Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2018-03-06T20:14:19Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Kamilla Soares Nogueira - 2015.pdf: 1269034 bytes, checksum: 57bf041ae63db9b0edaaf9382d4a5698 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-03-07T12:13:12Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Kamilla Soares Nogueira - 2015.pdf: 1269034 bytes, checksum: 57bf041ae63db9b0edaaf9382d4a5698 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-07T12:13:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Kamilla Soares Nogueira - 2015.pdf: 1269034 bytes, checksum: 57bf041ae63db9b0edaaf9382d4a5698 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-08-12 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The Chagas disease is a zoonosis of huge worldwide impact that has such as vector triatomine insects belonging to the hemiptera order and such as etiological agent Trypanosoma cruzi a flagellate that presents different evolutive manners. The evolutive manners of Trypanosoma cruzi can gain energy from various sources, for example glucose and amino acids. This capacity in gain energy from various sources lead to understand how this parasite can be able to adapt and survive in different environment, be it on the vector insects or on the vertebrate host. The aim of this work was evaluate the energetic metabolism in vitro of epimastigote forms of Trypanosoma cruzi pre and post-treatment with different concentrations of benznidazole. The parasites were grown in means of Liver infusion triptose - LIT and the organic acids referring to them energetic metabolism were measured for 3º, 6º, 9º e 12º days of growing. For evaluation of the drug effect on the parasite's metabolism was added in the growing medium the following concentrations: 100 μmolar, 50 μmolar, 25 μmolar, 12.5 μmolar e 6.25 μmolar. It was possible to detect organic acids referring to glycolytic path, oxidation of fatty acids, urea cycle and citric acid of parasites in every analyzed day. It was possible to observe that the largest concentrations of drug (25, 50 e 100μmolar) induced anaerobic way of energy production. This way before the non-detection of glicossomais and mitochondrias final products, it can conclude that one of the mechanisms of action of this drug is to prevent the aerobic metabolism of the parasite, inhibiting mitochondria paths and glicossomais. / A doença de Chagas é uma zoonose de grande impacto mundial que tem como vetor insetos triatomínios pertencentes à ordem hemíptera e como agente etiológico Trypanosoma cruzi um flagelado que apresenta diferentes formas evolutivas. As formas evolutivas de Trypanosma cruzi podem obter energia de diversas fontes, como por exemplo glicose e aminoácidos. Essa capacidade em obter energia de várias fontes leva a entender como este parasito consegue se adaptar e sobreviver em diferentes ambientes seja ele no inseto vetor ou no hospedeiro vertebrado. O objetivo deste trabalho foi avaliar o metabolismo energético in vitro de formas epimastigotas de Trypanosoma cruzi pré e pós tratamento com diferentes concentrações de benzonidazol. Os parasitos foram cultivados em meio Liver infusion triptose - LIT e os ácidos orgânicos referentes ao seu metabolismo energético foram quantificados aos 3º, 6º, 9º e 12º dias de cultura. Para avaliação do efeito do fármaco no metabolismo do parasito foi adicionado ao meio de cultura às seguintes concentrações: 100 μmolar, 50 μmolar, 25μmolar, 12.5 μmolar e 6.25μmolar. Foi possível detectar ácidos orgânicos referentes à via glicolítica, oxidação de ácidos graxos, ciclo da uréia e do ácido cítrico nos parasitos em todos os dias analisados. Foi possível observar que as maiores concentrações do fármaco (25, 50 e 100μmolar) induziram a via anaeróbia de produção de energia. Desta forma, diante da não detecção de produtos finais glicossomais e mitocondriais pode-se concluir que um dos mecanismos de ação deste fármaco é impedir o metabolismo aeróbio do parasito, inibindo vias mitocondriais e glicossomais.

A transmissão oral ganhou destaque devido aos recentes surtos que ocorreram no Brasil com a ingestão de alimentos contaminados, além dessa via outra de grande importância é a transmissão transplacentária, sendo assim o presente trabalho associou as duas formas de transmissão da doença, juntamente com o tratamento com o benzonidazol único medicamento disponível no Brasil para o tratamento da doença. O medicamente é adotado somente para o tratamento da fase aguda, porém alguns pesquisadores mostraram alguns benefícios da terapia com benzonidazol na fase crônica da doença podendo o medicamento diminuir o avanço da doença e prolongar a soro conversão negativa em pacientes intermediários. Assim o objetivo deste trabalho foi de investigar a eficácia do tratamento tanto na fase aguda quanto na fase crônica da doença, bem como o efeito do tratamento em fêmeas de fase crônica. Utilizou-se camundongos Balb/c infectados com 2 x 105 formas tripomastigotas sanguíneos da cepa RC de T. cruzi administrado via oral. Os animais de fase aguda tratados receberam 50mg/Kg/dia de benzonidazol por 16 dias enquanto que aos animais de fase crônica o tratamento se iniciou ao 3º dia de gestação sendo administrado pelo mesmo período. O curso da parasitemia sanguínea foi verificada bem como ao fim do tratamento a parasitemia tecidual em baço, fígado e coração; placenta e feto, quando havia, empregando-se as técnicas de qPCR, com dois distintos métodos de cálculos matemáticos, imunofluorescência em microscopia confocal e análise histopatológica por coloração HE. A administração de benzonidazol proporcionou a diminuição das cargas parasitárias de baço, fígado e coração elucidando a eficácia do medicamento também em fase crônica. Porém em placenta e feto o medicamento gerou aumento de parasitas teciduais nos grupos que receberam tratamento em detrimento aos que não receberam. Deste modo, podemos sugerir que o tratamento com benzonidazol pode ser indicado para minimizar a carga de parasitas ou até mesmo para sua completa erradicação em indivíduos em fase crônica. Bem como, sugerimos que o medicamento deve ser ofertado por maior tempo aos indivíduos chagásicos tanto na fase aguda quanto na fase crônica visto que apresenta melhores resultados com o prolongamento da terapia. Entrementes dissuadimos o tratamento durante o período gestacional visto que, pode induzir a diminuição das barreiras imunológicas maternas e/ou facilitar a migração parasitária para os tecidos placentários e fetais. / Chagas\' disease affect millions of people around the world and the benznidazole is the only drug for the treatment in Brazil, but it is used basically for the acute phase of the disease. Some researchers showed many benefits of benznidazole therapy in chronic phase like reduction of the progression of the disease. Therefore, the objective of this work was investigate the efficacy of treatment in both acute and chronic phase of this disease, as well as the effect of treatment of female mouse in chronic phase. Balb/c mice were infected with 2 x 105 trypomastigotes forms of RC strain of Trypanosoma cruzi by oral route. Mice in acute phase were treated with 50mg/Kg/day Benznidazole for 16 days. Some chronically-infected mice were treated by 3rd to 18th day of gestation with the same dose. Blood parasitaemias were determined by microscopic examination of tail vein blood amount. Tissues parasitism were determined by qPCR with two different mathematical forms, immunofluorescence confocal microscopy and histopathology by HE staining. Administration of benznidazole promoted decrease of parasites in spleen, liver and heart indicating the efficacy of the drug in the chronic phase. However in placenta and fetus the drug caused tissues parasites increased in the groups that received treatment. Therefore, we suggest that the treatment with benznidazole would be indicated to minimize the number of parasites or eliminate them in individuals in chronic phase. As well, we suggest that the drug should be offered for longer chagasic individuals to both acute and chronic phase because it shows better results with prolonged therapy. However, our results indicate the treatment do not be offered during pregnancy because it can induce the decrease of maternal immunological barriers and facilitate the parasite migration to the placental and fetal tissues.

Benznidazol (BZ), fármaco utilizado para o tratamento da doença de Chagas, apresenta eficácia limitada na fase crônica da doença. Falhas terapêuticas foram atribuídas majoritariamente a diferenças na suscetibilidade a BZ entre as cepas do T. cruzi. Resultados prévios de nosso grupo indicam que o gene de um transportador ABC da subfamília G, TcABCG1, encontra-se super-expresso em cepas resistentes a BZ. Transportadores ABCG foram associados a resistência a drogas em vários organismos. O objetivo central do presente estudo foi caracterizar o gene TcABCG1 em cepas de diferentes linhagens e cuja suscetibilidade a BZ foi definida. A sequência do gene TcABCG1 (1.998 pb) de 14 cepas foi determinada. Observamos algumas variações de aminoácidos na proteína ABC entre as cepas. Análises genealógicas de TcABCG1 definiram quatro clados (TcI, TcII, TcIII e Tcbat). Os dois haplótipos das cepas híbridas TcV e TcVI agruparam com os clados TcII e TcIII. Dados de imunofluorescência indireta em epimastigotas indicam que TcABCG1 está localizado em vesículas intracelulares. / Benznidazole (BZ), drug employed for Chagas disease treatment, has limited efficacy in the chronic phase of the disease. Treatment failures have been attributed mostly to differences in BZ susceptibility among T. cruzi strains. Previous data from our group indicate that one ABC transporter gene of the G subfamily, named TcABCG1, is overexpressed in BZ-resistant strains. ABCG transporters have been associated to drug resistance in several organisms. The central goal of the present study was to characterize TcABCG1 gene in strains belonging to different lineages and of defined BZ susceptibility. TcABCG1 gene sequence (1,998 bp) of 14 strains was determined. Few amino acid substitutions were detected in the ABC transporter protein among the strains. Genealogic analyses of TcABCG1 showed four distinct clades (TcI, TcII, TcIII and Tcbat). The two haplotypes of TcV and TcVI hybrid strains clustered with TcII and TcIII clades. Indirect immunofluorescence analysis in epimastigote forms indicated that TcABCG1 is localized to intracellular vesicles.

A enzima cruzaína, expressada durante todo o ciclo de vida do parasita Trypanosoma cruzi (T. cruzi), é a principal cisteíno protease desse parasita e,vem se apresentando como elemento promissor para o tratamento da doença de Chagas. Neste trabalho, sintetizamos uma série de dipeptidilnitrilas que apresentam atividade sobre a enzima cruzaína em concentrações baixo-micromolar. Esses compostos apresentam também atividade diante do parasita T. cruzi, sendo prototípico o composto 9, um dos mais potentes, capaz de inibir a enzima com IC50 de 1.89 ± 0.11 µM (pIC50 = 5.7) e, uma vez em face do parasita, IC50 de 2.7 ± 0.3 µM (pIC50 = 5.6). O composto 9 é mais potente que o fármaco benzonidazol (BZ), que foi usado como controle nos ensaios bioquímicos das nossas moléculas; o BZ apresentou pIC50 = 4.6. Os compostos 9 e 7 apresentam estrutura similar, mas exibiram diferenças significantes nos ensaios diante do T. cruzi. Eles foram rotulados mediante a incorporação de fluoróforos da família dos borodipirrometenos (Bodipy) e, finalmente, monitorados mediante microscopia confocal para identificar processos biológicos específicos ou alguma resposta celular in vitro nas moléculas. / The Cruzaíne enzyme, a cysteine protease expressed throughout the life cycle of the parasite Trypanosoma cruzi (T. cruzi), is the main cysteine protease of this parasite and has been presented as a promising target for the treatment of Chagas\' disease. In this work, we have synthesized a series of dipeptidylnitriles that have activity against the enzyme cruzaína in low-micromolar concentrations. These compounds also present activity against the parasite T. cruzi, the prototypical compound being one of our most potent compounds, which inhibits the enzyme with IC50 of 1.89 89 ± ± 0.11 µM (pIC50 pIC50 = = 5.7), and against the parasite IC50 of 2.7 7 ± ± 0.3 3 µM (pIC50 pIC50 = = 5.6), compound 9 is more potent than the drug Benzonidazole (BZ) which was used as a control in the biochemical assays of these molecules, this (BZ) had pIC50 pIC50 = = 4.6. Compounds 09 and 07 have a similar structure but showed a significant difference in the assays against the T. cruzi parasite, these two compounds were labelled by the incorporation of borodipyrromethene family fluorophores (Bodipy) and finally, they were monitored by microscopy confocal, to identify specific biological processes or some cellular response in vitro to these molecules.

Segundo a Organização Mundial de Saúde (OMS), mais de um bilhão de pessoas estão infectadas com uma ou mais doenças tropicais endêmicas encontradas especialmente entre as populações pobres da África, Ásia e América Latina. Nos últimos 25 anos, apenas 1% de todos os medicamentos desenvolvidos no mundo foram destinados ao tratamento de doenças tropicais, como a doença de Chagas. A doença de Chagas é causada por um protozoário intracelular, o Trypanosoma cruzi, e atualmente apenas dois compostos tem sido empregados para tratamento etiológico da doença de Chagas: nifurtimox e benznidazol. Entretanto, ambos os compostos apresentam considerável toxicidade sistêmica. Nesse contexto, o objetivo do presente trabalho foi desenvolver complexos híbridos de rutênio, com potencial atividade tripanocida, que possam atuar com maior eficácia em sítios biológicos específicos do Trypanosoma cruzi e com reduzida toxicidade sistêmica. Para tal efeito, moléculas com conhecida atividade microbicida como derivados aminoglicosídeos, óxido nítrico e benznidazol foram coordenados a complexos de rutênio originando as espécies Ru(desoxiestreptamina), Ru(neamina), cis-[Ru(bpy)2(Bz)(NO)](PF6)3 e cis-[Ru(NO2)(bpy)2(Bz)]PF6. Os complexos foram caracterizados por espectroscopia de absorção no UV-vis e FTIR, espectrometria de massa, análise elementar, voltametria cíclica e voltametria de pulso diferencial. Nossos estudos sugerem que os complexos Ru(desoxiestreptamina), Ru(neamina), cis-[Ru(bpy)2(Bz)(NO)](PF6)3 e cis-[Ru(NO2)(bpy)2(Bz)]PF6 apresentam propriedades químicas que suportam o sucesso da coordenação dos ligantes ao íon metálico rutênio(II) ou (III). Dentre todos os compostos estudados, cis-[Ru(NO2)(bpy)2(Bz)]PF6, apresentou maior potência tripanocida desprovida de citotoxicidade, a julgar pelos estudos in vitro. IC50 foi ao redor de 0,24 ?mol.L-1, o que é 47 vezes menor do que a droga comumente usada em tratamento de Doença de Chagas. Isto determinou avaliação in vivo, no que foi observado aumento da sobrevida dos animais infectados com tripomastigotas, para 60 dias. Os estudos desenvolvidos com complexos de rutênio no presente trabalho reafirmam o sucesso na obtenção de tais complexos inicialmente propostos, implementando importantes informações e perspectivas no que diz respeito a complexos nitrosilos de rutênio e seus potenciais terapêuticos na doença de Chagas. / Ru(bpy)2(Bz)(NO)](PF6)3 and cis-[Ru(NO2)(bpy)2(Bz)]PF6 complexes. The compounds were characterized by UV-vis absorption spectroscopy, FTIR, mass spectrometry, elemental analysis, and cyclic voltammetry and differential pulse voltammogram. The chemical characterization presented in this work gave evidencie that support the coordination of biological ligand in ruthenium ion such as in Ru(desoxiestreptamina), Ru(neamina), cis-[Ru(bpy)2(Bz)(NO)](PF6)3 and cis-[Ru(NO2)(bpy)2(Bz)]PF6 complexes. Subsequently, in vitro and in vivo studies have been conducted evaluating the cytotoxicity and trypanocidal activity of the ligands and ruthenium complexes. In vitro analysis suggested us that ruthenium complexes are greatly effective against T. cruzi. Among all complexes synthesized cis-[Ru(NO2)(bpy)2(Bz)]PF6 showed higher in vitro trypanocidal activity, which has determined the in vivo assays with this compound. IC50 was around 0,24 ?mol.L-1, which is 47 times less than usual drugs used in Chagas diseases treatment. This was performed using animals infected with T. cruzi in trypomastigote form, animal survivals until 60 days. The studies developed for ruthenium complexes reaffirm the success in obtaining of the complexes originally proposed, implementing important information and perspectives regarding the nitrosyl ruthenium complex and its therapeutic potential in Chagas disease.

Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-03-14T19:12:00Z No. of bitstreams: 1 alejandro_mh_moreno_ioc_mt_0001_2010.pdf: 339583 bytes, checksum: 457b4793ca6b03e5f5a4b94f0e5534b1 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-03-14T19:12:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 alejandro_mh_moreno_ioc_mt_0001_2010.pdf: 339583 bytes, checksum: 457b4793ca6b03e5f5a4b94f0e5534b1 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O objetivo deste trabalho é descrever a evolução eletrocardiográfica, sorológica e parasitológica de pacientes com doença de Chagas na forma indeterminada, tratados com benzonidazol, comparando-os com um grupo controle de pacientes que não receberam tratamento etiológico. Para determinação da freqüência de surgimento de alterações eletrocardiográficas durante o período de seguimento, os grupos de pacientes tratados (n = 62) e não tratados (n = 62) foram observados por, em média, 118,3 ± 61,7 meses (7333,7 pacientes-meses) e 144,51 ± 49 meses (8959,9 pacientes-meses), respectivamente. A freqüência de surgimento de alterações eletrocardiográficas foi de 8/62 (12,9%) no grupo tratado e 10/62 (16,1%) no grupo não tratado (p = 0,400), com densidades de incidência de 1,09 / 1000 pacientes-meses e 1,11 / 1000 pacientes-meses nestes dois grupos, respectivamente (risco relativo = 0,98). Não foi observada relação entre a evolução para piora eletrocardiográfica e as variáveis idade (35,2 ± 9,6 entre os que evoluíram para este desfecho e 34,8 ± 6,7 entre os que não evoluíram), sexo ou naturalidade. Para comparação da evolução dos títulos sorológicos, os grupos de pacientes tratados e não tratados foram observados por 88,7 ± 49,6 meses e 140,9 ± 47,8 meses, respectivamente. Após conversão dos títulos de diluição sorológicos para valores em uma escala linear na qual o valor 1 representa a diluição de 1:40 e o valor 6 a diluição de 1:1280, observou-se que os pacientes tratados evoluíram com uma redução significativa dos títulos (4,07 no pré-tratamento e 2,85 ao fim do acompanhamento, p < 0,001), redução esta que não foi observada entre os não tratados (4,22 no início do acompanhamento e 4,11 ao término do seguimento, p = 0,503). Embora quando comparados aos títulos observados antes da terapia específica os títulos sorológicos pós- tratamento apresentem significativa redução, estes últimos apresentam uma tendência de elevação com o passar do tempo, após 100 a 150 meses de acompanhamento. Não foi observada relação entre a evolução dos títulos sorológicos ou os títulos sorológicos iniciais e o surgimento de alterações eletrocardiográficas, assim como entre estes títulos e a naturalidade dos pacientes. No grupo tratado com benzonidazol, todos os pacientes (62) realizaram xenodiagnóstico, observando-se 32 pessoas com exames positivos (51,6%). Após o tratamento, apenas um destes pacientes permaneceu positivo. Conclui- se que, na amostra de pacientes estudada: i) os pacientes com xenodiagnóstico positivo, ao serem tratados evoluem, em sua maioria, com negativação deste exame; ii) o tratamento específico proporciona uma redução significativa dos títulos sorológicos e iii) não há relação entre o tratamento etiológico da doença de Chagas com benzonidazol e a evolução eletrocardiográfica. / The aim of this study was to describe the effect of benzonidazol treatment on the electrocardiographic, serological and parasitological evolution of patients in indeterminate form of Chagas disease. In order to do this, we retrospectively analyzed a group of 62 patients that were treated with benzonidazol and compared their clinical findings with the findings of an untreated group (n=62) with Chagas disease. The frequency of electrocardiographic alterations in the treated group was followed for 118.3 ± 61.7 months (7333.7 patients-months) and in the untreated group was followed for 144.51 ± 49 months (8959.9 patients-months). The rate of disease progression from indeterminate to the cardiac form of Chagas disease based on electrocardiographic findings was 12.9% (8/62) among treated patients and 16.1% (10/62) among untreated (p = 0.4). The incidence densities of this outcome was 1.09/1000 patients-months and 1.11/1000 patients-months in treated and untreated groups, respectively (relative risk = 0.98). There was no correlation between the progression to cardiac form and age, sex or place of birth. The serological titers of benzonidazol treated and untreated patients were followed for 88.7 ± 49.6 months and 140.9 ± 47.8 months, respectively. The titers were converted to a linear scale, where 1 represented a 1:40 dilution and 6 a 1:1280 dilution. The serological titer reduced significantly after benzonidazol treatment ((4.07 before treatment vs. 2.85 post-treatment, p < 0.001). Such reduction was not observed among untreated persons (4.22 at the beginning of the follow-up vs. 4.11 at the end, p = 0.503). Despite the observed reduction of the serological titers after benzonidazol treatment, the post-treatment titers tended to increase throughout the follow-up period, mainly after 100-150 months. Furthermore, we failed to detect a relationship between serological evolution and electrocardiographic alterations. All treated patients were submitted to xenodiagnosis and 32 proved positive. After treatment, xenodiagnosis remained positive in only one patient. We concluded that: i) parasitemia seems to be suppressed soon after specific treatment ii) treatment with benznidazole is associated with a significant reduction in serological titers, and iii) among studied patients there was no relationship between etiologic treatment and electrocardiographic evolution

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2014-07-21T18:21:23Z No. of bitstreams: 1 Marcio Cerqueira de Almeida, Avaliação da associação... 2013.pdf: 1510563 bytes, checksum: 0e9c49e3f55ccee94564fa6d382253e8 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-21T18:21:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcio Cerqueira de Almeida, Avaliação da associação... 2013.pdf: 1510563 bytes, checksum: 0e9c49e3f55ccee94564fa6d382253e8 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A doença de Chagas (DC) é causada pelo protozoário hemoflagelado Trypanosoma cruzi. Estima-se que ainda existam 10 milhões de pessoas infectadas na América Latina. Para a quimioterapia específica da DC o benzonidazol (BZ) é o medicamento de escolha. A eficácia terapêutica dos compostos atualmente em uso clínico tem sido questionada, tendo em conta os diferentes índices de cura já registrados na literatura. A associação do BZ, com medicamentos que apresentem um efeito anti-T. cruzi poderá potencializar a ação antiparasitária do mesmo e possivelmente permitirá o uso de doses menores e consequentemente diminuição dos efeitos tóxicos. O objetivo da presente investigação é avaliar o efeito do tratamento com o BZ associado aos medicamentos nifurtimox (NF) e cetoconazol (CETO), em duplas combinações, sobre o curso da infecção aguda pela cepa Y do T. cruzi, em camundongos suíços. Foram feitos três experimentos: A e B, nos quais os camundongos foram inoculados com 5 X 104 formas de tripomastigotas sanguícolas do T. cruzi e o C formado por animais não infectados. O tratamento foi feito por entubação (via oral) a partir do 6º dia pós-infecção e teve duração de 60 dias. Experimento A (A1 – controles infectados e não tratados; A2 – infectados e tratados com 100 mg/kg/dia BZ; A3 – infectados e tratados com dose inicial de 200mg/kg/dia e seguidos de 50 mg/kg/dia NF; A4 – infectados e tratados com BZ + NF); Experimento B (B1 – controles infectados e não tratados; B2 – infectados e tratados com 100 mg/kg/dia BZ; B3 – infectados e tratados com 120 mg/kg/dia CETO; B4 – infectados e tratados com BZ + CETO); Experimento C (C1 – tratados com 100 mg/kg/dia BZ; C2 – tratados com dose inicial de 200 mg/kg/dia seguido de 50 mg/kg/dia NF; C3 – tratados com 120 mg/kg/dia CETO; C4 – tratados com BZ + NF; C5 – tratados com BZ + CETO). Os níveis parasitêmicos e a mortalidade foram avaliados a partir do 6º dia pós-infecção, e trinta dias após o fim do tratamento foram realizados os testes de cura parasitológicos (parasitemia, xenodiagnóstico e hemocultura) e o teste sorológico de imunofluorescência indireta (IFI). O critério de cura foi baseado na combinação dos resultados dos testes de cura parasitológicos com a IFI. Os resultados do Experimento A indicaram uma taxa de mortalidade de 100% para o grupo controle, 5,26% para os grupos BZ e BZ + NF e 0% para o NF; o índice de cura foi de 80% para o grupo BZ, 5,26% para o NF e 100% para o BZ + NF; Os resultados do Experimento B mostraram uma taxa de mortalidade de 100% para o grupo controle, 0% para os grupos BZ e CETO, e 5,26% para o BZ + CETO; o índice de cura foi de 80% para o grupo BZ, 81,8% para o CETO e 100% para o BZ + CETO. O estudo histopatológico demonstrou que o tratamento com BZ isoladamente ou em combinação com o NF ou com o CETO determinou significativa diminuição da intensidade das lesões no miocárdio e músculo esquelético quando comparado aos controles não tratados. O grupo GC, não demonstrou alterações inflamatórias em miocárdio. Em conclusão, o tratamento combinado do BZ com outras drogas (NF e CETO) não determinou aumento significante dos índices de cura e diminuição das lesões histopatológicas do miocárdio quando comparado com o tratamento isolado com o BZ. Provavelmente, o uso neste trabalho, de doses previamente estabelecidas, influenciou no efeito das referidas associações. Novos experimentos são necessários, com o uso de doses decrescentes do BZ, para melhor avaliar o efeito das referidas combinações sobre a toxicidade da droga. / Chagas’disease (CD) is caused by the hemoflagelate protozoa Trypanosoma cruzi. It is estimated that 10 million infected people are still living in Latin America. For the specific chemotherapy of CD, the Benznidazole (BZ) is the drug of choice. However, the therapeutic efficacy of the compounds now in clinical use is not confirmed, taking into account that different cure rates have been registered. It is possible that the association of BZ with other drugs with an anti-T. cruzi action could improve its anti-parasitic effect, with the use of lower dose and consequent decrease of the toxic effects. The objective of the present investigation is to evaluate the effect of the treatment with BZ in association with the drugs Nifurtimox (NF) and Ketoconazole (CETO) in double combinations, on the evolution of the acute phase of the infection of Swiss mice, with the Y strain of T. cruzi. Three experimental groups were performed: Group A (GA) and Group B (GB) in which the mice were inoculated with 5x104 trypomastigote blood forms; Group GC of uninfected mice, submitted to the same treatment schedules. Treatment was performed by gavage (oral route) from the 6th day after infection, during 60 days; Group GA: I - infected, non treated controls; II - infected and treated with 100 mg/kg/day of BZ; III - infected and treated with NF ( initially 200 mg/kg/day, followed by 50 mg/kg/day); IV – infected and treated with BZ + NF; Group GB: I - infected, non treated controls; II - infected and treated with 100 mg/kg/day of BZ; III - infected and treated with 120 mg/kg/day CETO; IV – infected and treated with BZ + CETO; Group C: I - treated with 100 mg/kg/day of BZ; II - treated with NF ( initially 200 mg/kg/day, followed by 50 mg/kg/day); III - treated with 120 mg/kg/day CETO; IV - treated with BZ + NF; V - treated with BZ + CETO. Parasitemia and mortality were evaluated from the 6th day of infection. Thirty days after the end of treatment, parasitologic cure tests of the mice of the several groups were performed (parasitemia after Cyclophosphamide injection: 250mg/kg b.w, xenodiagnosis and hemoculture). Cure criteria was based on the combination of the results of parasitological tests and the serological titles (cut off 1:20). Results: GA – 100% of mortality for untreated control, 5,26% for sub-groups BZ and BZ +NF and 0% for NF group. Cure rate was of 80% for the subgroup BZ, 5.26%, for the NF group and 100% for the group BZ+NF Results – GB – 100% of mortality for untreated controls; 0% for the subgroups BZ and CETO and 5.26% for the group BZ + CETO. Cure rates: 80% for the subgroup BZ, 81.8% for the subgroup CETO and 100% for the group BZ + CETO. Histopatological study showed that treatment with BZ only or in combination with NF or CETO determined significant decrease in the intensity of the inflammatory lesions of the myocardium and skeletal muscles, as compared with untreated controls. However isolated treatment with NF or CETO did not determined regression of the inflammatory lesions. The group GC did not show inflammatory lesions in the myocardium or skeletal muscle. Conclusion – the combined treatment with BENZ and other drugs (NF and CETO) did not determine a significant increase of the cure indices when compared to the isolated treatment with BZ. These combinations have not determined a significant decrease of histopathological lesions of the myocardium, as compared to the treatment with BZ. Probably the use of previously established doses interferes with the analysis of the effect of the cited combinations. New experiments are necessary with the use of lower doses of BZ to a better evaluation of the efficacy and toxicity of the drug.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-03-27T17:55:05Z No. of bitstreams: 1 Marcos Lazaro Silva Guerreiro Influencia....pdf: 2165714 bytes, checksum: 9a6d8386215fdb4bd40dfb88b8b772a4 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-03-27T17:55:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Marcos Lazaro Silva Guerreiro Influencia....pdf: 2165714 bytes, checksum: 9a6d8386215fdb4bd40dfb88b8b772a4 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-27T17:55:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcos Lazaro Silva Guerreiro Influencia....pdf: 2165714 bytes, checksum: 9a6d8386215fdb4bd40dfb88b8b772a4 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A infecção pelo Trypanosoma cruzi determina uma resposta imunológica inata do hospedeiro vertebrado, decorrente da multiplicação parasitaria em macrófagos e a produção de Interferon gama (IFNy) pelas células T ativadas, além de estimulação policlonal de células do baço, com imunossupressão. Por outro lado tem sido demonstrado que o tratamento com quimioterápico Benzonidazol em camundongos infectados, além de determinar uma destruição dos parasitos, tem também uma ação sobre o sistema imunológico em camundongos infectados com cepas do T. cruzi com diferentes graus de suscetibilidade ao Benzonidazol, como a cepa Y (suscetível ao quimioterápico) e a cepa Colombiana (resistente). No presente estudo procura-se investigar a influência do tratamento com o Benzonidazol sobre a resposta imunológica em camundongos infectados com cepa suscetível (Cepa Y) ou resistente (Colombiana). Foram utilizados 320 camundongos, subdivididos em grupos experimentais: Infectados tratados cepa Y (YT) e não tratados (Y-NT); Colombiana tratados (COL-T) e não tratados (COL-NT), Tratados não infectados (TNI) e Controles sem tratamento (CI). O inóculo foi de 1,0 x 104 por via intraperitoneal. O tratamento foi iniciado no pico parasitêmico de cada cepa, sendo no 7º dia após a infecção nos animais infectados pela cepa Y e, nos tratados e não infectados, no 18º dia de infecção na cepa Colombiana. A quimioterapia foi realizada em 60 doses (100mg/kg/dia de Benzonidazol-Benz). Os camundongos sacrificados na fase aguda e na fase crônica em todos os grupos tiveram as secções de coração e músculo esquelético coletadas, fixadas e processadas para o estudo histopatológico em secções coradas pela Hematoxilina & Eosina e Picro-Sirius. Investigou-se a resposta humoral pela sorologia (Imunofluorescência indireta) e pela reação de Elisa. A resposta celular pela proliferação celular do baço, e pela avaliação quantitativa das subpopulações celulares no baço de CD4+, CD8+, células de memórias CD62L, células B e macrófagos. Também foi investigada a hipersensibilidade tardia pelo teste cutâneo (DTH). Os títulos sorológicos variaram de negativo a 1/640 YT, de 1/80 a 1/640 COL-T, de 1/80 a 1/2560 COL-NT, de negativo a 1/10 nos grupos TNI e CI. A dosagem das imunoglobulinas IgM, IgG1, IgG2a e IgG total, mostraram-se mais elevadas no grupo COL-NT em relação aos grupos avaliados. A dosagem das citocinas circulantes IL-6 IL-10, MCP-1, INF-γ e TNF-α, foram mais elevados na cepa Y, e o tratamento com Benz, não foi capaz de alterar os índices circulantes nos animais TNI. As análises citométricas do baço na fase aguda demonstraram maior frequência de CD4+ e CD8+ no grupo TNI; de células de memória (CD62L/CD4 e CD8) no grupo YT; de CD11b no grupo COL-NT fase aguda e na YT na fase crônica; e de células B (B220) no grupo CI. Na fase crônica foi evidenciado maior frequência de CD4+ e CD8+ no grupo COL-T; de células de memória: (CD4/CD62L) no grupo YT e (CD8/CD62L) no COL-T; de CD11b no YT; e de células B (B220) CI. Em nossos resultados constatamos pela análise dos infiltrados inflamatórios (miocárdio e músculo esquelético) lesões mais extensas no grupo COL-NT em relação a todos os grupos analisados (COL-T, YT). A análise do teste cutâneo de hipersensibilidade tardia demonstrou maior celularidade evidenciada pelos infiltrados inflamatórios e pelo edema nos tempos de 48 e 72 horas no grupo YT. Nossos resultados sugerem que o tratamento com Benz tem influência sobre a resposta imunológica em camundongos. / Infection with T. cruzi determines an immunological response in the vertebrate host, wit h parasites multiplication in macrophages, with production of TNFα by these cells an IFNγ, by stimulated T. cells: a polyclonal multiplication of spleen cells is present, with immunossuppression. Treatment of infected mice with BENZ showed that this chemotherapy determines parasitic destruction and also stimulates the immunological system in mice infected either with the Y or the Colombian strain which differs in the susceptibility to chemotherapy with BENZ. In the present study we intend to investigate the influence of treatment with BENZ on the immunological response in mice infected either with the Y strain (susceptible) or the Colombian strain (resistant). This study was performed by comparing the results obtained with the groups of mice not infected and treated, and infected controls, not treated. Material and methods : Number of animals: 320, sub-divided in the experimental groups:Ystrain infected and treated with BENZ(YT) or not-treated (YNT); Colombian treated (COL-T) and not-treated (COL-NT); treated not infected (TNI); Control not treated (COL-NT). Inoculum : 1x104 trypomastigotes, (blood forms) injected intraperitoneally. Treatment was initiated in the peak of parasitemia for each strain:7th day for the Y strain and in the 18th day in the infection with the Colombian strain. Chemotherapy was performed in 60 doses (100mg x kg x day) of BENZ. Mice were killed in the acute and chronic phases post infection; sections of the heart and skeletal muscles were collected, fixed and processed for histopathology, in sections stained with Hematoxylin and Eosin, and with Picro-Sirius staining, for collagen. The humoral response was evaluated by serological reactium of indirect immununofluorescence and ELISA reaction. Celular responses were evaluated by celular proliferation in the spleen of CD4+, CD8+ and memory cells (CD62L) macrophages and B cells. DTH was evaluated by intradermal skin teste. Serological titles varied in ted several grupos follows: YT: 0 - 1/640; COL-T: 1/80 to 1/640; COL-NT: 1/80 to 1/2560; TNI and CI: 0 – 1/10. Immunoglobulins leves (IgM, IgG1, IgG2a and total IgG) were higher in the groups COL-NT as ampered with the other groups. Evaluation of serum cytokines leves (IL-6, IL-10, MCP-1, IFN-γ and TNF-α): They were higler in mice infected with the Y strain. Treatment with Benzonidazole/BENZ did not influence the levels of cytokines in the group TNI. Cytometric analysis of the spleen in the acute phase showed a higher frequency of CD4+ and CD8+ cells in the group TNI; B cells (B220) in the CI group. In the chronic phase it has been show a higler frequency of CD4+ AND CD8+ in the groups COL-T; memory cells (CD4/CD62L) in the group YT; CD8/CD62L in the group COL-T; CD11B in the group COL-T acute phases the YT acute chronic . Histopathology of the heart and muscles showed presence of inflammatory infiltrates more intense in the group COL-NT as compared whit the several groups. The Skin Test for DTH revealed a higler cellularity of the inflammatory infiltrates in the groups YT, with 48 and 72 hours. Results suggest an influence of treatment with BENZ on the immunological response.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A doenÃa de Chagas (DC) à uma patologia de natureza endÃmica, causada pelo protozoÃrio Trypanosoma cruzi, com pronunciada relevÃncia entre as doenÃas cardÃacas. Foi descrita oficialmente em 1909 e mesmo apÃs mais de um sÃculo de sua descoberta ainda representa um problema de saÃde pÃblica. O objetivo deste trabalho foi avaliar a efetividade da quimioterapia com Benzonidazol (Bz) em pacientes chagÃsicos crÃnicos atravÃs de anÃlise sorolÃgica e eletrocardiogrÃfica. Trata-se de um estudo prospectivo nÃo concorrente e concorrente, onde os pacientes foram acompanhados sorologicamente uma vez ao ano depois do tratamento, a partir de 2005, 2006 ou 2007 (antes do tratamento) atà 2011. A avaliaÃÃo eletrocardiogrÃfica foi realizada no inÃcio (2005 a 2007) e final da pesquisa (2011). Os pacientes foram tratados com Bz na dosagem de 5mg/Kg/dia em duas a trÃs tomadas diÃrias durante 60 dias. A anÃlise sorolÃgica foi realizada atravÃs das tÃcnicas de ELISA (Ensaio ImunoenzimÃtico) e IFI (ImunofluorescÃncia indireta). A avaliaÃÃo eletrocardiogrÃfica foi feita atravÃs dos eletrocardiogramas (ECG) realizados no Hospital UniversitÃrio Walter CantÃdio e disponÃveis nos prontuÃrios dos pacientes. Foram acompanhados 31 pacientes, 20 (64,5%) do sexo masculino e 11 (35,5%) do feminino, de 25 a 64 anos, dos quais 51,6% (16/31) cursaram o primeiro grau incompleto e 22,6% (7/31) eram agricultores. A anÃlise sorolÃgica atravÃs do teste ELISA demonstrou queda significativa da densidade Ãptica das amostras coletadas antes (2005 a 2007) em relaÃÃo Ãs amostras pÃs-tratamento (2011). Com relaÃÃo à IFI, os pacientes mantiveram-se inalterados durante o segmento (variaÃÃo de no mÃximo uma diluiÃÃo entre a amostra basal e 2011). No que diz respeito à avaliaÃÃo eletrocardiogrÃfica, 76,2% (16/21) apresentaram manutenÃÃo dos laudos eletrocardiogrÃficos ao longo do estudo, com exceÃÃo de cinco casos. Um dos pacientes excluÃdo da anÃlise eletrocardiogrÃfica (nÃo existia ECG realizado em 2011) necessitou de um implante de desfibrilador ao longo do acompanhamento (2010). Em conclusÃo, pode-se afirmar que embora o Bz apresente efetividade limitada em pacientes na fase crÃnica da DC, este estudo demonstrou um efeito benÃfico do medicamento na maioria dos pacientes acompanhados, jà que a maioria destes apresentou manutenÃÃo dos laudos eletrocardiogrÃficos e a sorologia mostrou uma tendÃncia à queda. Entretanto, faz-se necessÃrio um perÃodo maior de segmento, jà que o tempo de acompanhamento deste estudo (5 a 7 anos) à considerado curto para pacientes na fase crÃnica da doenÃa. / Chagas disease (CD) is a pathology of endemic nature, caused by the protozoan Trypanosoma cruzi, with pronounced relevance between heart disease. It was officially described in 1909 and even after more than a century of its discovery is still a public health problem. The aim of this study was to evaluate the effectiveness of chemotherapy with Benznidazole (Bz) in patients with chronic Chagas disease by serological analysis and electrocardiography. This is a prospective non-concurrent and concurrent study, where patients were followed serologically once a year after treatment, from 2005, 2006 or 2007 (before treatment) until 2011. The electrocardiographic evaluation was performed at baseline (2005-2007) and end of the study (2011). The patients were treated with Bz in dose of 5mg/kg/day in two to three daily doses for 60 days. The serological analysis was conducted, through the techniques of ELISA (enzyme immunoassay) and IIF (indirect immunofluorescence). The electrocardiographic evaluation was performed at the University Hospital Walter CantÃdio through the electrocardiograms (ECG) available in patient charts. This study followed 31 patients, 20 (64,5%) male and 11 (35,5%) female, from 25 to 64 years, where 51.6% (16/31) did not finish high school and 22,6% (7/31) were farmers. Serological analysis by ELISA demonstrated a significant decrease in the optical density of the samples collected before (2005 to 2007) when compared with the samples after treatment (2011). Now with regard to IIF, patients remained unchanged during the segment (variation in a maximum of a dilution of the sample between baseline and 2011). Regarding the electrocardiographic evaluation, 76.2% (16/21) showed maintenance of electrocardiographic reports throughout the study, with the exception of cinco cases. One patient was excluded from analysis electrocardiographic (there wasnât ECG performed in 2011) required a defibrillator implantation during follow-up (2010). In conclusion, one can say that although Bz presents limited effectiveness in patients in the chronic phase of CD, this study demonstrated a beneficial effect of the drug in most followed patients, as the majority of these reports showed maintenance of electrocardiographic and serology showed a downward trend. However, it is necessary a longer segment, since the follow-up period of this study (5-7 years) is considered short for patients in the chronic phase of the disease.

A transmissão oral ganhou destaque devido aos recentes surtos que ocorreram no Brasil com a ingestão de alimentos contaminados, além dessa via outra de grande importância é a transmissão transplacentária, sendo assim o presente trabalho associou as duas formas de transmissão da doença, juntamente com o tratamento com o benzonidazol único medicamento disponível no Brasil para o tratamento da doença. O medicamente é adotado somente para o tratamento da fase aguda, porém alguns pesquisadores mostraram alguns benefícios da terapia com benzonidazol na fase crônica da doença podendo o medicamento diminuir o avanço da doença e prolongar a soro conversão negativa em pacientes intermediários. Assim o objetivo deste trabalho foi de investigar a eficácia do tratamento tanto na fase aguda quanto na fase crônica da doença, bem como o efeito do tratamento em fêmeas de fase crônica. Utilizou-se camundongos Balb/c infectados com 2 x 105 formas tripomastigotas sanguíneos da cepa RC de T. cruzi administrado via oral. Os animais de fase aguda tratados receberam 50mg/Kg/dia de benzonidazol por 16 dias enquanto que aos animais de fase crônica o tratamento se iniciou ao 3º dia de gestação sendo administrado pelo mesmo período. O curso da parasitemia sanguínea foi verificada bem como ao fim do tratamento a parasitemia tecidual em baço, fígado e coração; placenta e feto, quando havia, empregando-se as técnicas de qPCR, com dois distintos métodos de cálculos matemáticos, imunofluorescência em microscopia confocal e análise histopatológica por coloração HE. A administração de benzonidazol proporcionou a diminuição das cargas parasitárias de baço, fígado e coração elucidando a eficácia do medicamento também em fase crônica. Porém em placenta e feto o medicamento gerou aumento de parasitas teciduais nos grupos que receberam tratamento em detrimento aos que não receberam. Deste modo, podemos sugerir que o tratamento com benzonidazol pode ser indicado para minimizar a carga de parasitas ou até mesmo para sua completa erradicação em indivíduos em fase crônica. Bem como, sugerimos que o medicamento deve ser ofertado por maior tempo aos indivíduos chagásicos tanto na fase aguda quanto na fase crônica visto que apresenta melhores resultados com o prolongamento da terapia. Entrementes dissuadimos o tratamento durante o período gestacional visto que, pode induzir a diminuição das barreiras imunológicas maternas e/ou facilitar a migração parasitária para os tecidos placentários e fetais. / Chagas\' disease affect millions of people around the world and the benznidazole is the only drug for the treatment in Brazil, but it is used basically for the acute phase of the disease. Some researchers showed many benefits of benznidazole therapy in chronic phase like reduction of the progression of the disease. Therefore, the objective of this work was investigate the efficacy of treatment in both acute and chronic phase of this disease, as well as the effect of treatment of female mouse in chronic phase. Balb/c mice were infected with 2 x 105 trypomastigotes forms of RC strain of Trypanosoma cruzi by oral route. Mice in acute phase were treated with 50mg/Kg/day Benznidazole for 16 days. Some chronically-infected mice were treated by 3rd to 18th day of gestation with the same dose. Blood parasitaemias were determined by microscopic examination of tail vein blood amount. Tissues parasitism were determined by qPCR with two different mathematical forms, immunofluorescence confocal microscopy and histopathology by HE staining. Administration of benznidazole promoted decrease of parasites in spleen, liver and heart indicating the efficacy of the drug in the chronic phase. However in placenta and fetus the drug caused tissues parasites increased in the groups that received treatment. Therefore, we suggest that the treatment with benznidazole would be indicated to minimize the number of parasites or eliminate them in individuals in chronic phase. As well, we suggest that the drug should be offered for longer chagasic individuals to both acute and chronic phase because it shows better results with prolonged therapy. However, our results indicate the treatment do not be offered during pregnancy because it can induce the decrease of maternal immunological barriers and facilitate the parasite migration to the placental and fetal tissues.