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Avaliação da técnica de Nested PCR em tubo único com dois genes alvos para detecção de Vibrio Cholerae o1 diretamente do meio de cultura / Evaluation of Nested PCR in a single tube with two target genes for detection of Vibrio cholerae o1 directly from the culture medium

Mendes, Carina Lucena January 2007 (has links)
Made available in DSpace on 2012-05-07T14:44:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 000068.pdf: 816656 bytes, checksum: c8740fc970374a5b1d5b8e0e1ab000ba (MD5) Previous issue date: 2007 / A cólera é uma doença bacteriana historicamente conhecida por seu potencial de provocar epidemias, tendo levado milhares de indivíduos à morte. É causada pelo bacilo Gramnegativo Vibrio cholerae O1 toxigênico. No Brasil, apesar de grandes avanços no que se refere a prevenção, a infecção ainda persiste e, embora não seja causa de alta mortalidade, sua presença é motivo de preocupação para a rede de Saúde Pública local. A infecção colérica é endêmica no nordeste brasileiro e está relacionada, principalmente, a condições sanitárias precárias. O diagnóstico clássico da infecção é a cultura bacteriana, complementada pela detecção da toxina colérica, o que retarda o resultado do exame. O objetivo principal deste trabalho foi avaliar a técnica de nested PCR em tubo único com dois genes alvos (MSTNPCR) na detecção de V. cholerae O1 diretamente do meio de cultura. Utilizando DNA, a técnica foi capaz de amplificar até 1 pg de V. cholerae O1, além de ter possibilitado a detecção do vibrião diretamente do meio de cultura líquido, sem prévia extração de DNA, apresentando limite de detecção de três Unidades Formadoras de Colônia. Além disso, a MSTNPCR mostrou-se específica para V. cholerae O1 quando testada com vários microrganismos diferentes. Um kit diagnóstico foi montado e estocado a -20 ºC, permanecendo estável durante os quatro meses em que foi testado. A MSTNPCR descrita neste trabalho pode ser útil no diagnóstico da infecção colérica e em investigações epidemiológicas, complementando os resultados obtidos com a cultura bacteriana
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Abnormal daily situations and negative affects in Peru / Situaciones cotidianas anómalas y afectos negativos en el Perú

León, Ramón 25 September 2017 (has links)
Four hundred seventy nine Peruvian students (188 mal e and 291 female) rated the frequency of negative social emotions in themselves, in their neighborhood, and in the Peruvian society; and the frequency of anomalous daily situations. Verbal aggressions and gossiping obtained the highest averages in the evaluations of affects in the neighborhood, but solidarity was rated as high than the negative affects. In the Peruvian society, envy and physical aggression were rated asthe highest, and the positive affects obtained the smallest averages. To be a victim of an assault,to be cheated, and to be insulted obtained the highest averages in anomalous situations. Resentment and anger were the most salient negative affects. / Se investigó a 479 universitarios peruanos (188 hombres y 291 mujeres) a través de una autoevaluación sobre la frecuencia de afectos y conductas negativas en ellos mismos, en su vecindad y en la sociedad peruana, y la de situaciones anómalas en su vida cotidiana. Agresiones verbales al otro y hablar mal de los demás obtuvieron los promedios más elevados en la valoración de los afectos y las conductas negativos en el barrio, pero la solidaridad fue asimismo vista como muy elevada. En la sociedad peruana, la envidia y la agresión verbal fueron evaluadas como las más altas y los promedios de los afectos positivos (solidaridad y confianza en los demás)f ueron los más bajos. Ser víctima de un robo, ser víctima de un engaño y ser insultado obtuvieron los promedios más altos en situaciones anómalas. El resentimiento y la cólera fueron los afectos negativos de mayor magnitud.
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As gotas que transbordam do copo: a disputa pelo poder em Um copo de cólera / The drops driving from the glass: the dispute by power In a glass of cholera

Rocha, Marijara Oliveira da January 2016 (has links)
ROCHA, Marijara Oliveira da. As gotas que transbordam do copo: a disputa pelo poder em Um copo de cólera. 2016. 129f. – Dissertação (Mestrado) – Universidade Federal do Ceará, Programa de Pós-graduação em Letras, Fortaleza (CE), 2016. / Submitted by Gustavo Daher (gdaherufc@hotmail.com) on 2017-10-19T17:05:50Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_morocha.pdf: 980437 bytes, checksum: 29c2a74a2493cda82ce52adbe97b2e30 (MD5) / Approved for entry into archive by Márcia Araújo (marcia_m_bezerra@yahoo.com.br) on 2017-10-19T17:37:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_morocha.pdf: 980437 bytes, checksum: 29c2a74a2493cda82ce52adbe97b2e30 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-19T17:37:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_morocha.pdf: 980437 bytes, checksum: 29c2a74a2493cda82ce52adbe97b2e30 (MD5) Previous issue date: 2016 / A linguagem é compreendida como necessidade de interação social do ser humano. Contudo, ela não é usada somente para veicular informações; a função referencial da linguagem não é senão uma entre outras. Entre estas, ocupa a função de comunicar ao ouvinte a posição que o falante ocupa de fato na sociedade. As pessoas não falam somente para serem ouvidas, mas também para serem respeitadas e exercer influência no ambiente comunicativo. O poder da palavra é o poder de mobilizar a autoridade acumulada pelo falante e concentrá-la em um ato linguístico. A linguagem, além de servir à necessidade de comunicação, também é utilizada pelo ser humano com o intuito de seduzir o interlocutora compartilhar as ideias, e a realizar determinadas ações, através do discurso ideológico do locutor. A literatura não deixa passarem despercebidas, em suas produções, essas relações de poder, bem como o modo como o discurso foi elaborado de acordo com os interesses do produtor do ato locutório. Verifica-se com frequência a manifestação do discurso erótico, sedutor, como tentativa de manter ou burlar o poder vigente, ou ainda como forma de tomar para si o poder, sendo comumente associada à ideia de que o homem é o opressor, elemento dominante na relação, enquanto à mulher cabe o papel de oprimido, entidade dominada que pode ora acomodar-se, ora buscar subverter a ordem. Detendo-se especificamente ao poder que se estabelece por meio da sedução, o presente trabalho dissertativo tem por objetivo analisar as relações de poder registradas a partir do discurso erótico em Um copo de cólera, de Raduan Nassar, delimitando o conceito de discurso erótico ao embate linguístico e ao jogo de sedução existente entre os personagens.
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Quando o anjo do extermínio se aproxima de nós: representações sobre o cólera no semanário cratense O Araripe (1855-1864)

Alexandre, Jucieldo Ferreira 17 March 2010 (has links)
Made available in DSpace on 2015-05-14T12:23:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2627411 bytes, checksum: 81c43cd1a2e83e9b2338e2774c464d33 (MD5) Previous issue date: 2010-03-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / This work belonging to the line of research of Regional History in the Post Graduation Program in History of the Federal University of Paraíba, within the area of Historic Culture has as objective to discuss the representations engendered by the weekly newspaper O Araripe printed in the city of Crato, region of Cariri in the south of the Province of Ceará, under the orientation of a group of market traders and liberal professionals of that city, connected to the Liberal Party to refer to a disease: the cholera. The period chosen starts in 1855, the year of the foundation of the referred newspaper and of the arrival of the cholera to the Brazilian territory, and ends in 1864, when the second and last outbreak of this disease happens in the 19th century Crato and before the last year of circulation of the newspaper. This dissertation has as inspiration the Historiography of Diseases, mainly developed in the last decades of the 20th century, due to the dialogue between History and other disciplines such as Sociology and Anthropology. The studies developed by this historiography have shown how the phenomenon of the diseases exceeds the domain of the natural, in that they are experienced from many different contexts and spaces, being socio-culturally interpreted by the historical subjects that start multiple representations and practices with the purpose to attribute meaning to these. / Este trabalho vinculado à linha de pesquisa História Regional do Programa de Pós-Graduação em História da Universidade Federal da Paraíba, com área de concentração em História e Cultura Histórica tem por objetivo discutir as representações engendradas pelo semanário O Araripe impresso na cidade do Crato, região do Cariri, no sul da província do Ceará, sob orientação de um grupo de comerciantes e profissionais liberais daquela cidade, ligados ao Partido Liberal para se referir a uma doença: o cólera-morbo. O recorte escolhido começa em 1855, ano de fundação do jornal em questão e da chegada do cólera ao território brasileiro, e termina em 1864, quando se deu o segundo e último surto dessa moléstia no Crato do século XIX, e penúltimo ano de circulação d‟O Araripe. A dissertação tem como inspiração a Historiografia das Doenças, desenvolvida, principalmente, a partir das últimas décadas do século XX, devido ao diálogo da História com outras disciplinas, tal como a Sociologia e a Antropologia. Os estudos desenvolvidos por tal historiografia têm demonstrado como o fenômeno das doenças ultrapassa a esfera do natural, na medida em que são vividas a partir de diferentes contextos e espaços, sendo interpretadas socioculturalmente pelos sujeitos históricos, que encetam múltiplas representações e práticas na busca de dar sentido às mesmas.
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Controvérsias em torno das práticas e terapias de cura: a epidemia de cólera-morbus em Pernambuco (1855) / Controversies regarding practices and healing therapies: the epidemic of cholera-morbus in Pernambuco (1855)

Santos, Luciana dos 22 March 2013 (has links)
O trabalho focaliza as controvérsias que se seguem ao evento da epidemia de cóleramorbus deflagrada na província de Pernambuco no ano de 1855, em torno de práticas e terapias que foram mobilizadas no combate à moléstia. O fio condutor da análise são os embates que se estabeleceram entre a medicina acadêmica e outras formas terapêuticas - particularmente de homeopatas, leigos, negros e índios. Adicionalmente, o trabalho procura pontos de intersecção entre a emergência de um projeto moderno de medicina e a religião, acompanhando a reflexão e a prática produzidas pelos missionários capuchinhos italianos sobre a epidemia. / The work focuses on the controversy following the event of the epidemic of choleramorbus triggered in the province of Pernambuco in the year 1855, around practices and therapies that have been mobilized to fight the disease. The guiding thread of the analysis are the shocks that have been established between academic medicine and other therapeutic methods - particularly of homeopaths, lay people, blacks and indians. Additionally, the work searches points of intersection between the emergence of a modern project of medicine and religion, accompanying the reflection and practice produced by italian capuchin missionaries on the epidemic.
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Adsorção ótima de bicamada fosfolipídica sobre sílica e reconstituição do reconhecimento receptor-ligante / Optimum adsorption of phospholipid bilayer on silica and reconstitution of receptor function.

Moura, Sérgio de Paula 30 October 2006 (has links)
Este projeto teve como objetivo geral continuar a avaliar a adequação de anfifílicos que se agregam em solução aquosa formando bicamadas, para recobrir superfícies de sílica. Em paralelo, foi objetivada a reconstituição do reconhecimento receptor-ligante, tendo como modelo o monosialogangliosídio GM1 e a enterotoxina do vibrião da cólera. Os resultados obtidos poderão se mostrar de grande valor em aplicações práticas que envolvem a construção de sistemas de detecção e quantificação de substâncias ou moléculas específicas. A adsorção e estabilidade de bicamadas contendo fosfatidilcolina (PC) ou misturas de brometo de dioctadecildimetilamônio (DODAB) e dipalmitoilfosfatidilcolna (DPPC) sobre a superfície de nanopartículas de sílica foi estudada através de isotermas de adsorção por dosagem do fosfato inorgânico, análises de sedimentação por imagens fotográficas e medidas dos diâmetros médios (Dz) e potenciais-zeta (ζ) de partículas por espectroscopia de correlação de fótons. Foram avaliadas as afinidades entre as bicamadas e a superfície das nanopartículas e a estabilidade do sistema em função da força iônica, do pH e da concentração adicionada de lipídio. A afinidade das bicamadas pela superfície da sílica apresentou uma correlação com as forças de van der Waals e as pontes de hidrogênio que se formam entre os grupos químicos do anfifílico e aqueles de superfície da sílica. A formação de uma única bicamada lipídica de PC sobre a sílica foi detectada, o que levou à estabilidade coloidal do sistema particulado. As bicamadas mistas de DPPC/DODAB por sua vez apresentaram uma afinidade decrescente pela sílica com a elevação da porcentagem de DODAB na bicamada. Os dados de isoterma e de ζ das partículas sugerem uma separação física entre o DPPC e o DODAB. O conjunto otimizado partícula de sílica/bicamada de PC (partícula biomimética) foi assim utilizado para promover a incorporação do GM1 micelar nas bicamadas, medida por fluorescência com a utilização da sonda GM1 pireno, seguida do reconhecimento e ligação da toxina da cólera (CT) ao complexo formado. A transferência do GM1 das micelas para as partículas se mostrou dependente da disponibilidade de bicamadas adsorvidas nestas e da ausência de bicamadas não-adsorvidas, livres em dispersão. Para avaliar a ligação da toxina da cólera às partículas biomiméticas foram calculadas isotermas de adsorção a partir da dosagem de proteína não ligada que resta no sobrenadante. A ligação específica da CT na presença de bicamadas de PC e GM1 foi de 67% em massa do total da proteína adicionada, revelando uma ligação positiva entre receptor e ligante. A estequiometria revela que a proporção molar PC: GM1: CT é de 300: 5: 1 respectivamente. A proporção de 1 CT: 5 GM1 está de acordo com a literatura onde experimentos de difração de raios-X mostram a estrutura tridimensional do pentâmero CTB5 ligado a cinco unidades de pentasacarídeo do GM1. / The general objective of this project was to continue evaluating the suitability of amphiphiles that aggregate in aqueous solution forming bilayers, to cover surfaces of silica. A secondary objective pursued was to promote the reconstitution of the receptor-ligand function, having as a model the monosialoganglioside GM1 and the enterotoxin of the choleric vibrio. The results may prove to be valuable in pure research or practical applications for sensing and detection of biomolecules. The adsorption and stability of phosphatidylcholine (PC) bilayers or mixtures of dipalmitoylphosphatidylcholine (DPPC) and dioctadecyldimethylammonium bromide (DODAB) over surfaces of silica nanoparticles were evaluated through adsorption isotherms by inorganic phosphate dosage, sedimentation analysis by means of photographic images and measurements of hydrodynamic diameter (Dz) and zeta-potentials (ζ) of particles by photon correlation spectroscopy. The affinity between the bilayers and the nanoparticles surfaces and the general system stability were evaluated as a function of ionic strength, pH and added lipid concentration. The affinity showed a correlation with the van der Waals and the hydrogen bridges forces that form between the chemical groups of the amphiphile and the silica surface. The formation of a single lipid PC bilayer over the silica was detected, leading to the colloidal stability of the particulate system. Mixed bilayers of DPPC/DODAB on the other hand showed a decreasing affinity for silica with an increasing DODAB percentage in the bilayer. Data from isotherms and ζ of particles suggests a physical separation of the DPPC and DODAB. The optimized array of silica particle/PC bilayer (biomimetic particles) was thus used to promote the incorporation of micellar GM1 into the bilayers, measured by fluorescence with a GM1 pirene probe, followed by the cholera toxin (CT) binding to the resulting array. GM1 transfer from micelles to particles showed dependence on the adsorbed bilayers availability and on the absence of non-adsorbed bilayers, free in the bulk solution. To evaluate CT binding to biomimetic particles adsorption isotherms were calculated from the dosage of unbound protein remaining in the supernatant. Specific binding of CT in the presence of PC and GM1 bilayer was 67% mass of total protein added, indicating a positive binding between receptor and ligand. Stoichiometry revealed that the molar proportion PC: GM1: CT is 300: 5: 1 respectively. The proportion of 1 CT: 5 GM1 is in good agreement with data in the literature where X-ray diffraction tests show the 3-dimensional structure of the CTB5 pentamer bound to five units of the pentasaccharide GM1.
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Diversidade genética de isolados ambientais de Vibrio cholerae da Amazônia brasileira

SÁ, Lena Líllian Canto de 30 September 2009 (has links)
Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-02-07T11:44:28Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_DiversidadeGeneticaIsolados.pdf: 1765217 bytes, checksum: e159b664332d4cd1ed8d170a0a2c6559 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2014-02-12T15:56:27Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_DiversidadeGeneticaIsolados.pdf: 1765217 bytes, checksum: e159b664332d4cd1ed8d170a0a2c6559 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-12T15:56:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_DiversidadeGeneticaIsolados.pdf: 1765217 bytes, checksum: e159b664332d4cd1ed8d170a0a2c6559 (MD5) Previous issue date: 2009 / Vibrio cholerae, agente etiológico da cólera, é uma bactéria nativa de ambientes aquáticos de regiões temperadas e tropicais em todo o mundo. A cólera é endemica e epidemica em países da África, Ásia e Americas Central e do Sul. Neste trabalho o objetivo foi estudar a diversidade genética de isolados desta espécie, de ambientes aquáticos da Amazônia brasileira. Um total de 148 isolados de V.cholerae não-O1 e não-O139 (NAGs) e O1 ambientais da Amazônia, obtidos entre 1977 e 2007, foram caracterizados e comparados a linhagens clínicas de V.cholerae O1 da sexta e sétima pandemias. Utilizou-se os perfis de macrorestrição definidos em eletroforese em gel de agarose em campo pulsado (PFGE), para determinar a relação clonal entre V.cholerae non-O1 e O1 ambientais e clínicos. A presença de genes de virulência (hlyA/hem, hlyB, hlyC, rtxA, rtxC, tcp, ctx, zot, ace, stn/sto) e integrons de classe 1, 2 e 3 (intI 1, 2 e 3), foi analisada utilizando-se a reação em cadeia da polimerase. A análise dos perfis de macrorestrição revelou que os NAGs apresentaram uma grande diversidade genética comparada aos V.cholerae O1. Isolados de NAGs e O1 segregaram em distintos grupos e a maioria dos O1 ambientais apresentou relação clonal com isolados clínicos da sétima pandemia de cólera. A distribuição dos genes de virulência entre os NAGs é diferente a dos O1, os quais, em geral, foram positivos para todos os genes de virulência estudados exceto stn/sto e integrons de classe 1, 2 e 3. Alguns V.cholerae O1 ambientais pertencentes a linhagem da sétima pandemia, apresentaram uma extensiva perda de genes. Diferentes NAGs foram stn/sto+ e intI 1+. Dois alelos do gene aadA foram encontrados: aadA2 e aadA7. De modo interessante os V.cholerae O1 ambientais pertencentes à linhagem pandêmica, só foram isolados durante o período da última epidemia de cólera na região Amazônica brasileira (1991-1996). / Vibrio cholerae, the etiologic agent of cholera, is an autochtonus bacterium of aquatic environment in temperate and tropical regions of the world. Cholera is endemic and epidemic in many countries in Africa, Asia and Central and South America. In this study our goal was to detemine the genetic diversity of V.cholerae environmental isolates from aquatic ecosystems in the Amazon region of Brazil. A total of 148 environmental strains of V.cholerae non-O1 and non-O139 (NAG) and O1 serogroups, isolated from the Amazon region since 1977 to 2007, were characterized and compared with clinical strains of V.cholerae O1 from sixty and seventh cholera pandemic. PFGE (pulsed-field gel electrophoresis) was performed to determine the clonal relationships between V.cholerae non-O1, O1 environmental and clinical strains. The presence of virulence genes (hlyA/hem, hlyB, hlyC, rtxA, rtxC, tcp, ctx, zot, ace, stn/sto) and class 1, 2 and 3 integrons (intI 1, 2 e 3) was analyzed by polymerase chain reaction. Whole genome macrorestriction analysis revealed that the environmental V.cholerae NAGs were more diverse than the environmental O1 strains, both groups segregate in distinct clusters and most of environmental O1 strains show a clonal relationship with seventh cholera pandemic strains. The distribution of virulence genes in NAGs strains is largely different from that of O1 strains which, in general, were positive for all virulence genes analyzed excepting for stn/sto and class 1, 2 and 3 integrons. Some O1 environmental strains, belonging to the seventh pandemic lineage, went through an extensive gene loss. Distinct NAGs strains were stn/sto+ and intI 1+. Two alleles of aadA were found: aadA2 and aadA7. Interestingly, V.cholerae O1 environmental strains belonging to the pandemic lineage were only isolated during the period of cholera epidemic in the Amazon region of Brazil (1991-1996).
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Controvérsias em torno das práticas e terapias de cura: a epidemia de cólera-morbus em Pernambuco (1855) / Controversies regarding practices and healing therapies: the epidemic of cholera-morbus in Pernambuco (1855)

Luciana dos Santos 22 March 2013 (has links)
O trabalho focaliza as controvérsias que se seguem ao evento da epidemia de cóleramorbus deflagrada na província de Pernambuco no ano de 1855, em torno de práticas e terapias que foram mobilizadas no combate à moléstia. O fio condutor da análise são os embates que se estabeleceram entre a medicina acadêmica e outras formas terapêuticas - particularmente de homeopatas, leigos, negros e índios. Adicionalmente, o trabalho procura pontos de intersecção entre a emergência de um projeto moderno de medicina e a religião, acompanhando a reflexão e a prática produzidas pelos missionários capuchinhos italianos sobre a epidemia. / The work focuses on the controversy following the event of the epidemic of choleramorbus triggered in the province of Pernambuco in the year 1855, around practices and therapies that have been mobilized to fight the disease. The guiding thread of the analysis are the shocks that have been established between academic medicine and other therapeutic methods - particularly of homeopaths, lay people, blacks and indians. Additionally, the work searches points of intersection between the emergence of a modern project of medicine and religion, accompanying the reflection and practice produced by italian capuchin missionaries on the epidemic.
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Adsorção ótima de bicamada fosfolipídica sobre sílica e reconstituição do reconhecimento receptor-ligante / Optimum adsorption of phospholipid bilayer on silica and reconstitution of receptor function.

Sérgio de Paula Moura 30 October 2006 (has links)
Este projeto teve como objetivo geral continuar a avaliar a adequação de anfifílicos que se agregam em solução aquosa formando bicamadas, para recobrir superfícies de sílica. Em paralelo, foi objetivada a reconstituição do reconhecimento receptor-ligante, tendo como modelo o monosialogangliosídio GM1 e a enterotoxina do vibrião da cólera. Os resultados obtidos poderão se mostrar de grande valor em aplicações práticas que envolvem a construção de sistemas de detecção e quantificação de substâncias ou moléculas específicas. A adsorção e estabilidade de bicamadas contendo fosfatidilcolina (PC) ou misturas de brometo de dioctadecildimetilamônio (DODAB) e dipalmitoilfosfatidilcolna (DPPC) sobre a superfície de nanopartículas de sílica foi estudada através de isotermas de adsorção por dosagem do fosfato inorgânico, análises de sedimentação por imagens fotográficas e medidas dos diâmetros médios (Dz) e potenciais-zeta (ζ) de partículas por espectroscopia de correlação de fótons. Foram avaliadas as afinidades entre as bicamadas e a superfície das nanopartículas e a estabilidade do sistema em função da força iônica, do pH e da concentração adicionada de lipídio. A afinidade das bicamadas pela superfície da sílica apresentou uma correlação com as forças de van der Waals e as pontes de hidrogênio que se formam entre os grupos químicos do anfifílico e aqueles de superfície da sílica. A formação de uma única bicamada lipídica de PC sobre a sílica foi detectada, o que levou à estabilidade coloidal do sistema particulado. As bicamadas mistas de DPPC/DODAB por sua vez apresentaram uma afinidade decrescente pela sílica com a elevação da porcentagem de DODAB na bicamada. Os dados de isoterma e de ζ das partículas sugerem uma separação física entre o DPPC e o DODAB. O conjunto otimizado partícula de sílica/bicamada de PC (partícula biomimética) foi assim utilizado para promover a incorporação do GM1 micelar nas bicamadas, medida por fluorescência com a utilização da sonda GM1 pireno, seguida do reconhecimento e ligação da toxina da cólera (CT) ao complexo formado. A transferência do GM1 das micelas para as partículas se mostrou dependente da disponibilidade de bicamadas adsorvidas nestas e da ausência de bicamadas não-adsorvidas, livres em dispersão. Para avaliar a ligação da toxina da cólera às partículas biomiméticas foram calculadas isotermas de adsorção a partir da dosagem de proteína não ligada que resta no sobrenadante. A ligação específica da CT na presença de bicamadas de PC e GM1 foi de 67% em massa do total da proteína adicionada, revelando uma ligação positiva entre receptor e ligante. A estequiometria revela que a proporção molar PC: GM1: CT é de 300: 5: 1 respectivamente. A proporção de 1 CT: 5 GM1 está de acordo com a literatura onde experimentos de difração de raios-X mostram a estrutura tridimensional do pentâmero CTB5 ligado a cinco unidades de pentasacarídeo do GM1. / The general objective of this project was to continue evaluating the suitability of amphiphiles that aggregate in aqueous solution forming bilayers, to cover surfaces of silica. A secondary objective pursued was to promote the reconstitution of the receptor-ligand function, having as a model the monosialoganglioside GM1 and the enterotoxin of the choleric vibrio. The results may prove to be valuable in pure research or practical applications for sensing and detection of biomolecules. The adsorption and stability of phosphatidylcholine (PC) bilayers or mixtures of dipalmitoylphosphatidylcholine (DPPC) and dioctadecyldimethylammonium bromide (DODAB) over surfaces of silica nanoparticles were evaluated through adsorption isotherms by inorganic phosphate dosage, sedimentation analysis by means of photographic images and measurements of hydrodynamic diameter (Dz) and zeta-potentials (ζ) of particles by photon correlation spectroscopy. The affinity between the bilayers and the nanoparticles surfaces and the general system stability were evaluated as a function of ionic strength, pH and added lipid concentration. The affinity showed a correlation with the van der Waals and the hydrogen bridges forces that form between the chemical groups of the amphiphile and the silica surface. The formation of a single lipid PC bilayer over the silica was detected, leading to the colloidal stability of the particulate system. Mixed bilayers of DPPC/DODAB on the other hand showed a decreasing affinity for silica with an increasing DODAB percentage in the bilayer. Data from isotherms and ζ of particles suggests a physical separation of the DPPC and DODAB. The optimized array of silica particle/PC bilayer (biomimetic particles) was thus used to promote the incorporation of micellar GM1 into the bilayers, measured by fluorescence with a GM1 pirene probe, followed by the cholera toxin (CT) binding to the resulting array. GM1 transfer from micelles to particles showed dependence on the adsorbed bilayers availability and on the absence of non-adsorbed bilayers, free in the bulk solution. To evaluate CT binding to biomimetic particles adsorption isotherms were calculated from the dosage of unbound protein remaining in the supernatant. Specific binding of CT in the presence of PC and GM1 bilayer was 67% mass of total protein added, indicating a positive binding between receptor and ligand. Stoichiometry revealed that the molar proportion PC: GM1: CT is 300: 5: 1 respectively. The proportion of 1 CT: 5 GM1 is in good agreement with data in the literature where X-ray diffraction tests show the 3-dimensional structure of the CTB5 pentamer bound to five units of the pentasaccharide GM1.
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Caracterização molecular de Vibrio cholerae O1 sacarose negativa de isolados clínicos e ambiente na Amazônia brasileira

BAHIA, Márcia de Nazaré Miranda 11 May 2011 (has links)
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