Submitted by Angela Maria de Oliveira (amolivei@uepg.br) on 2018-07-31T12:54:31Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Ana Cláudia Dalmolin.pdf: 4507654 bytes, checksum: 94b0e5d7e5b5768e1913e17076d5138e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-31T12:54:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Ana Cláudia Dalmolin.pdf: 4507654 bytes, checksum: 94b0e5d7e5b5768e1913e17076d5138e (MD5) Previous issue date: 2018-02-22 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A hipersensibilidade dentinária cervical (HSDC) ocorre devido à exposição dentinária da região cervical por fatores como perda de minerais do esmalte ou da própria dentina, ou por recessão gengival. A exposição dos túbulos dentinários, conforme a teoria hidrodinâmica, facilita a transmissão de estímulos desde a superfície dentinária até a polpa. Os biovidros são biomateriais que inicialmente foram desenvolvidos para reparo e regeneração óssea, e que passaram a ser empregados também no tratamento da HSDC. Considerando a falta de compreensão quanto a condição pulpar, e a lacuna existente entre os biomateriais e a eficácia no tratamento, foi proposta a utilização de um modelo in vivo em ratos, em que, através da exposição dentinária cervical, pudesse demonstrar o processo neuroinflamatório no tecido pulpar, bem como testar e avaliar os efeitos de duas formulações de biovidros experimentais para a obliteração de túbulos dentinários. Desta forma, foram utilizados 29 ratos Wistar machos, os quais receberam cirurgias de indução de recessão gengival, com instalação de dispositivo de permanência temporária, assim promovendo a manutenção da condição de túbulos dentinários cervicais expostos. Prosseguiu-se com a aplicação dos tratamentos de acordo com os grupos de estudo: Naive (N) - sem recessão gengival e sem tratamento; Sham (S) – com recessão gengival e sem tratamento; Verniz cavitário (V) - recessão gengival e tratamento com verniz cavitário; Biosilicato® (BV-BS) - recessão gengival e tratamento com Biosilicato®; Biovidro de estrôncio (BV-Sr) - recessão gengival e tratamento com biovidro de estrôncio; Biovidro de potássio (BV-K) - recessão gengival e tratamento com biovidro de potássio. Os tratamentos foram aplicados sobre a superfície dentinária exposta dos primeiros molares superiores esquerdos, a cada 4 dias durante 28 dias, totalizando 7 aplicações. Realizou-se processamento histológico das hemimaxilas esquerda e direita, com posterior coloração de hematoxilina e eosina (HE) para avaliar alterações no complexo dentino-pulpar, além de coloração imunohistoquímica (IHQ) para identificação de substância P (SP). Os resultados apontaram que não houve diferenças significativas (p>0,05, teste de Kruskal-Wallis) entre os grupos, considerando os critérios para alterações dentino-pulpares; tampouco foram observadas diferenças na imuno-marcação para SP. Concluiu-se que não há alterações no complexo dentino-pulpar ou aumento de substância P em dentes com exposição radicular e túbulos expostos em ratos. Nas condições em que foram aplicados, os biovidros experimentais não são capazes de causar danos na polpa dental. No entanto, sugere-se a continuidade das pesquisas, com a avaliação de outros parâmetros no modelo animal para a melhor compreensão do mecanismo da HSDC. / Cervical dentin hypersensitivity (CDH) occurs due to dentin exposure of the teeth’s cervical region by factors such as loss in enamel or dentin minerals, or gingival recession. Dentin tubules exposure, according to the hydrodynamic theory, facilitates the transmission of stimuli from the dentin surface to the pulp. Bioactive glasses are biomaterials that were initially developed for bone repair and regeneration, but they could also be used for CDH treatment. There is no understanding about pulp conditions when dentin is exposed, neither about the efficacy of biomaterials used to CDH treatment. It was proposed an in vivo model of cervical dentin exposure in rats. This in vivo model demonstrates the pulp neuroinflammatory process and tests the efficacy of Biosilicate® and of two others experimental formulations of bioglasses in dentinal tubules obliteration. Thus, 29 male Wistar rats were submitted to exposure of the dentinal tubules, through gingival recession surgery. A temporary device was installed to keep the dentinal tubules exposure. Then, the treatments were applied over the exposed dentin surface of the upper left first molars every 4 days during a 28 days period, with the total of 7 applications. The treatments were applied according to the study groups: Naive (N) – no recession and no treatment; Sham (S) – recession but no treatment; Cavity varnish (V) – gingival recession and treatment with varnish; Biosilicate® (BV-BS) – gingival recession and treatment with Biosilicate®; Strontium bioglass (BV-Sr) – gingival recession and treatment with strontium bioglass; Potassium bioglass (BV-K) – gingival recession and treatment with potassium bioglass. The dentin-pulp complex changes and investigation of substance P (SP) were evaluated through hematoxylin and eosin (HE) and immunohistochemical (IHC) stainings after histological processing and paraffin sectioning of the left and right hemi-maxilae. The results showed that there were no significant differences (p>0.05, Kruskal-Wallis test) among the groups considering the conditions of the dentin-pulp complex. No differences were observed in immunostaining for SP. It was concluded that teeth with cervical root exposition and opened tubules in rats do not have changes in the dentinpulp complex or in the pattern of immunotracing for SP. Experimental bioactive glasses are not capable of causing damage to the dental pulp under the conditions in which it was applied. Nevertheless, new animal model studies could be conducted using others histological and immunohistochemical parameters in order to understand the mecanisms of the CDH.

Resumo: A poliuretana derivada do óleo de mamona propicia estimulação na reparação óssea por apresentar propriedades de osteocondutividade auxiliando na neoformação óssea. Quanto a osteoindução, pode ser estimulada por fatores de crescimento, como a BMP, e por fatores físicos como o laser. O trabalho avaliou a regeneração óssea a partir da confecção de uma lesão na base da mandíbula de rato, preenchida com mamona particulada, acrescida do "pool" de BMP E Hidroxiapatita (HA) absorvível. Posteriormente aplicou-se ou não um estímulo local com o laser de baixa intensidade. O aparelho utilizado foi o Laser beam (Semicondutor de Arseneto de Gálio-Alumínio, infravermelho - 785nm, 35mW). Foram usados 60 ratos Holtzman, divididos em quatro grupos de 15 animais, e estes subdivididos em 5 animais por período de análise, da seguinte forma: Grupo Controle (somente defeito); Grupo Experimental com estimulação laser (dose=178J/cm2; energia=1,4J); Grupo Experimental com mamona particulada acrescido de (BMP-HA); Grupo Experimental com mamona particulada acrescido de (BMP-HA), e estimulação laser (dose=178J/cm2; energia=1,4J). Os ratos foram sacrificados nos períodos de 15,45 e 60 dias; as mandíbulas foram removidas e processadas para inclusão em parafina, e os cortes de 6um foram corados por H&E, Tricrômico de Massom e Picro sirius. Os resultados histológicos mostraram formação óssea em todos os grupos. Nos grupos com o laser, a resposta tecidual foi antecipada em relação aos demais grupos promovendo a rápida neoformação da matriz óssea. / Abstract: It suggest that polyurethane achieved from (Ricinus communis) induces bone repair because their osteoconductivity properties. In concerning the bone-inducing, that promotes osseous neoformation, it has been stimulate by growth factors, as bone morphogenetic protein (BMP), and laser therapy. The aim of this study was to evaluate osseous regeneration after mandible defects created in rats, and coveried with polyurethane resin partices (Ricinus communis), added with BMP and absorbable Hydroxyapatite (HA), stimulated or not by Laser beam. It was used the laser equipment "Laser beam" (Infra-red, continuous, Gallium-arsenide, 785nm, 35mW). Were utilized for this study 60 rats (Holtzman), were distributed in 4 groups of 15 animals. The control group (with only defect); the experimental group with laser stimulated (fluency=178J/cm2; energy=1,4J); the experimental group with resin particles added with (BMP-HA), and another similar group with laser stimulation (fluency=178J/cm2; energy=1,4J). The animals were then sacrified at the 15th, 45th and 60th days; mandibles were removed and processed for light microscopy. The histological examination samples were stain with H&E, Tricomic of Masson and Sirius Red. The results showed osseous neoformation in all groups. However, in the groups with laser stimulation the tissue response presented demonstrating earlier bone matrix formation. / Orientador: Lizeti Toledo de Oliveira Ramalho / Coorientador: Rosane de Fátima Zanirato Lizarelli / Banca: Hélio Ferraz Porciúncula / Banca: Maria Cristina Borsatto / Mestre

Reembasadores resilientes temporários contendo fármacos antifúngicos foram sugeridos como um tratamento adjunto para estomatite protética. No entanto, antes de utilizar clinicamente estes reembasadores modificados em humanos, é importante avaliar a sua biocompatibilidade em modelos animais. Este estudo avaliou a biocompatibilidade in vivo de um reembasador resiliente temporário para base de prótese (Trusoft) modificado por agentes antimicrobianos em suas mínimas concentrações inibitórias (MCIs) para biofilme de Candida albicans. Dispositivos acrílicos intra-orais (DIOs) foram confeccionados individualmente para 60 ratos Wistar. Os ratos foram divididos em 6 grupos (n=5): 3 grupos controle (Negativo: sem DIO; Geral: DIO sem reembasamento; Positivo: DIO reembasado com Trusoft sem fármacos) e 3 grupos experimentais (DIOs reembasados com Trusoft modificados por fármacos em suas respectivas MCIs: 0,032 g de nistatina, 0,064 g de diacetato de clorexidina e 0,128 g de cetoconazol). Os ratos com ou sem os DIOs foram eutanasiados após 7 e 14 dias de avaliação. A análise histopatológica qualitativa foi realizada comparando-se fotomicrografias de secções histológicas, que foram obtidas utilizando um microscópio óptico que abrangeu transversalmente a região intermolares. As alterações morfológicas no epitélio e queratina foram analisadas quantitativamente através da realização de planimetria computadorizada. Os dados quantitativos foram analisados utilizando ANOVA 2-fatores e teste de Tukey (=0,05). A análise quantitativa mostrou que apenas o grupo com DIO contendo cetoconazol diminuiu significativamente a espessura e a área do estrato córneo em comparação com os outros grupos (p<0,05), que não apresentaram diferenças significativas entre si (p>0,05). Estes resultados estiveram de acordo com os obtidos para análise qualitativa. A incorporação de MCIs de nistatina e diacetato de clorexidina no Trusoft não induziram alterações histopatológicas na mucosa palatina de ratos, sugerindo a biocompatibilidade in vivo deste protocolo para o tratamento de estomatite protética. / Temporary resilient denture liners containing antifungal drugs have been suggested as an adjunct treatment for denture stomatitis. However, before clinically using these modified liners in humans, it is important to assess their biocompatibility in animal models. This study evaluated the in vivo biocompatibility of a temporary soft denture liner (Trusoft) modified by antimicrobial agents at their minimum inhibitory concentrations (MICs) for biofilm formation by Candida albicans. Methods: Acrylic intraoral devices (IODs) were individually made for 60 Wistar rats. The rats were divided into the following 6 groups (n=5): 3 control groups (Negative: without IOD; General: IOD without relining; Positive: IOD relined with Trusoft without drugs) and 3 experimental groups (IOD relined with Trusoft modified by drugs at MICs: 0.032 g for nystatin, 0.064 g for chlorhexidine diacetate, and 0.128 g for ketoconazole). The rats with or without the IODs were sacrificed after 7 or 14 days of evaluation. Histopathological qualitative analysis was performed by comparing photomicrographs of histological sections, which were obtained using an optical microscope that transversely covered the inter-molar region. Morphological changes in the epithelium and keratin were quantitatively analyzed by performing computerized planimetry. Quantitative data were analyzed using 2-way ANOVA and Tukey\'s test (=0.05). Quantitative analysis showed that only the group with IOD containing ketoconazole significantly decreased the thickness and area of the stratum corneum compared with the other groups (p<0.05), which showed no significant differences between each other (p>0.05). These results were in accordance with those obtained for qualitative analysis. Incorporation of MICs of nystatin and chlorhexidine diacetate in Trusoft did not induce histopathological changes in the palatal mucosa of rats, suggesting the in vivo biocompatibility of this protocol for treating denture stomatitis.

Os avanços relacionados à ciência dos biomateriais e engenharia tecidual buscam esclarecer os mecanismos envolvidos na resposta biológica associada ao uso desses dispositivos e sua interação com o sistema imune. Neste estudo, avaliou-se a resposta imune e inflamatória desenvolvida em camundongos frente à implantação de membrana de cortical óssea bovina no tecido subcutâneo, em implantação única e sequencial de duas membranas, assim como os possíveis mecanismos envolvidos no processo de reconhecimento e reabsorção desse biomaterial, de acordo com análise histomorfométrica, enzimática e molecular. Após a implantação da membrana, sinais de reabsorção que antes eram notados em pontos isolados, aos poucos se unem até sua completa degradação, observada somente após 15 dias. Todo o processo de reabsorção da membrana é acompanhado por uma reação inflamatória de magnitude moderada, seguida pelo declínio do número de leucócitos, surgimento de células gigantes multinucleadas e formação de uma cápsula de tecido conjuntivo fibroso. A cinética de TNF- e MMP-2, MMP-8, MMP-9 e MMP-13 apresentou um padrão de produção decrescente, entretanto os níveis dos inibidores de metaloproteinases (TIMPs) e TGF- parecem atuar de forma inversa. A velocidade de reabsorção após duas implantações consecutivas da membrana foi maior quando comparada ao grupo de animais que sofreu apenas uma implantação, porém os resultados do teste de hipersensibilidade do tipo tardia (DTH) demonstraram que a membrana é biocompatível, pois não elicitou resposta imunológica exacerbada após uma segunda implantação, confirmando então a natureza não imunogênica desse biomaterial. Finalmente, os animais CD14KO e MyD88KO apresentaram uma reabsorção mais lenta da membrana implantada, quando comparados aos animais C57Bl/6 (WT), demonstrando que as moléculas CD14 e MyD88 estão envolvidas no reconhecimento do biomaterial e desempenham importante papel no processo de reabsorção da membrana de cortical óssea bovina, indicando a participação de PAMPs e/ou DAMPs na resposta biológica gerada por esse biomaterial. / Advances related to the biomaterials science and tissue engineering seek to clarify the mechanisms involved in the biological response associated with the use of those devices and their interaction with the immune system. This study evaluated the inflammatory and immune response developed in mice after implantation bovine bone cortical membrane in subcutaneous tissue, in both, unique and sequential implantation of 2 membranes, as the mechanisms involved in this biomaterial recognition and resorption process, on regards to histomorphometric, enzymatic and molecular analysis. After membrane implantation, previously observed signs of resorption in isolated spots, gradually unite until their complete degradation after 15 days. The whole membrane resorption process is accompanied by a moderate inflammatory reaction, followed by a decline in the leukocytes number, appearance of multinucleated giant cells and formation of a capsule of fibrous connective tissue. The kinetics of TNF-, MMP-2, MMP-8, MMP-9 e MMP-13 showed a pattern of decreasing production, however, levels of metalloproteinases inhibitors (TIMPs) and TGF- seem to act in reverse way. The resorption rate after two successive membrane implantations was higher when compared to the group which suffered only one implantation, however, the results of delayed test hypersensity (DTH) demonstrated that the membrane is biocompatible, that is, it does not elicited too high immune response after a second position, confirming the non immunogenic nature of this biomaterial. Eventually, CD14KO and MyD88KO strains showed a slower membrane resorption when compared to animals C57Bl/6, demonstrating that the CD14 and MyD88 molecules are involved in biomaterial recognition and play an important role in bovine cortical bone membrane resorption process, indicating that PAMPs and/or DAMPs are involved in biological response generated by this biomaterial.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-05-23Bitstream added on 2014-06-13T20:21:32Z : No. of bitstreams: 1 vasconcellos_lmr_dr_sjc.pdf: 1195264 bytes, checksum: 6797b053e1594bb9372c91865bdb71e3 (MD5) / O objetivo neste estudo foi avaliar e comparar a reparação óssea ao redor de implantes cilíndricos densos e porosos, ambos de titânio puro grau 2, confeccionados via metalurgia do pó, por meio de análise histológica, histomorfométrica e teste mecânico de cisalhamento. Previamente à cirurgia, todos os implantes foram caracterizados por meio de análise metalográfica e os implantes densos foram submetidos também a um rugosímetro. Em seguida, os implantes foram inseridos em tíbias de coelhos. Concluiu-se, portanto, que a técnica de metalurgia do pó é eficiente para produzir implantes densos e porosos, e que os porosos apresentam maior contato na área de interface osso-implante e maior adesão ao osso, melhorando a osseointegração deste implante ao tecido ósseo. / The aim of this study was to assess and compare the bone repair around dense and porous cylindrical implants, both made of commercially pure titanium by means of powder metallurgy. Histological analysis, histomorphometric analysis, and mechanical test were carried. Prior to the surgery, all implants were characterized by means of metallographic analysis. The dense implants were also submitted to perfilometer equipment. Following the implants were placed in the rabbit tibiae. Thus, these findings suggest that the powder metallurgy technique is efficient to produce dense and porous implants, and that the porous implants exhibit greater contact in the implant-bone interface and greater adhesion to the bone, therefore improving the osseointegration of this implant to the bone.

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:43:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 KerlisonPO_DISSERT.pdf: 1641521 bytes, checksum: 5f1078757c465e02ee64ce8aff96f794 (MD5) Previous issue date: 2012-12-18 / The aim of this study was to comparatively evaluate the mechanical strength of squared and rectangular 2.0 mm system miniplates comparing them to the standard configuration with 2 straight miniplates in stabilizing fractures in the anterior mandible. Ninety synthetic polyurethane mandible replicas were used in mechanical test. The samples were divided into six groups of three different methods for fixation. Groups 1, 2 and 3 showed complete fractures in symphysis, characterized by a linear separation between the medial incisor, and groups 4, 5 and 6 showed complete fractures in parasymphysis with oblique design. Groups 1 and 4 were represented by the standard technique with two straight miniplates parallel to each other. Groups 2 and 5 were stabilized by squared miniplates and groups 3 and 6 were fixed by rectangular design. Each group was subjected to a mechanical test at a displacement speed of 10 mm/min on a universal testing machine, receiving linear vertical load on the region of the left first molar. The values of the maximum load and when displacements reached 5 mm were obtained and statistically analyzed by calculating the confidence interval of 95%. Fixation systems using squared (G2) and rectangular (G3) miniplates obtained similar results. No statistically significant differences with respect to the maximum load and the load at 5 mm displacement were found when compared to standard method in symphyseal fractures (G1). In parasymphysis the fixation method using squared miniplates (G5) obtained results without significant differences regarding the maximum load and the load at 5 mm when compared to the standard configuration (G4). The fixation method using rectangular miniplates (G6) showed inferior results which were statistically significant when compared to the standard configuration (G4) for parasymphysis fractures. The mechanical behavior of the fixation methods was similar, except when rectangular miniplates were used. The fixation methods showed better results with statistical significance in symphyseal fractures / O prop?sito deste estudo foi avaliar comparativamente a resist?ncia mec?nica de miniplacas quadradas e retangulares do sistema 2.0 mm, comparando-as ? configura??o padr?o, com 2 miniplacas retas, na estabiliza??o de fraturas na regi?o anterior de mand?bula. Noventa r?plicas de mand?bulas de poliuretano foram utilizadas no ensaio mec?nico. As amostras foram divididas em 6 grupos com 3 m?todos de fixa??o do sistema 2.0 mm. Os grupos 1, 2 e 3 apresentavam fraturas sinfis?rias completas, caracterizadas pela separa??o linear entre os incisivos mediais, e os grupos 4, 5 e 6 apresentavam fraturas parassinfis?rias completas com desenho obl?quo. Os grupos 1 e 4 foram representados pelo m?todo padr?o, com 2 miniplacas retas, dispostas paralelamente entre si. Os grupos 2 e 5 tiveram as mand?bulas estabilizadas por meio de miniplacas quadradas e os grupos 3 e 6, pelas retangulares. Cada grupo foi submetido a um teste mec?nico realizado por meio de uma m?quina de ensaio universal, na velocidade de 10mm/minuto, recebendo carga vertical linear na regi?o de primeiro molar esquerdo. Os valores da carga m?xima e da carga com deslocamento pr?-estabelecido em 5 mm foram obtidos e submetidos ? an?lise estat?stica a partir do c?lculo do intervalo de confian?a de 95%. Os sistemas de fixa??o utilizando miniplacas quadradas (G2) e retangulares (G3) obtiveram resultados similares, sem diferen?as estatisticamente significativas em rela??o ? carga m?xima e ? carga no deslocamento de 5 mm, quando comparada ? configura??o padr?o (G1), nas fraturas sinfis?rias da mand?bula. Nas fraturas parassinfis?rias, o m?todo de fixa??o utilizando miniplacas quadradas (G5) obteve resultados sem diferen?as estatisticamente significativas no que se refere ? carga m?xima e ? carga no deslocamento de 5 mm, quando comparadas ? configura??o padr?o (G4). O m?todo de fixa??o utilizando as miniplacas retangulares (G6) obteve resultados inferiores, estatisticamente significantes, quando comparado ? configura??o padr?o (G4) nas fraturas parassinfis?rias. O comportamento mec?nico dos m?todos de fixa??o estudados foi similar, exceto nas fraturas parassinfis?rias, quando se utilizaram as miniplacas com a configura??o retangular. Os m?todos de fixa??o utilizados apresentaram melhores resultados, com signific?ncia, nas fraturas sinfis?rias

Orientador: João Eduardo Gomes Filho / Banca: Célio Percinoto / Banca: Elisa Maria Aparecida Giro / Resumo: A necessidade de melhorar a qualidade dos materiais utilizados no tratamento endodôntico tem estimulado o estudo de vários materiais, buscando melhores condições de trabalho, biocompatibilidade e propriedade de estimular a ocorrência do selamento biológico. Este trabalho teve a finalidade de avaliar quantitativamente e qualitativamente a resposta tecidual frente ao implante de tubos de polietileno preenchidos pelos cimentos Endo-CPM-Sealer®, Sealapex® e Ângelus MTA® em tecido subcutâneo de ratos e a citotoxicidade e a produção de citocinas (IL-1β e IL-6) por fibroblastos de camundongos estimulados por estes cimentos. Para os testes de biocompatibilidade foram utilizados 30 ratos, os quais receberam individualmente três implantes de tubos de polietileno contendo os cimentos a serem testados e mais um tubo vazio como controle. Após 7, 15, 30, 60 e 90 dias do período de implantação, os animais foram sacrificados e os tubos de polietileno juntamente com o tecido que o circunda foram removidos, fixados e processados para análise em microscopia de luz. Após inclusão em glicol metacrilato, foram realizados cortes seriados de 3mm, corados com hematoxilina-eosina e cortes de 10mm, corados com Von Kossa e sem coloração para serem analisados sob luz polarizada. Os resultados foram analisados estatisticamente pelo teste de Kruskal Wallis. Os materiais Endo-CPM-Sealer®, Sealapex® e Ângelus MTA® causaram reações moderada no tempo experimental de 7 dias que diminuiu com o tempo. A resposta foi similar entre os grupos Controle, Endo- CPM-Sealer® e Ângelus MTA® no tempo experimental de 30 dias. Aos 60 dias todos os grupos foram semelhantes ao Controle. Mineralizações e granulações birrefringentes à luz polarizada foram observadas com todos os materiais. Foi possível concluir que o Endo-CPM-Sealer® foi biocompatível e estimulou a mineralização. Para o teste... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The need of improving the quality of materials used in endodontic treatment has stimulated the study of various materials seeking better working conditions, biocompatibility and property to stimulate the occurrence of biological sealing. The aim of this study was to evaluate quantitatively and qualitatively the tissue response to the implantation of polyethylene tubes filled with Endo-CPM-Sealer®, Sealapex® and Ângelus MTA® in subcutaneous tissue of rats and cytotoxicity and production of cytokines (IL-1β and IL-6) by mouse fibroblasts stimulated by these sealers. Thirty rats were used for the biocompatibility tests. Each animal received three implants of polyethylene tubes containing the cement to be tested and one empty polyethylene tube was used as control. After 7, 15, 30, 60 and 90 days from the implantation time, the animals were killed and the tubes with surrounding tissues were removed, fixed and processed for analysis using a light microscope. After inclusion in glycol methacrylate, they were serially sectioned into 3 μm or 10 μm cuts and stained with hematoxylineosin, Von Kossa or remained without staining to be observed under polarized light. The results were statistically analyzed by Kruskal Wallis test. The materials Endo- CPM-Sealer®, Sealapex® and Ângelus MTA® caused moderate reactions at 7 days which decreased with time. The response was similar among the control group, Endo- CPM-Sealer® and Ângelus MTA® at the 30th day. At 60th day all groups were similar to control group. Mineralization and granulations birefringent to the polarized light were observed with all materials. It was possible to conclude that Endo-CPM-Sealer® was biocompatible and stimulated mineralization. To test the cytotoxicity of mouse fibroblast (L929) were incubated in plate of 24 wells and stimulated with the sealers tested. Cell culture... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Rupture of the anterior cruciate ligament (ACL) of the knee leads to chronic joint instability and reduced range of motion while the long term results are marred by a high prevalence of degenerative joint disease especially osteoarthritis. Bundles of collagen threads have been widely investigated for the repair of torn ACL, but are limited by insufficient tissue ingrowth to repopulate and completely regenerate these grafts. We have developed a novel in vitro method of characterizing fiber-based thread matrices by probing their ability to promote tissue ingrowth from a wound margin as a measure of their ability to promote repopulation and regeneration. This method is useful in the optimization of thread scaffolds, and is sensitive enough to distinguish between subtle variations in biopolymer chemistry and organization. Furthermore, this method was used to characterize the effects of crosslinking on the cell outgrowth and correlated the findings with the mechanical properties of collagen threads. The results suggest that crosslinking is required to achieve sufficient mechanical properties for high stress applications such as ACL replacement, but regardless of technique, crosslinking attenuated the cell outgrowth properties of the threads. To improve the regenerative capacity of these scaffolds, novel fibrin microthread matrices were developed with a similar morphology to collagen threads and sufficient mechanical strength to be incorporated in composite thread scaffold systems. These fibrin microthreads were loaded with FGF-2, a potent mitogen and chemotactic agent that works synergistically with fibrin in regulating cell signaling and gene expression. Increases in fibroblast migration and proliferation in FGF-2-loaded fibrin threads were successfully demonstrated with the concomitant promotion of oriented, aligned, spindle-like fibroblast morphology. These results suggest that fibrin-FGF-2 microthreads have distinct advantages as a biomaterial for the rapid regeneration of injured tissues such as the ACL.

Hydroxyapatite (HAP) coatings are used in orthopaedic surgery for bone regeneration. Current methods of phase quantification of HAP coatings suffer from drawbacks. A novel methodology of quantitative phase analysis of HAP coatings has been devised and validated. This method, based on whole pattern fitting with a fundamental parameters approach, incorporates amorphous calcium phosphate (ACP) and apatite phases into structural refinements. A comparison of the structural and chemical properties of plasma sprayed (PS) and novel electrodeposited (ED) HAP coatings has been conducted. ED coatings contained less ACP and more preferred orientation than the PS coatings, although the stoichiometry was similar. In vitro investigations of PS and ED coatings in simulated body fluid and foetal calf serum revealed that both are bioactive. A carbonated apatite layer produced on the ED coatings was -0.7μm thick with a stoichiometry and chemical constituents similar to that of natural bone apatite. PS coatings produced a nanocrystalline carbonated apatite layer (-4μm). For the first time it has been possible to model crystalline HAP and nanocrystalline apatite as independent phases and obtain accurate lattice parameters for each. A positive linear correlation has been made between microstrain and the solubility of HAP and carbonated apatites. Dissolution studies have shown that the behaviour of HAP and carbonated apatite is dominated by crystallite size at low undersaturation and by crystallite size and microstrain at high undersaturation for crystallites between -30OA- 1000A. Metastable equilibrium occurred for crystallites <_400A at low undersaturation. Carbonate content did not affect the solubility or dissolution behaviour. A novel technology for coating polymeric tape with HAP for potential use in anterior cruciate ligament reconstruction has been devised. Mechanical tests have demonstrated that no adverse properties are induced by the coating technology. Cell culture studies have shown that the HAP layer is capable of enhanced attachment, proliferation and differentiation of osteoblast cells compared to uncoated tape.

Submitted by Regiane Godoy de Lima (regigodoy@gmail.com) on 2018-07-10T18:42:41Z No. of bitstreams: 1 Tese Regiane versão final.pdf: 4431175 bytes, checksum: ae162e9e86a8dc06ab1e81dc83a8f1cd (MD5) / Approved for entry into archive by Cristina Alexandra de Godoy null (cristina@adm.feis.unesp.br) on 2018-07-10T19:18:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 lima_rg_dr_ilha.pdf: 4431175 bytes, checksum: ae162e9e86a8dc06ab1e81dc83a8f1cd (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-10T19:18:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 lima_rg_dr_ilha.pdf: 4431175 bytes, checksum: ae162e9e86a8dc06ab1e81dc83a8f1cd (MD5) Previous issue date: 2018-04-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os produtos naturais são uma fonte inesgotável de compostos químicos com as mais variadas propriedades biológicas, entretanto, muitos deles têm baixa biodisponibilidade e/ou são degradados pelas condições fisiológicas, o que os torna de pouco interesse para uso como potenciais fármacos. Dentre os vários produtos naturais bioativos as lignanas apresentam um significativo potencial citotóxico contra várias linhagens de células tumorais, como a (-)-hinoquinina (HNK), (-)-cubebina (CB) e (-)-6,6’-dinitrohinoquinina (DN), determinado em outros trabalhos. Entretanto, essa lignanas possuem caráter hidrofóbico e podem ser degradadas em condições fisiológicas dependendo do pH. Desta forma, o presente trabalho teve por objetivo estudar a incorporação dessas lignanas em nanopartículas poliméricas (NNPs), como forma de melhorar a biodisponibilidade, perdas por degradação e os efeitos da incorporação sobre a atividade citotóxica desses compostos. Neste estudo a HNK e CB foram extraídas da Piper cubeba e a DN foi sintetizada a partir da reação de nitração da HNK. Essa lignanas foram submetidas a ensaios de citotoxicidade contra as linhagens tumorais Hep-2 e Si-Ha. As NNPs com e sem a lignana foram sintetizadas utilizando como matriz polimérica inicialmente o PLGA (Poli(ácido lático-co-ácido glicólico). As NNPs sintetizadas foram caracterizadas quanto ao seu tamanho, morfologia e estabilidade utilizando análises de MEV, DSC, MET, UV/Vis, FTIR, DLS e potencial zeta. A eficiência da incorporação foi determinada através de analises de UV/Vis. Nos ensaios de citotoxicidade todas as lignanas foram ativas, com destaque para a inibição de 98% da HNK sobre a linhagem Hep-2. As três lignanas foram incorporadas em NNPs de PLGA utilizando o método de nanoemulsão-evaporação com agitação mecânica e gotejamento, entretanto a estabilidade dessas NNPs e as porcentagens de incorporação indicaram que apenas as NNPs-PLGA-HNK apresentaram os parâmetros necessários para a utilização nos ensaios de citotoxicidade. Portanto, outros estudos foram realizados com as três lignanas visando a melhora nos métodos de obtenção e estabilidade com o uso de sonicador e diferente composição do PLGA (50:50) e PLGA-PEG. As análises físicas mostraram que as nanopartículas de PLGA (50:50) obtidas através da metodologia por sonicação foram mais estáveis com menores tamanhos e maior potencial zeta em valores absolutos, entretanto, a DN e a CB não foram encapsuladas de forma eficiente. Desta forma, somente a HNK prosseguiu no estudo. O uso do PLGA-PEG alterou de forma significante os parâmetros físicos e químicos das NNPs-PLGA-PEG-HNK em relação as de PLGA-HKN. Os testes de liberação mostraram melhores resultados com as NNPs-PLGA-HNK, principalmente em pH 7,4. O tempo de liberação total da HNK em todas as NNPs avaliadas foi em torno de 30 minutos o que sugere que as nanopartículas obtidas são nanocápsulas. A comparação dos resultados dos ensaios de citotoxicidade mostraram que o CI50 das NNPs de PLGA-HNK foi de 29,8 µM sobre as células tumorais Si-Ha, enquanto a HNK livre apresentou CI50 = 110 µM. Para as outras células tumorais mais agressivas as NNPs de PLGA(50:50)-HNK foram menos eficazes do que a HNK livre, com cerca de 50% de perda da atividade. Esses resultados indicam a efetividade das NPPs de PLGA(65:35)-HNK sobre as células da linhagem Si-Ha, e que o encapsulamento da HNK em NNPs de PLGA pode ser uma alternativa para diminuir a decomposição e aumentar a biodisponibilidade para a condução de em ensaios in vivo. / The natural products are inexhaustible source of chemical compounds with the most varied biological properties; however, many of them have low bioavailability and / or are degraded by physiological conditions, which makes them less interesting for use as potential drugs. Among the several bioactive natural products the lignans present a significant cytotoxic potential against several tumor cell lines, as (-)-hinokinin (HNK), (-)-cubebin (CB) and (-)-6,6’-dinitrohinokinin (DN), determined in previous works. However, these lignans have a hydrophobic character and can be degraded in physiological conditions depending on pH. Thus, the present work aimed to study the incorporation of these lignans into polymeric nanoparticles (PNPs), as a method to improve bioavailability, avoid losses by degradation and evaluate as this incorporation affects the its cytotoxic activity. In this study, the HNK and CB were extracted from Piper cubeba and the DN was synthesized from the nitration reaction of the HNK. These lignans were submitted to cytotoxicity assays against tumoral cells Hep-2 and Si-Ha. The empty and content lignans PLGA (Poly Lactic-co-Glycolic Acid, 65:35) PNPs were synthesized using the emulsion-evaporation methodology on mechanical agitation and dripping. The PNPs were investigated for their size, morphology and stability through SEM, DSC, TEM, UV/Vis, FTIR, DLS and zeta potential. Encapsulation efficiency incorporation of the lignan was determined by analysis of UV/Vis. In the cytotoxicity assays all lignans were active, with emphasis on inhibition of 98% da (-)-hinokinin about the Hep-2 tumoral line. The three lignans were incorporated into PLGA (65:35) NNPs, however the stability of these PNPs and the percentages of incorporation indicated that only the PLGA-HNK PNPs had the parameters required for use in the cytotoxicity assays. Therefore, other studies were performed with the three lignans aiming to improve the methods of obtaining and stability from sonicator and different composition in PLGA: (50:50) and PLGA-PEG. The physical analyzes showed that PLGA (50:50) nanoparticles obtained by sonication were more stable with smaller sizes and higher zeta potential in absolute values. However, even in this method, DN e CB were not efficiently encapsulated. In this way, only HNK continued the study. The use of PLGA-PEG altered the physical and chemical parameters of PLGA-PEG-HNK NNPs obtained when compared to PLGA-HNK NNPs. Release tests showed better results with NNPs-PLGA-HNK, especially at pH 7.4. The total release time of HNK in all NNPs evaluated was around 30 minutes, which suggests that the nanoparticles obtained are nanocapsules. Comparison of cytotoxicity assay results showed that PLGA-HNK PNPs IC50 was 29.8 μM on the Si-Ha tumor cells, while the free HNK showed IC50 = 110 μM. For the other more aggressive tumor cells PLGA (50:50)-HNK PNPs were less effective than free HNK with about 50% loss of activity. These results indicate the effectiveness of PLGA(65:35)-HNK NPPs on cells of the Si-Ha line, and that the encapsulation of HNK in PLGA NNPs may be an alternative to decrease decomposition and increase bioavailability for conducting biological assays in vivo. / PSDE/88881.134923/2016-01