O objetivo do trabalho foi avaliar a técnica de biópsia retal em equinos e as alterações histopatológicas encontradas na mucosa retal em animais clinicamente saudáveis e em animais com alterações do trato gastrintestinal. Foram utilizados 32 equinos divididos em três grupos: 10 animais clinicamente saudáveis (grupo 1), sete animais com alterações do trato gastrintestinal com diagnóstico estabelecido (grupo 2) e 15 animais com manifestações clínicas inespecíficas do trato gastrintestinal (grupo 3). Os equinos do grupo 1 foram biopsiados duas vezes, a segunda biópsia sendo realizada 48 horas após a primeira. As biópsias retais foram realizadas com os animais em estação, utilizando-se pinça de biópsia tipo jacaré. As amostras de mucosa retal foram coradas por hematoxilina-eosina (HE), azul de alciano com ácido periódico de Schiff a 2,5% e azul de toluidina. No grupo 1, não foram observadas diferenças significativas entre a primeira e a segunda biópsia, mas três equinos apresentaram pequenas alterações que podem ser decorrentes da palpação retal. Na primeira avaliação, sete animais desse grupo apresentaram padrão semelhante, permitindo estabelecer um padrão de normalidade histológica para a mucosa retal: epitélio superficial preservado; criptas uniformes e alinhadas perpendicularmente à superfície com grande número de células caliciformes com mucinas ácidas em maior quantidade; linfócitos intra-epiteliais na superfície do epitélio em número de até 15 linfócitos para cada 100 colonócitos; pequeno número de linfócitos, plasmócitos e eosinófilos infiltrando a lâmina própria e a submucosa. Os outros três equinos deste grupo apresentaram um aumento na intensidade das células inflamatórias (discreto a moderado na intensidade de linfócitos e plasmócitos na lâmina própria e submucosa, e moderado na intensidade dos eosinófilos na submucosa). Os equinos do grupo 2, todos com síndrome cólica, apresentaram as seguintes alterações histopatológicas: proctite linfoplasmocítica simples (4/7) e proctite eosinofílica (1/7). No grupo 3 (12 equinos com diarreia crônica e três com emagrecimento progressivo), apenas um animal apresentou mucosa retal com padrão de normalidade. Nos outros animais foram observadas: proctite linfoplasmocítica simples (6/15), proctite erosiva (3/15), proctite linfoplasmocítica com aumento de neutrófilos (2/15), proctite eosinofílica (2/15), proctite linfoplasmocítica com aumento de neutrófilos e eosinófilos (1/15) e infiltração por linfócitos atípicos/linfoma (1/15). Concluiu-se que: a técnica de biópsia retal avaliada é de fácil execução e segura; embora algumas alterações histológicas possam ser observadas na mucosa retal de equinos clinicamente saudáveis, causadas ou não por palpação retal, há um padrão de normalidade que deve ser usado para a avaliação de equinos com alterações gastrintestinais; apenas em alguns casos as alterações histológicas encontradas na mucosa retal em equinos permitem um diagnóstico definitivo, mas elas podem direcionar o raciocínio diagnóstico em outros, sendo este um importante exame complementar a ser indicado em casos de equinos com alterações gastrintestinais inespecíficas. / The purpose of this study was to asses the rectal biopsy techique in horses and the histopathological changes found in the rectal mucosa in clinically healthy animals and in animals with clinical signs of intestinal disorders. 32 horses were divided into three groups: 10 animals clinically healthy (group 1), seven animals with gastrointestinal disorders with an established diagnosis (group 2) and 15 animals with nonspecific clinical manifestations of the gastrointestinal tract (group 3). The horses in group 1 had two biopsies, the second biopsy was performed 48 hours after the first. Rectal biopsies were performed on the animals station, using alligator biopsy forceps. The samples of rectal mucosa were stained with hematoxylin end eosin (HE), alcian blue PAS pH 2.5% and toluidine blue. In group 1, no significant differences between the first and second biopsy were observed, but three horses showed small changes that may result from rectal palpation. In the first evaluation, seven animals of this group showed a similar pattern, establishing a standard of normality for histological rectal mucosa: Surface epithelial preserved; crypts of uniform length, diameter and perpendicular arrangement to the surface with acid mucins strongly dominated over neutral mucins in the goblet cell population; intraepithelial lymphocytes in the surface of the epithelium with sparse population of approximately 15 cells per stretch of 100 epithelial cells; sparse individual lymphocytes, plasma cells and eosinophils infiltrating the lamina propria and submucosa. The other three horses in this group had an increase in the intensity of inflammatory cells (mild to moderate in intensity of lymphocytes and plasma cells in the lamina propria and submucosa, and moderate intensity of eosinophils in the submucosa). The horses in group 2, all with colic syndrome, showed the following pathological changes: simple lymphocyticplasmacytic proctitis (4/7) and eosinophilic proctitis (1/7). In group 3 (12 horses with chronic diarrhea and three with progressive weight loss), only one animal showed rectal mucosa with normal histology. It was observed in the other animals: simple lymphocytic-plasmacytic proctitis (6/15), erosive proctitis (3/15), lymphocyticplasmacytic proctitis with increased neutrophils (2/15), eosinophilic proctitis (2/15), lymphocytic-plasmacytic proctitis with increased neutrophils and eosinophils (1/15) and atypical lymphocytes infiltration/lymphoma (1/15). It was concluded that: the rectal biopsy technique evaluated is effective and safe; although some histological changes can be observed in the rectal mucosa of clinically healthy horses, whether or not caused by rectal palpation, there is a normal range that should be used to the evaluation of horses with gastrointestinal disorders; only in some cases the histological changes found in the rectal mucosa in horses allow a definitive diagnosis, but they can lead to a diagnostic logic in others, which is an important complementary test to be indicated in cases of horses with nonspecific gastrointestinal disturbances.

Apesar do grande desenvolvimento das biotecnologias da reprodução animal, como a produção in vitro de embriões (PIV), o diagnóstico genético pré-implantacional (PGD) ainda é aplicado com restrição na rotina da transferência de embriões em animais. Os recentes avanços da genômica têm permitido associar características fenotípicas com informações moleculares, possibilitando a realização da seleção assistida por marcadores moleculares. O objetivo do presente estudo foi de realizar o PGD de embriões bovinos em plataforma de alta densidade de SNP (BeadChip/6.909 SNP). A pequena quantidade de DNA genômico (gDNA) obtida na biópsia embrionária é a principal limitação para a análise de grande número de SNP. Dessa forma, a metodologia de amplificação total do genoma (WGA) (Repli-g Mini Kit, Qiagen, Hilden, Alemanha) foi utilizada para aumentar a quantidade de gDNA da biópsia e permitir a análise de milhares de SNP simultaneamente. Foram utilizados 88 embriões bovinos PIV, submetidos à micromanipulação pela técnica de microaspiração, possibilitando a formação de 3 grupos com diferentes números de células biopsiadas: G1) 5-10 (n=28); G2) 10-20 (n=37); G3) >100 - blastocisto eclodido (n=23). Todas as amostras foram submetidas ao mesmo protocolo de WGA e 4&micro;L de cada amostra foram utilizados para a genotipagem em plataforma iScan/Illumina. A qualidade dos genótipos foi avaliada pela análise do Call Rate (CR), 10o percentil do GCScore (GC10), Alelle Drop In (ADI) e Alelle Drop Out (ADO). O teste de Kruskal-Wallis foi utilizado para investigar diferenças na distribuição das variáveis entre os grupos. O coeficiente de correlação de postos de Spearman revelou correlação significativa entre todas as variáveis. Os resultados apresentaram correlação positiva entre o CR e GC10 (0,99/P<0,001), enquanto as taxas de ADI e ADO apresentaram correlação negativa com o CR e CG10 (ADI/CR: - 0,87; ADI/GC10:-0,88; ADO/CR:-0,87; ADO/GC10:-0,86), com P<0,001 para todas as variáveis. O teste de Kruskal-Wallis apontou para diferença significativa em todas as variáveis analisadas (CR, GC10, ADI e ADO) entre os 3 grupos de biópsias (G1, G2 e G3). O CR médio foi de 59,26%, 78,47% e 95,97%, para G1, G2 e G3, respectivamente. Foi desenvolvido programa computacional (mendelFix) baseado na Lei da Segregação, para inferência dos genótipos não determinados baseado no genótipo do progenitores, aumentando o CR dos grupos 1, 2 e 3 para 79,69%, 88,20% e 97,28%, respectivamente. Os resultados do presente estudo permitem concluir que é possível realizar a genotipagem de embriões bovinos em plataforma de alta densidade de SNP com amostras submetidas ao protocolo WGA/MDA, mas o número de células obtidas na biópsia embrionária afeta a qualidade da genotipagem. A associação das biotecnologias descritas no presente trabalho permite a aplicação da seleção assistida por marcadores moleculares em embriões bovinos, contribuindo para acelerar ainda mais o processo de melhoramento genético animal. / Despite the great development of animal reproduction biotechnology, such as embryo in vitro production (IVP), preimplantation genetic diagnosis (PGD) is still applied with restraint in animals embryo transfer. Recent advances in genomics have associated phenotypic characteristics with molecular information, allowing the development of marker assisted selection. The aim of this study was to perform PGD in bovine embryos using high-throughput SNP platform (BeadChip/6,909 SNP). The small amount of genomic DNA (gDNA) obtained from embryo biopsy is the main limitation for the high-density SNP analysis. Thus, the Whole Genome Amplification (WGA) (Repli-g Mini Kit, Qiagen, Hilden, Germany) was used to increase the amount of gDNA from embryo biopsy and allow the analysis of thousands SNP simultaneously. Eighty-eight IVP bovine embryos were subjected to micromanipulation by microaspiration, allowing the formation of three groups with different numbers of biopsied cells: G1) 5-10 (n=28); G2) 10-20 (n=37); G3) > 100 - hatched blastocyst (n = 23). All samples were subjected to the same WGA protocol, and 4&micro;L of each sample were used for genotyping on iScan/Illumina platform. The genotyping quality was assessed using the Call Rate (CR), 10th percentile GCScore (GC10), Alelle Drop In (ADI) and Alelle Drop Out (ADO). Kruskal-Wallis test was applied to investigate differences in the distribution of variables among groups. Spearman`s rank correlation coefficient revealed a significant correlation between all variables. The results showed a positive correlation between CR and GC10 (0.99/P <0.001), while ADI and ADO rates were negatively correlated with CR and CG10 (ADI/CR: -0.87; ADI/GC10: - 0.88; ADO/CR: -0.87; ADO/GC10: -0.86), P<0.001 for all variables. Kruskal Wallis pointed to significant differences in all variables (CR, GC10, ADO and ADI) among the 3 groups of biopsies (G1, G2 and G3). The CR average was 59.26%, 78.47% and 95.97% for G1, G2 and G3, respectively. Was developed a script (mendellFix) based on the \"Law of Segregation\", for inference of not determined genotypes based on the parents genotypes, thus increasing the CR of group 1, 2 and 3 to 79.69%, 88.20% and 97 28%, respectively. The results of this study show that it is possible to perform the genotyping of bovine embryos in highthroughput SNP platform with samples subjected to WGA/MDA protocol, but the number of cells obtained by embryo biopsy affects the quality of genotyping. The association of biotechnologies described in this work allows the application of marker-assisted selection in bovine embryo, contributing to further accelerate the process of animal breeding.

O presente estudo teve como objetivos avaliar a sensibilidade, a especificidade e a acurácia da Punção Aspirativa por Agulha Fina (PAAF) em nódulos submucosos da cavidade bucal e da região de cabeça e pescoço como ferramenta auxiliar de diagnóstico. Foram selecionados 50 pacientes consecutivamente que procuraram a Clínica da Disciplina de Estomatologia Clínica da FOUSP, portadores de lesões em boca e em região de cabeça e pescoço. O material obtido pela PAAF foi enviado a um mesmo patologista apenas com o diagnóstico clínico e após a emissão do laudo da PAAF o laudo do anátomo patológico era emitido servindo como padrão ouro. Após os cálculos, o resultado da sensibilidade foi de 75%, a especificidade foi de 96%, a acurácia foi de 58,8%, o valor preditivo positivo foi de 86% e o valor preditivo negativo foi de 93%. A significância foi estabelecida para 5% e o teste usado foi o teste de Kappa com valor de P<0,001 e um teste qui-quadrado, com valor de P=0,788. Pela análise dos resultados a PAAF teve uma alta sensibilidade para identificar lesões malignas, uma alta especificidade para identificar lesões benignas e uma baixa acurácia para se obter um diagnóstico definitivo. / The objectives of this present study are to evaluate the sensitivity, specificity and accuracy of Fine Needle Aspiration Biopsy (FNAB) in submucous nodules of oral cavity and nodules of head and neck region as an auxiliary tool of diagnoses. 50 patients that looked for the Clinic of the Discipline of Oral Stomatology of FOUSP were consecutively selected, carrying lesions in the oral cavity and the head and neck region. The material obtained by FNA was sent to only one pathologist with the clinical diagnosis and after the emission of FNAB report the biopsy report was emitted serving as the gold standard. After the calculation, the results of sensibility was 75%, the specificity was 96%, the accuracy was 58,8%, the positive predict value was 86% and the negative predict value was 93%. The significance was established for 5% and the tests used was Kappa with P<0,001 and a Chi-square with a P value of 0,778.With the results analysis the FNAB had a high sensibility to identify malignant lesions, a high specificity to identify benign lesions and a low accuracy to obtain final diagnoses.

Submitted by Filipe dos Santos (fsantos@pucsp.br) on 2018-04-18T11:34:24Z No. of bitstreams: 1 Cassiano Tamura Vieira Gomes.pdf: 1441081 bytes, checksum: c7102b6f4f5dc3b087cd53e1eb7927c0 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-18T11:34:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cassiano Tamura Vieira Gomes.pdf: 1441081 bytes, checksum: c7102b6f4f5dc3b087cd53e1eb7927c0 (MD5) Previous issue date: 2018-03-09 / Introduction: It is through the biopsy of skin that we can obtain material for the study histopathological of cutaneous lesions, which is an important subsidiary examination, sometimes fundamental, for conducting different dermatitis and clinical situations with dermatological involvement. However, we observe that even in necessary clinical situations, rarely physicians not experts indicate or perform this propaedeutic instrument. We believe that this occurs due to the fact that they do not feel empowered to indicate or perform such a procedure. Objective: We intend to evaluate how the residents of Medical Clinic (RCM) have previously been in relation to this situation, and then propose a theoretical and practical qualification and re-evaluate them afterwards. Methodology: Initial questionnaire addressed to the RCM, on how they feel about the theme, their experiences and knowledge about skin biopsy, followed by theoretical and practical training with simulation of procedure in anatomical pigs’ feet. Subsequent evaluation, two weeks from the initial intervention, through a questionnaire in which the resident is positioned in relation to the situations of indication and the realization of the biopsy, and revaluation of his performance. Quantitative analysis of the number of correct responses in the initial and final questionnaires. Individual analysis of the perception of residents in front of the inclusion of skin biopsy as a propaedeutic instrument of their future practice as clinical. Results/Conclusion: The intervention included nine residents of the Medical Clinic Residency program at the Faculty of Medical Sciences and Health of PUC/SP. Four RCM that participated in the study, felt fit to indicate a skin biopsy and none of them felt able to perform such a procedure alone. After training everyone responded to feel fit to indicate the procedure, claiming to find a procedure, useful, safe and easy to accomplish. A RCM consider himself unable to perform the procedure alone because it requires more training and eight consider theirselves able / Introdução: É através da biópsia de pele que podemos obter material para o estudo histopatológico de lesões cutâneas, a qual é um importante exame subsidiário, por vezes fundamental, para condução de diferentes dermatoses e situações clínicas com envolvimento dermatológico. Porém, observamos que mesmo em situações clínicas necessárias, raramente os médicos não especialistas indicam ou executam este instrumento propedêutico. Acreditamos que isto ocorra devido ao fato de que eles não se sentem habilitados a indicar ou realizar tal procedimento. Objetivo: Pretendemos avaliar como os residentes de clínica médica (RCM), previamente se encontram em relação a esta situação, para em seguida propor uma capacitação teórica e prática e reavaliá-los posteriormente. Metodologia: Questionário inicial dirigido aos RCM, sobre como se sentem em relação ao tema, suas experiências e conhecimentos sobre biópsia de pele, seguido de capacitação teórica e prática com simulação de procedimento em peça anatômica de pata de porco. Avaliação posterior, realizada duas semanas após a intervenção inicial, através de questionário em que se investiga como o residente se posiciona em relação às situações de indicação e para a realização da biópsia, e reavaliação de seus desempenhos. Análise quantitativa do número de respostas corretas nos questionários inicial e final. Análise individual da percepção dos residentes frente à inclusão da biópsia de pele como instrumento propedêutico de sua futura prática como clínico. Resultados/Conclusão: A intervenção incluiu nove residentes do Programa de Residência Médica de Clínica Médica da Faculdade de Ciências Médicas e da Saúde da PUC/SP. Quatro RCM que participaram do estudo, se sentiam aptos a indicar uma biópsia de pele e nenhum deles se sentia apto a realizar tal procedimento sozinho. Após o treinamento todos responderam se sentirem aptos à indicação do procedimento, alegando em sua maioria acharem um procedimento, útil, seguro e de fácil realização. Um RCM se considera inapto a realizar sozinho o procedimento por necessitar de mais treinamento e oito se consideram aptos

Os objetivos deste estudo são: 1) avaliar a capacidade de se demonstrar, através da ultra-sonografia, microcalcificações agrupadas, previamente identificadas pela mamografia. 2) identificar parâmetros mamográficos dos agrupamentos de microcalcificações e correlacionar com a positividade da ultra-sonografia na caracterização destas lesões. 3) avaliar a possibilidade de a ultra-sonografia mamária servir de guia de biópsias dirigidas, através de agulha grossa (biópsia percutânea de fragmento - \"core biopsy\"), nestas lesões. Entre dezembro de 2000 e abril de 2002, foram avaliadas através da ultra-sonografia, 68 pacientes com 70 focos de microcalcificações agrupadas na mamografia, suspeitas para neoplasia maligna, classificadas segundo critério de BI-RADSTM nas categorias 4 e 5, sem outras alterações mamográficas associadas, como distorções ou massas. Características das lesões na mamografia, como tamanho e profundidade do foco, foram avaliadas e os exames ultra-sonográficos foram classificados como positivos, quando as microcalcificações foram claramente identificadas e, negativos, quando não identificadas. Nas lesões positivas foram realizadas biópsias percutâneas de fragmento (\"core biopsy\"), através da ultra-sonografia e radiografia dos fragmentos. Nas negativas, os procedimentos foram guiados pela esterotaxia. Características ultra-sonográficas das lesões positivas foram analisadas e resultados anatomopatológicos foram correlacionados. Dos 70 focos de microcalcificações, 26 foram identificados através da ultra-sonografia (37,1%), sendo submetidas a biópsias guiadas pela ultra-sonografia e 44 não foram identificadas (62,9%). O tamanho médio dos focos de microcalcificações foi significativamente maior nos casos positivos ao ultra-som - 14,0 mm, em relação aos negativos - 7,6 mm (p< 0,001). Na avaliação da profundidade dos focos, a identificação positiva pela ultra-sonografia foi significativamente maior nos casos de lesões no terço anterior, mais superficiais (16/26 - 61,5%) em relação às intermediárias (8/26 - 30,8%) e nas posteriores, mais profundas (2/26 - 7,7%) - Chi Square (p< 0,002). Avaliando as características ultra-sonográficas dos achados, em 6 identificou-se massa associada (6/26 - 23,1%), Nas outras, foram identificados pontos hiperecogênicos em meio ao tecido adiposo em 13 (13/26 - 50%); na parede de cistos em 5 (5/26 - 19,2%) e no interior de ductos em 2 (2/26 - 7,7%). Foram diagnosticados 12 casos de câncer, sendo que 8 foram identificados através da ultra-sonografia (8/12 - 66,7%) e 4 não (4/12 - 33,3%). Das 26 biópsias orientadas pela ultra-sonografia, em 18 delas (18/26 - 69,2%) foram identificadas microcalcificações nas radiografias dos fragmentos e em 8 não (8/26 - 30,8%). Nos 8 casos positivos para câncer, o diagnóstico foi subestimado em 3 delas (37,5%) em comparação com resultado anatomopatológico final da cirurgia. A ultra-sonografia apresenta uma sensibilidade baixa na identificação de focos de microcalcificações, previamente vistos na mamografia. O diâmetro médio dos focos de microcalcificações identificados na ultra-sonografia é maior do que nos não identificados. A ultra-sonografia identifica melhor focos de microcalcificações situados no terço anterior da mama, mais superficiais, em números percentuais maiores que no intermediário e posterior. A identificação de focos de microcalcificações ao ultra-som permite que biópsias de fragmento sejam realizadas, orientadas por este método / The present study aims to (1) evaluate sonographic ability of demonstrating clustered microcalcifications previously detected on mammographic examination, (2) demonstrate mammographic patterns of clustered microcalcifications and its correlation to sonographic characterization of lesions, and (3) evaluate clinical feasibility of using ultrasound-guided core biopsy of suspicious microcalcifications. Sixty eight patients with 70 clusters of mammographically detected suspicious microcalcifications - classified as category 4 or 5 according to ACR BI-RADS(TM) - and without associated findings, such as architectural distortions or nodules, underwent sonographic examination between December/2000 and April/2002. Examinations were considered positive when microcalcifications were clearly demonstrated and negative otherwise. In the former, ultrasound-guided core biopsy was performed, including specimen radiograph, and sonographic findings were correlated to histopathological results. In the latter, patients underwent stereotactic biopsy. Among 70 clusters of microcalcifications, 26 were demonstrated on sonography (37,1%) and these patients underwent ultrasound-guided core biopsy, while 44 lesions were not detected on sonographic examination (62,9%). The median size of lesions seen on sonography was significantly greater - 14.0 mm -, in contrast to the median size of lesions not detected - 7.6 mm (p<0.001). Considering the location of microcalcifications, sonographic detection of lesions was significantly more frequent in patients with microcalcifications in the anterior third of breast parenchyma (16/26 - 61.5%), when compared to those in the mid third (8/26 - 30.8%) and posterior third (2/26 - 7.7%) (p<0.002). Cancer was demonstrated in 12 patients, 8 of them using ultrasound-guided biopsy (8/12 - 66.7%) and 4 using stereotactic biopsy (4/12 - 33.3%). Microcalcifications were demonstrated on specimen radiographs in 18 out of 26 ultrasound-guided core biopsies (18/26 - 69.2%), and it was not possible to detect them on specimen radiographs in 8 patients (8/26 - 30.8%). Between 8 patients with cancer demonstrated using ultrasound-guided core biopsy, diagnosis was underestimated in 3 (37.5%), in comparison to 1 patient out of 4 (25%) who underwent stereotactic biopsy. Sonographic examination has low sensitivity in detection of clustered microcalcifications previously seen on mammography. The median diameter of lesions demonstrated on sonography is greater than that of microcalcifications not detected. Clusters of microcalcifications in the anterior third of breast parenchyma were also detected more frequently than lesions situated more posteriorly. Sonographic detection of clustered microcalcifications allows performing ultrasound-guided core biopsy

Resumo: A técnica de biópsia hepática guiada por videolaparoscopia em caprinos foi realizada em 12 animais machos, castrados, hígidos, sem raça definida e com idades de seis a 12 meses. Os animais foram submetidos à anestesia intravenosa e a laparoscopia consistiu na introdução da agulha de Veress no flanco direito para provocar pneumoperitôneo com dióxido de carbono e permitir a inserção da cânula e trocarte para introdução do endoscópio na cavidade abdominal acoplado a uma microcâmera e ao monitor de vídeo por um cabo de fibra ótica. Após a visualização do fígado, foi introduzida a agulha de biópsia hepática tru-cut no décimo primeiro espaço intercostal, a aproximadamente 12cm ventral à coluna vertebral, para punção e remoção de fragmento do lobo hepático direito. Em seguida, o pneumoperitônio foi desfeito e as incisões cutâneas foram suturadas. Os fragmentos hepáticos colhidos foram fixados em solução de Bouin por 24 horas e processados de forma rotineira para inclusão em parafina. Foram feitas avaliações clínicas e exames hemáticos no pré-jejum e às 24, 48 e 72 horas após a intervenção cirúrgica. Houve leucocitose com neutrofilia e aumento do fibrinogênio plasmático nas primeiras 24 horas pós-operatórias, indicando a ocorrência de processo inflamatório intra-abdominal discreto e fugaz, não mais observado na 488 hora pós-cirúrgica. A biópsia hepática com agulha tru-cut guiada por videolaparoscopia foi considerada segura e eficaz para uso em caprinos, permitindo a obtenção de fragmentos hepáticos suficientes para exame histopatológico. / Abstract: The technique of videolaparoscopic guided hepatic biopsy was performed in 12 castrated male goats, healthy, without defined breed and aging from six to 12 months. Each animal received total intravenous anesthesia and was submitted to the laparoscopic procedure that consisted in the insertion of a Veress needle in the right flank in order to cause a pneumoperitoneum with carbon dioxide. This procedure was followed by cannulation and then by introduction of a rigid endoscope coupled with a microcamera. Afier visualization of the liver, a tru-cut hepatic biopsy needle was applied in the eleventh intercostal space about 12cm ventral to the spinal column for punch and removal of a fragment from the right hepatic lobe. Soon afier the drainage of the pneumoperitoneum, the small skin incisions were sutured. The biopsy fragments were fixed in Bouin's solution for 24 hours and then submitted to paraffin inclusion histologic routine. Clinical evaluation and hematologic exams were made during the pre-fasting period and again at 24, 48 and 72 hours afier the surgery. There was observed leucocytosis with increased neuthrophils and plasmatic fibrinogen levels at 24 hours afier the procedure, indicating the presence of a discrete intraabdominal inflammatory process that was no more observed at 48 hours. The videolaparoscopic guided hepatic biopsy with a tru-cut needle was considered efficacious and secure to be used in goats, allowing the obtention of hepatic tissue fragments suitable for histopathological examination. / Orientador: José Wanderley Cattelan / Coorientador: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Banca: Delphim da Graça Macoris / Banca: Claudia Acosta Duarte / Mestre

Base teórica: o tratamento do carcinoma endometrial é feito através do estadiamento cirúrgico, que envolve histerectomia com salpingo-oforectomia bilateral e linfadenectomia pélvica e para-aórtica. Questiona-se o benefício da linfadenectomia sistemática em todos os pacientes, já que o risco de disseminação linfática em tumores de baixo risco é pequeno e não há evidências de benefício terapêutico em sua realização. Desse modo, tentam-se encontrar modos de determinar, na avaliação pré-operatória, quais são os pacientes que poderão se beneficiar da linfadenectomia e aqueles que podem prescindir do procedimento. Objetivos: avaliar a concordância da avaliação anatomopatológica entre a amostra endometrial pré-operatória e a peça cirúrgica das pacientes submetidas a tratamento cirúrgico primário do carcinoma de endométrio, correlacionando com características das pacientes e das amostras da patologia. Métodos: foram incluídos pacientes submetidos a tratamento cirúrgico para carcinoma de endométrio que tinham diagnóstico pré-operatório através de amostragem endometrial. Os prontuários foram revisados e as amostras disponíveis na instituição foram procuradas para posterior releitura por dois patologistas cegados para as demais informações anatomopatológicas. Resultados: foram incluídos 166 pacientes, com uma idade média de 64,6 anos. Das biópsias, 118 eram tumores endometrioides, 38 não-endometrioides e as demais, hiperplasia. As taxas de concordância foram de 93,2% para tumores endometrioides e 68,9% para não-endometrioides, com um índice kappa (k) de 0,73 para o tipo histológico. O grau tumoral distribui-se na amostra como G1 em 37,1%, G2 em 35,7% e G3 em 27,1%, com uma taxa de concordância de 61,5%, 56% e 78,9%, respectivamente, e k=0,46. Dos tumores G1, somente 1,9% teve upgrade para G3, em comparação com 16% das lesões G2. Não houve diferença estatística na taxa de concordância do tipo histológico e grau tumoral em função do local de execução da biópsia, método de amostragem e intervalo biópsia-cirurgia. Biópsias com pés > 3g tiveram uma concordância do grau tumoral significativamente melhor (p=0,040). Amostras de 105 pacientes estavam disponíveis no HCPA e foram reavaliadas por dois patologistas, com uma taxa de concordância interobservador geral de 73,3% (k=0,58) para o tipo histológico e 57,9% (k=0,54) para o grau tumoral. Conclusão: a acurácia da biópsia pré-operatória em predizer as características da peça cirúrgica não é ideal. Deve-se ter cuidado ao utilizar essa informação para determinar a extensão da cirurgia a ser realizada, sob risco de ser realizado subestadiamento. Estas baixas taxas de concordância correlacionam-se também com as baixas taxas de concordância interobservador. Novos sistemas de graduação e equipes de especialistas são possibilidades para melhorar esta questão. / Background: endometrial carcinoma treatment is based on surgical staging, including hysterectomy with bilateral salpingo-oophorectomy and pelvic and paraortic lymphadenectomy. The benefits of systematic lymphadenectomy in all patients have been questioned, since the risk of dissemination in low risk tumors is small and there is no evidence of benefits in its execution. Thereby, researches are looking for ways to determine, by preoperative evaluation, which patient will benefit from full staging and those who can do without the procedure. Objectives: evaluate the agreement between the preoperative endometrial samples and the surgical specimens in endometrial carcinoma, correlating it with characteristics of the samples and patients included, and evaluate the interobserver agreement of the preoperative biopsy. Methods: patients submitted to surgery as primary treatment for endometrial carcinoma at HCPA with a preoperative endometrial sampling were included. Their medical charts were reviewed. The available samples of the preoperative biopsies were recollected for reanalyzes by two pathologists. Inadequate transcriptions of the biopsy report were excluded. Results: we included 166 patients, with a mean age of 64.6 years. Of the biopsies, 118 were endometrioid, 38 were non-endometrioid and the remaining, hyperplasia. The agreement rates were 93.2% for endometrioid tumors and 68.9% for non-endometrioid, with a kappa index of 0.73 for the tumor cell type. The tumor FIGO grade distributed as G1 in 37.1%, G2 in 35.7% and G3 in 27.1%, with an agreement rate of 61.5%, 56% and 78.9%, respectively. The general kappa index for FIGO grading was 0.46. Of the G1 tumors, only 1.9% upgraded to G3, while 16% of the G2 lesions upgraded. There was no statistical difference in the agreement rates of tumor cell type and FIGO grading in function of place of biopsy execution, method of endometrial sampling and biopsy-surgery interval. Biopsies weighing more than 3g had a significantly better agreement in FIGO grading (p=0.040). Samples of 105 were available at HCPA and were reevaluated by 2 pathologists, with a general interobserver agreement 73.3/% (k=0.58) for tumor cell type and 57.9% (k=0.54) for grading. Conclusion: the accuracy of the preoperative biopsy in predicting the definite surgical characteristics it is not ideal. Caution must be taken when using this information to determine the surgical extension, due to the risk of under staging. These low rates of agreement are correlated with the low interobserver agreement. New grading systems and specialists teams are possible ways of improving this issue.

A proposta do experimento baseia-se na análise uterina de éguas distribuídas em três graus de fibrose, conforme estabelecido em 1978 por Kenney (grupo I – endométrio saudável; grupo II, endométrio saudável ou com poucas alterações; grupo III – endométrio com alterações severas). Portanto, o estudo tem por objetivo determinar o perfil da expressão gênica de possíveis genes causadores da fibrose, conhecidos pelo o envolvimento em outros órgãos e espécies, no endométrio de éguas classificadas com diferentes graus de saúde uterina. Uma amostra de tecido endometrial foi colhida por meio de biopsia uterina e seccionada em dois fragmentos para posterior análise. Para os exames laboratoriais, a primeira amostra foi destinada à avaliação histopatológica e a segunda à validação de genes-alvo por reação polimerase em tempo real (qPCR). No exame histopatológico, o grau de fibrose e fase do ciclo estral foram estimados para distribuir as fêmeas nos grupos, além disso, o histórico reprodutivo foi analisado e a partir dos dados do exame histopatológico e histórico foram selecionadas 20 fêmeas para realização do qPCR (grupo I = 11; grupo II = 6; grupo III = 3). A segunda amostra de tecido foi armazenada em nitrogênio líquido imediatamente após a coleta, sendo posteriormente armazenada em freezer -80°C. Após o processamento das amostras, a quantificação relativa da abundância dos transcritos de Fator de Transformação do Crescimento-β1 (TGF-β1), Fator de Crescimento do Tecido Conjuntivo (CTGF), Colágeno tipo I (COL-I), α actina de músculo liso (αSMA), Molécula de Adesão Intercelular-1 (ICAM-1), e Cluster de Diferenciação 147 (CD147) foi comparada entre os grupos. A expressão de αSMA (P = 0,78), COL-I (P = 0,57) e ICAM-1 (P = 0,98) não resultou em diferença entre os grupos; e a de TGF-β1 e CTGF foi maior no grupo I (P = 0,04). Nos casos de fibrose severa, a transcrição de mRNA de CD147 foi maior em comparação com o grupo I (P = 0,04). Desta forma, acredita-se que a partir da avaliação de genes expressos do endométrio de éguas com diferentes graus de fibrose pode ser possível identificar genes marcadores que aumentam a precisão da classificação previamente proposta. / The purpose of the experiment was to analyze the uterus of mares distributed in three degrees of fibrosis, as established by Kenney in 1978 (group I - healthy endometrium; group II, healthy endometrium or with few alterations; group III - endometrium with severe changes). A sample of endometrial tissue was collected by biopsy which was sectioned into two fragments for further analysis. For the laboratory tests, the first sample was used for histopathological evaluation and the second for the validation of target genes by quantitative polymerase chain reaction (qPCR). In the histopathological examination, the degree of fibrosis and phase of the estrous cycle were estimated to distribute the females into groups; in addition, the reproductive history was analyzed and from the obtained data of histopathological evaluation and history 20 mares were selected for qPCR (group I = 11; Group II = 6, group III = 3). The second tissue sample was stored in liquid nitrogen immediately after collection and stored in a freezer at -80 ° C. After the samples were processed, the relative abundance quantification of Transforming Growth Factor-β1 (TGF-β1), Connective Growth Factor (CTGF), α Smooth Muscle Actin (αSMA), Intercellular Adhesion Molecule-1 (ICAM-1), Type I Collagen (COL-I), and Differentiation Cluster 147 (CD147) was carried out. The expression of αSMA (P = 0.78), COL-I (P = 0.57) and ICAM-1 (P = 0.98) did not resulted in difference between the groups; and TGF-β1 and CTGF were higher in group I (P = 0.04). In severe cases of fibrosis, CD147 mRNA transcription was higher in comparison to the group I (P = 0.04). Thus, it is believed that from the evaluation of expressed endometrial genes in the mare with different degrees of fibrosis it may be possible to identify marker genes that increase the accuracy of the previously proposed classification.

Orientador: Noeme Sousa Rocha / Banca: Rosany Mucha Dufloth / Banca: Luiz Gonzaga Porto Pinheiro / Resumo: A avaliação microscópica dos linfonodos em cadelas portadoras de carcinoma de mama pode desempenhar um papel fundamental no direcionamento terapêutico, já que a drenagem linfática representa a via mais comum de metástases. Nos últimos anos tem-se desenvolvido técnicas que oferecem excelente acurácia na remoção dos linfonodos, como a Técnica do Linfonodo Sentinela (TLS), que se baseia no princípio de progressão escalonada na drenagem linfática de neoplasias e que atualmente é o principal fator prognóstico e diagnóstico em mulheres portadoras de carcinomas de mama. O objetivo da pesquisa foi avaliar de forma inédita a acurácia da biópsia do linfonodo sentinela em cadelas portadoras de carcinoma de mama. Foram utilizadas 41 cadelas com diagnóstico citológico do tumor. Após injeção do corante azul patente V, procedeu-se a mastectomia, juntamente com a linfadenectomia (sentinelas e não sentinelas). O material foi submetido a cortes seriados e avaliado microscopicamente pela coloração rotineira de H&E e imuno-histoquímica com os marcadores para pan-citoqueratina AE1/AE3 e células mioepiteliais CK14, que revelou que 46,3% (19/41) dos animais apresentavam metástase nodal. Os valores de sensibilidade e especificidade encontrados para a TLS foram de 89,5% e 100%, respectivamente, com índice kappa igual a 0,90 e p<0,0001. Portanto, a TLS oferece alta sensibilidade no diagnóstico precoce de micrometástases, permitindo maior precisão no estadiamento do paciente oncológico e consequentemente, maiores chances de sobrevida / Abstract: Microscopic evaluation of lymph nodes in bitches with mammary carcinomas may have fundamental importance in guidance the therapy since lymphatic drainage constitutes the most common route for metastasis. In recent years, several techniques have been used to detect and remove Sentinel Lymph Nades (SLN) based on the principIe of stepwise progression of cancer and lymphatic drainage. In human medicine, SLN biopsy and analysis constitutes the main prognostic factor in women with mammary , carcinomas. This study was designed to evaluate, in an unprecedented manner, the accuracy of sentinel lymph no de biopsy in bitches with mammary carcinomas. Forthyone dogs with no predilection for breed or age, with previous cytological diagnosis of mammary carcinoma were submitted to inoculation of patent blue V dye in peritumoral skin, followed by radical mastectomy and radicallymphadenectomy. Lymphanedectomy included sentinel and non- sentinel lymph nades in order to detect lymph nade metastasis. Both groups were compared in order to determine the accuracy of SLN technique in the detection of node metastasis. The lymph nades were subject to a standard serial sectioning method, stained by routine H&E or submitted to immunohistochemistry using pan-cytokeratins AEl/AE3 and the myoepitelial marker CK14. Nineteen animaIs (46.3%) had nodal metastasis. Sensibility and specificity for SLN technique were 89.5 % and 100 %, respectively, with a kappa value of 0.90 (p<O.OOOl). Therefore, SLN biopsy offers high sensitivity in the early diagnosis of lymph no de metastasis allowing a more accurate clinical staging. These results probably impacts on greater chances of patient survival / Mestre

O Exame de Medula Óssea (EMO) permite avaliação citológica da medula, sendo útil no diagnóstico e monitoramento de desordens hematológicas, quando exames mais simples não são suficientes para esclarecer o quadro clínico. Investigação clínica e laboratorial completa deve ser realizada para garantir que a indicação apropriada exista. São requeridas pelo menos duas colorações (Romanowsky e Azul da Prússia), onde devem ser avaliadas a qualidade da amostra, celularidade global da mesma, contagem diferencial de células nucleadas, relação Mielóide/Eritróide bem como cuidadosa avaliação quantitativa e qualitativa das três linhagens hematopoéticas (Granulocítica, Eritróide e Megacariocítica). O EMO fornece informações relevantes no diagnóstico e monitoramento de Leucemias/Linfomas, Mieloma Múltiplo (MM), Síndrome Mielodisplásica (SMD), Aplasia medular, doença metastática na Medula Óssea (MO), infecções em HIV positivos, febre de origem desconhecida e investigação de citopenias. Tendo em vista a classificação da OMS de 2008 para neoplasias mielóides e leucemias agudas cabe ressaltar a importância de unir achados citogenéticos, dentre os quais se destacam atualmente as mutações gênicas FLT3, KIT, NPM1 e CEBPA, aos achados morfológicos, imunofenotípicos, citoquímicos e clínicos, alcançando desta forma marcadores diagnósticos e prognósticos precisos que servem como guia para um tratamento eficaz. Este estudo tem por objetivo identificar as principais indicações para o EMO no HCPA bem como verificar a acurácia das mesmas. Foram analisados 400 pacientes submetidos ao EMO na Unidade de Hematologia do HCPA no período de Janeiro a Dezembro de 2009, tendo sido resgatados todos os resultados do Aspirado de Medula Óssea bem como dados clínicos e laboratoriais relevantes obtidos do prontuário médico. Verificou-se que cerca de metade dos pacientes submetidos ao EMO em nosso centro são para controle de tratamento, o que está de acordo com as características do mesmo, o qual é referência regional para tratamento de doenças malignas. Nos pacientes que realizam o exame com propósito diagnóstico as indicações principais são suspeita de Leucemia e MM. Nos 260 pacientes com suspeita de doença hematológica primária observou-se confirmação da mesma em 61% dos casos, nos 39% restantes foram encontradas alterações qualitativas e/ou quantitativas (29%), MO normal (7%) e amostra insuficiente/diluída (3%). Dos pacientes que fizeram o exame com propósito diagnóstico 20.5% não fizeram biópsia. Com relação à acurácia da indicação, encontrou-se que 7 pacientes (2%) provavelmente não deveriam ter sido submetidos a este procedimento. Ressaltamos a importância de realizar em todos os casos Aspirado e Biópsia de MO simultaneamente uma vez que seus achados devem ser correlacionados e se a Biópsia for omitida o patologista pode não obter a informação máxima requerida. / The Bone Marrow Examination (BME) permits cytological assessment of Marrow, being useful in the diagnosis and monitoring of hematological disorders, when simpler tests are not sufficient to clarify the clinical picture. Are required at least two colors (Romanowsky and Prussian blue), it should be evaluated the quality of the sample, the same overall cellularity, differential count of nucleated cells, myeloid:erythroid (M:E) ratio and carefull evaluation quantitative / qualitative from the three lineages of hematopoietic (granulocytic, erythrocytic and megakaryocytic). The BME provides information relevant to diagnosis and follow-up of leukemia/lymphoma, multiple myeloma (MM), myelodysplastic syndrome (MDS), marrow aplasia, bone marrow (BM) metastatic disease , infections in HIV positive, pyrexia of unknown origin and investigation of cytopenias. The 2008 classification of the World Health Organization (WHO) to the myeloid neoplasms and acute leukemia highlight the importance of join cytogenetic findings - bring out currently FLT3, KIT, NPM1 and CEBPA gene mutations - to the morphologic, immunophenotypic, cytochemical and clinical findings reaching this way accurate diagnostic and prognostic markers that serve as a guide to effective treatment. This study aims to identify the main indications for the BME at HCPA and to verify their accuracy. It were analyzed 400 patients submitted to BME in the Hematology Unit of HCPA in the period January to December 2009, having been rescued the bone marrow aspirate results as well as all relevant clinical and laboratory data obtained from the medical records. It was found that about half of patients submit BME in our center are to control treatment, which agrees with the characteristics of it, it is a regional referral center for treatment of malignancies. In patients who perform the test with diagnostic purpose the main indications were suspected leukemia and MM. In 260 patients with suspected primary hematological disease 61.2% turned out to be the case, the remaining 38.8% had quantitative and/or qualitative BM alterations (29.6%), normal MO (6.5%) and insufficient sample or diluted (2.7%). Of the patients who took the exam with diagnostic purpose 20.5% had no biopsy. With respect to accuracy of indication, it was found that 7 patients (2%) probably should not have undergone this procedure. We emphasize the importance of performing in all cases aspirate and biopsy since their findings must be correlated and furthermore if the biopsy is omitted the pathologist can not get the maximum information required.