Orientador: Fernanda da Cruz Landim e Alvarenga / Banca: Cezinande de Meira / Banca: Marcelo Marcondes Seneda / Resumo: Em éguas, o aprimoramento e a aplicação de técnicas como a ICSI, TO e transferência nuclear é restrita devido à dificuldade de obtenção de oócitos in vivo, atribuída a particularidades dos folículos ovarianos da espécie. Em folículos pré-ovulatórios, a expansão do cumulus que ocorre com a progressão da maturação folicular e deposição de ácido hialurônico aumenta os índices de recuperação de oócitos por folículo, enquanto o tratamento superovulatório, embora não seja eficiente em aumentar os índices de recuperação por folículo, melhora os índices de recuperação por égua. Este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito da administração de hCG na expansão das células da granulosa e do cumulus e no índice de recuperação de oócitos a partir de folículos imaturos de éguas superovuladas. Para isso 10 éguas foram submetidas à OPU após três diferentes tratamentos hormonais (G1: EPE, G2: EPE/hCG e G3:controle). Cada égua foi submetida aos três tratamentos, tendo sido alternados um ciclo onde era permitido que houvesse ovulação, sem interferência, e um ciclo com OPU. No ciclo onde devia ocorrer aspiração, as éguas recebiam aplicações de prostaglandina no sétimo e oitavo dia após a ovulação. Para os grupos 1 e 2, iniciava-se o tratamento com EPE no D7. Quando a maioria dos folículos atingia entre 22 e 27 mm, somente o grupo 1 recebia hCG, a EPE era suspensa e efetuava-se OPU 24 horas depois para ambos os grupos. Para o grupo controle, após a aplicação de prostaglandina a OPU era efetuada 24 horas após o folículo dominante atingir 27-30 mm. Em todos os grupos foram aspirados folículos entre 10 e 35 mm. Não houve diferença entre os 3 grupos quanto aos índices de recuperação de oócitos por folículo, com médias de 15% a 16,7%. Entretanto, a hCG foi capaz de induzir uma expansão e luteinização precoce das células foliculares. / Abstract: In mares, the use of artificial reproductive techniques (ART) such as intracitoplasmatic sperm injection (ICSI), oocyte transfer (OT), and cloning is limited by the low availability of oocytes obtained either in vitro or in vivo. The low recovery rate of oocytes from immature follicles seems to be linked with anatomical particularities of the follicular wall. In pre-ovulatory follicles (>35mm in diameter), final oocyte maturation is accompanied by the expansion of the cumulus, which releases the oocyte from the follicular wall resulting in increased recovery rates after follicular aspiration. The number of oocytes recovered in each OPU (Ovum Pick Up) section should be higher with superovulation. However, although the total number of oocytes recovered by each individual mare is increased, the recovery rate per follicle is still low. Treatment with hCG modifies the intra-follicular environment by inducing precocious expansion of the granulosa cells, leading to a higher recovery rate during OPU of pre-ovulatory follicles. Therefore, this study aimed to evaluate the effect of hCG treatment on the recovery rate of oocytes obtained from immature follicles in mares superovulated with Equine Pituitary Extract (EPE). Ten mares were rotated in three different treatments: G1 - superovulated with EPE; G2 - Superovulated with EPE and treated with hCG, and G3 - Control. For all treatments, when the biggest follicle reached 27 - 30 mm, all follicles bigger than 10 mm were aspirated. Each OPU cycle was alternated with a rest cycle when a spontaneous ovulation occurred. Although treatment with hCG increased the number of follicles presenting expanded granulosa and high intra-follicular progesterone concentration, no statistically significant differences were observed between groups regarding oocyte recovery. / Mestre

Orientador: Regina Maria Barretto Cicarelli / Banca: Dulce Helena Siqueira Silva / Banca: Maurício Bacci Junior / Resumo: O protozoário hemoflagelado, Trypanosoma cruzi, transmitido principalmente pelo inseto triatomíneo, por infecção congênita ou por transfusão sanguínea, causa a tripanossomíase americana ou doença de Chagas, como é mais conhecida. Essa é uma séria doença parasitária que ocorre na América Latina, com considerável impacto social e econômico. Dois fármacos, nifurtimox e benzonidazol, são indicados no tratamento de pessoas infectadas, mas são pouco eficientes na fase aguda e praticamente ineficientes na fase crônica da doença. Devido a esses fatores, é de extrema importância que se encontre agentes quimioterápicos e/ou quimiopreventivos mais eficientes e eficazes. O presente trabalhou objetivou avaliar a influência no proteoma de T. cruzi de três substâncias extraídas de plantas da família Piperaceae, peperobtusina A e B de Peperomia obtusifolia e piplartina de Piper tuberculatum, através da eletroforese bidimensional (2D) - DIGE (Difference Gel Electrophoresis - GE Healthcare) associada à espectrometria de massas. O tratamento realizado com peperobtusina A de Peperomia obtusifolia em cepa Y de T. cruzi identificou proteínas de interesse, como proteína do bastão paraflagelar e triparedoxina peroxidase, importantes na composição flagelar e proteção natural do parasito ao estresse oxidativo, respectivamente. Os resultados obtidos com peperobtusina B de Peperomia obtusifolia na mesma cepa de T. cruzi mostraram proteínas que podem servir como interessantes alvos potenciais para futuro desenvolvimento de fármacos. São elas: calmodulina, tirosina aminotransferase e arginina quinase. Os resultados obtidos com o tratamento das cepas Y e Bol de T. cruzi pela piplartina de Piper tuberculatum demonstraram que apesar das diferenças de suscetibilidade dessas cepas em relação ao benzonidazol... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The protozoa hemoflagelate, Trypanosoma cruzi, transmitted mainly for the triatomíneo insect, congenital infection or sanguineous transfusion, cause American tripanosomiasis or Chagas disease, as more it is known. This is a serious parasitic illness that occurs in Latin America, with considerable social and economic impact. Two drugs, nifurtimox and benznidazol, are indicated in the treatment of infected people, but they are little efficient in the acute phase and practically inefficient in the chronic phase of the illness. Because of these factors, it is of extreme importance find efficient chemopreventive and/or chemotherapic agents. This work aims to evaluate the T. cruzi proteome influence of three substances extracted of plants belonging to Piperaceae family, being peperobtusine A and B of Peperomia obtusifolia and piplartine of Piper tuberculatum, through two dimensional electrophoresis (2D) - DIGE (Difference Gel Electrophoresis - GE Healthcare) and mass spectrometry. The treatment carried with peperobtusine A of P. obtusifolia in Y strain of T. cruzi identified interest proteins, as paraflagelar rod protein and triparedoxin peroxidase, important in the flagella composition and natural protection of oxidative stress, respectively. The results using peperobtusine B of the P. obtusifolia in Y strain of T. cruzi showed proteins that can be interesting potential targets for future development of drug. They are: calmodulin, tyrosine aminotransferase and arginine kinase. The results with the treatment of Y and Bol strains of T. cruzi with piplartine of P. tuberculatum demonstrated that although to the differences of susceptibility of these strains related to benznidazol, the piplartine was active for both strains as a similar way and modified the expression of enzymes involved in the protection of the parasitic to the... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Sony Dimas Bicudo / Banca: Eunice Oba / Banca: André Luís Rios Rodrigues / Resumo: Objetivou-se estudar comparativamente os efeitos da administração seriada de 100μg de deslorelina por via intramuscular frente ao implante de liberação continuada de deslorelina (4,7mg), sobre a supressão temporária do crescimento folicular ovariano em ovelhas Bergamácia, visando a aplicação em biotecnologias do controle da ovulação. Após um período de adaptação e monitoramento da ciclicidade, as ovelhas tiveram o estro sincronizado pelo emprego de dispositivo intravaginal Eazi-Breed CIDR®, (0,33g de progesterona) de segundo uso, por 12 dias e administração única, pela via intramuscular, de 350UI de eCG concomitantemente à retirada do dispositivo. Foram coletadas amostras de sangue para confirmação da ovulação e ciclicidade através da quantificação de progesterona no plasma sendo considerados animais com atividade lútea aqueles que apresentaram valores igual ou superior a 1ng/mL. Decorridos seis dias da ovulação, as fêmeas foram então divididas em quatro grupos: G0 (Controle): animais sem tratamento; G1 (DES 48h); animais submetidos a aplicações intramusculares de 100μg de deslorelina a cada 48 horas durante sete dias; G2 (DES 72h): animais submetidos a aplicações intramusculares de 100μg de deslorelina a cada 72 horas durante sete dias; e G3 (Implante): animais com implante subcutâneo contendo 4,7mg de deslorelina que permaneceu por sete dias. Durante o período de tratamento específico de cada um dos grupos (sete dias), os animais tiveram os ovários monitorados ultrassonograficamente uma vez ao dia para a constatação da supressão do crescimento folicular, sendo os folículos presentes nos ovários classificados em pequenos, com diâmetro de 2 a 2,9mm, médios, com diâmetro de 3 a 4,4mm e grandes, com diâmetro ≥4,5mm. O monitoramento ultrassonográfico ovariano foi mantido após o término dos tratamentos, até que 100% das ovelhas retomasse a atividade de crescimento folicular. A população... / Abstract: The objective is to comparatively study the 100μg deslorelin serial administration effects front implantation of sustained release deslorelin (4.7 mg) on the temporary suppression of ovarian follicular growth in Bergamacia ewe aiming the application in biotechnology for the control of ovulation. After an adaptation period and monitoring of cyclicity, they had estrus synchronized with the second use intravaginal device Eazi-Breed CIDR® (0.33g progesterone) for 12 days and a single intramuscular injection, of eCG 350UI concurrently with the removal of the device. Blood samples were collected for confirmation of ovulation and cyclicality by measuring plasma progesterone being considered with luteal activity those animals with values equal or higher than 1 ng / mL. Elapsed six days of ovulation females was then be randomly divided into four groups: G0 (Control): untreated animals; G1 (DES 48h); animals subjected to intramuscular injections of 100μg deslorelin every 48 hours for seven days; G2 (DES 72h) animals subjected to intramuscular injections of 100μg deslorelin every 72 hours for seven days; and G3 (implant): animals with subcutaneous implant containing 4.7 mg deslorelin that remained for seven days. During the specific treatment period of each group (seven days), the animals ovaries was monitored by ultrasound to establish the suppression of follicular growth. And the follicles present in the ovaries classified into small, with a diameter of 2 to 2.9 mm, medium, with a diameter of 3 to 4.4 mm and large diameter ≥4.5mm. Ovarian ultrasound monitoring was maintained after completion of treatment, until 100% of the sheep retake the follicular activity. The follicular population was compared in the groups and between the groups during the treatment period. The G0 (Control) did not differ (p> 0.05) between the follicles classes wherein the post-synchronization elapsed time did not allow to characterize the typical pattern in ... / Mestre

Resumo: A espécie bacteriana Acidithiobacillus ferrooxidans é o principal micro-organismo utilizado na biohidrometalurgia. Este processo permite a recuperação de metais de interesse econômico, que se encontram na natureza na forma de sulfetos minerais. O A. ferrooxidans obtém energia da oxidação de íons ferrosos e enxofre incluindo os sulfetos minerais, promovendo assim a solubilização dos metais. A calcopirita (CuFeS2) é um dos sulfetos de cobre mais abundante na natureza, porém, altamente refratário ao ataque químico e bacteriano. Alguns trabalhos vêm sendo realizados com o objetivo de selecionar linhagens bacterianas mutantes de A. ferrooxidans a fim de otimizar o processo de oxidação da calcopirita. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi induzir e selecionar linhagens mutantes de A. ferrooxidans por radiação ultravioleta, que possam melhorar o processo de biolixiviação de sulfetos minerais, principalmente no que diz respeito à calcopirita. Os resultados obtidos mostraram que a radiação ultravioleta afetou a multiplicação do A. ferrooxidans S tanto em meio líquido quanto em meio sólido. Os 10% de sobrevivência foram obtidos após 300 s de exposição à radiação ultravioleta. Duas colônias de A. ferrooxidans S foram re-isoladas de meio sólido e analisadas quanto a alguns estudos fisiológicos. Com os resultados obtidos, observou-se que a radiação ultravioleta não afetou a oxidação bacteriana de íons ferrosos e dos sulfetos minerais calcopirita e pirita. Os possíveis mutantes foram analisados quanto à tolerância aos íons cloreto durante o processo de oxidação de íons ferrosos. Os resultados mostraram que o perfil de tolerância das possíveis linhagens mutantes foi semelhante à linhagem selvagem. Embora, não tenha sido possível obter um mutante com características importantes para otimizar processos na biohidrometalurgia, esse estudo foi realizado... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The bacterial species Acidithiobacillus ferrooxidans is the main microorganism used in Biohidrometallurgy. This process allows the recovery of metals of economic interest, which occur in nature in the form of sulfide minerals. A. ferrooxidans obtains energy from oxidation of inorganic sulfur and ferrous ions including sulfide minerals, thereby promoting the solubilization of metals. The chalcopyrite (CuFeS2) is one of the most abundant copper sulfides in nature but highly refractory to bacterial and chemical attack. Some studies have been carried out to select strains of bacterial mutants of A. ferrooxidans in order to optimize the process of chalcopyrite oxidation. Therefore, the objective was to induce and select mutant strains of A. ferrooxidans by ultraviolet radiation at different times, which can improve the bioleaching process of sulfide minerals, mainly with respect to chalcopyrite. The results showed that the UV affected the multiplication of A. ferrooxidans S both in liquid and in solid medium. The 10% survival was obtained after 300 s exposure to ultraviolet radiation. Two colonies of A. ferrooxidans S were re-isolated from solid medium and analyzed for some physiological studies. With these results, we found that ultraviolet radiation does not affect the bacterial oxidation of ferrous ions and chalcopyrite and pyrite sulfide minerals. Potential mutants were analyzed for their tolerance of chloride ions during the oxidation of ferrous ions. With these results, we found that ultraviolet radiation does not affect the bacterial oxidation of ferrous ions and chalcopyrite and pyrite sulfide minerals. Potential mutants were analyzed for their tolerance to chloride ions during the oxidation of ferrous ions. The results showed that the tolerability profile of the possible mutant strains was similar to wild type. Although it was not possible to obtain a mutant with important features... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Oswaldo Garcia Júnior / Coorientador: Ana Paula Felicio Novello / Banca: Cecília Laluce / Banca: Luis Gonzaga Santos Sobral / Mestre

Resumo: Clicar acesso eletrônico abaixo. / Abstract: Click electronic access below. / Orientador: Regina Kiomi Takahira / Coorientador: João Pessoa Araújo Júnior / Banca: Sheila Canavese Rahal / Banca: Luis Artur Loyola Chardulo / Banca: Luis Fernando Pita Gondim / Banca: Paulo Ricardo Oliveira Paes / Doutor

Orientador: Maria Célia Bertolini / Banca: Marcos Roberto de Mattos Fontes / Banca: Dulce Helena Ferreira de Souza / Resumo: Este trabalho teve como objetivo identificar fatores de transcrição envolvidos na via metabólica do glicogênio no fungo Neurospora crassa durante o crescimento vegetativo e na condição de choque térmico. Para isso foi utilizado uma coleção de 139 linhagens mutantes do fungo, as quais possuem genes codificadores de fatores de transcrição individualmente nocauteados. O conteúdo de glicogênio de todas as linhagens foi determinado tanto a 30ºC, temperatura fisiológica de crescimento, quanto a 45ºC, situação de choque térmico. Do total das linhagens analisadas, 10 apresentaram um perfil distinto daquele observado na selvagem. Com o objetivo de verificar o envolvimento dos fatores de transcrição identificados na expressão do gene que codifica a enzima glicogênio sintase (gsn), experimentos de Northern blot foram realizados e revelaram que do total de linhagens analisadas, 3 apresentaram diferenças na transcrição de gsn, sugerindo que os fatores de transcrição nocauteados nestas linhagens atuam diretamente na regulação da transcrição do gene. As linhagens mutantes selecionadas foram avaliadas quanto ao crescimento e comparadas à linhagem selvagem. Todas as linhagens selecionadas apresentaram uma taxa de crescimento bastante semelhante à linhagem selvagem, exceto a linhagem FGSC011062 (ORF NCU09739), a qual apresentou uma taxa de crescimento muito reduzida. Ferramentas de bioinformática disponíveis na internet foram utilizadas para a dedução teórica das características bioquímicas, moleculares e estruturais dos fatores de transcrição selecionados, tais como ponto isoelétrico, massa molecular, sinais de localização nuclear clássicos e a presença de domínios conhecidos. A análise por Blastp revelou que apenas 2 das 10 ORFs selecionadas codificam fatores de transcrição com função conhecida e as demais codificam proteínas hipotéticas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this work was to identify transcription factors involved in the glycogen metabolic pathway of the fungus Neurospora crassa. We used a collection of 139 mutant strains, in which each strain has a gene codifying for transcription factor individually knockedout. The glycogen content was quantified during the vegetative growth (30ºC), and after a stress condition such as heat shock (transfer for 30ºC to 45ºC). Of all analyzed strains, 10 showed a pattern of glycogen accumulation distinct of the one observed for the wild type strain. To verify the involvement of the transcription factors identified in the expression of the gene encoding glycogen synthase (gsn), Northern blot experiments were performed and revealed that 3 strains showed differences in gene transcription, either before or after heat shock. The results suggested that the transcription factors knocked-out in the strains might act directly in the regulation of the gsn gene transcription. The growth of the selected mutant strains was evaluated and compared to the wild type strain. Most of the selected mutant had a growth rate similar to the wild type strain, except the strain FGSC01162 (ORF NCU09739), which showed a reduced growth rate. Online bioinformatics tools were used to predict the biochemical parameters, such as isoeletric point and molecular weight, as well protein domain, such as classic nuclear localization signal (cNLS). Analysis by Blastp revealed that 2 from 10 selected ORFs codify transcription factors having functional roles in public databases: the ORF NCU08000 codifies the cutinase transcription factor 1α that is involved in the induction of the expression of cutinases genes by fatty acids in ascomycetes, and the ORF NCU06971 codifies the protein XlnR a transcription factor responsible for the transcription activation of genes involved in the xylan degradation. The results described... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Maria Teresa Marques Novo / Coorientador: Oswaldo Garcia Junior / Banca: Sandro Roberto Valentini / Banca: Gilberto Moraes / Banca: Lucio Fabio Caldas Ferraz / Banca: Julio Cezar Franco de Oliveira / Resumo: Acidithiobacillus ferrooxidans (A. ferrooxidans) é uma bactéria quimioautotrófica capaz de oxidar íon ferroso ou sulfetos minerais para a obtenção de energia. Bornita e calcopirita são dois sulfetos de cobre que possuem a mesma composição elementar, mas diferem na susceptibilidade para a biolixiviação. Este trabalho teve por objetivo a análise proteômica diferencial de A. ferrooxidans em resposta à mudança do substrato íon ferroso para os sulfetos minerais calcopirita ou bornita. Comparativamente a outras doze linhagens de A. ferrooxidans, a linhagem LR apresentou uma das maiores velocidades de oxidação sobre ambos os minerais em experimentos de respirometria, sendo selecionada para ser utilizada na análise proteômica. Respostas de células de A. ferrooxidans LR à bornita ou calcopirita foram investigadas utilizando-se 2D-PAGE e espectrometria de massas. O perfil de proteínas totais de células livres expostas aos minerais por 24 ou 48 horas foi comparado com o perfil das células não expostas (controle). Para bornita, detectou-se indução na síntese das proteínas chaperonina (groEL), antioxidante da família AhpC/Tsa e aldeído desidrogenase, enquanto que proteína de domínio radical SAM, frutose-1-6-bifosfatase, proteína de choque térmico HslU, carboidrato quinase, ribulose bifosfato carboxilase e proteínas ribossomais S2 e L25 tiveram sua síntese reprimida. Alterações opostas na expressão protéica foram detectadas para duas formas da fructose-bifosfato aldolase, as quais apresentaram valores distintos de ponto isoelétrico, sugerindo o envolvimento de modificações pós-traducionais desta proteína em A. ferrooxidans em resposta à bornita. Todas as alterações detectadas para a bornita não foram observadas na presença de calcopirita, não sendo detectada pela abordagem utilizada qualquer alteração significativa em células expostas a este mineral... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Acidithiobacillus ferrooxidans (A.ferrooxidans) is a chemoautotrophic bacterium able to oxidize ferrous iron or mineral sulfides to obtain energy. Bornite and chalcopyrite are two copper sulfides having the same elemental composition but differ in relation to the susceptibility for bioleaching process. The aim of this work was to perform a differential proteomic analysis of the A. ferrooxidans response to the exchange of ferrous ion as an energetic substrate to the mineral sulfides chalcopyrite or bornite. Among twelve A. ferrooxidans strains, the LR strain presented one of the highest oxidative rates on both minerals by respirometric assays, and was chosen for the proteomic analysis studies. The bacterium responses to bornite or chalcopyrite were investigated by 2D-PAGE and mass spectrometry. The total protein profiles of cells exposed to bornite or chalcopyrite for 24 or 48 hours were compared to the one of control not exposed to minerals. For bornite, were detected an induction for the proteins chaperonin (groEL), AhpC/Tsa family antioxidant and aldehyde dehydrogenase, whereas the proteins radical SAM domain, fructose-1-6- bisphosphatase, carbohydrate kinase, HslU heat shock protein, ribulose bisphosphate carboxylase and the ribosomal proteins S2 and L25 were repressed. For the protein fructosebisphosphate aldolase two forms having distinct isoelectric points were observed suggesting pos-translational modification of this protein in the A. ferrooxidans response to bornite. No significant alteration of the protein expression was detected for cells exposed to chalcopyrite. Therefore, the proteomic analyses show that these minerals lead to distinct cellular responses in A. ferrooxidans. Distinct responses were detected by proteomic analysis of the periplasmic fraction for chalcopyrite-attached cells in relation to non-attached cells. The analysis by 2D showed four proteins that presented... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Maria Lúcia Gonsales da Costa Araújo / Banca: Álvaro de Baptista Neto / Banca: Rosineide Gomes da Silva Cruz / Resumo: Streptomyces clavuligerus produz importantes Compostos -lactâmicos como: a holomicina (Hol), importante membro da classe pirrotina de antibióticos; cefamicina C (CefC), utilizada como matéria prima para a produção de antibióticos semi-sintéticos de amplo espectro, aplicados na prevenção de infecções pós-operatórias graves; além do ácido clavulânico (AC), inibidor de β-lactamases produzido por bactérias resistentes a penicilinas. A elevada instabilidade genética de S. clavuligerus resulta, com frequência, em deleções de trechos do DNA cromossomal que são, em sua maioria, associados à capacidade de esporulação e a produção de metabolitos secundários. Tais estados mutadores indesejáveis normalmente são potencializados por condições limite, como a mudanças bruscas de temperatura e pH, a presença de certos compostos, entre outros fatores, que podem ocorrer em qualquer etapa de manuseio/cultivo do microrganismo. Por outro lado, certas condições adversas ao crescimento durante a fermentação favorecem a produção de metabólitos secundários. Assim, a indústria da fermentação tem investido na busca de condições favoráveis de crescimento celular que permitam favorecer a produção. Para isto, é necessário dispor de estoque de células estáveis e produtivas, cuja integridade genética permita obter dados reprodutíveis e confiáveis. Deste modo, o presente trabalho teve por objetivo melhorar as condições de cultivo de S. clavuligerus, definindo-se um meio padrão de cultivo em batelada contendo nutrientes cuja presença favoreceu a produção de um determinado bioativo (CefC, AC ou Hol), tanto pela linhagem selvagem quanto pelas mutantes. Ainda, comparou-se a produção de Hol pelos mutantes utilizando-se como inóculo esporos estocados em criotubos (-80ºC) e suspensão fresca de esporos. / Abstract: Streptomyces clavuligerus produces important β-lactam compounds such as: holomycin (Hol), pirrotina an important member of the class of antibiotics; cephamycin C (CefC), used as raw material for the production of semi-synthetic broad-spectrum antibiotics, applied in the prevention of severe postoperative infections; lastly, clavulanic acid (AC) inhibitor, β-lactamases produced by bacteria resistant to penicillins. The high genetic instability of S. clavuligerus often results in chromosomal deletions of stretches of DNA that are mostly associated with the sporulation capacity and production of secondary metabolites. Mutators such undesirable states are usually exacerbated by boundary conditions, such as sudden changes in temperature and pH, the presence of certain compounds, among other factors, which may occur at any stage of handling/cultivation of the microorganism. On the other hand, certain adverse conditions promote growth during fermentation production of secondary metabolites. Thus, the present study aimed to improve the cultivation of S. clavuligerus, defining a means cropping pattern batch containing nutrients whose presence favored the production of a bioactive determined (CEFC, AC or Hol), both by wild type as well as the mutant strain. Still, compared to the production of Hol mutants using inoculum spores stored in cryotubes (-80 ° C) and fresh spore suspension. / Mestre

Orientador: Denise Bevilaqua / Banca: Ana Teresa Lombardi / Banca: Paulo Teixeira Lacava / Resumo: Com o advento dos bens de consumo industrializados, tornou-se maior a demanda por compostos minerais, sendo o cobre um dos metais mais utilizados para a produção de componentes tecnológicos, o que confronta a atual capacidade das mineradoras, uma vez que as jazidas vem se esgotando progressivamente e portanto apresentam teores cada vez menores. Neste contexto, a Biohidrometalurgia, processo que utiliza micro-organismos que promovem a dissolução de minérios sulfetados para otimização da extração do metal de interesse, apresenta-se como alternativa promissora e mais ambientalmente adequada para a recuperação de metais a partir de minérios de baixo teor. A maior parte do cobre presente na natureza encontra-se na forma de calcopirita, mas esse sulfeto mineral é altamente refratário ao ataque químico e biológico. Atualmente não há processo biohidrometalúrgico comercial em operação para a extração do cobre da calcopirita. A maior limitação para isso não está nos aspectos operacionais do processo, mas nos micro-organismos envolvidos nele. Desta maneira, o objetivo deste trabalho foi obter novas linhagens mutantes utilizando técnicas da genética clássica (radiação ultravioleta) a partir de uma das principais bactérias envolvida neste processo a Acidithiobacillus ferrooxidans e disponível em nosso banco de linhagens e avalia-las quanto à alguns dos parâmetros envolvidos no processo. Por meio da aplicação de radiação ultravioleta em diferentes tempos (0, 10, 15, 30, 60, 120, 300, 600, 1800 e 7200 segundos) na linhagem selvagem de A. ferrooxidans foram obtidos dezoito linhagens mutantes para cada fonte energética. Estes mutantes foram avaliados quanto à capacidade de produção de ácido na presença de enxofre elementar e quanto às velocidades iniciais (v0) na cinética de oxidação dos íons ferrosos. As linhagens mutantes que se destacaram nestes aspectos foram utilizadas em ensaios de frascos agitados... / Abstract: Recent industrialization has demanded great amounts of mineral compounds copper is one of the most utilized in technological components manufacturing. The large increase in mining activities has resulted in lower grade mineral deposits. As a consequence, the demand for technical and economical solutions became critical. In this context, biohydrometalurgy, a process that uses microorganisms to perform mineral sulphide dissolution for improving metal extraction, has been pointed as a promising and environmentally safer solution for metal recovery from low grade mineral deposits. In its natural conditions most of copper is found as chalcopyrite, but this mineral sulphide is recalcitrant to chemical and biological dissolution. Nowadays, there is no commercial biohydrometalurgic processes for extracting copper from chalcopyrite. The biggest issue for this is not in the operational aspects of the process, but the microrganisms involved in it. The aims of this study were to obtain new mutant strains of Acidithiobacillus ferrooxidans, the main bacterium involved in this process, (available in our strains collection) using classical genetics tools (ultraviolet radiation) and study some parameters involved. By means of ultraviolet radiation directed to the wild strain of Acidithiobacillus ferrooxidans in different exposure periods (0, 10, 15, 30, 60, 120, 300, 600, 1800 and 7200 seconds), eighteen mutant strains were obtained for each energy source. These strains were evaluated regarding their capacity of acid production in the presence of elemental sulphur and initial velocities in the kinetics of ferrous ions oxidation. The cell suspensions with higher performances were submitted to shake flasks experiments in the presence of chalcopyrite. The selective pressure of UV radiation over the wild strain resulted in mutant bacteria that presented different behaviors towards kinetics consumption of its energetic sources. Nine strains from ferrous ions... / Mestre

Orientador: Olga Maria M. de Faria Oliveira / Coorientador: José Carlos Rebuglio Vellosa / Banca: Maria José Queiroz de Freitas Alves / Banca: Mariza Pires de Melo / Resumo: Nos últimos anos houve uma explosão no interesse dos consumidores pelos alimentos denominados alimentos nutraceuticoss. Estudos epidemiológicos têm sugerido que esses alimentos tem um importante papel na prevenção de doenças crônicas. Acredita-se que os antioxidantes, principalmente os compostos fenólicos, carotenóides, tocoferóis, naturalmente encontrados em frutas, vegetais e grãos, são os responsáveis por promover o efeito quimioprotetor contra o estresse oxidativo. As frutas são um dos importantes componentes de uma dieta saudável. Seu consumo em quantidades adequadas pode reduzir o risco de doenças cardiovasculares e alguns tipos de câncer. Esse alimento é importante porque é uma fonte rica de micronutrientes, fibras e outros componentes com propriedades funcionais. Ademais, é um alimento de baixa densidade energética, isto é, com poucas calorias em relação ao volume da alimentação consumida, o que favorece a manutenção do peso corporal saudável. Dentro desse cenário, o Brasil ostenta uma grande fonte de espécies tropicais e exóticas ainda pouco exploradas, as quais podem ter um potencial agroindustrial, representando uma excelente perspectiva de oportunidade econômica. Considerando os benefícios do consumo de frutas e o sua importância mercadológica, este trabalho procura estudar a atividade antioxidante de diferentes extratos de frutas, tropicais e exóticas, para avaliar o potencial antioxidante destes extratos, visando aplicações nos setores farmacêuticos, alimentícios e de cosméticos. Assim escolheu-se avaliar a atividade antioxidante frente a diferentes espécies reativas de oxigênio e espécies reativas de nitrogênio, bem como aplicá-los a um modelo que simula a lipoperoxidação lipídica. Determinando os respectivos valores de IC50 para os testes utilizados / Abstract: In recent years have seen an explosion in consumer interest in foods called nutraceutical foods. Epidemiological studies have suggested that these foods have an important role in preventing chronic diseases. It is believed that antioxidants, especially phenolic compounds, carotenoids, tocopherols naturally found in fruits, vegetables and grains, are responsible for promoting chemistryprotect effect against oxidative stress. Fruits are one of the important components of a healthy diet. Its consumption in appropriate amounts can reduce the risk of cardiovascular disease and some cancers. This is important because food is a rich source of micronutrients, fiber and other components with functional properties. Moreover, food is a low energy density, that is, low in calories compared to the volume of feed consumed, which contributes to the maintenance of healthy body weight. Within this situation, Brazil have a great source of tropical and exotic yet unexplored, which may have a potential agrobusiness, representing an excellent economic opportunity. Considering perspective the benefits of consuming fruits and marketing its importance, this work study the antioxidant activity of different extracts of fruits, exotic and tropical to evaluate the antioxidant potential of these extracts, order at applications in pharmaceutical, food and cosmetics. So we chose to evaluate the antioxidant activity against different reactive oxygen species and reactive nitrogen species, as well as apply them to a model that simulates the lipoperoxidation. Determining their IC50 values for the tests / Mestre