Submitted by Suelen Reis (suziy.ellen@gmail.com) on 2013-04-23T18:34:23Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao-luciano-sec.pdf: 1411311 bytes, checksum: 683e953cb766c31b8aeb9633635ca645 (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Meirelles(rodrigomei@ufba.br) on 2013-05-08T11:40:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao-luciano-sec.pdf: 1411311 bytes, checksum: 683e953cb766c31b8aeb9633635ca645 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-08T11:40:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao-luciano-sec.pdf: 1411311 bytes, checksum: 683e953cb766c31b8aeb9633635ca645 (MD5) Previous issue date: 2005 / Os Granulomas Dentários e Cistos Radiculares representam lesões periapicais crônicas que, frequentemente, acometem os ossos maxilares. As Células de Langerhans são células dendríticas, responsáveis pela apresentação de antígenos aos Linfócitos T, que desempenham importante função nos tecidos epiteliais, bem como na patogênese das lesões periapicais. O presente estudo analisou a expressão das Células de Langerhans, através da técnica imuno-histoquímica para o marcador CD1a em 18 casos de Granuloma Dentário (GD) e 26 casos de Cisto Radicular (CR). Essas células dendríticas foram observadas em 11,1% dos Granulomas Dentários e em 69,2% dos Cistos Radiculares, mostrando correlação estatisticamente significante (p-valor=0,000. Teste de Fisher). Nos Cistos Radiculares, as CLs exibiram tanto a forma arredondada quanto a dendrítica, em todas as camadas epiteliais. Já nos Granulomas Dentários, as CLs foram vistas apenas no tecido de granulação com densidade discreta de marcação. Apesar de termos encontrado uma correlação entre densidade de marcação e espessura de epitélio, bem como entre imunomarcação e intensidade inflamatória, não foi observada representatividade estatística entre essas correlações. Dos resultados obtidos conclui-se que as Células de Langerhans parecem influenciar na imunopatogênese das lesões periapicais aqui estudadas, principalmente nos Cistos Radiculares. / Salvador

Com o propósito de colaborar na elucidação da fisiopatologia do pênfigo foliáceo endêmico (PFE), realizou-se titulação de anticorpos séricos e quantificação das células de Langerhans (CL) e células dendríticas dérmicas (CD) na pele de pacientes com PFE. Sangue e biopsia de pele de lesão ativa foram colhidos de 22 pacientes com PFE e, em 13 deles realizou-se também biopsia de pele normal não adjacente à lesão, em área não exposta ao sol. Dos 22 pacientes, 13 apresentavam a forma clínica localizada e 9, generalizada; 11 estavam em tratamento. O grupo controle constituiu-se de pele normal obtida da região torácica anterior de 8 cadáveres e de 12 mulheres submetidas à cirurgia plástica (mastoplastia). A imunofluorescência indireta (IFI) foi realizada com pele humana normal da região abdominal como substrato e anti-IgG humana. A identificação das CL e CD foi feita pela técnica imunohistoquímica da avidina-biotina-peroxidase com o anticorpo anti-CD1a e quantificação por análise morfométrica. Houve correlação entre a titulação de anticorpos séricos por IFI e a forma clínica do PFE, sendo esse maior na forma generalizada. O número de CL na lesão (60,18 CL/ mm2; 5,00 CL/ mm de membrana basal (MB); 3,55 CL/mm de camada córnea) e na pele normal do PFE (28,45 CL/ mm2; 2,50 CL/ mm de MB; 2,87 CL/mm de camada córnea) foi semelhante ao número de CL na pele dos grupos controles de cirurgia plástica (72,35 CL/ mm2; 4,53 CL/ mm de MB; 4,42 CL/mm de camada córnea) e de cadáveres (47,15 CL/ mm2; 2,53 CL/ mm de MB; 2,42 CL/mm de camada córnea). O número de CD dérmicas na pele lesada de PFE (0,98 CD/ mm de MB) foi semelhante ao do grupo controle de plástica de mama (0,48 CD/ mm de MB), porém maior do que o do grupo cadáver (0,13 CD/ mm de MB). A razão entre o número de CL e CD dérmicas foi menor na pele lesada do paciente com PFE comparada à dos grupos controles, confirmando maior número de CD na derme. Num mesmo paciente, as CL e CD da derme encontravam-se em maior número na lesão de PFE (61,50 CL/ mm2; 5,49 CL/ mm de MB; 6,64 CL/mm de camada córnea, 0,86 CD dérmicas/ mm de MB) quando comparadas à pele normal (28,45 CL/ mm2; 2,50 CL/ mm de MB; 2,87 CL/mm de camada córnea; 0,04 CD dérmicas/ mm de MB). Houve correlação direta entre o número de CD dérmicas na lesão de PFE e a titulação de anticorpos séricos por IFI (r=0,4779, p<0,05), indicativo de que as CD dérmicas poderiam estar participando da patogênese do PFE. Poder-se-ia supor que as CD estariam transitando pela derme em direção ao linfonodo regional, exercendo função estimuladora de linfócitos T na indução da resposta imune e produção de auto-anticorpos. / In order to contribute to the elucidation of pathophysiology of Endemic Pemphigus Foliaceus (EPF) titration of serum antibodies and quantification of Langerhans Cells (LC) and dermal dendritic cells (DC) in skin of patients with EPF were made. Blood and skin biopsies (lesional skin) of 22 EPF patients were collected and, in 13 of them, biopsies of normal sun-protected skin of non perilesional area were collected too. 13 patients had localized lesions and 9, generalized; 11 were in treatment. Control groups consisted of thoracic normal skin from 8 cadavers and 12 women submitted to breast plastic surgery. For indirect immunofluorescence (IFI), abdominal normal skin as substrate and anti-IgG were used. LC and dermal DC identification was done by immunohistochemistry with anti-CD1a antibody and quantification by morfometric analysis. It was found association between titration of serum antibodies by IFI and clinical form of EPF, with greater titration in the generalized one. LC number in lesion (60.18 LC/ mm2, 5.00 LC/ mm basement membrane (BM), 3.55 LC/mm stratum corneum) and normal skin of EPF patients (28.45 LC/ mm2, 2.50 LC/ mm BM, 2.87 LC/mm stratum corneum) was similar to LC number in skin of plastic surgery (72.35 LC/ mm2, 4.53 LC/ mm BM, 4.42 LC/mm stratum corneum) and cadaver controls (47.15 LC/ mm2, 2.53 LC/ mm BM, 2.42 LC/mm stratum corneum). Dermal DC number in lesional skin of EPF patients (0.98 DC/ mm BM) was similar to the DC number of plastic surgery controls (0.48 DC/ mm BM), but greater than DC number in cadaver controls (0.13 DC/ mm BM). The ratio LC number/ dermal DC number was smaller in lesional EPF skin than in controls, confirming the greatest DC number in dermis. In the same patient, LC and dermal DC were in greater amounts in EPF lesional skin (61.50 LC/ mm2, 5.49 LC/ mm BM, 6.64 LC/mm stratum corneum, 0.86 dermal DC/ mm BM) than in normal skin (28.45 LC/ mm2, 2.50 LC/ mm BM, 2.87 LC/mm stratum corneum, 0.04 dermal DC/ mm BM). It was found direct association between dermal DC number in lesional skin of EPF patients and titration of antibodies by IFI (r=0.4779, p<0.05), confirming that dermal DC could play an important role in EPF pathogenesis. It could be proposed that DC would be in transit through the dermis towards the regional lymph node, stimulating T lymphocytes to produce autoantibodies.

A doença enxerto contra hospedeiro (GVHD) é uma complicação comum nos pacientes submetidos ao transplante de células-tronco hematopoiéticas (TCTH), sendo considerada a maior causa de morbidade e mortalidade nesses pacientes. O principal objetivo do presente estudo foi relacionar a concentração de células de Langerhans em mucosa bucal de pacientes com GVHDc bucal com a expressão da quimiocina CCL20 e de seu receptor CCR6 no epitélio bucal, a fim de elucidar os mecanismos biológicos envolvidos no recrutamento das células de Langerhans na GVHDc. Foram selecionados fragmentos obtidos por biópsia de mucosa bucal de 60 pacientes onco-hematológicos e hematológicos submetidos previamente ao transplante de células tronco hematopoiéticas no Hospital Amaral Carvalho, Jaú SP, onde 30 pacientes desenvolveram GVHDc em mucosa bucal (Grupo 1) e 30 não desenvolveram GVHDc (Grupo 2). Amostras obtidas a partir de 30 biópsias de lesões não inflamatórias em mucosa bucal constituíram o Grupo Controle (Grupo 3). Cortes microscópicos foram avaliados em coloração de rotina Hematoxilina e Eosina, e submetidos à técnica imuno-histoquímica, utilizando-se anticorpos monoclonais anti-CD1a e anti-CCR6, e anticorpos policlonais anti-CCL20. As células de Langerhans CD1a+ foram quantificadas no epitélio da mucosa bucal, e os resultados demonstraram um maior número destas células nos pacientes com GVHDc quando comparados àqueles sem GVHDc e ao Grupo Controle (p<0,001). A análise da imunomarcação das moléculas CCR6 e CCL20 foi subjetiva com aplicação de escores. Quanto à molécula CCR6, houve maior expressão no Grupo 1 (p<0,001) em comparação aos outros Grupos; porém, quanto à expressão de CCL20, não houve diferença estatística entre os três Grupos (p=0,108). Estes resultados sugerem que o aumento das células de Langerhans, na doença enxerto contra hospedeiro crônica, em mucosa bucal, pode estar associado a maior expressão do receptor CCR6. Possivelmente, o maior recrutamento de células de Langerhans até a mucosa bucal, em pacientes transplantados de medula óssea, colabora para o desenvolvimento da GVHDc bucal. / The graft versus host disease (GVHD) is a common complication in patients undergoing hematopoietic stem cell transplantation (HSCT), and considered a major cause of morbidity and mortality in these patients. The main objective of this study was to compare the concentration of Langerhans cells in oral mucosa of patients with oral chronic GVHD (GVHDc) with the expression of the chemokine CCL20 and its receptor CCR6 in oral epithelium, in order to clarify the biological mechanisms involved in the recruitment of Langerhans cells in GVHDc. We selected 60 biopsies of oral mucosa from onco-hematological and hematological patients submitted to prior hematopoietic stem cell transplantation at Hospital Amaral Carvalho, Jaú - SP from which 30 patients developed GVHDc in the oral mucosa (Group 1) and 30 did not develop GVHDc (Group 2). The Control Group (Group 3) was obtained from 30 biopsies of non-inflammatory lesions of oral mucosa. Microscopic sections were evaluated in routine Hematoxylin and Eosin staining, and submitted to immunohistochemistry using anti-CD1a and anti-CCR6 monoclonal antibodies, and anti-CCL20 polyclonal antibody. The Langerhans cells (CD1a+) were quantified in the epithelium of the oral mucosa, and the results showed a greater number of these cells in patients with GVHDc compared to those without GVHDc and the Control Group (p<0.001). Analysis of immunostaining of molecules CCL20 and CCR6 were subjective with application of scores. The expression of CCR6 molecule was more significant in Group 1 (p<0.001) compared to other groups, but in relation to CCL20 expression, there was no statistical difference between the three groups (p=0.108). These results suggest that the increase of Langerhans cells in GVHDc affecting oral mucosa may be associated with increased expression of the receptor CCR6. We suggest that the increased recruitment of Langerhans cells to the oral mucosa in patients with transplanted bone marrow contributes to the development of oral GVHDc.

A radiação ultravioleta (UV) do sol é a principal responsável pelo desenvolvimento do câncer de pele não-melanoma. A radiação UV induz efeitos biológicos, que promovem a fotocarcinogênese, agindo diretamente sobre o DNA, provocando mutações. Porém, tudo indica que há um efeito indireto, que induz imunossupressão. O fenômeno fisiológico da imunotolerância, que é responsável pela prevenção de doenças autoimunes e pela modulação da resposta inflamatória, pode ser aproveitado por determinadas neoplasias para escaparem do controle imunológico e reforçado pela radiação UV. Os personagens principais da imunotolerância no ambiente tumoral são células dendríticas imaturas e linfócitos T reguladores (Treg), além de inúmeras citocinas imunossupressoras. Com o objetivo de avaliar a imunotolerância na fotocarcinogênese em lábio, foram analisadas, por meio da técnica de imuno-histoquímica, 75 amostras de material fixado e emblocado em parafina, sendo 44 casos de queilite actínica (QA) nos três graus de displasia epitelial (discreta, moderada e intensa), 18 casos de carcinoma epidermoide de lábio (CEL) e 12 espécimes representativos de lábio normal (LN). Tais amostras foram submetidas aos anticorpos anti-CD83, anti-DEC-205, anti-FOXP3, anti-CD1a e anti-CD207. Foi efetuada a contagem de células em 3 campos significativos, escolhidos aleatoriamente, e obtida a média de células contadas/campo. Assim, os resultados mostraram uma grande quantia de linfócitos Treg FOXP3+ tanto no CEL como na QA. Também houve uma expressão acentuada de DEC-205 nos casos estudados. Quanto à presença de células de Langerhans CD207+ e CD1a+, notou-se um acúmulo no epitélio das lesões de QA e nas ilhotas do CEL, além de algumas células estarem presentes no tecido conjuntivo. Já para o marcador CD83, a contagem de células positivas foi baixa em relação aos demais marcadores tanto no CEL como na QA. Portanto, sugere-se um microambiente imunotolerante tanto no início, quanto no estabelecimento do processo da fotocarcinogênese em lábio. / Ultraviolet radiation (UV) is the main cause of non-melanoma skin cancer and induces biological effects that promote photocarcinogenesis by causing mutations directly on DNA. However, there seems to be an indirect effect, which induces immunosuppession. The physiological phenomenon of immune tolerance, which is responsible for the prevention of autoimmune diseases and the modulation of inflammatory response, may be used by certain tumors to escape immune control. This phenomenon is enhanced by UV radiation. Immature dendritic cells, regulatory T cells (Treg), and also several immunosuppressive cytokines play a central role in immune tolerance associated to the tumor environment. In order to assess the immune tolerance in lip photocarcinogenesis, we analyzed 75 samples represented by 44 cases of actinic cheilitis (AC), 18 cases of lip squamous cell carcinoma (LSCC) and 12 specimens of normal lip. Sections were submitted by means of immunohistochemistry, to the antibodies against CD83, DEC-205, FOXP3, CD1a and CD207. Positive cells for each marker were counted in three high-power fields in each section and the results expressed by the mean number of cells per field. The results showed a large amount of Treg FOXP3+ in both AC and LSCC. There was also a strong staining for DEC-205 in the cases studied. There were an increased number of CD1a+/CD207+ Langerhans cells in the AC epithelium and LSCC islets, as well as a few cells in the connective tissue. For the marker CD83, the count of positive cells was low compared to other markers for both lesions. Therefore, we suggest an immune tolerant microenvironment both at the beginning, and in the establishment of the lip photocarcinogenesis process.

A radiação ultravioleta (UV) do sol é a principal responsável pelo desenvolvimento do câncer de pele não-melanoma. A radiação UV induz efeitos biológicos, que promovem a fotocarcinogênese, agindo diretamente sobre o DNA, provocando mutações. Porém, tudo indica que há um efeito indireto, que induz imunossupressão. O fenômeno fisiológico da imunotolerância, que é responsável pela prevenção de doenças autoimunes e pela modulação da resposta inflamatória, pode ser aproveitado por determinadas neoplasias para escaparem do controle imunológico e reforçado pela radiação UV. Os personagens principais da imunotolerância no ambiente tumoral são células dendríticas imaturas e linfócitos T reguladores (Treg), além de inúmeras citocinas imunossupressoras. Com o objetivo de avaliar a imunotolerância na fotocarcinogênese em lábio, foram analisadas, por meio da técnica de imuno-histoquímica, 75 amostras de material fixado e emblocado em parafina, sendo 44 casos de queilite actínica (QA) nos três graus de displasia epitelial (discreta, moderada e intensa), 18 casos de carcinoma epidermoide de lábio (CEL) e 12 espécimes representativos de lábio normal (LN). Tais amostras foram submetidas aos anticorpos anti-CD83, anti-DEC-205, anti-FOXP3, anti-CD1a e anti-CD207. Foi efetuada a contagem de células em 3 campos significativos, escolhidos aleatoriamente, e obtida a média de células contadas/campo. Assim, os resultados mostraram uma grande quantia de linfócitos Treg FOXP3+ tanto no CEL como na QA. Também houve uma expressão acentuada de DEC-205 nos casos estudados. Quanto à presença de células de Langerhans CD207+ e CD1a+, notou-se um acúmulo no epitélio das lesões de QA e nas ilhotas do CEL, além de algumas células estarem presentes no tecido conjuntivo. Já para o marcador CD83, a contagem de células positivas foi baixa em relação aos demais marcadores tanto no CEL como na QA. Portanto, sugere-se um microambiente imunotolerante tanto no início, quanto no estabelecimento do processo da fotocarcinogênese em lábio. / Ultraviolet radiation (UV) is the main cause of non-melanoma skin cancer and induces biological effects that promote photocarcinogenesis by causing mutations directly on DNA. However, there seems to be an indirect effect, which induces immunosuppession. The physiological phenomenon of immune tolerance, which is responsible for the prevention of autoimmune diseases and the modulation of inflammatory response, may be used by certain tumors to escape immune control. This phenomenon is enhanced by UV radiation. Immature dendritic cells, regulatory T cells (Treg), and also several immunosuppressive cytokines play a central role in immune tolerance associated to the tumor environment. In order to assess the immune tolerance in lip photocarcinogenesis, we analyzed 75 samples represented by 44 cases of actinic cheilitis (AC), 18 cases of lip squamous cell carcinoma (LSCC) and 12 specimens of normal lip. Sections were submitted by means of immunohistochemistry, to the antibodies against CD83, DEC-205, FOXP3, CD1a and CD207. Positive cells for each marker were counted in three high-power fields in each section and the results expressed by the mean number of cells per field. The results showed a large amount of Treg FOXP3+ in both AC and LSCC. There was also a strong staining for DEC-205 in the cases studied. There were an increased number of CD1a+/CD207+ Langerhans cells in the AC epithelium and LSCC islets, as well as a few cells in the connective tissue. For the marker CD83, the count of positive cells was low compared to other markers for both lesions. Therefore, we suggest an immune tolerant microenvironment both at the beginning, and in the establishment of the lip photocarcinogenesis process.

A doença enxerto contra hospedeiro (GVHD) é uma complicação comum nos pacientes submetidos ao transplante de células-tronco hematopoiéticas (TCTH), sendo considerada a maior causa de morbidade e mortalidade nesses pacientes. O principal objetivo do presente estudo foi relacionar a concentração de células de Langerhans em mucosa bucal de pacientes com GVHDc bucal com a expressão da quimiocina CCL20 e de seu receptor CCR6 no epitélio bucal, a fim de elucidar os mecanismos biológicos envolvidos no recrutamento das células de Langerhans na GVHDc. Foram selecionados fragmentos obtidos por biópsia de mucosa bucal de 60 pacientes onco-hematológicos e hematológicos submetidos previamente ao transplante de células tronco hematopoiéticas no Hospital Amaral Carvalho, Jaú SP, onde 30 pacientes desenvolveram GVHDc em mucosa bucal (Grupo 1) e 30 não desenvolveram GVHDc (Grupo 2). Amostras obtidas a partir de 30 biópsias de lesões não inflamatórias em mucosa bucal constituíram o Grupo Controle (Grupo 3). Cortes microscópicos foram avaliados em coloração de rotina Hematoxilina e Eosina, e submetidos à técnica imuno-histoquímica, utilizando-se anticorpos monoclonais anti-CD1a e anti-CCR6, e anticorpos policlonais anti-CCL20. As células de Langerhans CD1a+ foram quantificadas no epitélio da mucosa bucal, e os resultados demonstraram um maior número destas células nos pacientes com GVHDc quando comparados àqueles sem GVHDc e ao Grupo Controle (p<0,001). A análise da imunomarcação das moléculas CCR6 e CCL20 foi subjetiva com aplicação de escores. Quanto à molécula CCR6, houve maior expressão no Grupo 1 (p<0,001) em comparação aos outros Grupos; porém, quanto à expressão de CCL20, não houve diferença estatística entre os três Grupos (p=0,108). Estes resultados sugerem que o aumento das células de Langerhans, na doença enxerto contra hospedeiro crônica, em mucosa bucal, pode estar associado a maior expressão do receptor CCR6. Possivelmente, o maior recrutamento de células de Langerhans até a mucosa bucal, em pacientes transplantados de medula óssea, colabora para o desenvolvimento da GVHDc bucal. / The graft versus host disease (GVHD) is a common complication in patients undergoing hematopoietic stem cell transplantation (HSCT), and considered a major cause of morbidity and mortality in these patients. The main objective of this study was to compare the concentration of Langerhans cells in oral mucosa of patients with oral chronic GVHD (GVHDc) with the expression of the chemokine CCL20 and its receptor CCR6 in oral epithelium, in order to clarify the biological mechanisms involved in the recruitment of Langerhans cells in GVHDc. We selected 60 biopsies of oral mucosa from onco-hematological and hematological patients submitted to prior hematopoietic stem cell transplantation at Hospital Amaral Carvalho, Jaú - SP from which 30 patients developed GVHDc in the oral mucosa (Group 1) and 30 did not develop GVHDc (Group 2). The Control Group (Group 3) was obtained from 30 biopsies of non-inflammatory lesions of oral mucosa. Microscopic sections were evaluated in routine Hematoxylin and Eosin staining, and submitted to immunohistochemistry using anti-CD1a and anti-CCR6 monoclonal antibodies, and anti-CCL20 polyclonal antibody. The Langerhans cells (CD1a+) were quantified in the epithelium of the oral mucosa, and the results showed a greater number of these cells in patients with GVHDc compared to those without GVHDc and the Control Group (p<0.001). Analysis of immunostaining of molecules CCL20 and CCR6 were subjective with application of scores. The expression of CCR6 molecule was more significant in Group 1 (p<0.001) compared to other groups, but in relation to CCL20 expression, there was no statistical difference between the three groups (p=0.108). These results suggest that the increase of Langerhans cells in GVHDc affecting oral mucosa may be associated with increased expression of the receptor CCR6. We suggest that the increased recruitment of Langerhans cells to the oral mucosa in patients with transplanted bone marrow contributes to the development of oral GVHDc.

Introdução: Rosácea é uma doença inflamatória cutânea crônica relativamente comum, com incidência que varia de 2 a 10%. Caracteriza-se pelo surgimento de pápulas e pápulo-pustulas, eritema e telangiectasias precedidas por episódios de flushing. Apesar de não ser doença que comprometa o estado geral dos doentes, por ter acometimento preferencial da face, representa problema estético acentuado que interfere na socialização e qualidade de vida dos doentes. A etiologia da rosácea permanece incerta. A participação da imunidade inata tem sido implicada recentemente. Objetivo: Este estudo avaliou o envolvimento da imunidade inata na patogenia da rosácea através de pesquisa de células de Langerhans, células plasmocitóides (PDC), receptores \"toll-like\" (TLR) e expressão da forma induzida da enzima óxido nítrico sintase (iNOS) em biopsias de pele de pacientes com diagnóstico de rosácea. Métodos: Biopsias de 28 pacientes com diagnóstico clínico e histopatológico de Rosácea foram classificadas de acordo com características histopatológicas em Rosácea Granulomatosa (RG) (n = 10) e Rosácea Não Granulomatosa (RNG) (n = 18), e submetidas à técnica imunoistoquímica para demonstração de células de Langerhans (anticorpo anti-CD1a) (n = 26), PCD (anticorpo anti- CD123) (n = 24) e expressão dos receptores toll-like 2 e 4, bem como da forma induzida da óxido nítrico sintase (iNOS) (n = 28). Todos foram comparados com controles de pele normal (n = 15). Resultados: A população de células de Langerhans epidérmicas foi menor no grupo rosácea. Foram encontradas PDC dérmicas isoladas ou agrupadas no grupo rosácea, representando um novo dado no estudo da sua etiopatogenia. A expressão de TLR 2, TLR 4 e iNOS foi maior no grupo rosácea do que no grupo controle, estando distribuída com forte predominância na epiderme e anexos. Não houve diferença dos achados entre os grupos RG e RNG. Conclusão: Demonstrou-se, pela primeira vez, a presença de PDC nas lesões de rosácea. Juntamente com os outros marcadores estudados, os resultados apresentados confirmam a participação da imunidade inata na patogênese da rosácea através de mecanismos interdependentes e associados / Introduction: Rosacea is a common, chronic inflammatory condition with a reported prevalence between 2 and 10%. The disease has a variety of clinical manifestations that include flushing, persistent erythema, papules, pustules and telangiectasia. Because the facial skin is the predominant site of involvement, many patients sense that rosacea alters their social interactions affecting quality of life. The etiology of rosacea remains unknown. Recent studies have suggested that aberrant innate immunity is central to this disease. Objective: The aim of the present study was to examine the presence of Langerhans cells, plasmacytoid dentritic cells (PDC), and the expression of toll-like receptors (TLR) and inducible oxide nitric synthase (iNOS) in skin of patients with rosacea, in order to highlight the participation of innate immunity in the pathogenesis of this disease. Methods: 28 biopsy specimens were taken from patients with clinical and histopathological findings of rosacea. The samples were classified as Granulomatous rosacea (GR) (n= 10) or Non-Granulomatous rosacea (NGR) (n =18) according to histopathological features. Immunohistochemical demonstration of Langerhans cells (anti-CD1a antibody) (n = 24), PDC (anti-CD 123 antibody) (n = 26), TLR 2, TLR 4 and iNOS (n = 28) was performed in skin samples. The results were compared to normal skin control group (n = 15). Results: The number of Langerhans cells was lower in rosacea group than in control group. PDC were found in skin samples of rosacea as isolated cells and forming small clusters which represents a new contribution to the researches of its etiology. Expression of TLR2, TLR4 and iNOS was higher in rosacea samples than in normal skin controls, predominatly located in epidermal and adnexal structures. The comparison between GR and NGR groups did not show significant statistical difference. Conclusion: This research demonstrates, for the first time, the presence of PDC in lesions of rosacea, which together with the other results of this study, ratifies the existence of an altered innate immunity in pathogenesis of rosacea

Atualmente existem diversas opções terapêuticas para o tratamento do fotoenvelhecimento cutâneo.Uma das formas de tratamento muito utilizada é a fototerapia com laser. Com o desenvolvimento da tecnologia em lasers surgiu um novo conceito de tratamento da pele envelhecida, a fototermólise fracionada microablativa. Essa tecnologia fracionada visa combinar os efeitos visíveis de uma terapia ablativa com o conforto e segurança dos métodos não ablativos. Antes de atingir a pele o laser passa por uma lente óptica especial que o divide em microrraios. Tal procedimento produz colunas de lesões térmicas microscópicas que penetram na epiderme e derme, sem danificar o tecido circunvizinho. A grande vantagem de ser fracionado é que a pele íntegra ao redor de cada coluna funciona como um reservatório de células potentes para a rápida cicatrização e regeneração da pele, culminando com a produção de colágeno e resultando em uma pele mais jovial, sem o inconveniente de um longo período de recuperação pós-tratamento. 20 pacientes foram selecionadas para o tratamento das rítides periorais com uma sessão de laser Erbium-YAG de 2940nm, fracionado. Após 28 dias do procedimento observou-se melhora na textura da pele, clareamento de manchas e atenuação de rugas finas periorais. Foi realizado um estudo comparativo da quantificação das células de Langerhans e receptores toll-like ( TLRs ) 2, 3 e 9 na epiderme, antes e após 3, 7, 14 e 28 dias do tratamento e da quantificação das fibras de colágeno na derme superior, antes e após 28 dias do laser. Houve diferenças estatisticamente significativas entre as medianas dos valores de CD1a (p = 0,0085), TLR 2 (p = 0,0108), TLR 3 (p = 0,0011) e TLR 9 (p = 0,0012) na epiderme pré e pós-tratamento. Foi constatado que a significância se deu entre os valores: antes e após 14 dias para CD1a (diminuição), antes e após 7 dias para TLR 2 (diminuição), antes e após 14 dias para TLR 3 (aumento), antes e após 7 dias para TLR 9 (diminuição). Não se encontraram diferenças estatisticamente significativas entre os valores medianos das fibras colágenas do tipo I (p = 1,0000) e III (p = 0,3125) antes e após 28 dias do tratamento. O protocolo desse estudo mostrou-se bastante seguro, pois apresentou efeitos colaterais transitórios e nenhuma complicação permanente. / There are several treatment options for skin photoaging. One of them widely used nowadays is lasertherapy. The development of lasers technology introduced a new therapeutic concept for aging skin: ablative fractional photothermolysis. This technology combines the visible effects of an ablative therapy with the comfort and safety of nonablative methods. Before reaching the skin the laser passes through a special optical lens that splits it into tiny rays. This procedure produces columns of microscopic thermal injuries that penetrate the epidermis and dermis, without damaging the surrounding tissue. The great advantage of the fractional photothermolysis is that the intact skin around each column acts as a potent reservoir of cells for fast healing and skin regeneration, resulting in collagen production and a youthful skin without the inconvenience of a long period of recovery after treatment. 20 patients were selected for perioral wrinkles treatment with a session of fractional Erbium-YAG 2940nm. After 28 days of the procedure the perioral skin showed improvement in texture, bleaching of sunspots and attenuation of superficial wrinkles. A comparative study was conducted between the expression of Langerhans cells and toll-like receptors 2, 3 and 9 in the epidermis, before and after 3,7,14 and 28 days of treatment and among collagen fibers in the dermis, before and after 28 days of the laser. There were statistically significant differences between the median values of CD1a (p = 0.0085), TLR 2 (p = 0.0108), TLR 3 (p = 0.0011) and TLR 9 (p = 0.0012) in the epidermis pre and post-treatment. The significance occurred between the values: before and after 14 days for CD1a (decrease) before and after 7 days to TLR 2 (decrease) before and after 14 days for TLR 3 (increase) before and after 7 days for TLR 9 (decrease). There were not statistically significant differences between the median values of collagen type I (p = 1.0000) and III (p = 0.3125) before and after 28 days of treatment. The irradiation of skin with fractional Erbium-YAG was safe, as it showed transitory side effects and no permanent complication.

A paracoccidioidomicose (PCM) é uma doença sistêmica causada pelos fungos Paracoccidioides brasiliensis e Paracoccidioideslutzii. O comprometimento da pele e mucosa oral são frequentes na PCM. As células dendríticas e queratinócitos do tegumento, devido à sua função como células apresentadoras de antígenos, atuam na resposta imune inata e adaptativa contra agentes patogênicos. Com o objetivo de verificar a interação do P. brasiliensis com essas células, estudamos 47 biopsias de mucosa oral e 52 de pele de lesões de doentes com diagnóstico comprovado de PCM. As biopsias foram submetidas à técnica de imuno-histoquímica de dupla-marcação com os anticorpos anti-fator XIIIa (marcador de dendrócitos dérmicos), anti-CD207 (marcador de células de Langerhans maduras), anti-pancitoqueratinas (AE1-AE3) e anti-P. brasiliensis. Fez-se também a reação de dupla marcação por técnica de imunofluorescência, com análise por microscopia confocal a laser, para a melhor visualização da interação entre queratinócitos e os fungos. Quarenta e dois por cento das amostras de mucosa oral exibiram formas fúngicas no citoplasma de dendrócitos dérmicos. As células de Langerhans, tanto nas biopsias de mucosa oral como de pele, não mostraram leveduras ou antígenos do fungo no seu citoplasma. Cinquenta e quatro por cento das biopsias de pele e sessenta por cento das amostras de mucosa exibiram leveduras no citoplasma de queratinócitos. Os resultados obtidos permitem concluir que o parasitismo de queratinócitos pode representar possível mecanismo de evasão do fungo aos mecanismos imunes locais. Os dendrócitos dérmicos fator XIIIa positivos e queratinócitos podem estar a atuar como células apresentadoras de antígenos para suprir a função, provavelmente prejudicada, das células de Langerhans nas lesões de pele e mucosa oral da PCM humana / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic disease caused by the fungus Paracoccidioides brasiliensis, which compromises various organs, mainly the lungs. The skin and oral mucosa are often affected. Dendritic cells and keratinocytes of the integument play a role in innate and adaptive immune response against pathogens, due to their function as antigen presenting cells. Aiming to verify the interaction of P. brasiliensis with these cell populations, we studied 52 biopsies of skin and 47 oral mucosa samples taken from patients with proven diagnosis of PCM. The biopsies were subjected to double immune staining technique with anti-factor XIIIa (marker of dermal dendrocytes), anti- CD207 (marker of mature Langerhans cells), anti-pan cytokeratins (AE1-AE3) and anti P. brasiliensis antibodies. Analyses with confocal laser microscopy were also performed to better visualization of the interaction between keratinocytes and the fungi. Factor XIIIa + dermal dendrocytes of 42% samples of oral mucosa displayed yeast forms in their cytoplasm. We did not observe yeast cells in the cytoplasm of Langerhans cells in both skin and oral mucosa samples. Fifty -four percent of skin and 60% of mucosal samples displayed yeast cells in the cytoplasm of keratinocytes. The parasitism of keratinocytes may represent a possible mechanism of evasion of the fungus to local immune mechanisms, or even as a result of keratinocytes ability to antigen presentation in PCM. Factor XIIIa dendrocytes and keratinocytes may be acting as antigenpresenting cells to fulfill the function of Langerhans cells, probably impaired, in skin and mucosa of human PCM

L. (L.) amazonensis (La) e L. (V.) braziliensis (Lb) podem causar um espectro de manifestações clínicas e imunopatológicas no homem, sendo La responsável pela forma anérgica difusa e Lb pela forma mucocutânea da doença, formas polares e de elevada gravidade. Neste sentido, o objetivo do presente estudo foi avaliar os aspectos da resposta imune celular no ponto de inoculação e no linfonodo de drenagem de camundongos BALB/c inoculados no coxim plantar com 106 promastigotas de La e Lb. A evolução da lesão foi avaliada semanalmente sendo que na 4ª e 8ª semana PI biópsias do ponto de inoculação foram coletadas para determinação da densidade de células dendríticas (CD207+ e CD11c+), linfócitos T CD4+ e CD8+ e células iNOS+ por imunoistoquímica, e o linfonodo de drenagem para caracterização de subpopulações de células dendríticas e de linfócitos T CD4 e CD8 por citometria de fluxo. Células de linfonodo de drenagem foram cultivadas, com estímulo homólogo, para quantificação de citocinas (IL-4, IL- 10 e IFN-g) e nitrito nos sobrenadantes. A infecção por La levou à progressão da doença, com aumento do tamanho da lesão e da carga parasitária tanto na pele quanto no linfonodo de drenagem, enquanto que a infecção por Lb mostrou um discreto aumento da lesão entre a 6ª e 7ª semana PI com posterior regressão e redução da carga parasitária na pele e no linfonodo de drenagem. Aumento do número de células dendríticas dérmicas e de Langerhans foi observado na pele de camundongos inoculados com La na 4ª semana PI, juntamente com o aumento no número de células de Langerhans nos linfonodos de drenagem. Resposta imune celular preferencial de células T CD4+ foi observada tanto na pele quanto no linfonodo de camundongos inoculados com La, que mostrou ser predominantemente do tipo Th2 com a produção aumentada de IL-10 e IL-4. Já a infecção por Lb levou ao aumento na expressão de células dendríticas dérmicas e Langerhans na pele dos animais inoculados com Lb somente na 8ª semana PI, assim como aumento do número de células dendríticas dérmicas no linfonodo. A resposta imune celular foi caracterizada por células T CD4+ e CD8+ em pele e linfonodo dos animais infectados com Lb, vinculada a um perfil Th1 com a produção preferencial de IFN-g e altos níveis de NO. Aumento no número de células T regulatórias foi observado na infecção por Lb, que mostrou correlação direta com o número de linfócitos T CD4+ produtores de IL-10. Assim, a infecção por La foi relacionada à suscetibilidade, enquanto que a infecção por Lb foi relacionada à resistência do hospedeiro vertebrado. Estes resultados evidenciam não só o papel do parasita na modulação da resposta imune do hospedeiro como também das células dendríticas à infecção por Leishmania / L. (L.) amazonensis (La) and L. (V.) braziliensis (Lb) are responsible for a spectrum of clinical and immunopathological manifestations in humans, La is able to cause anergic diffuse leishmaniasis and Lb mucocutaneous leishmaniasis, polar forms with high severity. In this way, the aim of the present study was to evaluate aspects of the cellular immune response in the site of infection and in the draining lymph node of BALB/c mice inoculated in the hind footpad with 106 promastigotes of La and Lb. The evolution of the lesion size was evaluated weekly and in the 4th and 8th week PI biopsies from the site of infection were collected to determine the density of dendritic cells (CD207+ and CD11c+), CD4+ and CD8+ T cells and iNOS+ cells by immunohistochemistry, and the draining lymph node to characterize subsets of dendritic cells and CD4+ and CD8+ T cells by flow citometry. The draining lymph nodes cells were cultured with specific antigen to determine the cytokines (IL-4, IL-10 e IFN-g), and the nitric oxide in the supernatants. The infection caused by La led to the progression of disease with increase on lesion size and parasite load in the skin and draining lymph node, while Lb infection showed a discrete increase on the lesion size between 6th and 7th week PI with late regression and reduction in the skin as well as lymph node parasite load. An increase on the number of dermal dendritic and Langerhans cells were observed in the skin of BALB/c mice infected with La at 4th week PI together with an increase of Langerhans cells in the draining lymph node. The preferential CD4+ T cell immune response was observed in skin and lymph node of mice infected with La, which showed to be rather Th2 with an increase on the levels of IL-4 and IL-10. However, Lb infection led an increase of dermal dendritic cells and Langerhans cells in the skin only at 8th week PI, as well as an increase in the dermal dendritic cells in lymph node. The cellular immune response were characterized by CD4+ and CD8+ T cells in the skin and draining lymph node of mice infected with Lb, which was related to a Th1 immune response with production of high levels of IFN-g and nitric oxide. An increase of Regulatory T cells was observed in Lb infection, which showed the positive correlation with the IL-10 producing CD4+ T cells. So, the La infection was related to the susceptibility, while Lb infection was related to the resistance in the vertebrate host. These results emphasize the role of the parasite in the modulation of the host immune response to Leishmania infection