166 f. / Submitted by Simone Silva (simogui@ufba.br) on 2013-03-21T16:44:35Z No. of bitstreams: 1 DEIVID CARVALHO LORENZO - Dissertação.pdf: 763786 bytes, checksum: c30e03d834455a45d72e11320a285d35 (MD5) / Approved for entry into archive by Simone Silva(simogui@ufba.br) on 2013-03-21T16:44:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DEIVID CARVALHO LORENZO - Dissertação.pdf: 763786 bytes, checksum: c30e03d834455a45d72e11320a285d35 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-21T16:44:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DEIVID CARVALHO LORENZO - Dissertação.pdf: 763786 bytes, checksum: c30e03d834455a45d72e11320a285d35 (MD5) Previous issue date: 2007 / Esta dissertação tem por objetivo confrontar a manipulação biotecnológica das células-tronco embrionárias com a concepção contemporânea de sujeito de direito. O trabalho se divide, basicamente, em duas partes. A primeira se dedica a explicar em que consiste a manipulação das células-tronco, quais os resultados que com ela, espera-se, sejam alcançados, e o porquê de ser valorizada a utilização de células-tronco embrionárias, em detrimento das adultas. A segunda se destina a estabelecer um estatuto ético-jurídico do embrião humano, o qual deve resvalar para o reconhecimento de sua respectiva personalidade, instituto capaz de rechaçar qualquer experimentação que lhe seja lesiva. O presente trabalho objetiva, de maneira geral, evidenciar que o regramento legal acerca das pesquisas com células-tronco embrionárias não pode prescindir da condição ético-jurídica do embrião humano, que deve ser compreendido como pessoa, no domínio da Ética e do Direito. Para legitimar o novo delineamento do instituto da personalidade jurídica, que deve superar o tradicional requisito da nascimento com vida, invoca-se a mudança de perspectiva do direito civil contemporâneo, o qual, inspirado nos valores constitucionais, tem primado pelo respeito integral e incondicional ao ser humano, desatrelado, portanto, do tradicional requisito do nascimento. Assim arrimada, esta obra critica o advento da Lei Federal nº 11.105/2005, que logrou regulamentar as pesquisas com células-tronco embrionárias, sem, contudo, atinar para a reformulação, que ora se defende, do instituto da personalidade jurídica. No desenvolvimento da dissertação, recorreu-se, essencialmente, à pesquisa da literatura nacional e estrangeira concernente ao tema, não apenas na área do Direito, mas também em Filosofia e Ciências Biológicas. Lançou-se mão, ainda, de elementos empíricos, tais como o estudo da ADI nº 3510, a tramitar no Supremo Tribunal Federal, e da audiência pública realizada no processo respectivo. Eis, pois, o escopo precípuo do presente trabalho. Tomando como situação emblemática o atual debate sobre a pesquisa com células-tronco embrionárias, pugnar pelo reconhecimento da personalidade ético-jurídica do embrião, a fim de ser inteiramente reprovada não só a experimentação referida, assim como toda e qualquer investida biotecnológica que instrumentalize a vida embrionária, ainda que em homenagem a um interesse coletivo, pretensamente superior. / Salvador

VALIENTE, A. E. F. Avaliação da imunoexpressão de LGR5 e LGR6 em células-tronco no câncer gástrico primário, metástases linfonodais e mucosa gástrica histologicamente normal. 2017. 78 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-03-16T11:41:10Z No. of bitstreams: 1 2017_dis_aefvaliente.pdf: 2737006 bytes, checksum: 9b5ed6cfe94d31f61e9103232c252378 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-03-16T11:41:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_dis_aefvaliente.pdf: 2737006 bytes, checksum: 9b5ed6cfe94d31f61e9103232c252378 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-16T11:41:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_dis_aefvaliente.pdf: 2737006 bytes, checksum: 9b5ed6cfe94d31f61e9103232c252378 (MD5) Previous issue date: 2017-02-16 / Gastric cancer is the fourth most common neoplasm in the world and the second leading cause of cancer mortality. Despite the treatment with surgery and chemotherapy, the overall five-year survival of patients with gastric cancer remains low, a possible explanation for less effective therapy is the presence of cancer stem cells. Several markers, including LGR5 and LGR6, have been reported as markers of normal and cancerous stem cells. LGR5 and LGR6 are transmembrane proteins of the G protein group, rich in leucine residues, that participate in cell signaling pathways and activate transcription factors related to tumor formation. The objective of this work was to evaluate the immunoexpression of LGR5 and LGR6 as possible markers of stem cells in primary gastric cancer, lymph node metastases and histologically normal gastric mucosa through tissue microarray and immunohistochemistry techniques. The cross-sectional and observational study was carried out from eighty-eight (88) pieces of gastrectomies due to gastric carcinomas performed at the Walter Cantídio University Hospital, which are part of the Archives of the Service of Pathology and Legal Medicine of the Federal University Of Ceará. The relationships between LGR5 and LGR6 differential expression and clinical-pathological characteristics were assessed by the chi-square test or Fisher's exact test. A value of p <0.05 was considered statistically significant. Positive (from previous reports) were considered cases that presented one or more cells with cytoplasmic or membrane immunostaining. LGR5 was shown to be a potential biomarker, more characteristic of tumor and non-tumor stem cells, than LGR6 in this study. Both are expressed in tumoral and non-tumoral tissue, predominantly in histologically normal mucosa, in a basal third of epithelial thickness. Positive LGR5 predominated in the diffuse histotype and LGR6 in the intestinal type of gastric carcinomas. In the positive cases of the two biomarkers, marked cells are infrequent or rare, in the total cells of the tumor mass and the normal gastric mucosa. / O câncer gástrico é a quarta neoplasia mais comum em todo o mundo e a segunda causa de mortalidade por câncer. Apesar do tratamento com cirurgia e quimioterapia, a sobrevida global em cinco anos de pacientes com câncer gástrico permanece baixa, uma possível explicação para menor eficácia da terapia é a presença de células tronco cancerosas. Vários marcadores, incluindo LGR5 e LGR6, têm sido relatados como marcadores de células- tronco, normais e cancerosas. LGR5 e LGR6 são proteínas transmembranas, do grupo da proteína G, ricas em resíduos leucina, que participam nas vias de sinalização das células e ativam fatores de transcrição relacionados com a formação de tumores. O objetivo deste trabalho foi avaliar a imunoexpressão de LGR5 e LGR6 como possíveis marcadores de células-tronco no câncer gástrico primário, metástases linfonodais e mucosa gástrica histologicamente normal, através das técnicas de microarranjo tissular (tissue microarray) e imuno-histoquímica. O estudo, de caráter transversal e observacional realizou-se a partir de oitenta e oito (88) peças de gastrectomias devido a carcinomas gástricos, realizadas no Hospital Universitário Walter Cantídio, que fazem parte dos Arquivos do Serviço de Patologia e Medicina Legal da Universidade Federal do Ceará. As relações entre a expressão diferencial de LGR5 e LGR6 e características clinico-patológicas foram avaliadas pelo teste do qui-quadrado ou teste exato de Fisher. Um valor de p < 0,05 foi considerado estatisticamente significativo. Foramconsiderados positivos (a partir de relatos prévios) casos que apresentaram uma ou mais células com imunomarcação citoplasmática ou membranar. LGR5 mostrou-se, neste estudo, ser um potencial biomarcador, mais característico de células-tronco tumorais e não tumorais, do que LGR6. Ambos são expressos em tecido tumoral e não tumoral, com predomínio em mucosa histologicamente normal, em terço basal da espessura epitelial. LGR5 positivo predominou no histotipo difuso e LGR6 no tipo intestinal de carcinomas gástricos. Nos casos positivos dos dois biomarcadores, células marcadas são pouco frequentes ou raras, no total de células da massa tumoral e da mucosa gástrica normal. LGR6 esteve presente no tumor gástrico primário em número de células muito superior ao encontrado nas respectivas metástases linfonodais, diferença não observada em relação a LGR5. Com exceção da relação de cada biomarcador com um histotipo específico, já citada, não houve relação entre as demais variáveis clinico-patológicas e a expressão de LGR5 e LGR6.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:34:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 332307.pdf: 4190550 bytes, checksum: 47afc464a32ec01695950d5da6b3dda6 (MD5) Previous issue date: 2014 / A placenta é um órgão essencial no desenvolvimento embrionário e fetal. Este órgão contém vários tipos de células, entre as quais diferentes populações de células-tronco ou progenitoras, tais como as células-tronco mesenquimais (CTM), células-tronco hematopoéticas (CTHs) e trofoblásticas. O objetivo deste trabalho foi estudar a organização do nicho molecular de células-tronco no tecido da placenta humana a termo. Para isto, foram utilizadas técnicas histológicas, histoquímicas, imuno-histoquímicas e de microscopia eletrônica de transmissão (MET). As técnicas de coloração histológica empregadas nas amostras do tecido tiveram como objetivo identificar, principalmente, as características estruturais das vilosidades coriônicas (VC) e da decídua basal (DB). A técnica de coloração de Hematoxilina e eosina proporcionou uma visão geral do tecido placentário, de modo a permitir a identificação dos elementos teciduais da placenta. A técnica de coloração azul brilhante de Coomassie foi utilizada para identificar a presença de proteínas totais neste tecido. Outro teste utilizado foi Azul de toluidina (ATO) para identificar a presença de polissacarídeos ácidos, através da reação de metacromasia. As amostras, contendo o tecido placentário, reagiram mais fortemente com o ATO nas regiões do sinciciotrofoblasto, nos núcleos das células que compõem o estroma e na parede dos vasos sanguíneos das vilosidades coriônicas. Na região da decídua basal, a reação também foi positiva ao ATO nas células deciduais, porém, na matriz extracelular esta reação foi menos intensa, quando comparada com as regiões do sinciciotrofoblasto e da parede dos vasos sanguíneos das vilosidades coriônicas. Testes realizados com o ácido periódico de Schiff mostraram que a reação foi positiva em praticamente todas as regiões das vilosidades, mas houve uma positividade maior na região do sinciciotrofoblasto. Com relação à decídua basal (DB), a presença de polissacarídeos neutros também foi confirmada em praticamente todas as regiões da decídua. A técnica de Mallory revelou que fibras de colágeno estão presentes em grande parte nas regiões tanto das vilosidades coriônicas, bem como, na decídua basal. Esta técnica é capaz de revelar a presença dos diferentes tipos colágenos que estão presentes tanto nas vilosidades coriônicas quanto na decídua basal, porém, sem a identificação de quais são os tipos presentes neste tecido. A técnica de imuno-histoquímica empregada no tecido da placenta teve como objetivo avaliar a expressão dos marcadores CD73, CD105 e CD34, bem como, o perfil de expressão do colágeno do tipo I, fibronectina e laminina na matriz extracelular (MEC). O perfil expresso10pelos marcadores CD73+, CD105+ e CD34+ na superfície da membrana das células, e pelas moléculas de MEC como o colágeno do tipo I, a fibronectina e a laminina, se mostrou positivo. Estes resultados nos mostram que as CTMs tem uma disposição na região das vilosidades coriônicas, em associação com moléculas de laminina e de colágeno. A fibronectina se expressa nas vilosidades coriônicas sempre com associação à lâmina basal e perivascularmente. No sinciciotrofoblasto as CTM se associam próximas às células CD34+ com característica de CTH. As análises ultraestruturais demonstraram plena atividade metabólica e de células que organizam a placenta, tanto bioquimicamente quanto metabolicamente, sugerindo que a placenta, mesmo a termo, é ainda capaz de produções celulares, tanto de CTs quanto na homeostase do tecido.<br> / Abstract : Placenta is an essential organ in the development of the embryo and/or fetus. It is a readily available material, easy to obtain, and there is no association between its use and risks for the mother or fetus health. The organ contains several types of cells, including different populations of stem cells or progenitor cells, such as mesenchymal stem cells (CTM), hematopoietic stem cells (CTHs) and trophoblast. The aim of this work was to study the molecular niche organization of stem cells in the tissue of human placenta at term. Therefore, it was possible to use histological, histochemical and immunohistochemical techniques, and also, transmission electron microscopy (TEM). Histological staining techniques employed on tissue samples aimed to identify, mainly, the structural characteristics of chorionic villi (VC) and decidua basalis (DB). Hematoxylin and eosin stain provided placental tissue overview in order to enable the identification of placenta tissue elements. Coomassie brilliant blue staining technique was used to determine the presence of total protein in the tissue. Results showed the placental tissue structures as a whole. Another test performed was toluidine blue (ATO) to identify the presence of acidic polysaccharides by metachromasia reaction. Samples with placental tissue reacted more strongly to the ATO in regions of syncytiotrophoblast, cells nuclei comprising the stroma and blood vessels wall of the chorionic villi. In the basal decidua region, there was also a positive reaction to ATO. However, it was less intense when compared to the regions of syncytiotrophoblast of chorionic villi of tissue. Tests performed with periodic acid of Schiff showed that the reaction was positive in virtually all regions of the villi, but there was a greater positivity in the syncytiotrophoblast region. With respect to basal decidua (DB), the presence of neutral polysaccharides was also confirmed in practically all regions of decidua. Mallory technique revealed that collagen fibers are present largely in the areas of both chorionic villi and basal decidua. That technique can reveal the presence of different collagen types that are present in both chorionic villi and basal decidua; however, without identifying which types are present in the tissue. The immunohistochemical technique employed in placental tissue aimed to evaluate the markers expression: CD73, CD105 and CD34, as well as the expression profile of collagen type I, fibronectin and laminin in the extracellular matrix (MEC). Profile expressed by markers CD73+, CD105+ and CD34+ on cells membrane surface and MEC molecules such as collagen type I, fibronectin and laminin showed in a positive12way. These results show that CTMs have a disposition in the region of chorionic villi in association with molecules of laminin and collagen. Fibronectin is expressed in chorionic villi always associated with basal lamina and perivascularly. In the Syncytiotrophoblast, CTM associate close to CD34+ cells with CTH characteristics. Ultrastructural analysis presented full metabolic activity and cells that organize the placenta both biochemically and metabolically, suggesting that the placenta even at term is still capable of cells production not only of CTs, but also for tissue homeostasis.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-07-16T19:43:50Z No. of bitstreams: 1 Daniele Pinheiro de Freitas Células-tronco mesenquimais derivadas da polpa de dente....pdf: 2028523 bytes, checksum: cd8d31def021492a032a820714bfde3d (MD5) / Made available in DSpace on 2012-07-16T19:43:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Daniele Pinheiro de Freitas Células-tronco mesenquimais derivadas da polpa de dente....pdf: 2028523 bytes, checksum: cd8d31def021492a032a820714bfde3d (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / Terapia celular é o conjunto de métodos e abordagens tecnológicas com a utilização de células no tratamento de doenças. A terapia com células-tronco tem despertado grande interesse na comunidade científica devido à capacidade que essas células indiferenciadas têm de preservar sua própria população e de se diferenciar em células dos diversos tecidos. Encontrar a fonte de célula-tronco apropriada para uso terapêutico depende de diversos fatores, como a sua capacidade de proliferação e estabilidade citogenética, assim como suas características fenotípicas e seu potencial de diferenciação. A epilepsia é uma desordem neurológica que acomete de 1 a 3% da população mundial. É caracterizada pela presença de crises espontâneas recorrentes (CER) e possui seu tratamento clínico baseado no emprego de drogas anti-epilépticas (DAES). O uso de células tronco apresenta-se como uma alternativa ao tratamento desta patologia. Este trabalho tem como objetivos caracterizar as células-tronco mesenquimais de polpa de dente decíduo humano e avaliar seu papel terapêutico no modelo de epilepsia do lobo temporal induzido por lítio-pilocarpina em ratos Wistar. As células da polpa de dente humano utilizadas nesse estudo foram submetidas à avaliação fenotípica, do seu potencial de diferenciação, e da estabilidade cromossômica. Para verificar os efeitos terapêuticos das células-tronco de polpa de dente em modelo experimental de epilepsia os animais foram divididos nos seguintes grupos: SE-salina (n=10), que no transplante recebeu solução salina; SE-CDLH1 (n=13) que recebeu células-tronco de polpa de dente humano (107 células/animal), SE-CMO (n=8) que recebeu células mononucleares de medula óssea (107 células/animal) e o grupo controle (n=10) que não foi submetido ao status epilepticus (SE). As células foram transplantadas por via intraperitoneal. Foram realizadas análises, em diferentes espaços de tempo para avaliar migração celular por imunofluorescência e as crises espontâneas recorrentes. Para avaliar alterações de memória foi estudado o desempenho dos animais no labirinto aquático de Morris (LAM). As CDLH1 apresentaram estabilidade cromossômica (até a 8ª passagem); características imunofenotípicas de células mesenquimais, com alta expressão de CD105, CD73, CD 44, CD90, CD166, CD54, OCT-4, e STRO-1; capacidade de diferenciação nas linhagens adipogênicas, osteogênicas e condrogênicas. As CDLH1 migraram para o cérebro e baço dos ratos. Dos resultados terapêuticos observou-se a redução das crises espontâneas recorrentes nos animais tratados após 30 dias do SE e transplante, mas as células não foram capazes de bloquear essas crises (observado 60 dias pós-SE). Obtendo-se os mesmos resultados com o transplante de CMO. Já no estudo da memória não houve diferença estatística na latência de escape nos animais dos grupos epilépticos (tratado e não-tratado). Os animais do grupo controle (não epiléptico), apresentaram retenção de memória em relação aos animais dos grupos SE-salina e SE-CDLH1. Novos estudos devem ser realizados para que se possa estabelecer a utilização ideal das células-tronco mesenquimais derivadas da polpa de dente humano em relação às necessidades terapêuticas da epilepsia. / Cell therapy is the set of methods and technological approaches to the use of cells in treating diseases. The stem cell therapy has aroused great interest in the scientific community due to the capacity of these undifferentiated cells in preserving its own population and to differentiate into cells of various tissues. Finding the source of stem cells suitable for therapeutic use depends on various factors such as their ability to proliferate and cytogenetic stability, as well as their phenotypic characteristics and their potential of differentiation. Epilepsy is a neurological disorder that affects 1-3% of world population. It is characterized by recurrent spontaneous seizures (RSS) and has its medical treatment based on use of antiepileptic drugs (AEDs). The use of stem cells is an alternative treatment for this pathology. This work aims to characterize the mesenchymal stem cells from human deciduous dental pulp and evaluate its therapeutic role in the model of temporal lobe epilepsy induced by lithium-pilocarpine in rats. The cells of the human dental pulp used in this study were subjected to phenotypic analysis of their potential of differentiation and chromosomal stability. To verify the therapeutic effects of stem cells from dental pulp in experimental epilepsy, the animals were divided into the following groups: SE-Saline (n = 10) transplanted with saline; SE-CDLH1 (n = 13) who received stem cells from human dental pulp (107 cells / animal), SE-CMO (n = 8) who received bone marrow mononuclear cells (107 cells / animal) and the control group (n = 10) who did not undergo status epilepticus (SE). The cells were transplanted by intraperitoneal route. Analyses were performed in different time to assess cell migration by immunofluorescence and recurrent spontaneous seizures. To evaluate changes in memory we studied the performance of the animals in the Morris water maze, after cell transplantation. Stem cells analyzed showed chromosomal stability (up to 8th passage); immunophenotypic characteristics of mesenchymal cells with high expression of CD105, CD73, CD 44, CD90, CD166, CD54, OCT-4, and STRO-1; ability to differentiate into adipogenic, osteogenic and chondrogenic lineages. The CDLH1 migrated throughout the brain and spleen of mice. The therapeutic results observed the reduction of recurrent spontaneous seizures in treated animals after 30 days of transplantation and SE, but cells were not able to block these seizures (observed 60 days post-SE). The same results were obtained with the transplantation of BMC. In the study of memory there was no statistical difference in escape latency of the epileptic groups (treated and untreated). Animals of control group (non epileptic) showed memory retention in comparison to groups saline-SE and SE-CDLH1. Further studies should be conducted so that we can determine the optimal use of mesenchymal stem cells derived from human dental pulp in relation to the therapeutic needs of the epilepsy.

Made available in DSpace on 2016-04-12T12:39:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 ailin_oliveira_ioc_dout_2015.pdf: 4901825 bytes, checksum: 4248ae90175b5218e570617bea7ee462 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A involução do timo associada ao envelhecimento é acompanhada por redução do desenvolvimento e exportação de células T para a periferia do sistema imune, o que afeta a competência imunológica. A relação causal entre hormônios sexuais e atrofia tímica senil já está bem estabelecida. Embora a depleção de hormônios sexuais tenha sido demonstrada em regenerar o timo, restabelecendo o compartimento linfóide e promovendo a recuperação de células T, pouco é conhecido sobre os fatores desencadeadores desse processo e as alterações promovidas no microambiente tímico. O presente estudo demonstra que embora a castração afete globalmente as diferentes subpopulações de células epiteliais tímicas (TEC) e linfóides, o processo regenerativo do timo em camundongos envelhecidos é iniciado especificamente a partir da diferenciação de TEC corticais expressando baixos níveis de MHCII (cTEC lo). Observamos que a depleção de hormônios sexuais em camundongos envelhecidos (9 - 11 meses) resulta em redução de células cTEC lo seguida do aumento de cTEC hi e TEC medulares, tanto com baixa quanto alta expressão de MHCII (mTEC lo e mTEC hi, respectivamente) Ainda, observamos a recuperação do compartimento epitelial ocorre simultaneamente ao aumento da expressão dos fatores de diferenciação e ativação de TEC, FoxN1, Wnt4 e DLL4, além de aumento dos receptores de activina acvr1a, acvr2a e acvr2b em cTEC lo no dia 4 pós castração, ao mesmo tempo em que a biodisponibilidade de activina no está aumentada no timo desses animais. A adição de activina em sistema de cultura celular primária 3D gerou aumento da diferenciação de mTEC a partir de cTEC lo obtidas do timo senil, enquanto ensaios in vitro e in vivo demonstraram que, por outro lado, a inibição da sinalização de activina no timo jovem gera um perfil de TEC semelhante ao de animais envelhecidos. Através do transplante de cultura de timo fetal (FTOC) na capsula renal de camundongos atímicos demonstramos que a produção de activina pelo microambiente tímico é necessária pra o desenvolvimento de células T CD4-CD8-, CD4+ e CD8+. Por ultimo, através do tratamento de animais envelhecidos castrados com folistatina, antagonista fisiológico de activina, demonstramos que o aumento da sinalização de activina pós castração é essencial para recuperação das diferentes subpopulações de TEC e de timócitos CD4-CD8- e CD4+, além de restabelecer a expressão de DLL4 no compartimento cortical de TEC Juntos, esses dados apontam activina vii como um hormônio essencial para o restabelecimento da atrofia tímica senil tanto diretamente por induzir o restabelecimento do compartimento epitelial, como indiretamente por restabelecer a sinalização de DLL4-Notch, necessária para o desenvolvimento das diferentes populações de timócitos a partir de progenitores hematopoiéticos / The involution associated with aging is accompanied by reduction in thymus development and export of T cells towards the periphery of the immune system, which affects the immune competence. The causal relationship between sex hormones and senile thymic atrophy is already well established. Althou gh the depletion of sex hormones have been shown to regenerate the thymus restoring lymphoid compartment and promoting the recovery of T cells, little is known about the factors that trigger this process and the changes induced in th e thymic microenvironment. The present study demonstrates that although castration generally affects the different subpopulations of thymic epithelial cell s (TEC) and lymphoid cells the regenerative process of the thymus in age d mice is initiated specifically from cortical TEC expressing low levels of differentiation MHCII (cTEC lo) . We note that the depletion of sex hormones in aged mice (9 - 11 months) results in reduction in cTEC lo cells followed by the increase of cTEC hi and medullary TEC, both with low and high expression of MHCII (mTEC lo and mTEC hi, respectively) . Also, we observe the recovery of the epithelial compartment occurs simultaneously with the increase in the expression of TEC differentiation and activation factors, Foxn1, Wnt4 and Dll4, and increased activin receptors acvr1a, acvr2a and acvr2b in cTEC lo at day 4 post castration, at the same time the activin bioavailability is increased in the thymus of the animals. The addition of activin in primary 3D cell culture system generated increased differentiation mTEC from cTEC lo obtained from senile thymus, while in vitro and in vivo assays showed that, on the other hand , inhibition of activin signaling in the young thymus generates a TEC profile similar to that of aged animals. Through fetal thymus transplantation cultur e (FTOC) in renal capsule of athymic mice we demonstrate that the production of activin in thymic microenvironment is required for the development of CD4 - CD8 - T cells, CD4 + and CD8 + . Finally, by treatment of aged castrated animals with follistatin, physiological antagonist of activin, we demonstrate that the increase in activin signaling post castration is essential for the recovery of different subpopulations of TEC and thymocytes CD4 - CD8 - and CD4 + , and reestablish the expression of DLL 4 in cTEC. Together, these data indicate activin as a hormone essential for the restoration of the senile thymic atrophy either dir ectly inducing the restoration of TEC and indirectly by restoring DII4-Notch signaling necessary for the growth of different populations of thymocytes from hematopoietic progenitors

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Odontologia, Florianópolis, 2017. / Made available in DSpace on 2017-10-24T03:19:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 348352.pdf: 2146491 bytes, checksum: fca0836c2324c6f4cb7411023e219694 (MD5) Previous issue date: 2017 / Células da polpa dental humana (hDPCs) têm sido identificadas como uma população de células-tronco com multipotencial de diferenciação. Este trabalho teve como objetivo analisar o potencial das hDPCs em regenerar defeitos ósseos mandibulares de ratos e avaliar a marcação de progenitores de células da crista neural, HNK1 e Sox10, neste processo. Para examinar a eficácia destas células na regeneração óssea, foram isoladas células da polpa de dentes permanentes e enxertadas em defeitos ósseos mandibulares de ratos. Anteriormente às cirurgias, as hDPCs foram analisadas. As mesmas apresentaram: aderência ao plástico; expressão de CD105, CD90 e CD73 em mais de 95% da população e expressão de CD45 em menos de 2% da população; capacidade de diferenciação em osteoblastos, adipócitos e condrócitos, sendo caracterizadas como células-tronco da polpa dental humana (hDPSCs). Para o protocolo cirúrgico, utilizou-se 9 ratos Wistar, machos, de aproximadamente 250 gramas que foram submetidos à confecção de um defeito ósseo no lado direito e esquerdo da mandíbula, medindo 1mm de altura/ profundidade e 3mm de comprimento, sob a coroa do primeiro molar inferior. No lado direito, grupo tratado, aplicou-se hDPCs, enquanto que no lado esquerdo, grupo controle, nenhum material foi aplicado. As hDPCs remanescentes do protocolo cirúrgico tiveram sua viabilidade analisada através do teste de MTS e ensaio de diferenciação osteogênica. Verificou-se que as células remanescentes estavam viáveis, sem haver diferença estatística significativa quando comparada ao grupo controle, e as mesmas mantiveram a capacidade de diferenciação osteogênica. Três animais de cada grupo foram eutanasiados no tempo de 7, 14 e 28 dias de pós-operatório. As amostras foram avaliadas por microscopia de luz (coloração de hematoxilina e eosina), a área de regeneração foi mensurada pelo programa Image J e a expressão dos marcadores, HNK1 e Sox10, foi avaliada através de imuno-histoquímica. Considerou-se valor de p<0,05 para dados com significância estatística. Os resultados indicaram que em 7 dias de pós-operatório o grupo controle apresentou pronunciada formação óssea quando comparado ao grupo tratado (p = 0,03). Aos 14 dias, o grupo tratado mostrou aumento na formação óssea, mas não houve diferença estatística significativa entre os grupos (p = 0,62). No período final de avaliação não houve diferença entre o grupo controle e o tratado (p = 0,89). Foi observada marcação moderada para HNK1 e Sox10 em osteoblastos e osteócitos em 7 dias, e intensa em 14 e 28 dias, sem diferença entre controle e tratado. Dentro dos padrões do presente estudo, pode-se concluir que, embora houve um rápido aumento na formação óssea entre 7 e 14 dias de pós-operatório com o uso das hDPCs, não há evidências de que o uso destas células beneficiou a formação óssea quando comparado ao grupo controle nos períodos analisados. HNK1 e o Sox10 estão presentes em osteoblastos e osteócitos em processo de regeneração.<br> / Abstract : Human dental pulp cells (hDPCs) have been identified as a stem cell population with multipotential differentiation capabilities. The aim of this study was to analyze the potential of hDPCs in regenerating mandibular bone defects of rats and to evaluate the immunoexpression of progenitors of neural crest cells, HNK1 and Sox10, in this process. To examine the efficacy of these stem cells in bone regeneration, we isolated human dental pulp cells from permanent teeth and engrafted in mandibular bone defects of rats. Prior to surgery procedures, the hDPCs were analyzed: plastic-adherent; > 95% expression of CD105, CD90 and CD73; < 2% expression of CD45; and differentiation into osteoblasts, adipocytes and chondroblasts; and therefore characterized as human dental pulp stem cells (hDPSCs). Surgery procedures were performed in 9 male Wistar rats. The bone defect was prepared under the mandibular first molar, in the right and left mandible with 1mm of height/depth and 3mm length. On the right side, treated group, the hDPCs were applied, while on the left side, control group, no treatment was performed. The remaining hDPCs of the surgical protocol had their viability analyzed through the MTS test and osteogenic differentiation assay. The remaining cells were viable, without significant statistical difference when compared to the control group, and they maintained the capacity for osteogenic differentiation. Three animals of each group were euthanized at 7, 14 and 28 days post-surgery. Samples were evaluated by light microscopy (hematoxylin and eosin staining), the regeneration area was measured by Image J software and the presence of the markers HKN1 and Sox10 was evaluated by immunochemistry. A value of p <0.05 was considered for data with statistical significance. Results indicated that within 7 days, control group presented a pronounced bone formation when compared with the treated group (p = 0,03). In 14 days, the treated group showed an increase in bone formation, but with no statistical difference among groups (p = 0,62). At the final period evaluated there was no difference between both groups (p = 0,89). Moderate staining for HNK1 and Sox10 was observed in osteoblasts and new osteocytes at 7 days, and intense at 14 and 28 days, with no difference between control and treated groups. In conclusion, although there was a rapid increase in bone formation between 7 and 14 days with the use of hDPCs, with regard the methods used in this study, there is no evidence that the use of these cells improve bone formation in comparison to the control group during the periods analyzed. HNK1 and Sox10 are present in osteoblasts and osteocytes during the regeneration process.

O genoma humano tem um tamano aproximado de 3,2 Gb e aproximadamente 74% das suas sequências são transcritas em RNAs. Destes transcritos, cerca de 33 mil não são traduzidos em proteínas, desempenhando seu papel funcional na célula na forma de RNAs. Dentre os trancritos que não codificam proteínas estão os lncRNAs, os pseudogenes e os circRNAs. Inicialmente considerados como ruídos transcricionais, esses RNAs têm chamado cada vez mais a atenção da comunidade científica e têm sido atribuídos a um série de funções celulares. Apesar do crescente número de trabalhos enfocando estes RNAs, pouco se sabe sobre essas moléculas em células-tronco embrionárias (CTEs) humanas, tanto no que se refere ao conjunto de moléculas expressas quanto sobre a função por elas desempenhada. Nesse sentido, este trabalho teve como objetivo identificar os lncRNAs, pseudogenes e circRNAs expressos em células-tronco embrionárias humanas a partir de dados de RNA-seq depositados no banco de dados GEO e inferir, através de ferramentas de bioinformática, as possíveis funções desempenhadas por estas moléculas no estado tronco. As análises revelaram, ao todo 1182 ncRNAs pertencentes as três classes em estudo (lncRNA, n=317; pseudogene, n=585; e circRNA, n=280) no conjunto de dados principal. Quando este foi comparado a outros conjuntos de dados, 87 lncRNAs, 51 pseudogenes e 10 circRNAs foram detectados como transcritos comuns. Dentre os lncRNAs e os pseudogenes, 15 foram selecionados para inferência de função pela abordagem de guilty by association. Foi possível associar RNA selecionados a processos como splicing, organização de cromatina, mitose, ciclo celular, biogênese de ribossomos, reparo de DNA e resposta ao dano, apoptose, organização do citoesqueleto, desenvolvimento embrionário e regulação da diferenciação celular. Além disso, alguns dos RNAs em estudo mostraram-se fortes candidatos a atuarem como competidores endógenos de mRNAs expressos em CTEs. Análises de correlação, de força de ligação ao miRNA e do tipo de seed do sítio de ligação apontaram os pares de mRNAs e ncRNAs AHCY-RP11-253E3.3, F2RL1-EEF1A1P6, HSPD1-SNHG5, INO80-RP11-20D14.6, PARP1-RP11-20D14.6 e PRIM2-GAS5, juntamente com o RNA circular circ-HIPK3, como os RNAs com maior potencial para competirem pelos miRNAs expressos em CTEs. Estes resultados voltam a atenção da pesquisa básica para uma parte pouco conhecida da biologia das CTEs e direcionam futuros experimentos visando a elucidação da função de ncRNAs nesse contexto celular. Ensaios de modulação da expressão dos ncRNAs e a observação concomitante da respostas dos RNAs e proteínas a eles relacionados são o próximo passo para desvendar os mecanismos moleculares através dos quais estes RNAs desempenham seus papeis em CTEs. / The human genome has an average size of 3.2 Gb and approximately 74% of its sequences are transcribed into RNAs. From this transcripts, around 33 thousand are not translated into proteins, performing their cellular roles as RNAs molecules. Among the non-protein coding transcripts are the lncRNAs, the pseudogenes and the circRNAs. Inicially thought to be transcription noise, these molecules have been drawing attention of the scientific comunity and several cellular functions have been attributed to them. Although the rising number of studies focusing on these RNAs, little is known about them in human embryonic stem cells (ESCs), includind the set of expressed non-coding RNAs (ncRNA) and their functions. In this sense, this study aimed to identify lncRNAs, pseudogenes and circRNAs expressed in human ESCs from RNA-seq data deposited in GEO public database and infer, through bioinformatic tools, the possible functions played by these molecules in the stem state. The analyzis revealed 1182 ncRNAs belonging to the three classes (lncRNA, n=317; pseudogene, n=585; and circRNA, n=280) studied in the main dataset. When compared to other datasets, 87 lncRNAs, 51 pseudogenes and 10 circRNAs were detected as common to all datasets. Among the lncRNAs and the pseudogenes, 15 were selected for function inference through the guilty by association method. It was possible to associate the selected RNAs to cellular processes as RNA splicing, chromatin organization, mitosis, cell cycle, ribosome biogenesis, DNA repair and DNA damage response, apoptosis, cytoskeletton organization, embryonic development and regulation of cell differentiation. Moreover, some of the RNAs showed to be strong candidates to act as endogenous competitors of the ESCs-expressed mRNAs. Pearson correlation analysis and investigation of the miRNA seed type and binding strenght indicate the following ncRNA-mRNA pairs AHCY-RP11-253E3.3, F2RL1-EEF1A1P6, HSPD1-SNHG5, INO80-RP11-20D14.6, PARP1-RP11-20D14.6 e PRIM2-GAS5, together with the circular RNA circ-HIPK3, as the RNAs with major potential to act as competing endogenous RNAs in ESCs. These results shift the attentions to a poorly known part of ESCs biology and give directions to future experiments aiming to elucidate the ncRNAs function in this cellular context. ncRNAs expression modulation assays and the concomitant observation of the positively correlated mRNAs response to these alterations are the next step in the unraveling of the specific molecular mechanisms through which ncRNAs exert their roles in ESCs.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Odontologia, Florianópolis, 2016 / Made available in DSpace on 2016-09-20T04:55:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 340521.pdf: 922318 bytes, checksum: ae784c612f656f3a6d50e86dd94b3b18 (MD5) Previous issue date: 2016 / A eficácia do clareamento dental já é um consenso na literatura. No entanto, ainda há dúvidas quanto sua segurança. Sabe-se que os íons hidroxila e radicais livres provenientes do clareamento dental são tóxicos e capazes de difundir-se tecidos dentinários, alcançando a polpa dentária. Quando em contato com o tecido pulpar podem provocar danos pulpares irreversíveis, como a necrose da polpa. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar in vitro os efeitos citotóxicos de agentes clareadores sobre a cultura de células-tronco da polpa dental humana (DPSC). Dezesseis terceiros molares humanos foram selecionados e seccionados transversalmente 2 mm aquém da junção amelodentinária. As coroas dentais foram limpas e inseridas em recipientes plásticos contendo 1 mL de meio de cultura sem soro fetal bovino. Três agentes clareadores foram testados: peróxido de carbamida 10% de aplicação caseira (Opalescence PF, Ultradent e PowerBleaching, BM4) e peróxido de hidrogênio 38% de aplicação de consultório (Opalescence Boost, Ultradent). Os agentes clareadores foram aplicados na superfície oclusal das coroas dentais, de acordo com os grupos (n=4): PB10 (PowerBleaching), 14 aplicações consecutivas de 2 horas; OP10 (Opalescente PF), 14 aplicações consecutivas de 2 horas; OP38 (Opalescence Boost), 2 aplicações consecutivas de 45 minutos; e C controle, sem aplicação. Para avaliação da citotoxicidade foi realizado o teste de viabilidade celular (ensaio Metiltetrazolium MTT) e os dados analisados estatisticamente (ANOVA e Teste Tukey com 5% de significância). Observou-se redução da viabilidade celular para todos os grupos, diferindo estatisticamente do grupo controle (p<0,05). Os grupos PB10 (59,34%) e OP10 (61%) não apresentaram diferença estatística significativa entre si (p=0,1), porém apresentaram maior viabilidade celular comprado ao grupo OP38 (17,40%), diferindo estatisticamente (p<0,05). Por meio dos resultados obtidos concluiu-se que os agentes clareadores apresentam diferentes níveis de citotoxicidade à cultura de células DPSC. A toxicidade foi dependente do protocolo de aplicação, sendo mais severa para o agente clareador de alta concentração (PH38%). <br> / Abstract : Tooth bleaching effectiveness is already a consensus in the literature. However, doubts about its safety still remain. It is known that hydroxyl ions and free radicals from bleaching agents are toxic and able to diffuse through dentinal tissues reaching dental pulp. When in contact with the pulp tissue may cause irreversible pulp damage, as necrosis. Therefore, the aim of this study was to assess in vitro the cytotoxic effects of diffused hydrogen peroxide on human dental pulp stem cells (DPSC). Sixteen human third molars were selected and sectioned 2 mm of amelo junction. The dental crowns were cleaned and placed in plastic vials containing 1 mL of medium culture without fetal bovine serum. Three bleaching agents were tested: 10% carbamide peroxide (Opalescence PF, Ultradent and PowerBleaching, BM4) and 38% hydrogen peroxide (Opalescence Boost, Ultradent). Belaching agentes were applied on the oclusal surfasse of each crown, according to groups (n=4): PB10 (PowerBleaching), 14 consecutive applications fo 2 hours; OP10 (Opalescence PF), 14 consecutive applications fo 2 hours; OP38 (Opalescence Boost), 2 consecutive applicantions of 45 minutes; C (Control), no application. To evaluate the cytotoxicity, a cell viability assay was performed (MTT assay) and analyzed statistically (ANOVA and Tukey Test with 5% significance). There was a reduction in cell viability for all grupos, differing statisticaly from control group (p<0,05). The groups PB10 (59,34%) and OP10 (61%) showed no statistically signigicant difference between them (p=0,1), but showed higher cell viability difference compared to OP38 group (17,40%). It may be concluded that bleaching agents exhibit different levels of cytotoxicity to DPSC. Toxicity was dependent on protocol application, being more severe for bleaching agent of high concentration (PH38%).

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Odontologia, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-09-20T05:04:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 339549.pdf: 818402 bytes, checksum: 6b71cd252342310ae9b208c35b73bd6f (MD5) Previous issue date: 2016 / Objetivo: Revisar de forma sistemática a literatura de estudos pré-clínicos com animais que avaliem o potencial das células-tronco da polpa dental na regeneração periodontal. Materiais e Métodos: Foram desenvolvidas estratégias de busca individuais para cada uma das seguintes bases de dados bibliográficos: PubMed, LILACS, Scopus, Web of Science e na literatura cinzenta utilizando o ProQuest. Os critérios de inclusão abrangeram estudos em animais que utilizaram células-tronco de polpa dental para regeneração de defeitos periodontais criados. Estudos publicados em todas as línguas foram considerados. Um guia de diretrizes para Revisões Sistemáticas e Meta-análises foi utilizado (PRISMA). A avaliação da qualidade dos artigos incluídos foi realizada com a ferramenta SYRCLE que avalia o risco de viés em estudos com animais. Resultados: Foram identificados 1.007 títulos. Após triagem minuciosa 2 artigos foram incluídos. Avaliou-se a formação de osso alveolar, cemento e ligamento periodontal. O primeiro estudo relatou que células-tronco da polpa dental mostraram resultados semelhantes ao grupo que não recebeu tratamento do defeito periodontal. O segundo artigo sugeriu que estas células associadas a um biomaterial aumentaram a formação de cemento e ligamento periodontal enquanto não influenciaram a formação de osso alveolar. Conclusão: Devido aos diferentes desenhos metodológicos empregados nos estudos incluídos, não foi possível inferir que o uso de células-tronco da polpa dental seja vantajosa na regeneração periodontal. Pesquisas adicionais são necessárias para verificar o potencial destas células para a regeneração de defeitos periodontais.<br> / Abstract : Aim: To systematically review the literature for preclinical animal studies evaluating the potential of dental pulp stem cells transplantation on periodontal regeneration. Materials and Methods: Individual search strategies for each of the following bibliographic databases were developed: PubMed, LILACS, Scopus, Web of Science and gray literature using ProQuest. Inclusion criteria were animal studies that applied dental pulp stem cells into created periodontal defects for periodontal regeneration. Studies published in any language were considered. Preferred Reporting Items for Systematic Reviews and Meta-Analyses guidelines were used and quality assessment was performed based on SYRCLE s risk of bias tool for animal studies. Results: Search identified 1,007 titles. After comprehensive screening, 2 articles were included. Outcome measures included alveolar bone, cementum and periodontal ligament formation. One study reported that dental pulp stem cells showed outcomes similar to the untreated group. The other research reported that these cells associated to a biomaterial enhanced cementum and periodontal ligament formation while not influenced the formation of alveolar bone. Conclusion: Due to different methodological designs of the included studies, it is not possible to infer that the use of dental pulp stem cells may be an advantage for periodontal regeneration. Additional research is needed to verify the potential of these cells for the regeneration of periodontal defects.

Made available in DSpace on 2016-04-01T17:55:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-06-18. Added 1 bitstream(s) on 2016-04-01T18:01:07Z : No. of bitstreams: 1 000860673.pdf: 1122445 bytes, checksum: 86f140efaf5384055fe303ac33ccce6d (MD5) / Na Endodontia, estudos têm demonstrado avanços nas terapias reparativas e regenerativas que visam à recuperação da vitalidade e função do tecido pulpar. Para isso são realizadas técnicas conservadoras como o capeamento pulpar e pulpotomia. Os materiais bioativos comumente empregados durante o capeamento pulpar são o MTA e o Ca(OH)2 PA. Porém, um novo material denominado Biodentine, a base silicato de tricálcio, está sendo comercializado com o mesmo propósito. Contudo, os efeitos biológicos deste cimento ainda não são claros, principalmente em se tratando da polpa a ser regenerada. Desta forma, este trabalho avaliou os efeitos destes materiais sobre células progenitoras. A biocompatibilidade da Biodentine, MTA e Ca(OH)2 foi analisada por ensaios de citotoxicidade (XTT e SRB), após 1, 3 e 5 dias do contato das células com os materiais. Os processos funcionais de mineralização foram verificados pela quantificação da atividade da enzima fosfatase alcalina (ALP) envolvida no processo de mineralização, bem como pela observação da formação de nódulos mineralizados pelo ensaio de alizarin vermelho. Os resultados foram submetidos aos testes estatísticos (ANOVA e Tukey 5%) e demonstraram uma significativa biocompatibilidade da Biodentine nos ensaios de citotoxicidade. Contudo, o cimento de Ca(OH)2 foi o material que estimulou a maior atividade de ALP. Além disso, todos os cimentos propiciaram a formação de nódulos mineralizados a partir do sétimo dia, no teste do alizarin vermelho. Pôde-se concluir que a Biodentine pode ser uma importante alternativa como material capeador nos procedimentos regenerativos / With the use of principles of regenerative therapies in Endodontics, new tissue engineering strategies have showed success in the de novo formation of pulp tissue in animal models. The commonly used materials on the original dental pulp tissue are the MTA and calcium hydroxide. In addition, a new material known as Biodentine, based on tricalcium silicate, is new to the market, with the same purpose of the others. However, the biological effects and mechanisms of this bioactive material are not elucidated. This project evaluated the effects of these biomaterials on dental pulp stem cells. The biocompatibility of them was assessed by XTT and SRB assays, at 1, 3 and 5 days. The alkaline phosphatase activity assay and alizarin red staining of mineralized nodules was assessed by functional mineralization. The results were subjected to statistical analysis (ANOVA and Tukey 5%) and demonstrated a significant Biodentine's biocompatibility in cytotoxicity assays. However, Ca(OH)2 cement was the material that was most stimulated ALP activity. In addition, all cements enabled the formation of mineralized nodules from the seventh day, in alizarin red test