Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-04-10T14:01:10Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2684709 bytes, checksum: 6aa0509934b41f48c4d6f6a12a738f58 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-10T14:01:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2684709 bytes, checksum: 6aa0509934b41f48c4d6f6a12a738f58 (MD5) Previous issue date: 2018-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos de três soluções eletrolíticas enterais sobre o bem-estar, equilíbrio hidroeletrolítico e ácido base em bovinos adultos. O delineamento experimental foi o crossover 6x3 (seis animais x três tratamentos). Os animais foram hidratados via nasorruminal em fluxo contínuo por 12h, a uma dose de 15 mL / kg / h. Todos os animais foram submetidos aos três tratamentos: solução contendo propionato de cálcio (SEPCa) - 4g de NaCl, 0,5g de KCl, 0,3g de MgCl 2 e 10g de propionato de cálcio diluídos em 1000mL de água (osmolaridade mensurada 299 mOsm / L); Solução com glicerol (SEGli) - 4g de NaCl, 0,5g de KCl, 0,3g de MgCl 2 e 10mL de glicerol diluídos em 1000 mL de água (osmolaridade mensurada 287 mOsm / L); Solução contendo propilenoglicol (SEPro) - 4g de NaCl, 0,5g de KCl, 0,3g de MgCl 2 e 15 mL de propilenoglicol diluídos em 1000 mL de água (osmolaridade mensurada 378 mOsm / L). Foi realizado exame físico (frequências cardíaca e respiratória, temperature retal, circunferência abdominal e movimentos ruminais) e obitdas amostras de sangue, urina e fezes a cada três horas de hidratação e uma amostra após 12h após a hidratação. As seguintes análises foram realizadas: sódio, potássio, cloreto, cálcio, magnésio, fósforo, uréia, creatinina, proteínas plasmáticas, glicose, lactato, osmolaridade sérica, densidade urinária, volume e pH urinário. Foram obtidas amostras de sangue em seringas contendo heparina lítio para determinação do pH, concentração de bicarbonato (HCO -3 ), excesso de base (BE), ânion gap e diferença de íons fortes (DIF). Não houveram sinais de estresse ou desconforto, todas as soluções promoveram diminuição do número de eritrócitos, da concentração de hemoglobina e do volume globular, sem causar alterações no leucograma. Houve diminuição das proteínas plasmáticas, da concentração de potássio e magnésio urinários e da densidade urinária. Foi observado aumento na glicemia e nas concentrações de sódio e cloreto urinários. Foram detectadas variações significativas no pH sanguíneo, HCO -3 e BE durante as 12h de hidratação. A solução SEPCa induziu alcalose metabólica discreta e reversível. As três soluções eletrolíticas admnistradas por sonda nasorruminal em fluxo contínuo, mostraram-se capazes de expandir a volemia com mínimos efeitos sobre o bem-estar, sem induzir o aparecimento de distúrbios hidroeletrolíticos. As soluções com propionato de cálcio e propilenoglicol apresentaram os melhores efeitos sobre a glicemia. As soluções SEGli e SEPro não causaram alterações no equilíbrio ácido base, podendo serem utilizadas com segurança na terapia de manuntenção fluidos em bovinos. / The objective of this study was to evaluate the efficacy of three enteral electrolyte solutions on the hydroelectrolytic balance of healthy cattle. The crossover design was 6x3 (six animals x three treatments). The animals were hydrated via nasoruminal in continuous flow for 12h, in a dose rate of 15mL / kg / h. All the animals was submitted to the three treatments: Solution with calcium propionate – 4g of NaCl, 0,5g of KCl, 0,3g of MgCl 2 and 10g of calcium propionate diluted in 1000mL of water (Measured osmolarity: 299 mOsm/L); Solution with Glycerol - 4g of NaCl, 0,5g of KCl, 0,3g of MgCl 2 , 1g of calcium acetate and 10 mL of glycerol in 1000mL of water (Measured osmolarity: 287 mOsm/L); Solution with propylene glycol - 4g of NaCl, 0,5g of KCl, 0,3g of MgCl 2 , 1g of calcium acetate and 15 mL of propylene glycol in 1000mL of water (Measured osmolarity: 378 mOsm/L). Was performed physical evaluation (heart and respiratory rate, rectal temperature, abdominal circumference, ruminal movements, and stool moisture) and blood and urine samples were performed every three hours of fluid therapy and another blood sample 12 hours after the end of fluid therapy. The following analyzes were performed: sodium, potassium, chloride, calcium, magnesium, phosphorus, urea, creatinine, plasma proteins, glucose, lactate, serum osmolarity, urinary density, and urinary volume. There was a decrease in plasma proteins, potassium and magnesium urinary concentration and urinary density. Blood samples were obtained in lithium heparin-containing syringes pH, carbon dioxide partial pressure (pC0 2 ), bicarbonate concentration (HC0 -3 ), base excess (BE), anion gap, difference ion strog (DIF), and urinary pH were determined. No signs of stress or discomfort was observed, all solutions caused a significant decrease in erythrocytes number, hemoglobin concentration and of hematocrit, without cause alterations in the leukogram. There was a decrease in plasma proteins, potassium and magnesium urinary concentration and urinary density. Increased glycemia, urinary sodium and chloride concentrations and urinary volume were registered. Significant changes in blood pH, HC0 -3 and BE during the 12 hours of fluid therapy were detected. The electrolytic solution containing calcium propionate (SEPCa) induced the arising of reversible slight metabolic alkalosis. The three electrolytes solutions administrated by nasogastric tube in continuous flow was showed secure, capable of expand the volemia, with minimal effects in the welfare of the heifers without causing hydroelectrolytic imbalances. Solutions with calcium propionate and propylene glycol had a better effect on glycaemia, The solutions containing glycerol (SEGli) and propylene glycol (SEpro) did not cause alterations in the acid balance balance and could be safely used in maintenance therapy of fluids in cattle.

COSTA, José Jackson do Nascimento. Expressão de marcadores de células germinativas e de oócitos em fibroblastos bovinos tratados com 5-aza-citidina e em células-tronco adultas cultivadas in vitro na presença de BMP-2, BMP-4 ou fluido folicular. 2016. 207 f. Tese (Doutorado em Biotecnologia)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2016-08-31T20:28:44Z No. of bitstreams: 1 2016_tese_jjncosta.pdf: 2424368 bytes, checksum: 8fb10f9a05f8f2bc642ce3964eb960d3 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2016-08-31T20:29:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_tese_jjncosta.pdf: 2424368 bytes, checksum: 8fb10f9a05f8f2bc642ce3964eb960d3 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-31T20:29:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_tese_jjncosta.pdf: 2424368 bytes, checksum: 8fb10f9a05f8f2bc642ce3964eb960d3 (MD5) Previous issue date: 2016 / This study aimed to investigate the effect of 5-Aza-cytidine during induction of pluripotency, and evaluate the effects of culture in medium containing BMP-2, BMP-4 or follicular fluid in the differentiation of fibroblasts in primordias germ cells (CGP) and oocytes (stage 1). Furthermore, isolation of stem cells from the bovine ovarian epithelium and evaluate the effects of BMP-2, BMP-4 or follicular fluid on the differentiation of these stem cells into structures similar to oocytes (stage 2). In phase 1, fibroblasts were treated with 0.5, 1.0 or 2.0 μM of 5-Aza for 18, 36 or 72 h. Morphology cell viability and gene expression (OCT-4, NANOG, SOX2 and REX), were assessed, for the selection of the concentration/time more efficient. The fibroblasts were then cultured in medium supplemented with 10 ng/mL BMP-2 or 10 ng/mL BMP-4 or 5% bovine follicular fluid by 7 or 14 days. Subsequently, evaluation of the morphology and cell viability was taken, and gene expression (VASA, DAZL, c-Kit, SCP3, ZPA and GDF-9). For phase 2, the stem cells of ovarian surface were isolated, expanded, grown in differentiation medium containing 50 ng/mL BMP-2 or 50 ng/mL BMP-4, or BMP-2+BMP-4 or 5% bovine follicular fluid for 14 days. Morphological characteristics, cell viability and expression of alkaline phosphatase and gene expression (VASA, DAZL, C-KIT, SCP3, ZPA and GDF-9), were evaluated. The gene expression results were analyzed using ANOVA followed by Kruskal-Wallis test (P <0.05). In stage 1, the culture with 2.0 μM of 5-Aza for 72 h caused changes in morphology and cell proliferation rate, and significantly increased the expression of pluripotency factors. The culture in medium containing BMP-2, BMP-4 or follicular fluid for 7 or 14 days, altered cellular morphology, and expression of specific genes for stem cells and oocytes. In stage 2, the ovarian stem cells expressed pluripotent genes, and after culture, this cells showed morphologic characteristics similar to PGC and oocytes, including the expression of alkaline phosphatase, and the expression of specific genes for PCG and oocytes. In conclusion, the present study describes the possibility of conversion of the skin fibroblasts and stem cells from ovarian surface of the bovine, in oocyte-like cells, similar oocyte cells, through the cell reprogramming process associated with the supplementation of BMP-2, BMP- 4 and follicular fluid. / Este estudo teve como objetivo investigar o efeito da 5-Aza-citidina durante a indução da pluripotência, e avaliar os efeitos do cultivo em meio contendo BMP-2, BMP-4 ou fluido folicular na diferenciação de fibroblastos em células germinativas primordias (CGP) e oócitos (fase 1). Além disso, isolar células-tronco do epitélio ovariano de bovinos e avaliar os efeitos da BMP-2, BMP-4 ou fluido folicular sobre a diferenciação destas células-tronco em estruturas semelhantes a oócitos (fase 2). Na fase 1, os fibroblastos foram tratados com 0.5, 1,0 ou 2.0 μM de 5-Aza por 18, 36 ou 72 h. Foi avaliada a morfologia, viabilidade celular e a expressão gênica (OCT-4, NANOG, REX e SOX2), para a seleção da concentração/tempo mais eficientes. Os fibroblastos foram então cultivados em meio suplementado com 10 ng/mL de BMP-2, ou 10 ng/mL de BMP-4 ou 5% de fluido folicular bovino, por 7 ou 14 dias. Posteriormente, foi feita a avaliação da morfologia e viabilidade celular, e expressão gênica (VASA, DAZL, C-KIT, SCP3, ZPA e GDF-9). Para a fase 2, as células-tronco da superfície ovariana foram isoladas, expandidas, cultivadas em meio de diferenciação contendo as 50 ng/mL de BMP-2, ou 50 ng/mL de BMP-4, ou BMP-2+BMP-4 ou 5% de fluido folicular bovino por 14 dias. Foram avaliadas as características morfológicas, viabilidade celular, e expressão da fosfatase alcalina e expressão gênica (VASA, DAZL, C-KIT, SCP3, ZPA e GDF-9). Os resultados de expressão gênica foram analisados usando ANOVA seguido pelo Teste de Kruskal Wallis (P<0,05). Na fase 1, o cultivo com 2.0 μM de 5-Aza por 72 h provocou mudanças na morfologia e na taxa de proliferação celular, e aumentou significativamente a expressão de fatores de pluripotência. Já o cultivo em meio contendo BMP-2, BMP-4 ou fluido folicular, durante 7 ou 14 dias, alterou a morfologia celular, e a expressão de genes específicos para células germinativas e oócitos. Na fase 2, as células-tronco do ovário expressaram genes de pluripotência e após o cultivo, as células apresentaram características morfológicas que se assemelhavam a CGP e a células semelhantes a oócitos, incluindo a expressão da fosfatase alcalina e a expressão de genes específicos de células germinativas e oócitos. Em conclusão, o presente estudo descreve a possibilidade de converter os fibroblastos da pele de bovinos e células-tronco da superfície ovariana, em células semelhantes a oócitos, através do processo de reprogramação celular, associado à suplementação do meio com BMP-2, BMP-4 e fluido folicular.

O vírus da diarreia viral bovina (BVDV) é um Pestivirus, pertencente à família Flaviviridae, o qual é dividido em dois genótipos ou espécies (BVDV-1 e BVDV-2), e em pelo menos 20 subgenótipos de BVDV-1 (1a-1t) e três de BVDV-2 (2a-2c). O BVDV também pode ser classificado em biótipos [citopático(cp) e não-citopático (ncp)]. As perdas reprodutivas podem ser a consequência econômica mais importante da infecção. A infecção persistente (PI) pode ocorrer quando há uma infecção entre os 42 e 125 dias de gestação, e se o feto sobreviver, o bezerro será imunotolerante ao vírus e como resultado pode desenvolver doença das mucosas (DM). O objetivo desse estudo é descrever um surto de infecção por BVDV-1d em bezerros de corte que apresentaram lesões de DM atípica, abordando aspectos clínicos, epidemiológicos, virológicos e patológicos. O surto ocorreu em uma propriedade rural de bovinos de corte Angus localizada em Glorinha, Rio Grande do Sul, Brasil. Em um intervalo de 15 dias, 11 de 164 bezerros apresentaram sinais clínicos de anorexia, sialorreia acentuada, perda de peso e andar rígido com claudicação, progredindo para decúbito e morte em um curso clínico de sete dias. Todos esses 11 bezerros apresentavam em mucosa oral e nasal, região interdigital de membros torácicos e pélvicos extensas áreas de ulceração. Três bezerros foram necropsiados: úlceras orais e nasais foram observadas, frequentemente envolvendo gengiva, palato duro, palato mole e plano nasal; ulcerações lineares multifocais na língua, esôfago e rúmen; e também ulcerações multifocais arredondadas no abomaso. Além disso, o bezerro #2 exibiu na pele de regiões ventrais do corpo espessamento difuso com formação crostosa acentuada, ocasionalmente áreas de ulceração. Microscopicamente, as lesões ulcerativas em mucosas e pele consistiam em necrose superficial, com numerosas células apoptóticas, células epiteliais vacuolizadas e hiperqueratose paraqueratótica difusa acentuada. O exame imuno-histoquímico (IHQ) da pele dos três bezerros evidenciou acentuada imunomarcação no citoplasma de células epiteliais, enquanto na mucosa oral evidenciou moderada a acentuada imunomarcação. Todos os 11 bezerros mortos foram positivos no RT-PCR para detecção do Pestivirus, assim como outros 11 bezerros vivos (de 387 animais restantes no rebanho). Após quatro semanas, os exames de RT-PCR e IHQ dos 11 bezerros vivos foram repetidos com resultados positivos, comprovando o status de animais PI. O sequenciamento de partes do genoma determinou que todos animais haviam sido infectados por um BVDV- 1 do subgenótipo “d”. BVDV cp foi isolado das amostras de 8 bezerros mortos; enquanto apenas BVDV ncp foi isolado de amostras dos 11 bezerros vivos. Os achados patológicos, moleculares e virológicos permitiram concluir que esse foi um surto de DM atípico em bezerros causado por BVDV-1d com lesões restritas ao trato alimentar superior e pele. Como as características epidemiológicas e clínicas de doenças vesiculares podem ser muito similares ao observado, recomenda-se que os testes diagnósticos específicos para BVDV (histopatologia, IHQ e RT-PCR) sejam empregados rotineiramente na necropsia em surtos com lesões atípicas similares em bovinos. / Bovine viral diarrhea virus (BVDV) is a Pestivirus, belonging to the Flaviviridae family, also divided in two genotypes or species (BVDV-1 and BVDV-2), and in at least 20 subgenotypes of BVDV-1 (1a-1t) and three of BVDV-2 (2a-2c). BVDV can also be classified into biotypes (cytopathic and noncytopathic). Reproductive losses may be the most economically important consequence of the infection. Persistent infection (PI) may occur when there is an infection between 42 and 125 days of gestation, and if the fetus survives, the calf will be immunotolerant to the virus and a possible outcome is mucosal disease (DM). The aim of this study is to describe an outbreak of BVDV-1d infection in calves of a beef herd cattle that presented atypical DM lesions, with a clinical, epidemiological, virological and pathological approach. The outbreak occurred in a beef Angus cattle farm located in Glorinha, Rio Grande do Sul state, Brazil. Within 15 days, 11 of 164 calves presented clinical signs of anorexia, severe sialorrhoea, weight loss and stiff gait with lameness, progressing to recumbency, and death in a clinical course of seven days. All these 11 calves presented in oral and nasal mucosa, interdigital region of thoracic and pelvic limbs extensive areas of ulceration. Three calves were necropsied: oral and nasal ulcers were observed, often involving gingiva, hard palate, soft palate and nasal planum; multifocal linear ulcerations in tongue, esophagus and rumen; and also rounded multifocal ulcerations in the abomasum. In addition, calf #2 showed diffuse thickening of the skin with severe crust formation, occasionally ulceration, in ventral body regions. Microscopically, ulcerative lesions observed in mucosas and cutaneous lesions consisted of superficial necrosis, with numerous apoptotic cells, vacuolation of epithelial cells and severe diffuse parakeratotic hyperkeratosis. Immunohistochemistry (IHC) of skin of the three calves showed severe immunostaining in the cytoplasm of epithelial cells, while oral mucosa showed moderate to severe immunostaining. All 11 dead calves were positive in RT-PCR for detection of Pestivirus along with other 11 live calves (from 387 remaining animals from herd). After four week, RT-PCR and IHC of these 11 live animals were repeated with positive results, which prove the PI status of these animals. All animals were infected by BVDV-1 of subgenotype ”d” according to parts of the genome of the virus that were sequenced.. Cytopathic BVDV was isolated from samples of 8 dead calves; only non-cytophatic BVDV were isolated from samples of 11 live animals. Pathological, molecular and virological findings allowed us to conclude that this was an outbreak of atypical DM in calves caused by BVDV-1d with lesions restricted to the upper alimentary system and skin. Since epidemiological and clinical features of vesicular diseases may be very similar to what was observed, it is recommended that BVDV diagnostic tests (histopathology, IHC and RT-PCR) should be routinely included in the necropsy workup in outbreaks with similar atypical lesions in cattle.

A tecnologia de inseminação artificial (IA) é considerada uma determinante da estruturação do melhoramento genético e da competitividade da pecuária bovina. Essa tecnologia apresenta demandas específicas para a sua adoção, procedimentos diferenciados tanto no processo produtivo como na área gerencial da propriedade rural. Ana lisar o impacto que essa tecnologia causa na gestão das propriedades rurais é objeto de estudo desde trabalho, que pesquisou aquelas especializadas em bovino reprodutor, no sentido de averiguar quais as reais mudanças estruturais, organizacionais e gerenciais que nelas ocorreram após a adoção da tecnologia. No intuito de verificar quais as subtecnologias e procedimentos necessários para que a tecnologia de IA pudesse ser adotada realizou-se levantamento de dados em fontes secundárias e entrevistas com profissionais da área, que culminou na elaboração de um quadro contendo as exigências para a adoção dessa tecnologia, com os objetivos e/ou as atividades envolvidas, assim como a infra-estrutura necessária. Com base nos dados coletados, foram relacionadas, ainda, as exigências com as implicações ou procedimentos administrativos necessários para a implantação da tecnologia. Elaborou-se o roteiro de entrevistas que foi utilizado no estudo de multicasos envolvendo três propriedades. A seleção das propriedades foi com base no volume de sêmen adquirido. Destacam-se as constatações, a partir da análise dos dados levantados: a) a infra-estrutura existente nas propriedades sofre alterações ou adaptações com a adoção da IA, estando as mesmas relacionadas com o nível tecnológico já existente nas propriedades; b) a adoção da IA foi determinada pela disponibilidade de recursos financeiros e capacidade técnica para implantá-la, em duas das propriedades analisadas o processo de adoção da tecnologia de IA está relacionado com a formação dos filhos em medicina veterinária; c) o planejamento passa a ser instrumento na condução do negócio, após a adoção da IA; d) o controle de qualidade está relacionado com o nível de desenvolvimento tecnológico existente na propriedade, e) a informação gerada no processo produtivo começa a receber tratamento após o uso da tecnologia de IA, seja pela necessidade de maximizar o seu retorno, seja pela exigência dos órgãos controladores de gado de alta linhagem; f) as propriedades, onde a tecnologia não está consolidada, são mais receptivas à pesquisa e desenvolvimento; g) os proprietários na comercialização passam a adotar a venda por unidade utilizando também os leilões e materiais promocionais para divulgar os produtos; h) o volume de sêmen utilizado não guarda relação direta com o tamanho da propriedade; i) as propriedades cuja utilização da tecnologia ainda não está consolidada, reinvestem a renda gerada na própria propriedade; e j) a adoção da tecnologia possibilitou maior competitividade aos proprietários. Como resultado, coloca-se à disposição dos produtores rurais um referencial para a tomada de decisão sobre a adoção e/ou implementação da tecnologia de IA. Identificam-se também novas áreas de pesquisa, envolvendo a questão da tecnologia e da gestão na atividade agropecuária, pois às vezes a falta da competitividade do setor não está na carência de tecnologia, mais sim na forma como a mesma é gerenciada.

Made available in DSpace on 2016-05-19T13:20:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 magyda_dahroug_ipec_dout_2014.pdf: 2498272 bytes, checksum: aefea87984dc2feeb3a24559c8628d4b (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A toxoplasmose, causada pelo Toxoplasma gondii é uma protozoose que acomete o homem e uma grande variedade de animais de sangue quente e aves. No Brasil, a prevalência pode variar de 20% a 90% dependendo da área estudada, clima, condição socioeconômica e cultural. A infecção se dá através da ingestão de oocistos, que podem ser encontrados no solo, água e alimentos ou através da manipulação e ingestão de carne crua ou mal cozida, além da infecção congênita, apresentando importância em saúde pública. Este trabalho objetivou estudar a ocorrência da infecção por Toxoplasma gondii em animais silvestres, bovinos, suínos, ovinos e comunidade rural da região de Nhecolândia, no Pantanal do Mato Grosso do Sul, utilizando métodos sorológicos (Hemaglutinação Indireta - HAI, Reação de Imunofluorescência Indireta - RIFI, Técnica de aglutinação modificada - MAT) e moleculares (Reação em cadeia pela polimerase \2013 PCR, PCR-RFLP). Foram feitas coletas de amostras de sangue de 73 indivíduos da comunidade rural, de 25 cães, 442 bovinos e 148 porco-monteiros. Observou-se que 47,95% (35/73) das pessoas eram sororreagentes. Destas, apenas um indivíduo sororreagente (2,9%) apresentou lesão ocular presumível da infecção pelo parasito. Nos animais, observou-se a ocorrência de anticorpos anti- T. gondii em 48% dos cães, 30,55% dos bovinos e 1,3% nos porco-monteiros. Relatos de várias partes do mundo têm demonstrado a importância do ciclo silvestre na epidemiologia da infecção por Toxoplasma gondii. No entanto, apesar do papel conhecido de alguns felinos selvagens como hospedeiros definitivos para manutenção e transmissão do parasita para outros predadores carnívoros, pouco se sabe sobre a incidência de Toxoplasma gondii nestes animais Os carnívoros foram capturados em armadilhas contendo iscas e após a contenção química as amostras biológicas (sangue de todos os animais e fezes dos felídeos) foram coletadas e armazenadas para análise posterior. No presente estudo, três espécies de carnívoros foram avaliadas: quati (Nasua nasua), lobinho ou cachorro do mato (Cerdocyon thous) e jaguatirica (Leopardus pardalis). Quarenta e dois roedores (Tricomys) também avaliados tiveram análises de PCR realizada em 42 tecidos (cérebro, pulmão e músculo). Através dos exames sorológicos (Hemaglutinação Indireta, Reação de Imunofluorescência Indireta, Técnica de aglutinação modificada) observou-se a ocorrência da infecção por Toxoplasma gondii em 29,16% (7/24) dos quatis, 47,82% (11/23) em lobinhos e 100% (2/2) nas jaguatiricas. No PCR observou-se positividade em 41,66% (10/24) dos quatis, 47,82 % (11/23) dos lobinhos e em 100% (2/2) das jaguatiricas. Em roedores, observou-se 23,80 % (10/42) de positivos pela PCR. Realizamos a caracterização molecular de amostras sanguíneas dos animais silvestres positivos pela PCR, onde utilizamos 12 marcadores genotípicos (SAG1, SAG2 (5\2019-SAG2 e 3\2019-SAG2), SAG3, GRA6, BTUB, c22-8, c29-2, L358, PK1, novo SAG2, Apico, CS3), onde observou-se a presença de um novo genótipo do parasito, circulando na região de forma homogênea entre as espécies / Toxoplasmosis, caused by Toxoplasma gondii is a protozoan infection that affects humans and a wide variety of war m - blooded animals and birds. In Brazil, the prevalence varies from 20% to 90% depending on the study area, climate, socioeconomic and cultural conditions. Infection occurs through ingestion of oocysts, which can be found in soil, food and water or through manipulation and ingestion of raw or undercooked meat, with public health significance. Collection of blood samples from 73 individuals from the rural community of 25 dogs, 442 cattle and 148 feral pig Nhecolândia the region were made. It was found that 47 .95% (35/73) were seropositive persons. Of these, only one sororreagente individual (2.9%) had presumed ocular injury from infection by the parasite. In animals, we observed the occurrence of 48% of dogs and 30.55% in cattle and 1.3% in feral pig. Reports from several parts of the world have demonstrated the importance of the sylvatic cycle in the epidemiology of Toxoplasma gondii infections. However, despite the known role of some wild felids as definitive hosts for maintenance and transmission of the para site to other carnivore predators, little is known about the incidence of Toxoplasma gondii in these animals. Therefore , one of the objective of this study was to detect exposure and occurrence of the T. gondii infection in wild carnivores and rodents of t he Pantanal techniques. The carnivores were captured in traps containing lures and after chemical restraint samples were harvested and preserved until further analyses. In the present study, three species of carnivores were evaluated : Ring - tailed coati ( Nasua nasua ), Crab - eating fox ( Cerdocyon thous ) and Ocelots ( Leopardus pardalis ). Forty two rodents also evaluated had PCR analyses performed in 42 tissues (brain, lung and muscle). Serological analyses demonstrated exposure to Toxoplasma gondii in 29.16% of the ring - tailed coati (7/24), 47.82% in crab - eating fox (11/23) and 100% in ocelots (2/2). The PCR analyses showed that 41.66% (10/24) of the ring - tailed coati were positive, comparing to 47.82% (11/23) in crab - eating fox and 100% (2/2) in ocelots. In small rodents, the positive results were 23.80% (10/42) by PCR. (sub - region subregion Nhecolândia), Brazil, using serologic and molecular . We performed the molecular characterization of blood samples from wild animals positive by PCR, where we use 12 genot ypic markers (SAG1, SAG2 (5' - and 3' - SAG2 SAG2), SAG3, GRA6, BtuB, c22 - 8, c29 - 2, L358 , PK1, new SAG2 and apical). Thus, we observed the presence of a new genotype of the parasite, never described before, circulating in the region evenly between species.

As plantas tóxicas continuam entre as principais causas de morte em bovinos no Brasil. Elas apresentam efeito relativamente específico sobre os tecidos e/ou sistemas. Várias plantas tóxicas do Brasil causam dano hepático, de forma aguda ou crônica, muitas vezes acompanhado de encefalopatia hepática, cuja patogenia ainda não havia sido elucidada nos casos de hepatopatia tóxica aguda em bovinos. O presente estudo teve como objetivo caracterizar microscopicamente as alterações encefálicas relacionadas a hepatopatias tóxicas em bovinos e resultou em três artigos. O primeiro deles descreve alterações encefálicas histológicas em bovinos com intoxicação espontânea por Cestrum intermedium e suas características na avaliação imuno-histoquímica (IHQ), com emprego dos anticorpos anti-proteína S100 e anti-proteína glial fibrilar ácida. No segundo artigo são caracterizadas as alterações encefálicas de 22 bovinos intoxicados natural ou experimentalmente por cinco espécies de planta de ação hepatotóxica aguda ou pela ingestão de P. flavipes, com avaliação de telencéfalo, tronco encefálico e cerebelo pelas técnicas de hematoxilina e eosina (HE), histoquímicas de ácido periódico de Shiff (PAS) e lectinas e pelas provas de IHQ usando os anticorpos anti-S100, anti-GFAP e anti-vimentina. Neste artigo são evidenciadas alterações relevantes em astrócitos, tanto da substância branca quanto da cinzenta e se demonstra serem os mesmos o principal alvo de lesão na hepatopatia tóxica aguda em bovinos, evidenciado pela IHQ. As técnicas histoquímicas citadas não apresentaram resultados promissores, por isso não são apresentadas no Artigo 2. No terceiro artigo é realizada avaliação comparativa de encéfalos de bovinos intoxicados por Senecio sp. com uso das mesmas técnicas e que demonstrou não haver alterações significativas em astrócitos e estruturas vasculares encefálicas, reiterando a patogenia anteriormente proposta, de que a degeneração esponjosa, alteração histológica encefálica amplamente descrita nessa intoxicação, é caracterizada por edema intramielínico. / Toxic plants remain among the major causes of death in cattle in Brazil. They have relatively specific effects on animal tissues or systems. Several Brazilian poisonous plants cause acute or chronic liver damage, often accompanied by hepatic encephalopathy, the pathogenesis of which was not yet elucidated in cases of acute toxic liver disease in cattle. This study resulted in three articles. The first describes histological findings in brains of cattle poisoned by Cestrum intermedium and their immunohistochemical characteristics using the anti-protein S100 and anti-glial fibrillary acidic protein markers. The second article characterizes changes in the brain from 22 cattle natural or experimentally poisoned by five plant species with acute hepatotoxic effects or by the ingestion of P. flavipes larvae. Hematoxylin and eosin stained slides of cerebrum, brainstem and cerebellum were evaluated, as well histochemical preparations stained with periodic acid Schiff or lectins and immunohistochemical evaluation employing anti-S100, anti-GFAP and anti-vimentin markers. These histochemical techniques did not show promising results, so these are not shown in the second article. Relevant changes were observed in astrocytes from white and gray matter, presenting these cells as the main target of injury in acute toxic liver disease in cattle. The third paper presents a comparative evaluation of the brains of ten cattle poisoned by Senecio sp. using the same techniques. There were no significant changes in astrocytes and brain vascular structures, backing up the pathogenesis previously proposed; that the histological brain changes identified as spongy degeneration, largely described in this poisoning, are characterized by intramyelinic edema.

O alfaherpesvírus bubalino 1 (BuHV1) e os alfaherpesvírus bovinos 1 (BoHV1), 5 (BoHV5) e são membros da ordem Herpesvirales, família Herpesviridae, subfamília Alphaherpesvirinae, gênero Varicellovirus. O BoHV1 e o BoHV5 são subdivididos em subtipos (BoHV1.1, 1.2a, 1.2b; BoHV5a, b, c). No Brasil circulam BoHV1 e BoHV5 de todos os subtipos até o presente reconhecidos. Em vista dessa variedade de alfaherpesvírus potencialmente infecciosos para bovinos e bubalinos, o conhecimento sobre estes agentes é essencial para a implementação de medidas de controle ou erradicação. Com o objetivo de permitir algumas comparações entre estes agentes e as respostas por eles induzidas em seus hospedeiros, primeiramente foi realizado o sequenciamento do genoma completo de uma amostra de BuHV1 (b6), isolada a partir de prepúcio de búfalos (Bubalus bubalis) em 1972, na Austrália. O objetivo foi disponibilizar a primeira sequência completa de um alfaherpesvírus bubalino e avaliar o grau de similaridade entre o genoma desse vírus e os alfaherpesvírus de bovinos. O genoma sequenciado compreende 137.452 pares de bases (pb), com um nível de similaridade nucleotídica de 92,2% com BoHV5 (SV507/99) e 76,7% com BoHV1 (NVSL). Estes resultados permitirão estudos futuros buscando reconstruir a história evolutiva destes vírus, a importância de infecções interespécies na geração de variantes destes agentes e possíveis associações entre tais infecções e patogenicidade. Na segunda etapa dos estudos, foram realizados diversos testes sorológicos buscando definir uma metodologia de diagnóstico adequada para a identificação de anticorpos contra BuHV1 e todos os diferentes subtipos de BoHV1 e BoHV5. Inicialmente, 600 amostras de soros de bovinos de campo foram testadas através do teste de soroneutralização (SN), realizada frente aos sete alfaherpesvírus em estudo. Os resultados da SN foram influenciados pela escolha do vírus desafio utilizado no ensaio. Para obter a sensibilidade máxima do teste (259/600), foi necessário combinar resultados positivos frente a pelo menos cinco diferentes amostras virais. Em seguida, foram preparados ensaios do tipo “ELISA” para detecção de anticorpos utilizando antígenos preparados com cada um dos diferentes tipos/subtipos desses vírus (BuHV1; BoHV1.1, 1.2a, 1.2b; BoHV5a, b, c), individualmente (chamado “single ELISA” ou “sAgELISA”). Os resultados obtidos foram comparados com os resultados da soroneutralização (SN). A sensibilidade do sAgELISA variou significativamente conforme a amostra viral utilizada no preparo dos antígenos. Considerando os resultados frente a apenas um antígeno, a maior sensibilidade foi de 96,1% (249/259), obtida com apenas uma amostra de BoHV5c. Foram necessários pelo menos seis antígenos (BuHV1; BoHV1.2a, 1.2b; BoHV5a, b, c) para atingir a sensibilidade máxima do teste (263/259). Assim, foi desenvolvido um ELISA combinando vários antígenos em um mesmo teste (chamado “multiple ELISA” ou “mAgELISA”). O mAgELISA detectou 263 amostras positivas, resultando em uma concordância ótima entre sAgELISA e mAgELISA (κ=0,99). Frente a SN, o mAgELISA apresentou uma sensibilidade de 96,5% e especificidade de 96,1% (κ=0,93; VPP=95,0%; VPN=97,3%). Essas diferenças não foram estatisticamente significativas. Os resultados obtidos com a SN e mAgELISA foram comparados também a um ELISA comercial para a detecção de anticorpos contra BoHV1. O ELISA comercial utilizado nas comparações não apresentou resultados significativamente diferentes dos demais testes realizados, no entanto, revelou o maior número de resultados discrepantes em relação ao SN, considerado padrão-ouro. Estes resultados revelam que o mAgELISA aqui relatado é adequado para a detecção de anticorpos para BuHV1, BoHV1 e BoHV5, com sensibilidade e especificidade significativamente comparáveis às da SN. / Bubaline alphaherpesvirus 1 (BuHV1), Bovine alphaherpesviruses 1 (BoHV1) and 5 (BoHV5) are members of the order Herpesvirales family Herpesviridae, subfamily Alphaherpesvirinae, genus Varicellovirus. The BoHV1 and BoHV5 are divided into subtypes (BoHV1.1, 1.2a, 1.2b; BoHV5a, b, c). In Brazil, circulates BoHV 1 and BoHV 5 from all subtypes known to the present. In view of this variety of potentially infectious alphaherpesviruses for bovines and buffaloes, knowledge about these agents is essential for the implementation of control or eradication measures. In order to gain a deeper understanding about these agents and the responses induced by them in their hosts, initially, the complete genome sequence of BuHV1-b6, one of the first BuHV1 viruses isolated in Australia in 1972, is reported. The objective was to provide the first complete sequence of a buffalo alphaherpesvirus and to evaluate the degree of similarity between BuHV1 and bovine alphaherpesviruses genomes. The BuHV1-b6 genome is a linear double-stranded DNA molecule, 137,452 bp long, with overall sequence of the 92.2% similarity at the nucleotide level to the reference BoHV5 (SV507/99) strain and 76.7% with BoHV1 (NVSL) strain. These results are expected to be valuable for further studies involving evolutionary chain of these viruses, the interspecies infections importance in generation of variants and possible associations between such infections and pathogenicity. In the second stage of the study, several serological tests were performed in order to define a appropriate diagnostic methodology for the identification of antibodies against BuHV1 and all different subtypes of BoHV1 and BoHV5. Initially, 600 bovine field serum samples were screened in serum neutralization tests (SN) performed against all seven virus types/subtypes. The SN results were influenced by the choice of the challenge virus. The maximum number of positive sera (259/600) was detected by adding the positive results obtained with at least five different viruses. Seven enzyme linked immunoassays were prepared with each of the seven antigens (BuHV1; BoHV1.1, 1.2a, 1.2b; BoHV5a, b, c), individually (single antigen ELISAs; sAgELISAs). The results obtained were compared to the SN. The sensitivity of the sAgELISAs was also influenced by the choice of antigen. Considering the results against only one of them, the best sensitivity was 96.1% (249/259), obtained with BoHV5c. Maximum sAgELISA sensitivity (263/259) was achieved when positive results of at least six viruses (BuHV1; BoHV1.2a, 1.2b; BoHV5a, b, c) were combined. A multiple antigen ELISA (mAgELISA) was then prepared by combining of different viral antigens in the same test. The mAgELISA detected 263 positive samples, resulting an optimum concordance between sAgELISA and mAgELISA (κ=0.99). When compared to SN, the mAgELISA revealed 96.5% sensitivity and 96.1% specificity (κ=0.93; PPV=95.0%; NPV=97.3%). These differences were not statistically significant. The results of both SN and mAgELISA were compared to a commercially available (IBRgB) ELISA. The results of the commercial ELISA did not vary significantly in relation to others tests performed, however, revealed the highest number of discrepant results in relation to SN, taken as the gold standard. These results reveal that the mAgELISA reported here is suitable for the detection of antibodies to BuHV1, BoHV1 and BoHV5 with sensitivity and specificity significantly comparable to those of SN.

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Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The experiment was realized with the objective of study the performance and feeding behavior of steers and cull cows, feedlot finished, submitted to distincts feeding frequencies, two (7:00 and 19:00 hours), three (7:00, 13:00 and 19:00 hours) or four (7:00, 11:00, 15:00 and 19:00 hours) times a day. Charolais-Nellore crossbred steers, 21 months old, and cull cows, 66 months old, from the same population, were used. The diet was composed by corn silage (40%) and concentrate (60%). The performance datas were obtained by the weight and body condition of the animal at pre-established periods, by the measures of the quantity of the food that was supplied and the respective leftovers, chemical analysis of the diet ingredients and leftovers. The behavior parameters were obtained after three evaluations for 48 hours each one, with the register of animals activity at each 5 minutes, beyond the meansure of chews per bolus of rumination and duration of it. The interaction between feeding frequencies and feedlot period was significant for voluntary intake of dry matter (DM) and of digestible energy (DE). The increase of the feeding frequencies did not affect the average daily weight gain (1.54, 1.53 and 1.50 kg, repectively) and the efficiency of converting the dry matter (8.90, 8.59 and 8.31 kg of DM/kg of weight gain) and DE (26.42, 25.34 and 24.58 Mcal/kg of weight gain) into weight gain. Any significant interaction was observed for feeding frequency and animal category. The cows showed higher average daily intake of DM expressed by animal (13.92 vs. 10.76 kg) and per metabolic weight in relation to steers, causing any significant modification on average daily weight gain (1.60 and 1.45 kg, repectively). Cows were 17.72 and 17.30% less efficient then steers on converting DM and DE into weight gain, respectively. The interaction between animals category and feedlot period was significant for body condition gain. For cows, the body condition gain was more proimminent during the first two feedlot periods, while for the steers it was more proimminent during the last period. The interaction between feeding frequency x animal category did not affect the behavior parameters studied. Animals fed three times daily ruminated more time in the stand-up position than those fed four times (1.16 vs .68 hours). However, when rumination in the two positions (stand-up plus lay down) was considered, no difference was observed (6.76 vs 6.9 h). Animals fed three times also spent more time consuming water (.33 h) in relation to two (.25 h) or four (.19 h) times fed animals. Feeding frequency did not affect the leisure and ingestion activities. Animals remained in the stand-up position during 38.92% of the time and in the lay down position 61.02%. The feeding frequency did not affect the rumination activities, while the animal category affected the number of chews per bolus, per kg of dry matter consumed and the intake rate. Steers showed 55.7 chews/bolus and 2,163.32 chews per kg of dry matter consumed while the cows showed 51.69 and 1,591.13 chews, respectively. Dry matter intake rate was 3.01 kg/h for steers and 3.58 kg for cows. / O experimento foi realizado com o objetivo de estudar o desempenho e o comportamento alimentar de novilhos e vacas de descarte terminados em confinamento, submetidos a distintas freqüências de alimentação, duas (7:00 e 19:00 horas), três (7:00, 13:00 e 19:00 horas) ou quatro (7:00, 11:00, 15:00 e 19:00 horas) vezes ao dia. Foram utilizados novilhos com idade média de 21 meses e vacas com média de 66 meses, todos mestiços Charolês-Nelore do mesmo rebanho. A dieta fornecida aos animais foi composta de silagem de milho (40%) e concentrado (60%). A obtenção dos parâmetros de desempenho ocorreu pela pesagem e atribuição de escore corporal aos animais em períodos pré-estabelecidos, pesagem das quantidades de alimento fornecida e respectivas sobras, análise bromatológica dos ingredientes da dieta e das sobras. Os parâmetros de comportamento foram originados de três avaliações de 48 h cada, com registros de atividades dos animais a cada 5 minutos, além da contagem de mastigações por bolo de ruminação e sua duração. A interação freqüência de alimentação x período de confinamento foi significativa para consumo voluntário de matéria seca (MS) e energia digestível (ED). O aumento do número de fornecimentos de alimento não afetou o ganho de peso médio diário (1,54, 1,53 e 1,50 kg, respectivamente) e a eficiência da transformação da MS consumida em ganho de peso (8,90, 8,59 e 8,31 kg de MS/kg ganho de peso) e da energia digestível (26,42, 25,34 e 24,58 Mcal/kg ganho de peso). Não houve interação significativa entre freqüência de alimentação e categoria animal. As vacas apresentaram maior consumo médio diário de MS expresso por animal (13,92 contra 10,76 kg) e por unidade de tamanho metabólico em relação aos novilhos, não causando alteração significativa no ganho de peso médio diário (1,60 e 1,45 kg, respectivamente). As vacas foram 17,72 e 17,30% menos eficientes que os novilhos na transformação de MS e energia digestível em ganho de peso, respectivamente. A interação categoria animal x período de confinamento foi significativa para o ganho em estado corporal. Nas vacas, o ganho em estado corporal foi mais acentuado nos dois períodos iniciais do confinamento; já nos novilhos foi mais acentuado na fase final. A interação freqüência de alimentação x categoria animal não foi significativa para os parâmetros de comportamento. Os animais que receberam três fornecimentos permaneceram ruminando em pé mais tempo do que àqueles que receberam 4 fornecimentos (1,16 contra 0,68 h). No entanto, quando somados o tempo total de ruminação (em pé e deitado) essa diferença deixou de existir (6,76 contra 6,90 h, respectivamente). As três refeições diárias também levaram os animais a consumir água por mais tempo (0,33 h) em relação aos alimentados duas (0,25 h) e quatro vezes (0,19 h). Não houve influência do número de fornecimentos para as variáveis ócio e ingestão. Os animais permaneceram 38,92% do tempo em pé e 61,02% deitados. O número de fornecimentos não influenciou as atividades relacionadas à ruminação; mas a categoria animal influenciou o número de mastigações realizadas por bolo, por kg de MS ingerida e a taxa de ingestão. Os novilhos apresentaram 55,70 mastigações/bolo e 2.163,32 mastigações por kg de MS consumida contra 51,69 e 1.591,13 mastigações das vacas, respectivamente. A taxa de ingestão de MS foi de 3,01 kg/h para os novilhos e de 3,58 kg/h para as vacas de descarte.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / This study was designed to investigate the role played by AngII receptors (AT1 and AT2) in follicle development and maturation of bovine oocytes. Receptor expression was assessed by the RT-PCR technique using preantral (secondary), 3-8, 6-7, and 12mm follicles. Secondary preantral follicles did not express AngII receptors. Antral follicles expressed AngII receptors distinctly. AT1 receptors were expressed in teca (TC) and granulose cells (GC) from follicles greater than 6mm. AT2 receptors were expressed in TC and GC from follicles >6mm. AT2 receptors were expressed in TC in follicles >3mm. Only follicles >12mm expressed AT2 receptors in GC. The investigation of oocyte maturation was evaluated in cumulus-oocyte complexes (COCs) from 2-8mm follicles obtained in slaughterhouses. The treatments were carried out using the co-culture of 20 COCs with 8 follicle hemi-sections for 12h in 20μL TCM199 plus 1mg/mL polyvinyl alcohol (negative control group: CON(-)), supplemented with AngII (AngII group), with AngII plus Losartan (LOS group), and with AngII plus PD123319 (PD123319 group). For the positive control group (CON(+)), COCs were cultured without follicle hemi-sections. Oocytes were analyzed for maturation stage in germinal vesicle (GV), germinal vesicle breakdown (GVB), and metaphase I (MI). The oocyte rate kept in GV observed in the groups cultured with receptor inhibitors AT1 (LOS: 65.5%, 78/119) and AT2 (PD123319: 54.6%, 53/97) was greater (p<0.05) than that of CON(+) (10.8%, 12/111) and AngII (22.7%, 25/110) groups, but no difference was seen as compared with CON(-) (50%, 53/106). In the MI analysis, the oocyte percentage that reached this stage in groups CON(+) and AngII (62.1%, 69/111 and 52.2%, 58/111, respectively) was greater (p<0.05) than that seen for CON(-), LOS and PD123319 (13.2%, 14/106; 0.8%, 1/119; 1.03%, 1/97, respectively). TC and GC expressed AngII receptors (AT1 and/or AT2) before antrum formation, according to follicle size. Both AT1 and AT2 receptors take part in the resumption and progression of meiosis in bovine oocytes. / O objetivo do presente trabalho foi investigar a participação de receptores de AngII (AT1 e AT2) no desenvolvimento folicular e maturação de oócitos bovinos. A expressão dos receptores foi avaliada, por meio de RT-PCR em folículos pré-antrais (secundários) e folículos antrais de 3-4mm, 6-7mm e >12mm de diâmetro. Para verificação da maturação de oócitos foram utilizados CCOs de folículos com diâmetro entre 2-8mm obtidos em matadouro. Os tratamentos foram conduzidos com o co-cultivo, por 12h, de 20 CCOs com oito metades foliculares em 200μl de TCM-199 acrescido de 1mg/ml de álcool polivinílico (grupo controle negativo (CON(-)), suplementados com AngII (grupo AngII), AngII mais Losartan (grupo LOS) e AngII mais PD123319 (grupo PD123319). No controle positivo (CON(+)), os CCOs foram cultivados sem metades foliculares. Os oócitos foram analisados quanto a fase de maturação em VG, RVG e MI. Folículos pré-antrais secundários não expressaram receptores para AngII. Folículos antrais expressaram receptores para AngII de forma diferenciada. Receptores AT1 foram expressos em CT e CG em folículos a partir de 6 mm. Receptores AT2 foram expressos em CT a partir de folículos de 3mm, e somente folículos maiores que 12mm expressaram receptores AT2 nas CG. O percentual de oócitos mantidos em VG, observados nos grupos submetidos ao cultivo com inibidores dos receptores AT1 (LOS, 65,5%; 78/119) e AT2 (PD123319, 54,6%; 53/97) foi superior (p<0,05) ao observado nos grupos CON(+) (10,8%; 12/111) e AngII (22,7%; 25/110), porém não houve diferença com relação ao grupo CON(-) (50%; 53/106). Na avaliação da MI, o percentual de oócitos que atingiram esse estádio nos grupos CON(+) e AngII (62,1%; 69/111 e 52,2%; 58/111, respectivamente) foi superior (p<0,05) aos grupos CON(-), LOS e PD123319 (13,2%; 14/106, 0,8%; 1/119 e 1,03%; 1/97, respectivamente). CT e CG expressam receptores para AngII (AT1 e/ou AT2) a partir da formação do antro, de acordo com o tamanho folicular. Ambos os receptores AT1 e AT2 participam do reinício e progressão da meiose de oócitos bovinos.