Made available in DSpace on 2017-07-10T14:38:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marina.pdf: 1184727 bytes, checksum: 464327ef9797c59ec694ee14413ca72c (MD5) Previous issue date: 2012-09-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This study aimed to select and characterize strains of entomopathogenic fungi in order to control Gyropsylla spegazziniana. For this, the fifth instar nymphs were transferred to Paraguay tea seedlings, followed by spraying conidial suspensions of 48 strains of Beauveria spp., Metarhizium anisopliae, Isaria spp. and Lecanicillium spp. at a concentration of 1 × 109 conidia/mL. The seedlings were placed in PVC cages kept in a climatized room (26 ± 1°C; 12 h photophase and 60 ± 10% R.H.), and the insect mortality was evaluated daily for 10 days. The most active isolates were compared by means of vegetative growth, conidial production in culture media, insecticidal activity and molecular analyses, by sequencing the region rDNA-ITS and RAPD. The genus 22 Beauveria spp. was more efficient among the entomopathogenic fungi, especially for strain Unioeste 44 that showed the best performance, demonstrating its potential to control the pest. Molecular analysis of rDNA-ITS region allowed the identification of isolates as B. bassiana e B. brongniartii and RAPD markes were associated with virulence / O objetivo desse trabalho foi selecionar e caracterizar isolados de fungos entomopatogênicos, visando o controle dessa praga. Para tal, ninfas de 5o ínstar foram transferidas para mudas de erva-mate, seguido da pulverização de suspensões de conídios (1 × 109 conídios/mL) de 48 isolados de Beauveria spp., Metarhizium anisopliae, Isaria spp. e Lecanicillium spp. As mudas foram acondicionadas em gaiolas de PVC, e mantidas em sala climatizada (26 ± 1°C; 12 h de fotofase e U.R. 60 ± 10%). 21 A mortalidade dos insetos foi avaliada diariamente, por 10 dias e os isolados mais ativos foram comparados entre si por meio do crescimento vegetativo, produção de conídios em meios de cultura, atividade inseticida e análises moleculares, por meio do seqüenciamento da região rDNA-ITS e marcadores RAPD. O gênero Beauveria spp. foi mais eficiente dentre os fungos entomopatogênicos, em especial o isolado Unioeste 44 que apresentou o melhor desempenho, evidenciando seu potencial para o controle da praga. As análises moleculares da região rDNA-ITS possibilitou a identificação dos isolados como B. bassiana e B. brongniartii e os marcadores RAPD foram associados à virulência

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:30:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 221617 bytes, checksum: 8dea1fe4e748dc72a9e46876a76c3606 (MD5) Previous issue date: 2010-02-12 / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Age polyethism is the change in activities carried out by members of a colony during its life. Older individuals have lower future value to the colony, so it would be better for the colony if they could perform more dangerous tasks outside the nest and not return to its interior. Thus, the risk of bringing pathogens into the colony is reduced, protecting internal individuals and thereby increasing the life expectancy of the colony. The first hypothesis of this study is that external ants are older than internal ones and therefore die earlier. A complementary hypothesis is that external workers are weaker, having been previously selected by the colony to carry out dangerous tasks, since the losses would be less prejudicial to the colony. To test these hypotheses, internal e external workers of the leaf-cutter ant Atta laevigata (Smith) (Hymenoptera: Formicidae) were collected from nests in the field (Viçosa, Minas Gerais State, Brazil) and also from laboratory colonies. Ants of the same size were placed individually in Petri dishes and supplied with water and honey solution 1:1. To test the second hypothesis, ants were inoculated with the fungus Beauveria bassiana (Bals.) Vuill to compare their survival to controls. In both the field and laboratory experiments, the external workers died before the gardeners, suggesting that they are older, supporting the first hypothesis, that this species use age-dependent polyethism. In the experiment with ants from the field, there was no difference in the survival curves of external ants, inoculated or not. There was a difference in the laboratory ants. The first experiment indicates that external workers are not previously weaker, but the second suggests they are. This could be the difference betweennatural conditions (where they have more contact with pathogens so more susceptible individuals may be eliminated) and laboratory conditions (less pathogens). This study is the first step to test the conveyor belt model of Schmid-Hempel. Additional studies will be important to understand the intrinsic and extrinsic mechanisms mediating progression from internal to external activities, during aging. / O polietismo etário é a mudança nas atividades exercidas pelos membros de uma colônia ao longo da sua vida. Os indivíduos mais velhos teriam menor valor futuro para a colônia, seria então melhor se realizassem tarefas fora do ninho e não retornassem ao interior do mesmo. Isso diminuiria o risco de trazerem patógenos para dentro da colônia, o que consequentemente, aumentaria a expectativa de vida da colônia. A primeira hipótese desse trabalho é que as operárias de fora do ninho de formigas cortadeiras morrem antes das de dentro sugerindo que sejam mais velhas. Uma hipótese alternativa é que as formigas que forrageiam são operárias mais fracas, previamente escolhidas pela colônia, para realizarem tarefas mais perigosas, já que as perdas das mesmas não acarretariam tantos prejuízos. Para testá-las, operárias de dentro e fora do ninho da formiga cortadeira Atta laevigata (Smith) (Hymenoptera: Formicidae) foram coletadas de ninhos no campo (Viçosa, Minas Gerais, Brasil) e também de colônias provenientes de laboratório. Formigas de mesmo tamanho foram individualizadas em placas de Petri e supridas com água e solução de mel 1:1. Para testar a segunda hipótese, formigas foram inoculadas com o fungo Beauveria bassiana (Bals.) Vuill., com objetivo de comparar a sobrevivência dessas com formigas controle. As operárias de fora morreram antes das de dentro tanto no experimento de campo quanto no de laboratório. Isto sugere que sejam mais velhas, apoiando a primeira hipótese, que essa espécie utilize o polietismo dependente da idade. No experimento com formigas do campo, não houve diferença nas curvas de sobrevivência das de fora do ninho, inoculadas ou não; mas com as formigas de laboratório houve. O primeiro experimento indica que as formigas externas não são previamente mais fracas,mas o segundo indica que sim. Isso pode ter ocorrido pela diferença entre as condições naturais (onde têm mais contato com patógenos e indivíduos mais suscetíveis seriam eliminados) e as condições de laboratório (menos patógenos). Esse estudo foi o primeiro passo para se testar o modelo esteira de Schmid-Hempel. Estudos adicionais serão importantes para entender os mecanismos, extrínsecos e intrínsecos, mediadores das mudanças nas atividades internas ao ninho para atividades externas, com a passagem da idade.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-07-15Bitstream added on 2014-06-13T19:14:44Z : No. of bitstreams: 1 simi_ld_me_jabo.pdf: 975668 bytes, checksum: a1a658ff0ef48ae2b0a2439f7cbf0bb3 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A broca da cana Diatraea saccharalis (Fabricius, 1794) (Lepidoptera: Crambidae) é responsável por grandes prejuízos na cultura da cana-deaçúcar. O controle tem como alvo principal somente a fase de lagarta. No entanto, a eficiência pode ser maior atingindo fases do ciclo da praga mais expostas aos agentes de controle. O objetivo deste estudo foi avaliar a patogenicidade de Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorok. Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. e Isaria farinosa (Holmsk.) Fr. para ovos, lagartas, pupas e adultos de D. saccharalis e avaliar, através da análise de parâmetros biológicos, os efeitos no ciclo de vida da praga. Ovos postos no período de 24 horas, lagartas com 15 dias de desenvolvimento, pupas recém formadas e adultos com 24 horas de vida foram inoculados com os fungos nas concentrações de 108, 107 e 106 conídios mL-1. A viabilidade dos ovos foi afetada significativamente no tratamento com 108 con. mL-1 de M. anisopliae, mas as lagartas sobreviventes não foram afetadas em nenhum outro parâmetro avaliado. M. anisopliae e B. bassiana causaram mortalidade de lagartas principalmente nas concentrações de 108 e 107 con. mL-1, enquanto a viabilidade pupal e o peso de pupas fêmeas formadas a partir de lagartas tratadas foram reduzidos apenas pelos tratamentos com 108 e 107 con. mL-1 de M. anisopliae, respectivamente. I. farinosa não se mostrou patogênico para as fases de ovo e lagarta de D. saccharalis. O tratamento com 108 con. mL-1 de M. anisopliae e B. bassiana produziu 52,0 e 42,0% de mortalidade de pupas, respectivamente, afetando também a viabilidade de pupas e a longevidade de adultos emergidos. A fecundidade destes adultos foi severamente afetada por I. farinosa na concentração 108 con. mL-1 e pelos outros fungos em todas as concentrações avaliadas. Verificou-se grande mortalidade de adultos tratados com todas as concentrações de M. anisopliae... / The sugarcane borer Diatraea saccharalis (Fabricius, 1794) (Lepidoptera: Crambidae) is responsible for high losses in sugarcane. The larval stage is the main target of control. However, the efficiency can be higher by reaching different and more exposed stages with more exposure to the control agents. The aim of this study was to evaluate the pathogenicity of Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorok. Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. and Isaria farinosa (Holmsk.) Fr. to eggs, larvae, pupae and adults of D. saccharalis and to evaluate the effects on pest lifecycle. Eggs with 24 hours, larvae with 15 days of development, newly formed pupae and adults with 24 hours of life were inoculated with fungi at concentrations of 108, 107 and 106 conidia mL-1. The eggs viability was significantly affected in the treatment with 108 con. mL-1 of M. anisopliae, but the survival larvae were not affected in any of the analyzed parameters. M. anisopliae and B. bassiana caused larval mortality mainly at concentrations of 108 and 107 con. mL-1, while pupae viability and female pupal weight formed from treated larvae were reduced only by treatments with 108 and 107 con. mL-1 of M. anisopliae, respectively. I. farinosa wasn´t pathogenic to eggs and larvae of D. saccharalis. The treatment with 108 con. mL-1 of M. anisopliae and B. bassiana produced 52.0 and 42.0% pupae mortality respectively, also affecting the pupal viability and the longevity of adults. The fecundity of these adults was severely affected by I. farinosa in the concentration of 108 con. mL-1 and by other fungi in all evaluated concentrations. High mortality of treated adults with all concentrations of M. anisopliae and with 107 con. mL-1 was observed. The longevity and fecundity were not affected by the fungi, and the eggs viability laid by treated females was significantly reduced by treatment with 106 and 108 con. mL-1 of B. bassiana... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Angelo Pires do Prado / Tese(doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-09T08:57:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barci_LeilaAparecidaGardiman_D.pdf: 32026366 bytes, checksum: 02c031128906719534741a0aa1ce434a (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: o presente trabalho teve por objetivo avaliar a patogenicidade e a virulência do isolado IBCB66 de Beauveria bassiana, sobre larvas de B. microplus, com a finalidade de se utilizar esta cepa como padrão em estudos de seleção de isolados deste fungo e testar a compatibilidade da(s) melhor(es) estirpes(s) selecionada(s) com carrapaticidas comerciais. Seis suspensões (5x1O6,107,5x1O7,108,5x1O8and 1O9conidios/mL)do isolado IBCB66 foram testadas sobre larvas para avaliar a porcentagem de mortalidade e os resultados foram submetidos à análise de Probit. As observações foram realizadas até o 18° dia quando houve mortalidade total das larvas do grupo que recebeu 109 conídios/mL de suspenssão de B. bassiana...Observação: O resumo na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The objective of this research was to evaluate the pathogenicity and the virulence of the IBCB66 isolate of B. bassiana on infected larvae of B. microplus. The IBCB66 fungus strain was used as standard in screening thirty isolates of B. bassiana against Boophilus microplus larvae . The compatibility of IBCB66 and IBCB21 isolates of the fungus with several chemical acaricides was also assessed. The larval bioassay tests using the IBCB66 isolate were carried out to determine the LC 50, LC90, LT50 and LT90 doses. The IBCB66 fungus strain was tested at six different concentrations (5x1O6,107,5xl07, 108,5xlO8and 109 conidia/rnL), to determine the percentage of larval mortality. In addition, a Probit analysis was also performed. Total larval mortality was observed eighteen days after the beginning ofthe test in the group treated with 5xl09 conidia/mL...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Doutor em Parasitologia

O principal problema fitossanitário da citricultura atualmente é a doença conhecida como greening ou Huanglongbing (HLB), transmitida pelo inseto vetor Diaphorina citri. O presente trabalho objetivou desenvolver estratégias para incorporação dos fungos Beauveria bassiana ESALQ-PL63, registrado para o controle de outras pragas e/ou I. fumosorosea ESALQ-1296 em desenvolvimento como biopesticida especialmente para o manejo de D. citri, determinando a melhor concentração de adjuvantes e de conídios dos fungos a serem utilizados, sua eficácia em laboratório, semi-campo e campo; assim como sua compatibilidade com os agroquímicos utilizados na cultura. Na comparação dos dois fungos aplicados com seis adjuvantes no controle de D. citri revelaram que exceto Tween 80 a 0,001%, todos os outros adjuvantes contribuíram para aumentar a eficácia dos fungos. Os níveis de controle obtidos nos bioensaios em laboratório com B. bassiana e I. fumosorosea foram confirmados nos bioensaios em semi-campo e em campo. Realizaram-se 12 pulverizações com os dois fungos durante o período de dezembro de 2011 a janeiro de 2013 em campo nas concentrações de 2,5x106 conídios/mL em 2000 L/ha e 5x106 conídios/mL em 1000 L/ha ambos com 0,075% do adjuvante KBRAdj. Na comparação mês a mês, somente em janeiro de 2012 o controle químico foi superior a todos os outros tratamentos. No restante dos meses, as mortalidades causadas pelos tratamentos com fungos foram semelhantes entre si e semelhantes ao controle químico. As mortalidades de adultos de D. citri pelos fungos variaram de 96,4±3,8% (dezembro/2011) a 57,8±3,5% (outubro/2012). Os efeitos de 27 agroquímicos sobre o crescimento vegetativo e esporulação das colônias e a viabilidade dos conídios in vitro e a virulência dos fungos in vivo após mistura com cada um dos produtos foram determinados e revelaram que exceto os fungicidas a maioria dos produtos são compatíveis com os fungos e podem ser misturados na calda de aplicação. Estes resultados indicam que Beauveria bassiana ESALQ-PL63 e Isaria fumosorosea ESALQ-1296 são promissores para utilização no controle de D. citri em programas de manejo integrado de pragas de citros. / The main cause of the crop loss in citrus is currently the disease known as greening or Huanglongbing (HLB), transmitted by the insect vector Diaphorina citri. This study aimed to develop strategies for incorporating the fungi Beauveria bassiana ESALQ-PL63, registered for the control of other pests and Isaria fumosorosea ESALQ-1296 in development as biopesticide especially for the management of D. citri by determining the optimal concentration of adjuvants and of conidia to be used, their effectiveness in laboratory, semifield and field; as well as its compatibility with agrochemicals used in the crop. The comparison of the two fungi applied with six adjuvants for the control of D. citri revealed that except Tween 80 (0.001%), all other adjuvants contributed to increase the effectiveness of the fungi. Control levels obtained in the laboratory bioassays with B. bassiana and I. fumosorosea were confirmed in bioassays in semi-field and field. Both fungi were sprayed 12 times from December 2011 to January 2013 in the field at concentrations of 2.5x106 conidia/mL in 2000 L/ha and 5x106 conidia/mL in 1000 L/ha both with 0.075% of KBRAdj adjuvant. Only in January 2012 the chemical control was superior to all other treatments. In the remaining months, the mortalities caused by all the fungi treatments were similar to each other and similar to chemical control. The mortalities of adult D. citri by fungi ranged from 96.4 ± 3.8% (December/2011) to 57.8 ± 3.5% (October/2012). The effects of 27 agrochemicals on the vegetative growth and sporulation of colonies and conidia viability in vitro and in vivo virulence of the fungus after mixing it with each of the products were determined and showed that except the fungicides, the majority of products are compatible with the fungi and may be tank mixed. These results indicate that B. bassiana ESALQ-PL63 and I. fumosorosea ESALQ-1296 are promising for use in the control of D. citri in integrated pest management programs of citrus.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:25:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_Eula_Costa.pdf: 1234220 bytes, checksum: 9b0a765b29a3c24c4ab992c52d3cab65 (MD5) Previous issue date: 2009-03-25 / Considering the vast biotechnological applicability described for Beauveria bassiana, the versatility microbial biotransformation exhibits, the important biological activities attributed to the flavonoid quercetin, the therapeutic perspectives of its use, and the activity the enzyme quercetin 2,3-dioxygenase has on quercetin, we intended to evaluate quercetin biotransformation by B. bassiana ATCC 7159 and isolates of B. bassiana collected in the Midwestern Region of Brazil. The objectives of this study were: evaluate the potential of B. bassiana isolates and B. bassiana ATCC 7159 to produce metabolites of quercetin; investigate quercetin 2,3-dioxygenase production by the isolates and B. bassiana ATCC 7159; determine the genetic variability among the isolates of B. bassiana and establish possible correlations between molecular data and quercetin 2,3-dioxygenase production. All isolates and B. bassiana ATCC 7159 were capable of metabolizing quercetin and form compounds described in mammalian quercetin biotransformation studies and isolate IP 94 produced a higher number of metabolites compared with the others. B. bassiana ATCC 7159 and isolates IP 94, IP 98, IP 129, IP 147 produced methylated metabolites, while isolates IP 8, IP 11, and IP 94 produced glucuronidated metabolites. All the isolates produced sulphated metabolites and methylated and glucuronidated metabolites simultaneously and were capable to synthesize quercetin 2,3-dioxygenase. Quercetin 2,3-dioxygenase synthesis on PDSM, used in its biotransformation process was higher than on basic medium. B. bassiana ATCC 7159 and the isolates IP 11 and IP 132 presented the highest quercetin 2,3-dioxigenase activity, whereas the isolates IP 153 and IP 3a presented the lowest ones. Quercetin metabolites formation and quercetin 2,3-dioxygenase production were not correlated with the geographic origin of the isolates. Genetic variability analysis by RAPD allowed the separation of the isolates into three distinct groups and showed high genetic diversity among them; however, the RFLP-PCR of ITS region did not provide characteristic markers to differentiate the isolates. The ITS region sequencing confirmed the identity of the isolates as B. bassiana. The results obtained can lead to the following conclusions: B. bassiana constitutes an interesting alternative to the use of chemical methods and biological systems to produce quercetin metabolites, but is necessary to optimize the biotransformation process in order to obtain a more expressive amount of metabolites; B. bassiana is able to produce quercetin 2,3-dioxygenase, although more detailed studies are needed to explain its production pathway, regulation, and mechanism of action. / Considerando-se a vasta aplicabilidade biotecnológica descrita para Beauveria bassiana, a versatilidade que a biotransformação microbiana apresenta, as importantes atividades biológicas atribuídas ao flavonóide quercetina, as perspectivas quanto ao seu uso terapêutico e ainda a atividade da enzima quercetina 2,3-dioxigenase sobre a quercetina, pretendeu-se avaliar a metabolização da quercetina pela cepa B. bassiana ATCC 7159 e por isolados de B. bassiana obtidos na Região Centro-Oeste do Brasil. Os objetivos específicos do presente estudo foram: avaliar o potencial da cepa B. bassiana ATCC 7159 e dos isolados em produzir metabólitos da quercetina; investigar a produção de quercetina 2,3-dioxigenase pela cepa B. bassiana ATCC 7159 e pelos isolados; determinar a variabilidade genética entre os isolados de B. bassiana e estabelecer possíveis correlações entre dados moleculares e produção de quercetina 2,3-dioxigenase. Todos os isolados e a cepa B. bassiana ATCC 7159 foram capazes de metabolizar a quercetina formando compostos descritos nos estudos da metabolização deste flavonóide em mamíferos e o isolado IP 94 produziu um número maior de compostos quando comparado aos demais. B. bassiana ATCC 7159 e os isolados IP 94, IP 98, IP 129, IP 147 geraram metabólitos metilados, enquanto os isolados IP 8, IP 11 e IP 94 geraram metabólitos monoglicuronados. Todos os isolados estudados geraram metabólitos sulfatados e metabólitos metilados e glicuronados simultaneamente e foram capazes de sintetizar a enzima quercetina 2,3-dioxigenase. A síntese de quercetina 2,3-dioxigenase no meio de cultivo PDSM, utilizado para a biotransformação microbiana da quercetina, foi superior à obtida em meio mínimo. B. bassiana ATCC 7159 e os isolados IP 11 e IP 132 apresentaram maior atividade da quercetina 2,3-dioxigenase, enquanto os isolados IP 153 e IP 3a apresentaram as mais baixas. A formação dos metabólitos da quercetina e a produção de quercetina 2,3-dioxigenase não se relacionaram com a origem geográfica dos isolados. A análise da variabilidade genética por meio de RAPD permitiu dividir os isolados em três grupos distintos e mostrou elevada diversidade genética entre eles; porém, a análise por meio de RFLP-PCR da região ITS não permitiu diferenciar os isolados. A análise da sequência da região ITS confirmou a identidade dos fungos como B. bassiana. Os resultados obtidos permitiram concluir que: a biotransformação microbiana da quercetina por meio do fungo B. bassiana constitui alternativa ao uso de métodos químicos e sistemas biológicos para a produção de metabólitos da quercetina, sendo necessário otimizar o processo de biotransformação para a obtenção de quantidades expressivas dos metabólitos; B. bassiana é capaz de produzir a enzima extracelular quercetina 2,3-dioxigenase, sendo necessários estudos mais detalhados para elucidar sua via de produção, regulação e mecanismo de ação.

Formulações a base de dispersões oleosas de conídios aéreos de fungos entomopatogênicos apresentam diversas vantagens em comparação à aplicação de produtos não formulados; entretanto, a complexidade e a falta de compreensão dos fatores que influenciam a persistência desse tipo de formulação fazem com que ainda seja pouco utilizada. O efeito de diferentes níveis de secagem de conídios, tipo de óleo, métodos de extração, estabilidade de blastosporos, compatibilidade de surfactantes e adição de aditivos foram avaliados para o desenvolvimento de micopesticidas formulados em óleo. Os melhores resultados obtidos com os conídios em óleo foram avaliados quanto à proteção conferida à radiação UV e a eficiência das formulações na mortalidade de Tenebrio molitor. Zeolita foi a argila mais eficiente na manutenção da viabilidade de blastosporos de M. anisopliae e B. bassiana, e apesar de resultados promissores a estabilidade desses propágulos foi muito inferior a de conídios aéreos. Vinte surfactantes foram avaliados quanto a inocuidade aos conídios, em dois ensaios, culminando com a seleção dos quatro mais compatíveis, dois deles E5 e E7, avaliados nos experimentos posteriores demonstraram bom potencial para compor a formulação como agentes emulsionantes. Dois aditivos foram avaliados na formulação e respostas distintas foram observadas. O A1 foi altamente incompatível, enquanto diferentes concentrações de A2 (1, 3 e 5%) incrementaram a sobrevivência dos conídios em até sete vezes. As vantagens da presença do A2 ficaram evidentes também em combinações de óleo com os quatro emulsionantes selecionados. As dispersões oleosas proporcionaram sobrevivência até sete vezes superior para conídios expostos a radiação UV em relação a conídios não formulados e dois experimentos comprovaram que as formulações oleosas testadas foram mais eficientes no controle de insetos, com reduções de até 2,3 vezes no tempo de sobrevivência de insetos. Os 12 bioensaios com mais de 20.000 leituras de viabilidade descritos neste trabalho permitiram um melhor entendimento dos fatores críticos que afetam a vida de prateleira de conídios, e indicam procedimentos que podem ser utilizados para melhorar a estabilidade de micopesticidas formulados em óleo. / Oil-based formulations of aerial conidia of entomopatogenic fungi have several advantages compared to the use of unformulated products; however, the complexity and lack of understanding of the factors that influence the persistence of this type of formulation make it still not widely used. The effect of different levels of drying conidia, oil type, extraction methods, blastospores stability, compatibility of surfactants and addition of additives were evaluated for the development of a mycopesticide oil formulation. The best results obtained with aerial conidia were evaluated regarding the protection against UV radiation and the efficacy of the formulations to control Tenebrio molitor. Zeolita was the most compatible clay in maintaining the viability of blastospores of M. anisopliae and B. bassiana, and despite promising results in the stability, the shelf life of these propagules was much lower than aerial conidia. Twenty surfactants were evaluated for safety to conidia in two trials resulting in the selection of the four most compatible, two of them E5 and E8, were evaluated in subsequent experiments demonstrating good potential as emulsifiers in oil-based formulations. Two additives were evaluated in the formulation and distinct responses were observed. A1 was highly toxic to the fungi, while different concentrations of A2 increased the survival of the conidia up to seven times. The advantages of A2 were evident also in combinations of oil with the four selected emulsifiers. Oil-based formulation provided survival up to seven times higher for conidia exposed to simulated UV radiation compared to unformulated conidia, and two experiments showed that oil formulations were more efficient in the insect control, with reductions of up to 2.3 times on the survival time of insects. Twelve bioassays and over 20.000 viability readings described in this work, allowed a better understanding of the critical factors that affect the shelf-life of conidia, and indicate methods that can be used to improve the stability of mycopesticides in oil-based formulations.

Os fungos entomopatogênicos dos gêneros Metarhizium, Beauveria e Isaria (Ordem Hypocreales), são comumente encontrados em solo onde sobrevivem de maneira saprofítica ou como endofíticos do sistema radicular das plantas. Informações sobre a composição destas espécies bem como sua diversidade, distribuição e associação com diferentes tipos de cultivos e vegetação nativa são escassas no Brasil. O presente estudo foi desenvolvido para comparar a abundância de fungos entomopatogênicos e a diversidade genética de isolados de Metarhizium spp. em amostras de solo de cultivos anuais, perenes e vegetação nativa, em cinco estados brasileiros que representam os biomas Amazônia, Cerrado, Caatinga, Mata Atlântica e Pampa, em duas estações (seca e úmida) nos anos de 2012 e 2013. O isolamento dos fungos foi realizado com meio seletivo e \"Insect bait\" utilizando Galleria mellonella e Tenebrio molitor. Nos estudos de diversidade genética de Metarhizium spp. foram utilizadas sequências de DNA da região MzIGS3. Representantes dos haplótipos revelados nesta análise tiveram a região 5\'-TEF sequenciada para identificação específica. Fungos entomopatogênicos foram isolados de 86% das 1.056 amostras de solo sendo Metarhizium o gênero predominante (66% das amostras de solo), seguido por Beauveria (41,9%) e Isaria (10,8%). Em geral, as maiores densidades de fungos entomopatogênicos foram obtidas nos biomas Amazônia e Cerrado e as menores densidades detectadas no bioma Caatinga. Metarhizium spp. foi detectado em maior número de amostras de solo em vegetação nativa e cultivos anual e perene do Cerrado. A frequência de Isaria spp. foi baixa nas amostras de solo, sendo detectado em maior número de amostras nos solos com cultivos anuais e vegetação nativa na Amazônia e Caatinga. Metarhizium spp. foi geralmente encontrado em um maior número de amostras coletadas na estação úmida em comparação com as coletas da estação seca, por outro lado Beauveria spp. foi superior na estação seca. A diversidade dos isolados de Metarhizium spp. provenientes de áreas de vegetação nativa foi maior do que dos isolados de cultivos anuais e perenes. Seis linhagens foram encontradas neste estudo; M. robertsii, M. anisopliae, M. pingshaense e três espécies indeterminadas. M. robertsii foi a linhagem predominante (65% dos isolados) sendo encontrado em áreas com vegetação nativa e cultivos anual e perene dos cinco biomas. Metarhizium sp. indet. 1 apresentou a maior diversidade haplotípica dentre as linhagens estudadas. Uma nova linhagem, não caracterizada taxonomicamente, Metarhizium sp. indet. 3, foi encontrada predominantemente na Caatinga. Somente na Amazônia foram encontradas todas as linhagens. O conhecimento da composição das populações de fungos entomopatogênicos nativos bem como sobre a filogenia, diversidade e distribuição dos haplótipos de Metarhizium spp. em solos brasileiros, gerado neste estudo, poderá servir como subsídio para o desenvolvimento de estratégias de conservação e maximização do controle biológico natural de pragas. / Entomopathogenic fungi of the genera Metarhizium, Beauveria and Isaria (order Hypocreales) are associated to the soil where they survive saprofitically or as endophytes of the plants root system. Information on the species composition and its diversity, distribution and association of these fungi with different types of crops and native vegetation are scarce in Brazil. The present study was carried out to compare the abundance of entomopathogenic fungi and the genetic diversity of Metarhizium spp. Isolated from soil samples from annual and perennial crops and native vegetation in five Brazilian states that represent the biomes Amazon, Cerrado, Caatinga, Atlantic Forest and Pampa, in two seasons (wet and dry) in the years 2012 and 2013. The isolation of fungi was performed with selective medium and \"Insect bait\" using Galleria mellonella and Tenebrio molitor. DNA sequences of the region MzIGS3 were used in genetic diversity studies of Metarhizium spp. Representatives haplotypes revealed in the diversity analysis had the 5\'-TEF region sequenced for species identification. Entomopathogenic fungi were isolated from 86% of 1,056 soil samples and Metarhizium was the predominant genus (66% of soil samples), followed by Beauveria (41.9%) and Isaria (10.8%). In general, the highest densities of entomopathogenic fungi were obtained in the Amazon and Cerrado biomes and the lowest densities were detected in the Caatinga biome. Metarhizium spp. was detected in a greater number of soil samples from native vegetation and annual and perennial crops of Cerrado. The frequency of Isaria spp. was low in soil samples being detected in a greater number of soils with annual crops and native vegetation in the Amazon and Caatinga. Metarhizium spp. was usually found in a greater number of samples collected during the wet season compared to the collections in the dry season. On the other hand, Beauveria spp. was higher in the dry season. The diversity of isolates of Metarhizium spp. from areas of native vegetation was greater than that obtained from annual and perennial crops. Six lineages were found in this study; M. robertsii, M. anisopliae, M. pingshaense and three indeterminate species. M. robertsii was the predominant (65% of isolates) found in areas with native vegetation and in the annual and perennial crops of the five biomes. Metarhizium sp. indet. 1 showed the greatest haplotype diversity among the strains studied. A new strain, not characterized taxonomically, Metarhizium sp. indet. 3, was found predominantly in the Caatinga. Only in the Amazon, all lineages were found. The knowledge on species composition of entomopathogenic fungi as well as about phylogeny, diversity and distribution of haplotypes of Metarhizium spp. in Brazilian soils, generated in this study, may be useful for the development of strategies for conservation and maximization of natural biological control of pests.

La lutte biologique à l’aide de champignons entomopathogènes est une des alternatives aux insecticides de synthèse. La thèse étudie la spécificité, la persistance et la dispersion de souches du genre Beauveria ainsi que le potentiel d’une stratégie d’utilisation innovante. À l’aide de tests de pathogénicité, un premier volet décrit le spectre d’hôtes physiologique de trois souches commerciales de B. bassiana et B. hoplocheli. Ces travaux révèlent des différences significatives entre souches. Néanmoins, elles possèdent toutes un large spectre d’hôtes, qui permet notamment d’envisager une extension d’usage pour lutter contre les mouches des fruits. Le second volet explore le potentiel d’une stratégie de lutte biologique ciblant spécifiquement les femelles de la mouche du melon, basée sur l’auto-dissémination de champignons entomopathogènes en utilisant les mâles comme vecteurs de spores. À l’aide d’un dispositif expérimental original, nous démontrons que la transmission de spores des mâles aux femelles lors de l’accouplement augmente significativement la mortalité des femelles. À la Réunion, depuis 30 ans, un programme de lutte contre un ver blanc de la canne à sucre est basé sur l’utilisation de B. hoplocheli. Le troisième volet étudie, à l’aide de marqueurs microsatellites, la diversité génétique de B. hoplocheli dans un réseau de parcelles de canne à sucre sur trois ans. La diversité génétique se relève très faible et nous identifions des génotypes de souches introduites dans les années 1980. Ces résultats suggèrent que les souches introduites au début de la lutte se sont maintenues et répandues dans l’agro-système réunionnais. / Biological control using entomopathogenic fungi is one of the alternatives to chemical insecticides. The thesis studies the specificity, persistence and dispersion of Beauveria strains and the potential of an innovative use strategy. Using pathogenicity tests, a first chapter describes the host range of three commercial strains of B. bassiana and B. hoplocheli. These studies reveal significant differences between strains. Nevertheless, they all have a broad host range, which allows considering extending their use against fruit flies. The second chapter explores the potential of a biocontrol strategy specifically targeting females of the melon fruit fly, based on the auto-dissemination of entomopathogenic fungi using males as spore vectors. Using an original experimental design, we demonstrate that spore transmission from male to female during mating significantly increases female mortality. In Reunion, for 30 years, a biocontrol program for a sugarcane white grub has been based on the use of B. hoplocheli. The third chapter investigates the genetic diversity of B. hoplocheli strains using microsatellite markers in a three years survey in sugarcane fields. We reveal a very low genetic diversity and identify genotypes of strains introduced in the 1980s. These results suggest that the strains introduced at the beginning of the biological control persisted and spread in the Reunion agro-ecosystem.

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:15:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Wendell Marcelo de Souza Perinotto.pdf: 801461 bytes, checksum: 1968d4da38ce1a3b31453946416d435c (MD5) Previous issue date: 2010-02-05 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Recent studies have indicated the possibility of difference in susceptibility between different populations of ticks, while undergoing treatment with entomopathogenic fungi. To assess whether this difference actually occurs, this study intents to verify the in vitro effect of fungi Metarhizium anisopliae and Beauveria bassiana on two distinct populations of Rhipicephalus (B.) microplus collected from different properties. Experiments were conducted on engorged females, eggs and larvae. To evaluate the effect of fungi female reproductive parameters were observed. In eggs, the hatch percentage was evaluated, and in larvae, the mortality rate was analyzed. Five groups were formed (108, 107 con?dia/ml of M. anisopliae; 108, 107 con?dia/ml of B. bassiana and control group) with 10 repetitions each. The specimens were immersed in one ml of the suspension for three minutes and the control group was exposed only to diluent. The results showed that the fungi were efficient, influencing all females s reproductive parameters of both properties. To verify the susceptibility of different populations statistical analysis were carried out comparing the treatments on females of different origins. The following parameters presented significant difference: periods of the pre oviposition, larvae hatch and egg production index. Furthermore, B. bassiana was more effective than M. anisopliae on engorged female. In the bioassay with eggs the hatch percentage ranged between 3.1 and 49.5% in one property and from 3.4 to 42.7% in another, but there was no significant difference between the two populations at this stage of R. (B.) microplus. At the bioassay with larvae the mortality percentage of larvae ranged from 91.8 to 98.7% in one and 71.0 to 94,0% in another property. Moreover, the average lethal time (LT 90) ranged from 19.52 to 27.51 days in one of the properties and 22.89 to 37.31 days in the other. Through these results, it can be concluded the entomopathogenic fungi used in this study are effective in controlling this tick species. However, different populations have variation in their susceptibility to B. bassiana and M.anisopliae. / Estudos recentes indicaram a possibilidade de diferen?a na susceptibilidade entre popula??es distintas de carrapatos, quando submetidos ao tratamento com fungos entomopatog?nicos. Para avaliar se ocorre realmente essa diferen?a, foi avaliada a a??o in vitro dos fungos M. anisopliae e B. bassiana sobre duas popula??es distintas de R. (B.) microplus, oriundas de diferentes propriedades. Foram realizados bioensaios sobre f?meas ingurgitadas, ovos e larvas. Para avaliar o efeito dos fungos sobre as f?meas observaram-se os par?metros reprodutivos. Para ovos analisou-se o percentual de eclos?o das larvas e sobre larvas analisaram-se o percentual de mortalidade e tempo m?dio letal. Foram formados cinco grupos por propriedade (108, 107 con?dios/ml de M. anisopliae; 108, 107 con?dios/ml de B. bassiana e controle) com 10 repeti??es cada. No tratamento, as esp?cimes foram imersas em um ml da suspens?o testada durante tr?s minutos e o grupo controle foi exposto apenas ao diluente. Os resultados obtidos demonstraram que os fungos influenciaram na maioria dos par?metros reprodutivos das f?meas de ambas as propriedades. Para verificar a susceptibilidade das popula??es distintas, foram realizadas an?lises estat?sticas comparando os tratamentos sobre as f?meas de diferentes origens. Pode-se observar que houve diferen?a significativa nos seguintes par?metros: per?odos de pr?-postura, per?odo de eclos?o das larvas e ?ndice de produ??o de ovos. Al?m disso, pode-se observar que o isolado Bb 986 de B. bassiana foi mais patog?nico do que o isolado Ma 959 de M. anisopliae sobre f?meas ingurgitadas, promovendo um percentual de controle de 49%. No bioensaio com ovos, a redu??o do percentual de eclos?o das larvas variou entre 3,1 a 49,5% em uma propriedade e 3,4 a 42,7% em outra, por?m n?o houve diferen?a significativa entre as duas popula??es nesta fase do R. (B.) microplus. No bioensaio com larvas o percentual de mortalidade das larvas variou de 91,8 a 98,7% em uma e 71,0 a 94,0% em outra propriedade. Al?m disso, o tempo m?dio letal (LT 90) foi de 19,52 a 27,51 dias em uma das propriedades e de 22, 89 a 37,31 dias na outra. Atrav?s destes resultados, pode-se concluir que os fungos entomopatog?nicos utilizados neste estudo s?o capazes de agir sobre esta esp?cie de carrapato. No entanto, popula??es distintas apresentam varia??o na sua susceptibilidade ? B. bassiana e M. anisopliae.