Para avaliar um sistema integrado de aquicultura foram realizadas análises microbiológicas da água utilizada neste sistema e determinada a incidência e resistência antimicrobiana dos enteropatógenos no ecossistema relacionado. As amostras de água testadas apresentaram 32,9% de taxas de coliformes fecais (≤1.600/100mL), de acordo com a OMS para piscicultura em águas residuais. Salmonella spp. foram detectadas em 14,5% das amostras. De um total de 33 cepas, 15,1% eram resistentes a um ou dois antimicrobianos testados e resistência a múltiplas drogas não foi observada. Aeromonas spp. foram identificadas em 91,6% das amostras. De um total de 416 cepas, resistência a uma classe de antimicrobianos foi observada em 66,3% e a multirresistência às drogas em 37,7%. Na avaliação da virulência dos isolados de Aeromonas hydrophila, 85,3% das cepas apresentaram Beta-hemólise nos três diferentes tipos de eritrócitos empregados e 99,1% nos eritrócitos de coelho e cavalo, sendo possível a caracterização através da PCR do gene aerA e lip, em 100% das amostras. Os resultados obtidos apontam para a relevância quanto às vantagens da implementação de um sistema integrado, disponibilizando alimentos com custo reduzido, porém este sistema necessita de um controle rígido e efetivo para que estes produtos não constituam veículos para a disseminação de doenças. / To evaluate an integrated aquaculture system, microbiological analyses of water used in this system were carried out and the incidence and antimicrobial resistance of enteropathogens were determined in the related ecosystem. Water samples tested had 32.9% of fecal coliforms rates (≤1600/100mL) in accordance with WHO for psiculture in wastewater. Salmonella spp. were detected in 14.5% of the samples. From a total of 33 strains, 15.1% were resistant to one or two antimicrobial drugs tested and multidrug-resistance was not observed. Aeromonas spp. were identified in 91.6% of the samples. From a total of 416 strains, resistance to one antimicrobial class was observed in 66.3% and multidrug-resistance in 37.7%. In relation to virulence factors of Aeromonas hydrophila, 85.3% of the strains showed beta-hemolysis in three different types of erythrocytes and 99.1% in horse and rabbit erythrocytes. It was possible to characterize by PCR assay, the genes aerA and lip in 100% of the strains. The results indicate the relevance of the benefits of implementing an integrated system, providing food with reduced cost, but this system requires a strict and effective control so that these products do not constitute a vehicle for the spread of disease.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-04-15T16:13:29Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_MicobacterioseNaoTuberculosaPulmonar.pdf: 594173 bytes, checksum: 314dc62f56d3e99cf40e3139b885c869 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-04-30T17:06:52Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_MicobacterioseNaoTuberculosaPulmonar.pdf: 594173 bytes, checksum: 314dc62f56d3e99cf40e3139b885c869 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-04-30T17:06:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_MicobacterioseNaoTuberculosaPulmonar.pdf: 594173 bytes, checksum: 314dc62f56d3e99cf40e3139b885c869 (MD5) Previous issue date: 2013 / As micobactérias não tuberculosas (MNT) estão amplamente presentes no ambiente, tendo sido isoladas em águas naturais, sistemas de distribuição de água, solo e animais. Caracterizam-se pela presença de ácido micólico na parede celular. Em geral, são adquiridas através de inalação de gotículas de água contendo micobactérias. Podem causar formas variadas de doença como linfadenite, pulmonar, cutânea e disseminada. São patógenos oportunistas, com patogenicidade variável, que requerem defeitos na imunidade local ou sistêmica, congênitos ou adquiridos para causar doenças em humanos. Foram avaliados aspectos epidemiológicos, clínicos e radiológicos de 44 casos de micobacteriose não tuberculosa na forma pulmonar no Hospital João de Barros Barreto (HUJBB) através de estudo retrospectivo e foram tratados e acompanhados 21/44 (47,7%) pacientes durante um período de seis a dezessete meses através de estudo do tipo coorte prospectivo. Os dados mostraram um incremento de mais de 100% no número de casos a partir do ano de 2010 em relação aos anos anteriores no HUJBB. As micobactérias mais isoladas foram M. intracellulare (22,7%) e M. massiliense (20,5%). As condições mais frequentemente associadas à doença incluíram tratamento prévio para tuberculose (93,2%), bronquiectasias (59%), HIV (11,4%), asma (9,1%) e doença pulmonar obstrutiva crônica (9,1%). Não foram observadas diferenças nos aspectos radiológicos entre as espécies, exceto na análise das radiografias de tórax, onde atelectasias foram mais frequentes nos grupo M. massiliense do que no grupo de M. abscessus. A resposta ao tratamento de acordo com a análise das culturas para micobactérias mostrou que em 58,8% dos casos ocorreu negativação, persistência da positividade em 11,7% e positividade após negativação inicial em 11,7%. Durante o período de acompanhamento, a taxa de óbito foi de 17,7%. Os dados sugerem que a forma pulmonar da micobacteriose não tuberculosa tem se tornado uma doença com importância cada vez maior em nossa região. Adicionalmente, a resposta ao tratamento tem sido bastante satisfatória quando comparada à literatura. Entretanto, é necessário um seguimento desses pacientes por período mais prolongado para estabelecer o real desfecho da nossa abordagem terapêutica. / The nontuberculous mycobacteria are present in environment and has been isolated from natural waters, soil, animals and water distribution systems. It’s characterized by the presence of mycolic acid in the cell wall. In general, the disease is acquired through inhalation of droplets containing mycobacteria. This disease can manifest itself in many ways as lymphadenitis, pulmonary, cutaneous and disseminated. They are opportunistic pathogens of variable pathogenicity. Immunity defects, local or systemic, are required to cause disease in humans. We evaluated epidemiological, clinical and radiological features of 44 cases with pulmonary nontuberculous mycobacteriosis at Hospital Universitário João de Barros Barreto. In addition, we treated and followed 21/44 (47,7%) patients during a period of six to seventeen months in a prospective cohort study. There was an increase more than 100% in the number of cases in 2010 when compared to previous years. The most frequently isolated mycobacterias were M. intracellulare (22.7%) and M. massiliense (20.5%). The conditions associated included previous treatment for tuberculosis (93.2%), bronchiectasis (59%), HIV (11.4%), asthma (9.1%) and chronic obstructive pulmonary disease (9.1%). In general, there were no differences between NTM groups in radiological aspects, but when we analyzed chest radiographs, we found atelectasis more frequently in M. massiliense group vs. M. abscessus group. When we considered mycobacterial cultures, there was a good treatment outcome. Negative, persistent positive and positive after an initial negative culture occurred in 58,8%, 11,7% and 11,7% of patients, respectively. During the follow-up period, the death rate was 17,7%. Our data suggest that of pulmonary nontuberculous mycobacteriosis has become a disease with increasing importance in our region. Additionally, the response to treatment performed in major hospital has been quite satisfactory when compared to literature. However, it is necessary to follow these patients for a longer period to determine the actual success rate of our therapeutic approach.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-09-04T12:06:25Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_CaracterizacaoMolecularKlebsiella.pdf: 3383189 bytes, checksum: 1b8dc4391b448cb697a3dd6a7612a585 (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2017-09-04T17:57:15Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_CaracterizacaoMolecularKlebsiella.pdf: 3383189 bytes, checksum: 1b8dc4391b448cb697a3dd6a7612a585 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-04T17:57:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_CaracterizacaoMolecularKlebsiella.pdf: 3383189 bytes, checksum: 1b8dc4391b448cb697a3dd6a7612a585 (MD5) Previous issue date: 2016-12-13 / A resistência aos antimicrobianos em bactérias da família Enterobacteriaceae está aumentando de forma alarmante no mundo todo. As K. pneumoniae constituem um importante grupo de patógenos humanos, causadores de infecções hospitalares e comunitárias. Nestas bactérias, a produção de beta-lactamases é um dos principais mecanismos de resistência aos antimicrobianos e responsável pela falha da terapia antimicrobiana. Este trabalho teve como objetivo realizar a caracterização molecular de espécimes de K. pneumoniae produtoras de ESBL e KPC quanto a resistência aos antimicrobianos em pacientes hospitalizados em Belém-PA. Foram analisadas 124 espécimes de K. pneumoniae oriundas de um hospital público de Belém-Pará. Foram realizadas nesses espécimes testes de suscetibilidade a antimicrobianos, testes fenotípicos para detecção de betalactamases de espectro ampliado (ESBL) e K. pneumoniae produtora de carbapenemase (KPC). Posteriormente foram realizadas reações de cadeia de polimerase (PCR) e o sequenciamento de DNA para identificar os genes determinantes de resistência aos antimicrobianos. Foi observado que 83% dos isolados apresentaram o gene bla CTX-M, 85,5% o bla SHV, 83% o bla TEM e 5% o gene bla KPC. Quanto aos genes que codificam ESBL o gene bla CTX-M-71 foi isolado com maior freqüência e foi identificado em 60% dos isolados analisados. Os outros genes que codificam ESBL foram bla SHV-38 (5%), bla SHV-100 (5%) and bla SHV-12 (3,5%). O gene bla KPC-2 foi detectado em 100% dos isolados. Estas enterobactérias apresentaram fenótipos de multidroga resistência com elevados níveis para os quinolonas e aminoglicosideos. Foram observadas associações entre os genótipos e à resistência aos antibióticos. A presença de micro-organismos multirresistentes em unidades hospitalares reforça a necessidade de medidas para a rápida contenção de possíveis infecções causadas por esses patógenos. / The antimicrobial resistance in Enterobacteriaceae is increasing worldwide. The K. pneumoniae constitute an important group of human patogen, causing of hospital and communitarian infections. In these bacteria, the production of extended spectrum beta-lactamases (ESBL) is one of the main mechanisms of resistance the antimicrobials, responsible for the imperfection of the therapy against infections for gram-negative bacilli. This work aimed to do the molecular characterization of the K. pneumoniae producing ESBL and KPC about antimicrobial resistence in pacients from Belém-PA. A total of 124 K. pneumoniae isolates were collected from public hospital from Belém-PA and susceptibility test was performed to detect its susceptibility patterns antibiotics. Phenotypic tests for extended-spectrum beta-lactamases (ESBLs) and carbapenemase-producing Klebsiella pneumoniae (KPC) producing strains were performed to detect the resistance phenotype of the isolates. Then PCR amplification and sequencing analysis were performed for the drug resistance determinants genes. The results showed that 83% strains harbored bla CTX-M gene, 85,5% carried bla SHV , 83% carried bla TEM and 5% carried bla KPC. The most frequent gene ESBL detected was bla CTX-M-71, which was observed in 60% of isolates. Other ESBL genes were bla SHV-38 (5% of isolates), bla SHV-100 (5% of isolates) and bla SHV-12 (3,5% of isolates). O gene bla KPC-2 was detected in 100% of isolates.These enterobacterias showed multidrug resistance phenotypes with high levels for quinolones and aminoglycosides. Associations between genotypes and antibiotic resistance were observed.The presence of multidrug resistant micro-organisms in hospitals, reinforces the need for measures for rapid containment of possibles infections caused by these pathogens.

Para avaliar um sistema integrado de aquicultura foram realizadas análises microbiológicas da água utilizada neste sistema e determinada a incidência e resistência antimicrobiana dos enteropatógenos no ecossistema relacionado. As amostras de água testadas apresentaram 32,9% de taxas de coliformes fecais (≤1.600/100mL), de acordo com a OMS para piscicultura em águas residuais. Salmonella spp. foram detectadas em 14,5% das amostras. De um total de 33 cepas, 15,1% eram resistentes a um ou dois antimicrobianos testados e resistência a múltiplas drogas não foi observada. Aeromonas spp. foram identificadas em 91,6% das amostras. De um total de 416 cepas, resistência a uma classe de antimicrobianos foi observada em 66,3% e a multirresistência às drogas em 37,7%. Na avaliação da virulência dos isolados de Aeromonas hydrophila, 85,3% das cepas apresentaram Beta-hemólise nos três diferentes tipos de eritrócitos empregados e 99,1% nos eritrócitos de coelho e cavalo, sendo possível a caracterização através da PCR do gene aerA e lip, em 100% das amostras. Os resultados obtidos apontam para a relevância quanto às vantagens da implementação de um sistema integrado, disponibilizando alimentos com custo reduzido, porém este sistema necessita de um controle rígido e efetivo para que estes produtos não constituam veículos para a disseminação de doenças. / To evaluate an integrated aquaculture system, microbiological analyses of water used in this system were carried out and the incidence and antimicrobial resistance of enteropathogens were determined in the related ecosystem. Water samples tested had 32.9% of fecal coliforms rates (≤1600/100mL) in accordance with WHO for psiculture in wastewater. Salmonella spp. were detected in 14.5% of the samples. From a total of 33 strains, 15.1% were resistant to one or two antimicrobial drugs tested and multidrug-resistance was not observed. Aeromonas spp. were identified in 91.6% of the samples. From a total of 416 strains, resistance to one antimicrobial class was observed in 66.3% and multidrug-resistance in 37.7%. In relation to virulence factors of Aeromonas hydrophila, 85.3% of the strains showed beta-hemolysis in three different types of erythrocytes and 99.1% in horse and rabbit erythrocytes. It was possible to characterize by PCR assay, the genes aerA and lip in 100% of the strains. The results indicate the relevance of the benefits of implementing an integrated system, providing food with reduced cost, but this system requires a strict and effective control so that these products do not constitute a vehicle for the spread of disease.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-01-11T10:54:50Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Robmary Matias de Almeida - 2017.pdf: 3556874 bytes, checksum: 27db72af224144cb18266e9f23af2021 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-01-11T10:55:37Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Robmary Matias de Almeida - 2017.pdf: 3556874 bytes, checksum: 27db72af224144cb18266e9f23af2021 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-11T10:55:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Robmary Matias de Almeida - 2017.pdf: 3556874 bytes, checksum: 27db72af224144cb18266e9f23af2021 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-06-26 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Haemophilus influenzae (Hi) and Haemophilus haemolyticus (Hhae) are important microorganisms present in human nasopharyngeal colonization, with rates varying according to locality, sampling frequency, individual and social factors. Hi is a pathological agent that causes diseases such as meningitis, pneumonia, sepsis and otitis media, which presents in encapsulated forms with six serotypes a, b, c, d, e, f, and uncapsulated or non-typeable (HiNT). Hhae is a nasopharyngeal comensal and rarely causes invasive diseases. The objective of this study was to estimate the prevalence of Hi and Hhae in children under five years of age attending public day care centers in the city of Goiânia-GO, to determine the circulating serotypes, to analyze the risk factors associated with the nasopharyngeal carrige, as well as to characterize the antimicrobial resistance of Hi. Were analyzed 1.188 nasopharynx swabs from healthy children between 36 and 59 months of age from October to December 2010. The samples were submitted to bacterial culture for the isolation of Haemophilus spp. For the identification of the species, the Real-Time Polymerase Chain Reaction (TR-PCR) was used. Serotyping, as well as detection of the bla TEM-1 and bla ROB-1 resistance genes, was performed through the conventional Polymerase Chain Reaction. Phenotypic detection for β-lactamase production was performed by the chromogenic cephalosporin test. The database was constructed with the statistical software SPSS (Chicago, IL, USA) version 18.0. Risk factors, children aged 3 years, low maternal schooling and three or more children under 10 years of age living in the same household of the child recruited in the study were evaluated by multivariate Poisson regression. The prevalence of Hi carriers was 54.4% (646 / 1.188), 0.9% (n = 11) of the serotype e, 0.9% (n = 11) of serotype f, 0.2% (n = 2) serotype a, 0.08% (n = 1) serotype d, 0.0% (n = 0) serotype b and c and 52.3% (621 / 1.188) of HiNT. The prevalence of Hhae was 1.2% (14 / 1.188). Among the encapsulated Hi, the prevalence of the bla TEM-1 gene was 4.0% (1/25) and the bla ROB-1 gene was 4.0% (1/25). Among the 20% (124/621) of HiNT analysed, the prevalence of the bla TEM-1 gene was 13,7% (17/124) and the prevalence of the bla TEM-1 gene was 1,6% (2/124). Continuous surveillance of Haemophilus spp. as a colonizer, is necessary to evaluate its transmission and dissemination in the population where there is a higher risk of invasive disease, to control Hib re-emergence after the vaccinacion and to continue to monitor antimicrobial resistance. / Haemophilus influenzae (Hi) e Haemophilus haemolyticus (Hhae) são importantes microrganismos presentes na colonização nasofaríngea humana, com taxas que variam de acordo com a localidade, frequência de amostragem, fatores individuais e sociais. O Hi é um agente patológico causador de doenças como meningite, pneumonia, sepse e otite média que se apresenta sob as formas capsuladas com seis sorotipos a, b, c, d, e, f, e não capsuladas ounão tipáveis (HiNT). O Hhae é comensal nasofaríngeo e raramente causa doenças invasivas. O objetivo do estudo foi estimar a prevalência de Hi e Hhae em crianças menores de cinco anos de idade que frequentam creches públicas no município de Goiânia-GO, determinar os sorotipos circulantes, analisar os fatores de risco associados ao portador nasofaríngeo, bem como caracterizar a resistência antimicrobiana dos Hi. Foram analisados 1.188 swabs de nasofaringe de crianças saudáveis entre 36 e 59 meses de idade, no período de outubro a dezembro de 2010. As amostras foram submetidas à cultura bacteriana para o isolamento do Haemophilus spp. Para identificação da espécie foi utilizada a Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real (PCR-TR). A sorotipagem, assim como a detecção dos genes de resistência bla TEM-1 e bla ROB-1 , foi realizada através da Reação em Cadeia da Polimerase convencional. A detecção fenotípica para produção da β-lactamase foi executada pelo teste da cefalosporina cromogênica. A base de dados foi construída com o programa estatístico SPSS (Chicago, IL, USA) versão 18.0. Os fatores de risco, crianças com idade de 3 anos, baixa escolaridade da mãe e três ou mais crianças menores de 10 anos de idade convivendo no mesmo domicilio da criança recrutada no estudo, foram avaliados por regressão de Poisson multivariada. A prevalência de portador do Hi foi de 54,4% (646/1.188) sendo 0,9% (n=11) do sorotipo e, 0,9% (n=11) do sorotipo f, 0,2% (n=2) do sorotipo a, 0,08%(n=1) do sorotipo d, 0,0% (n=0) dos sorotipos b e c e 52,3% (621/1.188) de HiNT. A prevalência do Hhae foi de 1,2% (14/1.188). Entre os Hi encapsulados a prevalência do gene bla TEM-1 foi de 4,0% (1/25) e do gene bla ROB-1 foi de 4,0% (1/25). Em 20% (124/621) dos HiNT, a prevalência do gene bla TEM-1 foi de 13,7% (17/124) e do gene bla ROB-1 de 1,6% (2/124). A vigilância contínua do Haemophilus spp. como colonizador, se faz necessária para avaliar sua transmissão e disseminação na população onde há maior risco de incidência de doenças invasivas, controlar a re-emergência do Hib após a vacinação e continuar monitorando a resistência antimicrobiana.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_claudia_fernandes.pdf: 1692742 bytes, checksum: 5395743de930fc1ac7ec3c75eaab4e86 (MD5) Previous issue date: 2008-02-15 / Leptospirosis is a zoonotic disease that occurs all over the world and is caused by pathogenic bacteria of the genus Leptospira. Clinical manifestations of leptospirosis are similar to other febrile illnesses and this fact frequently retards beginning of antibiotic therapy. Thus, early and accurate diagnosis is a prerequisite for proper treatment of leptospirosis. Pathogenic serovars of Leptospira have a wide antigenic diversity attributed mainly to the lipopolysacharide present in the outer membrane. In contrast, antigens conserved among pathogenic serovars are mainly represented by outer membrane proteins. Surface exposure of a major and highly conserved outer membrane lipoprotein (LipL32) was recently demonstrated on pathogenic Leptospira. LipL32 on its recombinant form (rLipL32) was used to immunize BALB/c mice to develop murine monoclonal antibodies (mAbs). Three mAbs against rLipL32 were produced, isotyped and evaluated for further use in diagnostic tests of leptospirosis using different approaches. The mAbs were conjugated to peroxidase and evaluated in a native protein ELISA with intact and heat-treated leptospiral cells, conjugated to fluorescein isothiocyanate (FITC) for direct immunofluorescence with intact and methanol fixed cells and were used for LipL32 immunoprecipitation from leptospiral cells. rLipL32 mAbs conjugated to peroxidase or used as primary antibody bounded to intact and heat-treated cells in ELISA, proving that they could be used in enzyme immunoassays for detection of the native protein. On immunofluorescence assay, mAbs labeled bacterial cells either intact or methanol fixed. Two mAbs were able to immunoprecipitate the native protein from live and motile leptospiral cells and, adsorbed onto magnetic beads, captured intact bacteria from artificially contaminated human sera for detection by PCR amplification. One mAb was utilized for the development of an immunoseparation assay coupled to PCR test (IMS/PCR) for diagnosis of leptospirosis. The antibody adsorved onto magnetic beads captured leptospires from urine and human sera artificially contaminated for further amplification of the lipL32 gene by PCR. To ensure PCR accuracy, an internal amplification control (IAC) was constructed using as amplification targets sequences of standardized primers specific for pathogenic Leptospira and for a not-related DNA sequence. The IMS/PCR IAC method developed was able to detect 102 cells per mL of sera or urine, corresponding to approximately 25 genomic copies per reaction. These results suggest that the association of LipL32-based immunochemical and molecular techniques could yield a novel method for the diagnosis of leptospirosis. Moreover, immunomagnetic separation with mAbs against LipL32 can be used previous to amplification of other targets in the Leptospira genome by PCR. / A Leptospirose é uma zoonose de ocorrência mundial causada por bactérias do gênero Leptospira. As manifestações clínicas da leptospirose são similares a outras doenças febris e este fato frequentemente atrasa o diagnóstico e o início do tratamento. Portanto, o diagnóstico precoce e acurado da doença é um prerequisito para o tratamento adequado. Sorovares patogêncios de Leptospira possuem uma grande variação antigência e esta diversidade é atribuída principalmente ao lipopolissacarídeo presente na membrana externa. Contrastando com esta característica, antígenos conservados de sorovares patogênicos são principalmente representados por proteínas de membrana externa. Recentemente foi comprovada a exposição da proteína LipL32 na superfície da membrana externa de leptospiras patogênicas. Neste estudo, LipL32 em sua forma recombinante (rLipL32) foi utilizada para imunizar camundongos BALB/c e produzir anticorpos monoclonais (mAbs). Três mAbs contra rLipL32 foram produzidos e caracterizados quanto ao seu potencial para uso em testes diagnósticos usando diferentes metodologias. Os mAbs foram conjugados à peroxidase e avaliados quanto a reação com proteina nativa em células de leptospiras íntegras e rompidas, conjugados com isotiocianato de fluoresceína (FITC) para uso em imunofluorescência para marcar células de leptospira intactas e tratadas com metanol, e usados para imunoprecipitar células de leptospira. Os anticorpos monoclonais anti-LipL32, utilizados em ELISA tanto conjugados com peroxidase ou como anticorpo primário, ligaram-se às células de leptospiras intactas ou rompidas pelo calor, provando que podem ser usados em testes imunoenzimáticos para detecção da proteína nativa. Na imunofluorescência, os mAbs foram capazes de marcar células da bactéria tanto intactas como fixadas com metanol. Dois mAbs foram capazes de imunoprecipitar proteina nativa de leptospiras vivas e móveis, e quando adsorvidos em partículas magnéticas foram capazes de capturar bactérias para amplificação por PCR. Na seqüência deste estudo, o mAb 1D9 foi utilizado em estudos de padronização da metodologia de imunoseparação magnética associada a PCR (IMS/PCR) para diagnóstico de leptospirose. O anticorpo 1D9 foi adsorvido em partículas magnéticas e utilizado para capturar leptospiras em soro e urina humanas artificialmente contaminadas com leptospiras para posterior amplificação. Para assegurar a acurácia da PCR foi construído um controle interno de amplificação (IAC) específico para a metodologia desenvolvida utilizando como alvo sequências de primers já padronizados para exclusiva amplificação de leptospiras patogências e uma sequencia de DNA não relacionada. A metodologia de IMS/PCR IAC permitiu usar somente um par de primers na reação de PCR e mostrou ser promissora para diagnóstico de leptospirose, pois foi capaz de detectar 102 células por mL em amostras de soro e urina artificialmente contaminadas, correspondendo a amplificação a partir de aproximadamente 25 cópias do genoma. Os resultados obtidos evidenciam uma nova perspectiva no diagnóstico da leptospirose através da utilização da proteína LipL32 em métodos imunoquímicos e moleculares ou pela associação destas metodologias. A metodologia de imunoseparação com o mAb anti-LipL32 pode ser utilizada previamente a amplificação de outros alvos do genoma bacteriano por PCR, já que ela possibilita a separação e concentração exclusiva de Leptospira patogênica.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2013-04-16T19:57:01Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_QualidadeBacteriologicaAgua.pdf: 3321901 bytes, checksum: 8d67b7242ebd3d0bd2e31aada1886d97 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2013-04-17T14:45:07Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_QualidadeBacteriologicaAgua.pdf: 3321901 bytes, checksum: 8d67b7242ebd3d0bd2e31aada1886d97 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-17T14:45:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_QualidadeBacteriologicaAgua.pdf: 3321901 bytes, checksum: 8d67b7242ebd3d0bd2e31aada1886d97 (MD5) Previous issue date: 2006 / O saneamento ambiental é um dos mais importantes meios de prevenção de doenças, mas infelizmente não é uma realidade em todos os setores da população, gerando uma situação preocupante para os profissionais de Saúde Pública. A problemática relativa à saúde e meio ambiente mostra-se particularmente importante para a região norte do Brasil, onde pessoas habitam as margens de rios e igarapés com carência ou até mesmo, ausência de infra-estrutura de saneamento, estando expostas a possíveis riscos de contaminação. Neste estudo, de caráter descritivo exploratório, utilizou-se métodos quali-quantitativos, visando diagnóstico bacteriológico da água consumida pelos ribeirinhos habitantes da região insular, mais especificamente nas ilhas de Paulo da Cunha (Ilha Grande) e Murutucu na zona rural do município de Belém-Pa. Foram coletadas 96 amostras de água armazenada nas residências e 80 amostras de água superficial em dez pontos localizados ao entorno das ilhas. Foi avaliado o número de Coliformes termotolerantes e Contagem Padrão de Bactérias Heterotróficas na água armazenada para consumo, assim como Coliformes termotolerantes Estreptococos/Enterococos fecais e enteropatógenos bacterianos na água superficial. Na Ilha Grande os resultados revelam concentrações que variaram de 25 a 3600, 15 a 420 e 15 a 420, para coformes termotolerantes, Estreptococos e Enterococos fecais, respectivamente, em relação à ilha Murutucu estes valores variaram de 540 a 2600, 44 a 680 e 44 a 448, respectivamente para os mesmos indicadores. A presença de Salmonella spp foi observada em 27,5% na Ilha Grande e 12,5% na Ilha de Murutucu. Foi verificado que 58,7% e 66% das amostras de água de consumo nas Ilhas Grande e Murutucu, respectivamente foram consideradas impróprias para consumo, com presença de coliformes termotolerantes. Em relação a bactérias heterotróficas, 41,3% na Ilha Grande e 15% na Ilha de Murutucu possuíam mais de 500 UFC/ml. Considerando-se os resultados obtidos no presente trabalho verificamos que a água utilizada nas zonas rurais pode funcionar como um fator de risco à saúde dos seres humanos que a utilizam. / The ambient sanitation is one of the most important ways of prevention of illnesses, but unhappyly it is not a reality in all the sectors of the population, generating a preoccupying situation for the professionals of Public Health. Problematic relative to the health and the environment reveals particularly important for the brazilian north region, where people inhabit the edges of rivers and igarapés with lack or even though, infrastructure of sanitation absence, being displayed to possible risks of contamination. In this study, of expedition descriptive character, were used quali-quantitative methods, aiming at bacteriological diagnostics of the water consumed for the marginal inhabitants of the region of the islands, more specifically in the islands of Paulo da Cunha (Grande island) and Murutucu in the agricultural zone of the city of Belém-Pará. 96 water samples stored in the residences and 80 superficial water samples had been collected in ten points located surrounding area of the islands. It was evaluated the number of Termotolerants Coliforms and Standard Counting of Heterotrofics Bacteria in the water stored for consumption, as well as Termotolerants coliforms, fecals Estreptococos/Enterococos and bacterial enteropathogens in the superficial water. In the Grande island the results disclose concentrations that had varied of 25 to 3600, 15 to 420 and 15 to 420, for termotolerants Coliforms, fecals Estreptococos and Enterococos, respectively, in relation to the Murutucu island these values had varied of 540 to 2600, 44 to 680 and 44 to 448, respectively for the same pointers. The presence of Salmonella spp was observed in 27,5% in Grande island and 12.5% in the Murutucu island. It was verified that 58.7% and 66%, of the water samples of consumption in the islands Grande and Murutucu, had been respectively considered improper for consumption, with presence of termotolerants coliforms. In relation to heterotrofics bacteria, 41.3% in Grande island e 15% in the Murutucu island had 500 more than UFC/mL. Considering itself the results gotten in the present work verify that the water used in the agricultural zones can function as a factor of risk to the human health that use it.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-02-07T12:13:57Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_EpidemiologiaDescritivaSalmonella.pdf: 1843515 bytes, checksum: a5c42dfc1faa9cb362984eace3292be4 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2014-02-12T14:34:30Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_EpidemiologiaDescritivaSalmonella.pdf: 1843515 bytes, checksum: a5c42dfc1faa9cb362984eace3292be4 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-12T14:34:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_EpidemiologiaDescritivaSalmonella.pdf: 1843515 bytes, checksum: a5c42dfc1faa9cb362984eace3292be4 (MD5) Previous issue date: 2007 / A vigilância dos sorovares de Salmonella em ambientes aquáticos constitui um dos principais elementos do monitoramento das infecções humanas e animais. Foram analisadas 694 amostas de águas de diferentes origens (rio, igarapé, baía, praias, lago, poço, nascente, abastecimento, córrego, drenagem e esgoto) procedentes de 11 municípios do Estado do Pará, e de 212 (30,5%) amostras foram isoladas 2.115 cepas de 91 sorovares de Salmonella. Foram identificados 77 sorovares de Salmonella do total de 1.300 isolamentos de água doce e esgoto no município de Belém, destacando os sorovares S. Saintpaul, S. Panama, S. Muenster, S. Hadar e S. Agona. Na Floresta Nacional de Caxiuanã, 69,4% das amostras de águas foram positivas para Salmonella e 17 sorovares foram identificados, sendo S. Panama, S. Miami e S. Gaminara os mais freqüentes. Dentre os isolados de Salmonella dos ambientes aquáticos, 64,8% foram resistentes às drogas, com especial destaque para a estreptomicina (97,1%) e a tetraciclina (10,8%). Ocorreu distribuição uniforme quanto a presença de Salmonella e coliformes termotolerantes em águas superficiais e subterrâneas, porém em 10 situações positivas para Salmonella não foi possível isolar E.coli. O meio de enriquecimento Rappaport-Vassiliadis foi mais eficiente do que o Selenito Cistina para o isolamento de Salmonella quando mantido a 42,5ºC. Os sorovares isolados em esgoto foram os mesmos obtidos a partir de coproculturas humanas no mesmo período. Os resultados mostram a grande disseminação/dispersão da Salmonella em ecossistemas aquáticos no Estado do Pará e o risco potencial à saúde da população humana. / Surveillance of Salmonella serotypes in aquatic environments is an important procedure for the monitoring of human and animal infections. The analysis of 694 samples of water collected from river, creek, bay, beaches, lake, well, nascent, provisioning water, stream, drainage and sewage distributed along 11 districts in the State of Pará, Brazil, yielded 212 (30,5%) contaminated samples with 91 serotypes and 2,115 strains of Salmonella. In Belém, 77 sorotypes were identified out of 1,300 isolates from freshwater and sewage; S. Saintpaul, S. Panama, S. Muenster, S. Hadar and S. Agona were the most frequent serotypes. In the National Forest of Caxiuanã, 69,4% of water samples were positive for Salmonella and 17 serotypes were identified, being S. Panama, S. Miami and S. Gaminara the most frequent ones. Antibiotic resistance was described in 64.8% of the Salmonella isolates from aquatic environments, with a special importance to streptomycin (97,1%) and tetracycline (10,8%). The presence of Salmonella and thermo-tolerant coliforms in superficial and underground water was frequently associated, but E.coli was not isolated in ten occasions. Rappaport-Vassiliadis enrichment broth was more efficient than Selenite Cystine for the isolation of Salmonella when kept at 42,5ºC. The serotypes isolated from sewage closely resembled the isolates originated from human fecal cultures during the same period. The results show the dissemination of Salmonella in aquatic environments in the State of Pará and the risk to the health of the human population.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-02-10T14:29:20Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_CaracterizacaoMolecularVibrio.pdf: 3174345 bytes, checksum: 206791fda17f07e3185ab94a45a6791f (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-04-16T15:10:09Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertacao_CaracterizacaoMolecularVibrio.pdf: 3174345 bytes, checksum: 206791fda17f07e3185ab94a45a6791f (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-04-16T15:10:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao_CaracterizacaoMolecularVibrio.pdf: 3174345 bytes, checksum: 206791fda17f07e3185ab94a45a6791f (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Previous issue date: 2011 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O V.cholerae é um microorganismo autóctone do ambiente aquático e os sorogrupos O1 e O 139 estão ligados a pandemia e epidemia de cólera. Os V.cholerae não O1 e não O139 ou vibrios não aglutinantes (NAGs) estão envolvidos em casos isolados e surtos de diarréia semelhantes à cólera. No decorrer da sétima pandemia houve o surgimento de diversos isolados “El Tor atípicos”. Entre estes se encontra a variante bioquímica do V.cholerae O1 que não fermenta a sacarose no TCBS em 18 a 24 horas que é o tempo de incubação convencional. Neste trabalho foram estudados 138 isolados de V.cholerae O1 e não O1 não fermentador da sacarose no TCBS de procedência clínica e ambiental, obtidos entre 1994 e 1995 na Amazônia Brasileira (Estados do Pará, Amapá e Amazonas). Avaliou-se a fermentação da sacarose no TCBS e em caldo; o perfil de suscetibilidade a oito diferentes antimicrobianos em ágar difusão; a relação clonal entre os V.cholerae O1 e NAG clínicos e ambientais pelo PFGE e a presença de genes de virulência ctxAB e tcpA pela reação em cadeia da polimerase. Observou-se que as amostras de V.cholerae não fermentaram a sacarose em 24 de incubação no ágar TCBS e em caldo, 43% utilizaram a sacarose em 24 horas e 57% a fermentavam tardiamente (tempo superior a 24 horas). Os isolados apresentaram baixo percentual de resistência a antimicrobianos (8,7%) e nenhum caso de multiresistência. Em relação aos genes de virulência, de um modo geral, os isolados de V.cholerae O1 apresentavam o tcpA e o ctxAB. Nos não O1 estes estavam ausentes, com exceção de um isolado clínico não O1 (gene tcpA+). A análise do PFGE revelou pulsotipos distintos entre os O1 e NAGs, embora dois destes últimos tenham apresentado relação clonal com os O1 clínicos. Todos os O1 clínicos apresentaram relação clonal com isolados de referência da sétima pandemia. / The V. cholerae is an autochthonous organism of the aquatic environment and serogroups O1 and 139 are associated to the pandemic and epidemic cholera. The V. cholerae non-O1 and non O139 or non-binders vibrios (NAGS) are involved in isolated cases and outbreaks of cholera-like diarrhea. During the seventh pandemic there was the emergence of several isolated “El Tor atypical”. Among these there is a biochemical variant of V. cholerae O1 that does not ferment sucrose in TCBS in 18 to 24 hours which is the conventional incubation time. In this work, we studied 138 isolates of V. cholerae O1 and non O1 non-fermenter of sucrose on TCBS from clinical and environmental origin, obtained between 1994 and 1995 in the Brazilian Amazon (states of Pará, Amapá and Amazonas). We evaluated the fermentation of sucrose in TCBS and broth; the susceptibility to eight different antimicrobials in agar diffusion, the clonal relationship between V. cholerae O1 and NAG from clinical and environmental origin by PFGE and the presence of virulence genes tcpA and ctxAB by the polymerase chain reaction. It was observed that the samples of V. cholerae did not ferment sucrose in 24 hours of incubation in TCBS agar and broth, 43% used sucrose in 24 hours and 57% fermented it lately (more than 24 hours). The isolates had a low percentage of antimicrobial resistance (8.7%) and no cases of multidrug resistance. Regarding the virulence genes, in general, the isolates of V. cholerae O1 showed the ctxAB and tcpA. In the non-O1, these were absent, except for one clinical isolate non-O1 (gene tcpA +). The PFGE analysis revealed pulsotypes distinguished between O1 and nags, although two of the latter had presented the clonal relationship to clinical O1. All O1 clinical isolates were clonally related to the reference isolates from the seventh pandemic.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-02-17T15:59:10Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_EpidemiologiaPerfilSensibilidade.pdf: 470584 bytes, checksum: 381e19fc368423f92307289a61462c2d (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-04-22T13:04:17Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertacao_EpidemiologiaPerfilSensibilidade.pdf: 470584 bytes, checksum: 381e19fc368423f92307289a61462c2d (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-04-22T13:04:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao_EpidemiologiaPerfilSensibilidade.pdf: 470584 bytes, checksum: 381e19fc368423f92307289a61462c2d (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Previous issue date: 2007 / No gênero Staphylococcus, o S. aureus com resistência à oxacilina é sem duvida alguma o patógeno de maior importância, quando associado às infecções hospitalares, sendo responsável por elevadas taxas morbidade e mortalidade. Este estudo descreve a epidemiologia e perfil de sensibilidade de linhagens de S. aureus procedentes de hospitais públicos de Macapá-Amapá. Todos os isolados usados neste trabalho foram novamente reisolados através de métodos convencionais da microbiologia e sistemas automatizados. As amostras com resistência à oxacilina foram todas submetidas ao teste screening com a cefoxitina 30 mcg. O tratamento estatístico dos dados revelou que houve predominância de S. aureus no sexo masculino (62,8%), sendo a média de idade dos pacientes de 20 anos, entretanto, a maior ocorrência foi na faixa etária de 0 a 10 anos, o hospital de maior prevalência foi o Hospital da Criança e do Adolescente (54,7%). A prevalência das amostras isoladas nos hospitais foi de 3,8%. Do total de amostras isolada (n=105), 25 (23,8%) foram resistentes à oxacilina. Essas amostras apresentaram resistência cruzada à Gentamicina (80%); Sulfazotrim (72%), Tetraciclina (64%), Eritromicina (60%), Clindamicina (44%), Norfloxacino (44%) e Quinupristina/Dalfopristina (32%). A vancomicina apresentou 100% de sensibilidade. Apesar dos diversos estudos realizados no Brasil e no mundo mostrarem altos índices de resistência do S. aureus à oxacilina, nesta pesquisa os níveis de resistência da bactéria nos hospitais públicos de Macapá ainda podem ser considerados baixos. Contudo, os resultados revelam a necessidade de vigilância sistemática, visando o controle e prevenção da disseminação de linhagens resistentes deste patógeno associado com infecção hospitalar. / Amongst the Staphylococcus genus, the oxacillin-resistant Staphylococcus aureus is without doubts some the pathogen of bigger importance, when associated to the nosocominal infections, being responsible for high mortality and morbidity rates. This study describes the epidemiology and the sensitivity profile of the Staphylococcus aureus originated from public hospitals of Macapá-Amapá. All strains used in this study had been again isolated through manual and automatized methodology. The oxacilin-resistant samples had all been submitted to the screening test with cefoxitin 30 mcg. The statistical treatment of the data revealed the predominance of the masculine sex (62,8%), being of 20 years the average age of the patients. The biggest occurrence was in the age group of 0 to 10 years, the hospital of bigger prevalence was the Hospital of the Child and the Adolescent (54,7%). The prevalence of the isolated samples in the hosptals was 3,8%. 25 (23,8) of the total isolated samples (n=105) were resistant to oxacilin. These samples presented crossed resistnce to gentamycin (80%), sulfazotrim (72%), tetracyclin (64%), erythromycin (60%), clindamycin (44%), norfloxacin (44%) and quinupristin/dalfopristin (32%). The vancomycin presented 100% of sensitivity. Despite many studies done in Brazil and in the world show high rates of oxacillin-resistant S. aureus, in this research the resistance levels of the bacterium in the public hospitals of Macapá still can be considered low. However, the results reveal the need for systematic surveillance for the control and prevention of the spread of resistant strains of the pathogen associated with nosocomial infection.