Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-06-10T16:55:50Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Camila Brandão.pdf: 1719574 bytes, checksum: 88d3f5ffc68d62268cbbbc0e858b902e (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-10T16:55:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Camila Brandão.pdf: 1719574 bytes, checksum: 88d3f5ffc68d62268cbbbc0e858b902e (MD5) / FAPESB / O CAEV é um vírus envelopado cuja cápside é formada por uma tripla camada protéica, dentro da qual se encontra a p28, proteína de maior número de unidades repetidas. Os AcM consistem em ferramentas de grande uso para fins diagnósticos ou de pesquisa para agentes virais. Neste trabalho AcM para a p28 do CAEV foram analisados na sua reatividade e característica imunológica. Dentre as características imunológicas, foi demonstrada que a imunoglobulina predominante foi a IgG, de cadeia leve κ, sem atividade precipitante segundo o ensaio de Imunodifusão. A atividade ou reatividade destes AcM em substratos celulares infectados com CAEV foi baixa, o que foi demonstrado pela imunofluorescência indireta. Por outro lado, a atividade destes AcM está direcionada para a p28 e seus precursores protéicos virais. O epítopo reconhecido na p28 poderia ser do tipo seqüencial pela maior reatividade ao desnaturar a proteína que o contém (Western-blot). Entretanto, a depender dessa desnaturação o reconhecimento do epítopo pode ser afetado, como demonstrado nos tratamentos do antígeno viral com agente surfactante (SDS) ou β-Mercaptoethanol. Estes resultados mostraram que o epítopo na p28 seria afetado com ambos os tratamentos, porém foi mais notável com o β-Mercaptoethanol, o que sugeriria que este determinante antigênico é rico em resíduos Cys. / Salvador

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:53:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4828_1.pdf: 1055413 bytes, checksum: 4dae5bdcc85f3c7cc7eb4f56a9483f5b (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2005 / A infecção pelo lentivirus Caprine arthritis-encephalitis vírus (CAEV) causa doença progressiva crônica caracterizada por artrite, lesões no tecido linfóide, sistema nervoso e em outros órgãos, e o processo clínico é marcado por perda de peso, fragilidade e morte do animal. No Brasil, a infecção pelo CAEV, vem sendo considerada um problema de saúde pública que envolve vários rebanhos de caprinos do país. O presente estudo tem como objetivo avaliar o efeito da infecção pelo CAEV sobre o colesterol, fosfolipídios e triglicerídeos do plasma de caprinos de Pernambuco / Brasil. O plasma dos animais de diversos rebanhos foi analisado por método de imunodifusão em agar gel para detectar a presença de anticorpos para o lentivirus CAEV. Foram selecionados animais infectados pelo CAEV, sem sintomatologia clínica. Animais do grupo controle foram selecionados de rebanhos saudáveis da mesma região e com similar manipulação. Lipoproteína de alta densidade (HDL) plasmática foi isolada por precipitação seletiva das lipoproteínas de baixa (LDL) e muito baixa densidade (VLDL) com ácido fosfotungstico (1,4 mmol/L) e MgCl (53 mmol/L). Colesterol livre e esterificado, bem como, as subclasses de fosfolipídios foram separados por cromatografia em camada fina. Colesterol total e da HDL (HDL-C), bem como, triglicerídeos do plasma foram quantificados por ensaios enzimáticos, enquanto o colesterol das lipoproteínas VLDL e LDL (VLDL-C e LDL-C) foi determinado pela Equação de Friedwald. Os fosfolipídios totais e subclasses foram analisados por método químico. Animais infectados por CAEV apresentaram um aumento significativo nos níveis de colesterol total, ester de colesterila, fosfolipídeos totais e LDL-C. Os níveis plasmáticos de triglicerídeos, HDL-C e VLDL-C foram similares aos valores encontrados para o grupo controle. As concentrações de lisofosfatidilcolina, fosfatidicolina e fosfatidiletanolamina, subclasses de fosfolipídeos, foram aumentadas significativamente no plasma dos animais infectados, em comparação com o grupo controle. Contudo, nenhuma alteração foi observada em outra subclasse dos fosfolipídeos plasmáticos dos animais infectados: a esfingomielina. Os resultados indicam que a infecção pelo CAEV afeta o metabolismo lipídico animal. Os resultados deste trabalho servirão como teste laboratorial auxiliar do diagnóstico e prognóstico clínico/veterinário, importantes para os pequenos e grandes criadores de caprinos.

Artrite-encefalite dos Caprinos (CAE) é uma enfermidade infecciosa, multissistêmica, causada por um lentivírus, e infecta caprinos de todas as idades, independente do sexo, raça e tipos de produção econômica. Os principais sintomas descritos são leucoencefalomielite, artrite, pneumonia crônica intersticial e mamite intersticial endurativa. A CAE possui distribuição mundial, no Estado de São Paulo encontra-se amplamente disseminada no rebanho caprino. Com o intuito de aprofundar os conhecimentos sobre o vírus da Artrite-encefalite dos caprinos (CAEV) serão realizados estudos de sequenciamento de parte do cDNA e análise filogenética de amostras detectadas de órgãos, líquido sinovial, sêmen e leite de caprinos naturalmente infectados e soropositivos ao IDGA para o vírus da CAE e correlacionar as variantes genéticas com a sintomatologia, a forma clinica preferencial e a patogenicidade. Para o estudo filogenético serão amplificados, por RT-PCR, e sequenciados, parte do gene pol e o gene tat das amostras. Este estudo possibilitará o conhecimento das estirpes virais existentes no rebanho caprino do estado de São Paulo e a sua patogenicidade. A pesquisa de mutações encontradas por meio da análise do estudo filogenético do vírus poderá mostrar se a variante encontrada apresenta predileção por uma determinada expressão clínica. O seqüenciamento genético poderá permitir, também no futuro, uma maior eficiência na produção de antígenos virais para sorodiagnóstico e vacinas a partir das cepas circulantes encontradas. / Caprine arthritis-encephalitis (CAE) is an infectious disease, multisystem caused by a lentivirus, and infects goats of all ages, regardless of sex, race and types of economic production. The main symptoms are leukoencephalomyelitis, arthritis, chronic interstitial pneumonia and interstitial mastitis induration. CAE has a worldwide distribution in the State of São Paulo is widely disseminated in the goat herd. Aiming to deepen knowledge about the virus caprine arthritis-encephalitis (CAEV) studies will be performed sequencing of part of the cDNA and phylogenetic analysis of samples detected in organs, synovial fluid, semen and milk of goats naturally infected and seropositive AGID test for CAE virus and to correlate genetic variants with the symptoms, the clinical form of preferential and pathogenicity. For the phylogenetic study will be amplified by RT-PCR and sequenced, part of the pol gene and the gene tat of the samples. This study will allow the knowledge of existing viral strains in goat herd in the state of Sao Paulo and its pathogenicity. The analysis of mutations found by analyzing the phylogenetic analysis of the virus may show if the variant has found a predilection for a particular clinical expression. The gene sequencing will allow, in future, greater efficiency in the production of viral antigens for serodiagnosis and vaccines from the circulating strains found.

Artrite-encefalite dos Caprinos (CAE) é uma enfermidade infecciosa, multissistêmica, causada por um lentivírus, e infecta caprinos de todas as idades, independente do sexo, raça e tipos de produção econômica. Os principais sintomas descritos são leucoencefalomielite, artrite, pneumonia crônica intersticial e mamite intersticial endurativa. A CAE possui distribuição mundial, no Estado de São Paulo encontra-se amplamente disseminada no rebanho caprino. Com o intuito de aprofundar os conhecimentos sobre o vírus da Artrite-encefalite dos caprinos (CAEV) serão realizados estudos de sequenciamento de parte do cDNA e análise filogenética de amostras detectadas de órgãos, líquido sinovial, sêmen e leite de caprinos naturalmente infectados e soropositivos ao IDGA para o vírus da CAE e correlacionar as variantes genéticas com a sintomatologia, a forma clinica preferencial e a patogenicidade. Para o estudo filogenético serão amplificados, por RT-PCR, e sequenciados, parte do gene pol e o gene tat das amostras. Este estudo possibilitará o conhecimento das estirpes virais existentes no rebanho caprino do estado de São Paulo e a sua patogenicidade. A pesquisa de mutações encontradas por meio da análise do estudo filogenético do vírus poderá mostrar se a variante encontrada apresenta predileção por uma determinada expressão clínica. O seqüenciamento genético poderá permitir, também no futuro, uma maior eficiência na produção de antígenos virais para sorodiagnóstico e vacinas a partir das cepas circulantes encontradas. / Caprine arthritis-encephalitis (CAE) is an infectious disease, multisystem caused by a lentivirus, and infects goats of all ages, regardless of sex, race and types of economic production. The main symptoms are leukoencephalomyelitis, arthritis, chronic interstitial pneumonia and interstitial mastitis induration. CAE has a worldwide distribution in the State of São Paulo is widely disseminated in the goat herd. Aiming to deepen knowledge about the virus caprine arthritis-encephalitis (CAEV) studies will be performed sequencing of part of the cDNA and phylogenetic analysis of samples detected in organs, synovial fluid, semen and milk of goats naturally infected and seropositive AGID test for CAE virus and to correlate genetic variants with the symptoms, the clinical form of preferential and pathogenicity. For the phylogenetic study will be amplified by RT-PCR and sequenced, part of the pol gene and the gene tat of the samples. This study will allow the knowledge of existing viral strains in goat herd in the state of Sao Paulo and its pathogenicity. The analysis of mutations found by analyzing the phylogenetic analysis of the virus may show if the variant has found a predilection for a particular clinical expression. The gene sequencing will allow, in future, greater efficiency in the production of viral antigens for serodiagnosis and vaccines from the circulating strains found.

Cultivos celulares podem ser utilizados para isolamento viral, caracterização de novas amostras virais e produção de imunobiológicos. Podem ser empregados cultivos celulares primários, secundários ou de linha. Estes últimos podem ser obtidos pela transformação física, química ou biológica de cultivos primários ou secundários. Para verificar a interação entre células transformadas com o Ag T do vírus símio 40 (SV40) e os Lentivírus de Pequenos Ruminantes (SRLV), amostras brasileiras de SRLV foram utilizadas para inoculação em cultivos celulares de membrana sinovial ovina transformados pelo Ag T e comparadas à amostras inoculadas em cultivos não transformados. Inicialmente, as células transformadas pelo Ag T foram caracterizadas e observou-se um aumento na cinética de crescimento e alterações no cariótipo, provavelmente induzidas pela presença do Ag T. Este foi detectado por PCR no núcleo e no citoplasma das células transformadas e sua expressão, confirmada através de RT-PCR. A fim de avaliar a permissividade e a possível seleção de populações virais em células transformadas, dois isolados, um de maedi-visna dos ovinos e um de artrite-encefalite caprina, foram inoculados em células MSO e TMSOpSV1. Através da análise de sequências dos genes gag e env e LTR obtidos por PCR, procurou-se avaliar a variabilidade viral em função do tipo de célula utilizada. Analisando-se as seqüências obtidas pelo método de Maximum Likelihood, embora tenha sido observada variabilidade viral, esta não estava associada ao tipo celular utilizado para inoculação viral.

LOPES, T.A. Influência da Artrite Encefalite Caprina sobre a expressão de RNAm para GDF-9, BMP-15 e BMPR-IB em folículos ovarianos e ativação in vitro de folículos primordiais em meio suplementado com fitohemaglutinina e EGF. 2014. 101 f. Dissertação (MESTRADO EM BIOTECNOLOGIA) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2014. / Submitted by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-09-01T13:34:45Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_tdalopes.pdf: 1351150 bytes, checksum: 65ee09c841d91119c1eb7a31b1f26ee5 (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-10-03T14:50:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_tdalopes.pdf: 1351150 bytes, checksum: 65ee09c841d91119c1eb7a31b1f26ee5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-03T14:50:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_tdalopes.pdf: 1351150 bytes, checksum: 65ee09c841d91119c1eb7a31b1f26ee5 (MD5) Previous issue date: 2014 / This study aims to investigate the effects of caprine arthritis encephalitis (CAE) on the expression of BMP-15, BMPR-IB and GDF-9 in ovarian follicles, as well as the effects of phytohemagglutinin (PHA) and EGF on the survival and activation of primordial follicles, and on expression of mRNA for TNF-α and its receptors in cultured goat ovarian tissue. The levels of BMP-15, BMPR-IB and GDF-9 in primordial/primary and secondary follicles, as well as in COCs and follicular walls from antral follicles were evacuated by real-time PCR (experiment 1). Ovarian tissues were cultured for six days in α-MEM+ alone or supplemented with EGF (100μg/mL), PHA (10μg/mL) or both (experiment 2). Before and after culture, ovarian fragments were processed for morphological analysis or stored to evaluate the expression of mRNA for TNFα and its receptors. The results showed that the expression of BMP-15 and GDF-9 in primordial/primary follicles from infected goats was significantly higher than in health animals, but the expression of GDF-9 in secondary follicles from infected goats was significantly lower. Additionally, the expression of mRNA for BMP-15 in follicular wall of antral follicles from infected goats was significantly higher than in healthy goats. After culturing ovarian fragments in all tested media, reduced percentages of primordial follicles, and increased of developing follicles was observed when compared to uncultured control. Furthermore, there was a significant increase in follicular diameter after culture in medium supplemented with EGF. Ovarian tissue from infected goats cultured in medium supplemented with PHA had primordial follicles with higher diameters than those from healthy animals. An increase in the levels of mRNAs for TNF-α was observed after culturing ovarian tissue in presence of both EGF and PHA in healthy animals, but this same treatment promoted a reduction of mRNAs for TNF-α and and increase of TNFR-II transcripts in infected animals. In conclusion, CAE influences the expression of mRNA for BMP-15 and GDF-9 in goat ovarian follicles and PHA and EGF differentially regulate the expression of TNFα and TNFR-II in cultured ovarian tissue. / O objetivo deste trabalho foi investigar os efeitos da artrite encefalite caprina (CAE) sobre a expressão de BMP-15, BMPR-IB e GDF-9 em folículos ovarianos, bem como os efeitos de fitohemaglutinina (PHA) e EGF na sobrevivência e ativação de folículos primordiais, e na expressão de genes para o sistema de TNF-α no tecido ovariano cultivado caprino. Os níveis de BMP-15, BMPR-IB e GDF-9 em folículos primordiais/primários e secundários, bem como em CCOs e parede folicular de folículos antrais foram avaliados por PCR em tempo real (experimento 1). Para os estudos in vitro, fragmentos de tecido ovariano foram cultivados por seis dias em α-MEM sozinho ou suplementado com EGF (100ug), PHA (10μg/mL) ou ambos (experimento 2). Antes e depois do cultivo, o tecido ovariano foi processado para análise morfológica ou armazenado para avaliar a expressão de RNAm para TNF-α e seus receptores. Os resultados mostraram que a expressão de BMP-15 e GDF-9 em folículos primordiais/primários de cabras infectadas foram significativamente maiores do que em animais saudáveis, mas a expressão de GDF-9 em folículos secundários de cabras infectadas foi significativamente menor. Além disso, a expressão de RNAm para BMP-15 na parede folicular de folículos antrais de cabras infectadas foi significativamente maior do que em cabras saudáveis. Após o cultivo dos fragmentos ovarianos em todos os meios testados, observou-se a redução nos percentuais de folículos primordiais, e aumento de folículos em desenvolvimento quando comparado ao grupo controle não cultivado. Além disso, houve um aumento significativo no diâmetro folicular após cultivo em meio suplementado com EGF. Após o cultivo de tecido ovariano de cabras infectadas em meio suplementado com PHA, os folículos primordiais apresentavam diâmetros maiores do que os de animais saudáveis. Além disso, observou-se um aumento nos níveis de RNAm para TNF-α após cultivo de tecido ovariano na presença de ambos EGF e PHA em animais saudáveis, mas este mesmo tratamento proporcionou uma redução de RNAm para TNF-α e aumento dos transcritos de TNFR-II em animais infectados. Pode-se concluir que a CAE influencia a expressão de RNAm para BMP-15 e GDF-9 em folículos ovarianos caprinos e a PHA e o EGF diferencialmente regulam a expressão de TNF-α e TNFR-II em tecidos ovarianos.

Cultivos celulares podem ser utilizados para isolamento viral, caracterização de novas amostras virais e produção de imunobiológicos. Podem ser empregados cultivos celulares primários, secundários ou de linha. Estes últimos podem ser obtidos pela transformação física, química ou biológica de cultivos primários ou secundários. Para verificar a interação entre células transformadas com o Ag T do vírus símio 40 (SV40) e os Lentivírus de Pequenos Ruminantes (SRLV), amostras brasileiras de SRLV foram utilizadas para inoculação em cultivos celulares de membrana sinovial ovina transformados pelo Ag T e comparadas à amostras inoculadas em cultivos não transformados. Inicialmente, as células transformadas pelo Ag T foram caracterizadas e observou-se um aumento na cinética de crescimento e alterações no cariótipo, provavelmente induzidas pela presença do Ag T. Este foi detectado por PCR no núcleo e no citoplasma das células transformadas e sua expressão, confirmada através de RT-PCR. A fim de avaliar a permissividade e a possível seleção de populações virais em células transformadas, dois isolados, um de maedi-visna dos ovinos e um de artrite-encefalite caprina, foram inoculados em células MSO e TMSOpSV1. Através da análise de sequências dos genes gag e env e LTR obtidos por PCR, procurou-se avaliar a variabilidade viral em função do tipo de célula utilizada. Analisando-se as seqüências obtidas pelo método de Maximum Likelihood, embora tenha sido observada variabilidade viral, esta não estava associada ao tipo celular utilizado para inoculação viral.

Cultivos celulares podem ser utilizados para isolamento viral, caracterização de novas amostras virais e produção de imunobiológicos. Podem ser empregados cultivos celulares primários, secundários ou de linha. Estes últimos podem ser obtidos pela transformação física, química ou biológica de cultivos primários ou secundários. Para verificar a interação entre células transformadas com o Ag T do vírus símio 40 (SV40) e os Lentivírus de Pequenos Ruminantes (SRLV), amostras brasileiras de SRLV foram utilizadas para inoculação em cultivos celulares de membrana sinovial ovina transformados pelo Ag T e comparadas à amostras inoculadas em cultivos não transformados. Inicialmente, as células transformadas pelo Ag T foram caracterizadas e observou-se um aumento na cinética de crescimento e alterações no cariótipo, provavelmente induzidas pela presença do Ag T. Este foi detectado por PCR no núcleo e no citoplasma das células transformadas e sua expressão, confirmada através de RT-PCR. A fim de avaliar a permissividade e a possível seleção de populações virais em células transformadas, dois isolados, um de maedi-visna dos ovinos e um de artrite-encefalite caprina, foram inoculados em células MSO e TMSOpSV1. Através da análise de sequências dos genes gag e env e LTR obtidos por PCR, procurou-se avaliar a variabilidade viral em função do tipo de célula utilizada. Analisando-se as seqüências obtidas pelo método de Maximum Likelihood, embora tenha sido observada variabilidade viral, esta não estava associada ao tipo celular utilizado para inoculação viral.

Notre laboratoire a développé un prototype de vaccin unique contre le VIH-1 / SIDA. C'est un un lentivecteur ADN non-intégratif qui a été testé dans une étude pilote utilisant des modèles animaux. L'étude a montré la protection de tous les macaques (6/6) vaccinés et la réponse était composée de cellules effectrices (EM) et des cellules T mémoire centrale (CM). Plus important encore, elle contenait également des cellules antigène spécifique à haute capacité de prolifération contenant des cellules T mémoire de type cellule souche (TSCM). Durant le travail de cette thèse, le génome vaccinal a été encore amélioré en commutant son enveloppe dotée de tropisme CXCR4 contre des enveloppes à tropisme CCR5 de virus de clade B (WARO) obtenu à partir d'un patient infecté de façon chronique et de trois souches de VIH-1 de Clade C transmetteur foundateur (T/F) de patients Zambiens. Une deuxième amélioration du vaccin a été réalisée en modifiant le génome afin qu’il puisse incorporer des adjuvants moléculaires capables d'améliorer d’avantage son immunogénicité.Etant donné que le lentivirus humain VIH-1 a développé plusieurs stratégies complexes pour persister, l’autre partie de la thèse a été consacrée à développer un outil pour comprendre la latence dans les cellules T CD4 + de la mémoire infectée. Les cellules latentes ont des génomes d'ADN viral intégrés non exprimés. Un des principaux mécanismes de cette latence est l'absence de transactivation du promoteur LTR par Tat. Les développements récents de la thérapie antivirale hautement active (HAART) efficace pour contrôler les cellules infectées circulantes et dans les tissus reste inefficaces contre les cellules du réservoir composé de cellules infectées latentes. Un des obstacles pour ce type d'études est l'absence de prototypes de lentivirus de primates appropriés incapables de d’effectuer la latence pour s’en servir comme modèle d'infection extrême dans l'évaluation. Nous avons émis l'hypothèse qu'un génome SHIV réplicatifdont l’expression est sous le contrôle de LTR du CAEV, Tat-indépendant doté de promoteur constitutif constituera un outil précieux pour de telles études. Nous avons conçu des LTRs chimères de CAEV portant les séquences d'attachement de celles du SIV à leurs extrémités et nous les ont utilisés pour contrôler l’expression du génome complet de SHIV-KU2. La construction résultante est SHIV-YCC qui devrait générer un virus qui ne n’effectue pas de latence en absence de Tat. Nous avons observé que les cellules transfectées avec le génome SHIV-YCC produisent des protéines SHIV qui s’assemblent en particules infectieuses excrétées des cellules. Les virions sont capables d'infecter les lymphocytes T CD4 + cibles tant dans les PBMC primaires que dans les lignées cellulaires. Le passage en série du virus dans les PBMC de macaques augmente la réplication et l'infectiosité du virus. SHIV-YCC est le premier lentivirus chimérique réplicatif de primates qui exprime de manière constitutive toutes les protéines virales. Ce nouveau modèle offre la possibilité d'étudier les événements précoces par lesquels le provirus subit une latence, en particulier lorsque le gène de l'enveloppe sera remplacé par celui du T / F CCR5 tropique VIH-1. / Our lab has previously described the generation of a unique vaccine prototype against HIV-1/AIDS. It is a non-integrative DNA lentivector vaccine tested in pilot studies in animal models of HIV vaccine. The non-human primate study showed protection of all 6/6 macaques and immune response correlates were composed of a variety of effector (EM) and central memory (CM) T cells. More importantly, they also contained high proliferating antigen specific cells containing a type of stem cell-like memory T cells (TSCM). In this thesis the vaccine was enhanced further by switching the CXCR4 envelope of the vaccine to CCR5 tropic envelopes such as the clade B WARO obtained from a chronically infected patient and a series of three transmitted/founder (T/F) HIV Clade C strains from Zambia. To improve further the vaccine we developed new strategies to incorporate molecular adjuvants able to enhance and sustain the newly elicited immune responses.Since the human lentivirus HIV-1 has developed multiple complex strategies to persist, the focus of the next part of my thesis was to develop a tool to ease and better understand the underlying mechanisms of latency in infected memory CD4+ T cells. Latently-infected cells have non-expressed integrated viral DNA genomes. One of the main mechanisms of this latency is absence of Tat transactivation of the LTR promoter. The recent focus post development of efficient highly active antiviral therapy (HAART), is the cure of the reservoir of latently infected cells. One of the obstacles for this type of studies is the lack of proper primate lentivirus prototypes incapable of undergoing latency as extreme infection model in the evaluation. We hypothesized that a replication-competent SHIV genome driven by the Tat-independent constitutive-expression LTRs of CAEV will be a valuable tool for such studies. We designed chimeric CAEV LTRs bearing the attachment sequences of SIV at their extremities and used them to drive the complete genome of SHIV-KU2. The resulting construct is SHIV-YCC which is expected to generate virus that will not undergo latency due to absence of Tat. We found that cells transfected with SHIV-YCC genome produce SHIV proteins that are assembled into infectious particles released out of the cells. Virions are able to infect target CD4+ T cells both in primary PBMCs and cell lines. Passaged virus in macaques PBMCs increased virus replication and infectivity. SHIV-YCC is the first chimeric primate replication-competent lentivirus that constitutively expresses all viral proteins. This new model offers the possibility of studying the early events by which provirus undergoes latency particularly when the envelop gene will be replaced with that of the T/F CCR5 tropic HIV-1.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / O objetivo deste trabalho foi investigar os efeitos da artrite encefalite caprina (CAE) sobre a expressÃo de BMP-15, BMPR-IB e GDF-9 em folÃculos ovarianos, bem como os efeitos de fitohemaglutinina (PHA) e EGF na sobrevivÃncia e ativaÃÃo de folÃculos primordiais, e na expressÃo de genes para o sistema de TNF-α no tecido ovariano cultivado caprino. Os nÃveis de BMP-15, BMPR-IB e GDF-9 em folÃculos primordiais/primÃrios e secundÃrios, bem como em CCOs e parede folicular de folÃculos antrais foram avaliados por PCR em tempo real (experimento 1). Para os estudos in vitro, fragmentos de tecido ovariano foram cultivados por seis dias em α-MEM sozinho ou suplementado com EGF (100ug), PHA (10μg/mL) ou ambos (experimento 2). Antes e depois do cultivo, o tecido ovariano foi processado para anÃlise morfolÃgica ou armazenado para avaliar a expressÃo de RNAm para TNF-α e seus receptores. Os resultados mostraram que a expressÃo de BMP-15 e GDF-9 em folÃculos primordiais/primÃrios de cabras infectadas foram significativamente maiores do que em animais saudÃveis, mas a expressÃo de GDF-9 em folÃculos secundÃrios de cabras infectadas foi significativamente menor. AlÃm disso, a expressÃo de RNAm para BMP-15 na parede folicular de folÃculos antrais de cabras infectadas foi significativamente maior do que em cabras saudÃveis. ApÃs o cultivo dos fragmentos ovarianos em todos os meios testados, observou-se a reduÃÃo nos percentuais de folÃculos primordiais, e aumento de folÃculos em desenvolvimento quando comparado ao grupo controle nÃo cultivado. AlÃm disso, houve um aumento significativo no diÃmetro folicular apÃs cultivo em meio suplementado com EGF. ApÃs o cultivo de tecido ovariano de cabras infectadas em meio suplementado com PHA, os folÃculos primordiais apresentavam diÃmetros maiores do que os de animais saudÃveis. AlÃm disso, observou-se um aumento nos nÃveis de RNAm para TNF-α apÃs cultivo de tecido ovariano na presenÃa de ambos EGF e PHA em animais saudÃveis, mas este mesmo tratamento proporcionou uma reduÃÃo de RNAm para TNF-α e aumento dos transcritos de TNFR-II em animais infectados. Pode-se concluir que a CAE influencia a expressÃo de RNAm para BMP-15 e GDF-9 em folÃculos ovarianos caprinos e a PHA e o EGF diferencialmente regulam a expressÃo de TNF-α e TNFR-II em tecidos ovarianos. / This study aims to investigate the effects of caprine arthritis encephalitis (CAE) on the expression of BMP-15, BMPR-IB and GDF-9 in ovarian follicles, as well as the effects of phytohemagglutinin (PHA) and EGF on the survival and activation of primordial follicles, and on expression of mRNA for TNF-α and its receptors in cultured goat ovarian tissue. The levels of BMP-15, BMPR-IB and GDF-9 in primordial/primary and secondary follicles, as well as in COCs and follicular walls from antral follicles were evacuated by real-time PCR (experiment 1). Ovarian tissues were cultured for six days in α-MEM+ alone or supplemented with EGF (100Âg/mL), PHA (10Âg/mL) or both (experiment 2). Before and after culture, ovarian fragments were processed for morphological analysis or stored to evaluate the expression of mRNA for TNFα and its receptors. The results showed that the expression of BMP-15 and GDF-9 in primordial/primary follicles from infected goats was significantly higher than in health animals, but the expression of GDF-9 in secondary follicles from infected goats was significantly lower. Additionally, the expression of mRNA for BMP-15 in follicular wall of antral follicles from infected goats was significantly higher than in healthy goats. After culturing ovarian fragments in all tested media, reduced percentages of primordial follicles, and increased of developing follicles was observed when compared to uncultured control. Furthermore, there was a significant increase in follicular diameter after culture in medium supplemented with EGF. Ovarian tissue from infected goats cultured in medium supplemented with PHA had primordial follicles with higher diameters than those from healthy animals. An increase in the levels of mRNAs for TNF-α was observed after culturing ovarian tissue in presence of both EGF and PHA in healthy animals, but this same treatment promoted a reduction of mRNAs for TNF-α and and increase of TNFR-II transcripts in infected animals. In conclusion, CAE influences the expression of mRNA for BMP-15 and GDF-9 in goat ovarian follicles and PHA and EGF differentially regulate the expression of TNFα and TNFR-II in cultured ovarian tissue.