Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2015. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2015-11-11T13:38:30Z No. of bitstreams: 1 2015_DanielPaivaAgustinho.pdf: 4757903 bytes, checksum: 176be2c912f8463c991a719893a212c3 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2015-11-12T11:51:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_DanielPaivaAgustinho.pdf: 4757903 bytes, checksum: 176be2c912f8463c991a719893a212c3 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-12T11:51:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_DanielPaivaAgustinho.pdf: 4757903 bytes, checksum: 176be2c912f8463c991a719893a212c3 (MD5) / O fungo comensal Candida albicans pode causar doenças infecciosas sistêmicas letais em pacientes imussuprimidos. Um dos principais mecanismos de evasão ao sistema imune do hospedeiro e virulência é a mudança para a forma de hifa. Macrófagos e monócitos são as células do sistema imune inato que formam a primeira linha de defesa contra ainfecção de C. albicans, e essas células reconhecem patógenos através de Receptores de Reconhecimento de Padrão (PRR). A ativação desses PRRs induz uma cascata desinalização que culmina na produção de citocinas específicas, que orquestram a respostaimune. Micro RNAs (miRNAs) são considerados uma parte essencial da resposta imune a diversos patógenos, geralmente regulando a intensidade dessa resposta. miRNAs se ligam a sequências específicas de seus mRNAs alvo, geralmente silenciando-os através de degradação ou repressão traducional. Esse estudo focou em analisar os padrões moleculares de suscetibilidade à C. albicans, investigando as diferenças em expressão gênica em resposta a C. albicans em duas linhagens de Mus musculus, uma suscetível e outra resistente a esse fungo. Macrófagos derivados de medula óssea dessas duas linhagens (DBA/2J e BALB/c, respectivamente) foram co-cultivados com C. albicans e seus RNAs totais foram extraídos e sequenciados por RNA-seq. As análises preliminares dos dados de RNA-seq validam a qualidade das sequências obtidas e asseguram seu uso nas etapas subsequentes, voltadas à caracterização comparativa do transcritoma diferencial entre as linhagens suscetível e resistente de camundongo. Para tal, as etapas subsequentes envolverão a análise da expressão diferencial de genes e sua validação por qRT-PCR, bem como a interpretação destes dados com base nos genes expressos diferencialmente, como uma ferramenta para o melhor entendimento das bases moleculares da suscetibilidade a este patógeno de grande interesse médico. Assim, estas próximas análises determinarão genes diferencialmente expressos e que são chave na resposta imune durante a infecção de C. albicans. Neste trabalho, também avaliamos o impacto da morfologia de C. albicans sobre a modulação da expressão de miRNAs em células do hospedeiro. Assim, a modulação da expressão de nove diferentes miRNAs relacionados à resposta imune foi avaliada a partir da interação de macrófagos primários derivados de medula expostos a leveduras e hifas de C. albicans foi investigada. Neste estudo, foi mostrado que as diferentes tipos celulares deste fungo induzem padrões distintos de expressão de miRNAs em macrófagos. Além disso, esses dados mostram que a indução de miR155 por hifas em BMDMs é controlada no nível transcricional durante a fase inicial da interação patógeno-hospedeiro. É interessante ressaltar que o receptor Dectina-1 é um importante PRR que orquestra a expressão de miR155 de maneira dependente de Syk. Esses resultados sugerem que eventos de sinalização mediados por PRRs são importantes na regulação de miRNAs durante infecções fúngicas e descreve pela primeira vez a provável e principal via de sinalização envolvida nesse processo. / The commensal fungal pathogen Candida albicans can cause lethal systemic infections in immunocompromised patients. One of the main mechanisms of host immune evasion and virulence is the switch to hyphal growth morphologies. Macrophages and monocytes are the inate immune cells that represent the first line of defense against C. albicans infection, and they recognise pathogens via Pattern Recognition Receptors (PRRs). Activation of these receptors induces a signalling pathway that culminates in specific cytokine production, that orchestrates the immune response. Micro RNAs (miRNAs) are considered an essential part of the immune response to a wide variety of pathogens, generally regulating the intensity of this response. miRNAs bind to specific sequences of target mRNAs, thus generally silencing these targets through mRNA degradation or translational repression. This study focused on analyzing the molecular patterns of susceptibility to C. albicans by investigating the differences in gene expression response of two mouse strains, one susceptible and the other resistant to this fungus. Bone marrow-derived macrophages from these strains (DBA/2J and BALB/c, respectively) were co-cultured with C.albicans and their total RNA were extracted and sequenced by RNA-seq. Preliminary analysis of the RNA-seq data validated the quality of obtained sequences and support their use in subsequent steps of comparative characterization of differential transcriptome between resistant and susceptible strains. The next steps will involve the analyses of differentially expressed genes, and their validation by qRT-PCR, as well as interpretation of these data, as a tool for understanding the molecular bases of suceptibility of this medically important pathogen. The next analyses analysis will determine differentially expressed genes which are key to the immune response during the infection by C. albicans. In this work we also analyzed the impact of C. albicans cell morphology upon the modulation of the host miRNA expression. Modulation of the expression of nine different immune response-related miRNAs in primary murine bone marrow-derived macrophages (BMDMs) exposed to either yeast or hyphal forms of C. albicans was investigated. Different growth morphologies were shown to induce distinct miRNA expression patterns in BMDMs. Moreover, our data show that hyphal induction of miR155 in BMDMs is tightly regulated at the transcriptional level during early stages of the host-pathogen interaction. Interestingly, our data suggest that the C-Type lectin receptor Dectin-1 is a major PRR that orchestrates miR155 up regulation in a Syk-dependent manner. These results suggest that PRR-mediated signaling events are key drivers of miRNA-mediated gene regulation during fungal pathogenesis and describe for the first time the signaling pathway likely to be the most important in this process.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2014. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2014-04-28T15:21:49Z No. of bitstreams: 1 2014_ThaieneAvilaReis.pdf: 2252354 bytes, checksum: 92742506ffd4802424354fabceb96f52 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-04-28T16:12:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_ThaieneAvilaReis.pdf: 2252354 bytes, checksum: 92742506ffd4802424354fabceb96f52 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-04-28T16:12:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_ThaieneAvilaReis.pdf: 2252354 bytes, checksum: 92742506ffd4802424354fabceb96f52 (MD5) / A candidíase vulvovaginal (CVV) é uma infecção causada por fungos da espécie Candida sp. Os tratamentos são comumente realizados através da administração oral, sendo o fluconazol (FLU) o mais utilizado. Notadamente, a via de administração tópica é mais vantajosa que a oral, por reduzir os efeitos adversos sistêmicos. No entanto, as formulações convencionais proporcionam a absorção incompleta ou em baixas concentrações do fármaco, comprometendo o sucesso deste tipo de terapia. Este trabalho teve como objetivo desenvolver e caracterizar uma formulação contendo nanopartículas de quitosana (NP-QS) encapsulando o FLU (NP-FLU) e avaliar a capacidade dessa formulação em aderir-se à mucosa e sustentar a liberação do fármaco para esse tecido. Métodos analíticos para doseamento do FLU em solução ou extraído da mucosa utilizando Cromatografia Líquida de Alta Eficiência foram validados. A solubilidade do FLU em meio aquoso foi determinada como sendo igual a 5,8 mg/mL em temperatura ambiente. As NP-QS e NP-FLU foram obtidas utilizando a técnica de geleificação ionotrópica e caracterizadas pelo tamanho, índice de polidispersividade (IPD), potencial zeta e morfologia. As NP-QS apresentaram forma esférica, tamanho de 271,72 ± 59,46 nm, IPD de 0,345 ± 0,060 e potencial zeta igual a +46,16 ± 6,72 mV. As NP-FLU encapsularam 40% do fármaco e não diferiram significativamente (p < 0,05) das NP-QS quanto aos parâmetros de caracterização. As NP-FLU apresentaram estabilidade física durante 90 dias. A incubação das NP-FLU com NP de mucina e posterior análise de tamanho de partículas indicou que as NP-QS apresentam propriedades mucoadesivas. Os estudos de liberação e permeação in vitro, utilizando membrana de acetato e mucosa bucal de suínos, respectivamente, foram realizados em células de Franz comparando-se quatro formulações: uma solução de FLU (SOL-FLU), as NP-FLU, gel contendo FLU (G-FLU) e gel contendo as NP-FLU (G-NP-FLU). As formulações contendo as NP sustentaram pelo menos 2 vezes a liberação do FLU em comparação à SOL-FLU. Não foi possível quantificar o FLU que permeou a mucosa durante as 2 h de experimento a partir de nenhuma das formulações avaliadas. No entanto, o FLU penetrou a mucosa a partir da formulação NP-FLU em quantidade 1,5 vezes menor se comparado à SOL-FLU. Não houve diferença significativa (p<0,05) nas quantidades recuperadas da mucosa a partir das NP-FLU e G-NP-FLU, indicando que as NP conseguem sustentar melhor a liberação de FLU para a mucosa do que o gel somente. A formulação desenvolvida contendo NP-FLU, portanto, mostrou-se capaz de (i) permanecer por mais tempo em contato com a mucosa e (ii) promover a liberação sustentada do FLU para a mucosa, mostrando-se como uma alternativa eficiente para o tratamento tópico da CVV. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Vulvovaginal candidiasis (VVC) is an infection attributed to an overgrowth of Candida species, mainly C. albicans. The treatments are often carried out by the oral administration, like fluconazole (FLU). It is known that topical treatment is more advantageous than oral, because it reduces systemic side effects. However, conventional formulations provide incomplete or low concentrations of drug into the mucous, reducing the success of this kind of therapy. The purpose of this work was to develop and characterize a hydrophilic formulation containing chitosan nanoparticles (CS-NP) loading FLU (FLU-NP) and evaluate its ability to adhere to mucous and sustain drug delivery to this tissue. Analytical HPLC methods were properly validated for determination and recovery of FLU from mucous FLU solubility was determined as being 5.8 mg/mL at room temperature. CS-NP and FLU-NP were prepared by the ionotropic gelation technique and characterized according to their size, polydispersity index (PDI), zeta potential and morphology. CS-NP presented spherical shape, 271.72 ± 59.46 nm of size, PDI equal to 0.345 ± 0.060, zeta potential of +46.16 ± 6.72 mV and were physically stable for 90 days. FLU-NP were very similar to CS-NP, with encapsulation efficiency of 40%. FLU-NP incubation with mucine NP following by particle size determination indicated they possess mucoadhesive properties. Release and permeation studies were carried out in vitro in diffusion Franz cells using celulose acetate membrane and porcine mucous respectively, from four different formulations: a FLU solution (FLU-SOL), FLU-NP, a FLU gel (FLU-G) and a gel containing the FLU-NP (G-FLU-NP). All the tested formulations sustained at least 2-fold FLU release in comparison to the FLU-SOL. FLU did not permeate the mucous membrane in detectable amounts during the 2 h of experiments from any evaluated formulations. However, FLU penetrated the mucous membrane in amount 1.5-fold less from the FLU-NP formulation if compared with FLU-SOL. There was no significant quantities recovered from the mucous membrane from FLU-NP and G-FLU-NP, indicating that the NP are able to sustain FLU delivery to the mucous membrane, better than the formulation FLU-G. In conclusion, the developed formulation containing NP was capable of (i) remaining for longer periods in contact to the mucous membrane and (ii) performing a sustained delivery of FLU to the mucous membrane, indicating to be efficient for the treatment of VVC.

Orientador : Paulo Cesar Giraldo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T04:29:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gomes_FrancisdeAssisMoraes_D.pdf: 2428494 bytes, checksum: 85449a8447650b89245f0bc730512af9 (MD5) Previous issue date: 2003 / Doutorado

Orientador: Oslei Paes de Almeida / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-14T01:44:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jorge_AntonioOlavoCardoso_D.pdf: 5829466 bytes, checksum: 0cc40b636f18413b58ae7e243c57a5f7 (MD5) Previous issue date: 1991 / Resumo: Neste trabalho foram estudados os efeitos da xerostomia, provocada pela remoção cirúrgica das glândulas salivares maiores, na permanência de Candida albicans e no desenvolvimento de condidose na cavidade bucal de ratos. De 381 ratos Wistar examinados, o gênero Candida foi isolado da boca de 65 animais (17,06%), e destes, 20% foram caracterizados como da espécie C.albicans. Nos experimentos posteriores foram usados apenas os ratos que não apresentavam levedura do gênero Candida na cavidade bucal. A permanência de C.albicans na boca de ratos normais e sialoadenectomizados, foi verificada após três inoculações de 10º células da levedura, em dias consecutivos. Em vários períodos de tempo, até o máximo de 18 semanas, C.albicans foi recuperada em maior quantidade e por tempo mais prolongado na boca dos animais sialoadenectomizados... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: On this work it was studied the effects of xerostomia, provoked by extirpation of the major salivary glands, on the carriage of Candida albicans and development of candidosis in the mouth of rats. Candida gender was isolated from 65 (17,06%) of 381 Wistar rats, and of these isolates, 20% were characterized as C. albicans species... Note:The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Biologia e Patologia Buco-Dental / Doutor em Ciências

Orientadores: Angelica Zaninelli Schreiber, Jiri Borecky / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T01:07:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Faustinoni_ValeriaCristina_M.pdf: 8466570 bytes, checksum: 17c723bb4670efa7f3a5ed6edfeb5dd1 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Diversos quimioterápicos utilizados contra espécies de Candida, apresentam baixa especificidade e toxicidade. O alarmante relato de resistência clínica e microbiológica de drogas antifúngicas tem sido atribuído à presença da cadeia respiratória do metabolismo de energia de Candida. Recentemente, uma proteína desacopladora foi descoberta em Candida parapsilosis. As proteínas desacopladoras estão associadas freqüentemente com a proteção celular contra estresse oxidativo, limitando a super produção de espécies reativas de oxigênio. Sendo assim, para melhor entendimento do metabolismo de energia dos fungos, novos alvos biológicos podem ser explorados sendo um excelente'"caminho de pesquisa para desenvolvimento de terapias. Neste trabalho, nós relatamos um perfil de acúmulo de CpUCP durante as diferentes fases de crescimento da cultura de Candida parapsilosis em meio YEPG. Células de Candida iniciaram o acúmulo de CpUCP depois da velocidade máxima de crescimento. Entretanto, na presença de concentrações sub-inibitórias dos agentes antifiíngicos cetoconazol e fluconazol, o acúmulo de CpUCP foi considerado inibitório. Nossos resultados sugerem que a CpUCP pode ser um novo alvo para drogas antifiíngicas que juntamente com inibidores da oxidase alternativa pode solucionar a necessidade de encontrar novos e potentes medicamentos contra candidiases sistêmicas / Abstract: Current chemotherapy against Candida species suffers a number of deficiencies, as low specificity and toxiecity. Moreover, there is an alarming increase in reports of microbiological and clinical drug resistanees that have been attributed to the presence of branched respiratory pathways in Candida energy metabolism. Reeently, an uncoupling protein was discovered in this pathogenic yeast. Unecupling proteins are also associated frequently with cell protection against oxidative stresses, limiting the overproduction of reactive oxygen species. Thus, better understanding of the fungal energy metabolism could be an excellent way to search for new biological targets that could be exploited for the rational development of improved therapies. Here we report a CpUCP accumulation profile during different Candida parapsilosis culture growth stages in YEPG medium. CpUCP began to accumulate in Candida cells after the culture passed the maximal growth rate. However, in the presence of subinhibitory concentrations of the azolic antifungal agents ketoconazole and fluconazole the CpUCP accumulation was considerably inhibited. Our results suggest that CpUCP may be a new target for antifungic drugs that together with inhibiitors of alternative oxidase can resolve the alarming neeessity to find new and potent medicaments against systemic candidiases / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciencias Biomédicas

Resumo: As leveduras vêm se tornando um dos principais agentes etiológicos das infecções hospitalares encontrados em pacientes com imunossupressão, muitas vezes evoluindo para quadros de sepse fúngica, na qual a mortalidade é elevada. Vários fatores associados diferentes, para o desenvolvimento de candidemia, têm sido estudados. Porém, tem-se dificuldade para escolher o tratamento desses quadros sépticos, uma vez que os métodos utilizados atualmente para verificar sensibilidade necessitam de técnicas trabalhosas e com resultados demorados para uso em laboratórios de rotina médica. Os objetivos do presente trabalho foram: estudar os fatores associados para o desenvolvimento de candidemia, bem como, comparar a eficácia do antifungigrama, realizado por método de disco difusão em ágar 24 e 48 horas e pelo método do Etest®, para o fluconazol, com a metodologia da microdiluição; além de avaliar a viabilidade da identificação das espécies de Candida por metodologia automatizada, dos sistemas Vitek-Biomerieux (Durham NC, USA) e manual, chamada de mista (tubo germinativo e Chromagar Candida (Difco, Sparks, MD-EUA), com a metodologia tradicional de referência. Analisaram-se 98 prontuários retrospectivamente do período compreendido entre os anos de 2000 a 2006, que possuíam amostras viáveis de Candida spp para o estudo. Os fatores associados mais prevalentes para o desenvolvimento de candidemia no total geral dos pacientes foram: o uso de antimicrobianos e antifúngicos com 93,9% e 79,6% respectivamente; a utilização do cateter venoso central com 93,9%; a presença de ventilação mecânica com 73,5% além da nutrição parenteral com 60,2% dos casos. As principais espécies de Candida encontradas foram C. parapsilosis com 37,76% e C. albicans com 33,67%; Candida não-albicans somaram 66,33% dos casos. A C. glabrata apresentou o maior índice de mortalidade do estudo, com 75% dos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Yeasts are becoming some of the most common causes of nosocomial fungal infections that can be found in immunocompromised patients. Such infections many times develop to sepsis, whose mortality rate is high. Many different associated factors for the development of candidemia have been studied, but there is a great difficulty to choose the treatment of such cases because of the current methods of susceptibility testing, which are usually refined and time-consuming techniques for routine use in laboratory medicine. The aim of this study was to evaluate the factors associated with the development of candidemia, and fluconazole efficacy in disk diffusion test and Etest® as well as evaluate the viability of identification of Candida species by automated system Vitek-Biomerieux (Durham NC, USA), manual method (germinative tube) and Chromagar Candida (Difco, Sparks, MD-EUA). Ninety eight medical charts of patients with Candida spp samples available for the study were retrospectively analyzed. The results showed that the most prevalent risk factors to develop candidemia were: antibiotics and antifungal agents (93.9% and 79.6%, respectively); use of venal central catheter (93.9%); the presence of mechanical ventilation (73.5%) and parenteral nutrition (60.2%). The main species of Candida found were C. parapsilosis (37.76%), C. albicans (33.67%) and Candida non albicans (66.33%). C. glabrata showed the best mortality rate (75%), followed by C. tropicalis (57.1%) and C.albicans (54.5%). The disk diffusion test with visual reading and Cecom disk (São Paulo, Brazil) after 24 hours was recommended for utilization in laboratory routine with 81.6% agreement with the reference method. The disk diffusion test with visual reading and Cecom disk after 48 hours was not recommended for utilization in laboratory routine with only 72.4% of agreement with the reference method... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Ligia Niéro-Melo / Coorientador: Paulo José Fortes Villas Boas / Banca: Augusto César Montelli / Banca: Lígia Maria Suppo de Souza Rugolo / Banca: Ana Paula Campanelli / Banca: Antonio Eugênio C. Cardoso de Almeida / Doutor

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:05:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Realizou-se estudo coorte prospectivo em 4 hospitais de São Paulo no período de março de 2002 a fevereiro de 2003. Incluiu-se todos os pacientes que apresentaram hemocultura positiva para C. albicans ou C. parapsilosis. As leveduras foram identificadas ao nível de espécie por sistema comercial e submetidas a testes de susceptibilidade através de microdiluição em caldo (NCCLS). Informações clínicas e epidemiológicas foram colhidas através de ficha clínica padrão e armazenadas em banco de dados (EPI-INFO). Fatores de risco para ocorrência de infecção por C. parapsilosis foram definidos por análise univariada e multivariada. Foram documentados 282 episódios de candidemia, sendo 107 por C. albicans (54,2% homens, mediana 50 anos) e 64 por C. parapsilosis (59,4% homens, mediana 27,5 anos). Neutropenia, quimioterapia e CVC de longa permanência (p=0,01) foram condições de risco para fungemia por C. parapsilosis em análise univariada. Na análise multivariada identificou-se a presença de CVC longa permanência (p=0,01) como fator de risco para esta infecção. A mortalidade foi maior em pacientes com fungemia por C. albicans (61,7% versus 45,3%, p=0,03). Todos os isolados testados foram sensíveis a azólicos e 5-fluorocitosina, com apenas um isolado de C. parapsilosis resistente a anfotericina B. / A prospective cohort study was conducted in 4 hospitals of the city of São Paulo in the period from March 2002 to February 2003. The study included all patients who presented positive blood culture for C. albicans or C. parapsilosis. The yeasts were identified on the species level by a commercial system and subjected to susceptibility tests (NCCLS). Clinical and epidemiological data were collected through a standard case report form (CRF) and stored in a database (EPI-INFO). Risk factors for the occurrence of infection by C. parapsilosis were defined by univariate and multivariate analysis. Our study documented 282 candidemic episodes, 107 of them due to C. albicans (54.2% men, median 50 years) and 64 by C. parapsilosis (59.4% men, median 27.5 years). Neutropenia, chemotherapy and long-term central venous catheter (CVC) (p=0.01) were risk conditions for fungemia by C. parapsilosis in univariate analysis. In the multivariate analysis, the presence of long-term CVC (p=0.01) was identified as the only risk factor for that infection. Mortality rate was higher in patients with fungemia by C. albicans (61.7% versus 45.3%, p=0.03). All isolates tested were sensitive to azoles and 5- fluorocitosin, with only one isolate of C. parapsilosis exhibiting low susceptibility to amphotericinB. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-04-13T19:46:18Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Michellangelo Nunes da Silva.pdf: 2117434 bytes, checksum: d85805b4fffcc0cf9857c274d15e1ca5 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-13T19:46:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Michellangelo Nunes da Silva.pdf: 2117434 bytes, checksum: d85805b4fffcc0cf9857c274d15e1ca5 (MD5) Previous issue date: 2015-02-23 / FACEPE / Leveduras pigmentadas destacam-se nos processos biotecnológicos devido aos metabólitos produzidos com funções fisiológicas importantes, contribuindo com a resposta imune e tratamento de doenças. Assim, com o objetivo de detectar bioprodutos dessas leveduras e avaliar o potencial antifúngico foi desenvolvido além de técnicas in vitro, um modelo experimental de candidíase vaginal. Leveduras pigmentadas da Micoteca URM foram revisadas por critérios taxonômicos clássicos, moleculares e por espectrometria de massa. Testes de sensibilidade envolvendo o bioproduto de leveduras e antifúngicos comerciais foram realizados frente a isolados clínicos de Candida albicans. O isolado com menor concentração inibitória mínima foi selecionado para o modelo experimental. Fêmeas Wistar albinas, com peso médio de 230g, foram mantidas em temperatura controlada, umidade e fotoperíodo. A pre-disposição à infecção ocorreu por antibioticoterapia. A candidiase vaginal foi reproduzida atraves da inoculado de suspensão (106 UFC/mL) e C. albicans e após cinco dias foram tratadas com subproduto por via intravaginal. As leveduras pigmentadas foram autenticadas como Rhodotorula mucilaginosa. Entre outras substâncias, o acido oleico foi produzido com destaque pelas leveduras, sobretudo no isolado URM 6683. Apos os testes foi verificado a sensibilidade dos isolados de C. albicans tanto in vitro quanto no tratamento de candidíase vaginal. A aplicação de especies de Rhodotorula na biotecnologia representa uma importante opção na promoção à saúde. / Pigment include yeasts in biotechnology processes is due to metabolites produced with important physiological functions contributing to the immune response and treatment of diseases. Thus, in order to detect and evaluate byproducts of the yeast antifungal potential was developed in vitro techniques well as an experimental model of vaginal candidiasis. URM Culture Collection of pigmented yeasts were reviewed by classical taxonomic criteria, and molecular mass spectrometry. Sensitivity tests involving byproduct of yeast and commercial antifungal were performed against clinical isolates of Candida albicans. Isolated with lower minimum inhibitory concentration was selected for the experimental model. Albino Wistar rats, weighing 230g, were maintained under controlled temperature, humidity and photoperiod. The pre-disposition to the infection resulted from antibiotic therapy. Vaginal candidiasis is reproduced through the suspension for inoculation (106 CFU/mL) C. albicans and five days later were treated intravaginally byproduct. Pigmented yeasts were certified as Rhodotorula mucilaginosa. Among other substances, oleic acid was produced especially by yeasts, especially in isolated URM 6683. After testing it was found the sensitivity of the isolates of C. albicans both in vitro and in treatment vaginal candidiasis. The application of species of Rhodotorula biotechnology is an important option in health promotion.

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-04-19T17:17:06Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Alice Cristiane Rangel Silveira.pdf: 1302269 bytes, checksum: 8f5b04b6d5f0a0232c8c70de8f20da1d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-19T17:17:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Alice Cristiane Rangel Silveira.pdf: 1302269 bytes, checksum: 8f5b04b6d5f0a0232c8c70de8f20da1d (MD5) Previous issue date: 2013-02-19 / CNPQ / Infecções fúngicas constituem um problema crescente em pacientes críticos como os admitidos em unidades de terapia intensiva cardiológica (UTIc). Os agentes etiológicos dessas infecções podem expressar fatores de virulência que propiciem sua instalação e disseminação, como a capacidade de aderência e formação de biofilme. Assim, este trabalho teve como objetivo verificar a ocorrência de infecções fúngicas em pacientes internados em UTIc de hospital público de referência em cardiologia do estado de Pernambuco/Brasil, caracterizar os agentes etiológicos quanto à capacidade de aderência a células epiteliais bucais e formação de biofilme e relatar dois casos de infecção fúngica. Foram realizadas coletas de diversas amostras clínicas de pacientes de UTIc com suspeita de infecção fúngica e procedeu-se à investigação laboratorial no Laboratório de Micologia Médica da Universidade Federal de Pernambuco/Brasil. Do total de 70 pacientes avaliados, dezesseis (22,85%) desenvolveram infecção fúngica. Destes, oito apresentaram candidemia, cinco infecção superficial, dois infecção urinária, um apresentou candidemia associada à infecção urinária. O agente mais frequente foi Candida albicans (5) seguido de C. tropicalis (4), C. parapsilosis (3), C. krusei (3), Malassezia sp. (2), C. guilliermondii (1). Também foi isolada C. albicans em ponta de catéter de um caso de candidemia causado pela mesma espécie de levedura. De um total de 19 isolados obtidos, em dez (52,63%) foi evidenciada a capacidade de forte aderência celular, sendo oito obtidos em amostras de sangue. Formação de biofilme intermediária a forte foi revelada em 14 (73,68%) isolados, onze provenientes de amostras de sangue. Candidíase prevalece como a infecção fúngica mais frequente em UTIc, e os agentes etiológicos dessas infecções estão associados a uma maior virulência por frequentemente apresentarem alta capacidade de aderência a células epiteliais bucais e formação de biofilme moderada a forte. / Fungal infections are an increasing problem in critically ill patients as those admitted to cardiology intensive care units (CICU). The etiologic agents of these infections can express virulence factors that facilitate their installation and dissemination as the ability of adherence and biofilm formation. Thus, this study aimed to analyze the occurrence of fungal infection in patients admitted to CICU of public referral hospital in cardiology of the state of Pernambuco/Brazil, characterize the etiologic agents with respect to their ability of adherence to oral epithelial cells and biofilm formation and report two cases of fungal infection. Various clinical specimens were collected from CICU patients with suspected fungal infection and the laboratory investigation was conducted in the Medical Mycology Laboratory of the Federal University of Pernambuco/ Brazil. Of the total 70 patients, 16 (22.85%) developed fungal infection. Of these, eight had candidemia, five superficial infections, two urinary tract infection and one had candidemia associated with urinary tract infection. The most frequent agent was Candida albicans (5) followed by C. tropicalis (4), C. parapsilosis (3), C. krusei (3), Malassezia sp. (2) C. guilliermondii (1). Was also isolated C. Albicans from catheter tip in a case of candidemia caused by the same species of yeast. Of a total of 19 isolates, 10 (52.63%) were strongly adherent to epithelial cells, eight obtained from blood samples. Biofilm formation was revealed moderate to strong in 14 (73.68%) isolated from 11 blood samples. Candidiasis prevails as the most common fungal infection in CICU and the etiologic agents of these infections are associated with greater virulence often associated to high capacity of adherence to oral epithelial cells and moderate to strong biofilm formation.

Resumo: Embora a etiologia da estomatite por prótese total seja frequentemente associada à Candida albicans, a literatura também indica que a infecção pode ser associada à outros fatores. Neste ínterim, o objetivo deste estudo foi avaliar a correlação entre a prevalência da estomatite por prótese total, o grupo sanguíneo ABO, presença de Candida ssp. e a higienização da prótese total. Foram avaliados 30 pacienttes (média de idade de 61,13 +-11,96 anos) portadores de prótese total superior, sendo que 23 eram do sexo feminino. O exame clínico incluiu a avaliação da mucosa do palato e a avaliação da higienização da prótese total. A qualificação da higiene da prótese total foi feita por meio da visualização do biofilme com o uso de evidenciadores de placa, nas superfícies internas das próteses. As amostras micológicas foram obtidas da mucosa do palato (região central), da superfície interna da prótese total (região central) e do dorso da língua, por meio da técnica de impressão ("imprint"), utilizando discos de filtro de papel, colocados diretamente em placas de cultura contendo meio seletivo CHROMagar Candida. As espécies isoladas foram identificadas por meio da prova de produção de clamidoconídeo e pelo sistem API 20C AUX, além da pré-identificação fornecida pelo uso do meio seletivo. Amostra sanguínea foi coletada para determinação do tipo sanguíneo do paciente (sistema ABO e Rh). As análises estatísticas dos resultados foram feitas utilizando testes não paramétricos (Spearman, Mann-Whitney e Kruskal-Wallis). Em nosso estudo, 53,33% dos pacientes apresentaram estomatite por prótese total e a identificação de Candida ssp. foi positiva para 80% dos pacientes. O grau de higiene das próteses... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Although the etiology of denture stomatitis has been commonly related to Candida albicans, some previous studies indicate that the infection could be associated to other factors. The aim of this study was to evaluate the correlation between the prevalence of denture stomatitis, ABO blood groups, mycological status and denture cleanliness. Thirty patients with mean age of 61.13+-11.96 yeas being 23 female using complete maxillary dentures were investigated. Oral examinations included clinical diagnosis of denture stomatitis as well as the evaluation of denture cleanliness. The denture cleanliness was assessed using a stain as plaque detector in the fitting denture surface. The yeast cultures from the palatal mucosa, fitting denture surface and dorsum of the tongue were obtained using an imprint at CHROMagar Candida. The determinations of the species of the isolates was performed by chlamydospore formation and sugar assimilation using API 20C AUX. Venous blood was collected for ABO blood group determination. Spearman correlation, non-parametric t test and analysis of variance were performed to analyse the data. In this study, 53.33% of the patients presented denture stomatitis and the identification of Candida spp. was positive in 80% of the samples. The denture clean liness was classified as poor in 93.33% of the dentures. A statistical correlation was found between yeast detection and denture stomatitis (r=0.8250; p<0,0001) and between Candida ssp. and denture cleanliness (r=0,4666; p=0,0248). Although, majority of the patients were from blood group O no statistical correlation was found between clinical variables and mycological results. Candida albicans was the most frequent yeast isolated (60.94%) followed by C. tropicalis, C. glabrata... (Complete abstract, click electronic address below) / Orientador: Maria Regina Sposto / Coorientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Banca: Carlos Eduardo Vergani / Banca: Jacks Jorge Junior / Mestre