Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-11T11:27:37Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 904628 bytes, checksum: 5d0accfed4bf3ffa5b534f9e166eeacc (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-11T11:27:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 904628 bytes, checksum: 5d0accfed4bf3ffa5b534f9e166eeacc (MD5) Previous issue date: 2001-08-09 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A proteína BiP (Binding Protein) está envolvida no dobramento correto de proteínas secretórias e retenção no RE de proteínas dobradas ou montadas incorretamente. BiP também atua auxiliando na solubilização de agregados protéicos durante períodos de estresses. Dois clones de BiP de soja, denominados gsBiP6 e gsBiP9, foram isolados a partir das bibliotecas genômicas provenientes dos fagos λEMBL3 e λZAP II, respectivamente. Os promotores de gsBiP6 e gsBiP9 possuem cis-elementos gerais, característicos de promotores de genes de plantas, como as seqüências de transcrição CAAT e TATA, e cis-elementos que respondem a estresses do retículo endoplasmático (ERSE), além de elementos G-box. Os promotores de BiP foram fusionados ao gene repórter gus e usados para transformar Nicotiana tabacum via A. tumefaciens. Análises histoquímicas de plantas transformadas com as construções -358pbip6-gus ou -2200pbip9-gus revelaram que os promotores de BiP produziram um padrão uniforme de expressão de GUS em folhas, caules e raízes. Intensa atividade histoquímica de GUS foi observada nos feixes vasculares de folhas, caule e raízes e em regiões de traço foliar, assim como, no meristema apical, local onde ocorre intensa divisão celular. Este padrão de distribuição espacial da atividade de GUS sugere estar correlacionado com uma expressão desses genes em tecidos que apresentam alta atividade celular secretória e alta proporção de células em um processo ativo de divisão celular. Coerente com esta observação, a atividade histoquímica de GUS é muito menos intensa no parênquima xilemático. Deleções do promotor de gsBiP6 foram conduzidas na orientação 5’-3’ (- 138pbip6-gus) e no interior do clone Δ(-226/-82)pbip6-gus. Análise dessas deleções em plantas transformadas, identificaram 2 domínios regulatórios cis-atuantes, denominados CRD1 (-358 a -226) e CRD2 (-226 a -82). A região CRD1 exibe atividade de enhancer, já que foi capaz de restaurar altos níveis de expressão basal do gene repórter gus, quando ligada à extremidade 5’ na posição -82 do promotor de BiP6. A região CRD2 contém tanto cis -elementos regulatórios positivos quanto cis -elementos negativos que contribuem para o padrão tecido-específico de expressão controlado pelo promotor de gsBiP6. A expressão do gene repórter na região do procâmbio em raízes, no meristema apical e no floema de caule foi absolutamente dependente da região CRD2. Em contraste, deleção de CRD2 resultou em acúmulo acentuado de atividade de GUS no parênquima xilemático. A ativação dos promotores BiP6 e BiP9 em resposta ao acúmulo de proteínas anormais no retículo endoplasmático (UPR) e em respostas a estresse osmótico foi avaliada em discos foliares transgênicos. Tratamento dos discos foliares com tunicamicina, ativador da via UPR, e com PEG, indutor de um estresse osmótico, induziu a expressão de GUS, sob o controle do pro motor BiP6 e do promotor BiP9. A deleção da região CRD2 (-226 a -82) no promotor BiP6 causou a perda da inducibilidade da expressão gênica em resposta a tunicamicina e PEG, indicando que CRD2 contém elementos cis-atuantes de resposta a estresse. De fato, dois cis-elementos conservados atuantes na via UPR (UPRE) foram identificados na região CRD2. Coletivamente, estes resultados sugerem que o controle da expressão de BiP em plantas depende de uma complexa integração de múltiplos cis-elementos regulatórios no promotor. / The binding protein BiP is involved in the correct folding of secretory proteins and retention in the RE of unfolded proteins. BiP also prevents nonproductive intermolecular interactions of folding intermediates and subsequent misaggregation of proteins during stress conditions. We have isolated two genomic clones named gsBiP6 and gsBiP9 from λEMBL3 and λZAP II genomic libraries, respectively. The gsBiP6 and gsBiP9 promoters have general motifs founded in plant gene promoters, such as CAAT and TATA sequence, and specific motifs, such as endoplasmatic reticulum stress response element (ERSE) and G-box elements. The BiP promoters were fused to the reporter gene β-glucuronidase (GUS) and introduced into tobacco plants via Agrobacterium tumefaciens transformation. Histochemical analysis of transformed plants with the constructions -358pbip6-gus or -2200pbip9-gus revealed that the BiP promoters produced a uniform pattern of the GUS expression in leaves, stems, and roots. Intense GUS histochemical activity was observed in the vascular region of leaves,stems and roots, and in the leaf trace region as well as in the apical meristem, place where intense cellular division happens. This pattern of space distribution of the GUS activity suggests to be correlated with an expression of those genes in places that have high cellular secretory activity and high proportion of cells in an active process of cellular division. Coherent with this observation, the histochemical activity of GUS is much less intense in the xylem parenchyma. The gsBiP6 promoter deletions were driven in the 5'-3' orientation (-138pbip6-gus) and intern region Δ(-226/- 82)pbip6-gus. Analysis of those deletions in transformed plants identified two regulatory domains cis-acting, denominated CRD1 (-358 to -226) and CRD2 (- 226 to -82). The CRD1 exhibits enhancer activity, since it was capable to recuperate high levels of basal expression of the gus reporte r gene when linked to the extremity 5' in the position -82 of the BiP6 promoter. The CRD2 contains positive regulatory cis -elements, as negative regulatory cis -elements that contribute to the specific pattern of expression controlled by the gsBiP6 promoter. The reporter gene expression in the root procambium region, in the apical meristem and in the phloem stem, was absolutely dependent on the CRD2. In contrast, CRD2 deleted resulted in accentuated accumulation of GUS activity in the xylem parenchyma. The activation of the BiP6 and BiP9 promoters, in response to the unfolded proteins response in the endoplasmatic reticulum (UPR) and osmotic stress condition, were evaluated in transgenic leaf disks. Leaf disks incubated with tunicamycin, activator of the UPR, and with PEG, inductor of an osmotic stress, induced the expression of GUS, under the BiP6 and BiP9 promoters control. The CRD2 (-226 to -82) deleted in the BiP6 promoter caused the loss of the induction of the expression in response to tunicamycin and PEG, indicating that CRD2 contains responsive cis-acting elements under stress conditions. In fact, two conserved cis-acting elements in the UPR (UPRE) were identified in the CRD2. Collectively, these results suggest that the control of the expression of BiP in plants depends on a complex integration of multiple regulatory cis-elements in the promoter.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-07-13T17:46:00Z No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 659368 bytes, checksum: acee7a3fc1b46d941711528cad7098c2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-13T17:46:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 659368 bytes, checksum: acee7a3fc1b46d941711528cad7098c2 (MD5) Previous issue date: 2001-06-13 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O presente trabalho foi realizado no Parque Estadual do Itacolomi, situado nos municípios de Mariana e Ouro Preto-MG. O objetivo principal foi estudar a ocorrência de Vanillosmopsis erythropappa Sch. Bip., em diferentes ambientes dentro da área de estudo, caracterizando a composição florística destes ambientes, a estrutura fitossociológica, a distribuição de diâmetro, a área basal e o volume. Foi feita também a caracterização edáfica da área de estudo por meio da quantificação dos nutrientes Ca, Mg, P e K do solo local, bem como do elemento Al. Foram obtidos ainda o pH em água, a soma de bases (SB), a acidez trocável, a CTC em pH 7,0, a saturação por bases e a saturação por alumínio. A candeia ocorre de maneira distinta dentro da área estudada: maciços de candeia ou candeial, candeia ocorrendo no interior da mata natural e locais onde essa espécie é rara. Portanto, a área total de amostragem foi dividida em cinco partes distintas: áreas 1, 2 e 3 (candeiais), área 4 (ocorrência rara de candeia) e área 5 (mata com ocorrência de candeia). Em cada área foram lançadas cinco parcelas de área fixa, distribuídas sistematicamente, somando 25 áreas de 400 m 2 cada, totalizando 1,0 ha de amostragem. Foram avaliados todos os indivíduos com DAP acima de 3,0 cm. O solo foi amostrado nas profundidades de 0-10 e 10-20 cm, para análises química e granulométrica. Em cada parcela foi coletada um amostra composta de solo na profundidade de 0-10 cm e uma na profun- didade de 10-20 cm, totalizando 25 amostras compostas em cada profundidade amostrada. A análise estatística foi feita ao comparar os parâmetros densidade, dominância e volume e os teores de nutrientes do solo entre as áreas amostradas. Foi constatado que o solo da região é bastante pobre e que a espécie é bem adaptada a este tipo de solo. Apesar de não ter sido quantificado, o fator luz é muito importante no desenvolvimento dessa espécie. Observou-se em campo que a candeia se desenvolve com facilidade à plena luz, daí uma característica de espécie pioneira. Os maiores indivíduos foram encontrados no meio da mata, pois estes competem com os indivíduos das demais espécies por luz, portanto crescem mais que os indivíduos que formam os candeiais. É muito comum encontrar indivíduos mortos de candeia na área estudada. Observou-se que quanto mais avançado é o estádio sucessional da área mais indivíduos mortos foram encontrados. Tal fato prova que realmente a candeia precisa de luz para se desenvolver e sobreviver, e quanto mais a floresta cresce e aumenta a competição por luz entre as espécies, a candeia tende a desaparecer. As diferenças encon- tradas entre as áreas amostradas, no que diz respeito à densidade, à dominância, ao volume, à composição florística e à distribuição diamétrica, se devem, princi- palmente, à diferença de estádios sucessionais em que se encontram tais áreas, não sendo, portanto, o solo o maior contribuinte para tal fato. / The present work was carried out in the Parque Estadual do Itacolomi, located in the municipalities of Mariana and Ouro Preto-MG, Brasil. The main objective of the work was to study the occurrence of Vanillosmopsis erythropappa Sch. Bip. (Compositae – Candeia) in various environments inside the studied area, characterizing the floristic composition therein, the phytosociologic structure, the diameter distribution, basal area and volume. Also, the characterization of the soil of the studied area was done by means of the quantification of the nutrients Ca, Mg, P and K of the local soil, as well as of the element Al. The pH in water, the bases sum (SB), the exchangeable acididy, the CTC at pH 7.0, the bases saturation, and the aluminum saturation were obtained. The candeia tree occurs in a distinctive way throughout the studied area as follows: thickets of candeia trees or candeial, candeia trees occurring inside natural forests and in places where the species is scarce. Therefore, the total sampling area was divided into five different parts: areas 1, 2 and 3 (candeias), area 4 (rare occurrence of candeia trees), and area 5 (forest with occurrence of candeia trees). In each area five plots, with a fixed area were systematically distributed, i.e., 25 areas with 400 m 2 each, totaling 1.0 ha of sampling. All individuals with DBH of more than 3.0 cm were included. The soil was sampled at the depths of 0-10 and 10-20 cm, for the chemical and granulometric analyses. In each plot a composed soil sample was collected at a depth of 0-10 cm and 10-20 cm, totaling 25 composed samples in each of the depths sampled. The statistical analysis was made comparing the parameters density, dominance and volume, and the soil nutrient contents among the sampled areas. It was found that the soil of the region is quite poor and that the species is well adapted to this kind of soil. Although the factor light was not quantified, it is very important for the development of this species. In the field, it was observed that the cadeia tree grows easily in areas with plenty of light, therefore it is a feature of pioneer species. The larger individuals were found inside the forest, because they compete with individuals of other species for light, therefore growing taller than the individuals that form the thickets or candeiais. It is very common to find dead candeia trees in the studied area. It was observed that the more advanced the successional stage in the area the more dead individuals were found. This proves that the species really needs light to develop and survive, and the more the forest grows increasing light competition among species the more the candeia trees tend to disappear. The differences found among the sampled areas, in relation to density, dominance, volume, floristic composition and diametric distribution are due mainly to the difference in successional stages within the areas, thus, the soil is not the major contributor for these facts. / Dissertação importada do Alexandria

Ingeniero Civil Industrial / Desde los inicios de Transantiago han existido una serie de problemas por deficiencias a nivel de implementación como de gestión, lo que ha generado críticas de la población, que se ha mostrado insatisfecha con el nuevo sistema. Destacándose este último tiempo el tema de la evasión de pasajes, ya que ha llegado aproximadamente al 20% a nivel global, viéndose más perjudicada la empresa operadora STP Santiago S.A., la cual tiene el valor más alto, cercano al 30%. La justificación del trabajo se respalda en tres pilares. El primero es la misión y visión que tienen Transantiago en la mejora continua de calidad de servicio, siendo eficiente y sustentable económicamente, para poder transportar a las personas de la Ciudad de Santiago. Segundo, con las críticas de los usuarios que exigen un mejor servicio y sienten injusticia con respecto a gente que evade, ya que al final, son ellos mismos los que eventualmente asumirán un alza de tarifa del pasaje. Y tercero, es la participación activa en el tema evasión que tuvieron que asumir las empresas operadoras, con la generación de los nuevos contratos el 2012. Por lo anterior, en este trabajo se desarrolla una investigación de los factores que afectan más a la evasión, generando un sistema de gestión, sobre la variable más importante, y recomendaciones de las variables secundarias, para mitigar la evasión y en lo posible, convertir ésta, en transacciones al sistema. En el estudio se hace la diferencia entre evasores habituales y ocasionales. Los primeros son los que van a evadir siempre, por motivos como que no tienen dinero y encuentran el pasaje muy caro o están en contra del sistema. Y los evasores ocasionales, los cuales solo aprovechan la circunstancia y evaden por razones como no tener cargada la tarjeta bip! o estar demasiado lleno el bus y subirse por las puertas traseras sin validar el pasaje. Este trabajo se enfoca en el segundo segmento, el cual corresponde cerca del 64% del total de evasiones. Se descubre que los factores más importantes y gestionables por la empresa operadora corresponde a mejorar la operación y realizar fiscalización. El factor más importante para el usuario, es la ampliación de la red de carga para la tarjeta bip! También se determina la variable a estudiar en profundidad como el factor de fiscalización, ya que al aplicar una mejora sobre éste, se espera que la evasión se reduzca y se traspase a transacciones en un 40%, en comparación con el 30% y 20% de ampliar red de carga y mejorar operación respectivamente. Por lo cual, se propone para el tema de fiscalización, un modelo de optimización dinámico que haga que los fiscalizadores controlen los paraderos y los tramos horarios con mayor evasión, generando un ruteo de estos fiscalizadores donde sea conveniente económicamente para la empresa. Esta solución, para el caso del operador STP (6% del sistema), arroja que se pueden controlar 212 mil evasores potenciales, se aumentaría 85 mil transacciones y generaría 33 millones mensuales más en ingresos. También, esta solución es casi un 15% más eficiente que fiscalizar de forma estática el paradero toda la jornada laboral. Analizando la posible migración de paradero que presenten los evasores al enfrentarse a un paradero fiscalizado, se estudia a través de un análisis conjunto, la valoración de los atributos más importantes de la elección de paraderos de los usuarios. Generando una función de utilidad de migración para estudiar las posibles consecuencias de la solución propuesta.

A construction project can be compared to a triathlon where the building process takes place in three stages and participants try to finish three sub processes as fast as possible to reach the goal. After the first stage is finished, the next begins to eventually jointly meet the milestones that are set on the road. There are many different players in a building process where everyone can have completely different tasks and work in completely different locations around the world. This require that the information between the different parties must be correct and shared to avoid delays and unnecessary costs. Identifying, defining and structuring of information in the 3D-model reflects an organized approach where all information is available in the same location. The development in the construction industry has given the opportunity to let the information supply to be almost unlimited. BIM stands for Building Information Modeling, in design/construction models there is room for the construction industry to improve the efficiency and quality at much higher altitudes. Two systems that have grown during the BIM development is the BIP (Building Information Properties) and BSAB 2.0 (Bygg Samordning AB 2.0) which is designation and classification system in Sweden that aims to become the solution for a joint system for all construction companies. This would lead to that, information delivery becomes waterproof.  This report is a study of how a common system can be applied to the accounting of the various construction companies to be similar and flawless. The lineup of solutions in the examination are solutions for the modeling software Tekla Structures. There is also an investigation of how the mapping of a complete system that allows the different parties in the construction process to use the same terms throughout the different sub processes.

Seminario para optar al título de Ingeniero Comercial, Mención Administración / Este trabajo presenta una estrategia para optimizar la localización de la red de comercialización de la tarjeta inteligente conocida como tarjeta bip! en el área de superficie, con el fin de mejorar el uso de recursos. En la actualidad no existe un modelo de localización utilizado para la incorporación de nuevos comercios a la red, lo cual es ineficiente. El procedimiento desarrollado en el estudio consistió en encontrar patrones en el comportamiento de compra, comenzando por rendimientos en las ventas por comunas, per cápita por comuna, por local, hasta finalmente llegar a variables más relevantes, que consiste en la ubicación del comercio dado un principio de flujo de personas. Utilizar dicho modelo, aumentaría la recaudación de las comunas con peor rendimiento entre 22,9% y 38,8%. El desplazamiento de las personas de su hogar a su trabajo, por sí solo, no es un factor que influye en la carga de la tarjeta bip!, sino depende de cómo los clientes deciden utilizar el Transantiago. Los resultados muestran que la demanda de pasajeros en los paraderos que están cercanos a un local influye directamente en las ventas de éste. Por lo tanto, aquellos que se encuentren más retirados de los flujos de personas no generan ventas considerables. Finalmente se da una mirada a otras posibles formas de mejorar el actual sistema. Se muestra que tanto las tasas de captura y canibalización al momento de la entrada de un nuevo local, disminuyen a medida que exista mayor cantidad de comercios incumbentes. Lo cual, implica que solo se ve un efecto importante en las ventas de un área en particular, cuando hay un o ningún comercio con anterioridad.

This thesis was made to get a deeper understanding of how chaperones interact with unstable, aggregation prone, misfolded proteins involved in human disease. Over the last two decades, there has been much focus on misfolding diseases within the fields of biochemistry and molecular biotechnology research. It has become obvious that proteins that misfold (as a consequence of a mutation or outer factors), are the cause of many diseases. Molecular chaperones are proteins that have been defined as agents that help other proteins to fold correctly and to prevent aggregation. Their role in the misfolding disease process has been the subject for this thesis. Transthyretin (TTR) is a protein found in human plasma and in cerebrospinal fluid. It works as a transport protein, transporting thyroxin and holo-retinol binding protein. The structure of TTR consists of four identical subunits connected through hydrogen bonds and hydrophobic interactions. Over 100 point mutations in the TTR gene are associated with amyloidosis often involving peripheral neurodegeneration (familial amyloidotic polyneuropathy (FAP)). Amyloidosis represents a group of diseases leading to extra cellular deposition of fibrillar protein known as amyloid. We used human SH-SY5Y neuroblastoma cells as a model for neurodegeneration. Various conformers of TTR were incubated with the cells for different amounts of time. The experiments showed that early prefibrillar oligomers of TTR induced apoptosis when neuroblastoma cells were exposed to these species whereas mature fibrils were not cytotoxic. We also found increased expression of the molecular chaperone BiP in cells challenged with TTR oligomers. Point mutations destabilize TTR and result in monomers that are unstable and prone to aggregate. TTR D18G is naturally occurring and the most destabilized TTR mutant found to date. It leads to central nervous system (CNS) amyloidosis. The CNS phenotype is rare for TTR amyloid disease. Most proteins associated with amyloid disease are secreted proteins and secreted proteins must pass the quality control check within the endoplasmic reticulum (ER). BiP is a Hsp70 molecular chaperone situated in the ER. BiP is one of the most important components of the quality control system in the cell. We have used TTR D18G as a model for understanding how an extremely aggregation prone protein is handled by BiP. We have shown that BiP can selectively capture TTR D18G during co-expression in both E. coli and during over expression in human 293T cells and collects the mutant in oligomeric states. We have also shown that degradation of TTR D18G in human 293T cells occurs slower in presence of BiP, that BiP is present in amyloid deposition in human brain and mitigates cytotoxicity of TTR D18G oligomers. / Denna avhandling handlar om proteiner. Särskilt de som inte fungerar som de ska utan har blivit vad man kallar ”felveckade”. Anledningen till att proteiner veckas fel beror ofta (men inte alltid) på mutationer i arvsmassan. Felveckade proteiner kan leda till sjukdomar hos människor och djur (man brukar tala om amyloidsjukdomar), ofta av neurologisk karaktär. Exempel på amyloidsjukdomar är polyneuropati, där perifera nervsystemet är drabbat, vilket leder till begränsad rörelseförmåga och senare till förlamning; och Alzheimer´s sjukdom, där centrala nervsystemet är drabbat och leder till begränsad tankeförmåga och minnesförluster. Studierna som presenteras i denna avhandling har gått ut på att få en bättre förståelse för hur felveckade proteiner interagerar med det som vi har naturligt i cellerna och som fungerar som skyddande, hjälpande proteiner, så kallade chaperoner. Transtyretin (TTR) är ett protein som cirkulerar i blodet och transporterar tyroxin (som är ett hormon som bland annat har betydelse för ämnesomsättningen) samt retinol-bindande protein (vitamin A). I TTR genen har man funnit över 100 punktmutationer, vilka har kopplats samman med amyloidsjukdomar, bland annat ”Skellefteåsjukan”. Mutationer i TTR genen leder ofta till att proteinet blir instabilt vilket leder till upplösning av TTR tetrameren till monomerer. Dessa monomerer kan därefter sammanfogas på nytt men denna gång på ett sätt som är farligt för organismen. I denna avhandling har fokus legat på en mutation som kallas TTR D18G, vilken har identifierats i olika delar av världen och leder till en dödlig form av amyloidos i centrala nervsystemet. Det chaperon som vi har studerat benämns BiP och är beläget i en cellkomponent som kallas för det endoplasmatiska retiklet (ER). I ER finns cellens kontrollsystem i vilket det ses till att felveckade proteiner inte släpps ut utan istället bryts ned. Denna avhandling har visat att BiP kan fånga upp TTR D18G inuti celler och där samla mutanten i lösliga partiklar som i detta fall är ofarliga för cellen. Avhandligen har också visat att nedbrytningen av TTR D18G sker mycket långsammare när BiP finns i riklig mängd.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-08-29T16:38:34Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 671657 bytes, checksum: f28658698bf95e26a5cf8beb3fc64078 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-29T16:38:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 671657 bytes, checksum: f28658698bf95e26a5cf8beb3fc64078 (MD5) Previous issue date: 1997-07-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A proteína BiP, residente no lúmen do retículo endoplasmático (RE), tem sido descrita como um componente importante no processo de dobramento e montagem de proteínas secretórias recém-sintetizadas. Com base na localização subcelular, identidade imunológica, massa molecular relativa e síntese constitutiva, foi possível identificar o homólogo de BiP da soja, usando-se anticorpos preparados contra BiP do milho. A análise do padrão de acúmulo da proteína BiP revelou que a sua síntese é coordenada, temporalmente, com a síntese de proteínas de reserva na semente. Além disso, a síntese de BiP é correlacionada com a concentração de proteína total acumulada na semente de diferentes variedades de soja. Esses resultados indicam que a proteína BiP é induzida pelo aumento da atividade secretória do cotilédone, associada à síntese ativa de proteínas de reserva. Consistente com sua função de chaperone molecular, BiP é induzida em resposta a diversos estresses fisiológicos que promovem a proliferação do RE e o acúmulo de proteínas mal dobradas nesta organela. Infestação por Tetranichus urticae e infecção por Cercospora sojina Hara induziram a síntese de BiP em níveis comparáveis. Similarmente, sua síntese foi induzida, significativamente, em resposta a estresse nutricional. Ao contrário de BiP de espinafre, BiP de soja é regulada positivamente por estresse hídrico. Esses resultados contraditórios indicam que vias distintas de mecanismos regulatórios controlam a expressão dos genes BiP em plantas. Como membro da família Hsp70, foi demonstrado que a proteína BiP da soja se liga a ATP e associa-se com polipeptídios sintetizados exclusivamente na semente. No entanto, o complexo formado entre BiP e esses polipeptídios é altamente estável e insensível a ATP. A propriedade de BiP de se ligar a ATP foi explorada como meio de purificar essa proteína a partir de extratos protéicos de sementes, usando-se cromatografia de afinidade em resinas de ATP-agarose. Conforme julgado através de géis de acrilamida corados com prata, BiP foi purificada em um nível de homogeneidade em torno de 90%. A identidade da proteína purificada foi confirmada, uma vez que seus anticorpos reconheceram eficientemente a proteína expressa pelo clone cUFVBiP1, que codifica BiP da soja. / The protein BiP, reticulum endoplasmic resident molecular chaperone, has been described as an important mediator of folding and assembly of newly- synthesized proteins. Based on the subcelular localization, immunological identity, relative molecular mass and constitutive synthesis, we have identified the BiP homologue from soybean, using a maize BiP antibody. The pattern of BiP accumulation reveals that its synthesis is temporally coordinated with the seed storage protein synthesis. In addition, the BiP synthesis is correlated with the concentration of total protein in seeds of different soybean varieties. These results suggest that BiP is induced in response to the secretory activity of the cotyledon, which is associated with the active synthesis of storage proteins. As a molecular chaperone, we have found that soybean BiP is induced in response to several physiological stresses which promote the proliferation of the ER and an accumulation of unfolded proteins within the lumen of this organelle. Tetranichus urticae attack and Cercospora sojina infection induced the BiP synthesis to the same extend. Likewise, its synthesis was induced, considerably, in response to nutritional stress. Unlike spinach BiP, soybean BiP is upregulated by water stress. These controversial results suggest that disctint pathways of regulatory mechanisms control the BiP gene expression in plants. As a member of the Hsp70, we have demonstrated that soybean BiP binds to ATP and associates with seed polypeptides. However, these complexes are highly stable and insensitive to ATP. We have taken advantage of the BiP ATP-binding activity as a mean to purify this protein from whole seed protein extracts through affinity chromatography. As judged by silver-staining electrophoresis acrylamide gels, BiP was purified to 90% homogeneity. The identity of the purified protein was further confirmed, since antibodies prepared against it recognize efficiently a recombinant protein expressed by a soybean cDNA.

Les nouveaux systèmes ont souvent recours à une implémentation distribuée du logiciel, pour des raisons d'efficacité et à cause de l'emplacement physique de certains capteurs et actuateurs. S'assurer de la correction d'un logiciel distribué est difficile car cela impose de considérer tous les enchevêtrements possibles des actions exécutées par des processus distincts. Cette thèse propose une méthode pour générer, à partir d'un modèle d'application haut niveau, une implémentation distribuée correcte et efficace. Le modèle de l'application comporte des composants communiquant au moyen d'interactions multiparties avec priorités. L'exécution d'une interaction multipartie, qui correspond à un pas de la sémantique, change de façon atomique l'état de tous les composants participant à l'interaction. On définit une implantation distribuée comme un ensemble de processus communiquant par envoi de message asynchrone. La principale difficulté est de produire une implémentation correcte et efficace des interactions multiparties avec priorités, en utilisant uniquement l'envoi de message comme primitive. La méthode se fonde sur un flot de conception rigoureux qui raffine progressivement le modèle haut niveau en un modèle bas niveau, à partir duquel le code pour une plateforme particulière est généré. Tous les modèles intermédiaires apparaissant dans le flot sont exprimés avec la même sémantique que le modèle original. À chaque étape du flot, les interactions complexes sont remplacés par des constructions utilisant des interactions plus simples. En particulier, le dernier modèle obtenu avant la génération du code ne contient que des interactions modélisant l'envoi de message. La correction de l'implémentation est obtenue par construction. L'utilisation des interactions multiparties comme primitives dans le modèle de l'application permet de réduire très significativement l'ensemble des états atteignables, par rapport à un modèle équivalent mais utilisant des primitives de communication plus simples. Les propriétés essentielles du système sont vérifiées à ce niveau d'abstraction. Chaque transformation constituante du flot de conception est suffisamment simple pour être complètement formalisée et prouvée, en termes d'équivalence observationelle ou d'équivalence de trace entre le modèles avant et après transformation. L'implémentation ainsi obtenue est correcte par rapport au modèle original, ce qui évite une coûteuse vérification a posteriori. Concernant l'efficacité, la performance de l'implémentation peut être optimisée en choisissant les paramètres adéquats pour les transformations, ou en augmentant la connaissance des composants. Cette dernière solution requiert une analyse du modèle de départ afin de calculer la connaissance qui est réutilisée pour les étapes ultérieures du flot de conception. Les différentes transformations et optimisations constituant le flot de conception ont été implémentées dans le cadre de BIP. Cette implémentation a permis d'évaluer les différentes possibilités ainsi que l'influence des différents paramètres, sur la performance de l'implémentation obtenue avec plusieurs exemples. Le code généré utilise les primitives fournies par les sockets POSIX, MPI ou les pthreads pour envoyer des messages entre les processus. / Distributed software is often required for new systems, because of efficiency and physical distribution and sensors and actuators. Ensuring correctness of a distributed implementation is hard due to the interleaving of actions belonging to distinct processes. This thesis proposes a method for generating a correct and efficient distributed implementation from a high-level model of an application. The input model is described as a set of components communicating through prioritized multiparty interactions. Such primitives change the state of all components involved in an interaction during a single atomic execution step. We assume that a distributed implementation is a set of processes communicating through asynchronous message-passing. The main challenge is to produce a correct and efficient distributed implementation of prioritized multiparty interactions, relying only on message-passing. The method relies on a rigorous design flow refining the high-level model of the application into a low-level model, from which code for a given platform is generated. All intermediate models appearing in the flow are expressed using the same semantics as the input model. Complex interactions are replaced with constructs using simpler interactions at each step of the design flow. In particular, the last model obtained before code generation contains only interactions modeling asynchronous message passing. The correctness of the implementation is obtained by construction. Using multiparty interaction reduces drastically the set of reachable states, compared to an equivalent model expressed with lower level primitives. Essential properties of the system are checked at this abstraction level. Each transformation of the design flow is simple enough to be fully formalized and proved by showing observational equivalence or trace equivalence between the input and output models. The obtained implementation is correct with respect to the original model, which avoids an expensive a posteriori verification. Performance can be optimized through adequate choice of the transformation parameters, or by augmenting the knowledge of components. The latter solution requires to analyze the original model to compute the knowledge, that is reused at subsequent steps of the decentralization. The various transformations and optimizations constituting the design flow have been implemented using the BIP framework. The implementation has been used to evaluate the different possibilities, as well the influence of parameters of the design flow, on several examples. The generated code uses either Unix sockets, MPI or pthreads primitives for communication between processes.

O cDNA da glicoproteína do vírus da raiva (GPV) foi clonado em vetores plasmidiais (indutíveis) contendo ou não o cDNA do sinal de secreção BiP e da resistência ao antibiótico higromicina B. Esses vetores foram transfectados em células S2 e foram obtidas populações e subpopulações. A população S2MTGPV-H apresentou níveis 5x maiores na expressão da GPV em análise por FACS (~ 50% das células) e por ELISA (~ 0,65 µg/107 células). A seleção de subpopulações permitiu um aumento de aproximadamente 10x na expressão da GPV, especialmente na população S2MTGPV*-H. O tratamento com NaBu resultou em uma redução de aproximadamente 20% no crescimento celular e um aumento de 50% na GPV expressa pela população S2MTGPV*-H (~ 8,3 µg/107 células). O meio de cultura SF900 II permitiu um maior crescimento das células S2MTGPV*-H e uma maior síntese de GPV comparado com outros meios de cultura. Nossos dados mostram que a expressão da GPV pôde ser otimizada através da construção de vetores de expressão/seleção, subpopulações, da exposição da cromatina e do meio de cultura utilizado. / The cDNA encoding the entire rabies virus glycoprotein (RVGP) gene was cloned in plasmids (inductive) with or without a cDNA coding for the secretion signal and coding for the selection hygromicin antibiotic. These vectors were transfected into S2 cells and we had obtain cells populations and subpopulations S2MTRVGP-H cell population were shown to express 5 times higher of RVGP as evaluated by FACS (~ 50 %) and ELISA (~ 0.65 mg/107 cells at day 7). Sub-population selection allowed a higher RVGP expression, especially for the S2MTRVGP*-H. NaBu treatment leading to lower cell growth and higher RVGP expression allowed an even higher RVGP synthesis by S2MTRVGP*-H (~ 8.3 mg/107 cells at day 7 after induction). SF900II medium leading to a higher S2MTRVGP*-H cell growth allowed a higher final RVGP synthesis in this cell culture. The data show that RVGP synthesis may be optimized by the expression/selection vectors design, cell sub-populations selection, chromatine exposure and culture medium employed.

Magistro darbe, siekiant išanalizuoti veiksnius, kurie lėmė Lietuvos ekonomikos augimą 2004 -2010 m. laikotarpiu buvo susisteminti įvairių Lietuvos ir užsienio autorių teoriniai ir praktiniai tyrimai ekonomikos augimo klausimu, išskiriant, jų nuomone, pagrindinius ekonomikos augimą sąlygojančius veiksnius. Apskaičiuota intesyvaus ir ekstensyvaus veiksnių įtaka Lietuvos BVP ir BVP vienam gyventojui pokyčiams, panaudojant indeksų ir modifikuotos Du Ponto piramidinės analizės metodą bei lyginant su ES 27 šalių vidurkiu. Atlikta Lietuvos ekonomikos augimą sąlygojančių veiksnių analizė, kuri parodė Lietuvos aukštojo mokslo specialistų neatitikimą ūkio poreikiams, menkas investicijas į mokslinius tyrimus ir eksperimentinę plėtrą bei inovacijas, nepatrauklų Lietuvos investicinį klimatą, vartojimo ir tarpinių prekių dominavimą eksporto ir importo struktūroje pagal BEC klasifikaciją, taip pat dėl neigiamų pokyčių darbo rinkoje patirtus valstybės nuostolius. Atlikta analizuojamų veiksnių įtakos BVP pokyčiams analizė, kurios gautų rezultatų pagrindu įvertintos BVP didinimo galimybės. / In der Meisterarbeit, um die Faktoren, die Wirtschaftswachstum vom Litauen im Jahre 2004 - 2010 voraussetzten, zu analysieren, wurden die theoretischen und praktischen Forschungen des Wirtschaftswachstums verschiedener litauischen und ausländischen Autoren verwiesen. Es wurde der Einfluss der intensiven und extensiven Faktoren auf Änderungen vom BIP und BIP pro Kopf des Litauens mit der Methode des Indexes und der modifizierten Methode der Analyse von der Pyramide im Vergleich mit dem Durchschnitt der EU 27 Länder berechnet. Es wurde die Analyse des Wirtschaftswachstums von Litauen voraussetzenten Faktoren erledigt. Die Analyse zeigte, dass im Litauen das Angebot derjenigen Spezialisten der Hochschulen die Nachfrage überbietete. Litauen investiert nicht viel in Entwicklungsforschungen und Innovationen, es gibt unattraktives Investitionsklima in Litauen, im Export und Import von BEC Klassifizierung dominierten Konsum und Vorleistungsgütern. Es wurde die Verluste von der negativen Veränderungen auf dem Arbeitsmarkt analisiert. Es wurde die Analyse vom Einfluss der Veränderungen vom BIP erledigt, die Möglichkeiten der Vergrösserung vom BIP aufdeckten.