Memoria para optar al Título de Químico Farmacéutico / La nitrofurantoína es el antimicrobiano de elección para el tratamiento de infecciones del tracto urinario bajo en Chile, debido a su alta eficacia y bajo desarrollo de resistencia. Sin embargo, el tratamiento oral con este fármaco provoca efectos adversos, principalmente gastrointestinales, los que conllevan al abandono del tratamiento por un porcentaje significativo de los pacientes. Este fármaco es nitrorreducido en una reacción catalizada por reductasas, generando especies reactivas del oxígeno, lo que conduce a estrés oxidativo. Por lo tanto, se postula que los efectos adversos gastrointestinales provocados por nitrofurantoína, podrían ser la consecuencia de este estrés oxidativo. Asimismo, se postula que la coadministración de nitrofurantoína y el preparado herbal BG126, extracto seco estandarizado de hojas de Buddleja globosa Hope (matico), podría minimizar los efectos adversos producidos por nitrofurantoína. Los resultados obtenidos indican que la administración oral de nitrofurantoína en ratas machos Sprague Dawley, produce daño gastrointestinal observado macroscópicamente y a través de cambios de los parámetros del perfil bioquímico y el hemograma. Estos parámetros fueron normalizados a los valores control por la coadministración de nitrofurantoína y BG126. Más aún, esta combinación también normalizó las alteraciones de la capacidad antioxidante plasmática (FRAP) producidas por el tratamiento oral con nitrofurantoína. Además, BG126 inhibió la lipoperoxidación y la oxidación de los tioles microsómicos hepáticos de estas ratas, producidas por nitrofurantoína en condiciones de nitrorredución. Los resultados obtenidos demuestran que los efectos adversos producidos por la administración oral de nitrofurantoína se deben, al menos en parte, a la generación de estrés oxidativo a través de su nitrorredución. Dado que BG126 es un extracto de matico, planta de reconocida actividad antioxidante, la coadministración con nitrofurantoína podría ser una buena estrategia para disminuir los efectos adversos producidos por este fármaco y evitar así, el abandono de la terapia. / Nitrofurantoin is the antibacterial of choice for the treatment of lower urinary tract infections in Chile, due to its high efficacy and the low development of bacterial resistance. Oral treatment with this drug, however, leads to adverse effects, mainly gastrointestinal, which result in the abandonment of treatment by a significant percentage of patients. This drug is nitroreduced in a reaction catalyzed by reductases, generating reactive oxygen species and leading to oxidative stress. Therefore, we postulated that the gastrointestinal adverse effects produced by nitrofurantoin may be the consequence of this oxidative stress. Also, we hypothesized that co-administration of nitrofurantoin and the herbal preparation BG126, standardized dry extract from Buddleja globosa Hope leaves (matico), may minimize the adverse effects produced by nitrofurantoin. Our results indicate that the oral administration of nitrofurantoin in male Sprague Dawley rats produces gastrointestinal damage, which was observed macroscopically and through changes in clinical chemistry and hemogram parameters. These parameters were normalized to control values by co-administration of nitrofurantoin and BG126. Moreover, this combination also normalized the changes in plasma antioxidant capacity (FRAP) produced by oral treatment with nitrofurantoin. In addition, BG126 inhibited rat liver microsomal lipid peroxidation and thiol oxidation elicited by nitrofurantoin under conditions leading to its nitroreduction. Data presented show that the adverse effects produced by oral administration of nitrofurantoin are due, at least in part, to the generation of oxidative stress through its nitroreduction. Since BG126 is a matico extract, which has a widely acknowledged antioxidant activity, its co-administration with nitrofurantoin may be a good strategy to decrease the adverse effects elicited by this drug and, therefore, prevent therapy abandonment. / FONDECYT

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / La nitrofurantoína es un antibiótico derivado del nitrofurano utilizado como fármaco de primera elección para el tratamiento de infecciones del tracto urinario. Sin embargo, este fármaco produce serios efectos adversos principalmente de origen gastrointestinal. Se postula que las reacciones adversas se deberían al estrés oxidativo provocado por la nitroreducción de la nitrofurantoína que genera especies reactivas del oxígeno. Por lo tanto, BG126®, preparado herbal a base de hojas de Buddleja globosa Hope, podría mitigar los efectos adversos de nitrofurantoína; este fitofármaco se ha caracterizado por su alta actividad antioxidante (datos aún no publicados). Los resultados de este estudio clínico doble ciego y randomizado, mostraron que el tratamiento asociado de nitrofurantoína (200mg/día) y BG126® (2 cápsulas/día), efectivamente disminuyó los efectos adversos gastrointestinales de pacientes mujeres con infección bacteriana del tracto urinario (ITU). Entre estas reacciones adversas se cuantificó nausea, dolor abdominal y diarrea. Más aún, este tratamiento conjunto potenció la actividad antibacteriana de la nitrofurantoína; al final del tratamiento, todos los pacientes que recibieron nitrofurantoína y BG126® presentaron urocultivos negativos, mientras que el 19% de los pacientes que recibieron sólo nitrofurantoína mostraron urocultivos positivos, lo cual indica la presencia de cepas bacterianas resistentes a nitrofurantoína. Cabe destacar que a capacidad antioxidante plasmática de ambos grupos de pacientes no fue significativamente diferente. Así, no se observaron diferencias significativas en la capacidad reductora de hierro, ni en los niveles de MDA de ambos grupos de pacientes, el que recibió sólo nitrofurantoína y aquel que recibió en forma conjunta nitrofurantoína y BG126®. Estos resultados parecen indicar que la absorción de BG126® es baja y por tanto, el efecto observado es mayoritario a nivel de la pared gastrointestinal. El aumento de la resistencia a antibióticos de las diferentes cepas bacterianas que infectan al hombre, es un problema de salud pública a nivel mundial. Si sumamos a lo anterior, las reacciones adversas de los fármacos antibacterianos, como son los derivados de nitrofuranos, las estrategias terapéuticas contra las diversas infecciones bacterianas se ven muy limitadas. Interesantemente, BG126® no sólo disminuyó la severidad de las reacciones adversas provocadas por la nitrofurantoína, sino que al parecer potenció su efecto antibacteriano. Nuevos experimentos están en proceso con el objeto de dilucidar los mecanismos que permitan explicar el comportamiento antibacteriano de nitrofurantoína comparada con la mezcla nitrofurantoína-BG126® / Nitrofurantoin is an antimicrobial drug specially selected for treatment of the urinary tract infections. However, this therapy produces severe adverse reactions, mainly in the gastrointestinal tract. It has been postulated that the adverse reactions induced by nitrofurantoin are originated through its reductive metabolism. This drug suffers nitroreduction, reaction which generate reactive oxygen species and so, oxidative stress. Since, the preparation of Buddleja globosa Hope leaves, BG126®, may mitigate the nitrofurantoin adverse reactions; this phytodrug has a high antioxidant activity (date unpublished). The results of this randomized double-blinded clinical trial, showed that the associated treatment of nitrofurantoin (200mg/día) and BG126® (2 capsules/day), in fact, decrease the gastrointestinal nitrofurantoin adverse reactions in woman patients with urinary tract infection (UTI). Among them, we measured nausea, abdominal pain and diarrhea. Moreover, this associated treatment potentiated the nitrofurantoin antibacterial activity; at the end of the treatment, all of the patients that received nitrofurantoin and BG126® showed negatives urocultures, while 19% of the patients that received only nitrofurantoin showed positives urocultures, so indicating the presence of nitrofurantoin resistant bacterial strains. It’s important to highlight that the plasmatic antioxidant capacity of both groups of patients were not significantly different. We did not observed significant differences in the ferric reducing ability of plasma and in the levels of plasmatic MDA of both patients groups that received only nitrofurantoin and that received nitrofurantoin and BG126®. These results suggest that BG126® absorption was low and the main effect was on the gastrointestinal wall. It is necessary to note that the antibacterial resistance in several of bacteria’s strains that infects human beings has increased and is a worldwide public health problem. In addition, many of antibacterial drugs induce severe adverse reactions, between them the nitrofuran derivatives. These data have provoked a decrease in the therapeutic strategies against the bacterial infections. BG126® not only decreased the severity of the adverse drug reactions due to nitrofurantoin, it also apparently enhanced the antibacterial effect. New experiments are in process with the aim to elucidate the mechanisms involved in the antibacterial effects of nitrofurantoin associated to BG126® observed

Tesis presentada a la Universidad de Chile para optar al grado de Doctor en Ciencias Farmacéuticas / La planta Matico, Buddleja globosa Hope, Budlejaceae es una especie nativa en Chile de la cual se usan sus hojas por sus múltiples propiedades terapéuticas. Las investigaciones más recientes han permitido demostrar que el extracto etanólico (EMATst) obtenido a partir de sus hojas y estandarizado en su principal componente (verbascósido) presentó efectos antiinflamatorio, analgésico y cicatrizante. Este compuesto ha sido identificado en distintas especies vegetales y se le ha demostrado mediante ensayos in vitro efecto estrogénico y antiestrogénico dependiente de la concentración. En esta tesis se estudió la propiedad estrogénica y el posible efecto disruptor endocrino (DE) del EMATst y del verbascósido usando distintos modelos experimentales tanto in vivo como in vitro. Esta investigación se inició con la recolección de las hojas de matico en el mes de enero de 2008, en el campus Antumapu de la Universidad de Chile, con el objetivo de obtener el EMATst que fue elaborado por extracción sucesiva del material vegetal con solventes de polaridad creciente (hexano, diclorometano y etanol). La cuantificación del componente mayoritario (verbascósido) del extracto etanólico se realizó por CLAE-DAD y se expresó en ácido cafeíco. Posteriormente a partir del EMATst por sucesivas columnas cromatográficas de silicagel 60 y Sephadex LH20, se aisló el verbascósido. Tanto EMATst como verbascósido fueron utilizados para realizar los trabajos experimentales con el fin de determinar la alteración del ciclo estral de ratas de laboratorio despu es de la administración subcutánea de dos diferentes dosis de EMATst; posible unión competitiva de EMATst y verbacósido al receptor estrogénico (RE) mediante un ensayo in vitro usando citosol de útero de rata como fuente de RE; toxicidad aguda de Daphnia magna mediante la determinación de la concentración letal 50 (CL50) a las 24 h de exposición; toxicidad crónica y efecto DE mediante la determinación de la sobrevivencia, frecuencia de muda y reproducción de dos generaciones a los 14 días de exposición. Nuestros resultados permitieron demostrar que el EMATst en dosis alta (10-5 M) provocó una alteración en el ciclo estral de ratas, lo que podrá atribuirse a un efecto antiestrogénico. Tanto EMATst como verbascósido se unieron levemente de modo competitivo al RE comparado con estradiol. Ambos presentaron una baja toxicidad aguda relativa respecto del t oxico de referencia (dicromato de potasio) y 17 ß-estradiol en D. magna. Los resultados de toxicidad crónica en D. magna, muestran que se produce una disminución de la reproducción en ambas generaciones dependiente de la concentración y más marcada aún en la segunda generación y el efecto DE de ambas muestras se manifestó porque se alteró la reproducción / Matico plant, Buddleja globosa Hope, Budlejaceae is a native species in Chile which used their leaves of its multiples therapeutic properties. More recent investigations have demonstrated that the ethanol extract (EMATst) obtained from leaves and with an standardized main component (verbascoside) presented anti-in ammatory, analgesic and scarring e ects. This compound has been identi ed in di erent plant species and has shown through in vitro assays concentration dependent estrogenic and antiestrogenic e ects. In this thesis we studied the estrogenic property and possible endocrine disruptor (ED) e ect of EMATst and verbascoside using di erent experimental models both in vivo and in vitro. This investigation began with collecting matico leaves in the month of January 2008, in the Antumapu campus of the University of Chile, in order to obtain EMATst which was prepared by the successive extraction of plant material with solvents of increasing polarity (hexane, dichloromethane and ethanol). Quanti cation of the major component (verbascoside) of the ethanol extract was performed by HPLC-DAD and expressed as ca eic acid. Subsequently, verbascoside was isolated from EMATst by successive silica gel 60 and Sephadex LH20 chromatographic columns. Both EMATst and verbascoside were used to perform experimental work to determine the alteration of the estrous cycle of rats after subcutaneous administration of two di erent doses of EMATst; verbacoside and EMATst possible competitive binding to the estrogen receptor (ER) though an in vitro assay using the cytosolic fraction of a rat uterus as ER source; acute toxicity of Daphnia magna by determining the lethal concentration 50 (LC50) after 24 hours of exposure; chronic toxicity and DE e ect by determining the survival, molt frequency and reproduction of two generations at 14 days of exposure. Our results show that the EMATst at a high-dose (10-5 M) caused an alteration in

Doctora en Farmacología / Autor no autoriza el acceso a texto completo de su documento hasta diciembre de 2016 / La importancia mundial que hoy tienen las plantas medicinales ha fomentado el desarrollo de fitofármacos por las compañías farmacéuticas. A diferencia de los fármacos sintéticos, las etapas para el desarrollo de fitofármacos (formulaciones que contienen extractos de hierbas polivalentes), no están claramente definidos, estandarizados y normalizados. Estas preparaciones a base de hierbas son muy diversas y los estudios farmacocinéticos y farmacodinámicos de ellos son escasos. De ahí la importancia de la normalización de los procesos que intervienen en la obtención de extractos herbales y fitofármacos, así como la determinación de la dosis, la seguridad y la eficacia de fitofármacos. El estudio de los parámetros farmacocinéticos requiere datos experimentales, que se resumen en las curvas de dosis-respuesta. En estas curvas se representa la concentración plasmática del fármaco en función del tiempo después de su administración. La concentración individual de principios activos en los extractos de hierbas es muy baja, por lo que es difícil su cuantificación plasmática utilizando los métodos de HPLC clásicos. Asimismo, se ha observado que existe una correlación directa entre la concentración plasmática de los principios activos presentes en un fármaco con los efectos farmacológicos observados. Si se acepta esta correlación, la cuantificación del principio activo podría ser reemplazada por cualquier efecto medible en plasma. Las hojas de las plantas en general, poseen un alto contenido de antioxidantes, siendo mayoritarios los compuestos polifenólicos. Existen diversas publicaciones que indican que estos compuestos ejercen diferentes efectos farmacológicos relacionados con su actividad antioxidante. Así, preparados de ellos se han asociado a la terapia clásica de patologías tales como enfermedades cardiovasculares y neurodegenerativas (16, 62, 64). Considerando los antecedentes expuestos, en este trabajo se utilizaron extractos hidro-alcohólicos de hojas de Buddleja globosa Hope (matico) y Plantago major L. (Llantén). Extractos hidro-alcohólicos de matico y llantén, previamente caracterizados por su actividad antioxidante in vitro, fueron administrados oralmente a ratas Sprague-Dawley. El análisis de la capacidad antioxidante plasmática a través del tiempo, mostró un aumento de la capacidad de reducir hierro y una disminución de la concentración plasmática de malondialdehído, producto de la oxidación de los lípidos celulares. Por otra parte, el análisis cromatográfico (HPLC) del plasma de las ratas, no mostró los picos correspondientes a los marcadores polifenólicos seleccionados para cada planta (estándares de polifenoles). Como una forma de detectar la presencia de los marcadores seleccionados en los extractos, muestras de los extractos fueron analizadas por LC-masa. Los cromatogramas obtenidos por este método mostraron la presencia en los extractos de los marcadores seleccionados; por lo tanto, la no aparición de ellos en los cromatogramas HPLC confirma la falta de sensibilidad del método HPLC implementado para cuantificar tan pequeñas cantidades de principios activos. El aumento de la capacidad antioxidante plasmática sin embargo, demuestra que hubo absorción de los antioxidantes presentes en las dosis orales de los extractos herbales administrados a las ratas. Estos resultados nos permiten postular que para determinar los parámetros farmacocinéticos de fitofármacos, la determinación del efecto farmacológico, en este caso el efecto antioxidante, podría reemplazar a la concentración plasmática. Cabe destacar que este trabajo representa el primer intento para determinar parámetros farmacocinéticos de fitofármacos, preparados herbales polivalentes. Sin embargo, se necesitan nuevos experimentos que permitan estandarizar las condiciones experimentales implementadas de tal forma que esta metodología pueda que esta metodología pueda ser utilizada en el estudio farmacocinético de fitofármacos / The global importance now given to medicinal plants has encouraged the development of phytodrugs by pharmaceutical companies. Different to synthetic drugs, the stages for the development of phytodrugs (formulations containing polyvalent herbal extracts), are not clearly defined, standarized and normalized. These herbal preparations are very diverse and the pharmacokinetics and pharmadynamics studies of them are scarce. Hence the importance of standardizing the processes involved in obtaining herbal extracts and phytodrugs, as well as, the, the dosage, safety and efficacy of phytodrugs. The study of pharmacokinetic parameters requires experimental data, which are summarized in dose-response curves. These curves plot the plasmatic drug concentration versus time after administration. The individual concentration of active ingredients in herbal extracts are very low, so their plasmatic quantification is difficult using the classis HPLC methods. It has been observed that there is a direct correlation between plasma concentrations of the active ingredients present in a drug with the pharmacological effects observed. If this correlation is accepted, the quantification of the active ingredient could be replaced by any measurable effect on plasma. In general, the leaves of plants have a high content of antioxidants, being polyphenolic compounds the major constituents. There are different publications indicating that these compounds have many pharmacological effects related to its antioxidant activity. This is the reason why the use of herbal preparations has been associated with conventional theraphy of diseases such as cardiovascular and neurodegenerative (16, 62, 64). Considering the above, this study used hydro-alcoholic extracts of leaves of Buddleja globosa Hope (matico) and Plantago major L. (Llantén). Hydro-alcoholic extracts of matico and llantén, previously characterized for their in vitro antioxidant activity, were orally administered to Sprague-Dawley rats. Analysis of plasma antioxidant capacity over time showed an increase in the ability to reduce iron and a decreased in the concentration of plasmatic malondialdehyde, product of celular lipid oxidation. Moreover, chromatographic analysis (HPLC) of rat’s plasma showed no peak corresponding to the polyphenolic markers selected for each plant (polyphenols standards). As a way to detect the presence of polyphenols markers, extract samples were analyzed by LC-mass chromatography. The chromatograms Obtained by this method showed the presence of the selected markers in the extracts; therefore, the non-appearance of them in the HPLC chromatograms confirms the lack of sensitivity of the HPLC method implemented to quantify such small amounts of active principles. The increase in plasma antioxidant capacity however, shows absorption of antioxidant compounds present in the oral doses of herbal extracts given to rats. These results allow us to postulate that to determine the pharmacokinetic parameters of phytodrugs, determination of pharmacological effect, in this case antioxidante effect, could replace the determination of plasmatic concentration levels. It is worthy to note that this work represents the first attempt to determine pharmacokinetic parameters of phytodrugs (polyvalent herbal preparations). However, further experiments to standardize experimental conditions implemented so that this methodology can be used in pharmacokinetic studies of phytodrugs, are needed / Conicyt

Tesis presentada a la Universidad de Chile para optar al grado de Doctor en Ciencias Farmacéuticas / Para el tratamiento del cáncer, segunda causa de muerte en Chile, se utiliza cirugía, quimioterapia, radioterapia, hormonoterapia, inmunoterapia, terapias biológicas o combinaciones de éstas. Un paciente puede ser sometido a una o varias terapias. De estas terapias, la radioterapia, la quimioterapia y recientemente las terapias dirigidas o biológicas producen en el paciente una serie de efectos no deseados, algunos de los cuales aún no han sido resueltos. Una de las toxicidades provocada por los quimioterápicos es la eritrodisestesia palmar plantar (EPP) que disminuye la calidad de vida del paciente y pone en riesgo la continuidad de la terapia. Para disminuir este síntoma se utilizan corticoides y vitamina B6, pero no hay reportes de su eficacia y si no se logra su control, se hace necesario retrasar la terapia, disminuir la dosis de quimioterápicos o cambiar el esquema de terapia, poniendo en riesgo el éxito del tratamiento. La radioterapia por otro lado, puede afectar a los tejidos sanos cercanos al área de tratamiento. Esta toxicidad aparece en diferentes grados, en cerca del 90% de los pacientes, comprometiendo también el éxito de la terapia. En la actualidad no existen estrategias de prevención o tratamiento y el manejo clínico se realiza mediante el uso de preparados tópicos como apósitos hidrocoloidales, gel de aloe vera y/o cremas a base de corticoesteroides. En la búsqueda de una solución para los problemas mencionados, se encontró que un grupo de investigadores de la Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas de la Universidad de Chile había estudiado y publicado las propiedades analgésicas, antioxidantes, antiinflamatorias y cicatrizantes de un extracto estandarizado de Buddleja globosa (matico). Basado en esta investigación, se propuso desarrollar preparaciones dermatológicas con el extracto purificado y estandarizado de matico y evaluarlos en forma preliminar en un grupo de pacientes que presentaban EPP o radioepitelitis. De acuerdo con los resultados previos obtenidos, en este trabajo se propone como hipótesis que el tratamiento tópico con un preparado en base a un extracto de matico farmacológicamente activo y químicamente estandarizado disminuiría los síntomas de la EPP y retrasaría la aparición y severidad de la radioepitelitis secundaria a radioterapia. Para probar esta hipótesis se diseñaron 2 estudios clínicos doble ciego con control placebo, uno para tratar la EPP que presentan pacientes en quimioterapia y otro para prevenir la radioepitelitis a pacientes que deban recibir radioterapia, como tratamiento de cáncer. En el estudio de tratamiento de eritrodisestesia se evaluaron 207 esquemas de quimioterapia que recibieron 121 pacientes, con un total de 1262 ciclos de quimioterapia, en los 207 esquemas todos los pacientes recibieron el mejor cuidado de soporte, en 46 esquemas los pacientes recibieron además una loción en base a extracto estandarizado de matico y en 43 los pacientes recibieron además una loción sin el extracto de matico (placebo). De los tres grupos estudiados el que presentó mejor beneficio clínico con diferencia estadísticamente significativa (p=0.0005 IC 95%) fue la rama que recibió mejor cuidado de soporte más matico. Ingresaron al estudio de profilaxis de radioepitelitis 78 pacientes, 43 de ellos recibieron el gel en base a extracto estandarizado de matico como profilaxis de radioepitelitis y 35 pacientes recibieron gel placebo. El 16,2% de los pacientes que recibieron gel con extracto de matico no presentaron radioepitelitis versus el 8,5% que recibieron gel placebo. El 53,48% de los pacientes con matico presentaron una toxicidad Gº1 versus el 25% de aquellos que recibieron placebo, 27,9% de los pacientes con matico presentaron Gº2 versus 57,14% de los pacientes que recibieron placebo y en Gº3 sólo el 2,3% de los pacientes con matico versus el 8,5% de los que recibieron placebo, es decir los pacientes que recibieron matico presentaron la toxicidad en menor grado y en forma más tardía que aquellos que recibieron placebo. Los resultados de este trabajo permiten concluir que los productos farmacéuticos que contienen un extracto estandarizado de matico disminuyen la EPP con una diferencia estadísticamente significativa con un nivel de confianza del 95% y retrasan la radioepitelitis tanto en tiempo de aparición como en grado, (p value= 0,03) y un intervalo de confianza que no incluye el cero.

Orientadora : Profa. Dra. Marilis Dallarmi Miguel / Coorientador : Prof. Dr. Obdulio Gomes Miguel e Profa.Dra. Deise Prehs Montrucchio / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 09/06/2017 / Inclui referências : f. 118-133 / Resumo: O objetivo deste trabalho foi realizar isolamento de compostos e avaliação do potencial biológico e farmacológico da espécie Buddleja stachyoides Cham. & Schltdl. (Scrophulariaceae), conhecida popularmente como verbasco ou barbasco, encontrada, principalmente, na região sul do Brasil, é usada na medicina tradicional como anti-hemorroidal, antitussígena, analgésica, sudorífera, emoliente e antireumática. Foram isolados compostos das frações hexânica das raízes e acetato de etila das partes aéreas. O método analítico de quantificação do marcador verbascosídeo foi validado, utilizando-se o extrato bruto das partes aéreas. As atividades larvicida sobre Aedes aegypti e alelopática sobre a germinação e crescimento de Lactuca sativa L. e Allium cepa L. foram avaliadas com extratos brutos e frações das partes aéreas e raízes. O potencial antioxidante dos extratos brutos foi avaliado através dos ensaios de captura dos ânions superóxido e óxido nítrico. As atividades farmacológicas antinociceptiva, anti-inflamatória, gastroprotetora, motilidade gastrointestinal e a toxicidade subcrônica foram avaliadas com o extrato bruto das partes aéreas em camundongos Swiss. O composto isolado da fração hexânica das raízes foi identificado como ácido triacontanoico e a mistura de isômeros isolada da fração acetato de etila das partes aéreas foi identificado como martinosídeo (trans e cis). Os extratos brutos das partes aéreas e raízes foram capazes de capturar o ânion superóxido e mais eficazes na inibição do radical óxido nítrico do que o padrão ácido gálico. Algumas frações e extratos brutos apresentaram efeitos inibitórios e estimulantes na germinação e crescimento de Lactuca sativa L. e Allium cepa L. e toxicidade sobre as larvas de Aedes aegypti. O extrato bruto das partes aéreas, nas doses de 600 e 900 mg/kg, apresentou efeito anti-inflamatório em 3 e 4 horas no teste de edema de pata induzido por carragenina e diminuição da migração de leucócitos na cavidade peritonial no teste de peritonite induzida por carragenina. Nos testes antinociceptivos, formalina e ácido acético, o extrato bruto apresentou potencial analgésico nas doses de 600 e 900 mg/kg e demonstrou significativo efeito protetor sobre a úlcera gástrica induzida por etanol acidificado. Não teve ação sobre a motilidade gastrointestinal. O extrato na dose de 900 mg/kg apresentou baixa toxicidade no teste subcrônico avaliado em camundongos fêmeas. Estes efeitos podem estar relacionados aos compostos fenilpropanoides, que possuem propriedades antioxidantes e são capazes de inibir enzimas e mediadores inflamatórios. Devido ao potencial farmacológico e antioxidante observado para a espécie Buddleja stachyoides Cham. & Schltdl, torna-se interessante a realização de testes para comprovar sua segurança e eficácia, para futuro desenvolvimento de um fitoterápico. Palavras-chave: Aedes aegypti. Antioxidante. Anti-inflamatório. Antinociceptivo. Gastroprotetor. Motilidade gastrointestinal. / Abstract: The objective of this work was to isolate compounds and evaluate the biological and pharmacological potential of Buddleja stachyoides Cham. & Schlitdl. (Scrophulariaceae), popularly known as mullein or barbasco, found mainly in southern Brazil, is used in traditional medicine as anti-hemorrhoidal, antitussive, analgesic, sudorific, emollient and antirheumatic. Compounds of the hexane fractions of the roots and ethyl acetate of the aerial parts were isolated. The analytical method of quantification of the verbascoside marker was validated, using the crude extract of the aerial parts. The larvicidal activities against Aedes aegypti and allelopathic on the germination and growth of Lactuca sativa L. and Allium cepa L. were evaluated with crude extracts and fractions of the aerial parts and roots. The antioxidant potential of the crude extracts was evaluated through the superoxide anion and nitric oxide capture assays. The antinociceptive, anti-inflammatory, gastroprotective, gastrointestinal motile and subchronic toxicity activities were evaluated with the crude extract of the aerial parts in Swiss mice. The compound isolated from the hexane fraction of the roots was identified as triacontanoic acid and the mixture of isomers isolated from the ethyl acetate fraction of the aerial parts was identified as martynoside (trans and cis). The crude extracts of the aerial parts and roots were able to capture the superoxide anion and more effective in inhibiting the nitric oxide radical than the standard gallic acid. Some crude fractions and extracts had inhibitory and stimulating effects on the germination and growth of Lactuca sativa L. and Allium cepa L. and toxicity against Aedes aegypti larvae. The crude extract of the aerial parts, at doses of 600 and 900 mg/kg, showed anti-inflammatory effect in 3 and 4 hours in the paw edema test induced by carrageenan and decreased leukocyte migration in the peritoneal cavity in the induced peritonitis test by carrageenan. In the antinociceptive, formalin and acetic acid tests, crude extract showed analgesic potential at doses of 600 and 900 mg/kg and showed a significant protective effect on gastric ulcers induced by acidified ethanol. It had no action on gastrointestinal motility. The extract at the dose of 900 mg/kg showed low toxicity in the subchronic test evaluated in female mice. These effects may be related to phenylpropanoid compounds, which have antioxidant properties and are capable of inhibiting inflammatory enzymes and mediators. Due to the pharmacological and antioxidant potential observed for the species Buddleja stachyoides Cham. & Schltdl, it is interesting to carry out tests to prove its safety and efficacy, for the future development of a herbal medicine. Key-words: Aedes aegypti. Antioxidant. Anti-inflammatory. Antinociceptive. Gastroprotective. Gastrointestinal motility.

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / Buddleja globosa Hope es una planta nativa de Chile que ha demostrado efectos analgésicos, antioxidantes, antiinflamatorio, antibacterianos y antifúngicos. En la Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas de la Universidad de Chile se han realizado estudios que comprueban su actividad analgésica, antiinflamatoria y antioxidante. Además se han evaluado preparados farmacéuticos (crema y gel) en el tratamiento de eritrodisestesia palmo-plantar secundaria a terapia antineoplásica y radioepitelitis. Con estos antecedentes se propone la elaboración de un colutorio a base de un extracto de B. globosa para el tratamiento de mucositis oral, una enfermedad inflamatoria resultante de la terapia contra el cáncer, cuya incidencia es del 40-90% y se manifiesta como lesiones inflamatorias y/o ulcerativas del tracto oral y/o gastrointestinal. Este efecto secundario puede no sólo comprometer la salud de los pacientes que la presentan, sino también, la terapia a la que están sujetos. Hasta hoy no existe ningún producto aprobado para su uso en mucositis oral que haya demostrado eficacia en su prevención y/o tratamiento. El objetivo general de este trabajo consiste en estandarizar un extracto alcohólico de hojas de B. globosa y evaluar mediante un ensayo preclínico la efectividad de un colutorio a base de dicho extracto estandarizado en sus componentes activos. Para la elaboración del extracto etanólico semipurificado (EMAT) se utilizó material vegetal (hojas) recolectado en la Facultad de Ciencias Agronómicas de la Universidad de Chile, Santiago. Con el material seco y molido se realizaron extracciones seriadas con solventes de polaridad creciente (hexano, diclorometano y etanol). La valoración de EMAT y colutorio se realizó por cromatografía líquida de alta eficiencia (CLAE) cuantificando los metabolitos verbascósido y 7-O-glucósido de luteolina mediante curvas de calibración elaboradas con los respectivos patrones. Se evaluó la estabilidad de EMAT y colutorio en estufa a 40°C y a temperatura ambiente. Se realizó un estudio in vivo con Ratas hembras Sprague-Dawley, se estudiaron 7 grupos (control sano, control de mucositis, tratamiento de referencia (glutamina), colutorio al 1% EMAT vía oral, colutorio 5%EMAT vía oral, colutorio 1% EMAT vía tópica y colutorio 5% EMAT vía tópica) evaluando grado de mucositis, peso corporal y consumo de alimento. Además, se realizaron análisis histológicos a muestras de lengua. La metodología CLAE permitió cuantificar los componentes principales (verbascósido y 7-O-glucósido de luteolina) en EMAT (90,58± 1,377 ppm y 9,823± 0,131 ppm) y en las dos formulaciones elaboradas del colutorio, al 1% en EMAT (80,37± 4,454 ppm y 7,068± 0,3942 ppm) y al 5% en EMAT (325,1±9,668 ppm y 38,42± 1,367 ppm) Con respecto a la estabilidad química de los compuestos activos del colutorio, se estableció que se produce degradación, llegando a un 8,09% de verbascósido al tercer mes en estufa a 40°C y 18,96% en el caso de 7-O-glucósido de luteolina. Mientras que en EMAT la concentración del verbascósido fue un 77,63% al cabo de tres meses en estufa a 40°C y el 7-O-glucósido de luteolina de un 82,24% respecto a la concentración inicial. El colutorio a base de EMAT al ser un producto estandarizado en sus compuestos activos asegura la reproducibilidad lote a lote, la trazabilidad de la composición química del producto y por ende su acción farmacológica. En el estudio in vivo no se observan signos físicos de desarrollo de mucositis oral en ningún grupo y no se observan diferencias estadísticamente significativas en el peso y consumo de alimento entre los grupos estudiados. Sin embargo, en el análisis histológico de mucosa lingual revela diferencias entre los grupos, principalmente en el grosor epitelial que se ve más delgado en los grupos de control de mucositis y tratamiento de referencia, no así en los grupos tratados con colutorios que se asemejan más al control sano. En base a los resultados obtenidos en el estudio histológico, se encuentran evidencias que los colutorios al 1% y 5% en EMAT, tanto por vía oral como tópica, podrían ser efectivos en el tratamiento de la mucositis oral inducida por busulfán / Buddleja globosa Hope is a native plant from Chile that has shown analgesic, antioxidant, anti-inflammatory, antibacterial and antifungal effects. In the Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas de la Universidad de Chile, studies that verify its analgesic, anti-inflammatory and antioxidant activity have been carried out. In addition, pharmaceutical formulations (cream and gel) have been evaluated in the treatment of palmar-plantar erythrodysesthesia secondary to antineoplastic therapy and radioepithelitis. With this background it is proposed the development of a mouthwash based on an extract of Buddleja globosa Hope for the treatment of oral mucositis, an inflammatory disease resulting from cancer therapy. Oral mucositis’ incidence is 40-90% and is manifested as inflammatory and/or ulcerative lesions of the oral and/or gastrointestinal tract. This side effect may not only compromise the health of the patients presenting it, but also the therapy to which they are subject. To the date there is no approved product in the treatment and/or prevention of oral mucositis that has been demonstrated efficacious. The general objective of this work is to standardize an alcoholic extract of leaves of Buddleja globosa Hope and to evaluate, by a preclinical test, the effectiveness of a mouthwash based on this standardized extract in its active components. For the elaboration of fractionated ethanolic extract (EMAT) plant material (leaves), collected in the Facultad de Ciencias Agronómicas de la Universidad de Chile, Santiago, was used. With the dry and milled material, serial extractions were carried out with increasing polarity solvents (hexane, dichloromethane and ethanol). The analysis of the extract and mouthwash was performed by HPLC methodology, quantifying the metabolites verbascoside and luteolin 7-O-glucoside using calibration curves elaborated with the respective standards. Stability of the extract and mouthwash was evaluated in an oven at 40 ° C and at room temperature. An in vivo study was performed with 7 groups of female Sprague-Dawley rats (healthy control, mucositis control, standard treatment (glutamine), mouthwash 1% EMAT orally, mouthwash 5% EMAT orally, mouthwash 1% EMAT topically and mouthwash 5% EMAT topically) evaluating the degree of mucositis, body weight and food intake. In addition, histological analyzes were performed on tongue samples. The HPLC methodology allowed quantification of the major components (verbascoside and luteolin 7-O-glucoside) in EMAT (90.58 ± 1.377 ppm and 9.823 ± 0.131 ppm) and in the two formulations of the mouthwash, 1% in EMAT (80, 37 ± 4.454 ppm and 7.068 ± 0.3942 ppm) and 5% in EMAT (325.1 ± 9.668 ppm and 38.42 ± 1.367 ppm) Regarding the chemical stability of the active compounds of the mouthwash it was established that degradation occurs, reaching 8.09% verboscoside at the third month in an oven at 40 ° C and 18.96% in the case of luteolin 7-O- glucoside, while in the dry extract EMAT the concentration of verbascoside was 77.63% after three months in a stove at 40 ° C and luteolin 7-O-glucoside of 82.24% in relation to the initial concentration. The EMAT-based mouthwash as a standardized product concerning its active compounds ensures batch-to-batch reproducibility, traceability of the chemical composition of the product and thus its pharmacological action. In the in vivo study no physical signs of oral mucositis development were observed in any group and no statistically significant differences were observed in weight and feed intake among the groups studied; however, the histological analysis of lingual mucosa reveals differences between them, mainly in the epithelial thickness that was thinner in the control group of mucositis and standard treatment group, but not in the ones treated with mouthwashes, where a resemble to the healthy control group was observed. Based on the results obtained in the histological study, there is evidence that 1% and 5% mouthwashes in EMAT, both orally and topically, could be effective in the treatment of oral mucositis induced by busulfan / 31/12/2018

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / Existen diversos antecedentes de las propiedades farmacológicas de B. globosa tanto de su actividad analgésica como antiinflamatoria en trabajos anteriores realizados en nuestro laboratorio, como también en publicaciones científicas, esto condujo a continuar con el estudio farmacológico y químico de esta especie. Uno de los objetivos de nuestro trabajo consistió en aislar el verbascósido y el 7-O-glucósido de luteolina, además de comparar los rendimientos de los diferentes extractos obtenidos a partir de hojas recolectadas en la localidad de Padre Las Casas, IX Región, Temuco, en relación a los extractos obtenidos en el sector del Campus Antumapu, RM, Santiago. Los extractos fueron fraccionados con solventes de polaridad creciente. El seguimiento cromatográfico se realizó mediante cromatografía en capa fina (c.c.f.) en gel de sílice, usando como fase móvil acetato de etilo: ácido fórmico: ácido acético: agua en proporción 10: 1,1: 1,1: 2,6, (4A) revelando con 2-aminoetil difenilborinato al 1% en metanol (NP) y comparando con sus correspondientes patrones. Se estableció la metodología analítica mediante cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) para cuantificar el contenido de verbascósido presente en el extracto etanólico bioactivo (EET). El estudio dermatológico consistió en la evaluación de la cesión de los geles de EET al 1% y 10%, gel de 7-O-glucósido de luteolina 1% y gel de ácido cafeico al 1% a través de una membrana semipermeable. Los resultados fueron analizados por metodología HPLC En la evaluación farmacológica se utilizó el ensayo de inhibición de la enzima glicógeno fosforilasa (GPa), en el cual se evalúo el porcentaje de inhibición de la enzima por parte del EET. Los resultados de esta investigación permitieron demostrar que no existe una variación significativa entre los rendimientos de los extractos obtenidos en distintas regiones, sin embargo esto no implica que la variación geográfica no influya en la abundancia de los metabolitos secundarios activos. En relación a la evaluación de la cesión de los geles, los resultados demostraron que el verbascósido no es capaz de penetrar la membrana in vitro, lo mismo ocurrió para el 7-O-glucósido de luteolina a diferencia del ácido cafeico que sí pudo atravesar la membrana, esto nos llevó a postular que in vivo ocurre una hidrólisis del verbascósido, mediada por enzimas cutáneas, liberándose ácido cafeico, quien sería el responsable de generar las propiedades terapéuticas del gel. En el ensayo de inhibición de la enzima GPa, el EET demostró ser capaz de inhibir a la enzima en un 51%, presumiendo un posible efecto hipoglicemiante

Memoria para optar al título de Bioquímico / La degradación química de los alimentos es un proceso espontáneo e inducido por efecto de la luz, el calor y la presencia de trazas de algunos iones metálicos de transición, factores que inducen la formación de especies reactivas del oxígeno (ROS). Con el objetivo de preservar los alimentos de la degradación química, la industria alimentaria a utilizado durante años principalmente BHT y BHA; sin embargo, recientes estudios de toxicidad han provocado restricciones de su uso a nivel internacional, lo que ha motivado la búsqueda de sustitutos, cuya inocuidad no pueda ser cuestionada. Una posible alternativa a los antioxidantes sintéticos son los extractos naturales de reconocida actividad antioxidante, la cual estaría dada principalmente por su capacidad de secuestrar radicales libres del oxígeno atribuible principalmente a su alta concentración de polifenoles. Estos antecedentes permiten postular que extractos naturales enriquecidos en polifenoles podrían proteger los alimentos de la degradación química, preservando así sus características nutritivas y organolépticas. El objetivo de este trabajo fue comparar la capacidad de BHT y los extractos de Bluddleja globosa (matico) y Rosmarinus officinalis (romero) de proteger los lípidos y el contenido tiólico de filetes de Oncorhynchus mykiss (trucha arcoiris). El BHT y los preparados de matico y romero inhibieron la lipoperoxidación y protegieron la disminución del contenido de tioles de homogeneizados de filetes de trucha arcoiris, ambos fenómenos inducidos por el sistema Fe3+/ascorbato. Los polifenoles de los antioxidantes serían los principales responsables de la protección del contenido tiólico, mientras que los compuestos o-difenoles-diterpénicos serían los responsables principales de la actividad antilipoperoxidante. Cabe señalar que estos principios activos naturales poseen efectos benéficos para la salud humana y animal. Por lo tanto, preparados enriquecidos en polifenoles y o-difenoles-diterpénicos no sólo actuarían como antioxidantes de alimentos, sino además, podrían contribuir a mejorar la calidad de vida de los consumidores / Chemical degradation is a spontaneous and induced process by light, heat and the presence of metallic ions traces, factors which induce the formation of oxygen reactive species (ROS). To preserve foods from chemical degradation, food industries have used for a long time principally BHT and BHA; however, toxicity studies recently have been published and the international use of these antioxidants are under study. A possible alternative to replace BHT and BHA could be the use of natural extracts as preserving agents. Natural extracts have antioxidant properties due to the high poliphenols concentration and their capacity to scavenger oxygen radicals. These data permit postulate that natural extracts enriched in poliphenols compounds may prevent chemical degradation of foods, so preserving their nutritive and organoleptic properties. The aim of this work was to compared the capacity of BHT, an hydroalacoholic extract of Buddleja globosa (matico) and a dry extract of Rosmarinus officinalis (romero) to prevent the oxidation of lipids and thiol groups present in Oncorhynchus mykiss (rainbow trout) stakes. BHT and the extracts of matico and romero inhibited the lipoperoxidation and prevented the thiol oxidation of Oncorhynchus mykiss stakes, both phenomenon induced by Fe3+/ ascorbate. Protection of thiol oxidation seems to be mediated by the poliphenols present in the natural extract, and the antilipoperoxidant action would be mediated by the o-diphenol-diterpene. It is necessary to note that natural active principles induce benefic effects on human and animal health. Thus, natural preparations enriched in poliphenols and o-diphenol-diterpene would act as food antioxidants and besides improving the health of consumers