Submitted by MONALLY CONCEIÇÃO COSTA DE AQUINO null (monallyaquino@yahoo.com.br) on 2018-03-07T16:42:09Z No. of bitstreams: 1 Tese 28_02_18.pdf: 668105 bytes, checksum: 3162eceaf16141ce03dfad0ffdb157e4 (MD5) / Approved for entry into archive by Isabel Pereira de Matos null (isabel@fmva.unesp.br) on 2018-03-08T14:08:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 aquino_mcc_dr_araca_int.pdf: 668105 bytes, checksum: 3162eceaf16141ce03dfad0ffdb157e4 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-08T14:08:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 aquino_mcc_dr_araca_int.pdf: 668105 bytes, checksum: 3162eceaf16141ce03dfad0ffdb157e4 (MD5) Previous issue date: 2018-02-28 / Outra / Giardia duodenalis é um protozoário flagelado que coloniza o trato intestinal de hospedeiros vertebrados. A caracterização molecular de G. duodenalis revolucionou a compreensão da taxonomia, diversidade genética e epidemiologia da giardíase em seres humanos e animais. Em nosso estudo, realizamos a caracterização molecular de G. duodenalis em bezerros bubalinos do Estado de São Paulo, Brasil. Assim, foram colhidas 183 amostras fecais de animais da raça Murrah, com até seis meses de idade. Estas amostras foram examinadas por meio da reação em cadeia pela polimerase tipo para amplificação da subunidade menor do gene do RNA ribossômico, todas as amostras positivas por esse gene, foram caracterizadas para amplificação parcial dos genes beta-giardina, glutamato desidrogenase e triosefosfato isomerase. G. duodenalis foi verificada em 6,56% das amostras fecais e por meio da análise das sequências, verificou-se 100% de similaridade genética com “assemblage” E. Esta foi a primeira detecção de G. duodenalis “assemblage” E em bezerros bubalinos no Brasil. / Giardia duodenalis is a flagellated protozoan that colonizes the intestinal tract of vertebrate hosts. A molecular characterization of G. duodenalis revolutionized an understanding of the taxonomy, genetic diversity and epidemiology of giardiasis in humans and animals. In our stud, we performed the molecularly characterization of Giardia duodenalis in buffalo calves from State of São Paulo, Brazil. Then, 183 fecal samples of Murrah buffaloes were collected up to six months of age. These samples were examined by nested polymerase chain reaction for parcial amplification of the small subunit of the ribosomal RNA gene. All G. duodenalis-positive samples were characterized by beta-giardin, glutamate dehydrogenase and triosephosphate isomerase genes. G. duodenalis was detected in 6,56% of the faecal samples, and sequence analysis showed 100% genetic similarity with assemblage E. This was the first detection of G. duodenalis assemblage E in buffalo calves in Brazil.

Orientador: André Mendes Jorge / Banca: Paulo Roberto de Lima Meirelles / Banca: Cristiana Andrighetto / Resumo: O presente estudo teve como objetivo analisar os dados de desempenho ponderal e curva de crescimento do rebanho bubalino Murrah da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, da Universidade Estadual Paulista, Campus de Botucatu, no período de 1998 a 2009. Os pesos dos animais foram corrigidos às diversas idades padrão e o modelo estatístico incluiu os efeitos de sexo (S), mês (M) e ano de nascimento (A), classe de idade da búfala ao parto (C) e as interações S x M, S x A, S x C e M x A. As médias ajustadas e respectivos erros-padrão estimados para as características estudadas foram: PN: 37,89 ± 9,61kg; P120: 100,17 ± 20,28kg; P240: 170,36 ± 33,30kg; P365: 233,27 ± 35,57kg; P550: 309,85 ± 37,14kg e; P730: 395,14 ± 30,17kg. Houve efeito de sexo (S) somente para PN e P365, sendo que os machos tenderam a nascer mais pesados que fêmeas. O mês de nascimento (M) exerceu efeito sobre o PN, P120 e P730, sendo que animais nascidos em maio foram os mais pesados ao nascer, enquanto os nascidos em janeiro e maio foram os mais pesados aos 120 e 730 dias, respectivamente. O ano de nascimento (A) exerceu efeito sobre o PN, P120, P240 e P730. A classe de idade da búfala (C) exerceu efeito sobre o peso ao nascer, sendo que búfalas da classe 1 (3 anos ou menos) tenderam a parir bezerros mais leves e búfalas da classe 6 (10,11 e 12 anos) pariram bezerros mais pesados, o que contribui para a utilização desta característica na seleção das futuras matrizes do rebanho, respectivamente. O modelo linear foi o que melhor se ajustou aos dados para as curvas de crescimento / Abstract: This study aimed to analyze performance data and weight growth curve of Murrah buffalo herd of the Faculty of Veterinary Medicine, Universidade Estadual Paulista, Campus Botucatu, in the period 1998 to 2009. The weights of the animals were fixed for various ages and the standard statistical model included effects of sex (S), month (M) and year of birth (A), age class at calving buffalo (C) and the interactions S x M , S x, S x C x M and A. The adjusted means and their standard errors estimated for the characteristics studied were: NP: 37.89 ± 9.61 kg; P120, 100.17 ± 20.28 kg; P240, 170.36 ± 33.30 kg; P365, 233.27 ± 35.57 kg; P550, 309.85 ± 37.14 kg; and P730, 395.14 ± 30.17 kg. There was an effect of sex (S) only for BW and W365, and the males tended to be born heavier than females. The month of birth (M) exert effect on the PN, P120 and P730, and animals born in May were heavier at birth, while those born in January and May were heavier at 120 and 730 days, respectively. The year of birth (A) had an effect on the PN, P120, P240 and P730. The age class of buffalo (C) had an effect on birth weight, and buffaloes first class (three years or less) tended to give birth to lighter calves and buffaloes in Class 6 (10,11 and 12) gave birth to calves heavier, which contributes to the use of this feature in the selection of future headquarters of the herd, respectively. The linear model was the best fit to data for growth curves / Mestre

Orientador: André Mendes Jorge / Resumo: Objetivou-se com esse estudo avaliar a utilização da termografia infravermelho e a relação e interações entre medidas de eficiência e desempenho, de diferentes grupos genéticos de bubalinos na fase de crescimento em confinamento. Foram utilizados 75 bubalinos (Bubalus bubalis) machos não castrados de 3 diferentes grupos genéticos (Jafarabadi, Mediterrâneo e Murrah). De modo que 25 animais de cada raça (390 + 32 dias de idade, 310 + 61,27 kg) foram alojados em baias coletivas e alimentados de forma ad libitum. Foram avaliadas: conversão alimentar (CA), eficiência alimentar (EA), consumo alimentar residual (CAR), ganho residual (GR) e consumo ganho residual (CGR). Os animais foram classificados para cada medida de eficiência em três grupos: baixo (<0,5 DP média), médio (dentro de ± 0,5 DP) e alto (> 0,5 DP média), e em seguida, alto e baixo foram comparados utilizando Proc MIXED (SAS). As imagens de infravermelho foram coletadas nas regiões do olho, face, costelas, escroto, patas e peito. Significância foi considerada se P < 0,05. Houve interação entre os grupos genéticos para o CAR (P < 0,01), permitindo classificar os bubalinos Jafarabadi de baixo CAR como mais eficientes, e uma tendência foi encontrada (P = 0,08) para a classe alto CGR apresentando os melhores índices. As medidas de eficiência presentaram efeito no qual animais de baixo CAR apresentaram maior IMS e maior EA (P < 0,01), enquanto que animais das classes alto GR e alto CGR apresentaram os melhores índices de de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Orientador: Simone Biagio Chiacchio / Resumo: A bubalinocultura tem assumido cada vez mais importância econômica devido às suas características zootécnicas como a rusticidade e melhor qualidade do leite para a fabricação de derivados lácteos quando comparada ao leite de vaca. A morte embrionária e fetal é um importante fator de diminuição da eficiência reprodutiva pois aumenta o intervalo entre partos e causa perdas econômicas pela diminuição da lactação. O eletrocardiograma materno-fetal permite a avaliação da frequência cardíaca fetal (FCF) e variabilidade da frequência cardíaca (VFC) mediante análise de indicadores da VFC (HR, RR, RMSSD, SDNN, LF, HF e a relação LF/HF). Foram avaliadas semanalmente nove búfalas e neonatos saudáveis da raça murrah, nos momentos -28, -21, -14, -7 dias antes do parto e nos dias 7, 14, 21 e 28 dias após o parto. Nas búfalas foi observada diferença significativa na frequência cardíaca na fase pré-parto e com diminuição gradual conforme proximidade do parto. Já os índices RMSSD e SDNN não apresentaram diferença significativa mas demonstraram predomínio parassimpático. O componente de baixa frequência (LF) apresentou aumento significativo na fase pré-parto e o componente de alta frequência (HF) apresentou diminuição significativa, compatível com predomínio simpático. Embora não significativa, a relação LF/HF apresentou aumento na fase pré-parto e equilíbrio vagal pós-parto. Já os bezerros apresentaram variação significativa na fase pré-parto, com aumento gradativo conforme a proximidade dest... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Bubalinoculture has become increasingly important economically due to its zootechnical characteristics such as the rusticity and better quality of milk for the manufacture of dairy products when compared to cow's milk. Embryonic and fetal death is an important factor in decreasing reproductive efficiency because it increases the interval between births and causes economic losses due to decreased lactation. The maternal-fetal electrocardiogram allows the assessment of fetal heart rate (HRF) and heart rate variability (HRV) by analyzing HRV indicators (HR, RR, RMSSD, SDNN, LF, HF and the LF / HF ratio). Nine murrah buffaloes and healthy newborns were evaluated weekly at -28, -21, -14, -7 days before delivery and at 7, 14, 21 and 28 days after delivery. In buffaloes, a significant difference in heart rate was observed in the pre-partum phase and with a gradual decrease as the childbirth approached. The RMSSD and SDNN indices did not present significant difference but showed a parasympathetic predominance. The low frequency component (LF) showed a significant increase in the prepartum phase and the high frequency component (HF) showed a significant decrease, compatible with sympathetic predominance. Although not significant, the LF / HF ratio showed an increase in the prepartum phase and postpartum vagal balance. Calves, on the other hand, presented significant variation in the pre-partum phase, with gradual increase according to its proximity, with subsequent postpartum fall. Th... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

O presente trabalho objetivou avaliar comparativamente a susceptibilidade dos bufalinos e bovinos à intoxicação cúprica acumulativa, por meio do fornecimento de quantidades crescentes de cobre, analisando variáveis clínicas, sangüíneas e os teores de cobre hepático. Com tal objetivo, foram utilizados 20 ruminantes, 10 bovinos (mestiços) e 10 búfalos (raça Murrah) jovens, aleatoriamente distribuídos em seis animais de cada espécie nos grupos que receberam cobre (BOV Cu e BUF Cu) e quatro animais nos grupos controle (BOV e BUF). Diariamente, os grupos BOV Cu e BUF Cu receberam por meio de fistula ruminal 2 mg Cu /kg/PV (CuSO4.5H2O) sendo esta dose acrescida de mais 2 mg/kg/PV a cada semana, até o término do experimento (105 dias). Foram realizadas três biópsias hepáticas (Dia 0 - dia 45 - dia 105) em todos os animais para determinação da concentração de Cu e Zn neste órgão. Quinzenalmente, foi realizado exame clínico, pesagem dos animais e coleta de amostras de sangue. Três bovinos e dois búfalos dos grupos BOV Cu e BUF Cu manifestaram quadro laboratorial e/ou clínico sugestivo de intoxicação cúprica acumulativa (ICA), vindo a sucumbir em seguida. Não existiu diferença entre a freqüência de mortalidade entre os bovinos e búfalos (P > 0,87). Destaca-se a presença de dois quadros clínicos diferentes, o clássico (um bovino e um búfalo) e um atípico (dois bovinos e um búfalo), caracterizado pelo destacado acúmulo de cobre hepático, hiporexia progressiva seguida de anorexia, desidratação, redução dos movimentos de ruminais, oligúria, acentuada apatia e morte, mas sem apresentar hemoglobinúria. Parte dos bovinos e bufalinos se mostraram resistentes à ICA a despeito da administração de altas quantidades cobre. Os teores de cobre hepático nos bovinos com ICA foram superiores, em mais de 100%, aos encontrados nos bufalinos (4389 e 2052 ppm respectivamente). Bovinos com ICA aumentaram a concentração de zinco hepático nas fases finais da intoxicação. A presença de altas atividades séricas de gamaglutamil transferase (GGT) (> 24,6 U/L) e de aspartato aminotransferase (AST) (> 90 U/L) para bovinos e GGT (> 20 U/L) para bufalinos indicaram de maneira efetiva a presença de destacado acúmulo de cobre nos tecidos hepáticos (1000 ppm). Com exceção de um búfalo com o quadro atípico nenhum outro animal apresentou quadro de insuficiência renal. / The main aim of this project is to carry out a comparative study of the susceptibility of cattle (crossbreed) and buffalo (Murrah) to accumulative copper poisoning, by infusion of increasing doses of copper, and studying some clinical and blood variables and the liver Cu concentration. Ten cattle and 10 buffalo yearling steers were randomly distributed into two copper supplemented groups (BOV Cu; BUF Cu; n = 6) and two control groups (BOV; BUF; n = 4). The two former groups received initially 2 mg Cu/kg/BW (as CuSO4..5H2O) daily for a week; every following week, up to the end of the experiment (105th d), this initial dose was increased of 2 mg Cu/kg/BW. For three times during the experiment (day zero, 45thand 105th d) a liver biopsy was carried out to evaluate the degree of copper accumulation in this organ; the body weight and clinical examination was followed weekly, as far as blood samples were withdrawn. Three cattle and two buffaloes supplemented with copper presented clinical picture and/or laboratory findings indicative of accumulative copper poisoning (ACP), and died thereafter. There was no difference in the frequency of mortality between cattle and buffalo (P > 0.87) Two different clinical picture were seen, the classical (one cattle and one buffalo) and one atypical (two cattle and one buffalo) characterized by remarkable high levels of liver copper, progressive hyporexia followed by anorexia, dehydration, severe apathy, decreased rumen movements, oliguria and death. Some of animals were resistant to ACP in spite of high accumulative levels of copper. The liver copper concentration were higher in cattle than buffalo (4.389 and 2.052 ppm, respectively). Cattle with ACP increased their zinc liver concentration at the final stages of the poisoning. The presence of high serum activity of gamma glutamyltransferase (GGT) (> 24.6 U/L) and aspartate aminotransferase (AST) (>90 U/L) for cattle and GGT (> 20 U/L) for buffalo indicated effectively the high accumulation of copper in liver (> 1000 ppm). No poisoned animals developed renal insufficiency, but one buffalo with atypical picture.

Com o objetivo de se aperfeiçoar a PCR para detecção de Brucella spp. em leite bubalino, foram estudados diferentes protocolos de extração de DNA em leite bubalino experimentalmente contaminado com Brucella abortus amostra 1119-3. Esses protocolos basearam-se na utilização de isotiocianato de guanidina, fervura e proteinase K, com algumas variações. O critério de avaliação utilizado foi a sensibilidade analítica. O protocolo utilizando fervura com filtração inicial da amostra em colchão de sacarose a 40% apresentou sensibilidade analítica de 103 UFC/ml. Os protocolos utilizando proteinase K para extração de DNA apresentaram sensibilidade analítica de 104 UFC/ml. A maior sensibilidade analítica (10 UFC/ml) e a melhor visualização do produto amplificado foram obtidos com a utilização de isotiocianato de guanidina com precipitação imediata em álcool sem adição de Tween 20 na lavagem inicial da amostra. / To improve the PCR performance for detection of Brucella spp. in buffalo milk, different DNA extraction protocols were carried out in buffalo milk spiked with Brucella abortus strain 1119-3. These protocols were based on utilization of guanidine isothiocyanate, boil and proteinase K, with some variations. The analytical sensitivity was the evaluation criteria. Boiling with initial filtration of the sample through a solution of sacarosis 40% presented analytical sensitivity of 103 CFU/ml. The protocols based on proteinase K presented analytical sensitivity of 104 CFU/ml. The highest analytical sensitivity (10 CFU/ml) and best visualization of the amplified product were verified for the protocol using guanidine isothyocianate with immediate precipitation in alcohol without addition of Tween 20 in the initial sample wash.

Apesar de inúmeros estudos desenvolvidos no Brasil e no mundo, a utilização das biotecnologias de superovulação (SOV) e transferência de embriões (TE) em bubalinos ainda apresenta resultados inconsistentes, associados à principalmente à baixa taxa de recuperação de embriões. Dessa forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da utilização de dispositivo de P4 (para promover diminuição da contratilidade do trato genital, Capitulo 1) ou da administração de PGF2&#945; (para promover aumento da atividade da fímbria e da frequência do batimento ciliar, Capítulo 2) durante o período periovulatório na captação dos oócitos pelas fímbrias e no aumento da produção de embriões em búfalas superovuladas. No Experimento 1 (Capítulo 1), doadoras bubalinas foram homogeneamente divididas em dois grupos: controle (G-C; n=8) e tratamento com progesterona (P4) durante o período periovulatório (G-P4; n=8). A emergência da onda de crescimento folicular foi sincronizada com um dispositivo intravaginal de P4 e a administração de 2 mg i.m. de benzoato de em dia aleatório do ciclo estral (Dia 0; D0). A partir do D4, todas as búfalas receberam 200 mg i.m. de FSH duas vezes ao dia, em 8 doses decrescentes. Foram administrados 530&micro;g i.m. de PGF2&#945; no D6 e no D7. A P4 foi removida do G-C no D7 e do G-P4 no D10. No D8, todas as búfalas receberam 25 mg i.m. de pLH. As inseminações foram realizadas 12 e 24 h após o tratamento com pLH. Foram realizadas colheitas de sangue a cada 12h do D7 ao D11 para posterior dosagem de progesterona. As estruturas embrionárias (oócitos/embriões) foram coletadas pelo método não cirúrgico de lavagem uterina seis dias após a segunda IA (D14). Avaliações ultrassonográficas dos ovários foram realizadas no D8 e no D14 para aferir respectivamente as respostas superestimulatória e superovulatória. As variáveis foram analisadas pelo procedimento GLIMMIX do SAS®. As búfalas do G-P4 apresentaram menor taxa de ovulação (13,5±4,9 vs. 71,5±16,1%; P=0,002) e, consequentemente, maior taxa de folículos &ge; 8 mm (87,8±10,6 vs. 34,3±9,8 %; P=0,06) e menor número de CLs no D14 (1,1±0,3 vs. 8,0±2,8; P=0,04) que as búfalas do G-C. O número de estruturas embrionárias (1,9±0,7 vs. 0,0±0,0; P=0,03), de embriões transferíveis (1,6±0,7 vs. 0,0±0,0; P=0,04) e congeláveis (1,6±0,7 vs. 0,0±0,0; P=0,04) foram inferiores para o G-P4. A concentração sérica de progesterona foi maior nos animais do G-P4 (1,87±0,13) que nos do G-C (0,48±0,10; P<0,0001). No Experimento 1 (Capítulo 2), as doadoras foram divididas aleatoriamente em 2 grupos: controle (G-C; n=22) e tratamento com prostaglandina F2&#945; durante o período periovulatório (G-PGF; n=22). Os animais do G-C foram submetidos ao protocolo de superovulação descrito no capítulo 1. No G-PGF todas as búfalas receberam protocolo de superovulação semelhante ao G-C e, adicionalmente, receberam quatro doses de PGF2&#945; (0,53 mg i.m. de cloprostenol sódico) do D8 ao D10 com intervalo de 12h. Foi verificado maior número de estruturas embrionárias recuperadas em búfalas superovuladas tratadas com PGF2&#945; durante o período periovulatório (G-PGF=3,5±0,6) comparado ao grupo controle (G-C=2,3±0,5; P=0,02). Além disso, houve aumento no número de embriões transferíveis (G-PGF=2,7±0,6 vs. G-C=1,8±0,5; P=0,05). No Experimento 2 (Capítulo 2), os animais foram divididos aleatoriamente em três grupos experimentais: Grupo Controle (GC; n=22), Grupo PGF injetável (G-PGF-INJ; n=22) e Grupo PGF Bomba Osmótica (G-PGF-BO; n=22). Os animais pertencentes aos grupos: G-C e G-PGF-INJ foram submetidos aos mesmos protocolos descritos para seus grupos correspondentes no Experimento 1 (Capítulo 2). No GPGF- BO, todas as búfalas receberam protocolo de superovulação semelhante ao G-C e, adicionalmente, receberam a partir do D8 a inserção subcutânea de uma mini-bomba osmótica, contendo PGF2&#945; (2,12 mg de Cloprostenol sódico). A bomba osmótica retirada no D10. Não foram verificadas diferenças no número de estruturas totais recuperadas nas búfalas tratadas com PGF&#945; durante o período periovulatório (G-C=2,1±0,8 vs. G-PGF-INJ=2,1±0,6 vs. GPGF- BO=1,4±0,4; P=0,58). Os tratamentos no período periovulatório com dispositivo intravaginal de P4 (Capítulo 1) e com PGF2&#945; (Capítulo 2) não foram eficientes em aumentar a recuperação de estruturas embrionárias de búfalas superovuladas. / Despite numerous studies conducted in Brazil and world-wide, the use of superovulation (SOV) and embryo transfer (ET) biotechnologies in buffaloes still shows inconsistent results, particularly in terms of low embryos recovery rate. Thus, the aim of this study was to evaluate the use of a P4 device (to decrease contractility of the genital tract, Chapter 1) or PGF2&alpha; administration (to increase activity of the fimbriae and ciliary beat frequency, Chapter 2) during the periovulatory period in the uptake of oocytes by fimbriae and in the increase of embryo production in superovulated buffaloes. In Experiment 1 (Chapter 1), buffalo donors were homogeneously assigned into 2 groups: Control (C-G; n=8) and progesterone (P4) treatment during the periovulatory period (P4-G; n=8). Follicular growth wave emergence was synchronized with an intravaginal P4 device and the injection of 2 mg i.m. of estradiol benzoate at random stage of the estrous cycle (Day 0; D0). From D4 on, all buffaloes received 200 mg i.m. of FSH twice-daily, in 8 decreasing doses. A dose of PGF2&alpha; was given on D6 PM and on D7. The P4 was removed from the C-G on D7 and from the P4-G on D10. On D8, all buffaloes received 25 mg i.m. of pLH. Inseminations were done 12 and 24 h after the pLH treatment. Blood samples were collected every 12h from D7 to D11 for further progesterone assay. The embryonic structures (ova/embryos) were collected by nonsurgical uterine flush 6 days after the second timed AI (D14). Ovarian ultrasound examinations were performed on D8 and on D14 to verify respectively the superestimulation and the superovulatory response. Variables were analyzed by GLIMMIX procedure of SAS®. Buffaloes from P4-G showed lower ovulation rate (13.5±4.9 vs. 71.5±16.1%; P=0.002) and, consequently, higher follicles &ge; 8 mm rate (87.8±10.6 vs. 34.3±9.8 %; P=0.06) and lower number of CLs on D14 (1.1±0.3 vs. 8.0±2.8; P=0.04) than buffaloes from C-G. The total number of embryonic structures (1.9±0.7 vs. 0.0±0.0; P=0.03), transferable (1.6±0.7 vs. 0.0±0.0; P=0.04) and freezable embryos (1.6±0.7 vs. 0.0±0.0; P=0.04) were lower for P4-G. The serum progesterone concentration was greater for animals in P4-G (1.87±0.13) than in the C-G (0.48±0.10; P<0.0001). In Experiment 1 (Chapter 2), donors were randomly assigned into two groups: control (C-G; n=22) and prostaglandin F2&alpha; treatment during the periovulatory period (G-PGF; n=22). Animals from C-G were subjected to the superovulation protocol described on chapter 1. In G-PGF all buffaloes received similar superovulation protocol from the C-G and, additionally, received four doses of PGF2&alpha; (0.53 mg i.m. of sodic cloprostenol) from D8 to D10, 12h apart. A greater number of embryonic structures were recovered from superovulated buffaloes treated with PGF2&alpha; during the periovulatory period (PGF-G=3.5±0.6) compared to control group (C-G=2.3±0.5; P=0.02). Furthermore, increased number of transferable embryos were found in treated animals (PGF-G=2.7±0.6 vs. C-G=1.8±0.5; P=0.05). In Experiment 2 (Chapter 2), animals were randomly assigned into three experimental groups: Control group (CG; n=22), Injectable PGF group (INJ-PGF-G; n=22) and Osmotic pump PGF group (BO-PGF-G; n=22). The animals from C-G and INJ-PGF-G group were subjected to the same protocols described for their correspondent groups in Experiment 1 (Chapter 2). In BO-PGF-G, all buffaloes received the superovulation protocol similar to C-G and, additionally, received from D8, a subcutaneous insertion of a mini osmotic pump, containing PGF2&alpha; (2.12 mg de sodic cloprostenol). The osmotic pump was removed on D10. No differences were found on the total number of recovered structures in buffaloes treated with PGF2&alpha; during the periovulatory period (C-G=2.1±0.8 vs. INJ-PGF-G=2.1±0.6 vs. BO-PGF-G=1.4±0.4; P=0.58). Treatments on the peri- ovulatory period with intravaginal P4 device (Chapter 1) and PGF2&alpha; (Chapter 2) were not efficient in increasing the recovery of embryonic structures in superovulated buffalo.

A placenta de ruminantes possui uma estrutura macroscópica uniforme, baseada em áreas especializadas de aposição e proliferação das membranas materno-fetais: os placentônios. Mostrando um papel fundamental para o desenvolvimento da prenhez, estasestruturas tem sido muito estudadas em várias espécies domésticas de interesse comercial. Particularmente no búfalo, entretanto, não há dados consistentes quanto à sua capacidade funcional desta estrutura , ou até mesmo, a arquitetura dos vilosem um placentônio individual e sua troca eficaz de metabólitos que caracteriza o processo de placentação. Um estudo macroscópico prévio da placenta do búfalo (Bubalus bubalis bubalis) mostrou que o número de placentônios é de 92 aproximadamentedurante a prenhez, mas a morfologia microscópica e o desenvolvimento de tais estruturas não foram estudadas em todas as fases da prenhez. Neste trabalho, estudou-se os placentônios de búfalos prenhez nos meses 4-5, 7-8, 9-10, os quais forammorfologicamente caracterizados. Os espécimes foram seccionados e fixados por imersão em paraformoldeído à 4% ou em glutaraldeído à 2,5% em tampão fosfato tamponado 0,1M para microscopia de luz e eletrônica, respectivamente. Após 24 horas, osplacentônios foram recortados e processados para inclusão em paraplast, historesina ou em resina Spurr. As secções foram coradas por HE, Azul de Toluidina, Tricrômicos de Gomori e Mallory, Azul de Metileno com Fucsina Básica e submetidos àreação de PAS. Em todos períodos da prenhez encontrou-se placentônios de diferentes tipos e tamanhos, com uma estrutura macroscópica similar à do placentônio bovino, porém mais achatado. Aparentemente, durante o progresso da prenhez, osplacentônios mantiveram a mesma morfologia macroscópica mas com dimensões aumentadas. À microscopia de luz, a interface entre o trofoblasto e o epitélio uterino é extremamente irregular, formando uma árvore fetal vilosa que se conecta com o epitélio materno. O trofoblasto consiste em uma camada simples de células individuais onde células binucleadas estão interpostas com as células trofoblásticas. O eixo da árvore vilosa é formado fundamentalmente por tecido conjuntivofrouxo, considerando que o eixo interno das pregas epiteliais apresentam um tecido conjuntivo rico em fibras colágenas. Quando comparadas às fases precoces de prenhez, as árvores vilosas dos meses 9-10, são mais ramificadas e a aposição dainterface materno-fetal é mais próxima. Ainda, na junção materno-fetal no final da prenhez, encontrou-se regiões de hematomas e eritrofagocitose o que sugere transferência de ferro para o feto. À microscopia eletrônica de transmissão pudemosobservar uma intensa vascularização do vilo fetal, as células binucleadas apresentaram REG (retículo endoplasmático granular) e Complexo de Golgi bem desenvolvidos, indicando comprometimento com síntese protéica e vesículas eram abundantes. Ascélulas epiteliais trofoblásticas mostraram-se unidas por complexos juncionais, principalmente desmossomas, núcleos de contorno esférico e até dois nucléolos bastante evidentes. Superfícies celulares com microvilos também foram observadas. / The ruminant placenta has an uniform gross structure based on specialized areas of feto-maternal membrane apposition and proliferation: the placentons. By exerting a fundamental role for the development of the pregnancy, these structures have been very well studied in several domestic species of commercial interest. Particularly in the buffalo, however, there is no consistent data with relationship the functional capabilities of this structure or even, the villus architeture in the individual placenton and their metabolic exchange efficacy that characterize the placentation process. One previous macroscopy study on the placenta of buffalo (Bubalus bubalis bubalis) has shown that the number of the placentons is 92 aproximately during pregnancy, but the fine morphology and development of such structures were not studied in all phases of pregnancy. So, in this work, the placentons of pregnant buffaloes on months 4-5, 7-8 and 9-10 were morphologically characterized. The specimens were sectioned and fixed by immersion in either a 4 % paraformaldehyde or in 2.5 % glutaraldehyde in 0.1 M phosphate buffer for light and electron microscopy, respectively. After 24 h, the placentons were cut and processed for embedding in paraplast, historesin or Spurr\'s resin. Sections were stained by HE, Toluidine Blue, Gomori\'s and Mallory\'s trichromes, Methilene Blue and Basic Fucsin and submitted to PAS reaction. In all periods of the pregnancy, we found placentons of different shapes and sizes, with a gross structure similar to the bovine placenton, but more flattened. Apparently, during the progress of the pregnancy, the placentons maintained the same gross morphology but with increased dimensions. At light microscopy, the interface between the trophoblast and the uterine epithelium is extremely irregular forming a fetal villous tree that indents the endometrium. The trophoblast consists of a simple layer of individual cells where binucleated cells are interposed into the remaining trophoblast cells. The axis of the villous tree is fundamentally formed by loose connective tissue, whereas the internal axis of the epithelial folds presented a connective tissue rich in collagen fibers. When compared to early phases of the pregnancy, the villus tree on months 9-10 is much more branched and the materno-fetal interface closely appositioned. Still, in the feto-maternal junction in late pregnancy were found regions of hematomes and erythrophagocytosis. Ultrastructurally, we also observed: the intense vascularization of the fetal villous, binucleated cells presenting a much developed GER (granular endoplasmic reticulum) and Golgi complex, indicating intense secretory activity. The trophoblastic cells showed junctions (desmossomes), euchromatic nuclei and 2 evident nucleoli. The trophoblast and the uterine epithelium were close associated by interdigitated microvilli.

Com o objetivo de se aperfeiçoar a PCR para detecção de Brucella spp. em leite bubalino, foram estudados diferentes protocolos de extração de DNA em leite bubalino experimentalmente contaminado com Brucella abortus amostra 1119-3. Esses protocolos basearam-se na utilização de isotiocianato de guanidina, fervura e proteinase K, com algumas variações. O critério de avaliação utilizado foi a sensibilidade analítica. O protocolo utilizando fervura com filtração inicial da amostra em colchão de sacarose a 40% apresentou sensibilidade analítica de 103 UFC/ml. Os protocolos utilizando proteinase K para extração de DNA apresentaram sensibilidade analítica de 104 UFC/ml. A maior sensibilidade analítica (10 UFC/ml) e a melhor visualização do produto amplificado foram obtidos com a utilização de isotiocianato de guanidina com precipitação imediata em álcool sem adição de Tween 20 na lavagem inicial da amostra. / To improve the PCR performance for detection of Brucella spp. in buffalo milk, different DNA extraction protocols were carried out in buffalo milk spiked with Brucella abortus strain 1119-3. These protocols were based on utilization of guanidine isothiocyanate, boil and proteinase K, with some variations. The analytical sensitivity was the evaluation criteria. Boiling with initial filtration of the sample through a solution of sacarosis 40% presented analytical sensitivity of 103 CFU/ml. The protocols based on proteinase K presented analytical sensitivity of 104 CFU/ml. The highest analytical sensitivity (10 CFU/ml) and best visualization of the amplified product were verified for the protocol using guanidine isothyocianate with immediate precipitation in alcohol without addition of Tween 20 in the initial sample wash.

Apesar de inúmeros estudos desenvolvidos no Brasil e no mundo, a utilização das biotecnologias de superovulação (SOV) e transferência de embriões (TE) em bubalinos ainda apresenta resultados inconsistentes, associados à principalmente à baixa taxa de recuperação de embriões. Dessa forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da utilização de dispositivo de P4 (para promover diminuição da contratilidade do trato genital, Capitulo 1) ou da administração de PGF2&#945; (para promover aumento da atividade da fímbria e da frequência do batimento ciliar, Capítulo 2) durante o período periovulatório na captação dos oócitos pelas fímbrias e no aumento da produção de embriões em búfalas superovuladas. No Experimento 1 (Capítulo 1), doadoras bubalinas foram homogeneamente divididas em dois grupos: controle (G-C; n=8) e tratamento com progesterona (P4) durante o período periovulatório (G-P4; n=8). A emergência da onda de crescimento folicular foi sincronizada com um dispositivo intravaginal de P4 e a administração de 2 mg i.m. de benzoato de em dia aleatório do ciclo estral (Dia 0; D0). A partir do D4, todas as búfalas receberam 200 mg i.m. de FSH duas vezes ao dia, em 8 doses decrescentes. Foram administrados 530&micro;g i.m. de PGF2&#945; no D6 e no D7. A P4 foi removida do G-C no D7 e do G-P4 no D10. No D8, todas as búfalas receberam 25 mg i.m. de pLH. As inseminações foram realizadas 12 e 24 h após o tratamento com pLH. Foram realizadas colheitas de sangue a cada 12h do D7 ao D11 para posterior dosagem de progesterona. As estruturas embrionárias (oócitos/embriões) foram coletadas pelo método não cirúrgico de lavagem uterina seis dias após a segunda IA (D14). Avaliações ultrassonográficas dos ovários foram realizadas no D8 e no D14 para aferir respectivamente as respostas superestimulatória e superovulatória. As variáveis foram analisadas pelo procedimento GLIMMIX do SAS®. As búfalas do G-P4 apresentaram menor taxa de ovulação (13,5±4,9 vs. 71,5±16,1%; P=0,002) e, consequentemente, maior taxa de folículos &ge; 8 mm (87,8±10,6 vs. 34,3±9,8 %; P=0,06) e menor número de CLs no D14 (1,1±0,3 vs. 8,0±2,8; P=0,04) que as búfalas do G-C. O número de estruturas embrionárias (1,9±0,7 vs. 0,0±0,0; P=0,03), de embriões transferíveis (1,6±0,7 vs. 0,0±0,0; P=0,04) e congeláveis (1,6±0,7 vs. 0,0±0,0; P=0,04) foram inferiores para o G-P4. A concentração sérica de progesterona foi maior nos animais do G-P4 (1,87±0,13) que nos do G-C (0,48±0,10; P<0,0001). No Experimento 1 (Capítulo 2), as doadoras foram divididas aleatoriamente em 2 grupos: controle (G-C; n=22) e tratamento com prostaglandina F2&#945; durante o período periovulatório (G-PGF; n=22). Os animais do G-C foram submetidos ao protocolo de superovulação descrito no capítulo 1. No G-PGF todas as búfalas receberam protocolo de superovulação semelhante ao G-C e, adicionalmente, receberam quatro doses de PGF2&#945; (0,53 mg i.m. de cloprostenol sódico) do D8 ao D10 com intervalo de 12h. Foi verificado maior número de estruturas embrionárias recuperadas em búfalas superovuladas tratadas com PGF2&#945; durante o período periovulatório (G-PGF=3,5±0,6) comparado ao grupo controle (G-C=2,3±0,5; P=0,02). Além disso, houve aumento no número de embriões transferíveis (G-PGF=2,7±0,6 vs. G-C=1,8±0,5; P=0,05). No Experimento 2 (Capítulo 2), os animais foram divididos aleatoriamente em três grupos experimentais: Grupo Controle (GC; n=22), Grupo PGF injetável (G-PGF-INJ; n=22) e Grupo PGF Bomba Osmótica (G-PGF-BO; n=22). Os animais pertencentes aos grupos: G-C e G-PGF-INJ foram submetidos aos mesmos protocolos descritos para seus grupos correspondentes no Experimento 1 (Capítulo 2). No GPGF- BO, todas as búfalas receberam protocolo de superovulação semelhante ao G-C e, adicionalmente, receberam a partir do D8 a inserção subcutânea de uma mini-bomba osmótica, contendo PGF2&#945; (2,12 mg de Cloprostenol sódico). A bomba osmótica retirada no D10. Não foram verificadas diferenças no número de estruturas totais recuperadas nas búfalas tratadas com PGF&#945; durante o período periovulatório (G-C=2,1±0,8 vs. G-PGF-INJ=2,1±0,6 vs. GPGF- BO=1,4±0,4; P=0,58). Os tratamentos no período periovulatório com dispositivo intravaginal de P4 (Capítulo 1) e com PGF2&#945; (Capítulo 2) não foram eficientes em aumentar a recuperação de estruturas embrionárias de búfalas superovuladas. / Despite numerous studies conducted in Brazil and world-wide, the use of superovulation (SOV) and embryo transfer (ET) biotechnologies in buffaloes still shows inconsistent results, particularly in terms of low embryos recovery rate. Thus, the aim of this study was to evaluate the use of a P4 device (to decrease contractility of the genital tract, Chapter 1) or PGF2&alpha; administration (to increase activity of the fimbriae and ciliary beat frequency, Chapter 2) during the periovulatory period in the uptake of oocytes by fimbriae and in the increase of embryo production in superovulated buffaloes. In Experiment 1 (Chapter 1), buffalo donors were homogeneously assigned into 2 groups: Control (C-G; n=8) and progesterone (P4) treatment during the periovulatory period (P4-G; n=8). Follicular growth wave emergence was synchronized with an intravaginal P4 device and the injection of 2 mg i.m. of estradiol benzoate at random stage of the estrous cycle (Day 0; D0). From D4 on, all buffaloes received 200 mg i.m. of FSH twice-daily, in 8 decreasing doses. A dose of PGF2&alpha; was given on D6 PM and on D7. The P4 was removed from the C-G on D7 and from the P4-G on D10. On D8, all buffaloes received 25 mg i.m. of pLH. Inseminations were done 12 and 24 h after the pLH treatment. Blood samples were collected every 12h from D7 to D11 for further progesterone assay. The embryonic structures (ova/embryos) were collected by nonsurgical uterine flush 6 days after the second timed AI (D14). Ovarian ultrasound examinations were performed on D8 and on D14 to verify respectively the superestimulation and the superovulatory response. Variables were analyzed by GLIMMIX procedure of SAS®. Buffaloes from P4-G showed lower ovulation rate (13.5±4.9 vs. 71.5±16.1%; P=0.002) and, consequently, higher follicles &ge; 8 mm rate (87.8±10.6 vs. 34.3±9.8 %; P=0.06) and lower number of CLs on D14 (1.1±0.3 vs. 8.0±2.8; P=0.04) than buffaloes from C-G. The total number of embryonic structures (1.9±0.7 vs. 0.0±0.0; P=0.03), transferable (1.6±0.7 vs. 0.0±0.0; P=0.04) and freezable embryos (1.6±0.7 vs. 0.0±0.0; P=0.04) were lower for P4-G. The serum progesterone concentration was greater for animals in P4-G (1.87±0.13) than in the C-G (0.48±0.10; P<0.0001). In Experiment 1 (Chapter 2), donors were randomly assigned into two groups: control (C-G; n=22) and prostaglandin F2&alpha; treatment during the periovulatory period (G-PGF; n=22). Animals from C-G were subjected to the superovulation protocol described on chapter 1. In G-PGF all buffaloes received similar superovulation protocol from the C-G and, additionally, received four doses of PGF2&alpha; (0.53 mg i.m. of sodic cloprostenol) from D8 to D10, 12h apart. A greater number of embryonic structures were recovered from superovulated buffaloes treated with PGF2&alpha; during the periovulatory period (PGF-G=3.5±0.6) compared to control group (C-G=2.3±0.5; P=0.02). Furthermore, increased number of transferable embryos were found in treated animals (PGF-G=2.7±0.6 vs. C-G=1.8±0.5; P=0.05). In Experiment 2 (Chapter 2), animals were randomly assigned into three experimental groups: Control group (CG; n=22), Injectable PGF group (INJ-PGF-G; n=22) and Osmotic pump PGF group (BO-PGF-G; n=22). The animals from C-G and INJ-PGF-G group were subjected to the same protocols described for their correspondent groups in Experiment 1 (Chapter 2). In BO-PGF-G, all buffaloes received the superovulation protocol similar to C-G and, additionally, received from D8, a subcutaneous insertion of a mini osmotic pump, containing PGF2&alpha; (2.12 mg de sodic cloprostenol). The osmotic pump was removed on D10. No differences were found on the total number of recovered structures in buffaloes treated with PGF2&alpha; during the periovulatory period (C-G=2.1±0.8 vs. INJ-PGF-G=2.1±0.6 vs. BO-PGF-G=1.4±0.4; P=0.58). Treatments on the peri- ovulatory period with intravaginal P4 device (Chapter 1) and PGF2&alpha; (Chapter 2) were not efficient in increasing the recovery of embryonic structures in superovulated buffalo.