Resumo: O diagnóstico da infecção por Brucella ovis em ovinos usualmente é realizado por meio de exame clínico, testes sorológicos e bacteriologia. Devido às limitações apresentadas pelas técnicas, o diagnóstico é geralmente obtido mediante aplicação de duas ou mais técnicas para obtenção de um resultado conclusivo. A Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) tem sido utilizada como ferramenta diagnóstica aplicável, pois é sensível, pouco dispendiosa, rápida, simples de ser realizada e permite o diagnóstico específico do agente infectante. Neste trabalho foram realizados dois experimentos. No primeiro compararam-se os percentuais de positividade em duas técnicas de PCR padronizadas, sendo a primeira gênero-específica e a seguinte espécie-específica, em 191 amostras de sêmen e 214 de urina provenientes de ovinos inoculados experimentalmente com a cepa de B. ovis REO 198. Posteriormente, desenvolveu-se a nested PCR a partir do produto amplificado da reação espécie-específica, e o percentual de positividade obtido pela nested PCR foi comparado aos obtidos pelas PCRs gênero-específica e espécie-específica. Foi observada diferença significativa no percentual de positividade (P<0,05) entre PCR gênero-específica e PCR espécie-específica (24,08% e 15,18%, respectivamente) para amostras de sêmen de ovinos e concordância moderada entre os resultados destas técnicas (kappa de 0,623); para amostras de urina, não houve diferença significativa entre as positividades obtidas pela PCR gênero-específica e a espécie-específica (10,28% e 7,011%, respectivamente), e a concordância entre os resultados foi moderada (kappa de 0,6167). A nested PCR espécie-específica apresentou percentual de positividade significativamente maior (P<0,001) quando comparada às PCRs gênero-específica e espécie-específica em amostras de sêmen (53,93%) e de urina (49,07%)... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Diagnosis of Brucella ovis infection in rams is routinely performed by clinical examination, serology and bacteriology. Due to limitations presented by each technique, the diagnosis is usually made by two or more techniques to obtain a conclusive result. The Polymerase Chain Reaction (PCR) has been used as a diagnostic tool applicable because it is sensitive, inexpensive, rapid, simple to perform and allows the specific diagnosis of infectious agents. In this study, the positivity percentages of two techniques of PCR previous described, one genus-specific and other species-specific, were measured in 191 semen and 214 urine samples from sheep experimentally infected with strain of B. ovis REO 198. Then, a species-specific nested PCR was developed from amplified products of the species-specific PCR, and the percentage of positivity obtained by nested PCR was compared to those obtained by genus and species-specific PCRs. Significant difference was observed when comparing the percentage of positivity (P <0.05) between genus-specific and species-specific PCR (24.08% and 15.18%, respectively) in semen samples from sheep, and there was moderate agreement between the results of these techniques ( kappa 0.623). In urine, no significant difference between the percentages of positives samples obtained by genus and species-specific PCR was observed (10.28% and 7.011% respectively) and the concordance between the results was moderate (kappa 0.6167). The species-specific nested PCR showed significantly higher percentage of positivity (P <0.001) when compared to genus-specific and species-specific PCRs in semen (53.93%) and urine (49.07%). Thus, according to the results obtained in this experiment, the species-specific PCR showed the lower percentage of positivity when compared to genus-specific PCR, but the implementation of the species-specific nested PCR showed highly significant increase... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Jane Megid / Coorientador: Renato de Lima Santos / Banca: Sony Dimas Bicudo / Banca: Luis antônio Mathias / Mestre

Orientador: Luis Antonio Mathias / Banca: Luiz Augusto do Amaral / Banca: Maria da Gloria Buzinaro / Banca: Fernanda Senter Magajervski / Banca: Raphaella Barbosa Meirelles Bartoli / Resumo: O estudo foi desenvolvido em uma fazenda localizada em área de mata Atlântica e de floresta artificial, no Município de Telêmaco Borba, Estado do Paraná. Teve por objetivo verificar, por meio de armadilhas fotográficas, quais espécies de carnívoros selvagens ocorrem na região, caracterizar espacialmente a área de vida das espécies-alvo, verificar a inter-relação entre os carnívoros selvagens e os domésticos na área de estudo, investigar a ocorrência de anticorpos contra Brucella, Leishmania, Leptospira, Neospora e Toxoplasma em carnívoros selvagens e domésticos na área de estudo, verificar o conhecimento dos moradores locais a respeito das infecções estudadas e avaliar o efeito de campanha educativa sobre esse conhecimento. Foram examinados 18 cães de funcionários da fazenda e foram capturados três exemplares de lobo-guará (Chrysocyon brachyurus) e quatro exemplares de jaguatirica (Leopardus pardalis), dos quais foi colhido soro sanguíneo, e nos animais selvagens foi colocado rádio-colar com GPS. Foram realizados testes sorológicos para pesquisa de anticorpos contra Brucella abortus, B. canis, Leishmania chagasi, Leptospira spp., Neospora caninum e Toxoplasma gondii. Foram identificadas na área 14 espécies de carnívoros selvagens, pertencentes a 12 gêneros e quatro famílias. Foi possível recuperar o colar de apenas um dos animais (jaguatirica), cuja área de vida teve um Mínimo Polígono Convexo (MPC) de 25 mil hectares (Ha), aproximadamente. Os testes sorológicos mostraram que foram observados anticorpos contra: B. abortus, em apenas um dos lobos-guarás; Leptospira, em um dos cães, um dos lobos-guarás e três das jaguatiricas; Neospora, em dois dos cães, dois dos lobos-guarás e duas das jaguatiricas; Toxoplasma, em oito dos cães, todos os três lobos-guarás e todas as quatro jaguatiricas. Nenhum dos animais apresentou anticorpos contra B. canis nem contra Leishmania. As avaliações realizadas... / Abstract: The investigation was carried out in farm located in an area of Atlantic and artificial forest in the municipality of Telêmaco Borba, State of Paraná, Brazil. The aims of the study were: to verify, through photografical traps, the species of wild carnivores in the region; to characterize spatially the area of life of the target species; to verify the relationships between wild and domestic carnivora in the study area; to investigate the occurrence of antibodies against Brucella, Leishmania, Leptospira, Neospora and Toxoplasma in domestic dogs and wild carnivores; to verify the knowledege of people living in the farm about the infections studied and to verify the effect of educational instruction on the knowledge of these people. Blood samples were obtained from 18 domestic dogs belonging to the farm workers, from three freeranging maned wolves (Chrysocyon brachyurus) and four free-ranging ocelots (Leopardus pardalis) captured in the area. A GPS radio transmitter housed in a collar was attached to each of the wild animals. Serological tests to Brucella abortus, B. canis, Leishmania chagasi, Leptospira spp., Neospora caninum, and Toxoplasma gondii antigens were performed. Fourteen wild carnivore species classified in twelve genera and in four families were found in the area. Only one GPS transmitter, attached to one ocelot, was found, and revealed that this animal had an area of life measuring about 25 thousand hectares. Serological tests showed antibody against B. abortus only in one maned wolf, against Leptospira in one dog, one maned wolf and three ocelots, against Neospora in two dogs, two maned wolves and two ocelots, against Toxoplasma in eigth dogs, all the three maned wolves and all the four ocelots. None of the animals had antibody titres to B. canis nor to Leishmania. The workers had initially low knowledge about the diseases, but their knowledge significantly improved after the instructions. Results of the study led to ... / Doutor

Orientador: José Paes de Almeida Nogueira Pinto / Banca: Jane Megid / Banca: Luis Carlos Giarola / Resumo: O consumo de queijos produzidos artesanalmente, especialmente de queijos frescos, é muito comum no Brasil, principalmente em cidades do interior. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a presença de Brucella spp. em queijos produzidos artesanalmente na região centro oeste do Estado de São Paulo. Um total de 52 amostras foi adquirido de produtores rurais, feiras livres, padarias e outros estabelecimentos comerciais. As amostras foram analisadas por isolamento microbiológico direto, isolamento microbiológico após enriquecimento em caldo suplementado com confirmação das colônias suspeitas pela PCR e também por PCR direta. Brucella spp. não foi detectada no isolamento direto. Porém, 9,61% das amostras foram positivas no isolamento com enriquecimento em caldo suplementado. Já a PCR direta detectou 12 amostras positivas para o agente. A porcentagem significativa de amostras positivas nos queijos avaliados revela um risco para os consumidores e serve de alerta para os serviços públicos responsáveis pela sanidade animal e inspeção de produtos de origem animal / Abstract: The consumption of homemade cheeses, especially fresh cheese, is very common in Brazil, mainly in the small cities. The aim of this study was to evaluate the presence of Brucella spp. in homemade cheeses in the central west of São Paulo State. A total of 52 samples was acquired from farmers, street fairs, bakeries and other shops. Samples were analyzed by direct microbiological isolation, microbiological isolation after enrichment in broth supplemented allowed by PCR for conferenction and direct PCR. Brucella spp. was not detected in the direct isolation. However, 9.61% of samples were positive by isolation with enrichment broth supplemented. The direct PCR detected 12 positive samples to the agent. A significant percentage of positive samples evaluated in the cheeses reveals a risk to consumers and serves to warn the public services responsible for the inspection of animal and animal products / Mestre

A mortalidade fetal é uma causa importante de perdas reprodutivas em animais domésticos e tem impacto significativo na rentabilidade de um sistema de produção animal. No Brasil, poucas informações são disponíveis sobre as principais causa de aborto em bovinos. O presente estudo resultou em cinco artigos. O primeiro artigo descreve as principais causas de aborto bovino diagnosticadas no Setor de Patologia Veterinária da Universidade Federal do Rio Grande do Sul no período 2003-2011. Neste período um total de 490 fetos bovinos foi analisado. Causas específicas de aborto foram encontradas em 46,7 % dos casos. Infecções por protozoários, em especial Neospora caninum acometeram 33 % dos casos (162/490). Bactérias em 6,3 % (31/490), seguidas por fungos 0,8% (4/490) foram causas adicionais de abortos. Em dois fetos (0,4 %), coinfecções por dois agentes foram identificadas. Causas não infecciosas foram observadas em 3 % dos abortos e malformações congênitas a 2,6%. No segundo artigo estima-se a ocorrência de abortos por Brucella abortus em bovinos na região sul, caracterizando os achados macroscópicos, histopatológicos, bacteriológicos, imuno-histoquímicos e de PCR desta enfermidade. No terceiro artigo relata-se a infecção por Geotrichum candidum em feto bovino abortado associado a lesões de pele e pulmonares. A ocorrência de malformações congênitas múltiplas em um feto bovino abortado é relatada no quarto artigo e casos de condrodisplasia tipo Dexter em fetos bovinos abortados são descritos no quinto. / The fetal mortality is an important cause of reproductive failure in domestic animals and has a significant impact on the profitability of a livestock production system. In Brazil, little information is available on the main cause of abortion in cattle. This study resulted in five articles. The first article describes the main causes of abortion in cattle diagnosed in the period January 2003 to december 2011. A total of 490 fetuses, from several Brazilian states, were evaluated. Specific causes of abortion were found in 46,7 % of cases. Protozoan abortions especially Neospora caninum were detected in 33 % (162/490) of the cases. Bacterial abortions corresponded to 6,3 % (31/490), followed by fungal 0,8 % (4/490). In two aborted fetuses (0,4 %), a co-infection with two agents could be identified. Noninfectious diseases could be associated with 3 % of the abortions and congenital malformations with 2,6%. In the second article estimated the incidence of abortion by Brucella abortus in cattle in the southern region, characterizing the macroscopic findings, histological, bacteriological, immunohistochemical and molecular aspects of this disease. The third article relates a Geotrichum candidum infection in aborted bovine fetus associated with skin and lung lesions. The occurrence of multiple congenital malformations in an aborted bovine fetus is reported in the fourth article and cases of Dexter chondrodysplasia type of aborted fetuses are described in the fifth.

A mortalidade fetal é uma causa importante de perdas reprodutivas em animais domésticos e tem impacto significativo na rentabilidade de um sistema de produção animal. No Brasil, poucas informações são disponíveis sobre as principais causa de aborto em bovinos. O presente estudo resultou em cinco artigos. O primeiro artigo descreve as principais causas de aborto bovino diagnosticadas no Setor de Patologia Veterinária da Universidade Federal do Rio Grande do Sul no período 2003-2011. Neste período um total de 490 fetos bovinos foi analisado. Causas específicas de aborto foram encontradas em 46,7 % dos casos. Infecções por protozoários, em especial Neospora caninum acometeram 33 % dos casos (162/490). Bactérias em 6,3 % (31/490), seguidas por fungos 0,8% (4/490) foram causas adicionais de abortos. Em dois fetos (0,4 %), coinfecções por dois agentes foram identificadas. Causas não infecciosas foram observadas em 3 % dos abortos e malformações congênitas a 2,6%. No segundo artigo estima-se a ocorrência de abortos por Brucella abortus em bovinos na região sul, caracterizando os achados macroscópicos, histopatológicos, bacteriológicos, imuno-histoquímicos e de PCR desta enfermidade. No terceiro artigo relata-se a infecção por Geotrichum candidum em feto bovino abortado associado a lesões de pele e pulmonares. A ocorrência de malformações congênitas múltiplas em um feto bovino abortado é relatada no quarto artigo e casos de condrodisplasia tipo Dexter em fetos bovinos abortados são descritos no quinto. / The fetal mortality is an important cause of reproductive failure in domestic animals and has a significant impact on the profitability of a livestock production system. In Brazil, little information is available on the main cause of abortion in cattle. This study resulted in five articles. The first article describes the main causes of abortion in cattle diagnosed in the period January 2003 to december 2011. A total of 490 fetuses, from several Brazilian states, were evaluated. Specific causes of abortion were found in 46,7 % of cases. Protozoan abortions especially Neospora caninum were detected in 33 % (162/490) of the cases. Bacterial abortions corresponded to 6,3 % (31/490), followed by fungal 0,8 % (4/490). In two aborted fetuses (0,4 %), a co-infection with two agents could be identified. Noninfectious diseases could be associated with 3 % of the abortions and congenital malformations with 2,6%. In the second article estimated the incidence of abortion by Brucella abortus in cattle in the southern region, characterizing the macroscopic findings, histological, bacteriological, immunohistochemical and molecular aspects of this disease. The third article relates a Geotrichum candidum infection in aborted bovine fetus associated with skin and lung lesions. The occurrence of multiple congenital malformations in an aborted bovine fetus is reported in the fourth article and cases of Dexter chondrodysplasia type of aborted fetuses are described in the fifth.

Brucella sp. são causadoras de brucelose, zoonose de importância mundial, sendo sua identificação muito importante para programas de controle e erradicação ou para se realizar um rastreamento epidemiológico. Em caso de brucelose humana, o tratamento é feito com uma combinação de dois antimicrobianos, sendo a rifampicina uma das possibilidades nesta associação e frequentemente utilizada; porém há relatos de casos de resistência com este antimicrobiano. Este estudo teve como objetivos: (i) tipificar a coleção de cepas de Brucella sp. pertencentes à bacterioteca do Laboratório de Bacteriologia Animal, DeMIP, ICBS, por Bruce-Ladder; (ii) testar a susceptibilidade antimicrobiana para rifampicina pelos métodos E-test e microdiluição em caldo; (iii) realizar a avaliação do fenótipo de super expressão de bomba de efluxo; (iv) investigar os eventos moleculares que levam ao desenvolvimento do fenótipo de resistência através da análise do gene rpoB; (v) detectar a presença do gene bepC. A PCR Bruce-Ladder confirmou a identificação de todas as cepas de referência e de campo testadas e classificou todas as cepas de campo, isoladas de bovinos, como B. abortus. Houve divergência na Concentração Inibitória Mínima de microdiluição em caldo e E-test em 21% das cepas analisadas. Oito das 52 cepas testadas apresentaram susceptibilidade reduzida para rifampicina pelo método de diluição em caldo. Observamos redução da CIM na presença de carbonil cianida m-clorofenilhidrazona (cccp) das cepas com susceptibilidade reduzida a rifampicina indicando uma provável ação de bomba de efluxo nesta resistência. Encontramos duas mutações no gene rpoB que não estão envolvidas com o fenótipo de resistência. O gene bepC foi detectado em 100% das cepas testadas (susceptíveis e resistentes à rifampicina) indicando que não está relacionado ao fenótipo de resistência observado. / Brucella sp. are the causative agent of brucellosis, a zoonotic disease of global importance. Their correct identification is very important to help the control and eradication programs, or to carry out an epidemiological tracing. In the case of human brucellosis, treatment is done with a combination of two antimicrobials, rifampin being one of the possibilities in this association and commonly used; however there are case reports of resistance to this antibiotic. This study aims: (i) typing the Brucella strains collection belonging to the Laboratory of Animal Bacteriology, DeMIP, ICBS, by Bruce-Ladder; (ii) test its antimicrobial susceptibility to rifampin by E-test and microdilution broth methods; (iii) evaluate the phenotype of super expression of efflux pump; (iv) investigate the molecular events that can lead to the development of resistance analyzing the rpoB gene; and (v) detect the presence of the bepC gene. The Bruce-Ladder PCR confirmed the identification of all the reference and field strains tested and classified all strains isolated from cattle, as B. abortus. There was a divergent result in the minimum inhibitory concentration (MIC) between the microdilution broth test and E-test in 21% of the strains examined. Eight of 52 strains tested showed reduced susceptibility to rifampin by the broth dilution method. It was observed MIC reduction in the presence of carbonyl cianida m-clorofenilhidrazona with the strains with reduced susceptibility to rifampin, indicating a probable action of an efflux pump in this phenotype. We found two gene mutations in the rpoB gene who aren't involved with the resistance phenotype. The bepC gene was detected in 100% of the strains tested (susceptible and resistant to rifampicin) indicating that is not probably related to the phenotype of resistance observed.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-02-22T14:28:38Z No. of bitstreams: 1 Adriana Soares Leite.pdf: 443532 bytes, checksum: aecae8c9b89ee037b16d8d03ce6267a9 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-22T14:28:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Adriana Soares Leite.pdf: 443532 bytes, checksum: aecae8c9b89ee037b16d8d03ce6267a9 (MD5) Previous issue date: 2004-06-09 / An epidemiological study was performed to evaluate the prevalence of serum antibody to B. abortus, BVDV, BHV – 1 and tuberculin sensitivity to M. bovis, and the association among these infections. Sera from 241 dairy buffaloes were analyzed by buffered plate antigen test (BPAT), serum agglutination test (SAT) and by 2-mercaptoethanol (2-ME) for the diagnosis of Brucella abortus, virusneutralization (VN) for BVDV and BHV – 1 and comparative cervical tuberculin test for M. bovis. The results showed 32,34% of positive samples to B. abortus, 24,07% of positive tuberculin reactors, 76,76% of reactive samples to BVDV and 49,79% to BHV – 1. Association was found between reagent and non reagent animals to the tests to B. abortus and BHV – 1 (p<0,001). / Foi realizado um estudo epidemiológico para determinar a prevalência de anticorpos séricos anti-Brucella abortus e a associação com as infecções por Mycobacterium bovis, vírus da diarréia viral bovina (BVDV) e vírus da rinotraqueíte infecciosa bovina - IBR (BHV–1). Foram analisadas 241 amostras séricas de bubalinos com aptidão leiteira no Município de Taipu – RN, empregando o teste do antígeno acidificado tamponado (AAT) e as provas de soroaglutinação lenta em tubos (SAL) e 2–mercaptoetanol (2-ME) para o diagnóstico da brucelose; prova de virusneutralização (VN) para detecção de anticorpos para BVD e IBR. Os animais foram também submetidos ao teste cervical comparativo para tuberculose. Os resultados mostraram 32,34% de amostras soropositivas para B. abortus, 24,07% de animais com reação positiva ao teste alérgico para Tuberculose, 76,76% de animais sororreagentes para BVDV e 49,79% para BHV – 1. Foi detectada associação entre animais reagentes e não reagentes aos testes para B. abortus e BHV – 1 (p<0,001).

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-05-10T14:39:12Z No. of bitstreams: 1 andrealmeidasantosduch.pdf: 1562353 bytes, checksum: c681c7dd0bb3bc45cdb7bc06579fadb5 (MD5) / Rejected by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br), reason: Falta resumo em português on 2016-06-15T19:03:46Z (GMT) / Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-06-16T11:27:16Z No. of bitstreams: 1 andrealmeidasantosduch.pdf: 1562353 bytes, checksum: c681c7dd0bb3bc45cdb7bc06579fadb5 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-07-13T14:12:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 andrealmeidasantosduch.pdf: 1562353 bytes, checksum: c681c7dd0bb3bc45cdb7bc06579fadb5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-13T14:12:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 andrealmeidasantosduch.pdf: 1562353 bytes, checksum: c681c7dd0bb3bc45cdb7bc06579fadb5 (MD5) Previous issue date: 2015-05-29 / O objetivo desse trabalho foi estimar a prevalência de Brucella spp. em propriedades produtoras de Queijo Minas Artesanal da microrregião do Serro. Avaliou-se a presença do patógeno (presença de DNA) em queijos com períodos de maturação entre 4 e 8 dias, em temperatura ambiente, em queijarias cadastradas pelo Instituto Mineiro de Agropecuária (IMA), que possuem assim o aval do órgão para o comércio estadual. Os resultados das análises de Reação de Cadeia da Polimerase (PCR) mostraram que a prevalência da Brucella spp. em propriedades produtoras de Queijos Minas Artesanal do Serro foi de 30,9% (17/55). Os produtos de DNA amplificados por PCR, de amostras de queijos positivas na PCR foram sequenciados, para diferenciação entre bactérias de origem do campo ou vacinais. O sequenciamento demonstrou 100% de homologia com amostras do campo de Brucella spp. Todas as amostras de queijos foram provenientes de rebanhos testados e controlados por meio de exames sorológicos anuais para o monitoramento de Brucella spp., segundo determinação da legislação vigente, e apresentaram atestados de controles negativos de veterinários autônomos habilitados. A presença de DNA de Brucella spp. nos queijos sugere uma suposta deficiência no atual programa de controle do patógeno nesses rebanhos e que medidas de identificação e controle mais rigorosas deveriam ser adotadas como medida de segurança alimentar tanto em nível de rebanho, como na matéria prima e no produto acabado. / The main objective of the study is to estimate Brucella spp. prevalence in dairy herds involved in artisanal cheeses production in Serro’s micro-region, Minas Gerais state, named of “Queijo Minas Artesanal” (QMA). The pathogen's evidences (presence of DNA) in cheeses indexed by the “Instituto Mineiro de Agropecuária – IMA” with ripening periods at normal temperature between 4 and 8 days was evaluated. The results of the polymerase chain reaction (PCR) showed that the DNA of Brucella spp. prevalences in Serro's QMA was of 30.9% (17/55). The products of amplified DNA were sequenced for differentiating the bacteria’s source: if it came from the environment or from the vaccine. The DNA sequencing demonstrated 100% of homology with environment samples of Brucella ssp. All sample of cheeses were from cattletested and controlled through annual serological tests for the monitoring of brucelosis and presented negative control´s certificates delivered by autonomous veterinaries. The presence of DNA Brucella spp. in analyzed cheeses suggests a supposed deficiency of brazilian brucelosis control's program in monitoring this specific herds and that stronger measures of control should be adopted in the herds, ingredients and also in the final product as a food safety measure.

Submitted by Ubirajara Cruz (ubirajara.cruz@gmail.com) on 2016-09-13T13:06:21Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) tese_ana_recuero.pdf: 1673512 bytes, checksum: dd12763ac0bcd688aaa90dfe0ae42705 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2016-09-13T14:10:53Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) tese_ana_recuero.pdf: 1673512 bytes, checksum: dd12763ac0bcd688aaa90dfe0ae42705 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-13T14:10:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) tese_ana_recuero.pdf: 1673512 bytes, checksum: dd12763ac0bcd688aaa90dfe0ae42705 (MD5) Previous issue date: 2014-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / O objetivo deste trabalho foi descrever reações sorológicas falso-positivas (FPSR) em um estudo com 989 bovinos sorologicamente negativos, provenientes de propriedades com e sem história de aborto por brucella spp, bem como avaliar as ligações entre alguns fatores individuais ou de rebanho e a ocorrência destes FPSR. Usou-se o teste do Antígeno Acidificado Tamponado (AAT) em todos os animais e os bovinos reagentes ao AAT na primeira coleta de sangue, se confirmados pelos testes 2 Mercaptoetanol (2ME) e Fluorescência da Luz Polarizada (FPA) foram encaminhados ao abate sanitário. Os não reagentes no dia zero foram inoculados com Levamisole (782) e dois grupos controles (207) com solução fisiológica (100) e com Ivermectina (107). Os dois grupos controles foram negativos em todos os testes. O grupo Levamisole apresentou uma incidência global (IT) de 1,41% de FPSR. O risco relativo (RR) de FPSR na primavera foi 23,42 vezes mais provável do que nas outras estações. A Fração Etiológica do Risco (FER) mostrou que 95,73% das FPSR ocorreram pela exposição ao levamisole mais o efeito primavera. A incidência de animais FPSR com Condição Corporal ruim (CCr) foi 10,34% e nos com CC boa (CCb) foi 1.06%. O RR de FPSR com CCr foi 9,74 vezes mais provável do que nos CCb. A FER mostrou que 89,73% dos FPSR ocorreram pela exposição ao levamisole mais a CCr. A utilização do Levamisole como imunoestimulante e anti-helmíntico permanece recomendada, entretanto, deve ser observado um período de carência de no mínimo 15 dias entre aplicação do medicamento e realização do diagnóstico para brucelose bovina. / The aim of this study was to describe false-positive serological reactions (FPSR) in a study of 989 serologically negative cattle from farms with and without a history of abortion Brucella spp, as well as evaluating the links between some individual or herd factors and the occurrence these FPSR. We use the test Buffered Acidified Antigen (AAT) in all animals and reagents in the AAT first blood sample, if confirmed by tests 2 Mercaptoethanol (2ME) and Fluorescence Polarization Assay (FPA) were referred to stamping. Non reagents were inoculated on day zero with Levamisole (782) and two control groups (207) with saline (100) and Ivermectin (107). The two control groups were negative in all tests. The levamisole group had an overall incidence (IT) of 1.41 % of FPSR. The Relative Risk (RR) of FPSR spring was 23.42 times more likely than in other seasons. Fraction Etiologically Risk (FER) showed that 95.73 % of FPSR occurred by exposure to levamisole plus the spring effect. The incidence of animals with FPSR with Body Condition (CCr) poor was 10.34 % and with good CC (CCb) was 6.1 %. The RR of FPSR with CCr was 9.74 times more likely than in CCb. The FER showed that 89.73 % of FPSR occurred by exposure to levamisole more CCr. The use of levamisole as an immunostimulant and anthelmintic remains recommended, however, a grace period of at least 15 days must be observed between application of the product and make the diagnosis for bovine brucellosis.

La brucellose est infection causée par les bactéries du genre Brucella. Cette maladie est répandueà travers le monde entier chez les mammifères et est transmissible aux humains. Causant notammentstérilité, avortement et destruction des articulations, la brucellose représente un risque sanitaire majeur.La chronicité et la récurrence de cette infection provoquent une morbidité importante chez l'hommemalgré des traitements antibiotiques longs et coûteux. Actuellement, les vaccins disponibles ne sont pasconsidérés comme sûrs et efficaces. Le confinement de la maladie repose en partie sur l'identification etl’élimination des troupeaux infectés. La brucellose représente toujours d'énormes pertes économiquespour les pays où la maladie est endémique. Le développement rationnel d'un vaccin atténué efficace etsûr contre les infections à Brucella nécessite l'identification des gènes de virulence indispensables à laréplication in vivo de la bactérie.Dans un modèle d'infection intranasale bien caractérisé chez la souris imitant l'infection naturellepar voie aérienne, nous avons décrit la dynamique de l'infection. En utilisant un marqueur fluorescent,nous sommes en mesure de surveiller la multiplication bactérienne in situ et de déterminer les différentesphases de l'infection. Lors d'une infection intranasale, les macrophages alvéolaires (MA) sont le principaltype cellulaire infecté mais seule une petite proportion de la MA infectée (5 à 15%) est permissive àl'infection. Les bactéries entrant dans la réplication au cours des premières 24 heures sont massivementéliminées, mais cette importante pression sélective peut être partiellement levée par des déficitsimmunitaires génétiques par exemple pour la signalisation de l’IL-17 (réponse immunitaire de type TH17)ou même par une altération de la réponse immunitaire en induisant un phénotype asthmatique (réponseimmunitaire de type TH2).Une identification approfondie de tous les gènes essentiels nécessaires à la croissance sur desmilieux riches ou des gènes conditionnellement nécessaires à la survie lors d'une infection in vitro(macrophages RAW murins) ou in vivo (souris) a été effectuée à différents moments clés précoces du cycleinfectieux en utilisant la technique du séquençage des transposons (Tn-Seq). Sur les 3140 gènes de B.melitensis, 643 sont requis pour la croissance extracellulaire sur des milieux riches. 179 gènessupplémentaires sont indispensables à la survie dans les poumons de la souris jusqu'à 5 jours aprèsl'infection. Seule la moitié de ces gènes peuvent être identifiés à l'aide du modèle in vitro standard,illustrant la limitation d'une telle approche in vitro pour identifier les exigences d'adaptation àl'environnement hôte. L'application de l'analyse en cluster montre que la plupart de ces gènes identifiéspeuvent être recadrés en voies complètes ou impliqués dans des fonctions liées. La synthèse deslipopolysaccharides, la synthèse de certains acides aminés, la B oxydation des acides gras et la cytochromeC oxydase seraient particulièrement importantes face à l'environnement hôte. Nous avons maintenantune idée plus claire des exigences minimales pour que la bactérie infecte avec succès son hôte. Enappliquant cette approche en cas d’immunodéficience pour la signalisation de l’IL-17 ou en conditionasthmatique, nous savons maintenant que l'essentialité de certains gènes peut être levée à savoir lasynthèse du core et de la chaîne O du lipopolysaccharide et la B oxydation des acides gras respectivement.La délétion génétique de certains gènes sélectionnés (10) candidats valide les résultats de nos analysesTn-Seq. Ces analyses comparatives ont le potentiel d'identifier des souches de mutants atténués quipourraient déclencher une immunité protectrice sans la capacité de se propager ou de devenir chroniqueou d'être entièrement virulente même chez des animaux avec une immunité compromise. / Doctorat en Sciences / info:eu-repo/semantics/nonPublished