Orientador: Raphael Lucio Andreatti Filho / Banca: Adriano Sakai Okamoto / Banca: Marcelo Vasconcelos Meireles / Resumo: Na indústria avícola, o uso de Lactobacillus spp. como probiótico tem se mostrado freqüente e com resultados satisfatórios. A seleção de lactobacillus para uso como probióticos é realizada pela avaliação de seus produtos de metabolismo, bem como pelo seu potencial de adesão ao epitélio intestinal e efeito imunomodulatório. Este estudo teve como objetivo caracterizar a adesão in vitro e in vivo e efeito imunomodulatório de cepas de Lactobacillus isolados de aves. As amostras de Lactobacillus foram isoladas de aves de 35 semanas, identificadas por métodos bacteriológicos clássicos, confirmadas por meio de PCR e sua adesão foi avaliada in vitro com o uso de matriz celular tipo BMM e in vivo através da marcação por CFDA SE, inoculação em aves de um dia e coletas de duodeno, jejuno, íleo e cecos nos tempos de uma, quatro, 12 e 24 h após inoculação. As cinco cepas com maior adesão formaram um pool (PL) para avaliação de sua imunomodulação através da mensuração da concentração de IgA e IgG em soro e lavado intestinal. As aves foram divididas em grupos de acordo com o esquema de inoculação: grupo 1 (G1) tratado com Lactobacillus no segundo dia de vida e desafiado um dia depois (terceiro dia de vida) com Salmonella Enteritidis (SE) e novamente tratado com PL no quarto dia de vida; Grupo 2 (G2) Tratado com PL no segundo e no quarto dia de vida; Grupo 3 (G3) desafiado com SE no terceiro dia de vida; Grupo 4 (G4) controle negativo. Coletas aconteceram nos períodos de 7, 14, 21, 28 e 35 dias após a primeira inoculação. Os resultados encontrados demonstram uma maior adesão das cepas em ceco e uma importante correlação dos resultados in vitro com os in vivo. Conclui-se que a utilização de BMM representa uma importante técnica para triagem de amostras para posterior avaliação in vivo e a marcação com ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In the aviculture industry, the use of Lactobacillus spp. as a probiotic has been shown to be frequent and satisfactory. Lactobacillus is selected for probiotic use by evaluating its metabolism products and assessing its potential adhesion to intestinal epithelium and immunomodulatory effect. This study aimed to characterize the in vitro and in vivo adhesion and immunomodulatory effect of Lactobacillus strains isolated from birds. Lactobacillus samples isolated from 35-week-old birds were identified by classical bacteriological methods and confirmed by PCR; their adhesion was evaluated in vitro via BMM-type cell matrix and in vivo, through CFDA SE staining, inoculation in one-day-old birds and , duodenum, jejunum, ileum and cecum collections at one, four 12 and 24 hours after inoculation. The five best adhesive samples formed a pool (PL) for IgA and IgG measurement in serum and instestinal fluid. The birds were divided into groups by inoculation scheme: group 1 (G1) treated with LP on day two of life and challenged one day later (third day of life) with Salmonella Enteritidis (SE) and treated again with LP at four days; Group 2 (G2) Treated with LP on the second and fourth day of life; Group 3 (G3) challenged with SE at day three of life; Group 4 (G4) negative control. Collections were taken 7, 14, 21, 28 and 35 days after the first inoculation. The results demonstrate greater adhesion of strains in the cecum and an important correlation between in vitro and in vivo results. It is concluded that BMM utilization represents an important technique for triage of samples for subsequent in vivo evaluation and that CFDA SE staining is efficient for identifying this bacterial characteristic. The Lactobacillus-treated groups, G1 and G2, presented the highest IgA concentrations at the end of the experiment, 12,054.6 and... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Luis Antonio Mathias / Coorientador: Fernando Gomes Buchala / Banca: Luis Guilherme de Oliveira / Banca: Maria Carolina Guido / Resumo: Avaliou-se a implantação das medidas de biosseguridade nas granjas em resposta ao trabalho de educação sanitária realizado no Núcleo Colonial Mombuca no Município de Guatapará, SP, pela Coordenadoria de Defesa Agropecuária da Secretaria da Agricultura (CDA) e estabeleceu-se relação com resultados laboratoriais obtidos. Para isso, foi aplicado um questionário de investigação epidemiológica em dezembro de 2010 em entrevistas com os 19 avicultores com a finalidade de obter informações de interesse epidemiológico. Além disso, foram colhidos 30 suabes de traqueia em todas as propriedades em três momentos: em dezembro de 2010, antes do início da vacinação com vacina atenuada, e em novembro de 2011 e março de 2013, após o início da vacinação e encaminhados para o Instituto Biológico de Descalvado, sendo submetidos à prova laboratorial Polymerase Chain Reaction (PCR) para detecção da presença do vírus da laringotraqueíte (LTI). O modelo de educação sanitária escolhido foi o dialógico, com orientações e esclarecimentos de dúvidas nas propriedades. O diagnóstico das medidas de biosseguridade implantadas foi realizado por meio de "check list" aplicado por representantes da CDA nas granjas do Núcleo Colonial Mombuca em maio de 2010. Em julho de 2010, dois meses após a avaliação inicial, as propriedades foram inspecionadas para verificação da manutenção das medidas implementadas anteriormente. A segunda reavaliação com aplicação do check list nas granjas foi realizada após dois anos da avaliação inicial, em maio de 2012. As ações de educação sanitária influenciaram significativamente a implantação das medidas de biosseguridade. Não foram observadas associações entre a adoção de medidas de biosseguridade e o relato de doença respiratória pelos proprietários ou a detecção do vírus da laringotraqueíte pelo exame de PCR. Também não ... / Abstract: This present work has not only evaluated the implementation of biosecurity measures on poultry farms in response to the sanitary educational work program, conducted in Mombuca Colonial Nucleus, in the city of Guatapará, state of São Paulo/Brazil, by the Agriculture Defense Coordinating Council (ADCC) of the Secretariat of Agriculture, but also established relationship with obtained laboratory results. In order to achieve that, an epidemiological inquiry was conducted in December of 2010, in which 19 poultry farmers were interviewed with the purpose of obtaining information of epidemiological interest. In addition, 30 tracheal swabs were taken from all the properties at 3 different times: in December of 2010, before the start of the vaccination with attenuated vaccine, in November of 2011, and in March of 2013, after the start of the vaccination; thereafter, they were sent to the Biological Institute of Descalvado, where were subjected to the laboratory test Polymerase Chain Reaction (PCR) in order to detect the presence of the infectious laryngotracheitis virus (ILT). The chosen sanitary education model was the dialogical approach through orientation and clarification on doubts in the properties. The diagnosis of implanted biosecurity measures was conducted through the 'checklist', applied by the ADCC representatives on poultry farms of Mombuca Colonial Nucleus, in May of 2010. In July of 2010, two months after the initial evaluation, the properties were controlled with the purpose of verifying the maintenance of previous implemented measures. The second revaluation with the checklist application on poultry farms was conducted after two years of the initial evaluation, in May of 2012. The actions of the sanitary education strongly influenced the implementation of the biosecurity measures. Associations between adoption of biosecurity measures and report of respiratory disease by ... / Mestre

Orientador: Raimundo Souza Lopes / Coorientador: Adivaldo Henrique da Fonseca / Banca: Regina Kiomi Takahira / Banca: Pedro Paulo Pires / Resumo: A borreliose aviária é uma doença septicêmica aguda, causada pela espiroqueta Borrelia anserina, atualmente apresenta baixa incidência, porém devido ao crescimento das criações orgânicas e rústicas, maior preocupação com o bem estar animal e a diminuição do uso de antibióticos em rações, existe a preocupação com o surgimento de surtos da doença, que poderão causar prejuízos econômicos. Desta maneira, torna-se de fundamental importância a busca por terapias alternativas, entre elas, a terapia fotodinâmica, como a associação da luz ultravioleta (UV) e riboflavina, com o objetivo de controlar a enfermidade. Este estudo objetivou verificar a eficácia do tratamento com luz UV e riboflavina para inativar ou eliminar a B. anserina no soro de galinhas poedeiras, por meio de exames diagnósticos e laboratoriais, e verificar a resposta imunológica do hospedeiro. O experimento foi conduzido em duas etapas, a etapa in vivo foi formada por 42 galinhas, divididas em sete grupos, composto por seis aves: Grupo 1 (saúde); Grupo 2 (doença) inoculadas com soro parasitado por B. anserina; Grupo 3 (imunossupressor) que receberam metilprednisolona; Grupo 4 ( luz UV) que receberam soro parasitado tratado com luz UV; Grupo 5 (riboflavina) que receberam soro parasitado tratado com riboflavina; Grupo 6 (grupo veículo) que receberam soro parasitado tratado com cloreto de sódio 0,9%; Grupo 7 (tratado) que receberam soro positivo para B. anserina tratado com luz ultravioleta associada à riboflavina. A etapa in vitro, foi realizada com placas de cultivo celular, divididas igualmente à etapa in vivo. Foi possível observar que o tratamento não apresentou resultado esperado na inativação ou completa eliminação do agente. No entanto, uma ave do grupo tratado sobreviveu e apresentou recuperação clínica e laboratorial, apresentando espiroquetemia no Momento 11 e qPCR positivo no momento... / Abstract: Avian borreliosis is an acute septicemic disease caused by the spirochete Borrelia anserina, has a low incidence, however due to the growth of organic and rustic creations, greater concern for animal welfare and reducing the use of antibiotics in feed, there is concern about the emergence of disease outbreaks, which may cause economic losses. Thus, it becomes fundamental to search for alternative therapies, including, photodynamic therapy, such as the combination of ultraviolet (UV) light and riboflavin with the aim of controlling the disease. This study aimed to investigate the efficacy of treatment with riboflavin and UV light to inactivate or eliminate B. anserina from serum laying hens by diagnostic and laboratory tests and to check to the host immune response. The experiment was conducted in two stages. The first one was the in vivo step composed of 42 chickens, divided into seven groups of six birds: Group 1 (health); Group 2 (disease) inoculated with the serum parasitized by Borrelia anserina; Group 3 (immunosuppressant) receiving methylprednisolone; Group 4 (UV light) which received parasitized saline treated with UV light; Group 5 (riboflavin) which received parasitized serum treated with riboflavin; Group 6 (solvent group) parasitized receiving saline treated with 0.9% sodium chloride; Group 7 (treated) which received positive serum for B. anserina treated with ultraviolet light associated with riboflavin. The secund one was the in vitro stage performed with cell culture plates, equally divided in vivo step. It was observed that the treatment did not show expected results in the inactivation or complete elimination of the agent. However, one bird from the treated group survived and showed clinical and laboratory recovery, presenting spirochetemia at the time 11 and qPCR positive at the time... / Mestre

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:49Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-03Bitstream added on 2014-08-13T18:00:25Z : No. of bitstreams: 1 000759978.pdf: 3044978 bytes, checksum: 9f473a1b86cb80664b6c1dbec2f5f431 (MD5) / O tifo aviário é uma doença sistêmica provocada por Salmonella enterica subsp. enterica sorovar Gallinarum biovar Gallinarum (SG), bactéria que não possui flagelos. Acredita-se que por não produzir flagelos, SG seria pouco reconhecido pelo sistema imune. Deste modo provocaria inflamação de menor intensidade na mucosa, atravessando as barreiras intestinais com mais facilidade e assim desencadeando enfermidade sistêmica severa. Com intuito de investigar essa hipótese, em estudo prévio, construiu-se um mutante de SG capaz de produzir flagelos (SG Fla+) o qual desencadeou resposta imune pro-inflamatória em células de cultivo, além de ter sido menos patogênico para as aves que a estirpe selvagem de SG. No entanto, notou-se que SG Fla+ tende a interromper a produção de flagelos após dois ou mais cultivos consecutivos em meio sólido, tornando-se fenotipicamente aflagelado (SG Fla-). O presente estudo teve por objetivo comparar a patogenicidade de SG Fla+, SG Fla- e SG para aves susceptíveis ao tifo aviário. No primeiro experimento, as taxas de mortalidade provocadas pelas estirpes e excreção fecal das mesmas foram avaliadas. Enquanto que no segundo ensaio, avaliou-se a capacidade de colonização cecal, invasão das estirpes em fígado e baço e ainda a presença e intensidade de lesões macro e microscópicas em órgãos. SG Fla+ provocou mortalidade inferior às estirpes aflageladas, quando utilizou-se o inóculo diluído (106 UFC). Os resultados da excreção fecal demonstram que SG Fla+ foi a estirpe mais excretada. Pôde-se observar que SG e SG Fla- foram recuperadas do conteúdo cecal em quantidades mais elevadas que SG Fla+. SG e SG Fla- foram isoladas mais cedo e em maiores quantidades que SG Fla+ em fígado e baço. No fígado verificou-se hepatomegalia, degeneração, congestão, alterações na coloração (amarelo-esverdeado a esverdeado), reatividade linfoide ... / The fowl typhoid is a systemic disease of chickens caused by Salmonella enterica subsp. enterica serovar Gallinarum biovar Gallinarum (SG), a microorganism that does not produce flagella. It is suggested that due to the absence of flagella SG is poorly recognized by the bird immune system. As a result, just a mild inflammation is induced in the gut mucosa, favoring the development of a severe systemic infection. In order to investigate this hypothesis, in a previous study, a mutant of SG capable of producing flagella (SG Fla+) was constructed. This mutant was able to trigger mRNA pro-inflammatory cytokines e chemokines in cultured cells and was less pathogenic to birds than the wild type strain. However, it was noticed that SG Fla+ trends to stop flagella production after culturing two or more times on solid medium, becoming non-flagelated (SG Fla-). The present study aimed at comparing the pathogenicity of SG Fla+, SG Fla- and SG to birds. In the first experiment, mortality rates caused by strains and fecal excretion were evaluated. In the second assay, the ability of strains in colonizing the ceca and invading liver and spleen were compared. In addition to this, the presence and intensity of macroscopic and microscopic lesions in organs were evaluated. When inoculated in the lower amount (106 CFU) SG Fla+ provoked less mortality than the non-flagellate strains. The results of fecal excretion indicate that SG Fla+ was more excreted than the other strains. It was observed that SG and SG Fla- were recovered from cecal contents in higher amounts than SG Fla+. SG Fla- and SG were isolated earlier and in higher amounts from liver and spleen. In the liver degeneration, congestion, changes in color (greenish-yellow to greenish), lymphoid reactivity and multifocal areas of necrosis were noticed. Spleen was enlarged and congested; foci of necrosis in the white pulp and lymphoid depletion were also ...

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-07-02Bitstream added on 2014-11-10T11:57:46Z : No. of bitstreams: 1 000791050.pdf: 1212437 bytes, checksum: 9ae3d90306ec2b076f8c91fe5477dba7 (MD5) / Avaliou-se a implantação das medidas de biosseguridade nas granjas em resposta ao trabalho de educação sanitária realizado no Núcleo Colonial Mombuca no Município de Guatapará, SP, pela Coordenadoria de Defesa Agropecuária da Secretaria da Agricultura (CDA) e estabeleceu-se relação com resultados laboratoriais obtidos. Para isso, foi aplicado um questionário de investigação epidemiológica em dezembro de 2010 em entrevistas com os 19 avicultores com a finalidade de obter informações de interesse epidemiológico. Além disso, foram colhidos 30 suabes de traqueia em todas as propriedades em três momentos: em dezembro de 2010, antes do início da vacinação com vacina atenuada, e em novembro de 2011 e março de 2013, após o início da vacinação e encaminhados para o Instituto Biológico de Descalvado, sendo submetidos à prova laboratorial Polymerase Chain Reaction (PCR) para detecção da presença do vírus da laringotraqueíte (LTI). O modelo de educação sanitária escolhido foi o dialógico, com orientações e esclarecimentos de dúvidas nas propriedades. O diagnóstico das medidas de biosseguridade implantadas foi realizado por meio de “check list” aplicado por representantes da CDA nas granjas do Núcleo Colonial Mombuca em maio de 2010. Em julho de 2010, dois meses após a avaliação inicial, as propriedades foram inspecionadas para verificação da manutenção das medidas implementadas anteriormente. A segunda reavaliação com aplicação do check list nas granjas foi realizada após dois anos da avaliação inicial, em maio de 2012. As ações de educação sanitária influenciaram significativamente a implantação das medidas de biosseguridade. Não foram observadas associações entre a adoção de medidas de biosseguridade e o relato de doença respiratória pelos proprietários ou a detecção do vírus da laringotraqueíte pelo exame de PCR. Também não ... / This present work has not only evaluated the implementation of biosecurity measures on poultry farms in response to the sanitary educational work program, conducted in Mombuca Colonial Nucleus, in the city of Guatapará, state of São Paulo/Brazil, by the Agriculture Defense Coordinating Council (ADCC) of the Secretariat of Agriculture, but also established relationship with obtained laboratory results. In order to achieve that, an epidemiological inquiry was conducted in December of 2010, in which 19 poultry farmers were interviewed with the purpose of obtaining information of epidemiological interest. In addition, 30 tracheal swabs were taken from all the properties at 3 different times: in December of 2010, before the start of the vaccination with attenuated vaccine, in November of 2011, and in March of 2013, after the start of the vaccination; thereafter, they were sent to the Biological Institute of Descalvado, where were subjected to the laboratory test Polymerase Chain Reaction (PCR) in order to detect the presence of the infectious laryngotracheitis virus (ILT). The chosen sanitary education model was the dialogical approach through orientation and clarification on doubts in the properties. The diagnosis of implanted biosecurity measures was conducted through the ‘checklist’, applied by the ADCC representatives on poultry farms of Mombuca Colonial Nucleus, in May of 2010. In July of 2010, two months after the initial evaluation, the properties were controlled with the purpose of verifying the maintenance of previous implemented measures. The second revaluation with the checklist application on poultry farms was conducted after two years of the initial evaluation, in May of 2012. The actions of the sanitary education strongly influenced the implementation of the biosecurity measures. Associations between adoption of biosecurity measures and report of respiratory disease by ...

Orientador: Angelo Berchieri Junior / Coorientador: Oliveiro Caetano de Freitas Neto / Banca: Manoel Victor Franco Lemos / Banca: Marcelo Brocchi / Resumo: Salmonella enterica subespécie enterica sorovar Gallinarum biovar Gallinarum (S. Gallinarum) é o agente causador do tifo aviário, uma doença septicêmica que afeta principalmente aves adultas. Enquanto que Salmonella enterica subespécie enterica sorovar Gallinarum biovar Pullorum (S. Pullorum) é o micro-organismo causador da pulorose, uma doença sistêmica de aves jovens que evolui para infecção persistente em algumas das que se recuperam da enfermidade. Essas bactérias são genética e fenotipicamente semelhantes, mas causam doenças distintas nos seus hospedeiros. Ainda não se sabe quais seriam as informações genéticas responsáveis pelas diferenças na patogenia e epidemiologia do tifo aviário e da pulorose. Com o intuito de investigar essas diferenças, realizou-se o presente estudo, o qual teve por objetivo a comparação dos genomas de S. Gallinarum 287/91, S. Pullorum 449/87 e de S. Pullorum RKS5078 para identificação de regiões de diferenças ("regions of difference" - RODs). Foram identificadas e caracterizadas 68 RODs, buscando correlacioná-las com a patogenicidade desses micro-organismos. Além disso, verificou-se a conservação de algumas dessas RODs em 25 estirpes de S. Gallinarum e 17 de S. Pullorum, todas isoladas de aves com tifo aviário ou pulorose. De modo geral, as RODs continham genes relacionados à funções celulares (reparo de DNA e desagregação de proteínas celulares), produção de energia e virulência. No presente estudo foi observado que a maioria das RODs conservadas era gerada por deleções que, putativamente, provocaram perda de sua função em S. Pullorum. Por esse motivo, foi possível sugerir que a diferente epidemiologia de S. Pullorum poderia ser decorrente de perdas gênicas e não de características adquiridas... / Abstract: Salmonella enterica subspecie enterica serovar Gallinarum biovar Gallinarum (S. Gallinarum) is the causative agent of fowl typhoid, a septicaemic disease that affects mainly adult birds, whereas Salmonella enterica subespécie enterica serovar Gallinarum biovar Pullorum (S. Pullorum) causes pullorum disease, a systemic disease of young birds that can evolve for persistent infection in some of the birds that recovered. These two bacteria are genetic and phenotypically similar but cause distinct diseases. The genetic bases that would be responsible for these differences are still unknown. For this reason the present study was elaborated and aimed at comparing S. Gallinarum 287/91, S. Pullorum 449/87 and S. Pullorum RKS5078 whole genomes in order to identify regions of difference (RODs). In total, 68 RODs were identified and characterized attempting to correlate them with pathogenicity features of S. Gallinarum and S. Pullorum. Furthermore, the conservation status of some RODs was verified in 25 strains of S. Gallinarum and 17 strains of S. Pullorum, all of them isolated from birds with fowl typhoid or pullorum disease. Overall, the RODs have genes involved in cellular functions (as DNA repair and protein disaggregation), energy production and virulence. In the present study, it was noticed the majority of conserved RODs were generated by deletions in genes which, putatively, would lead to loss of their function in S. Pullorum. Consequently, it was feasible to suggest that S. Pullorum epidemiology would be a negative characteristic stemming from gene losses rather than acquired features... / Mestre

Made available in DSpace on 2016-07-01T13:10:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-10-01. Added 1 bitstream(s) on 2016-07-01T13:14:13Z : No. of bitstreams: 1 000866861.pdf: 4350939 bytes, checksum: 66e4b66b2461c077e283b7a4e21e7b8f (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A borreliose aviária é uma doença septicêmica aguda, causada pela espiroqueta Borrelia anserina, atualmente apresenta baixa incidência, porém devido ao crescimento das criações orgânicas e rústicas, maior preocupação com o bem estar animal e a diminuição do uso de antibióticos em rações, existe a preocupação com o surgimento de surtos da doença, que poderão causar prejuízos econômicos. Desta maneira, torna-se de fundamental importância a busca por terapias alternativas, entre elas, a terapia fotodinâmica, como a associação da luz ultravioleta (UV) e riboflavina, com o objetivo de controlar a enfermidade. Este estudo objetivou verificar a eficácia do tratamento com luz UV e riboflavina para inativar ou eliminar a B. anserina no soro de galinhas poedeiras, por meio de exames diagnósticos e laboratoriais, e verificar a resposta imunológica do hospedeiro. O experimento foi conduzido em duas etapas, a etapa in vivo foi formada por 42 galinhas, divididas em sete grupos, composto por seis aves: Grupo 1 (saúde); Grupo 2 (doença) inoculadas com soro parasitado por B. anserina; Grupo 3 (imunossupressor) que receberam metilprednisolona; Grupo 4 ( luz UV) que receberam soro parasitado tratado com luz UV; Grupo 5 (riboflavina) que receberam soro parasitado tratado com riboflavina; Grupo 6 (grupo veículo) que receberam soro parasitado tratado com cloreto de sódio 0,9%; Grupo 7 (tratado) que receberam soro positivo para B. anserina tratado com luz ultravioleta associada à riboflavina. A etapa in vitro, foi realizada com placas de cultivo celular, divididas igualmente à etapa in vivo. Foi possível observar que o tratamento não apresentou resultado esperado na inativação ou completa eliminação do agente. No entanto, uma ave do grupo tratado sobreviveu e apresentou recuperação clínica e laboratorial, apresentando espiroquetemia no Momento 11 e qPCR positivo no momento... / Avian borreliosis is an acute septicemic disease caused by the spirochete Borrelia anserina, has a low incidence, however due to the growth of organic and rustic creations, greater concern for animal welfare and reducing the use of antibiotics in feed, there is concern about the emergence of disease outbreaks, which may cause economic losses. Thus, it becomes fundamental to search for alternative therapies, including, photodynamic therapy, such as the combination of ultraviolet (UV) light and riboflavin with the aim of controlling the disease. This study aimed to investigate the efficacy of treatment with riboflavin and UV light to inactivate or eliminate B. anserina from serum laying hens by diagnostic and laboratory tests and to check to the host immune response. The experiment was conducted in two stages. The first one was the in vivo step composed of 42 chickens, divided into seven groups of six birds: Group 1 (health); Group 2 (disease) inoculated with the serum parasitized by Borrelia anserina; Group 3 (immunosuppressant) receiving methylprednisolone; Group 4 (UV light) which received parasitized saline treated with UV light; Group 5 (riboflavin) which received parasitized serum treated with riboflavin; Group 6 (solvent group) parasitized receiving saline treated with 0.9% sodium chloride; Group 7 (treated) which received positive serum for B. anserina treated with ultraviolet light associated with riboflavin. The secund one was the in vitro stage performed with cell culture plates, equally divided in vivo step. It was observed that the treatment did not show expected results in the inactivation or complete elimination of the agent. However, one bird from the treated group survived and showed clinical and laboratory recovery, presenting spirochetemia at the time 11 and qPCR positive at the time... / FAPESP: 2014/03353-4

Orientador: Angelo Berchieri Junior / Coorientador: Oliveiro Caetano de Freitas / Banca: Ana Maria Iba Kanashiro / Banca: Rafael Antonio Casarin Penha Filho / Resumo: Salmonella Enteritidis (SE) causa o paratifo aviário em aves e frequentemente está relacionada aos surtos de infecção alimentar em seres humanos. A contribuição do flagelo versus motilidade na interação patógenohospedeiro requer estudos mais aprofundados. Para melhor entendimento da contribuição individual desses fatores de virulência em aves, pintinhos de um dia de vida foram desafiados oralmente com estirpe selvagem de SE, uma mutante não-móvel mas flagelada (SE ΔmotB) e outra mutante aflagelada (SE ΔfliC). Excreção fecal e colonização de fígado, baço e conteúdo cecal pelas estirpes de SE foram avaliadas. Além disso, também foi realizada a avaliação das alterações macroscópicas e microscópicas. Nos estágios iniciais da infecção, ambos mutantes mostraram menor capacidade de colonizar o ceco, além de menor recuperação no baço por SE ΔfliC comparando a estirpe selvagem SE. Após 7 dpi não havia diferenças na contagem das três estirpes em conteúdo cecal, fígado e baço. Análises histopatológicas demonstraram que estirpes flageladas (SE ΔmotB e SE) induziram reatividade linfóide em inglúvio, ceco, íleo e fígado. No entanto, nos estágios iniciais da infecção a estirpe SE ΔfliC não estimulou a reatividade linfóide em lâmina própria de ceco e íleo mas induziu discretos focos necróticos em fígado. Portanto, neste estudo a presença de estrutura flagelar e motilidade parece exercer um papel nos estágios iniciais da colonização intestinal e infecção sistêmica por SE nas aves. / Abstract: Salmonella Enteritidis (SE) causes fowl paratyphoid in poultry often related to outbreaks of food-borne diseases in humans. The contribution of flagella and motility in host pathogen interaction require further investigation. To better understand the individual contribution of these virulence factors in poultry, one day old chickens were challenged orally with wildtype strain of SE, a nonmotile but fully flagellated (SE ΔmotB) and aflagellated mutant (SE ΔfliC). Faecal excretion and colonization of liver, spleen and cecal contents by the SE strains were assessed. Additionally, the assessment of gross and microscopic alterations was also performed. At the early stages of infection both mutants showed lower capacity to colonize the ceca, besides the lower recovering in spleen of SE ΔfliC comparing to the wild type of SE. After 7 dpi there were no differences among the counts of the three strains in ceca, liver and spleen. Histopathological analyses demonstrated that flagellated strains (wild type SE and SE ΔmotB) induced lymphoid reactivity in crop, ceca, ileum and liver. On the other hand, in the early stages of infection, SE ΔfliC strain did not stimulate lymphoid reactivity in lamina propria of ceca and ileum but induced discrete necrotic foci in liver. Thus in the present study the flagellar structure and motility seemed to play a role at the early stages of the intestinal colonization and systemic infection by SE in the chicken. / Mestre

Orientador: Angelo Berchieri Junior / Coorientador: Oliveiro Caetano de Freitas Neto / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Banca: Antonio José Piantino Ferreira / Resumo: O tifo aviário é uma doença sistêmica provocada por Salmonella enterica subsp. enterica sorovar Gallinarum biovar Gallinarum (SG), bactéria que não possui flagelos. Acredita-se que por não produzir flagelos, SG seria pouco reconhecido pelo sistema imune. Deste modo provocaria inflamação de menor intensidade na mucosa, atravessando as barreiras intestinais com mais facilidade e assim desencadeando enfermidade sistêmica severa. Com intuito de investigar essa hipótese, em estudo prévio, construiu-se um mutante de SG capaz de produzir flagelos (SG Fla+) o qual desencadeou resposta imune pro-inflamatória em células de cultivo, além de ter sido menos patogênico para as aves que a estirpe selvagem de SG. No entanto, notou-se que SG Fla+ tende a interromper a produção de flagelos após dois ou mais cultivos consecutivos em meio sólido, tornando-se fenotipicamente aflagelado (SG Fla-). O presente estudo teve por objetivo comparar a patogenicidade de SG Fla+, SG Fla- e SG para aves susceptíveis ao tifo aviário. No primeiro experimento, as taxas de mortalidade provocadas pelas estirpes e excreção fecal das mesmas foram avaliadas. Enquanto que no segundo ensaio, avaliou-se a capacidade de colonização cecal, invasão das estirpes em fígado e baço e ainda a presença e intensidade de lesões macro e microscópicas em órgãos. SG Fla+ provocou mortalidade inferior às estirpes aflageladas, quando utilizou-se o inóculo diluído (106 UFC). Os resultados da excreção fecal demonstram que SG Fla+ foi a estirpe mais excretada. Pôde-se observar que SG e SG Fla- foram recuperadas do conteúdo cecal em quantidades mais elevadas que SG Fla+. SG e SG Fla- foram isoladas mais cedo e em maiores quantidades que SG Fla+ em fígado e baço. No fígado verificou-se hepatomegalia, degeneração, congestão, alterações na coloração (amarelo-esverdeado a esverdeado), reatividade linfoide ... / Abstract: The fowl typhoid is a systemic disease of chickens caused by Salmonella enterica subsp. enterica serovar Gallinarum biovar Gallinarum (SG), a microorganism that does not produce flagella. It is suggested that due to the absence of flagella SG is poorly recognized by the bird immune system. As a result, just a mild inflammation is induced in the gut mucosa, favoring the development of a severe systemic infection. In order to investigate this hypothesis, in a previous study, a mutant of SG capable of producing flagella (SG Fla+) was constructed. This mutant was able to trigger mRNA pro-inflammatory cytokines e chemokines in cultured cells and was less pathogenic to birds than the wild type strain. However, it was noticed that SG Fla+ trends to stop flagella production after culturing two or more times on solid medium, becoming non-flagelated (SG Fla-). The present study aimed at comparing the pathogenicity of SG Fla+, SG Fla- and SG to birds. In the first experiment, mortality rates caused by strains and fecal excretion were evaluated. In the second assay, the ability of strains in colonizing the ceca and invading liver and spleen were compared. In addition to this, the presence and intensity of macroscopic and microscopic lesions in organs were evaluated. When inoculated in the lower amount (106 CFU) SG Fla+ provoked less mortality than the non-flagellate strains. The results of fecal excretion indicate that SG Fla+ was more excreted than the other strains. It was observed that SG and SG Fla- were recovered from cecal contents in higher amounts than SG Fla+. SG Fla- and SG were isolated earlier and in higher amounts from liver and spleen. In the liver degeneration, congestion, changes in color (greenish-yellow to greenish), lymphoid reactivity and multifocal areas of necrosis were noticed. Spleen was enlarged and congested; foci of necrosis in the white pulp and lymphoid depletion were also ... / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-23Bitstream added on 2014-06-13T20:20:49Z : No. of bitstreams: 1 000735464.pdf: 1949620 bytes, checksum: 606a0ff66a766ef4da41725644d69aa5 (MD5) / Salmonella enterica subespécie enterica sorovar Gallinarum biovar Gallinarum (S. Gallinarum) é o agente causador do tifo aviário, uma doença septicêmica que afeta principalmente aves adultas. Enquanto que Salmonella enterica subespécie enterica sorovar Gallinarum biovar Pullorum (S. Pullorum) é o micro-organismo causador da pulorose, uma doença sistêmica de aves jovens que evolui para infecção persistente em algumas das que se recuperam da enfermidade. Essas bactérias são genética e fenotipicamente semelhantes, mas causam doenças distintas nos seus hospedeiros. Ainda não se sabe quais seriam as informações genéticas responsáveis pelas diferenças na patogenia e epidemiologia do tifo aviário e da pulorose. Com o intuito de investigar essas diferenças, realizou-se o presente estudo, o qual teve por objetivo a comparação dos genomas de S. Gallinarum 287/91, S. Pullorum 449/87 e de S. Pullorum RKS5078 para identificação de regiões de diferenças (“regions of difference” – RODs). Foram identificadas e caracterizadas 68 RODs, buscando correlacioná-las com a patogenicidade desses micro-organismos. Além disso, verificou-se a conservação de algumas dessas RODs em 25 estirpes de S. Gallinarum e 17 de S. Pullorum, todas isoladas de aves com tifo aviário ou pulorose. De modo geral, as RODs continham genes relacionados à funções celulares (reparo de DNA e desagregação de proteínas celulares), produção de energia e virulência. No presente estudo foi observado que a maioria das RODs conservadas era gerada por deleções que, putativamente, provocaram perda de sua função em S. Pullorum. Por esse motivo, foi possível sugerir que a diferente epidemiologia de S. Pullorum poderia ser decorrente de perdas gênicas e não de características adquiridas... / Salmonella enterica subspecie enterica serovar Gallinarum biovar Gallinarum (S. Gallinarum) is the causative agent of fowl typhoid, a septicaemic disease that affects mainly adult birds, whereas Salmonella enterica subespécie enterica serovar Gallinarum biovar Pullorum (S. Pullorum) causes pullorum disease, a systemic disease of young birds that can evolve for persistent infection in some of the birds that recovered. These two bacteria are genetic and phenotypically similar but cause distinct diseases. The genetic bases that would be responsible for these differences are still unknown. For this reason the present study was elaborated and aimed at comparing S. Gallinarum 287/91, S. Pullorum 449/87 and S. Pullorum RKS5078 whole genomes in order to identify regions of difference (RODs). In total, 68 RODs were identified and characterized attempting to correlate them with pathogenicity features of S. Gallinarum and S. Pullorum. Furthermore, the conservation status of some RODs was verified in 25 strains of S. Gallinarum and 17 strains of S. Pullorum, all of them isolated from birds with fowl typhoid or pullorum disease. Overall, the RODs have genes involved in cellular functions (as DNA repair and protein disaggregation), energy production and virulence. In the present study, it was noticed the majority of conserved RODs were generated by deletions in genes which, putatively, would lead to loss of their function in S. Pullorum. Consequently, it was feasible to suggest that S. Pullorum epidemiology would be a negative characteristic stemming from gene losses rather than acquired features...