CXCL8 e CXCR2. Vários estudos demonstram o envolvimento dos genes CXCR2 e IL-10 na patogênese das doenças autoimunes. Acredita-se que combinações desses genes possam ser favoráveis para o desenvolvimento da ES, podendo seu conhecimento ser benéfico para o entendimento da patogênese da ES. O objetivo deste estudo é investigar o polimorfismo dos genes IL-10, CXCR2, CXCL8 e NFKB1 em um grupo de pacientes com ES, incluindo a forma difusa e limitada da doença. Nossos resultados confirmam a associação do fenótipo de alta produção (GCC + / GCC +) com risco aumentado para ES, mas não encontrou nenhuma correlação com polimorfismos do NF-KB. Nossos achados também sugerem um papel protetor da CXCL8 (- 251) A nos genótipos TT e TC do gene CXCR2 (+1208) e um risco aumentado do CXCL8 (-251) A em associação com o genótipo CC do CXCR2 (+1208) em pacientes com ES. Nenhuma diferença estatística no polimorfismo dos genes IL-10, CXCR2, CXCL8 e NFKB1 foram encontradas entre a forma difusa e a forma limitada. Estes resultados indicam um potencial papel do gene IL-10 e da combinação CXCR2/CXCL8 na patogênese da ES. / Systemic sclerosis (SSc) is a connective tissue disease characterized by fibrotic, immunological and vascular abnormalities. Nuclear factor-kB (NF-kB), as a key transcription factor involved in the regulation of immune responses, appears to be a good candidate for studies on the pathogenesis of autoimmune diseases, as well as the interleukin-10 (IL-10) polymorphism, and CXCL8 and CXCR2 chemokines. Several studies have demonstrated the involvement of genes CXCR2 and IL-10 in the pathogenesis of autoimmune diseases. It is believed that combinations of these genes may be favorable for the development of SSc, and this knowledge can contribute to the understanding of the pathogenesis of SSc. The objective of this study is to investigate the polymorphism of IL-10, CXCR2, CXCL8 and NFKB1 in a group of patients with SSc, including diffuse and limited subtypes of the disease. Our results confirm the association of high-producing phenotype (GCC/GCC) with increased risk for SSc, but found no correlation with NFKB1 polymorphisms. Our findings also suggest a protective role of CXCL8 (-251) A in the CXCR2 (+1208) TT and TC genotypes and an increased risk of CXCL8 (-251) A in association with the CXCR2 (+1208) CC genotype in SSc patients. No statistical difference in the polymorphism of IL-10, NFKB1, CXCR2 and CXCL8 were found between the diffuse and limited SSc. These results indicate a potential role of the IL-10 gene and the combination CXCR2/CXCL8 in the pathogenesis of SSc.

Le facteur de transcription Ikaros est un régulateur essentiel de la lymphopoïèse. Ikaros est nécessaire à la différenciation des lymphocytes B et joue aussi un rôle important dans la suppression des LAL-T. Contrairement aux souris mutantes nulles pour Ikaros, les souris mutantes hypomorphes IkL/L développent des lymphocytes B matures après la naissance. Avec l’âge, toutes les souris IkL/L développent des leucémies T Notch dépendantes avec des mutations similaires à celles trouvées chez les patients atteints de LAL-T. La souris IkL/L est donc un excellent modèle pour étudier l’activation des cellules B matures et la pathogenèsedes LAL-T. Nous avons montré que la délétion spécifique du promoteur et de l’exon 1 de Notch1 dans les cellules T conduit à l’activation de promoteurs cryptiques dans la région 3’ du gène, qui génèrent des transcrits codant pour des protéines Notch1 constitutivement actives qui accélèrent la leucémogenèse dans la souris IkL/L. De plus, nous mettrons en évidence l’existence de cellules initiatrices de leucémie dans les tumeurs IkL/L puisque nous avons trouvé que des cellules ayant la capacité de s’auto-renouveler représentent 1 sur 500. Enfin, nous avons montré que les cellules B IkL/L ont une activation excessive d’ERK et dep38 après la stimulation du BCR, ce qui résulte en une hyper-prolifération et une production d’autoanticorps liés au lupus systémique érythémateux. Nos résultats suggèrent qu’Ikaros est un régulateur négatif de l’activation des lymphocytes B. / The Ikaros transcription factor is a critical regulator of lymphopoeisis. Ikaros is needed for the differentiation of B cell and plays an important role in tumor suppression in T cells. Contrary to the other Ikaros targeted mutant mice, the IkL/L mouse develops mature B cells after birth. With age, it develops Notch dependent tumors with similar mutations as thosefound in human T cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL). Thus, the IkL/L mouse is an excellent model to study mature B cell activation and T-ALL tumor development. Here, we have shown that the deletion of the promoter and exon1 of the Notch1 gene in IkL/L T cells activates a cryptic promoter in the 3’ region which leads to the production of truncated, constitutively activated Notch1 proteins that accelerate tumorigenesis in the IkL/L mice. Moreover, we give evidence for the existence of LICs in the IkL/L tumors as we have found a specific subpopulation of cells with a frequency of 1 in 500 which show self-renewal capacity. In addition, we demonstrated that some tumor cells have the ability to efflux the Hoechst dye and that this side population is enriched in quiescent cells. Finally, we elucidate that IkL/L B cells display an enhanced activation of ERK and p38 after BCR stimulation that results in hyper-proliferation and the production of autoantibodies relatedto systemic lupus erythematosus (SLE). Our results suggest that Ikaros is a negative regulator of B cell activation.

Orientador: Giovanni Faria Silva / Banca: Oswaldo Melo da Rocha / Banca: Ana de Lourdes Candolo Martinelli / Resumo: A Hepatite C tem sido associada a várias manifestações extra-hepáticas como comprometimento articular. Em 90 pacientes VHC positivos, foram encontradas manifestações reumatológicas em 31%. A artralgia é mais comum, porém a artrite aparece em 4% dos casos. Clinicamente, a artrite relacionada ao VHC, pode ser indistinguível da artrite tradicional e a maioria dos doentes cumprem com os critérios diagnósticos para a doença preconizados pelo Colégio Americano de Reumatologia (ACR), tornando-se um desafio diagnóstico. O fator reumatóide e as crioglobulinas são os autoanticorpos mais presentes em cerca de 40% a 70% dos pacientes com VHC, portanto não auxiliam no diagnóstico diferencial . Anticorpos antipeptídeo citrulinado cíclico (anti-ccp), são considerados anticorpos com grande especificidade e sensibilidade para AR, assim, são capazes de distiguir atrite relacionada ao vírus e AR. Fatores genéticos do hospedeiro também foram associados à infecção pelo VHC, como os polimorfismos dos antígenos plaquetários humanos (HPAs). A avaliação de polimorfismos genéticos pode ser útil na identificação de maior suscetibilidade dos indivíduos infectados ao desenvolvimento de manifestações reumatológicas e/ou de alguns desses serem indicativos de um curso mais grave da doença. Assim, o objetivo deste estudo foi verificar possíveis associações de indicadores de autoimunidade e polimorfismos do HPA com manifestações reumatológicas em pacientes com Hepatite C. Realizamos avaliação clínica mediante consulta com o doente e levantamento em prontuário, coletas e armazenagem de amostras sanguíneas para genotipagem dos HPAs -1 e -3 pela técnica de PCR-SSP (Polymerase Chain Reaction-Sequence Specific Primers), HPA -5 pela técnica de PCR-RFLP (Polymerase Chain Reaction and Restriction Fragment Length Polymorphism), obtenção de valores de fator reumatóide por aglutinação do látex e anti-ccp pelo teste ELISA ... / Abstract: Hepatitis C has been associated with various extrahepatic manifestations such as joint involvement. In 90 HCV positive patients, rheumatological manifestations were found in 31%. Arthralgia is the most common, however the arthritis appears in 4% of the cases. Clinically, HCV related to arthritis may be indistinguishable from RA, since the majority of patients fulfilling the criteria of the American College of Rheumatology for the diagnosis of RA, making it diagnostic challenge. The rheumatoid factor and crioglobulines may be present in about 40 to 70% of patients with chronic HCV, which does not help in the differential diagnosis. The cyclic citrullinated peptide antibodies (anti-CCP) are considered good markers for RA, due to their high specificity and sensitivity, they can be useful in distinguishing between HCV arthritis and RA. The genetic factors of the host were also related to virus C infection like polymorphisms of human platelet antigens (HPAs). The evaluation of these genetic polymorphisms may reflect greater susceptibility to rheumatological manifestations and/or one of them be indicative of a more severe disease. So the goal of this study was evaluate possible associations of autoimmunity indicators and HPA polymorphisms with rheumatological manifestations in patients with Hepatitis C. We performed clinical evaluation by appointment and survey in medical chart, collection and storage of blood samples for genotyping of HPA- 1 and -3 by PCR-SSP (Polymerase Chain Reaction-Sequence Specific Primers), HPA-5 by PCR-RFLP (Polymerase Chain Reaction and Restriction Fragment Length Polymorphism), obtaining values of rheumatoid factor by latex agglutination and anti-ccp by ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay). The sample size of 160 subjects was determined by Fisher and Belle formula, using a confidence interval of 95%, accuracy of 7% and a ratio of 31% infected with hepatitis C who have rheumatological manifestations. Categorical ... / Mestre

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Alzheimer's Disease (AD) is the most important cause of dementia in the world.The involvement of the immune system in the pathogenic process has been shown by several studies including the description of autoantibodies (AAc) directed to targets in the central nervous system.It is not possible yet to further define what their exact involvement in AD is. In this study, using the methodology of Phage Display we sought to identify AAc specific to patients with the disease and to characterize their antigens using bioinformatics tools. We selected 10 patients with AD according to DSM-IV-TR and NINCDS ASRDA criteria and 10 healthy controls matched for age and sex.Using a library of peptides displayed on M13 phages, we performed biopanning, thus selecting 10 peptides recognized by IgG in sera from patients with AD. The probable epitopes were characterized and their involvement with AD was assessed in the literature.We found alignment with Neurexin 3β, PLK4, Neuroserpin, DNAJ, Mint-1/X11, units of the nicotinic acetylcholine receptor, Trombospondin-1, TRAF6, ACE, GDNF α3 receptor, PRUNE2 and CD44. The Phage display technology, combined with bioinformatics tools, has proven to be an interesting research methodology of AAb present in the serum of patients with AD and may provide new insights into disease mechanisms and therapeutic targets. / A Doença de Alzheimer (DA) é a causa mais importante de demência no mundo. O envolvimento do sistema imunológico no processo patogênico tem sido demonstrado em diversos estudos inclusive com a descrição de autoanticorpos (AAcs) presentes no soro dirigidos a alvos no sistema nervoso central. Não é possível definir ainda qual a sua participação exata na DA. Neste estudo, utilizando a metodologia do Phage Display procuramos identificar AAcs específicos de pacientes com a doença e caracterizar seus antígenos utilizando ferramentas de bioinformática. Foram selecionados 10 pacientes com DA segundo os critérios do DSM-IV TR e NINCDS-ASRDA e 10 controles saudáveis pareados por sexo e idade. Utilizando uma biblioteca de peptídeos expostos em fagos M13, foi realizado biopanning selecionando 10 peptídeos reconhecidos por IgGs no soro de pacientes com DA. Os prováveis epítopos foram caracterizados e seu envolvimento com a DA foi avaliado na literatura. Foram encontrados alinhamentos com a Neurexina 3β, PLK4, Neuroserpina, vários membros da família DNAJ, Mint-1/X11, Gene 2 de susceptibilidade para o Autismo, unidades α2, α3, α4 e α6 do receptor nicotínico da acetilcolina, Trombospondina-1, TRAF6, ECA, receptor α 3 do GDNF, PRUNE2 e CD44. A tecnologia de Phage Display, aliada a ferramentas de bioinformática, demonstrou ser interessante metodologia de investigação de AAcs presentes no soro de pacientes com DA podendo fornecer novas pistas sobre mecanismos da doença e alvos terapêuticos. / Mestre em Ciências da Saúde

A esclerose sistêmica (ES) é uma doença difusa do tecido conjuntivo caracterizada por anormalidades fibróticas, imunológicas e vasculares. O fator nuclear-kB (NF-kB), como um fator de transcrição essencial envolvido na regulação de respostas imunitárias, parece ser um bom candidato para estudos sobre a patogênese de doenças autoimunes, bem como a interleucina-10 (IL-10) e as quimiocinas, CXCL8 e CXCR2. Vários estudos demonstram o envolvimento dos genes CXCR2 e IL-10 na patogênese das doenças autoimunes. Acredita-se que combinações desses genes possam ser favoráveis para o desenvolvimento da ES, podendo seu conhecimento ser benéfico para o entendimento da patogênese da ES. O objetivo deste estudo é investigar o polimorfismo dos genes IL-10, CXCR2, CXCL8 e NFKB1 em um grupo de pacientes com ES, incluindo a forma difusa e limitada da doença. Nossos resultados confirmam a associação do fenótipo de alta produção (GCC + / GCC +) com risco aumentado para ES, mas não encontrou nenhuma correlação com polimorfismos do NF-KB. Nossos achados também sugerem um papel protetor da CXCL8 (- 251) A nos genótipos TT e TC do gene CXCR2 (+1208) e um risco aumentado do CXCL8 (-251) A em associação com o genótipo CC do CXCR2 (+1208) em pacientes com ES. Nenhuma diferença estatística no polimorfismo dos genes IL-10, CXCR2, CXCL8 e NFKB1 foram encontradas entre a forma difusa e a forma limitada. Estes resultados indicam um potencial papel do gene IL-10 e da combinação CXCR2/CXCL8 na patogênese da ES. / Systemic sclerosis (SSc) is a connective tissue disease characterized by fibrotic, immunological and vascular abnormalities. Nuclear factor-kB (NF-kB), as a key transcription factor involved in the regulation of immune responses, appears to be a good candidate for studies on the pathogenesis of autoimmune diseases, as well as the interleukin-10 (IL-10) polymorphism, and CXCL8 and CXCR2 chemokines. Several studies have demonstrated the involvement of genes CXCR2 and IL-10 in the pathogenesis of autoimmune diseases. It is believed that combinations of these genes may be favorable for the development of SSc, and this knowledge can contribute to the understanding of the pathogenesis of SSc. The objective of this study is to investigate the polymorphism of IL-10, CXCR2, CXCL8 and NFKB1 in a group of patients with SSc, including diffuse and limited subtypes of the disease. Our results confirm the association of high-producing phenotype (GCC/GCC) with increased risk for SSc, but found no correlation with NFKB1 polymorphisms. Our findings also suggest a protective role of CXCL8 (-251) A in the CXCR2 (+1208) TT and TC genotypes and an increased risk of CXCL8 (-251) A in association with the CXCR2 (+1208) CC genotype in SSc patients. No statistical difference in the polymorphism of IL-10, NFKB1, CXCR2 and CXCL8 were found between the diffuse and limited SSc. These results indicate a potential role of the IL-10 gene and the combination CXCR2/CXCL8 in the pathogenesis of SSc.

O Lupus Eritematoso Sistêmico (LES) é uma doença crônica auto-imune caracterizada pela alta produção de auto-anticorpos contra antígenos nucleares e pela formação de imunocomplexos que desencadeiam resposta citotóxica. As causas do LES são desconhecidas, porém se têm alguns indícios bem descritos que alterações genéticas, imunológicas e/ou ambientais podem desencadear processos autoimunes que levam ao LES. Esses fatores são, por exemplo, vírus e o mimetismo molecular causado por proteínas virais, ou genéticos que interfiram em rotas de processamento de imunocomplexos, produção de interferon (IFN) e transdução de sinal em linfócitos. Os receptores Toll-Like (TLR) são receptores de padrões moleculares de patógenos e estão envolvidos na produção de IFN, além de ser um elo importante entre a imunidade inata e a adquirida. Os TLR7/8/9 reconhecem ácidos nucléicos e são expressos em células dendríticas e células B, importantes na patogênese do LES. O objetivo do nosso trabalho foi avaliar a infuência dos polimorfismos genéticos potencialmente funcionais rs179008 no TLR7, rs3764880 no TLR8, rs5743836 e rs352140 no TLR9 em uma amostra de 370 pacientes com LES e em uma amostra de 415 indivíduos saudáveis provenientes do sul do Brasil. O polimorfismo rs5743836 foi genotipado através da técnica de PCR alelo específico BIPASA enquanto que os demais foram genotipados por PCR-RFLP. As freqüências genotípicas e haplotípicas foram comparadas usando o teste de Qui-Quadrado e as freqüências alélicas usando o teste Exato de Fisher. As comparações foram realizadas subdividindo os indivíduos de acordo com a origem étnica e sexo. As freqüências genotípicas e alélicas diferiram para rs179008 (P=0,020 e P=0,003; OR para presença do alelo T: 1,74 CI 95% 1,12-2,70) e rs5743836 (P=0,045 e P=0,017; OR para presença do alelo C: 1,59 CI 95% 0,99-2,57) nas comparações entre mulheres eurodescendentes controles e pacientes. Houve uma tendência na presença do alelo C em pacientes com Anti-Ro/SS-A comparados com pacientes sem Anti-Ro/SS-A (P corrigido = 0,06). As análises com haplótipos ou genótipos combinados não apresentaram diferenças estatisticamente significativas. Nossos dados sugerem que os alelos T do rs179008 e o alelo C do rs5743836 estão envolvidos na suscetibilidade/patogênese do LES em mulheres Eurodescedentes do sul do Brasil. / Systemic Lupus Erythematosus (SLE) is an autoimmune chronic disease characterized by high autoantibody production against nuclear antigens and by immunocomplexes formation that lead to citotoxicity. Causes of SLE are unknown, however there are some factors suggested to trigger autoimmune processes and result in SLE phenotype. These can be environmental, such as virus and molecular mimicry caused by their proteins, or genetic factors mainly related to immunocomplexes processing, interferon (IFN) production and the signal transduction pathway in lymphocytes. Toll-Like receptors (TLR) are pattern-recognition receptors and they are involved in IFN production, besides to be a link between the innate and acquired immune system. TLR7/8/9 recognize nucleic acids and are expressed mainly in dendritic and B cells. Our study aims to evaluate the prevalence of TLR7 rs179008, TLR8 rs3764880, TLR9 rs5743836 and rs352140, potencially functional polymorphisms, in 370 SLE patients and 415 healthy blood-donnors from southern Brazil. Rs5743836 polymorphism was genotyped trough allele-specific PCR BIPASA and the rest were genotyped through PCR-RFLP. Genotypic and allelic frequencies were compared using chi-square and exact fisher test, respectively. OR was calculated and clinical characteristics were evaluated. All comparisons were carried out grouping individuals according ethnicity and gender. Genotypic and allelic frequencies were significantly different for rs179008 (P=0.020 and P=0.003, OR for T allele carriers: 1.74, CI 95% 1.12-2.70) and rs5743836 (P=0.045 and P=0.017, OR for C allele carriers: 1.59, CI 95% 0.99-2.57) comparing European-derived SLE and control women. A trend in Anti-Ro/SS-A presence was observed for rs5743836 C allele carriers (corrected P=0.06). There were no statistical differences when haplotypes and combined genotypes were analyzed. Our data suggest both TLR7 rs179008 T allele and TLR9 rs5743836 C allele involved in SLE susceptibility/pathogenesis in women European-derived.

Les lymphocytes T CD4+FoxP3+ régulateurs (Tregs) jouent un rôle majeur dans l'homéostasie du système immunitaire et la prévention des maladies auto-immunes en régulant les réponses immunitaires. Aussi bien chez la souris que chez l'homme, il est établi que des mutations de Foxp3 entraînent une déficience en Tregs qui induit un syndrome auto-immun conduisant à la mort. Bien que Foxp3 soit essentiel à la différenciation, la fonction et la stabilité des Tregs, ce n'est pas le seul facteur de transcription impliqué dans ces processus. De plus en plus d'études suggèrent notamment un rôle important de NF- B dans le développement et la fonction des Tregs mais celui-ci reste mal défini. Nous avons donc généré des souris ayant une délétion spécifique des sous-unités RelA ou RelB de NF- KB dans les Tregs. L'invalidation de RelA dans les Tregs conduit au développement d'un syndrome auto-immun sévère qui s'explique par un défaut fonctionnel et de stabilité des Tregs. L'invalidation de RelB dans les Tregs semble, quant à elle, augmenter leur fonction suppressive. Nous montrons ainsi un rôle majeur de NF- KB dans la fonction des Tregs ouvrant la voie à de nouveaux traitements qui stimuleraient ou inhiberaient les Tregs en modulant l'activation de NF- KB. / CD4+ Foxp3+ regulatory T cells (Tregs) play a critical role in immune homeostasis and in the prevention of autoimmune diseases by regulating immune responses. In humans and mice, it is well established that Foxp3 deficiency conducts to the development of an autoimmune syndrome leading to early death. Although Foxp3 plays a critical role in differentiation, suppressive function and stability of Tregs, other transcription factors are also involved in different aspects of their biology. Even though increasing evidence shows an important role of NF-KB transcription factors in Treg cells development and function, their role is still poorly defined. To address this question we have generated conditional knock-out mice for RelA or RelB subunits of NF-KB only in Tregs. We show that the deficiency of RelA in Tregs leads to the development of a spontaneous severe autoimmune syndrome that could be explained by a defect in Tregs activation and stability. However, the deficiency of RelB seems to increase their suppressive function. Altogether, our data show a major role of NF-KB in Treg biology. This work could lead to new treatments that would stimulate or inhibit Tregs through the modulation of NF-KB activation.

O Lupus Eritematoso Sistêmico (LES) é uma doença crônica auto-imune caracterizada pela alta produção de auto-anticorpos contra antígenos nucleares e pela formação de imunocomplexos que desencadeiam resposta citotóxica. As causas do LES são desconhecidas, porém se têm alguns indícios bem descritos que alterações genéticas, imunológicas e/ou ambientais podem desencadear processos autoimunes que levam ao LES. Esses fatores são, por exemplo, vírus e o mimetismo molecular causado por proteínas virais, ou genéticos que interfiram em rotas de processamento de imunocomplexos, produção de interferon (IFN) e transdução de sinal em linfócitos. Os receptores Toll-Like (TLR) são receptores de padrões moleculares de patógenos e estão envolvidos na produção de IFN, além de ser um elo importante entre a imunidade inata e a adquirida. Os TLR7/8/9 reconhecem ácidos nucléicos e são expressos em células dendríticas e células B, importantes na patogênese do LES. O objetivo do nosso trabalho foi avaliar a infuência dos polimorfismos genéticos potencialmente funcionais rs179008 no TLR7, rs3764880 no TLR8, rs5743836 e rs352140 no TLR9 em uma amostra de 370 pacientes com LES e em uma amostra de 415 indivíduos saudáveis provenientes do sul do Brasil. O polimorfismo rs5743836 foi genotipado através da técnica de PCR alelo específico BIPASA enquanto que os demais foram genotipados por PCR-RFLP. As freqüências genotípicas e haplotípicas foram comparadas usando o teste de Qui-Quadrado e as freqüências alélicas usando o teste Exato de Fisher. As comparações foram realizadas subdividindo os indivíduos de acordo com a origem étnica e sexo. As freqüências genotípicas e alélicas diferiram para rs179008 (P=0,020 e P=0,003; OR para presença do alelo T: 1,74 CI 95% 1,12-2,70) e rs5743836 (P=0,045 e P=0,017; OR para presença do alelo C: 1,59 CI 95% 0,99-2,57) nas comparações entre mulheres eurodescendentes controles e pacientes. Houve uma tendência na presença do alelo C em pacientes com Anti-Ro/SS-A comparados com pacientes sem Anti-Ro/SS-A (P corrigido = 0,06). As análises com haplótipos ou genótipos combinados não apresentaram diferenças estatisticamente significativas. Nossos dados sugerem que os alelos T do rs179008 e o alelo C do rs5743836 estão envolvidos na suscetibilidade/patogênese do LES em mulheres Eurodescedentes do sul do Brasil. / Systemic Lupus Erythematosus (SLE) is an autoimmune chronic disease characterized by high autoantibody production against nuclear antigens and by immunocomplexes formation that lead to citotoxicity. Causes of SLE are unknown, however there are some factors suggested to trigger autoimmune processes and result in SLE phenotype. These can be environmental, such as virus and molecular mimicry caused by their proteins, or genetic factors mainly related to immunocomplexes processing, interferon (IFN) production and the signal transduction pathway in lymphocytes. Toll-Like receptors (TLR) are pattern-recognition receptors and they are involved in IFN production, besides to be a link between the innate and acquired immune system. TLR7/8/9 recognize nucleic acids and are expressed mainly in dendritic and B cells. Our study aims to evaluate the prevalence of TLR7 rs179008, TLR8 rs3764880, TLR9 rs5743836 and rs352140, potencially functional polymorphisms, in 370 SLE patients and 415 healthy blood-donnors from southern Brazil. Rs5743836 polymorphism was genotyped trough allele-specific PCR BIPASA and the rest were genotyped through PCR-RFLP. Genotypic and allelic frequencies were compared using chi-square and exact fisher test, respectively. OR was calculated and clinical characteristics were evaluated. All comparisons were carried out grouping individuals according ethnicity and gender. Genotypic and allelic frequencies were significantly different for rs179008 (P=0.020 and P=0.003, OR for T allele carriers: 1.74, CI 95% 1.12-2.70) and rs5743836 (P=0.045 and P=0.017, OR for C allele carriers: 1.59, CI 95% 0.99-2.57) comparing European-derived SLE and control women. A trend in Anti-Ro/SS-A presence was observed for rs5743836 C allele carriers (corrected P=0.06). There were no statistical differences when haplotypes and combined genotypes were analyzed. Our data suggest both TLR7 rs179008 T allele and TLR9 rs5743836 C allele involved in SLE susceptibility/pathogenesis in women European-derived.

A esclerose sistêmica (ES) é uma doença difusa do tecido conjuntivo caracterizada por anormalidades fibróticas, imunológicas e vasculares. O fator nuclear-kB (NF-kB), como um fator de transcrição essencial envolvido na regulação de respostas imunitárias, parece ser um bom candidato para estudos sobre a patogênese de doenças autoimunes, bem como a interleucina-10 (IL-10) e as quimiocinas, CXCL8 e CXCR2. Vários estudos demonstram o envolvimento dos genes CXCR2 e IL-10 na patogênese das doenças autoimunes. Acredita-se que combinações desses genes possam ser favoráveis para o desenvolvimento da ES, podendo seu conhecimento ser benéfico para o entendimento da patogênese da ES. O objetivo deste estudo é investigar o polimorfismo dos genes IL-10, CXCR2, CXCL8 e NFKB1 em um grupo de pacientes com ES, incluindo a forma difusa e limitada da doença. Nossos resultados confirmam a associação do fenótipo de alta produção (GCC + / GCC +) com risco aumentado para ES, mas não encontrou nenhuma correlação com polimorfismos do NF-KB. Nossos achados também sugerem um papel protetor da CXCL8 (- 251) A nos genótipos TT e TC do gene CXCR2 (+1208) e um risco aumentado do CXCL8 (-251) A em associação com o genótipo CC do CXCR2 (+1208) em pacientes com ES. Nenhuma diferença estatística no polimorfismo dos genes IL-10, CXCR2, CXCL8 e NFKB1 foram encontradas entre a forma difusa e a forma limitada. Estes resultados indicam um potencial papel do gene IL-10 e da combinação CXCR2/CXCL8 na patogênese da ES. / Systemic sclerosis (SSc) is a connective tissue disease characterized by fibrotic, immunological and vascular abnormalities. Nuclear factor-kB (NF-kB), as a key transcription factor involved in the regulation of immune responses, appears to be a good candidate for studies on the pathogenesis of autoimmune diseases, as well as the interleukin-10 (IL-10) polymorphism, and CXCL8 and CXCR2 chemokines. Several studies have demonstrated the involvement of genes CXCR2 and IL-10 in the pathogenesis of autoimmune diseases. It is believed that combinations of these genes may be favorable for the development of SSc, and this knowledge can contribute to the understanding of the pathogenesis of SSc. The objective of this study is to investigate the polymorphism of IL-10, CXCR2, CXCL8 and NFKB1 in a group of patients with SSc, including diffuse and limited subtypes of the disease. Our results confirm the association of high-producing phenotype (GCC/GCC) with increased risk for SSc, but found no correlation with NFKB1 polymorphisms. Our findings also suggest a protective role of CXCL8 (-251) A in the CXCR2 (+1208) TT and TC genotypes and an increased risk of CXCL8 (-251) A in association with the CXCR2 (+1208) CC genotype in SSc patients. No statistical difference in the polymorphism of IL-10, NFKB1, CXCR2 and CXCL8 were found between the diffuse and limited SSc. These results indicate a potential role of the IL-10 gene and the combination CXCR2/CXCL8 in the pathogenesis of SSc.

Orientador: Manoel Barros Bértolo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-16T11:59:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nishimura_WesterEidi_M.pdf: 1381412 bytes, checksum: a01c05ab2c7b9409c11bde6b5d507e4f (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar a freqüência e a associação clínica do HLA classe I e II em pacientes brasileiros com vasculite reumatóide (VR). Nós avaliamos 57 pacientes com artrite reumatóide (AR) estabelecida pelos critérios do Colégio Americano de Reumatologia (ACR) - 1987. Dezessete apresentavam VR de acordo com os critérios de Scott e Bacon - 1984. Foram avaliados nestes pacientes dados demográficos, fator reumatóide (FR), anticorpo anti-peptídio citrulinado cíclico (anti-CCP), tempo de diagnóstico da AR e a atividade da doença pelo escore de atividade da doença (DAS 28). Os alelos HLA foram tipados usando a reação em cadeia da polimerase hibridizado com seqüências específicas de "primers" de baixa resolução. Quanto à atividade da doença nos pacientes sem VR observou-se freqüência aumentada do HLA-B*15 (p=0.033) e HLA-DRB1*01 (p=0.014) com média de DAS 28 >3.2 _ 5.1 e o HLA-Cw*16 (p=0.027) e HLA-B*07 (p=0.027) com média de DAS 28>5.1. Não houve significância estatística de qualquer classe do HLA com o DAS 28 nos pacientes com VR. A comparação entre os 2 grupos mostrou diferença estatística (p=0.001) para o DAS 28 com rank médio = 39.94 para os pacientes com VR. O HLADQB1* 05 (p=0.035) esteve presente em 5 pacientes com VR com média de tempo de diagnóstico de AR de 17 anos e ausente em 12 pacientes com VR com média de tempo de diagnóstico AR de 11.45 anos. Os pacientes com VR tiveram freqüência aumentada do HLA-B*14 (p=0.006) e HLA-Cw*08 (p=0.006). Uma freqüência aumentada do HLA-DRB5*01 (p=0.048) foi encontrada em pacientes sem VR. Nossos resultados mostram na amostra estudada que a VR está associada ao sexo feminino, raça branca, FR e anti-CCP positivos. O HLA-B*15 e HLA-DRB1*01 podem estar envolvidos na atividade moderada da AR sem VR e o HLA-Cw*16 e HLA-B*07 podem estar envolvidos na atividade intensa da AR sem VR. Não houve diferença estatística das classes do HLA com o DAS 28 para VR, porém a doença foi mais ativa em pacientes com VR quando comparados com pacientes sem VR. O HLA-DQB1*05 pode estar envolvido nos casos tardios de AR para a manifestação da VR. O HLA-B*14 e HLACw* 08 podem estar envolvidos na suscetibilidade para VR. O HLA-DRB5*01 pode conferir proteção contra esta manifestação extra-articular da AR / Abstract: Our purpose was to evaluate the frequency and clinical association of HLA class I and class II in Brazilian patients with rheumatoid vasculitis (RV). We evaluated 57 patients with rheumatoid arthritis (RA) (American College of Rheumatology -ACR, 1987 criteria). Seventeen had RV according to Scott and Bacon's criteria - 1984. Demographic data, time of RA diagnosis, disease activity by the Disease Activity Score (DAS 28), rheumatoid factor (RF) and cyclic citrullinated peptide (anti-CCP) were analyzed. HLA alleles were typed using polymerase chain reaction-amplified DNA hybridized with low-resolution sequence-specific primers. HLA-B*15 (p=0.033) and HLA-DRB1*01 (p=0.014) were associated with moderate activity of RA without RV, and HLA-B*07 (p=0.027) and HLA-Cw*16 (p=0.027) with intense activity of RA without RV; no statistical significance of HLA class and DAS 28 was observed in RV. HLA-DQB1*05 (p=0.035) was related to RV in patients with late RA. The comparison between the groups showed an increased frequency of HLA-B*14 (p = 0.006) and HLA-Cw*08 (p = 0.006) in patients with RV, and an increased frequency of HLADRB5* 01 (p = 0.048) in patients without RV. In conclusion, the HLA-B*14 and HLACw* 08 may be involved in susceptibility to RV and HLA-DRB5*01 may confer protection against this extra articular manifestation of RA / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica