Made available in DSpace on 2014-06-12T17:16:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2464_1.pdf: 901352 bytes, checksum: 02348441657144d23a24c49a05223c82 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O trabalho tem por objeto a análise da diferença no tratamento ético e jurídico da questão das células-tronco embrionárias quando obtidas, de um lado, dos embriões excedentes da técnica de reprodução humana assistida e, de outro lado, de embriões produzidos pelo processo de clonagem terapêutica. A problemática é analisada numa perspectiva dos direitos fundamentais, na interface da Bioética e do Biodireito com o Direito Constitucional. A nova Lei da Biossegurança regulamentou a questão, permitindo a utilização, para fins de pesquisa e terapia, de embriões resultantes da reprodução assistida e não utilizados no procedimento; todavia, vetou a possibilidade de obtenção de células-tronco pela clonagem terapêutica. Busca-se averiguar, assim, as semelhanças e diferenças dessas situações jurídicas, abordando a possibilidade de nova legislação vir a igualar tais procedimentos ora tratados de maneira distinta. A decisão do STF, em sede da ADI 3510, é também analisada, sob a ótica de que as considerações ali lançadas têm direta repercussão no tratamento da clonagem terapêutica. O exame da problemática perpassa a questão do tratamento do embrião in vitro, cuja destruição constitui traço comum entre os dois processos de obtenção de células-tronco embrionárias em confronto, levantando o debate acerca do início da proteção jurídica da vida. O trabalho propõe que também a clonagem terapêutica utilizada de forma ponderada e com finalidade estritamente terapêutica , assim como a utilização das sobras embrionárias, não representa uma violação ao direito à vida e à dignidade da pessoa humana

Orientador: Carmino Antonio de Souza / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-06T06:28:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cardoso_RenataBaldissera_D.pdf: 346472 bytes, checksum: 84614c0f0a64309cbd572b9ce576d857 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: O tratamento convencional dos linfomas não-Hodgkin (LNH) com protocolo CHOP, promove taxas de remissão em aproximadamente 70% dos pacientes, as recidivas são freqüentes e, apenas 40% serão curados. Regimes poliquimioterápicos de segunda ou terceira gerações, não melhoraram estes índices. Atualmente, o transplante autólogo de medula óssea é a terapia de escolha para pacientes com LNH agressivos, em primeira recidiva sensível. Estudos de fase II em LNH agressivos, incorporando terapia de alta dose (TAD) seguida por transplante autólogo de medula óssea (TAMO) ou células progenitoras periféricas (CPP) em primeira linha, têm mostrado melhores taxas de sobrevida livre de doença (SLD), a longo prazo, em uma proporção substancial de pacientes. Porém, os resultados de estudos randomizados não confirmaram estes achados e foram muito heterogêneos. Análises retrospectivas de dois destes estudos, sugeriram o benefício do TAMO em pacientes com LNH agressivos e com IPI alto risco, após terapia de indução completa. Outros estudos, incorporando TAMO após terapia de indução abreviada, mostraram resultados conflitantes. Com o objetivo de analisar se intensificação precoce é mais efetiva que quimioterapia convencional, no tratamento dos pacientes portadores de LNH agressivos e de alto risco, conduzimos um estudo prospectivo, randomizado, de setembro de 1998 a dezembro de 2003. Um total de 56 pacientes com LNH IPI alto intermediário e alto risco, foram randomizados para receber 12 ciclos de VACOP-B (Braço A) ou 6 ciclos de VACOP-B seguido por TAD - CY 4g/m2, VP16 2g/m2 e resgate com CPP (Braço B). Foram analisadas as taxas de sobrevida global (SG), sobrevida livre de doença (SLD), sobrevida livre de eventos (SLE), toxicidade e taxas de mortalidade. Foram randomizados 27 pacientes para o braço A e 29 pacientes para o braço B. Destes, 73.2% (41/56) dos pacientes foram do sexo masculino e 26.8%, do sexo feminino. A mediana de idade foi de 38 anos. Mortalidade precoce (< 100 dias) ocorreu em 17% dos pacientes durante o tratamento e a principal causa foi progressão de doença. Com uma mediana de observação de 23 meses, 14 (52%) pacientes no braço A e 16 (55%) pacientes no braço B obtiveram remissão completa (P=0,08). As taxas de SG não diferiram entre os dois braços terapêuticos (P=0.8). Em análise multivariada, o IPI foi fator adverso influenciando a SG. A SLD foi de 93% no braço A comparado com 47% no braço B (P=0,02), apesar do maior número de pacientes com IPI de alto risco no braço A (P=0,02). A análise da SLE, não mostrou diferença estatisticamente significante (47% braço A e 30% braço B; P=NS). IPI foi fator adverso significante associado à SLE. Considerando a baixa SLD no braço B, nós não podemos considerar terapia seqüencial de alta dose e resgate com CPP, após indução quimioterápica abreviada, como terapia de primeira linha em LNH agressivos e IPI de risco intermediário-alto e alto risco / Abstract: Despite the improvement of treatment of aggressive non-Hodgkin¿s lymphomas in the past 20 years, only 40% are cured. No differences have been observed in terms of overall results using protocols of 1rst, 2nd or 3rd generations. Autologous bone marrow transplantation (ABMT) seems to be the salvage treatment of choice in sensitive diseases. However, the role of ABMT as front line therapy is not clear. France and Italian randomized studies, in a retrospective analysis, suggested that ABMT had better results than conventional CT for highrisk NHL. From September 1998, a multicenter phase III prospective randomized study was carried out comparing: VACOP-B 12 weeks (group A) and VACOP-B (6 weeks) + high dose sequential therapy (CY, 4g/m2; VP-16, 2g/m2) followed by ABMT (group B), focusing on overall survival, DFS, EFS and mortality rate. Valuable patients were 27 (A) and 29 (B). Male gender 41 (73.2%) and female 15 (26.8%). Median age was 38.3 years (17-60). At the diagnosis, more patients in arm A were classified as high-risk by the IPI score (59% vs 27%; P=0,02). 17% of patients dead early during treatment, most of them progression disease. With a median of observation of 23 months; 14 patients obtained CR (52%) in arm A and 16 (55%) pts in arm B (P=0,08).No difference in OS was observed between arm A and arm B, 47% and 40%, respectively (P=0.8). The high IPI was significantly associated with shorted OS (P=0,004). The DFS in arm A was 93%, compared to 47% in arm B (P=0,02). There was no statistically significant difference to EFS (47% in arm A vs 30% in arm B, P=NS). By multivariate analysis only high IPI was an adverse factor influencing EFS (P=0,009). Considering the low DFS in arm B, we cannot consider HDT and ASCT as front-line therapy in high-risk NHL patients / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Ciências Médicas

O envelhecimento é um processo gradual e intrínseco que ocorre devido a mudanças fisiológicas e fenotípicas com o avanço da idade e que acarreta na diminuição da capacidade de manter a homeostase e reparo tecidual. A perda do controle homeostático e o possível envolvimento de células-tronco e progenitores, provavelmente, é uma das causas das fisiopatologias do sistema hematopoético que acompanham o envelhecimento. O declínio na competência do sistema imune adaptativo, o aumento de doenças mielóides, leucemias e o desenvolvimento de anemias são algumas mudanças significantes e decorrentes do processo de envelhecimento. Durante a transição ontológica, a habilidade de células-tronco hematopoéticas originarem células progenitoras diminui progressivamente, sugerindo perda da capacidade de autorrenovação e diferenciação das células-tronco com o avanço da idade. O microambiente medular se divide em duas áreas distintas: nicho endosteal e nicho vascular, conhecidos por controlar a homeostase das células-tronco hematopoéticas; e é composto por uma mistura heterogênea de células, dentre elas as células-tronco mesenquimais que expressam moléculas que controlam algumas funções das células-tronco hematopoéticas. De acordo com estas observações, este trabalho investiga o papel do envelhecimento das células-tronco mesenquimais no processo de autorrenovação, multipotência e diferenciação das células-tronco hematopoéticas. Neste trabalho, avaliamos a percentagem de células-tronco hematopoéticas Lin-CD34+ e subpopulações em co-cultura com células-tronco mesenquimais derivadas de medula óssea de diferentes idades, bem como sua capacidade de autorrenovação, diferenciação, secreção da quimiocina CXCL-12 e a expressão do receptor CXCR-4. Nossos resultados mostraram diferenças significativas nos parâmetros fenotípicos e funcionais das células-tronco hematopoéticas co-cultivadas com células-tronco mesenquimais de doadores idosos. Estes dados sugerem que o envelhecimento das células-tronco mesenquimais podem influenciar na homeostase do microambiente medular / Certainly, aging is one of the best identified features of the human biology, and is also the least understood. This is largely attributed to the fact that aging is gradual and fundamentally complex, due to all modifications in the physiological and phenotypic aspects occurred during the age advancing. One of the most striking features of aging is the decreased ability to maintain homeostasis and tissue repair. Consistent with those findings, many of the pathophysiological conditions affecting aging, such as anemia, dysplasia, leukemia and anemia suggest an imbalance between cell losses and the ability to self-renew or differentiation. The decline in homeostatic maintenance and regenerative potential of tissues during aging has been associated with changes in stem cells. Increasing evidences point to the stem cells as major accountable for the aging pathophysiology in several tissues. Thus, studies in mammals comprise a careful evaluation of mechanisms connected to stem cells. The increasing age is accompanied by many pathophysiological changes in the hematopoietic system wherein the etiology suggests loss of homeostatic control and a possible involvement of stem and progenitor cells. The clinically relevant changes are related to adaptive immune system diminished competence, the increase of myeloid diseases including leukemia and the onset of anemia in the elderly. The hematopoietic stem cell microenvironment is located in the bone marrow and is divided in two domains: the endosteal niche near to the bone surface and vascular niche associated with the sinusoidal endothelium; the niche consist of several heterogeneous cells types, among them, the mesenchymal stem cells. The mesenchymal stem cells express molecules that control hematopoietic stem cells functions. Therefore, this study investigates the role of mesenchymal stem cells aging in the self-renewal, multipotency and differentiation of hematopoietic stem cells. This study evaluated the percentage of hematopoietic stem cell Lin-CD34+ and subpopulations in co-culture with mesenchymal stem cell bone marrow-derived from donors with different ages, their ability of self-renewal, differentiation, secretion of chemokine CXCL-12 and expression of the CXCR-4 receptor. Our results suggest that the mesenchymal stem cells aging can affect the bone marrow niche homeostasis

Orientador: Irene Lorand-Metze / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T09:37:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Delamain_MarciaTorresan_M.pdf: 3944857 bytes, checksum: 3a7a67439a8b8496098468fa900b5967 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: As Células Progenitoras Periféricas Hemopoiética(CPPH) são hábeis para restaurar a hemopoiese após tratamento quimioterápico mieloablativo. O tratamento com megaquimioterapiaacompanhadopor resgate de CPPH é uma importante abordagem terapêutica utilizada hoje em pacientes com neoplasias hematológicas como Linfoma Não-Hodgkin (LNH),Doença de Hodgkin (LH) e Mieloma Múltiplo (MM). O regime quimioterápicomais efetivo e de intensidademais adequada ainda deve ser definido e pode ser claramente demonstrado que a Célula Progenitora Hemopoiética pode ser influenciada por tratamentos prévios. Vários outros parâmetros também podem influenciar na coleta de CPPH após a quimioterapia de mobilização. A proposta do nosso estudo foi estabelecerparâmetros que possam melhor predizer o dia para iniciar a coleta de CPPH com o objetivo de coletar mais células CD34+ com um menornúmero de procedimentos de leucoaféreses. Nós analisamos,retrospectivamente,pacientes com neoplasias hematológicas tratados em nosso Serviço,que foram submetidos à mobilizaçãopara obter CPPH a fim de realizar o transplante autólogo de medula óssea. Os pacientes foram mobilizados com Ciclofosfamida (4 ou 7g/m2)e G-CSF na dose de 300/lg, sub-cutâneo, diariamente, com o propósito de coletar 5 x 106 células CD34+/Kg. Nós investigamos a influência da idade, sexo, diagnóstico,número de linhas quimioterápicasprévias, hemograma do sangue periférico no dia da mobilização, dia quando os neutrófilos < Ix I09/L e o dia do nadir (incluindo o intervalo de dias destes dois dias - delta). Foi elaboradoum modelo matemático utilizando a correlação linear multivariada com o objetivo de predizer o melhor dia da coleta. Nós analisamos 134pacientes: 36 com DH, 65 LNH, 33 MM. A mediana de idade foi de 28 , 40 e 48 anos respectivamente. O teste de Pearson mostrou uma correlação para o dia dos leucócitos > 1 x 109/L com os valores de hemoglobina no dia O,dia dos neutrófiolos < 1 xl 09/L,dia do nadir e doses de quimioterapia de mobilização utilizada. Para cada grupo de doença,um modelo foi desenvolvido: DH: dia da aférese = delta x 1.5 + 6.8 LNH: dia da aférese =delta x 0.88 +10.1 MM: dia da coleta =delta x 1.35 + 8.8. Em 54 casos foi realizada a determinação seriada do número de células CD34 + no sangue periférico no dia quando os leucócitos atingiram> 1 x1O9/L.Nestes pacientes, a correlação encontrada entre o dia da coleta e hemoglobina,dia dos neutrófilos < 1 x 109/L e o dia do nadir. foi estatisticamente significativa e possibilitou desenvolver um modelo matemáticoseparando os pacientes conforme a doença de base: DH: dia da aférese = delta x 1.5 + 9.1 LNH: dia da aférese = delta x 0.66 + 10.8 MM: dia da aférese = delta x 1.6+ 8.8 De acordo com nosso estudo, cada doença apresenta sua dinâmica de mobilização, possivelmente relacionada com o número de linhas quimioterápicas prévias ou pelo status do microambiente medular. O parâmetro mais importante encontrado e comum a todos os pacientes foi a velocidade de queda dos neutrófilos após a quimioterapia de mobilização / Abstract: Mobilized peripheral blood progenitor cells (PBPC) are able to engraft and restore hemopoiesis after myeloablative therapy. Intense chemotherapy with PBPC rescue is currently an important therapeutic approach in hematological malignancies such as non- Hodgkin's lymphoma(NHL),Hodgkin's disease (HD) and multiple myeloma (MM). The most effective regimen and the adequate intensity of mobilization chemotherapy still remains to be defined and it has been c1earlyshown that the progenitor cell yield can be influenced by intensity of previous treatments. Several other parameters may affect the harvesting of PBPC after mobilizationchemotherapy. The purpose of our study was to establish the parameters that best predict the day to start harvesting of PBPC in order to collect most CD34+ cells with few aphereses. We analysed retrospective data ofpatients with hematological malignancies treated in our Institution,who underwent mobilizationto obtain PBPC in order to perforrn autologous bone marrow transplantation. Patients were mobilized with Cyc1ophosphamide(4 or 7g1m2) and G-CSF 300Jlg,sc,dai1y,aiming to collect 5x1O6cells/Kg. We investigated the influence of age, sex, diagnosis, number of previous chemotherapy lines (nCHT), peripheral blood counts on day of mobilization, day of neutrophils < 1 xl09/L and day of nadir (inc1uding the interval between these two days) on harvesting. Multivariate linear correlation models were built in order to predict the day of best harvesting. We analysed 134 patients: 36HL, 65 NHL and 33 MM. Median age: 28,40 and 48 respectively. The Pearson's test showed a correlation for day of leucocytes > 1 xl 09/L with hemoglobin value of day O, day of neutrophils < Ix1O9/L,day ofnadir and dosis ofmobilization therapy. However, for each disease group a different model could be established: HL: day of apheresis = delta x 1.5+6.8 NHL: day of aphereis =delta x 0.88+ 10.1 MM: day of apheresis = delta x 1.35 +8.8. In 54 cases a serial deterrninationof the number of CD34 + cells in peripheral blood was performed starting on day of peripheral leucocytes > 1 xl 09/L. In these patients, a correlation was found between the day of harvesting and hemoglobin, day of neutrophils <lx1O9/L and day ofnadir. Separating the patients for disease: HL: day of apheresis =delta x 1.5 +9.1 NHL: day of apheresis = delta x 0.66 + 10.8 MM:day of apheresis=deltax 1.6+8.8. According to this study, each disease has its own pattem of mobilization dynamics, possibly related to the amount of previous chemotherapy or the status of bone marrow microenviroment. The most important parameter, cornrnonto alI patients, was the velocity of decline of the neutrophil count afier mobilization chemotherapy / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica

Dissertação (mestrado profissional) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Gestão do Cuidado em Enfermagem, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-09-20T04:01:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 341614.pdf: 1255532 bytes, checksum: 01710e51f0281e84a768896d2a608b4c (MD5) Previous issue date: 2016 / O presente estudo teve como objetivo geral: construir e aplicar follow-up de enfermagem via telefone pós-alta hospitalar do paciente submetido ao transplante de células-tronco hematopoiéticas autogênico no Centro de Pesquisas Oncológicas, uma instituição oncológica do Estado de Santa Catarina, Brasil e, como objetivos específicos: identificar se as orientações para alta pós-transplante atendem às necessidades vivenciadas pelos pacientes e familiares; identificar as dificuldades e facilidades encontradas pelos pacientes submetidos ao transplante durante a prática de cuidados domiciliares; identificar as alterações de saúde vivenciadas no domicílio e relatadas pelos pacientes submetidos ao transplante pós-alta hospitalar. A escolha para implantação do follow-up seguiu as recomendações do Ministério da Saúde, pois esta estratégia permite o desenvolvimento de cuidado proativo. O referencial teórico escolhido para sustentação teórica foi a Teoria do Autocuidado, proposta por Dorothea Orem, que orienta a sistematização da assistência de enfermagem no cenário do estudo. Para tanto, foi realizado estudo descritivo. Para o desenvolvimento do estudo, primeiramente, foi elaborada a proposta de follow-up de enfermagem, que constituiu-se de um questionário, contendo perguntas abertas e fechadas, com aplicabilidade via ligação telefônica. A proposta foi validada pela equipe multiprofissional e cinco pacientes. Os participantes do estudo foram nove pacientes submetidos ao transplante de células-tronco hematopoiéticas, entre agosto e setembro de 2015. Para a coleta de dados, realizada entre agosto e outubro de 2015 aplicou-se o follow-up de enfermagem via ligação telefônica, realizada entre 16º e 24º dia após a alta hospitalar. Para análise, os dados coletados foram agrupados por similaridade e submetidos à medida de frequência, sendo que as perguntas abertas foram transcritas antes do agrupamento das informações, na sequência os resultados foram discutidos a partir do referencial teórico e estudos relacionados aos resultados encontrados. A12pesquisa foi realizada seguindo-se os termos legais para pesquisa com ser humano. Por meio deste estudo foi possível construir um produto para o cuidado de enfermagem e identificou-se as necessidades dos pacientes vivenciadas no domicílio, o que possibilitou a orientação de cuidados específicos para sanar ou reduzir as demandas de necessidades e/ou indicar encaminhamentos necessários aos pacientes e familiares no domicílio. As alterações de saúde predominantes encontradas na aplicação do follow-up foram astenia, náusea, alteração do paladar, dor e alterações psicossociais. Os participantes apontaram que as orientações para alta atendem, em geral, as necessidades vivenciadas pelos pacientes e familiares. Relataram dúvidas quanto ao uso de máscaras descartáveis, animais de estimação, receio quanto à necessidade de realização de um segundo transplante; limpeza dos talheres e roupas e os cuidados diante das alterações de saúde. Quanto às facilidades destacaram o manual educativo fornecido pelo cenário do estudo e o atendimento prestado pela equipe multiprofissional. Com a aplicação do follow-up buscou-se a redução dos riscos pós-transplante de células-tronco hematopoiéticas autogênico, a melhoria da qualidade dos cuidados de enfermagem e da equipe multiprofissional, proporcionando maior segurança e conforto ao paciente transplantado pós-alta hospitalar. Os resultados apontaram que o follow-up de enfermagem via telefone é uma tecnologia viável e acessível, que possibilita o esclarecimento de dúvidas, orienta o cuidado domiciliar pós-alta, dá suporte ao enfrentamento da nova condição de saúde, sem necessidade de deslocamento do paciente, como também, auxilia no controle das complicações e reduz os custos para o sistema de saúde. Além disto, o follow-up de enfermagem foi reconhecido pelos pacientes como uma boa prática de cuidados que deve ser mantida pós-alta do transplante.<br> / Abstract : The overall objective of this study was: to build and apply a nursing follow up via telephone after discharge from the hospital of patients who have had autogenic hematopoietic stem cell?s transplant in the Oncology Research Centre, an oncology institution of Santa Catarina State, Brazil. As specific objectives: to identify if orientations after transplant discharge meet the needs experienced by patients and their families; to identify difficulties and facilities found by transplanted patients during home care practices; to identify health modification experienced at home and reported by transplanted patients after discharge from the hospital. The follow up implementation?s choice has followed the recommendations of the Ministry of Health, once this strategy allows a proactive care development. The theoretical background chosen was the Self-care Theory, by Dorothea Orem, which leads the nursing assistance systematization in this descriptive study. To develop the study, at first it was drafted the proposed nursing follow up, which consisted of a questionnaire with open and closed questions, with applicability via phone call. The multidisciplinary team and five patients validated the proposal. The study participants were nine patients undergoing transplantation of hematopoietic stem cells, between August and September 2015. To data collection, conducted between August and October 2015 was applied to the nursing follow up via telephone call held between 16 and 24 days after hospital discharge. For analysis, data were grouped by similarity and submitted as its frequency, and the open-ended questions were transcribed before the grouping of information and then results were discussed from theoretical background and from studies related to it. Research was performed following the legal terms for human beings' research. Through this study it was possible to build a product for nursing care and to identify the patients' needs at home, allowing the guidance of specific care to remedy or reduce the needs' demands and/or indicate necessary referrals14to patients and their families at home. The predominant health changes observed in follow up application were asthenia, nausea, taste disturbance, pain and psychosocial changes. Participants pointed out that the guidelines for hospital discharge meet the needs experienced by patients and families. They have reported doubts about the use of disposable masks, pets, fear about the need to perform a second transplant; cleaning utensils and clothes and care on the health changes. As for the facilities it was highlighted the educational manual provided by the study and the care provided by the multidisciplinary team. With the follow-up implementation it has been sought the autogenic hematopoietic stem cell?s post-transplant risks reduction, improving the quality of nursing care and of the multidisciplinary team, providing greater safety and comfort to the post-discharge transplant patients. Results have indicated that the nursing follow up via telephone is a viable and affordable technology that enables answering questions, orients the post-discharge home care, supports to face a new health condition without the need for patient displacement, but also assists in controlling complications and reduces costs to the health system. Moreover, the nursing follow up has been recognized as a good practice care by patients that should be kept transplantations post-discharge.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química, Florianópolis, 2016 / Made available in DSpace on 2016-09-20T04:26:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 341130.pdf: 11169699 bytes, checksum: 39a5d5dbbcb6c5507aafcef34bbaf1bf (MD5) Previous issue date: 2016 / Bentonitas são argilas que, devido às suas características estruturais, abundância na natureza e baixo custo, são amplamente aplicadas na indústria farmacêutica e de alimentos. Em contato com o corpo estas partículas argilominerais são eficientes para melhoria da saúde, sendo capazes de reduzir os efeitos colaterais de diferentes fármacos e/ou toxinas. Tais efeitos estão relacionados às propriedades químicas destes materiais, as quais podem variar de acordo com o local de extração e/ou de acordo com tratamentos físico-químico que podem ser realizados. Neste contexto, a proposta deste estudo foi caracterizar e realizar tratamentos térmicos (nas temperaturas de 125 a 1000 oC) e organofílicos - com cloreto de benzalcônio (BAC) e brometo de cetrimônio (CTAB) - sobre partículas de bentonita extraídas da região Sul do Estado de Santa Catarina, com o intuito de avaliar a influência destes novos materiais gerados sobre a capacidade de adsorção da micotoxina aflatoxina B1 (AFB1). Não obstante, este trabalho também buscou avaliar a toxicidade e potencial terapêutico dos materiais desenvolvidos utilizando, para tal finalidade, células-tronco da crista neural (CN) como modelo de estudo. Os resultados de caracterização demostraram que a bentonita in natura é constituída principalmente por SiO2 (68,14%), Al2O3 (18,04%), Fe2O3 (2,80%), K2O (2,85%), apresentando percentuais abaixo de 1% de MnO, MgO, CaO, Na2O, TiO2 e P2O5. Os tratamentos térmicos propiciaram transformações nas fases mineralógicas, área superficial, tamanho de poro, estabilidade térmica e distância interlamelar, sendo que estas modificações afetaram a capacidade de adsorção das partículas de bentonita, as quais foram reduzidas progressivamente com o aumento da temperatura. Diferentemente, os tratamentos com sais quaternários de amônio (BAC e CTAB) foram capazes de aumentar a capacidade de adsorção de AFB1, a qual passou de 27,3% (bentonita in natura) para 55,24 e 77,88% para as amostras de bentonitas tratadas com 2% de brometo de cetrimônio a 60 oC (CTAB302) e 2% de cloreto de benzalcônio a 60 oC (BAC302), respectivamente. Os materiais produzidos não apenas foram atóxicos para as células-tronco da CN na concentração de 0,6 mg/mL, como também foram capazes de proteger estas células contra os danos causados pela AFB1. Os processos de organofilização, inclusive, foram os mais eficientes, sendo capazes de impedir os danos celulares provocados por esta toxina (AFB1). Todos estes resultados, obtidos in vitro, não apenas contribuirão para uma melhor compreensão do mecanismo de ligação da bentonita com a AFB1, como também serão importantes para o desenvolvimento de novos fármacos e/ou materiais mais eficazes para mitigação e/ou eliminação de diferentes agentes tóxicos presentes nas dietas fornecidas aos humanos e/ou animais.<br> / Abstract: Due to their structural characteristics, bentonites are clays that can be found in abundance in nature, have low cost, and are widely applied in the pharmaceutical and food industries. When in contact with the human body, these clay particles are effective in improving health, reducing side effects of different drugs and / or toxins. Such effects are associated with the chemical properties of these materials, which may vary depending on the extraction site and / or on the physical and chemical treatments they are submitted to. Moreover, this present research aimed to characterize and conduct heat treatment (at temperatures 125-1000°C) and organophilic treatment - (with benzalkonium chloride, BAC, and bromide cetrimonium, CTAB) - on bentonite particles extracted from the southern region of the State of Santa Catarina, in Brazil, in order to assess how these new materials may affect the adsorption capacity of mycotoxin aflatoxin B1 (AFB1). In addition, this work aimed to assess the toxicity and therapeutic potential of produced materials, by using neural crest stem cells (NC) as reference. Characterization results showed that in natura bentonite consists mainly of SiO2 (68.14%), Al2O3 (18.04%), Fe2O3 (2.80%), K2O (2.85%), showing percentages below 1% of MnO, MgO, CaO, Na2O, TiO2 e P2O5. Thermal treatments provided changes in the mineralogical phases, surface area, pore size, thermal stability, and interlayer distance. Such changes have affected the adsorption capacity of bentonite particles, which were progressively reduced with increasing temperature. In contrast, treatments with quaternary ammonium salts (BAC and CTAB) were able to increase the adsorption capacity of AFB1, which rose from 27.3% (in natura bentonite) to 55.24; and 77.88% for samples of bentonites treated with 2% of cetrimonium bromide at 60 oC (CTAB302) and 2% of benzalkonium chloride at 60 oC (BAC302), respectively. The materials produced were not only non-toxic to the CN stem cells at a concentration of 0.6 mg/mL, they were also able to protect these cells from any damage caused by AFB1. The organophilization processes were the most efficient, since they were able to prevent cell damage caused by that toxin (AFB1). All of such results, found in vitro, not only could contribute to a better understanding of the bentonite linkagemechanism with AFB1, but could also aid on the development of new drugs and / or more effective materials for moderating and / or removing several toxic agents existing in diets fed to humans and / or animals.

Orientador: Maria José Hitomi Nagata / Banca: Valdir Gouveia Garcia / Banca: Leandro Araújo Fernandes / Resumo: O propósito deste estudo foi avaliar, histologicamente e histometricamente, o processo de cicatrização óssea em defeitos de tamanho crítico (DTC), criados cirurgicamente em calvárias de ratos e tratados com aspirado de medula óssea (AMO), laser em baixa intensidade (LLLT) ou a associação de ambas as terapias. 40 ratos foram divididos em 4 grupos: C (controle), AMO, LLLT e AMO/LLLT. Um DTC de 5 mm de diâmetro foi criado na calvária de cada animal. No Grupo C, o defeito foi preenchido com coágulo sangüíneo somente. No Grupo AMO, o defeito foi preenchido com AMO. Nos grupos LLLT e AMO/LLLT, o defeito recebeu aplicação da LLLT (InGaAlP laser), foi preenchido com coágulo sanguíneo e AMO, respectivamente, e recebeu novamente a aplicação da LLLT. Todos os animais foram submetidos à eutanásia aos 30 dias pós-operatórios. Análises histomorfométrica, usando software de análise de imagem, e histológica foram realizadas. A Área de Osso Neoformado (AON) foi calculada como uma porcentagem da área total do defeito original. Os dados foram analisados estatisticamente (ANOVA, Tukey, p<0,05). O Grupo AMO/LLLT (38,92 ± 7,12%) apresentou AON significativamente maior que os grupos C (13,75 ± 4,32%), AMO (28,71 ± 10,42%) e LLLT (18,40 ± 7,41%). O Grupo AMO apresentou AON significativamente maior que o controle. Não foram observadas diferenças significativas na AON dos grupos LLLT e C. Dentro dos limites desse estudo, pode-se concluir que a associação AMO/LLLT produziu formação óssea significativamente maior em DTC cirurgicamente criados em calvárias de ratos quando comparada ao controle ou a cada tratamento isoladamente / Abstract: The purpose of this study was to analyze, histologically and histometrically, the influence of bone marrow aspirate (BMA), low-level laser therapy (LLLT) or their combination on bone healing in surgically created critical-size defects (CSD) in rat calvaria. 40 rats were divided into 4 groups: C (control), BMA, LLLT and BMA/LLLT. A 5 mm diameter CSD was created in the calvarium of each animal. In Group C, the defect was filled by blood clot only. In Group BMA, the defect was filled with bone marrow aspirate. In groups LLLT and BMA/LLLT, the defect received laser irradiation (InGaAlP laser), was filled with blood clot or BMA respectively, and then irradiated again. All animals were euthanized at 30 days postoperatively. Histometric, using image analysis software, and histologic analyses were performed. Amount of newly formed bone (NFB) was calculated as a percentage of the total area of the original defect. Data were statistically analyzed (ANOVA, Tukey p<0.05). Group BMA/LLLT (38.92 ± 7.12%) had significantly greater NFB than groups C (13.75 ± 4.32%), BMA (28.71 ± 10.42%) and LLLT (18.40 ± 7.41%). Group BMA presented significantly greater NFB than control, while group LLLT did not. Within the limits of this study, it can be concluded that the combination of BMA/LLLT yielded significantly greater bone formation in surgically created CSD in rat calvaria when compared to control, or either treatment alone / Mestre

Estudos com células tronco (CT) têm despertado grande interesse devido ao seu promissor potencial terapêutico. Neste contexto, as CT mesenquimais (CTm) representam uma alternativa para o tratamento de diversas patologias em diferentes órgãos, inclusive o rim e as glomerulopatias que o acometem. As doenças glomerulares constituem uma freqüente causa de doença renal crônica e se caracterizam por apresentar proteinúria. Neste processo, os podócitos são células que apresentam um papel crucial, sendo que as podocitopatias se associam com o aparecimento de proteinúria e desenvolvimento de esclerose glomerular. A obtenção de um modelo de podocitopatia através da administração de aminonucleosídeo de puromicina (PAN), permite a melhor compreensão dessas células altamente diferenciadas que não possuem potencial de proliferação ou regeneração. O presente projeto teve como objetivo estabelecer o modelo experimental de nefropatia crônica induzida por PAN associado à nefrectomia unilateral (UniNx) para induzir lesões glomerulares mais exuberantes e, neste modelo experimental, avaliar o efeito da infusão de CTm derivadas da medula óssea. Ratos Wistar (n=52) foram divididos em três grupos: Controle (UniNx), PAN (PAN+UniNx) e PAN+CTm (PAN+UniNx+CTm). As CTm foram inoculadas na região subcapsular renal no dia 0 e os animais foram sacrificados após 30 e 60 dias. O efeito da infusão das CTm no tecido renal foi avaliado através de parâmetros clínicos e laboratoriais, além de análise histológica, imunohistoquímica, microscopia eletrônica e PCR em tempo real. Paralelamente, o projeto analisou a diferenciação in vitro de CTm em podócitos através do estímulo com colágeno tipo IV e através de cocultura de glomérulos isolados de ratos com CTm. A diferenciação celular das CTm foi analisada por citometria de fluxo, imunocitoquímica e PCR em tempo real para genes de proteínas podocitárias. No modelo in vivo foi possível observar a presença de CTm até 15 dias após a inoculação na região subcapsular renal. As CTm foram capazes de diminuir significativamente a proteinúria e a albuminúria com 30 e 60 dias, assim como a pressão arterial aos 60 dias. Não houve diferença nos valores de creatinina, uréia sérica, glomeruloesclerose e fibrose intersticial entre o grupo PAN e o grupo PAN+CTm. As CTm foram responsáveis pela diminuição significativa da fusão dos pedicelos à microscopia eletrônica, com melhora da expressão relativa de WT1 aos 60 dias e melhora parcial da expressão gênica de nefrina, podocina e sinaptopodina. A expressão proteica de WT1 também foi significativamente maior no grupo PAN+CTm em comparação ao grupo PAN. Além disso, houve melhora significante da expressão relativa de IL-4 e IL-10, e diminuição de IL-1? e TNF-? no grupo tratado. Ainda, as CTm promoveram aumento significativo da expressão gênica de VEGF aos 60 dias. Nos resultados in vitro não houve diferenciação das CTm em podócitos quando cultivadas com colágeno IV, assim como a cocultura com glomérulos não proporcionou alteração na expressão de marcadores de superfície das CTm. Concluímos que a terapia celular com CTm foi capaz de induzir proteção renal caracterizada por diminuição da proteinúria, da albuminúria e da pressão arterial, associado a menor fusão dos pedicelos, maior expressão gênica de proteínas podocitárias e de expressão celular de WT1. As citocinas inflamatórias IL-1?, TNF-?, IL-4 e IL-10, em conjunto com o VEGF, foram os possíveis mediadores responsáveis por estes resultados / Stem cells (SC) have emerged as a potential therapeutic approach for several diseases. In this context, the mesenchymal SC (mSC) are considered an alternative for the treatment of kidney diseases such as glomerulopathies. Glomerular diseases are an important cause of chronic kidney disease (CKD) and are characterized by proteinuria. In this process, the podocytes are cells that have a critical role, and the podocytopathies are associated with the onset of proteinuria and glomerular sclerosis. The achievement of a podocytopathy model through administration of puromycin (PAN) allows a better understanding of these highly differentiated cells which do not have the potential for proliferation or regeneration. The aim of the present study was to establish an experimental model of chronic nephropathy induced by PAN associated with unilateral nephrectomy (UniNx), to induce early and marked glomerular lesions and, in this experimental model, to evaluate the effect of bone marrow mSC infusion. Wistar rats (n=52) were randomly divided into three groups: Control (UniNx), PAN (PAN+UniNx) and PAN+mSC (PAN+UniNx+mSC). mSC were inoculated into the subcapsular renal region on day 0, and the animals were sacrificed after 30 and 60 days. The mSC infusion effects in renal tissue were evaluated by clinical and laboratory parameters, histology, immunohistochemistry, electron microscopy and real-time PCR. In parallel, we analyzed whether mSC could differentiate in vitro into podocytes through stimulation with collagen type IV or by means of co-culture of isolated rat glomeruli with mSC. The cell differentiation was analyzed by flow cytometry, immunocytochemistry and real-time PCR. In the in vivo model, mSC were detected until 15 days after inoculation in the renal subcapsular region. mSC were able to significantly reduce the proteinuria and albuminuria with 30 and 60 days, as well as blood pressure at 60 days. There was no difference in the values of creatinine, BUN, glomerulosclerosis and interstitial fibrosis between the groups PAN and PAN+mSC. The treated group showed lower effacement of foot process by electron microscopy, with significant improvement in the relative expression of WT1 in 60 days and partial improvement of nephrin, podocyn and synaptopodin. The WT1 protein expression was also significantly higher in the PAN+mSC group compared to the PAN group. In addition, mSC treatment significantly reduced gene expression of IL-1? and TNF-?, as well as increased the expression of IL-4 and IL-10. At 60 days mSC promoted significant increase of VEGF relative expression. In vitro results, mSC cultived with collagen type IV did not show differentiation to podocytes and the co-culture with glomeruli provided no change in expression of mSC surface markers. In conclusion, mSC therapy in the PAN model was able to induce renal protection characterized by the reduction of albuminuria, proteinuria and blood pressure, associated with a lower effacement of foot process, increased gene expression of podocytes proteins and cellular expression of WT1. Inflammatory cytokines IL-1?, TNF-?, IL-4 and IL-10 associated with VEGF were the probable mediators of these results, promoting podocyte protection

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-12-04T12:19:12Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_CocultivoEmbrioesBovinos.pdf: 1514173 bytes, checksum: 3a720fb9e7e5105e7d7ca80b17a04e2d (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-12-04T12:56:26Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_CocultivoEmbrioesBovinos.pdf: 1514173 bytes, checksum: 3a720fb9e7e5105e7d7ca80b17a04e2d (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-04T12:56:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_CocultivoEmbrioesBovinos.pdf: 1514173 bytes, checksum: 3a720fb9e7e5105e7d7ca80b17a04e2d (MD5) Previous issue date: 2014 / A produção in vitro de embriões (PIV) é uma biotecnologia utilizada para aumentar o potencial reprodutivo de animais geneticamente superiores, os embriões produzidos in vitro são de qualidade inferior aos produzidos in vivo, por isso técnicas tentam melhorar os índices de embriões produzidos in vitro. Uma técnica é o sistema de co-cultivo com células somáticas que removem metabólitos tóxicos e protegem contra o stress oxidativo. As células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo (CTA) são células multipotentes que segregam fatores de crescimento e citocinas. As células-tronco foram utilizadas em co-cultivo in vitro de embriões bovinos em diferentes concentrações com o objetivo de melhorar o protocolo de PIVE. CTAs foram submetidas à diferenciação em três linhagens mesenquimais, e foi realizada a imunofenotipagem de marcadores específicos de membrana das CTMs. A taxa de clivagem foi avaliada no segundo dia após a fertilização e taxa de blastocistos no sétimo dia, quando foram armazenados para contagem do número total de células e expressão gênica. Os resultados foram analisados por ANOVA, Teste-t e pós-teste de Fisher, adotando um nível de significância de 5%. O tratamento do co-cultivo com CTAs influenciou significativamente a formação de blastocisto, o número total de células de embriões e a expressão gênica correlacionada a pluripotência e metabolismo de carboidratos. Estes resultados mostraram aumento da taxa de produção e qualidade dos embriões produzidos in vitro em co-cultivo com CTAs em relação ao co-cultivo com células da granulosa. Os resultados deste trabalho indicam também que a presença constante de CTAs em co-cultivo é superior ao condicionamento com CTAs. Os efeitos verificados das CTAs podem ocorrer através de fatores solúveis ou via exossomos secretados pelas CTAs. Estudos futuros são necessários para esclarecer a possível via causadora dos efeitos positivos verificados neste trabalho pelas CTAs em co-cultivo. / The in vitro embryo production (IVP) is a biotechnology used to increase the reproductive potential of genetically superior animals, embryos produced in vitro are inferior in quality when compared in vivo. Techniques trying improve the rates of in vitro produced embryos. One technique is the co-culture system using somatic cells that remove toxic metabolites and protect against oxidative stress. Mesenchymal stem cells derived from adipose tissue (CTA) are multipotent cells that secrete growth factors and cytokines. The stem cells were used in in vitro co-culture of bovine embryos at different concentrations in order to improve the protocol PIVE. CTAs underwent differentiation into three mesenchymal lineages, and was performed immunophenotyping of specific membrane markers of MSCs. The cleavage rate was assessed on the second day after fertilization and blastocyst rate on the seventh day when they were stored for counting the total number of cells and gene expression. The results were analyzed by ANOVA, T-test and post-test of Fisher, adopting a significance level of 5%. Treatment of co-cultivation with CTAs significantly influenced the formation of the blastocyst, the total number of cells in embryos and correlated gene expression pluripotency and carbohydrate metabolism. These results showed increased production rate and quality of embryos produced in vitro co-culture with CTAs compared to co-culture with granulosa cells. These results also indicate that the constant presence of CTAs in co-culture is superior to conditioning with CTAs. Checked the effects of CTAs can occur through soluble factors or via exosomes secreted by CTAs. Future studies are needed to clarify the possible cause for positive effects observed in this work by the CTAs in co-cultivation.

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-11Bitstream added on 2014-08-13T18:00:42Z : No. of bitstreams: 1 000755550_20151031.pdf: 220836 bytes, checksum: 87b354d7a24b15fa538662e0ef64bad7 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-11-03T14:39:17Z: 000755550_20151031.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-11-03T14:40:19Z : No. of bitstreams: 1 000755550.pdf: 553044 bytes, checksum: 424382ed9bb35c0860f257d171e5ed77 (MD5) / O trabalho teve por objetivo avaliar clínica e laboratorialmente a viabilidade e a segurança do transplante intratecal de células-tronco mesenquimais autólogas e alogênicas provenientes da medula óssea (CTM-MO) de cães. Foram utilizados 15 cães, sem raça definida, adultos, de ambos os sexos, clinicamente saudáveis, excetuando dois que apresentavam trauma medular crônico. Foram divididos em três grupos, contendo cinco animais cada. As CTM-MO foram obtidas pela punção da medula óssea, isoladas e cultivadas. O grupo A foi transplantado com CTM-MO autólogas por via intratecal através da cisterna magna, enquanto que o grupo B recebeu as CTM-MO alogênicas e o grupo C (controle) foi aplicado solução tampão fosfato-salina (PBS). O líquido cefalorraquidiano (LCR) foi obtido imediatamente antes do transplante das CTM-MO (momento 1) e no quinto dia após (momento 2), para avaliação físico-química, citológica e da concentração de metaloproteinases (MMP-2 e MMP-9). Todos os animais foram acompanhados por exame físico neurológico pré e pós-transplante. Pelas avaliações clínicas e laboratoriais, não se observaram alterações significativas após o transplante das CTM-MO autólogas e alogênicas por via intratecal, demonstrando ser uma via segura e viável para a utilização de terapia celular em cães / The study aimed to evaluate clinical and laboratory viability and safety of intrathecal transplantation of bone marrow mesenchymal stem cells (BM-MSC) autologous and allogeneic of dogs. A total of 15 dogs, mixed breed, adults of both sexes, clinically healthy, except two who had chronic spinal trauma. They were divided into three groups with five animals each. BM-MSC were obtained by puncture of the bone marrow, isolated and cultured. Group A was transplanted with autologous BM-MSC intrathecally via the cisterna magna, while group B received allogenic BM-MSC and group C (control) was administered phosphate buffered saline (PBS). Cerebrospinal fluid (CSF) was obtained immediately before transplantation of BM-MSC (moment 1) and the fifth day after (moment 2) for physico-chemical, cytological and the concentration of matrix metalloproteinases (MMP-2 and MMP-9 .) All Animals were monitored by neurological examination before and after transplantation. By clinical and laboratory evaluations, no significant changes were observed after transplantation of BM-MSC autologous and allogeneic intrathecal, proving to be a safe and viable for the use of cell therapy in dogs