Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-03-09T13:42:06Z No. of bitstreams: 1 Alonso Pereira Silva Filho.pdf: 1874543 bytes, checksum: dc52de2aa0aaefcda612dca45529fa68 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-09T13:42:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alonso Pereira Silva Filho.pdf: 1874543 bytes, checksum: dc52de2aa0aaefcda612dca45529fa68 (MD5) Previous issue date: 2016-02-17 / The objective was to study the effect of seasonality on the energy profile, protein, hormone and mineral Girolanda cows during the last two months of pregnancy to the first two months of lactation in a property located in the municipality of Garanhuns, in the Agreste Pernambuco region. Therefore, we used 39 females, divided into groups by comparing the seasonal influence of the rainy season and dry and the metabolic profile among otherwise healthy and sick cows. The experiment took place from collections made in the period 60 days before delivery (60DBD) 40DBD, 20DBD, 10DBD, parturition day, and 10 days postpartum (10DPP), 20DPP, 40DPP, 60DPP. Metabolites were analyzed hormone (insulin and cortisol), energy (glucose, fructosamine, NEFA and β-hydroxybutyrate), protein (total protein, albumin, globulin and urea) and minerals (CaT, P, Mg, K, Na and Cl). The variables studied were interpreted by analysis of variance at 5% probability. The behavior of the hormones insulin and cortisol were similar, observing the highest values on the day of delivery, however, the dry season showed lower values. Analyzing the energy profile, it was through low fructosamine values and glucose, in addition to high concentrations of NEFA and β-hydroxybutyrate increased energy mobilization in the dry season and in the group of animals sick during childbirth. The protein profile revealed by the total protein time effect, whose lowest values were recorded on the day of delivery, albumin concentrations were lower in the dry season, and globulins showed up high in the group of cows had health disorders. With regard to minerals the total calcium, magnesium and chlorine showed lower levels from the initial period of the collections in the sick group of animals and after parturition, it was found lower concentrations in the group of the rainy season, due to higher milk production, which reflected in greater demand for these minerals. Seasonality is an important risk factor for dairy cows, especially those of higher production in the dry season, in Pernambuco Agreste region has lower availability of quality forage. Thus the process of physiological adaptation of the animals, especially during the transition period, is compromised, favoring the occurrence of metabolic disorders. / Objetivou-se, estudar o efeito da sazonalidade sobre o perfil energético, proteico, hormonal e mineral de vacas Girolandas durante os dois últimos meses de gestação até os dois primeiros meses de lactação em uma propriedade localizada no município de Garanhuns, na região do Agreste Pernambuco. Para tanto, utilizou-se 39 fêmeas, distribuídas em grupos, comparando a influência sazonal entre as épocas de chuva e seca e o perfil metabólico entre vacas hígidas e enfermas. O delineamento experimental ocorreu a partir das coletas realizadas nos períodos 60 dias antes do parto (60DAP), 40DAP, 20DAP, 10DAP, dia do parto, e 10 dias pós-parto (10DPP), 20DPP, 40DPP, 60DPP. Os metabólitos analisados foram os hormonais (insulina e cortisol), energéticos (glicose, frutosamina, AGNEs e β-hidroxibutirato), proteicos (proteína total, albumina, globulina e ureia) e minerais (CaT, P, Mg, K, Na e Cl). As variáveis estudadas foram interpretadas por meio de análise de variância ao nível de 5% de probabilidade. O comportamento dos hormônios insulina e cortisol foram análogos, observando os maiores valores no dia do parto, porém, a época de estiagem revelou valores inferiores. Analisando o perfil energético, verificou-se por meio dos baixos valores de frutosamina e glicose, além das concentrações elevadas de AGNEs e β-hidroxibutirato uma maior mobilização energética no período de estiagem e no grupo dos animais enfermos durante o periparto. O perfil proteico revelou, pelas proteínas totais, efeito de momento, cujos menores valores foram verificados no dia do parto, as concentrações de albumina foram inferiores no período de estiagem, e as globulinas apresentaram-se elevadas no grupo das vacas que apresentaram distúrbios sanitários. Com relação aos minerais cálcio total, magnésio e cloro apontaram níveis inferiores desde o período inicial das coletas no grupo de animais enfermos, e no grupo da época de chuva, constatou-se, após o parto concentrações inferiores devido a maior produção de leite, o que refletiu em uma maior demanda por esses minerais. A sazonalidade representa um fator de risco importante para as vacas leiteiras, especialmente as de maior produção, em que a época de estiagem, na região do Agreste Pernambucano, apresenta menor disponibilidade de forragem de qualidade. Com isso o processo de adaptação fisiológica dos animais, sobretudo durante o período de transição, fica comprometido, favorecendo a ocorrência de transtornos metabólicos.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-03-09T14:11:37Z No. of bitstreams: 1 Priscilla Bartolomeu de Araujo.pdf: 1359264 bytes, checksum: 748f6b0ea3345a96cd11610242db1af1 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-09T14:11:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Priscilla Bartolomeu de Araujo.pdf: 1359264 bytes, checksum: 748f6b0ea3345a96cd11610242db1af1 (MD5) Previous issue date: 2016-02-24 / The present objective was to perform a clinical and histopathological study to investigate the serum levels of estradiol, progesterone and prolactin, as well as the gene expression of the estrogen receptors α and β, and progesterone in bitches with mammary tumors. Sixty bitches of various ages and breeds were selected: 30 with mammary neoplasia and 30 healthy bitches. Fragments of the tumors were collected for histopathology and for investigation of the gene expression of the hormone receptors. Serum samples were also collected for measurement of serum hormones and Ca15.3. Malignant neoplasms were more frequent (76.6%), with a greater number of carcinosarcomas (36.7%). The frequency of benign tumors was 23.3%. Mammary tumors were mostly multiple, larger than 5 cm, and located in the abdominal mammary glands. Owners reported that most dogs had not shown signs of pseudocyesis, had not had a prior pregnancy, nor had they used contraceptives or been spayed. Regarding serum concentrations of the Ca15.3 marker, there was no difference when comparing bitches with neoplasia and healthy bitches, or when comparing the other groups. Bitches with malignant neoplasms had higher levels of estradiol and lower levels of prolactin. Both malignant and benign neoplasms expressed hormone receptors, and there was no difference in expression between them. There was also no difference in prognostic factors between groups. Serum levels of estradiol increased significantly with clinical staging of the disease. There was also a moderate negative correlation between serum levels of estradiol and prolactin. It is concluded that the hormonal influence is evident in cases of canine mammary neoplasms, especially estrogens, which seem to be most associated with malignant characteristics. The influence of hormones is reinforced by the presence of hormone receptors even in different tumor types, which could suggest the use of hormone therapy as an alternative. However, quantification of Ca15.3 did not show any results that made its use possible as a tool for patient monitoring and evaluation. / Objetivou-se realizar um estudo clínico e histopatológico e investigar os níveis séricos de estradiol, progesterona e prolactina, e a expressão gênica dos receptores de estrógeno α e β, e de progesterona em cadelas portadoras de tumores mamários. Foram utilizadas 60 cadelas de diferentes idades e raças, sendo 30 cadelas portadoras de neoplasias mamárias e 30 cadelas hígidas. Fragmentos do tumor foram coletados para realização do exame histopatológico, e para investigação da expressão gênica dos receptores hormonais. Coletou-se ainda amostras de soro para realização das dosagens hormonais séricas e de Ca15.3. As neoplasias malignas foram mais frequentes (76,7%), destacando-se o carcinossarcoma (36,7%). A frequência dos tumores benignos foi de 23,3%. As neoplasias mamárias foram em sua maioria múltiplas, maiores que 5 cm, localizadas nas mamas abdominais. Os tutores relataram que 56,7% das cadelas não apresentaram sinais de pseudociese, 63,3% não haviam passado por gestação anterior, 76,7% não haviam feito uso de anticoncepcionais, e 90% não haviam sido castradas. Quanto às dosagens séricas do marcador Ca15.3 não foi encontrada diferença quando comparadas as cadelas portadoras de neoplasias e cadelas hígidas, ou quando comparados os demais grupos. As cadelas portadoras de neoplasias malignas apresentaram maiores níveis de estradiol e menores níveis de prolactina. Tanto os tumores malignos como os benignos expressaram receptores hormonais, não havendo diferença na expressão entre eles ou entre os outros fatores prognósticos. Os níveis séricos de estradiol aumentaram significativamente com o estadiamento clínico da doença. Verificou-se também moderada correlação negativa entre os níveis séricos de estradiol e prolactina. Conclui-se que a influência hormonal é evidente nos casos de neoplasias mamárias caninas, sobretudo dos estrógenos, que parecem estar mais associados às características de malignidade. Soma-se ainda a presença dos receptores hormonais, mesmo em tipos tumorais distintos, o que pode propor a utilização da terapia hormonal como alternativa. Já a dosagem de Ca15.3 não mostrou resultados que tornassem possível sua utilização como ferramenta para acompanhamento e avaliação das pacientes.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-04-10T14:20:55Z No. of bitstreams: 1 Jessica Martins de Andrade.pdf: 635171 bytes, checksum: 2f6f05dd151d58b1e2e25d5e047d600c (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-10T14:20:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jessica Martins de Andrade.pdf: 635171 bytes, checksum: 2f6f05dd151d58b1e2e25d5e047d600c (MD5) Previous issue date: 2018-02-08 / Listeria monocytogenes is a relevant pathogen in contaminations of foods ready-to-eat, as it is the etiological agent responsible for listeriosis. The objective of this study was to investigate L. monocytogenes in sliced hams and to evaluate the sensitivity to sanitizers. 40 samples of sliced hams were purchased in supermarkets in the city of Recife - PE, nine from large supermarkets and 31 from medium sized supermarkets. In isolation, 25g of each sample was enriched in Fraser Demi Broth and Fraser Broth and seeded in Listeria Selective Agar according to Ottaviani and Agosti. The evaluation of the biofilm formation capacity and the evaluation of the disinfectants on the biofilms of L. monocytogenes in formation and consolidated in vitro was carried out in microdilution plates of polystyrene. Chlorine at 5% concentration and 10% quaternary ammonia were used. The presence of L. monocytogenes in 22.22% (02/09) of the samples collected in large supermarkets in the city and 25.8% (08/31) in medium-sized supermarkets was identified. When submitted to the in vitro biofilm formation test, two isolates were able to form biofilm, both classified as strong formers. In the biofilms in formation, treated with the sanitizers, the two bacteria presented moderate adherence to chlorine and already in relation to the quaternary ammonia the isolate coming from the large supermarket had poor adherence and the one belonging to the medium-sized supermarket had no adhesion. The consolidated biofilms presented a reduction in adhesion to both disinfectants, with a reduction of 75.44% and 79.76% in the idolates of large and medium-sized supermarkets, respectively. The action of quaternary ammonia compared to them represented a decrease of 64.84% and 66.13% of biofilms. The presence of L. monocytogenes, especially of strains capable of forming biofilms, in sliced hams is a relevant factor in single health. A more rigorous inspection is required in establishments regarding the use of adequate sanitizers in the hygiene process, as well as the correct application of them and the constant education of food handlers. / Listeria monocytogenes é um patógeno relevante nas contaminações de alimentos prontos para consumo, pois é o agente etiológico responsável pela listeriose. Objetivou-se com esse estudo realizar a pesquisa de L. monocytogenes em presuntos fatiados e avaliar a sensibilidade aos sanitizantes. Foram adquiridas 40 amostras de presuntos fatiados em supermercados na cidade de Recife - PE, sendo nove provenientes de supermercados de grande porte e 31 de supermercados de médio porte. No isolamento, 25g de cada amostra foi enriquecida em Caldo Demi Fraser e Caldo Fraser e semeadas em Agar Seletivo Listeria segundo Ottaviani e Agosti. A avaliação da capacidade de formação de biofilme e a avaliação dos desinfetantes sobre os biofilmes de L. monocytogenes em formação e consolidados in vitro foi realizada em placas de microdiluição de poliestireno. Foram utilizados cloro na concentração de 5% e amônia quaternária a 10%. Identificou-se a presença de L. monocytogenes em 22,22% (02/09) das amostras adquiridas em supermercados de grande porte da cidade e em 25,8% (08/31) nos supermercados de médio porte. No teste de formação de biofilmes in vitro, dois isolados foram capazes de formar biofilme, ambos classificadas como fortes formadores. Nos biofilmes em formação, as duas bactérias apresentaram aderência moderada frente ao cloro e já em relação a amônia quaternária o isolado proveniente do supermercado de grande porte apresentou fraca aderência e o pertencente ao supermercado de médio porte não apresentou aderência. Os biofilmes consolidados apresentaram redução da aderência frente a ambos desinfetantes, obtendo-se com o cloro uma redução de 75,44% e 79,76% nos isolados dos supermercados de grande e médio porte respectivamente. A ação da amônia quaternária frente aos mesmos representou uma diminuição de 64,84% e 66,13% dos biofilmes. A presença de L. monocytogenes, principalmente das cepas com capacidade de formar biofilmes, em presuntos fatiados é um fator relevante na saúde única. É necessária uma fiscalização mais rigorosa, nos estabelecimentos, referente a utilização de sanitizantes adequados no processo de higienização, bem como a correta aplicação dos mesmos e a constante educação dos manipuladores de alimentos.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-04-12T12:59:17Z No. of bitstreams: 1 Marilia de Andrade Santana.pdf: 470113 bytes, checksum: 3a12656944ce7d187e74678a0ea73600 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-12T12:59:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marilia de Andrade Santana.pdf: 470113 bytes, checksum: 3a12656944ce7d187e74678a0ea73600 (MD5) Previous issue date: 2017-08-31 / Visceral Canine Leishmaniasis (LVC) is a chronic and systemic infectious disease caused in Brazil by a protozoan of the Leishmania (Leishmania) infantum chagasi species, and is transmitted by blood-sucking insects of the species Lutzomyia longipalpis, on the occasion of blood repellent. It is considered an immunomediated disease due to the characteristic of the parasite. In addition, oxidative stress has been studied as one of the factors involved in the immunopathogenesis of the disease. In this study, the serum levels of Oxygen Reactive Species (EROs) of dogs naturally infected with Leishmania (Leishmania) infantum chagasi at Moment zero (M0), and at Moment three (M3) were evaluated. 63.6% of the animals showed a decrease in serum ERO levels after 3 months of treatment, the dogs in this group also showed visible clinical improvement. In 36.4% of the animals, these ROS levels remained high and the patients did not show clinical improvement. / A Leishmaniose Visceral Canina (LVC) é uma doença infecciosa, crônica e sistêmica, causada no Brasil por um protozoário da espécie Leishmania (Leishmania) infantum chagasi , sendo transmitida por insetos hematófagos da especié Lutzomyia longipalpis, por ocasião do repasto sanguíneo. É considerada uma doença imunomediada devido a característica do parasito além disso, o estresse oxidativo vem sendo estudado como um dos fatores envolvidos na imunopatogenese da doença. Diante disso, nesse estudo foram avaliados os níveis séricos de Espécies Reativas ao Oxigênio (ERO’s) de cães naturalmente infectados com Leishmania (Leishmania) infantum chagasi no Momento zero (M0), e no Momento três (M3). 63,6% dos animais apresentaram diminuição dos níveis séricos de ERO’s depois de 3 meses de tratamento, os cães desse grupo também apresentaram visível melhora clínica. Em 36,4% dos animais, esses níveis de ERO’s permaneceram-se altos e os pacientes não demonstraram melhora clínica.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-04-20T12:07:56Z No. of bitstreams: 1 Fernando Leonel da Silva.pdf: 2355971 bytes, checksum: a7fa512ae0e00441a67dad424547a342 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-20T12:07:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fernando Leonel da Silva.pdf: 2355971 bytes, checksum: a7fa512ae0e00441a67dad424547a342 (MD5) Previous issue date: 2017-08-07 / PDE inhibitors have been used for the treatment of erectile dysfunction, but their therapeutic potential is still unknown and little explored, among them Tadalafil, its daily use has been investigated in clinical trials and demonstrated to be a therapy capable of inhibiting inflammatory chains, the analysis of the heat applied directly to the testis has provided new information on the triggering mechanisms of inflammation and possible heat damage to tissues. The objective of this study was to evaluate the effect of tadalafil on the recovery of the testicular parenchyma of male Wistar rats, submitted to testicular thermal stress, for which 54 Wistar rats were used. Randomly distributed in 3 groups, where the control group suffered thermal insult and treated with intraperitoneal saline and the group treated with tadalafil at a daily intraperitoneal dose of 0.9 mg / kg-1 and 1.8 mg / kg-1. These animals were submitted to the same experimental condition, submitted to euthanasia procedures and perfused intraperitoneally. Oxidative stress of liver and spleen, cytokines IL-6 and TNF-α of splenic acid, plasma testosterone levels and histopathological analysis of the testis were measured. Body or testicular weight was not influenced by the administration of tadalafil, but was effective in reducing plasma testosterone levels on all evaluated days, also responsible for inhibiting the formation of NO in the liver and spleen. Low-dose Tadalafil exerted an anti-inflammatory effect on the levels of TNF-α (decreasing) and IL-6 (increase) in the splenic parenchyma during the experimental period. Tadalafil delayed the thermal stress lesions in the 7-day group with the two doses applied, and 15 days with a dose of 0.9 m / kg post-stress in the testicular parenchyma of rats, evidenced on histopathological analysis. / Drogas inibidoras das PDE's tem sido utilizada para tratamento da disfunção erétil, porém seu potencial terapeutico ainda é desconhecido e pouco explorado, dentre elas o Tadalafil, seu uso diário foi investigado em ensaios clínicos e demonstrado ser uma terapia capaz de inibir cadeias inflamatórias, a análise do calor aplicado diretamente sobre o testículo tem fornecido novas informações sobre os mecanismos desencadeadores da inflamação e dos possíveis danos do calor aos tecidos. O objetido deste estudo foi avaliar o efeito do tadalafil na recuperação do parênquima testicular de ratos Wistar machos, submetidos ao estresse térmico testicular, para tal foram utilizados 54 ratos, Wistar. Distribuídos aleatoriamente em 3 grupos, onde grupo controle sofreu injúria térmica e tratado com solução salina intraperitoneal e os grupo tratados com tadalafil em dose diária intraperitoneal de 0.9 mg/kg-1 e 1.8 mg/kg-1. Estes animais foram submetidos a mesma condição experimental, esubmetidos aos procedimentos de eutanásia e perfundidos intraperiotenalmente. Foram dosados estresse oxidativo de Fígado e Baço, A citocinas IL-6 e TNF-α de técido esplênico, níveis de testosterona plasmático e analise histopatológica dos testículos. O peso corporal ou testicular não foi influenciado pela administração de tadalafil, no entando foi eficaz na redução nos níveis de testosterona plasmático em todos os dias avaliados, responsável também por inibir formação de NO no fíagado e baço. O Tadalafil em doses baixas exerceu efeito anti-inflamatório sobre os níveis de TNF-α (diminuindo) e IL-6 (aumento) no parênquima esplênico durente o período experimental. O Tadalafil retardou as lesões provocadas pelo estresse térmico no grupo de 7 dias com as duas doses aplicadas, e 15 dias com dose de 0.9 m/kg pós-estresse no parênquima testicular de ratos, evidenciadas sobre análise histopatológica. Sendo Efizaz e promissor fármaco, principalmente em lesões agudas, necessitando de mais estudos para comprovação e melhor compreensão.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-04-20T13:31:52Z No. of bitstreams: 1 Jonatas Campos de Almeida.pdf: 1633673 bytes, checksum: 83b144a500fed3b24283ce76a90b4880 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-20T13:31:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jonatas Campos de Almeida.pdf: 1633673 bytes, checksum: 83b144a500fed3b24283ce76a90b4880 (MD5) Previous issue date: 2017-05-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The aim of this study was to investigate the occurrence of pathogens of interest in One Health in captive and free-range wild canids from northeastern Brazil. Biological samples (stool, fur and blood) were collected from 25 crab-eating foxes (Cerdocyon thous) from four states: Alagoas, Bahia, Paraíba, Pernambuco. From these samples was possible to obtain the first Toxoplasma gondii isolate (genotype #13) in crab-eating fox; Ctenocephalides canis and felis, Sarcoptes scabiei, Malassezia pachidermatis in animals from Paraíba and also one co-infection case by Microsporum gypseum; isolation of Clostridium perfringens – type A in five stool samples (one of them positive to beta-2 toxin) and Clostridium difficile in two stool samples. In molecular (PCR) and serological analysis (MAT for T. gondii, NAT for N. caninum, ELISA for L. chagasi and MAT for Leptospira spp) were observed frequencies of anti-T. gondii antibodies of 50% and 29.41% in captive and free-range wild canids, respectively, frequencies of anti-N. caninum antibodies of 62.50% and 23.52% in free-range and captive wild canids, respectively, frequency of anti-L. chagasi antibodies of 4.0% in captive wild canids. There were no serum samples positive for Leptospira, as well as absence of positive PCR for the pathogens analyzed in the blood. The results of this study demonstrate the circulation of pathogens with an impact on One Health. Studies involving wild animals and infectious diseases should be performed to provide data on the epidemiology of these diseases and to guide surveillance and control measures. / O objetivo do estudo foi investigar a ocorrência de patógenos de interesse em saúde única em canídeos silvestres de cativeiro e de vida livre na região nordeste do Brasil. Amostras biológicas (fezes, pelos, sangue) foram coletadas de 25 cachorro-do-mato (Cerdocyon thous) de quatro estados: Alagoas, Bahia, Paraíba e Pernambuco. A partir dessas amostras foi possível obter o primeiro isolado de Toxoplasma gondii (genótipo #13) em cachorro-do-mato; Ctenocephalides canis e felis, Sarcoptes scabiei, Malassezia pachidermatis em animais da Paraíba, além de um caso de co-infecção com Microsporum gypseum; isolamento de Clostridium perfringens – tipo A em cinco amostras de fezes (uma amostra positiva para toxina beta-2) e Clostridium difficile em duas amostras de fezes. Na análise molecular (PCR) e sorológica (MAT para T. gondii, NAT para N. caninum, ELISA para L. chagasi e MAT para Leptospira sp) foram observadas frequências de anticorpos anti-T. gondii de 50% e 29,41% em canídeos silvestres de cativeiro e de vida livre, respectivamente, frequências de anticorpos anti-N. caninum de 62,50% e 23,52% em canídeos silvestres de vida-livre e cativeiro, respectivamente e frequência de anticorpos anti-L. chagasi de 4,0% em canídeos silvestres de cativeiro. Não houve amostras de soro positivas para Leptospira, bem como ausência de PCR positiva para os patógenos analisados no sangue. Os resultados deste estudo demonstram a circulação de patógenos de impacto em saúde única. Estudos envolvendo animais silvestres e doenças infecciosas devem ser realizados para fornecer dados epidemiológicos sobre essas doenças e orientar ações de vigilância e controle.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-04-20T13:57:02Z No. of bitstreams: 1 Patyanne Carvalho Correia.pdf: 1733331 bytes, checksum: 0fd1c13c3c6c63ed674e16d388765579 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-20T13:57:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Patyanne Carvalho Correia.pdf: 1733331 bytes, checksum: 0fd1c13c3c6c63ed674e16d388765579 (MD5) Previous issue date: 2017-02-24 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / This study aimed to evaluate the production, purification characterization of proteases produced by filamentous fungi isolated from Caatinga. 32 strains of filamentous fungi were previously selected from the best protease producer and the best culture conditions for the microorganisms were determined in shake flasks using a factorial design 23, the influence of the independent variables were evaluated: glucose and soy concentrations, and pH on proteinase activity. Based on the obtained results from the fermentation in shake flasks, a a factorial design 22 was performed in a bioreactor type stirred tank of 1.5L to verify the influence of the independent variables: agitation and aeration in the protease production. The resulting metabolic liquid from the fermentation was used in the following purification steps using aqueous two phases system (ATPS) and chromatographic methods. Another protease with fibrinolytic activity was studied and proprieties analyzed effect on coagulation, stability with solvents and the structure on different pH and fibrinogenolytic activity.The maximum protease production (69.77 U/ml) for shake flasks was obtained under the following conditions: 6.0 of pH, glucose 0.5% and soy 3%. On stirred-tank bioreactor maximum protease activity it was obtained 61.19 U/mL after 72 h of cultivation, under conditions of agitation and aeration at 450 rpm and 0.5 vvm. The protease characterization revealed that the optimum temperature of the enzyme was 50 °C and the activity was 75% when incubated for 3 hours at 20, 30 and 40 °C. The enzyme activity was slightly inhibited by metal ions (ZnSO4 and CuSO4) and phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF), indicate be a serine protease. The enzyme was parcial purified by 24% (w/w) PEG 400 and 20% (w/w) citrate system, at pH 6 the proteases preferably partitioned to the top phase, resulting in 146% recovery and a 1.6-fold increase in specific activity. The ATPS combined with varied chromatography methods reached 8 fold purified and a 12.5% recovery. The fibrinolytic protease on coagulation time was analyzed, a prolonged effect over time was observed in the activated partial thromboplastin time (APTT), indicating an inhibition of intrinsic pathway coagulation and the prothrombin time (PT) was less sensitive to time variation, even at high enzymatic concentration. The fibrinolytic protease was more stable in the presence of ethyl acetate solvents and less stable in the presence of ethanol. When fibrinogenolytic activity was evaluated, a preferential action of the fibrinolytic protease on the Aα and Bβ chains occurred. The fibrinolytic protease presented a structural disorder at pH scales with higher acidity and alkalinity. The two fungal enzymes studied present potential for application in the biotechnology industry. / O presente estudo objetivou avaliar a produção, purificação e caracterização de proteases produzidas por fungos filamentosos isolados da Caatinga. Foram previamente utilizados 32, sendo selecionada a linhagem com maior produção de proteases em condições de cultivo em frascos agitados utilizando planejamento fatorial 23, foi avaliado influência das variáveis independentes: concentração de glicose, concentração de soja e pH. Com base nos resultados obtidos na fermentação em frascos agitados foi realizado em biorreator tipo tanque agitado de 1,5L, avaliando a influência das variáveis independentes: velocidade de agitação e aeração na produção da protease. O líquido metabólico resultante das fermentações foi utilizado nas etapas de purificação utilizando o sistema de duas fases aquosas (SDFA), métodos cromatográficos por troca iônica e gel filtração. Uma segunda protease com atividade fibrinolítica. foi utilizada e foram analisadas as propriedades em termos de coagulação, estabilidade da enzima na presença de solventes orgânicos e estrutural em diferentes pH, e atividade fibrinogenolíta. Em frascos agitados a produção máxima de protease (69,77 U/mL) foi obtida pH 6,0, 0,5% de glicose e 3% de soja, enquanto em biorreator nas condições de agitação e aeração iguais à 450 rpm e 0,5 vvm, a atividade máxima de protease foi de 61,19 U/mL após 72h de cultivo. A protease revelou uma temperatura ótima de 50°C e valores de atividade cerca de 75% quando incubada por 3h a 20, 30 e 40°C, respectivamente. A atividade enzimática foi fracamente inibida pelos íons metálicos ZnSO4 e CuSO4 e por fluoreto de fenilmetilsulfonil (PMSF), sugerindo ser uma serino protease. A protease foi parcialmente purificada a partir do sistema 24% (m/m) polietilenoglicol (PEG) 400 e 20% (m/m) citrato em pH 6, o que assegurou um fator de purificação de 1.6 e 146% de recuperação, na fase rica em (PEG). Associado o sistema a cromatografia por troca iônica e gel filtração foi possível alcançar uma purificação de 8 e rendimento de 12,5%. Quando analisado o efeito da protease fibrinolítica sobre o tempo de coagulação, observou-se no tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPa) um efeito prolongado com o passar do tempo, sugerindo uma inibição da via intrínseca.Com relação ao tempo de protrombina (TP), esse foi menos sensível a variação do tempo, mesmo em concentração enzimática elevada. A protease fibrinolítica apresentou-se mais estável na presença do solvente acetato de etila e menos estável na presença de etanol. Quando foi avaliada a atividade fibrinogenolítica ocorreu uma ação preferencial da protease fibrinolítica sobre as cadeias Aα e Bβ. A protease fibrinolítica apresentou uma desordem estrutural a valors extremos de pH. As duas enzimas fúngicas estudadas apresentam potencial para aplicação na indústria biotecnológica.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-05-03T14:16:07Z No. of bitstreams: 1 Marcus Vinicius Dias Falcao.pdf: 1474619 bytes, checksum: 0175beba567d6fd2060ec9dd863c927b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-03T14:16:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcus Vinicius Dias Falcao.pdf: 1474619 bytes, checksum: 0175beba567d6fd2060ec9dd863c927b (MD5) Previous issue date: 2017-02-23 / Brucellosis is an infectious disease with a chronic characteristic caused by the bacteria Brucella spp. The aim of this study was to develop and standardize a Western Blotting technique for use in bovine brucellosis serodiagnosis. Two groups were used: group I with 60 samples of true positive and true negative animals being 30 positive and 30 negative in CFT and group II with 383 field samples being 90 positive and 293 negative in CFT. The analysis using WB technique revealed the molecular weight ≤20 kDa as the most characteristic and reactive area for identification and separation of animals with natural infection from vaccinated. The sensitivity and specificity of WB as compared to AAT were 93% and 99% respectively, and when compared to TFC respectively were 97% and 98%. The WB standardized in this study may be used as confirmatory test, because it is more sensitive and specific with capacity for differentiation between naturally infected and vaccinated animals. / A brucelose é uma doença infectocontagiosa de caráter crônico causada por bactérias do gênero Brucella spp. Objetivou-se desenvolver e padronizar uma técnica de Western Blotting para uso no sorodiagnóstico da brucelose bovina. Dois grupos foram utilizados: o grupo I com 60 amostras de animais verdadeiros positivos e verdadeiros negativos, sendo 30 positivas e 30 negativas no TFC e o grupo II com 383 amostras de amostras de campo, sendo 90 positivas e 293 negativas na TFC. O resultado da análise das amostras no Western Blotting revelou banda com peso molecular ≤20 kDa como sendo a banda mais reativo e propriedade para identificação e separação de animais com infecção natural dos animais vacinados. A sensibilidade e especificidade do WB quando comparadas com o AAT foi, respectivamente, 93% e 99%, e quando comparadas com a TFC foi respectivamente, 97% e 98%. O WB padronizado neste estudo poderá ser empregado teste confirmatório, pois se trata de um teste mais sensível e específico e com capacidade de diferenciação entre animais naturalmente infectados e vacinados.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-05-03T14:46:00Z No. of bitstreams: 1 Ellen Leal Clementino.pdf: 1364888 bytes, checksum: 1a3b7cf184f74c3f95b093c74e973c3a (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-03T14:46:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ellen Leal Clementino.pdf: 1364888 bytes, checksum: 1a3b7cf184f74c3f95b093c74e973c3a (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / The fibrinolytic proteases, due to its potential use in the treatment of thrombosis, have drawn attention from researchers because such diseases are a leading cause of death worldwide. The objective of this research was to produce and extract simultaneously the fibrinolytic protease by Mucor subtilissimus UCP 1262 through extractive fermentation with PEG/sodium sulfate. Homogeneous fermentations were carried out by changing the nitrogen source (soybean flour or wheat -1%), carbon source with 1% glucose, agitation 120 rpm and 30°C. Extractive fermentation assays were made using a 23 factorial design, changing the PEG molar mass (4,000, 6,000 and 8,000 g/mol), the PEG concentration (18, 24 and 30%) and salt concentration (10; 11,5; 13%). After 72 hours fermentation, the fibrinolytic protease had its best output in soy flour obtaining 13.43 U/mL and specific activity 749.27 U/mg in homogeneous cultures. However in the extractive fermentation, the sodium sulfate rich phase showed 15.40 U/mL fibrinolytic activity and 34.17 U/mg for specific activity in the assay comprises of sodium sulphate concentration (10%) and PEG (18%) and PEG molar mass (8000g/mol) and yields (Y) of 80% of the fibrinolytic protease. The protease has a pH optimum between 7.0 and stability pH 6.0 to 8.5 and optimum temperature 50°C, stable between 10°C to 50°C. It has similar specificity to chymotrypsin enzyme it has been classified as a serine protease having molecular weight of 52-kDa. Thus it was possible to pre-purify the fibrinolytic protease having a low cost process and considerably faster when compared to other isolated production and purification techniques by replacing the initial stages of conventional separation processes. / As proteases fibrinolíticas, em virtude do seu potencial para uso no tratamento de trombose, têm chamado a atenção de pesquisadores, pois tal doença é uma das principais causas de morte no mundo. O objetivo desta pesquisa foi produzir e extrair de forma integrada a protease fibrinolítica por Mucor subtilissimus UCP 1262 através de fermentação extrativa utlilizandoSistema de Duas Fases Aquosas (SDFA) PEG/Sulfato de sódio. Foram realizadas fermentações homogêneas alterando a fonte de nitrogênio (farinha de soja ou trigo - 1%), fonte de carbono com 1% de glicose, agitação de 120 rpm e temperatura de 30°C. Os ensaios das fermentações extrativas foram constituídos através de um planejamento fatorial 23, modificando a massa molar do PEG (4000, 6000 e 8000 g/mol), concentração do PEG (18, 24 e 30%) e concentração do sal (10; 11,5 e 13%). Após 72 horas de fermentação, a protease fibrinolítica teve sua melhor produção na farinha de soja obtendo 13,43 U/mL e com atividade específica de 749,27 U/mg em cultivos homogêneos. No entanto na fermentação extrativa, a fase rica em sulfato de sódio apresentou 15,40 U/mL de atividade fibrinolítica e 34,17 U/mg de atividade específica no ensaio composto por concentração de sulfato de sódio (10%) e de PEG (18%) e massa molar do PEG (8000 g/mol), tendo recuperação (Y) de 80% da protease fibrinolítica. A protease tem pH ótimo 7,0 e estabilidade entre os valores de pH 6,0 e 8,5, e temperatura ótima aos 50°C, sendo estável entre 10°C a 50°C. Tem especificidade semelhante à enzima quimiotripsina e foi classificada como uma serino protease, apresentando massa molar de 52kDa. Deste modo foi possível pré-purificar a protease fibrinolítica com um processo de baixo custo e de considerável rapidez quando comparado a outras técnicas de produção e purificação isoladas substituindo etapas iniciais de processos de separação convencionais.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-05-03T15:03:06Z No. of bitstreams: 1 Fernanda Mafra Caju.pdf: 1734506 bytes, checksum: 2a98e11a55cf05a64d5657f7e0a37ca6 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-03T15:03:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fernanda Mafra Caju.pdf: 1734506 bytes, checksum: 2a98e11a55cf05a64d5657f7e0a37ca6 (MD5) Previous issue date: 2012-07-31 / Tadalafil is a 5(PDE5) fosfodiesterases inhibitor type that was created for tratament of erectile dysfunction in men, however, until nowadays, the information is conflicting regarding the side effects of these inhibitors on testicular function.To study the effects of tafalafil on testicular function it was performed an in-vivo study, where it was used 15 male and adult Swiss Webster mice (Mus musculus). The animals were divided in control group (n=8) and treated group (n=7). The animals in treated group received 25mg/kg of tadalafil, daily for 30 days by intraperitoneal via (IP) while, control group animals received the same sterile vehicle by the same way. At the end of the experiment, the animals were heparinized, anesthetized with ketamine and xylazine and euthanized by deep anesthesia. Liver, spleen, kidney, prostate, seminal vesicles, testes and epididymides were collected and weighed to be compared between groups, testicular fragments were fixed with Glutaraldehyde in sodium phosphate buffer, 0.01 M and pH 7.4. The testicular fragments were routinely processed for embedding in plastic resin based on glycol methacrylate and analized by hystomorphometry and electronic microscopy. Plasmatic testosterone was determined by ELISA test after the cardiac puncture and obtaining of total blood. According with the results, the tadalafil dosage and period utilized does not produced negative effects on the testicular parenchyma, just at the electronic microscopy that was showed a higher activity of Leydig cells on the treated group when compared to the control group, which was observed degenerated mitochondria due, probably, the hiperstimulation. Furthermore, there was a trend towards a 23% increase in sperm production in treated animals and 12% in serum testosterone. Therefore, the results showed that tadalafil does not interfere negatively in testicular function when used for 30 days of 25mg/Kg dose every 24 hours. / Tadalafil é um inibidor de fosfodiesterases (PDE) do tipo 5 (PDE5) que foi formulado para tratamento de disfunção erétil, contudo, até o presente momento, as informações são conflitantes quanto aos efeitos colaterais destes inibidores sobre a função testicular. Para estudar os efeitos do tadalafil sobre a função testicular, foi realizado estudo in vivo, utilizando 15 camundongos Swiss Webster (Mus musculus), machos, adultos. Os animais foram divididos em grupo controle (n=8) e grupo tratado (n=7). Os animais do grupo tratado receberam 25mg/kg de tadalafil diariamente durante 30 dias, pela via intraperitoneal (IP) enquanto os animais do grupo controle receberam solução para injeção estéril pela mesma via. Ao final do período experimental, os animais foram heparinizados, anestesiados com Xilazina e Ketamina e submetidos à eutanásia por aprofundamento anestésico. Fígado, baço, rins, próstata, vesícula seminal, epidídimos e testículos foram coletados e pesados para comparação entre grupos, fragmentos de testículo foram fixados com glutaraldeído em tampão fosfato de sódio, 0,01M e pH 7,4. Os fragmentos testiculares foram processados rotineiramente para inclusão em resina plástica à base de glicol metacrilato e analisados através de Histomorfometria e Microscopia Eletrônica. A testosterona plasmática foi determinada através de teste de ELISA após punção cardíaca e obtenção de sangue total. De acordo com os resultados, o tadalafil na dosagem e período utilizados, não produziu efeitos deletérios sobre o parênquima testicular, apenas na microscopia eletrônica demonstrou-se uma maior atividade das células de Leydig no grupo tratado quando comparado ao grupo controle, onde observou-se mitocôndrias degeneradas por provável hiper estimulação. Além disso, constatou-se tendência de aumento de 23% na produção espermática nos animais tratados e 12% na testosterona sérica. Portanto, os resultados demonstraram que o tadalafil não interfere negativamente sobre na função testicular quando utilizado por 30 dias em dose única de 25mg/Kg a cada 24 horas.