Orientador: Juliane Araújo Greinert Goulart. / Coorientador: Joel Dias da Silva. / Dissertação (Mestrado em Engenharia Ambiental) - Programa de Pós-Graduação em Engenharia Ambiental, Centro de Ciências Tecnológicas, Universidade Regional de Blumenau, Blumenau.

Os microrganismos endofíticos vêm sendo estudados na busca de novas espécies e pela sua importância nas aplicações biotecnológicas. Podem ser isolados de sementes, raízes, folhas e em frutos de diversas espécies de plantas. Além disso, pouco se sabe a respeito desses microrganismos associados as folhas e frutos da melancia. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi isolar e identificar bactérias e leveduras endofíticas e associadas às folhas e frutos de melancia, assim como avaliar o potencial biotecnológico dos isolados de leveduras. As amostras foram obtidas de frutos oriundos de Brasília-DF e de plantas de Formoso do Araguaia-TO. Para o isolamento dos microrganismos foram adotados diferentes procedimentos para folhas: fragmentação e trituração, testando-se quatro condições de desinfestação superficial e para os frutos: trituração, enriquecimento e filtração em membrana. A identificação e caracterização molecular foi realizada pela técnica de PCR colony para bactérias e pela extração do DNA genômico de leveduras e bactérias. O DNA dos isolados foi amplificado utilizando oligonucleotídeos P027F e R1357 para bactérias, e NL1 e NL4 para leveduras. Para os isolados de leveduras foram realizados os testes de antagonismo contra oito fungos fitopatogênicos e a capacidade de produzir ácido indolacético (AIA). De acordo com resultados, foram obtidos 380 isolados de bactérias e 240 leveduras endofíticas e associadas, com maior número de isolados no tecido foliar, sendo identificadas 71 bactérias e 92 leveduras. Foram identificados 12 gêneros de bactérias, com o gênero Pantoea sp. isolado em maior quantidade. Para os isolados de leveduras, foram identificados 5 gêneros, com destaque para a espécie Sporidiobolus pararoseus, obtida de folhas e frutos de melancia. Os isolados de leveduras associadas TAIL 04 (99% Saccharomyces cerevisiae) e TAIL 63 (99% Pseudozyma antarctica) apresentaram atividade de antagonismo para os fungos Sclerotinia sclerotirum, Alternaria sp., Curvularia lunata, Rhizoctonia solane e Pyricularia oryzae. Este também foi inibido pelos isolados TAIL 95 (99% Hannaella sinensis) e TAIL 66 (100% Sporidiobolus pararoseus) e apresentou maior inibição de 32,82% com o isolado S. cerevisiae (TAIL 04). Simultaneamente, os isolados S. cerevisiae (TAIL 04) e P. antarctica (TAIL 04) mostraram capacidade em produzir ácido indolacético (AIA) nas concentrações de 21,14 μg/mL e 15,79 μg/mL, respectivamente, em após 7 dias de incubação. Conclui-se que folhas e frutos de melancia possuem importantes bactérias e leveduras endofíticas e associadas de interesse biotecnológico, como promotores de crescimento da planta e como antagonistas, possibilitando o seu uso no desenvolvimento de bioprodutos. / Endophytic microorganisms have been studied in the identification of new species and for their importante in biotechnological applications. Can be isolated them from seeds, roots, leaves and in fruits of several plant species. Besides, the relation between these microorganisms and watermelon leaves and fruits is far from being well known. Therefore, the main of this work was to identify both endophytic and associated bacteria and yeasts to leaves and fruits of watermelon, as well as evaluate biotechnological potential applications of yeast isolate. The samples were obtained of fruits from Brasília-DF and plants from Formoso do Araguaia-TO. For the isolation of the microorganisms were used different procedures for the leaves: fragmentation and crushing, by testing four surface disinfection conditions and for the fruits: crushing, enriching and filtration in membrane. Molecular identification and characterization was realized by the colony PCR technique for bacteria and the extraction of genomic DNA from yeasts and bactéria. The DNAs of the isolates was amplified using oligonucleotides P027F and R1357 for bacteria and NL1 and NL4 for yeast. For the yeasts isolate tests of antagonisms for phytopathogenic and producers of indoleacetic acid (AIA) were carried out. A total of 380 bacteria and 243 endophytic and associated yeasts were isolated, obtaining a higher number of isolates from the watermelon leaf tissue and 71 bacteria and 92 yeasts were identified. Twelve genus of bacterias were identified, with the gener Pantoea sp. isolated in larger quantity. For yeasts isolated were identified five genus, with featured for the specie Sporidiobolus pararoseus obtained of leaves and fruits of watermelon. Associated yeasts isolates TAIL 04 (99% Saccharomyces cerevisiae) and TAIL 63 (99% Pseudozyma Antarctica) showed antagonistic activity for the fungi Sclerotinia sclerotirum, Alternaria sp., Curvularia lunata, Rhizoctonia sp., Didymella sp. and Pyricularia oryzae. This also was inhibied by TAIL 95 (99% Hannaella sinensis) and TAIL 66 (100% Sporidiobolus pararoseus) isolated and showed greater inhibition of 32,82% with S. cerevisiae (TAIL 04). Simultaneously, S. cerevisiae (TAIL 04) and P. Antarctica (TAIL 63) showed capacity to producer indoleacetic acid (IAA) in concentrations of 21,14 μg/mL and 15,79 μg/mL, respectively, in 7 days of incubation. It is concluded that watermelon leaves and fruits have importants endophytics and associated bacterias and yeasts of biotechnological interest as grownth promoters and antagonistics, making possible their use in the development of bioproducts.

O laser de diodo de alta potência tem sido estudado em Periodontia para redução microbiana como coadjuvante ao tratamento não cirúrgico. O objetivo deste ensaio clínico aleatório de boca-dividida foi avaliar a redução bacteriana e as mudanças nos parâmetros clínicos periodontais promovidas pela raspagem, associada ao laser de diodo de alta potência. Foram selecionados trinta e seis (36) pacientes, de ambos os sexos e portadores de periodontite crônica. Cada paciente forneceu um par de dentes unirradiculares contralaterais com profundidade clínica de sondagem (PCS) 5mm. Os pacientes passaram por tratamento periodontal prévio e em seguida os dentes experimentais foram divididos em dois grupos: teste e controle. Ambos receberam raspagem, alisamento e polimento coronário radicular (RAPCR), sendo que apenas o grupo teste recebeu a irradiação do laser de diodo (1,5W, contínuo, 1.193,7 W/cm2, 20 segundos) em duas sessões, com intervalo de uma semana. Os parâmetros clínicos e microbiológicos foram coletados no início e 6 semanas após o tratamento. Houve redução significativa para todos os parâmetros clínicos estudados em ambos o grupos, entretanto os parâmetros PCS e Nível Clínico de Inserção (NCI) demonstraram melhora estatisticamente significante no grupo controle quando comparado ao grupo teste. Em relação às Unidades Formadoras de Colônias (UFCs) de bactérias totais (BT) e pigmentadas de preto (BPP) foi observada redução em ambos os grupos, porém sem diferença significante entre eles. Não houve diferença significativa entre os grupos em relação à presença de Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A. actinomycetemcomitans) e Prevotella intermedia (P. intermedia), entretanto a redução no número de pacientes que apresentaram Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) foi significativamente maior no grupo controle. Foi concluído que a irradiação do laser de diodo de alta potência, em bolsas de dentes unirradiculares, não proporcionou melhora clínica e microbiológica adicional ao procedimento convencional. / The high intensity diode laser has been studied in periodontics for microbial reduction in non-surgical treatment as an adjunct to scaling procedures. The goal of this randomized clinical trial was to assess the bacterial reduction and changes in clinical periodontal parameters promoted by scaling, combined with high intensity diode laser. Thirty six (36) subjects, of both gender and with chronic periodontitis were selected. Each patient provided a pair of contra-lateral singles rooted teeth, with probing pocket depth (PPD) 5 mm. Patients underwent periodontal treatment prior and then the teeth were divided into two experimental groups: test and control. Both received scaling and root planing (SRP), and only the test group received irradiation of diode laser (1.5W, continuous, 1.193,7 W/cm2, 20 seconds) in two sessions, with break of one week. Clinical and microbiological data were collected at baseline and 6 weeks after treatment. There was a significant decrease for all clinical parameters studied in both groups, but the parameters PPD and clinical attachment level (CAL) showed statistically significant improvement in the control group compared to the test group. Concerning Colony Forming Units (CFU) of total bacteria and black pigmented colonies, reduction was observed in both groups but no significant difference was observed between them. There was no significant difference between the groups regarding the presence of P. intermedia and A. actinomycetemcomitans, however the decrease in the number of patients who had P. gingivalis was significantly higher in the control group. It was concluded that irradiation with the high intensity diode laser, in periodontal pockets of single- rooted teeth, did not provide additional clinical and microbiological improvement.

Os genes de choque térmico groES e groEL de Caulobacter crescentus foram isolados utilizando-se os genes homólogos de E.coli como sonda e por sequenciamento demonstrou-se que estes genes estão organizados na forma de um operon em um fragmento de DNA de aproximadamente 2,5 kb, contendo também sua região regulatória. \"Northern blots\" de RNA total de células crescidas a 300C ou submetidas a choque térmico mostraram a presença de um único RNA de tamanho aproximado de 2,3kb, altamente induzido por choque térmico, permanecendo em altos níveis mesmo após longos períodos de choque térmico. Amostras de RNA total de células sincronizadas, de diferentes estágios do ciclo celular de Caulobacter, foram também analisadas mostrando que os níveis do mRNA groESL variam durante o ciclo, apresentando um máximo na célula prédivisional. Análises através de \"Western blot\" mostraram uma pequena variação nos níveis da proteína GroEL ao longo do ciclo celular, sendo os tempos 60 e 120 minutos, respectivamente, os pontos de mínimo e máximo acúmulo da proteína concordando com os resultados obtidos em \"N orthern blots\". O mesmo tipo de análise foi feito com extratos totais obtidos a partir uma população mista de células crescidas a 300C e submetidas a choque térmico, observando-se o acúmulo da proteína até 60 minutos depois do choque térmico, com aumento da ordem de 5 vezes nos níveis de GroEL, níveis estes que diminuem lentamente a partir deste ponto. Os inícios de transcrição foram determinados em experimentos de \"primer extension\" utilizando-se RNA total de células incubadas 300C e de células submetidas a diferentes condições de choque térmico. Dois possíveis sítios de início de transcrição foram determinados nas posições -119 e -88 do ATG da metionina iniciadora de groES, sendo as regiões -10 e -35 dos promotores correspondentes (P 1 e P2) identificadas. Somente a transcrição iniciando a partir de P2, que apresenta características de um promotor transcrito pelo σ32, aumenta durante o choque térmico. Fusões de transcrição com o vetor repórte placZ/290 e a região 5\' regulatória do operon groESL foram construídas para identificar as sequências responsáveis pelo controle por choque térmico e pelo controle temporal. Fusões de transcrição contendo deleções na região 5\' do operon mostraram que sequências a montante do promotor P2 não são necessárias para a indução por choque térmico ou para o controle temporal. Fusões de transcrição contendo mutações sítio-dirigidas na repetição invertida, encontrada a 3\' do promotor P2, antes do gene groES, revelaram que este elemento, conhecido como CIRCE, regula negativamente a expressão de groESL a 300C e mutações neste elemento levam à perda do controle temporal deste operon. / The heat shock genes groES and groEL of Caulobacter crescentus were isolated using the homologous genes of E.colí as a probe. DNA sequence analysis has shown that these genes are organized as an operan in a fragment of about 2.5kb, which includes the 5\' regulatory region. Northern blot analysis of total RNA from cells grown at 300C or heat shocked treated has shown the presence of a single mRNA species for groESL, of approximately 2.3kb in size, which presented increased leveis even after long periods of heat shock. Samples of total RNA from synchronized cells, corresponding to different stages of the Caulobaaer cell cycle, were also analysed, showing that the amount of groESL mRNA varies during the cycle, with maximum leveis in predivisional cells. Western blot analysis of GroEL leveis in Caulobaaer has shown that the amount of the protein decreases during the first 60 minutes of C.crescentus cell cycle and then starts to increase again. These results corroborate the data obtained with Northern blot analysis. A similar experiment was performed after exposing a mixed population of C.crescentus cells to different times of heat shock at 400C. Western blot of extracts of these cells showed a fivefold increase in the leveis of GroEL after 60 minutes of heat shock, which then begins to decrease. Primer extension experiments were performed using total RNA from cells incubated at normal growth temperature or after heat shock treatment. Two possible transcription start sites were determined at positions -119 and -88 from the ATG of the groES initiator methionine and the -10 and -35 regions of the corresponding promoters (P 1 and P2) were identified. Only trancription initiating from the P2 promoter, which has caracteristics of a σ32 promoter, I ncreases during heat shock .Transcription fusions with the reporter vector placZ/290 and the 5\' regulatory region of the groESL operan were contructed in order to identify the sequences responsible for heat shock and cell cycle contral. Deletion analysis in the 5\' region of the operon showed that no sequences upstream of the P2 promoter are necessary for heat shock induction or for temporal contral. Site-directed mutagenesis in the inverted repeat found 3\' of the P2 promoter, in front of the groES gene, revealed that this element, also known as CIRCE, negatively regulates groESL expression at 300C and mutations in it lead to loss of temporal control of this heat shock operon.

O objetivo deste projeto foi entender a organização genômica e o conteúdo de genes de dois fitopatógenos relacionados geneticamente, mas que infectam diferentes hospedeiros: Leifsonia xyli subsp. xyli (Lxx), um patógeno de cana-de-açúcar; e Leifonia xyli subsp. cynodontis (Lxc), um patógeno de gramíneas do gênero Cynodon. Os resultados do seqüenciamento parcial do genoma de Lxc são descritos, incluindo as seqüências comuns ao genoma de Lxx e os fragmentos de organização distinta e genes específicos de Lxc. Para alcançar o objetivo, bibliotecas genômicas do genoma de Lxc foram construídas. A estratégia revelou seqüências específicas, algumas provavelmente adquiridas por transferência horizontal, e regiões não sintênicas do genoma de Lxc, quando comparadas com Lxx. Regiões específicas somaram 311.353 pb e foram anotadas. Devido a associação de elementos genéticos móveis com reorganização cromossômica e transferência horizontal de genes, um estudo detalhado dos transposons do tipo IS, presentes em ambos os genomas, foi realizado. A análise revelou um número variável de elementos para cada genoma atuando na diversificação dos mesmos. / This study aimed to understand genome organization and gene content of two closely related plant pathogens that infect different hosts: Leifsonia xyli subsp. xyli (Lxx), a sugarcane pathogen; and Leifonia xyli subsp. cynodontis (Lxc), a Cynodon grass pathogen. We describe the results of a partial genome sequence of Lxc, assessing the similarity to Lxx completely sequenced genome, describing differences in genome organization and uncovering genes specific to Lxc genome. To accomplish the objective, genomic libraries were constructed. The strategy uncovered specific sequences, some probably acquired by horizontal transfer and non-syntenic regions of Lxc genome compared to Lxx. Specific regions of Lxc genome accounted for 311,353 bp and were annotated. Because mobile genetic elements are often associated with rearrangements and horizontal gene transfer, a detailed study of all insertion sequence (IS) elements presented in both genomes were realized. The analysis revealed a variable number of transposable elements acting upon genomic diversity.

Orientador: Antonio Carlos Maringoni / Coorientador: Antônio Fernandes da Silva Junior / Banca: Eduardo Bagagli / Banca: José Belasque Junior / Banca: Luís Otávio Saggion Beriam / Banca: Renate Krause Sakate / Resumo: Uma das principais doenças bacterianas que acomete a cultura do feijoeiro comum (Phaseolus vulgaris L.) no Brasil é a murcha-de-curtobacterium, causa por Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens (Cff). Até o momento são escassas as informações a respeito da sobrevivência da bactéria no cultivo do feijoeiro, fato que pode interferir no manejo e controle da doença, além de informações a respeito da variabilidade genética da bactéria. Assim, esta pesquisa teve por objetivos analisar o potencial de algumas coberturas de inverno como hospedeiras alternativas de Cff, avaliar o efeito destas culturas aplicadas em sistema de rotação com o feijoeiro na incidência e severidade da doença, avaliar o comportamento de genótipos de feijoeiro que melhor se adaptam à doença em regiões do estado do Paraná, verificar a sobrevivência de Cff como células livres no solo e analisar a variabilidade genética da bactéria pela técnica de análise por sequências multilocus (MLSA). Foi observado que Cff pôde colonizar epifiticamente ou endofiticamente a aveia preta, trigo, aveia branca, cevada, azevém e canola. Os cultivos prévios da aveia preta e do trigo propiciaram o aumento da incidência e severidade da doença no feijoeiro, bem como redução no peso médio de 100 grãos. A produtividade média do feijoeiro teve uma redução de 50,64% em uma área com maior intensidade da doença, com parâmetros agronômicos (número de vagens/planta, número de grãos/planta, peso dos grãos/planta e peso de 100 grãos), m... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: One of the most important diseases of common bean in Brazil is the bacterial wilt, caused by Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens (Cff). Until now, there is no much knowledge about how this bacterium survives on common bean, fact that could interfere with the disease management, besides of information about genetic variability of the bacterium. In this work we studied the potential of some winter crops as alternative hosts of Cff; the effect of these crops in the incidence and severity of bacterial wilt in rotation with common bean; detection of common bean cultivars with resistance levels to Cff in regions of Paraná State; study the survival of Cff as free cells in the soil; and assess the genetic variability of the bacterium by multilocus sequence analysis (MLSA). Cff colonized epiphytically and endophytically black oat, wheat, white oat, barley, ryegrass and canola. The previous crop of black oat and wheat increased the incidence and severity of bacterial wilt and reduced the average weight of 100 grains. The average production of common bean decreased 50,64% in area with higher intensity of disease, with reduction of number of pods/plant, number of grains/plant, weigh of grains/plant and weigh of 100 bean grains. The previous crop of corn and soybean reduced the Cff incidence and increased the bean production. The cultivars IPR Juriti and IPR Tuiuiú shown greater level of reistance for bacterial wilt and were more productive in Paraná State. Cff strains showed... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Fabiana Pilarski / Banca: José Luiz Pedreira Mouriño / Banca: Manoel Victor Franco Lemos / Resumo: Os probióticos são microorganismos vivos que afetam de forma benéfica o hospedeiro ou o ambiente. Na aquicultura podem ser usados tanto na água como na ração, mas seu uso na alimentação é destacado como uma das principais medidas profiláticas. As doenças bacterianas são consideradas um dos principais entraves no crescimento da aquicultura, e assim, há a necessidade urgente no desenvolvimento de probióticos. O tambaqui Colossoma macropomum é a espécie nativa mais produzida no Brasil, e apesar de sua importância econômica, não há estudos que estabeleçam os microorganismos com potencial probiótico para esta espécie de peixe. Neste trabalho foi possível identificar e caracterizar bactérias autóctones com potencial probiótico para o tambaqui a partir de testes de: caracterização morfológica, catalase, tolerância à bile, antagonismo frente à patógenos, sensibilidade a antimicrobianos e sequenciamento do gene 16S rRNA. As cepas selecionadas foram: Enterococcus faecalis, Enterococcus hirae, Lactococcus lactis, Pediococcus pentosaceus, Staphylococcus hominis e Staphylococcus saprophyticus. Todas as cepas foram tolerantes aos ácidos biliares do tambaqui e capazes de inibir o crescimento dos patógenos Enterococcus casseliflavus, Lactococcus garvieae e Aeromonas hydrophila. Todas as cepas foram parcialmente resistentes contra sete antibióticos. Como as cepas de S. saprophyticus e E. faecalis apresentaram menores valores no teste de antagonismo e por estas bactérias serem relatadas como a... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Probiotics are living microorganisms that beneficially affect the host or the environment. In aquaculture it can be used in both water and feed, but its use in feed is highlighted as one of the main prophylactic measures. Bacterial diseases are considered to be one of the major obstacles to the growth of aquaculture, and thus, there is an urgent need for the development of probiotics. The tambaqui Colossoma macropomum is the most produced native species in Brazil, and despite its economic importance, there are no studies that establish the microorganisms with probiotic potential for this fish species. In this study it was possible to identify and characterize autochthones bacteria with probiotic potential for tambaqui from tests of: morphological characterization, catalase, bile tolerance, antagonism of pathogens, antimicrobial susceptibility and 16S rRNA gene sequencing. The selected strains were: Enterococcus faecalis, Enterococcus hirae, Lactococcus lactis, Pediococcus pentosaceus, Staphylococcus hominis and Staphylococcus saprophyticus. All strains were tolerant to acids bile from tambaqui and capable of inhibiting the growth of Enterococcus casseliflavus, Lactococcus garvieae and Aeromonas hydrophila pathogens. All strains were partially resistant against seven antibiotics. Since the strains of S. saprophyticus and E. faecalis presented lower values in the test of antagonism and because these bacteria were reported as zoonotic agents, we conclude this study selecting fou... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Telma Teresinha Berchielli / Coorientador: Juliana Duarte Messana / Banca: Raul Franzolin Neto / Banca: Renata Helena Branco Arnandes / Banca: Roberta Carrilho Canesin / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de três métodos e quatro tempos de armazenamento da amostra ruminal, sobre a qualidade e rendimento do DNA metagenômico extraído assim como o efeito sobre a composição da comunidade bacteriana ruminal e avaliar o efeito da glicerina bruta (CG) associada ao óleo de soja (OS) na dieta de Novilhos Nelore sobre o consumo, digestibilidade, fermentação, biohidrogenação (BH), microbiota ruminal e fluxo intestinal de ácidos graxos de cadeia longa. No experimento 1 utilizou-se um novilho Nelore equipado com cânula ruminal de silicone como doador de conteúdo ruminal e compreendeu 11 tratamentos: pellet controle (PC), liofilizado controle (LC), P-20: pellet armazenado a -20 ° C por um período de 3, 6 e 12 meses, P-80: pellet armazenado a -80 ° C durante um período de 3, 6 e 12 meses e L-20: amostra liofilizada armazenada a -20 ° C durante um período de 3, 6 e 12 meses. O método L-20 não conseguiu manter o rendimento de DNA durante o armazenamento. O método P-80 apresentou maior rendimento de DNA após 6 meses de armazenamento. Amostras armazenados como pellets (P-20 e P-80) resultaram em menor riqueza Chao 1, ACE e índice Shannon Wiener quando comparado com PC. Enquanto LC e PC apenas foram diferentes na riqueza ACE. O método de armazenamento e tempo de armazenamento influenciou as proporções de 14 ds 17 filos identificado. No método P-20 a proporção de Cianobactérias, Elusimicrobia, Fibrobacteres, Lentisphaerae, Proteobacteria e Espiroquetas ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this study was to investigate three methods and four storage times for rumen sampling in terms of quality and yield of extracted metagenomic DNA as well as the composition of the rumen bacterial community, and evaluate the effect of soybean oil (SO) and crude glycerin (CG) association on ruminal fermentation, ruminal biohydrogenation (BH) and ruminal microbial population in Nellore steers. In the experiment 1: One Nellore steer fitted with a ruminal silicone-type cannula was used as a donor of ruminal contents. The experiment comprised 11 experimental groups: pellet control (PC), lyophilized control (LC), P-20: pellet stored frozen at -20 °C for a period of 3, 6, and 12 months, P-80: pellet stored frozen at -80 °C for a period of 3, 6, and 12 months, and L-20: lyophilized sample stored frozen at -20 °C for a period of 3, 6, and 12 months. The L-20 method could not maintain the yield of DNA during storage. In addition, the P-80 group showed a greater yield of metagenomic DNA than the other groups after 6 months of storage. Rumen samples stored as pellets (P-20 and P-80) resulted in lower richness Chao 1, ACE, and Shannon Wiener indices when compared to PC, while LC and PC were only different in richness ACE. The storage method and storage time influenced the proportions of 14 of 17 phyla identified by sequencing. In the P-20 group, the proportion of Cyanobacteria, Elusimicrobia, Fibrobacteres, Lentisphaerae, Proteobacteria, and Spirochaetes phyla identified was lower than 1%. In the P-80 group, there was an increase in the proportion of the Bacteroidetes phylum (p = 0.010); however, the proportion of Actinobacteria, Chloroflexi, SR1, Synergistetes, TM7, and WPS.2 phyla were unchanged compared to the PC group (p > 0.05). The class Clostridium was the most abundant in all stored groups and increased in its proportion, (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Elerson Gaetti Jardim Júnior / Banca: Ana Maria Pires Soubhia / Banca: Hélio Massaioshi Tanimoto / Resumo: As doenças infecciosas representam uma das principais causas de perda precoce dos dentes, podendo levar a seqüelas graves. Os microrganismos normalmente envolvidos nessas patologias quase sempre pertencem a microbiota autóctone da cavidade bucal e, quase invariavelmente, são de baixa virulência. Assim, o objetivo desse estudo foi avaliar a susceptibilidade a antimicrobianos de bactérias anaeróbias obrigatórias e anaeróbias facultativas isoladas de processos infecciosos da cavidade bucal, procurando verificar a existência de padrões de susceptibilidade à fármacos nas diferentes espécies e gêneros microbianos. As amostras microbianas foram obtidas de 4 casos de osteomielite crônica da mandíbula, 3 lesões periapicais refratárias ao tratamento endodôntico, 30 infecções endodônticas, 7 casos de periodontite agressiva localizada e 2 casos de periodontite agressiva generalizada. O isolamento dos microbiano foi realizado em meios de cultura seletivos e a identificação dos isolados foi realizada de acordo com suas características morfológicas e bioquímico-fisiológicas. Os isolados, uma vez identificados, foram mantidos em nitrogênio líquido (- 196 oC). Nos testes de susceptibilidade, empregou-se o método de diluição em ágar e o meio de cultura empregado foi o ágar infuso de cérebro coração acrescido de extrato de levedura. Os resultados evidenciaram resistência natural dos anaeróbios facultativos ao metronidazol e níveis moderados de resistência às penicilinas, enquanto a cefoxitina, a associação de amoxicilina/ácido clavulânico e imipenem foram quase que universalmente eficazes. A lincomicina e a clindamicina também se mostraram eficazes, particularmente sobre os anaeróbios obrigatórios. O principal mecanismo de resistência aos b-lactâmicos foi a produção de compostos capazes de degradar essas drogas. / Abstract: Infections diseases represent one of the major causes of early tooth loss, and they can lead to sequels. The microorganisms involved oftenly in these pathologies belong to oral microflora and almost all of them are of virulence potential. Thus, the objective of this study was to evaluate the susceptibility to antimicrobials of obligate and facultative anaerobes recovered from infections in head and neck area, trying to verify the existence of susceptibility patterns to those drugs the different species and microbial goods. Microbials samples were obtained of 4 cases of chronic osteomyelitis, 3 refractary periapical lesions, 30 endodontics infections, 7 cases of localized aggressive periodontitis, 2 cases of generalized aggressive periodontitis. The isolation microbial was accomplished in selective culture means and the identification of the isolated ones was accomplished in agreement with its morphologic and biochemical-physiologic characteristics. The isolates, after identification, were maintained in liquid nitrogen (- 196°C). The susceptibility tests, were carried out throught na agar dilution method and the culture medium employed was brain heart infusion agar supplemented with yeast extract. The results evidenced natural resistance of facultative anaerobes to metronidazole and moderate levels of resistance to penicillin, while cefoxitin, amoxycillin/clavulanic acid and imipenem were almost universally effective, particularly on obligate anaerobes. The main mechanisms of resistance to b-lactams was the production of compounds capable to destroy these drugs. / Mestre

O laser de diodo de alta potência tem sido estudado em Periodontia para redução microbiana como coadjuvante ao tratamento não cirúrgico. O objetivo deste ensaio clínico aleatório de boca-dividida foi avaliar a redução bacteriana e as mudanças nos parâmetros clínicos periodontais promovidas pela raspagem, associada ao laser de diodo de alta potência. Foram selecionados trinta e seis (36) pacientes, de ambos os sexos e portadores de periodontite crônica. Cada paciente forneceu um par de dentes unirradiculares contralaterais com profundidade clínica de sondagem (PCS) 5mm. Os pacientes passaram por tratamento periodontal prévio e em seguida os dentes experimentais foram divididos em dois grupos: teste e controle. Ambos receberam raspagem, alisamento e polimento coronário radicular (RAPCR), sendo que apenas o grupo teste recebeu a irradiação do laser de diodo (1,5W, contínuo, 1.193,7 W/cm2, 20 segundos) em duas sessões, com intervalo de uma semana. Os parâmetros clínicos e microbiológicos foram coletados no início e 6 semanas após o tratamento. Houve redução significativa para todos os parâmetros clínicos estudados em ambos o grupos, entretanto os parâmetros PCS e Nível Clínico de Inserção (NCI) demonstraram melhora estatisticamente significante no grupo controle quando comparado ao grupo teste. Em relação às Unidades Formadoras de Colônias (UFCs) de bactérias totais (BT) e pigmentadas de preto (BPP) foi observada redução em ambos os grupos, porém sem diferença significante entre eles. Não houve diferença significativa entre os grupos em relação à presença de Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A. actinomycetemcomitans) e Prevotella intermedia (P. intermedia), entretanto a redução no número de pacientes que apresentaram Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) foi significativamente maior no grupo controle. Foi concluído que a irradiação do laser de diodo de alta potência, em bolsas de dentes unirradiculares, não proporcionou melhora clínica e microbiológica adicional ao procedimento convencional. / The high intensity diode laser has been studied in periodontics for microbial reduction in non-surgical treatment as an adjunct to scaling procedures. The goal of this randomized clinical trial was to assess the bacterial reduction and changes in clinical periodontal parameters promoted by scaling, combined with high intensity diode laser. Thirty six (36) subjects, of both gender and with chronic periodontitis were selected. Each patient provided a pair of contra-lateral singles rooted teeth, with probing pocket depth (PPD) 5 mm. Patients underwent periodontal treatment prior and then the teeth were divided into two experimental groups: test and control. Both received scaling and root planing (SRP), and only the test group received irradiation of diode laser (1.5W, continuous, 1.193,7 W/cm2, 20 seconds) in two sessions, with break of one week. Clinical and microbiological data were collected at baseline and 6 weeks after treatment. There was a significant decrease for all clinical parameters studied in both groups, but the parameters PPD and clinical attachment level (CAL) showed statistically significant improvement in the control group compared to the test group. Concerning Colony Forming Units (CFU) of total bacteria and black pigmented colonies, reduction was observed in both groups but no significant difference was observed between them. There was no significant difference between the groups regarding the presence of P. intermedia and A. actinomycetemcomitans, however the decrease in the number of patients who had P. gingivalis was significantly higher in the control group. It was concluded that irradiation with the high intensity diode laser, in periodontal pockets of single- rooted teeth, did not provide additional clinical and microbiological improvement.