A associação entre o diabetes e a periodontite produz uma descarga de proteínas inflamatórias que pode ser refletida na saliva. Com base nisso, o objetivo desse estudo foi mensurar as concentrações salivares de interleucina-6 (IL-6), metaloproteinase da matriz-8 (MMP-8) e osteoprotegerina (OPG) em pacientes com periodontite crônica associada ou não ao diabetes mellitus tipo 2. Um total de 90 indivíduos foi dividido em quatro grupos: saudáveis (Controle, n=22), pacientes com doença periodontal (DP, n=24), apenas com diabetes mellitus (DM, n=20) e com doença periodontal e diabetes mellitus (DP+DM, n=24). Dados clínicos e metabólicos foram registrados. Amostras de saliva não-estimulada foram analisadas pelo ensaio imunoenzimático (ELISA). Diferenças estatisticamente significantes foram detectadas entre os grupos para todos marcadores (p<0,05). Em relação à IL-6, diferenças estatisticamente significantes foram encontradas comparando os grupos Controle com DP e com DP+DM, e entre os grupos DP+DM com DM (p<0,005). Para MMP-8, a média das concentrações do grupo Controle foi significativamente menor que em todos os grupos doentes (p<0,01) e nenhuma diferença entre os grupos doentes foi detectada. Para OPG, diferenças estatisticamente significantes foram encontradas entre os grupos Controle com DP e entre Controle com DM (p<0,05). Todos os parâmetros clínicos foram estatisticamente significantes entre os grupos (p<0,001), exceto supuração. No grupo DP, SS (sangramento à sondagem) mostrou uma correlação positiva com as concentrações de IL-6 (r=0,48; p<0,05), PS>=7 (profundidade de sondagem>=7mm) correlacionou-se positivamente com as concentrações de MMP-8 (r=0,46; p<0,05), e os níveis de HbA1c também correlacionaram-se positivamente com as concentrações de IL-6 (r=0,54; p<0,000). Concluindo, a saliva é um adequado substrato para identificação de biomarcadores inflamatórios em pacientes periodontais com ou sem diabetes. A IL-6 é um biomarcador candidato para periodontite e periodontite associada ao diabetes na saliva. Além disso, conclui-se que a super-expressão de MMP-8 e OPG pode acionar o aumento do colapso periodontal observado em indivíduos com diabetes tipo 2. / Background: Association of diabetes and periodontitis produces an inflammatory proteins discharge that can be reflected in saliva. The aim of this study was to measure salivary concentrations of interleukin-6 (IL-6), matrix metalloproteinase-8 (MMP-8) and osteoprotegerin (OPG) in patients with chronic periodontitis associated or not to type 2 diabetes mellitus. Methods: A total of 90 subjects was divided in four groups: healthy (Control, n=22), patients with Periodontal Disease (PD, n=24), Diabetes Mellitus only (DM, n=20), Periodontal Disease and Diabetes Mellitus (PD+DM, n=24). Clinical and metabolic data were recorded. Non-stimulated saliva samples were analyzed by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Results: Significant differences were detected between groups for the biomarkers (p<0.05). Regarding IL-6, significant differences were found comparing Control with PD and with PD+DM, and comparing PD+DM with DM groups (p<0.005). For MMP- 8, the concentrations mean of the Control group was significantly lower than all the diseased groups (p<0.01), and no differences between diseased groups were detected. For OPG, significant differences were found between Control and PD, and between Control and DM groups (p<0.05). All clinical parameters were significant between groups (p<0.001), except suppuration. In PD group, BOP (bleeding on probing) showed positive correlation with IL-6 concentrations (r=0.48; p<0.05), PPD>=7 (pocket depth>=7mm) correlated positively with MMP-8 concentrations (r=0.46; p<0.05), also HbA1c levels correlated positively with IL-6 concentrations (r=0.54; p<0.000). Conclusion: Saliva is an adequate substrate for inflammatory biomarkers identification in periodontal patients. IL-6 is a candidate biomarker for periodontitis and periodontitis associated to diabetes in the saliva.

O câncer colorretal é um dos tipos de tumores mais frequentes no mundo. A atual dificuldade na avaliação correta da resposta ao tratamento torna necessário o desenvolvimento de novas abordagens de detecção tumoral. Atualmente, o sequenciamento genômico em larga escala permite um estudo mais compreensivo das alterações estruturais e de sequência presentes no tumor. A aplicação destas abordagens de maneira personalizada permite o desenvolvimento de biomarcadores tumor específicos que podem facilitar a avaliação de resposta ao tratamento e a presença de doença residual, bem como revelar alterações de sequência em genes capazes de servir de novos alvos terapêuticos. Neste estudo foi desenvolvida uma metodologia eficiente para a identificação de biomarcadores baseados na existência de variações estruturais em genomas de tumores de reto, eliminando a necessidade de sequenciamento do genoma normal do mesmo paciente e diminuindo portanto o custo da abordagem. Os biomarcadores encontrados para cada um dos seis pacientes foram utilizados para avaliar a presença de doença residual após o tratamento através da detecção de DNA tumoral circulante nas amostras de plasma coletadas em momentos diferentes do tratamento. O sequenciamento em baixa cobertura personalizado é portanto uma alternativa viável e promissora para avaliar a resposta ao tratamento em pacientes com tumores de reto. Na segunda parte do estudo, a análise de linhagens celulares de tumores colorretais revelou uma grande quantidade de mutações pontuais somáticas (SNVs e InDels) em genes codificadores para proteínas de superfície celular (surfaceoma). Estas alterações no surfaceoma indicam potenciais novos alvos para drogas e vias regulatórias alteradas neste tipo de tumor. Além disso, estas mutações pontuais também são responsáveis pela geração de epítopos com potencial imunogênico e estes novos epítopos podem ser aplicados como vacinas antitumorais personalizadas e já haviam sido propostos como uma alternativa terapêutica. A presença de novos epítopos, principalmente nas linhagens com elevadas taxas de mutação (resultante da instabilidade de microssatélites e mutações em genes de reparo de DNA tipo mismatch ou POLE), sugerem também um potencial uso de drogas moduladoras do sistema imune em pacientes com tumores que apresentam estas mesmas características. Portanto, o estudo de alterações genômicas em tumores primários e linhagens de câncer colorretal permitiu a detecção de variações estruturais que foram utilizadas como biomarcadores personalizados em pacientes com tumores de reto assim como a identificação de genes contendo mutações pontuais em linhagens celulares de câncer colorretal, que revelam potenciais novos alvos terapêuticos a serem explorados na clínica / Colorectal cancer is one of the more frequent tumor types in the world. To select the appropriate treatment course, it is necessary to develop more precise diagnostic approaches. The current availability of high throughput genome sequencing methods allows for a comprehensive characterization of the structural and sequence alterations present in each tumor. The use of tumor genome sequencing in a personalized setting can result in tumor specific biomarkers that help evaluate response to treatment and the presence of residual disease, improving the clinical management of these patients, and also reveal sequence alterations in genes capable of serving as new therapeutic targets. In this study we developed an efficient bioinformatics pipeline to identify biomarkers based on the existing structural alterations in rectal tumor genomes, eliminating the need to sequence the matched normal genome and therefore reducing the cost for this approach. The biomarkers found for each of the six patients were used to evaluate the presence of residual disease after treatment through the detection of circulating tumor DNA in plasma samples collected at different points during the treatment. Sequencing tumor genomes with low coverage is therefore a viable and promising alternative to follow up rectal cancer patient\'s response to treatment. In the second part of this study, the analysis of colorectal cancer cell lines revealed a large quantity of point mutations (SNVs and InDels) in genes coding for proteins located in the cell surface (surfaceome). These alterations in the surfaceome indicate potential new drug targets and altered pathways in this type of tumor. Furthermore, these point mutations are also responsible for the generation of new epitopes with immunogenic potential and these new epitopes can be applied as personalized tumor vaccines and had previously been proposed as a therapeutic alternative. The presence of new epitopes, especially in the cell lines with elevated mutation rates (resulting from MSI and mutations in DNA mismatch-repair genes or POLE), suggests a potential use of immune checkpoint target drugs in patients with tumors that share these genetic characteristics. With a large-scale bioinformatics approach, we detected new tumor epitopes resulting from point mutations, present in most of the cell lines used. The analysis of gene expression data puts into perspective both the somatic mutations found and which targets are promising as well as the development of therapies based on vaccines derived from tumor epitopes. In conclusion, the study of genomic alterations in primary tumors and colorectal cancer cell lines allowed the detection of structural variations that were used as personalized biomarkers in patients with rectal tumors as well as the identification of genes containing point mutations in colorectal cancer cell lines, that reveal potential new therapeutic targets to be explored in the clinical setting.

Apesar da introdução da HAART, formas leves de Transtornos Neurocognitivos Associados ao HIV (HAND) permanecem altamente prevalentes, afetando metade de todos os indivíduos infectados. A inflamação sistêmica e localizada induzida pelo HIV é considerada um dos mecanismos da HAND, e embora muitos biomarcadores potenciais tenham sido estudados, até o momento nenhum deles provou ser útil na prática clínica. Portanto, o objetivo desse trabalho foi investigar os níveis de biomarcadores de ativação celular, neurodegeneração e virológicos, no líquido cefalorraquidiano (CSF), e também marcadores genéticos no sangue, buscando associá-los à presença de HAND. Materiais e métodos: Utilizando um desenho transversal, níveis dos marcadores de ativação celular sCD14, Neopterina, MCP-1, IL-1b, IL-6, TNF-?, CXCL-10, IFN-? e MIP-1?; marcadores neuronais Tau, p-Tau, A?40, A?42 e Neurofilamentos; carga viral de HIV e níveis ApoE foram mensurados em 84 amostras de LCR , e a genotipagem do vírus, bem como a genotipagem da ApoE, foram feitas no sangue de 33 indivíduos infectados pelo HIV com alteração neurocognitiva assintomático (ANI), 15 com alteração neurocognitiva de leve a moderada (MND), 15 com demência associada ao HIV ( HAD), 14 controles infectados pelo HIV (C HIV +) e 7 controles não infectados pelo HIV (C HIV-). Os dados clínicos também foram avaliados. Resultados: O parâmetro de idade diferiu estatisticamente entre os grupos, por isso foi ajustado para análise posterior. Os controles HIV+ e o grupo HAND estavam todos sob HAART e aproximadamente 96% deles apresentaram carga viral plasmática e liquórica suprimidas. Os marcadores de neurodegeneração não diferiram estatisticamente entre os grupos. No entanto, os marcadores de ativação celular IFN-gama, IL-1beta e sCD14, juntamente com a ApoE, mostraram diferenças significativas. A análise discriminatória revelou que ApoE e IL-1? juntos possuem maior poder discriminatório para diferenciar o grupo HAND dos controles HIV+. A IL-1b mostrou um aumento progressivo no declínio cognitivo, enquanto os níveis de ApoE mostraram-se mais elevados nos controles HIV+, grupo que também teve a maior porcentagem de genótipo ?4. sCD14 por sua vez mostrou-se elevado no grupo HAND, enquanto IFN-? apresentou queda. Conclusão: Os resultados reforçam o conceito de que a elevação da regulação das citocinas pró-inflamatórias, como sCD14 e IL-1beta, pode desempenhar um papel na patogênese da HAND, mesmo nos pacientes com supressão viral.Em contrapartida, nenhum marcador de neurodegeneração apresentou diferença estatística entre os grupos. É possível que as diferenças encontradas em relação a ApoE nos grupos, tanto tem termos de regulação como a presença do genótipo e4, indique algum mecanismo compensatório, que poderia resultar em um fator protetor contra HAND, portanto deve ser melhor estudado. / Despite the introduction of HAART, mild forms of HIV-associated Neurocognitive Disorders (HAND) remain highly prevalent, affecting half of all infected individuals. Systemic and localized inflammation induced by HIV is considered to be one of the mechanisms of HAND, and although many potential biomarkers have been studied, none of them have proven to be useful in clinical practice. Therefore, the objective of this study was to investigate the levels of biomarkers of cellular activation, neurodegeneration and virological, in the cerebrospinal fluid (CSF), as well as genetic markers in the blood, seeking to associate them with the presence of HAND. Materials and methods: Using a cross-sectional design, levels of the cell activation markers sCD14, Neopterin, MCP-1, IL-1b, IL-6, TNF-?, CXCL-10, IFN-? and MIP-1?; neuronal markers Tau, p-Tau, A?40, A?42 and Neurofilaments; HIV viral load and ApoE levels were measured in 84 CSF samples, and virus genotyping and ApoE genotyping were done in the blood of 33 HIV-infected individuals with asymptomatic neurocognitive impairment (ANI), 15 with neurocognitive impairment (MND), 15 with HIV-associated dementia (HAD), 14 HIV-infected controls (C HIV +), and 7 non-HIV-infected controls (C HIV-). Clinical data were also evaluated. Results: The age parameter differed statistically between the groups, so it was adjusted for later analysis. HIV + controls and HAND group were all under HAART and approximately 96% of them had suppressed plasma and CSF viral load. Neurodegeneration markers did not differ statistically between the groups. However, the cell activation markers IFN-gamma, IL-1beta and sCD14, along with ApoE, showed significant differences. Discriminatory analysis revealed that ApoE and IL-1? together have greater discriminatory power to differentiate HAND group from HIV + controls. IL-1b showed a progressive increase in cognitive decline, while ApoE levels were higher in HIV + controls, which also had the highest percentage of ?4 genotype. sCD14 in turn showed to be elevated in the HAND group, while IFN-? showed decrease. Conclusion: The results reinforce the concept that increased regulation of proinflammatory cytokines, such as sCD14 and IL-1beta, may play a role in the pathogenesis of HAND, even in patients with viral suppression. On the other hand, no neurodegeneration marker presented statistical difference between groups. It is possible that the differences found regarding ApoE in the groups, both in terms of regulation and the presence of the e4 genotype, indicate some compensatory mechanism, which could result in a protective factor against HAND, so it should be better studied.

O Kraft 36EC® (i.a. abamectina) e o Score 250EC® (i.a. difenoconazol) são agrotóxicos intensamente utilizados nas culturas de morango em regiões de clima tropical, embora sejam compostos classificados como extremamente tóxicos e muito perigosos ao ambiente. Misturas de agrotóxicos são aplicadas nas culturas agrícolas e a presença destes compostos na água pode potencializar os efeitos tóxicos a organismos aquáticos não alvos. A ocorrência do escorrimento superficial (runoff) contaminado com agrotóxico e a contaminação por aspersão direta (spray drift) em ecossistemas tropicais próximo aos corpos hídricos também podem comprometer o ecossistema aquático local devido à toxicidade desses compostos a organismos não alvos. Considerando os riscos ecológicos inerentes ao uso destes agrotóxicos, o objetivo principal desta pesquisa foi avaliar o efeito ambiental dos praguicidas Kraft 36EC® e Score 250EC® e de seus princípios ativos, abamectina e difenoconazol, respectivamente. Foram realizados testes de toxicidade aguda em laboratório a partir de exposições dos compostos isolados e em misturas utilizando como organismo teste embriões e adultos de Danio rerio. Experimentos in situ (mesocosmos) foram realizados a fim de avaliar os efeitos do runoff e spray drift contaminados com os agrotóxicos Kraft 36EC® e Score 250EC®, isolados e em misturas. Tanto nos mesocosmos quanto em experimentos de laboratório analisou-se, além da mortalidade, biomarcadores bioquímicos. Pelos resultados obtidos verifica-se que não foram observadas diferenças significativas entre a toxicidade isolada dos ingredientes ativos e suas respectivas formulações comerciais em testes agudos. Nos testes de toxicidade com as misturas dos ingredientes ativos, observou-se que a mistura de abamectina + difenoconazol promoveu um efeito tóxico sinérgico a adultos de Danio rerio em exposições agudas. Observou-se também a ausência do mesmo efeito nas exposições com as misturas das formulações comerciais neste mesmo estágio de vida. A exposição dos embriões às misturas de Kraft 36EC® e Score 250EC® mostrou um efeito antagônico nas baixas concentrações e efeito sinérgico nas mais altas. Verificou-se um aumento significativo na atividade da enzima de biotransformação 7-etóxiresorufina-0-deetilase (EROD) e nos níveis de malondialdeído MDA nas brânquias de peixes expostos à formulação comercial da abamectina. Houve um aumento na atividade da glutationa-S-transferase (GST), glutationa peroxidase (GPx) e níveis de MDA, e diminuição da glutationa redutase (GR) nas brânquias dos peixes expostos ao difenoconazol e sua formulação comercial. Também foi observado um aumento nas respostas dos biomarcadores analisados nas brânquias dos organismos expostos às misturas tanto dos princípios ativos quanto das formulações comerciais. A exposição ao Kraft 36EC® spray drift em campo promoveu os maiores efeitos deletérios no metabolismo de Danio rerio, seguido das exposições ao runoff contaminado com Kraft 36EC® e Score 250EC®. As formulações comerciais Kraft 36EC® e Score 250EC® e as misturas das mesmas promoveram alterações significativas no metabolismo de detoxificação, e causam estresse oxidativo em peixes. Diferenças no padrão de respostas dos biomarcadores entre os experimentos realizados em mesocosmos e em laboratório ficam evidentes devido à influência das concentrações utilizadas, das interações ecológicas entre as comunidades presentes no meio e das variáveis ambientais nos experimentos em mesocosmos. A avaliação da toxicidade de agrotóxicos, especialmente em países tropicais, e indicações para futuras pesquisas são discutidos. / Kraft 36EC® (a.s. abamectin) and Score 250EC® (a.s. difenoconazole) are intensely used pesticides in strawberry crops in tropical regions, even though they are classified as extremely toxic and very dangerous to the environment. Mixtures of agrochemicals are applied to agricultural crops and the presence of these compounds in water may potentiate toxic effects to non-target aquatic organisms. The contamination of edge-of-field water bodies through runoff and spray drift may compromise the local aquatic ecosystem due to the toxicity of these compounds to non-target organisms. Considering the potential ecological risks related with the use of these pesticides, the main objective of this research was to evaluate the environmental effects of the pesticides Kraft 36EC® and Score 250EC® and its active ingredients abamectin and difenoconazole, respectively. Acute toxicity tests were performed in the laboratory with the isolated compounds and their mixtures using zebrafish (Danio rerio) embryos and adults as test organism. A mesocosm experiment was also performed to evaluate the effects of simulated runoff and spray drift containing Kraft 36EC® and Score 250EC® individually and in mixtures. Besides lethality, selected biomarkers were also evaluated in the fish from the mesocosm and laboratory experiments. No significant differences were observed in effects of the active ingredients and their respective commercial formulations in acute fish tests after single exposure to each test compound. The acute mixture toxicity tests with the active ingredients showed that this mixture exerts a synergistic toxic effect to adult fish. The absence of the synergistic effect on exposures with the commercial formulations mixtures was also observed. Embryo exposure to Kraft 36EC® and Score 250EC® mixtures showed an antagonistic effect at low concentrations and synergistic effect at the highest. A significant increase was observed in the activity of the EROD biotransformation enzyme and in the levels of MDA in fish gills after exposure to Kraft 36EC®. An increase in GST activity, GPx and MDA levels, and a decrease of GR in fish gills was noted after fish exposure to difenoconazole and its commercial formulation. An increase in the responses of the biomarkers analyzed in the gills of the organisms exposed to the mixtures of both the active ingredients and the commercial formulations as compared to single-compound exposure was also observed. Exposure to simulated spray drift of Kraft 36EC® in the mesocosms promotes the greatest deleterious effects on metabolism of Danio rerio followed by exposures to the runoff contaminated with a Kraft 36EC® and Score 250EC® mixture. The commercial formulations Kraft 36EC® and Score 250EC® and their mixtures lead to significant changes in the detoxification metabolism resulting in oxidative stress to fish. Differences in biomarkers responses between the experiments performed in the mesocosms and the laboratory were noted and are due to the different concentrations tested; the ecological interactions between the communities present in the mesocosms and differences in environmental variables. The need and indications for future research related with the evaluation of pesticide toxicity, especially in tropical countries, are discussed.

Submitted by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2017-08-25T18:56:36Z No. of bitstreams: 1 TES_DANIEL_DOLIVEIRA_SILVA_CONFIDENCIAL.pdf: 262553 bytes, checksum: 4a53c6ec3ea6da2ddc6cd64d93f5925c (MD5) / Approved for entry into archive by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2017-08-25T18:56:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TES_DANIEL_DOLIVEIRA_SILVA_CONFIDENCIAL.pdf: 262553 bytes, checksum: 4a53c6ec3ea6da2ddc6cd64d93f5925c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-25T18:56:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TES_DANIEL_DOLIVEIRA_SILVA_CONFIDENCIAL.pdf: 262553 bytes, checksum: 4a53c6ec3ea6da2ddc6cd64d93f5925c (MD5) Previous issue date: 2017-05-19 / Purpose: to determine the usefulness of serum TF as a potential marker for patients with clear cell RCC. Materials and Methods: prospective study of 30 patients with clear cell RCC submitted to nephrectomy and 16 controls without clear cell RCC treated surgically for other conditions. TF is a endothelium marker that was correlated with worse prognosis in a variety of solid tumors including RCC. Serum TF was collected before surgery at the operating room and in the postoperative setting after at least four weeks. Serum samples were analyzed with a commercial ELISA kit for human TF (R&D Systems ?). Results: Mean preoperative serum TF levels in clear cell RCC patients and in controls were 66.8 pg/dl and 28.4 pg/dl, respectively (p<0.001). Mean postoperative serum TF levels in clear cell RCC patients were 26.3 pg/dl. In all patients with clear cell RCC postoperative serum levels of TF were lower, with a mean reduction of 41.6 pg/dl in the postoperative setting (p<0.001). Linear regression revealed that tumor size was correlated with the postoperative reduction of serum TF levels (p=0.037). Conclusions: We have shown a 3-fold reduction in the median preoperative serum levels of TF in patients with clear cell RCC after surgery. We have also shown a difference of the same magnitude in the serum levels of TF compared with those of a control group of patients with benign diseases. TF appears to be a useful serum marker for the presence of clear cell RCC. Further studies are needed to validate these findings. / O c?ncer renal ? uma das neoplasias malignas mais letais. As taxas de mortalidade t?m crescido mundialmente a despeito da evolu??o do diagn?stico precoce e do surgimento de novos f?rmacos ativos na terapia da doen?a sist?mica. Atualmente, para se estabelecer riscos de morbimortalidade em c?ncer renal os pacientes s?o classificados de acordo com escalas e nomogramas, que ainda n?o conseguem predizer com grande acur?cia a evolu??o cl?nica dos mesmos. Nosso estudo foi realizado com o objetivo de determinar a utilidade da dosagem do Fator Tecidual (FT) no soro como potencial marcador para pacientes comCarcinoma de C?lulas Claras de Rim (CCCr).Realizamos um estudo prospectivo com 30 pacientes com CCCr submetidos ? nefrectomia e 16 controles sem CCCr tratados cirurgicamente para outras condi??es. O FT s?rico foi coletado na sala cir?rgica antes do procedimento e no p?s-operat?rio ap?s pelo menos quatro semanas. Os n?veis s?ricos detectados no pr?-operat?rio foram tr?s vezes mais altos em pacientes com CCCr do que nos controles, e dininu?ram em todos os pacientes com CCCr no p?s-operat?rio, com uma redu??o m?dia de 41,6 pg/ml (p <0,001). Nossos achados sugerem que oFTpode ser utilizado como um marcador s?rico para a presen?a de CCCr.

Submitted by PPG Biotecnologia Farmac?utica (mpbf@pucrs.br) on 2017-12-20T19:17:22Z No. of bitstreams: 1 ANA_SOFIA_OLIVEIRA-DIS.pdf: 959707 bytes, checksum: 29ee77d841ca692f44c6db51a03d5a23 (MD5) / Approved for entry into archive by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2017-12-26T17:46:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 ANA_SOFIA_OLIVEIRA-DIS.pdf: 959707 bytes, checksum: 29ee77d841ca692f44c6db51a03d5a23 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-26T17:48:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ANA_SOFIA_OLIVEIRA-DIS.pdf: 959707 bytes, checksum: 29ee77d841ca692f44c6db51a03d5a23 (MD5) Previous issue date: 2017-06-20 / Dengue fever is an arboviral infection highly common in Brazil, and it corresponds to a major public health problem. Annually, its incidence overcomes 50,000,000, from which about 25,000 are associated to death cases. Due to this high incidence and number of death, it is of great urgency to identify this disease while in an early state. That way, would be possible to avoid any progression of the disease to more severe cases. A major problem related to dengue is that the virus is represented by four subtypes, which are phylogenetically distinct (DENV1, DENV2, DENV3 and DENV4). This means that, although the manifestations and the forms of dissemination are the same, an infection caused by one of the serotypes will not protect against the others. In fact, an infection caused by one of the four serotypes may intensify even more the disease caused by a secondary infection by the three others. One hypothesis that could explain this relationship between heterotypic infections and severe cases of the disease is the ADE hypothesis (antibody-dependent enhancement), which suggests that a secondary infection would cause a cross-reaction between antigen and antibody, preventing the virus of being inactivated. As a consequence, it would result in an increase of the production of inflammatory mediators and vascular permeability that would intensify the disease. Therefore, it?s very important to identify the disease while it is still in an initial stage. However, this early identification is hard and its diagnosis is still limited. Thus, a serological marker would be highly valuable. Recently, serological biomarkers for early diagnosis have become a topic of great interest. These biomarkers have advantages of not being invasive to the patient and inexpensive to produce and analyze. Thus, in this project, we introduce a new technology for the search of such markers, the peptoids. Peptoids are synthetic oligomers, composed of N-substituted glycine units, and can be used for several biological utilities that provide an alternative technology for the investigation and the elucidation of the immune response. Moreover, they have been used and reported as a potential candidate for the search of serological biomarkers due to their chemical stability in fluids where degradative enzymes can be found. In addition to that, the fact that there is no need for a prior knowledge about the target only make them even more attractive for such ?job?. In this project, a combinatorial library of about one million of peptoids was screened in sera from dengue positive patients, as well as negative patients. Hereby we report the potential of this synthetic molecules for the identification of antibodies with clinical relevance present in the patients' serum. The results here reported were generated by 3 consecutive screening steps, where 33 reactive peptoids were identified as potential biomarkers. Because of the impartiality of this technique, we believe that at least one of these 33 peptoids are extremely specific for the studied disease. Currently, they have been sent for the sequencing and re-synthesis step, so that new experiments can be done and the study can continue. We are very excited and we don?t expect nothing less than promising results in the field of diagnosis and dengue. / A dengue ? uma arbovirose de alta incid?ncia no Brasil, e corresponde a um grande problema de sa?de p?blica. Ela possui uma incid?ncia anual de mais de 50.000.000 e resulta num elevado n?mero de casos de ?bito, cerca de 25.000. Devido a isso, ? de grande urg?ncia que possamos identificar esta doen?a enquanto ela ainda se encontra em um estado inicial, para que, deste modo, possamos evitar a progress?o da doen?a para casos mais severos. Um grande problema relacionado a dengue ? que o v?rus ? representado por quatro subtipos, os quais s?o filogen?ticamente distintos (DENV1, DENV2, DENV3 e DENV4). Isso quer dizer que, por mais que as manifesta??es e formas de dissemina??o sejam iguais, a contamina??o por um dos sorotipos n?o ir? proteger contra as demais. Ao contr?rio do que muitos acreditam, a infec??o por um sorotipo pode at? assentuar uma infec??o secund?ria pelos demais. Uma hip?tese para explicar casos mais severos da doen?a devido a infec??es heterot?picas ? a hip?tese de ADE (antibody-dependent enhancement), a qual sugere que a rea??o cruzada resulta na falta da inativa??o viral, aumentando assim a produ??o de mediadores inflamat?rios e permeabilidade vascular devido a uma estimula??o da replica??o do v?rus. Devido a isso, ? de grande necessidade a identifica??o da doen?a antes das manifesta??es severas, e, porque essa identifica??o cl?nica, principalmente no est?gio inicial da doen?a, ? dif?cil, um marcardor sorol?gico seria muito valioso. Marcadores sorol?gicos para diagn?stico de doen?as v?m se tornando um t?pico de recente interesse. Esses biomarcadores t?m a vantagem de n?o serem invasivos para o paciente e baratos de produzir e analizar. Sendo assim, aqui, apresentamos uma nova tecnologia para a busca desses marcadores, os pept?ids. Pept?ids s?o olig?meros sint?ticos, compostos por unidades de glicina N-substitu?da e possuem uma variada utilidade biol?gica que proporcionam uma tecnologia alternativa para a investiga??o e elucida??o da resposta imune. O mesmo, v?m se destacando para busca de biomarcadores sorol?gicos devido a sua estabilidade qu?mica em flu?dos onde enzimas degradativas podem estar presentes e devido a resultados promissores sem a necessidade de um conhecimento pr?vio sobre o ant?geno natural e o seu anticorpo correspondente. Neste projeto, foi realizado a triagem de uma biblioteca combinatorial com cerca de um milh?o de pept?ids, os quais passaram por etapas de triagens em soros de pacientes positivos para dengue, bem como para pacientes negativos. Aqui provamos o potencial dessas mol?culas sint?ticas na identifica??o de anticorpos com relev?ncia cl?nica presente no soro dos pacientes. Os resultados obtidos foram gerados atrav?s de 3 etapas de triagem consecutivas, onde 33 pept?ids reativos foram identificados. Devido a imparcialidade desta t?cnica, acreditamos que pelo menos um desses 33 pept?ids seja extremamente espec?fico para a doen?a estudada. Os mesmos foram enviados para sequenciamento e re-s?ntese para que novos experimentos sejam feitos e para que os estudos continuem. Espera-se resultados muito promissores na ?rea de diagn?stico para dengue.

Submitted by PPG Medicina e Ci?ncias da Sa?de (medicina-pg@pucrs.br) on 2018-05-15T11:37:17Z No. of bitstreams: 1 RICARDO_MEDEIROS_PIANT?.pdf: 4074123 bytes, checksum: 97d3d6422fb7d0e0e6563a995eea242c (MD5) / Approved for entry into archive by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2018-05-28T14:35:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 RICARDO_MEDEIROS_PIANT?.pdf: 4074123 bytes, checksum: 97d3d6422fb7d0e0e6563a995eea242c (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-28T14:39:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RICARDO_MEDEIROS_PIANT?.pdf: 4074123 bytes, checksum: 97d3d6422fb7d0e0e6563a995eea242c (MD5) Previous issue date: 2018-01-26 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Cardiovascular diseases are one of the most prevalent diseases worldwide and the main cause of mortality in Brazil. They are responsible for 34% of the deaths in America. The most prevalent cardiovascular disorder are ischemic heart disease, stroke, cardiac insufficiency and arterial systemic hypertension. The risk stratification for patients submitted to cardiac surgery comprehends pre operatory risks, mainly. However, during intraoperative period several factors, including surgical technique, myocardial protection and cardiopulmonary bypass may interfere in post-operative results. Thus, intraoperative monitoring and early intervention may improve cardiac surgery outcomes. The increase of serum biomarkers levels indicates myocardial lesion and even necrosis in subjects submitted to cardiac surgery. The biomarker concentration may be related to an adverse outcome. Blood level measures of lactate can also be used as a marker to assess adequate tissue perfusion; providing the magnitude of anaerobic metabolism and tissue oxygenation deficiency. The microRNAs (miRNAs) are part of a non-coding endogenous class of RNAs that act as potent post-transcriptional regulators of gene expression. Moreover, miRNAs present characteristics that make them good biomarkers with high levels of sensibility and specificity allowing early detection of pathological states. In addition, they also change in accordance to the disease course and have a long half-life in the sample enabling an easy laboratory detection. This study identified the profile of cardiac biomarkers such as CK-MB, troponin I and lactate in 115 patients submitted to cardiac surgery and its correlation with the outcome. It was analyzed the expression of miRNAs 1, 133a and 499 expression in 24 individuals as well as the correlation between the biochemical and molecular biomarkers. A correlation of miRNA-1 with troponin I (r = 0.4893, P = 0.0025) and lactate (r = 0.5689, P = 0.0002) was found, which pointed to the first evidence that a miRNA is related to the state of hypoperfusion and tissue oxygenation, monitored by serum lactate. These data will allow the potential of these complex nucleotides to be explored in future studies for the diagnosis, monitoring and therapy of the most diverse pathologies and cardiac surgeries. / As doen?as cardiovasculares s?o prevalentes mundialmente e, no Brasil, s?o respons?veis pela principal causa de mortalidade, superando as neoplasias e as doen?as pulmonares. Elas s?o respons?veis por 34% das causas de morte, com dados semelhantes em toda a Am?rica. As doen?as cardiovasculares mais significativas s?o a cardiopatia isqu?mica, o acidente vascular encef?lico, a insufici?ncia card?aca e a hipertens?o arterial sist?mica. A estratifica??o de risco dos pacientes submetidos ? cirurgia card?aca abrange principalmente os fatores de risco pr?-operat?rios. Entretanto, durante o transoperat?rio, v?rios fatores, incluindo a t?cnica cir?rgica, a prote??o mioc?rdica e a pr?pria circula??o extracorp?rea podem modificar o destino do p?s-operat?rio. Portanto, a monitoriza??o transoperat?ria desses fatores e uma interven??o precoce podem melhorar os resultados na cirurgia card?aca. Em pacientes que s?o submetidos ? cirurgia card?aca, a eleva??o de biomarcadores s?ricos indica les?o e at? mesmo necrose mioc?rdica, sendo que a magnitude do aumento da concentra??o do biomarcador provavelmente esteja relacionada com um desfecho desfavor?vel. A medida dos n?veis sangu?neos de lactato tamb?m pode ser usada como um marcador para avaliar a adequada perfus?o tecidual, fornecendo uma indica??o da magnitude do metabolismo anaer?bico e da defici?ncia de oxigena??o tecidual. Os microRNAs (miRNAs) fazem parte de uma classe de RNAs end?genos, n?o codificadores de prote?nas, que atuam como potentes reguladores p?s-transcricionais da express?o g?nica. Al?m disso, os miRNAs apresentam caracter?sticas que os tornam bons biomarcadores, como alto grau de sensibilidade e especificidade, permitindo a detec??o precoce de estados patol?gicos, al?m de se alterarem de acordo o curso da doen?a e t?m uma longa meia-vida na amostra, sendo rapidamente detectados em laborat?rio. O presente estudo identificou o comportamento dos biomarcadores card?acos CK-MB, troponina I e lactato em 115 pacientes submetidos ? cirurgia card?aca e sua correla??o com os desfechos desfavor?veis. Em 24 desses pacientes foi analisada a express?o dos miRNAs 1, 133a e 499 e estabelecida a correla??o entre esses dois grupos de marcadores. Foi identificada correla??o do miRNA-1 com a troponina I (r=0,4893, P=0,0025) e com o lactato (r=0,5689, P=0,0002), que apontou para a primeira evid?ncia de que um miRNA se relaciona com o estado de hipoperfus?o e oxigena??o tecidual, monitorados pelo lactato s?rico. Esses dados permitir?o que se explore, em futuros estudos, o potencial desses complexos nucleot?deos para o diagn?stico, monitoramento e terapia das mais diversas patologias e cirurgias card?acas.

O uso de agrotóxicos e fertilizantes está gerando risco ecológico aos ecossistemas aquáticos em função da disponibilização de diferentes xenobióticos para a biota e para o meio, expondo as populações aquática e humana a substâncias tóxicas por meio do consumo de água e animais contaminados. Na região de Lagoa da Confusão, há décadas tem sido uma região de importância para o agronegócio e a falta de monitoramento de contaminantes oriundos desta atividade pode comprometer a qualidade do ecossistema aquático. O presente estudo teve como objetivo avaliar o risco ecológico por xenobióticos, utilizando o Tucunaré (Cichla sp.) como bioindicador para avaliação dos possíveis efeitos de xenobióticos associados às atividades de agricultura na cidade de Lagoa da Confusão – TO. Foram realizadas coletas de água e peixes no período de setembro de 2013 a outubro de 2014 em três pontos (A – rio Javaés/Pium, B – rio Javaés/Lagoa da Confusão e C – rio Formoso/Lagoa da Confusão). Para avaliação da qualidade da água utilizou-se parâmetros físico-químicos e concentração de metais pesados (Cd, Pb, Cu, Cr, Mn, Ni e Zn). Para avaliar o risco ecológico do bioindicador utilizou-se a determinação da concentração de metais (Cd, Pb, Cu, Cr, Mn, Ni e Zn) no fígado e músculo e os seguintes biomarcadores: genotóxico (teste Micronúcleo), bioquímicos (níveis séricos de glicose, AST e ALT) e histológicos (brânquias e fígado). Em relação aos parâmetros físico-químicos, o fósforo total no Ponto C apresentou-se acima do valor de referência. Não houve diferença significativa para concentração de metais na água entre os três pontos amostrados (p> 0,05) em relação ao ponto A. A média das concentrações de Cu, Cr e Mn nos três pontos coletados excederam os valores para rios de Classe 1, segundo Resolução Conama 357, indicando contaminação dos recursos hídricos por esses metais. Apenas o Cr estava acima do limite máximo permitido para consumo humano, porém não foi significativamente diferente em relação ao ponto A (p>0,05). O teste de micronúcleo revelou uma baixa frequência nos três locais de coleta. Observou-se hiperglicemia nos animais do ponto C. Nas brânquias, as alterações mais frequentes foram: descolamento epitelial, hiperplasia e hipertrofia do epitélio lamelar, congestão, fusão lamelar parcial e total, edema, infiltrado inflamatório, dilatação capilar e em menor frequência aneurisma e necrose focal. No fígado, as alterações histopatológicas mais frequentes foram vacuolização citoplasmática, hipertrofia nuclear, dilatação dos sinusóides, desarranjo dos cordões hepáticos, estagnação biliar, congestão dos vasos, infiltrado inflamatório e núcleos picnóticos. Observou-se também a ocorrência de necrose focal. A avaliação integrada da concentração de metais na água e nos tecidos dos peixes e dos biomarcadores indica a contaminação tanto da água quanto do peixe por metal, provavelmente proveniente das atividades agrícolas, sendo necessário o monitoramento da qualidade do ecossistema aquático na região, uma vez que os tucunarés além do seu papel ecológico, também fazem parte da alimentação da população local. / The use of pesticides and fertilizers is generating ecological risk to aquatic ecosystems depending on availability of different xenobiotics for biota and the environment, exposing the aquatic and human populations to toxic substances through drinking water and animals contaminated. Confusion Lagoon region, for decades has been an important area for agribusiness and the lack monitoring of contaminants derived from this activity can compromise the quality of the aquatic ecosystem. This study aimed to evaluate the ecological risk by xenobiotics, using the Peacock Bass (Cichla sp.) as bioindicator for evaluation of possible xenobiotic effects associated with agricultural activities in the city of Confusion Lagoon - TO. Water and fish samples were carried out from September 2013 to October 2014 in three points (A - River Javaés/Pium, B - Javaés river/Confusion Lagoon and C - Formoso River/Confusion Lagoon). To evaluate the water quality was used physicochemical parameters and concentration of heavy metals (Cd, Pb, Cu, Cr, Mn, Ni and Zn). To assess the ecological risk of bioindicator was used to determine the concentration of metals (Cd, Pb, Cu, Cr, Mn, Ni and Zn) in the liver and muscle, and the following biomarkers: genotoxic (micronucleus test) and biochemical (serum glucose, AST and ALT) and histological (liver and gills). Regarding the physical and chemical parameters, the total phosphorus at point C showed above the reference value. There was no significant difference in concentration of metals in the water among the three sampling sites (p> 0.05) at point A. The average of Cu, Cr and Mn in the three points collected exceeded the values for Class 1 rivers, according to Conama Resolution 357, indicating contamination of water resources for these metals. Only Cr was above the maximum allowed for human consumption, but was not significantly different at point A (p> 0.05). The micronucleus test revealed a low frequency in the three collection sites. Hyperglycemia was observed in the animals of point C. In the gills, the most frequent changes were epithelial lifting, hyperplasia and hypertrophy of the lamellar epithelium, congestion, partial lamellar fusion and total, edema, inflammatory infiltration, capillary dilatation and less frequently aneurysm and focal necrosis. In the liver, the most common histopathological changes were stage I and II, as cytoplasmic vacuolization, nuclear hypertrophy, dilation of sinusoids, derangement of hepatic cords, bile stagnation, congestion of vessels, inflammatory infiltrate and pyknotic nuclei. It was also observed the occurrence of focal necrosis. Integrated assessment of the concentration of metals in water and tissues of fish and biomarkers indicates contamination both water and fish by metal, probably from agricultural activities, requiring the monitoring of the quality of the aquatic ecosystem in the region, as tucunarés beyond its ecological role, also part of the food for the local population.

Os íons terras raras apresentam propriedades espectroscópicas diferenciadas e números de coordenação entre 6 e 12 e seu estado de oxidação mais comum é o íon trivalente. Apesar de esses íons apresentarem uma baixa intensidade de luminescência, em função de sua baixa absortividade molar, esses são capazes de formar complexo onde o ligante absorva luz e transfira para o centro metálico essa energia, fenômeno conhecido como efeito antena. Essas propriedades tornam os seus complexos alvos de estudos como marcadores em ensaios imunoluminescentes, aliado ao uso de nanopartículas poliméricas. Todos esses fatores podem ser utilizados para a montagem de uma metodologia para o diagnóstico da doença de Chagas, doença tropical negligenciada, que apesar de seus mais de 100 anos após descoberta, ainda possui diversas questões em aberto e sem estudo aprofundado. Dessa maneira, propomo-nos a sintetizar e caracterizar nanopartículas de PHB misturadas aos complexos de terras raras, especificamente, complexos -dicetona - Tb3+ , Sm3+ , Gd3+, ou Eu3+. Pretende-se ligar essas nanopartículas a um espaçador como o glutaraldeído ou então diretamente a um anti-IgG humano e assim, num acoplamento antigeno-anticopo verificar sua emissão de luminescência para detecção de soro positivo para a doença. Dessa forma, obtém-se um biomarcador luminescente para diagnóstico da doença de Chagas. / The rare-earth ions exhibit different spectroscopic properties, coordination numbers between 6 and 12 and trivalent is its most common oxidation state. Despite these ions present low luminescence, due to their low molar absorptivity, they are capable of forming complexes where the ligand absorbs light and transfers this energy to the metal center, a phenomenon known as \"antenna effect\". These properties make their complexes object of studies as markers in fluoroimmunoassay allied to the use of polymeric nanoparticles. All these factors can be used for the assembly of a methodology for diagnosis of Chagas\' disease, a tropical overlooked disease, which despite its more than 100 years after discovering, still has several open issues and without thorough study. Thus, We propose to synthesize and characterize PHB nanoparticles labeled with the rare earth complexes, most specifically -diketone complexes - Tb3+ , Sm3+ , Gd3+, or Eu3+ as marker for biological targets. It\'s intended to link these nanoparticles to a glutaraldehyde as a spacer or directly to an anti-human IgG and thus, in a coupling antibody-antigen, verify its luminescence-emission for detecting positive serum sickness. Therefore, we have a luminescent biomarker for diagnosis of Chagas\' disease.

Os meningiomas são os tumores primários do Sistema Nervoso Central (SNC) mais frequentes e representam 35,5% dos casos considerando-se todas as faixas etárias. Apesar dos progressos ocorridos nas últimas décadas, a tumorigênese dos meningiomas ainda permanece como um desafio. Há um consenso da necessidade de ferramentas moleculares para ajudar tanto no diagnóstico quanto no prognóstico dos meningiomas. Neste contexto, alguns trabalhos demonstram a importância do papel dos receptores de estrógeno e progesterona, assim como o entendimento das alterações nos níveis de expressão dos microRNAs (miRNAs) na tumorigênese dos meningiomas. Alguns estudos demonstram que o perfil de expressão sérico dos miRNAs tem correlação com a classificação e evolução clínica, sendo de grande interesse o uso desse material por se tratar de um procedimento não-invasivo, ou seja, como biomarcadores. Objetivos: avaliar o perfil de expressão tecidual e sérica de microRNAs associados as vias dos receptores de estrógeno e progesterona em meningiomas grau I, II e III. Pacientes e métodos: foram utilizadas amostras de tecido e plasma de 40 pacientes com meningiomas grau I, II e III. Para a análise da expressão dos miRNAs miR-34a, miR-143, miR-145 e miR-335 foi utillizada a técnica de PCR em tempo real. Resultados: os miRNAs: miR-34a e miR-145 apresentaram diferença estatística significativa nas amostras de tecido tumoral entre os grupos estudados com menor expressão nas amostras de meningiomas grau II quando comparadas as amostras grau I e III. Não observamos diferença estatística estatística significativa na expressão dos miRNAs nas amostras de plasma. Conclusão: os miRNAs selecionados não apresentaram correlação com a progressão tumoral em meningiomas. / Meningiomas are the most common primary Central Nervous System (CNS) tumors, accounting for 35.5% of the cases, considering all age groups. Despite the progress made in recent decades, the tumorigenesis of meningiomas still remains a challenge. There is a consensus of the need for molecular tools to assist both diagnosis and prognosis of meningiomas. In this context, some studies demonstrate the importance of the role of estrogen and progesterone receptors, as well as the understanding of alterations in microRNA (miRNAs) expression levels in the tumorigenesis of meningiomas. Some studies have shown that the serum expression profile of the miRNAs correlates with the classification and clinical evolution, being of great interest the use of this material because it is a non-invasive procedure, i.e., as biomarkers. Objectives: To evaluate the tissue and serum expression profile of microRNAs associated with the estrogen and progesterone receptor pathways in meningiomas grade I, II and III. Patients and methods: tissue and blood samples from 40 patients with grade I, II and III meningiomas were used. For analysis of miRNA expression miR-34a, miR-143, miR-145 and miR-335 was used the real-time PCR technique. Results: miRNAs: miR-34a and miR-145 presented a significant statistical difference in the tumor tissue samples between the groups with lower expression in the samples of grade II meningiomas when compared to samples I and III. We did not observe statistically significant statistical difference in miRNA expression in blood samples. Conclusion: the selected miRNAs showed no correlation with tumor progression in meningiomas.