Submitted by Geandra Rodrigues (geandrar@gmail.com) on 2018-07-04T14:43:46Z No. of bitstreams: 1 alinecorrearibeiro.pdf: 2333411 bytes, checksum: 7c0df6693f47a6872d99460a06bc865b (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2018-07-06T14:24:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 alinecorrearibeiro.pdf: 2333411 bytes, checksum: 7c0df6693f47a6872d99460a06bc865b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-06T14:24:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 alinecorrearibeiro.pdf: 2333411 bytes, checksum: 7c0df6693f47a6872d99460a06bc865b (MD5) Previous issue date: 2017-08-29 / Devido à importância que o sistema imune desempenha na doença de Crohn (DC), as tiopurinas são os imunomoduladores mais indicados na terapia. Entretanto, as tiopurinas, como a Azatioprina (AZA) e seus metabólitos intraeritrocitários, levam a uma série de reações adversas ou falha terapêutica, podendo ocasionar em não adesão ou abandono da terapia. A conversão da AZA para os nucleotídeos ativos de 6-tioguanina (6-TGN) é necessária para a eficácia clínica, entretanto, outro metabólito, a 6-metilmercaptopurina (6-MMP), é formado através de uma via concorrente pela tiopurina metil transferase e está relacionado à hepatotoxicidade. Devido à ampla variabilidade interindividual da tiopurina metil transferase e a uma faixa terapêutica estreita, torna-se importante a realização do monitoramento terapêutico do metabólito ativo 6-TGN e da 6-MMP. Neste trabalho, um método cromatográfico (CLAE/HPLC-UV) foi desenvolvido e validado para a quantificação dos metabólitos nos eritrócitos, envolvendo um procedimento de tratamento simples baseado na desproteinização por ácido perclórico seguido de hidrólise ácida e aquecimento para a conversão dos metabólitos em suas respectivas bases livres. A cromatografia foi realizada em coluna C18 (250 x 4,6 mm, 5 μm). A fase móvel consistiu em mistura de solução tampão fosfato de potássio (0,02 mol/L, pH = 3), acetonitrila e metanol, eluição por gradiente, num fluxo de 1,0 mL/minuto, com detecção de UV em 291 ηm e 342 ηm. Os tempos de retenção foram de 6,2 min (6-TGN); 23,1 min (6-MMP) e 24,7 min (cafeína: padrão interno). A resposta do detector foi linear na concentração de 0,89-29,91 μmol/L (r=0,999) para 6-TGN e entre 0,90-30,08 μmol/L (r=0,999) para 6-MMP. Os limites de detecção foram de 0,29 μmol/L e 0,30 μmol/L e os limites de quantificação foram de 0,89 μmol/L e 0,90 μmol/L, para 6-TGN e 6-MMP respectivamente. As médias das recuperações de 87,9% para 6-TGN e 91,9% para 6-MMP. Os CV da repetibilidade, de 5,48 e 10,48% (intradia) e 9,23 e 10,48% (interdia), enquanto os EPR da reprodutibilidade de 11,36 e 9,85% (intradia) e 10,48 e 7,32% (interdia) para 6-TGN e 6-MMP, respectivamente. As concentrações de 6-TGN e 6-MMP foram determinadas para todos os pacientes do estudo e os resultados encontrados variaram de 4,51 a 1515,27 ρmol/8 x 10⁸ eritrócitos para a 6-TGN e de 169,98 a 53951,53 ρmol/8 x 10⁸ eritrócitos para a 6-MMP. Observou-se uma correlação entre os pacientes em terapia combinada AZA e alopurinol e a diminuição da dosagem de AZA, consequentemente a diminuição significativa dos níveis de 6-MMP (2030,71 ρmol/8 x 10⁸ eritrócitos) em comparação com o grupo de pacientes sob monoterapia (9098,43 ρmol/8 x 10⁸ eritrócitos). Um outro achado foi a diminuição estatisticamente significativa da transaminase TGO/AST (25,03 + 18,62 U/L) no grupo de pacientes que apresentavam a doença em atividade, com os níveis de 6-TGN a 540,51 ρmol/8 x 10⁸ eritrócitos e de 6-MMP a 7952,32 ρmol/8 x 10⁸ eritrócitos, semelhante a relatos anteriores da literatura. O método proposto de quantificação por CLAE-UV mostrou-se preciso, exato e reprodutível, podendo ser utilizado como uma importante ferramenta na rotina de monitorização terapêutica de pacientes com DC, permitindo a individualização da dose, o acompanhamento dos efeitos adversos relacionados com a terapia farmacológica, o monitoramento da adesão ao tratamento e a avaliação da evolução clínica do paciente. / The conversion of azathioprine (AZA) to active nucleotides of 6-thioguanine (6-TGN) is essential for clinical efficacy in Crohn's disease. However, other metabolite, 6-methylmercaptopurine (6-MMP), which is formed through a competitive pathway for thiopurine methyltransferase (TPMT), is related to hepatotoxicity of this drug. Due to the wide interindividual variability of TPMT and a narrow therapeutic range it is important to accomplish the therapeutic monitoring of active metabolite 6-TGN and 6-MMP, which is an unusual procedure in Brazil. In this study, a HPLC-UV method for simultaneous quantification of these metabolites was developed, validated and applied in 37 Crohn's disease patients. The chromatographic process was performed on C18 column (250 x 4.6 mm, 5 μm i.d.), mobile phase consisted of potassium phosphate buffer (0.02 mol/L, pH = 3), acetonitrile and methanol, flow rate at 1.0 ml/min and UV detection at 291 ηm and 342 ηm. Retention times were 6.2 min (6-TGN); 23.1 min (6-MMP) and 24.7 min (caffeine: internal standard). The detector response was linear at 0.89-29.91 μmol/L (r=0.999) for 6-TGN and 0.90-30.08 μmol/L (r=0.999) for 6-MMP. Limits of detection were 0.29 μmol/L and 0.30 μmol/L, while the quantification limits were 0.89 μmol/L and 0.90 μmol/L, for 6-TGN and 6-MMP respectively. Precision, accuracy and recovery, were according FDA and ANVISA guidelines. The concentrations of 6-TGN and 6-MMP were determined in patients’ blood and the results found ranged from 4.51 to 1515 ρmol/8 x 10⁸ erythrocytes for 6-TGN and from 169.98 to 53.951 ρmol/8 x 10⁸ erythrocytes for 6-MMP. It was observed a reduction of levels of 6-MMP in patients using AZA + allopurinol therapy (2030.7 ρmol/8 x 10⁸ erythrocytes) when compared with patients undergoing monotherapy (9098.43 ρmol/8 x 10⁸ erythrocytes). Another finding was the correlation between the decrease in GOT transaminase in the group of patients who had the active disease with the increase in the 6-TGN levels, similar to previous reports in the literature. These results indicate that the method developed was reliable, accurate and reproducible, and can be used as an important tool in the routine monitoring of patients with Crohn's disease, allowing the individualization of the dose, the monitoring of the adverse effects related to the pharmacological therapy, monitoring the adherence to the treatment and the evaluation of the clinical evolution of these patients.

A sepse é a maior causa de morbidade e mortalidade em pacientes queimados, uma vez que profundas alterações ocorrem na farmacocinética de agentes anti-infecciosos prescritos para o controle das infecções. Além disso, pacientes queimados podem apresentar quadro de infecção por germes da comunidade, numa fase precoce de internação na UTI, devendo receber antimicrobianos que diferem daqueles indicados na infecção sistêmica causada por germes hospitalares. Adicionalmente, na vigência de infecção fúngica, o quadro se torna ainda mais grave para os pacientes queimados de prolongada internação e imunocomprometimento. No presente trabalho deve como objetivo realizar o monitoramento plasmático de fluconazol prescrito aos pacientes com infecção sistêmica fúngica internados na UTI e investigar a farmacocinética para o ajuste do regime de dose no controle da infecção fúngica nos pacientes queimados. Investigaram-se 12 pacientes queimados internados na UTI/ Unidade de Queimados - Divisão de Cirurgia Plástica do HC FMUSP, portadores de infecção fúngica recebendo fluconazol através de infusão. Os pacientes receberam o antifúngico geralmente em associação a outros antimicrobianos para o controle das infecções seguindo a recomendação da CCIH do hospital relativa ao regime de dose empírica inicial do controle de infecção na UTI de Queimados. Realizou-se o monitoramento plasmático do fluconazol através da coleta de amostras sanguíneas de pico e vale. Complementarmente, a critério Clínico, foram colhidas amostras seriadas de sangue (pico, 1ª, 2ª, 4ª, 6ª e vale), totalizando seis coletas, para investigação da farmacocinética do agente que requereu ajuste de dose e individualização de terapia no paciente queimado. As coletas de sangue foram realizadas através de cateter venoso (2 mL/coleta em tubos contendo EDTA sódico) pelo médico intensivista de plantão na UTI; o plasma foi obtido pela centrifugação para análise do fármaco de interesse ou então armazenado no congelador (-80° C) até o ensaio. Previamente à realização da Etapa Clínica, foi realizado no Laboratório a validação do método bioanalítico para quantificação do fluconazol no plasma com base na legislação nacional e boas práticas de laboratório, empregando a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) com detector ultravioleta. A estatística foi realizada pelo tratamento estatístico com utilização do software GraphPad Instat 4.0., GraphPad Prism 4.0, pela utilização de testes não paramétricos. A modelagem farmacocinética foi realizada através da aplicação do software NonCompartmental Analysis, PK Solutions 2.0, aos pares de dados (C vs T) para o agente antifúngico investigado. Os pacientes queimados incluídos no protocolo eram adultos de ambos os sexos 8M/4F, 46,8 ± 20,6 anos, 69,9 ± 11,5 kg, 38,8 ± 24,0% de superfície corporal queimada, e os agentes da queimadura foram para 10 pacientes/ térmico-fogo e para dois pacientes/trauma elétrico; a lesão inalatória foi registrada em 50% pacientes com queimadura pelo fogo. Foram realizados 31 seguimentos farmacoterapêuticos com a emissão de laudos de resultado de exame para o fluconazol. Registrou-se alta variabilidade na farmacocinética para todos os parâmetros investigados. Adicionalmente, registrou-se alteração significativa na farmacocinética do fluconazol nos diversos seguimentos realizados nos pacientes queimados com disfunção renal dialítica quando comparados aqueles em que se registrou função renal preservada. O método bioanalítico mostrou-se adequado ao monitoramento das concentrações plasmáticas do fluconazol através cromatografia líquida de alta eficiência com detecção UV. Registrou-se alta variabilidade na farmacocinética desse agente que justificou em parte a substituição da terapia empírica inicial pela dose ajustada para garantia de terapia eficaz ao paciente queimado. / The sepsis is a main cause of morbidity and mortality in burn patients, once pharmacokinetics of anti-infective drugs prescribed for the control of systemic infections are significantly altered in those patients. In addition, burn patients in the ICU, initially can present infections by community microbial and must receive different antimicrobials than those prescribed for sepsis. On the other hand, burn immunocompromized patients with prolonged staying in the ICU, re-incidence of sepsis and fungal infection requires an effective antifungal agent that must be associated to the antimicrobials prescription. The objective of the study was to therapeutic plasma monitoring of fluconazole largely prescribed to burn patients from the ICU with fungal infection, Pharmacokinetic modeling for dose adjustment and for the control of infection. Twelve burn inpatients with systemic fungal infections from the ICU Burns- Division of Plastic Surgery of Clinics Hospital Medical School University of Sao Paulo received systemically antimicrobials/ antifungal agents. In general burn patients received several antimicrobial agents as recommended by the Control of Hospital Infection Committee as empirical dose at the beginning of therapy and also afterwards in the ICU. The control of infections by community microbial or yet by hospital microbial, and also for fungal infection, was performed by drug plasma after blood sample collection at the peak and at the trough. Complementary, usually by clinical criteria, six blood sample collections were performed at time dose interval (end of drug infusion 1st, 2nd, 4th, 6th and at the trough) for pharmacokinetic purposes, dose adjustment and individualization of drug therapy for burn patients. Blood sample collection was done by the physician from the ICU by venous catheter (2mL/each into blood collection tubes sodium EDTA); plasma obtained by centrifugation of blood tubes were analyzed in the same day or in a deep freezer to storage (-80° C) until assay. Bioanalytical method reported previously was re-validated as recommended by good laboratory practices (GLP). Parameters as linearity, sensitivity, precision and accuracy, recovery and stability, specificity and selectivity were determined for all drugs investigated to guaranteed drug plasma measurements during the pharmacotherapeutic follow up in the ICU. Descriptive statistics was performed by applying the software GraphPad Instat 4.0., GraphPad Prism 4.0 non parametric tests. Pharmacokinetics was estimated by applying the software NonCompartmental Analysis, PK Solutions 2.0, to data (C vs T) for each antimicrobial agent. Burn patients included in the protocol were of both genders 8M/4F, 46.8+/- 20.6 yrs, 69.9+/- 11.5 kg, 38.8+/-24.0% TBSA; agents of the accident were fire/ alcohol for 10 patients and electrical trauma for two patients; inhalation injury were described for 50% of patients with fire. High pharmacokinetic variability was registered for the antifungal agent investigated. In addition, significant changes on pharmacokinetic parameters were described for fluconazole for burn patients with dialytic renal dysfunction compared to those with renal function preserved. Bioanalytical methods validated with basis on good laboratory practices (GLP), recommended by the national and international guidelines were adequate for drug plasma monitoring by liquid chromatography, UV detection. High pharmacokinetic variability was obtained for fluconazol. In conclusion, it was demonstrated that PK modeling of antimicrobial is an important tool for the control of severe systemic fungal infection in burn patients.

A sepse é a maior causa de morbidade e mortalidade em pacientes queimados, uma vez que profundas alterações ocorrem na farmacocinética de agentes anti-infecciosos prescritos para o controle das infecções. Além disso, pacientes queimados podem apresentar quadro de infecção por germes da comunidade, numa fase precoce de internação na UTI, devendo receber antimicrobianos que diferem daqueles indicados na infecção sistêmica causada por germes hospitalares. Adicionalmente, na vigência de infecção fúngica, o quadro se torna ainda mais grave para os pacientes queimados de prolongada internação e imunocomprometimento. No presente trabalho deve como objetivo realizar o monitoramento plasmático de fluconazol prescrito aos pacientes com infecção sistêmica fúngica internados na UTI e investigar a farmacocinética para o ajuste do regime de dose no controle da infecção fúngica nos pacientes queimados. Investigaram-se 12 pacientes queimados internados na UTI/ Unidade de Queimados - Divisão de Cirurgia Plástica do HC FMUSP, portadores de infecção fúngica recebendo fluconazol através de infusão. Os pacientes receberam o antifúngico geralmente em associação a outros antimicrobianos para o controle das infecções seguindo a recomendação da CCIH do hospital relativa ao regime de dose empírica inicial do controle de infecção na UTI de Queimados. Realizou-se o monitoramento plasmático do fluconazol através da coleta de amostras sanguíneas de pico e vale. Complementarmente, a critério Clínico, foram colhidas amostras seriadas de sangue (pico, 1ª, 2ª, 4ª, 6ª e vale), totalizando seis coletas, para investigação da farmacocinética do agente que requereu ajuste de dose e individualização de terapia no paciente queimado. As coletas de sangue foram realizadas através de cateter venoso (2 mL/coleta em tubos contendo EDTA sódico) pelo médico intensivista de plantão na UTI; o plasma foi obtido pela centrifugação para análise do fármaco de interesse ou então armazenado no congelador (-80° C) até o ensaio. Previamente à realização da Etapa Clínica, foi realizado no Laboratório a validação do método bioanalítico para quantificação do fluconazol no plasma com base na legislação nacional e boas práticas de laboratório, empregando a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) com detector ultravioleta. A estatística foi realizada pelo tratamento estatístico com utilização do software GraphPad Instat 4.0., GraphPad Prism 4.0, pela utilização de testes não paramétricos. A modelagem farmacocinética foi realizada através da aplicação do software NonCompartmental Analysis, PK Solutions 2.0, aos pares de dados (C vs T) para o agente antifúngico investigado. Os pacientes queimados incluídos no protocolo eram adultos de ambos os sexos 8M/4F, 46,8 ± 20,6 anos, 69,9 ± 11,5 kg, 38,8 ± 24,0% de superfície corporal queimada, e os agentes da queimadura foram para 10 pacientes/ térmico-fogo e para dois pacientes/trauma elétrico; a lesão inalatória foi registrada em 50% pacientes com queimadura pelo fogo. Foram realizados 31 seguimentos farmacoterapêuticos com a emissão de laudos de resultado de exame para o fluconazol. Registrou-se alta variabilidade na farmacocinética para todos os parâmetros investigados. Adicionalmente, registrou-se alteração significativa na farmacocinética do fluconazol nos diversos seguimentos realizados nos pacientes queimados com disfunção renal dialítica quando comparados aqueles em que se registrou função renal preservada. O método bioanalítico mostrou-se adequado ao monitoramento das concentrações plasmáticas do fluconazol através cromatografia líquida de alta eficiência com detecção UV. Registrou-se alta variabilidade na farmacocinética desse agente que justificou em parte a substituição da terapia empírica inicial pela dose ajustada para garantia de terapia eficaz ao paciente queimado. / The sepsis is a main cause of morbidity and mortality in burn patients, once pharmacokinetics of anti-infective drugs prescribed for the control of systemic infections are significantly altered in those patients. In addition, burn patients in the ICU, initially can present infections by community microbial and must receive different antimicrobials than those prescribed for sepsis. On the other hand, burn immunocompromized patients with prolonged staying in the ICU, re-incidence of sepsis and fungal infection requires an effective antifungal agent that must be associated to the antimicrobials prescription. The objective of the study was to therapeutic plasma monitoring of fluconazole largely prescribed to burn patients from the ICU with fungal infection, Pharmacokinetic modeling for dose adjustment and for the control of infection. Twelve burn inpatients with systemic fungal infections from the ICU Burns- Division of Plastic Surgery of Clinics Hospital Medical School University of Sao Paulo received systemically antimicrobials/ antifungal agents. In general burn patients received several antimicrobial agents as recommended by the Control of Hospital Infection Committee as empirical dose at the beginning of therapy and also afterwards in the ICU. The control of infections by community microbial or yet by hospital microbial, and also for fungal infection, was performed by drug plasma after blood sample collection at the peak and at the trough. Complementary, usually by clinical criteria, six blood sample collections were performed at time dose interval (end of drug infusion 1st, 2nd, 4th, 6th and at the trough) for pharmacokinetic purposes, dose adjustment and individualization of drug therapy for burn patients. Blood sample collection was done by the physician from the ICU by venous catheter (2mL/each into blood collection tubes sodium EDTA); plasma obtained by centrifugation of blood tubes were analyzed in the same day or in a deep freezer to storage (-80° C) until assay. Bioanalytical method reported previously was re-validated as recommended by good laboratory practices (GLP). Parameters as linearity, sensitivity, precision and accuracy, recovery and stability, specificity and selectivity were determined for all drugs investigated to guaranteed drug plasma measurements during the pharmacotherapeutic follow up in the ICU. Descriptive statistics was performed by applying the software GraphPad Instat 4.0., GraphPad Prism 4.0 non parametric tests. Pharmacokinetics was estimated by applying the software NonCompartmental Analysis, PK Solutions 2.0, to data (C vs T) for each antimicrobial agent. Burn patients included in the protocol were of both genders 8M/4F, 46.8+/- 20.6 yrs, 69.9+/- 11.5 kg, 38.8+/-24.0% TBSA; agents of the accident were fire/ alcohol for 10 patients and electrical trauma for two patients; inhalation injury were described for 50% of patients with fire. High pharmacokinetic variability was registered for the antifungal agent investigated. In addition, significant changes on pharmacokinetic parameters were described for fluconazole for burn patients with dialytic renal dysfunction compared to those with renal function preserved. Bioanalytical methods validated with basis on good laboratory practices (GLP), recommended by the national and international guidelines were adequate for drug plasma monitoring by liquid chromatography, UV detection. High pharmacokinetic variability was obtained for fluconazol. In conclusion, it was demonstrated that PK modeling of antimicrobial is an important tool for the control of severe systemic fungal infection in burn patients.

O paciente grande queimado está entre os de maior risco de contrair infecção hospitalar, sendo que, aproximadamente 80% dos óbitos nestes pacientes são decorrentes de infecção. Devido à prevalência de S. aureus meticilina resistente (MRSA) nas unidades de queimados prescreve-se a vancomicina como fármaco de 1ª linha. Entretanto como a farmacocinética se encontra profundamente alterada geralmente ocorre a falência terapêutica e surgimento de resistência antimicrobiana. O objetivo do presente estudo foi monitorar as concentrações plasmáticas através da análise em CLAE-UV e realizar a modelagem farmacocinética da vancomicina, administrada nestes pacientes. Para tanto, validou-se método analítico que se mostrou linear, preciso, exato e suficientemente sensível para o monitoramento das concentrações plasmáticas da vancomicina nos pacientes. Investigaram-se 9 pacientes adultos grandes queimados após cirurgia de debridamento; os pacientes foram informados em detalhes sobre o estudo e assinaram o TCLE, e incluídos no protocolo. Coletaram amostras sangüíneas seriadas para a farmacocinética (PK solutions 2.0). A estatística descritiva (Microsoft Excell, Office for Windows, versão 2000) forneceu os resultados expressos através da média +/- DP: 16 mg/L±11, para o pico (referência 20-40mg/L) e 2,6 mg/L±1,5 para o vale (referência,5-10mg/L), abaixo da CME nestes pacientes. Os parâmetros farmacocinéticos foram o volume aparente de distribuição que se mostrou aumentado em cerca de 3,5 vezes, (1,4 L/Kg ± 0,8 versus 0,33-0,45L/kg, referência, a depuração plasmática mostrou-se aumentada em cerca de 2,5 vezes (3,2±1,65 mL/min.kg versus 1,3 - 1,5mL/min.kg, referência, enquanto a constate de eliminação e a meia-vida biológica se mantiveram inalteradas. Este estudo indica que o regime posológico e tipo de infusão endovosa devam ser revistos, utilizando a farmacocinética como ferramenta importante. Recomenda-se ainda que a terapia dose ajustada seja baseada no controle terapêutico destes pacientes em todas as fases da internação, principalmente após cada cirurgia de debridamento. / Nosocomial infections shows high incidence in burn patient, and approximately 80% of mortality of them is due to severe infections and sepse. High prevalence of methycilin resistant S. aureus (MRSA) occurs in the intensive care units for burn patients and vancomycin is largely prescribed as first choice drug for severe infections and sepse. In general occurs therapeutic fail, since the pharmacokinetics is altered in these patients and arise the antimicrobial resistance. The main of the present study was to perform therapeutic plasma vancomycin monitoring by HPLC-UV and also PK- modelling after 1g every 12 hours, 1 hour infusion. Bioanalitical method was validated showing good linearity, precision, accuracy, good stability and robustness. Additionally method required 200µL of plasma and showed sensitivity enough for vancomycin plasma monitoring. Nine large burn patients were included in the study after they signed the informed written consent term to participate of the protocol. The follow up was done after debridment surgery. Blood samples were collected from venous catheter at time dose interval to investigate the pharmacokinetics (PK solutions 2.0) and also to determine the peak and trough. Descriptive statistics was performed applying Microsoft Excell, Office for Windows, versão 2000. Data obtained were 16 mg/L±11 peak (reference 20-40mg/L) and 2.6 mg/L±1.5 trough that was lower than MEC since the reference ranges from 5 to 10mg/L). Pharmacokinetic parameters were volume apparent of distribution, that was increased by 3.5 times (1.4 L/Kg ± 0,8 against the reference values 0.33-0.45L/kg), plasma clearance was also increased by 2.5 times (3.2±1.7mL/min.kg versus 1.3 - 1.5mL/min.kg, reference values), while elimination rate constant and biological half-life remained unchanged in those patients. Based on data obtained in the study, author recommends a revision on dose schedule and also concerning intravenous drug infusion using the pharmacokinetics as a powerful tool and the therapeutic plasma vancomycin monitoring for dose adjustments in all phases of the follow up of burn patient, mainly after each surgery debridement.

The present study aims to determine the antioxidant capacity of the ethanolic extracts of husk fiber of four coconut (Cocos nucifera L.) varieties (yellow dwarf, green dwarf, giant and hybrid), aiming to verify their possible utilization as natural antioxidants. For this, their total phenolic content, radical DPPH• scavenging activity, reducing ability towards iron ions (FRAP) and copper ions (CUPRAC) and inhibition of lipid peroxidation using a biomimetic membrane system were analysed. The electrochemical investigation using a glassy carbon and a modified glassy carbon electrode, and the identification of some chemical constituents were performed by cyclic and differential pulse voltammetry and liquid chromatography coupled with UVVIS spectrometry (CLAE-UV/DAD) and mass spectrometry, respectively. The higher value of total phenolic content was found for the hybrid variety: 531 ± 24 mg GAE g-1 dry extract and the lowest was for the green dwarf with 58 ± 9 mg GAE g-1 dry extract. The ability of the extracts to scavenge DPPH• radicals was in the order giant> yellow dwarf > hybrid > green dwarf and IC50 values varied from 8.6 to 55.9 μgmL-1. All varieties showed reducing potential by the use of FRAP and CUPRAC methods, with the lowest performance obtained for the green dwarf variety. Through the use of mimetic biomembranes, ethanolic extracts of coconut husk fibers were shown to protect lipids against oxidative damage independent of the variety. Cyclic voltammetric studies of the ethanolic extracts on glassy carbon electrode confirmed the presence of easily oxidized compounds, and the high antioxidant capacity of the varieties. This was expressed as mg quercetin equivalents g-1 dry extract and ranged from 25.9 – 53.5 mg QE g-1 dry extract using a glassy carbon xanthurenic acid modified electrode (GCE/MWCNT/ poly-Xanthurenic Acid). The investigation of phenols using CLAE-UV/DAD revealed the presence the catechin, quercetin, chlorogenic, vanillic, ferulic, caffeic and gallic acids. Our findings suggest that these extracts can be an important source of natural antioxidants for use in food and possibly in the pharmaceutical and cosmetic industry, aggregating value to the enormous amount of waste from the coconut industry. / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O presente estudo teve como objetivo determinar a capacidade antioxidante dos extratos etanólicos das fibras da casca de coco (Cocos nucifera L.) das variedades anão amarelo, anão verde, gigante e híbrido, visando sua possível utilização como antioxidante natural. Para isso, foram analisados o conteúdo total de fenóis, as atividades sequestradora do radical DPPH• , redutora frente aos íons de ferro (FRAP), e íons de cobre (CUPRAC) e a inibição da lipoperoxidação utilizando um sistema de membranas biomimético. Fez-se investigação eletroquímica utilizando eletrodo de carbono vítreo e eletrodo de carbono vítreo modificado, assim como a identificação de alguns constituintes químicos, por meio da técnica de cromatografia líquida acoplada ao espectrômetro UV-Vis (CLAE – UV/DAD). Para o conteúdo total de fenóis, os maiores valores foram obtidos para a variedade híbrido (531 ± 24 mg EAG g-1 extrato seco) e o menor foi para a variedade anão verde (58 ± 9 mg EAG g-1 extrato seco). A habilidade dos extratos para sequestrar o radical DPPH• foi estabelecida na seguinte ordem: gigante > anão amarelo > híbrido > anão verde e os valores de IC50 variaram de 8,6 a 55,9 μg mL-1. Todas as variedades mostraram potencial redutor para os métodos FRAP e CUPRAC, com o menor desempenho para a variedade anão verde. Através do sistema do uso de membranas biomiméticas, os extratos etanólicos da fibra da casca de coco mostraram proteção contra os danos oxidativo lipídicos, independente da variedade. Estudos de voltametria cíclica dos extratos etanólicos em eletrodo de carbono vítreo confirmaram a presença de compostos facilmente oxidáveis, e elevada capacidade antioxidante das variedades. Esta capacidade foi expressa em miligramas equivalentes de quercetina (Q) por grama de extrato seco e variou de 25,9 – 53,5 mg EQ g-1 usando um eletrodo de carbono vítreo modificado (ECV/MWCNT/poliácido xanturênico). Na investigação de compostos fenólicos por CLAE-UV/DAD verificou-se a presença de quercetina, ácido clorogênico, ácidos vanílico, ferúlico, cafeíco, gálico, e catequina. Nosso trabalho sugere que esses extratos podem ser antioxidantes importantes para o enriquecimento na dieta humana, indústrias farmacêuticas e de cosméticos, agregando valor à enorme quantidade de resíduos gerados na indústria do coco.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The therapeutic use of medicinal plants is based on family tradition and became widespread in folk medicine. Yet there is a guarantee for the vast majority of products sold on the quality and effectiveness, since medicinal plants are subject to various types of contamination, such as pesticide residues. These chemicals are used to control and combat pests and weeds, but are potentially toxic to humans. As a result, this study aims to develop techniques based on the method of the matrix solid-phase dispersion (MSPD) and high performance liquid chromatography with UV detection with a photodiode array to determine pesticide residues kresoxim-methyl, and clofentezine and flumetralina in samples of dried and fresh transagem (Plantago major L.). The method of the matrix solid-phase dispersion was carried out using samples dried, testing different adsorbents (neutral alumina, Florisil ®, silica, C18 and Basolite®), in ratio matrix / sorbent 1:1 (m / m). The optimum recoveries for pesticide analysis HPLC-UV/DAD were obtained with silica (adsorbent), using a volume of 20 mL of dichloromethane with average recovery ranging from 45.5 to 90.3%, and coefficients variation in the range 6.1 to 18.5% for concentrations of 1.0, 1.5 and 2.0 μg g-1. Correlation coefficients between 0.9992 and 0.9997 were obtained for a concentration range between 0.2 and 5.0 μg g-1. The limits of detection and quantification were in the range 0.60 to 0,90 μg g-1 and 1.0 μg g-1, respectively. Tests were also made with the recovery of pesticides using the dried plant using the adsorbing aminopropyl and coordination polymer [Zn(BDC)(H2O)2]n. Were carried out by the analysis technique HPLC-UV/DAD with the plant in nature, using silica adsorbent with recovery values of pesticides in the range 78.3 to 110.1% and coefficients of variation between 9.9 and 15.6% for the concentration level of 2.0 μg g-1. / O uso terapêutico de plantas medicinais tem base na tradição familiar e tornou-se prática generalizada na medicina popular. Contudo não há uma garantia para a grande maioria dos produtos comercializados quanto à qualidade e eficácia, visto que as plantas medicinais estão sujeitas a diversos tipos de contaminação, como por exemplo, resíduos de pesticidas. Estes produtos químicos são utilizados no controle e combate de pragas e ervas daninhas, porém são potencialmente tóxicos ao homem. Em vista disso, este trabalho tem como objetivo o desenvolvimento de método baseado nas técnicas da dispersão da matriz em fase sólida (DMFS) e cromatografia líquida de alta eficiência com detector espectrofotométrico com arranjo de diodos para determinar resíduos dos pesticidas cresoxim-metílico, clofentezina e flumetralina em amostras desidratadas e in natura de transagem (Plantago major L.). O método por dispersão da matriz em fase sólida foi desenvolvido utilizando amostras desidratadas, testando-se diferentes adsorventes (alumina neutra, Florisil®, sílica, C18, Basolite®), na proporção matriz/adsorvente 1:1 (m/m). Os melhores valores de recuperações para os pesticidas em análise por CLAE-UV/DAD foram obtidos com sílica, utilizando um volume de 20 mL de diclorometano com valores médios de recuperação variando de 45,5 a 90,3%, e coeficientes de variação na faixa de 6,1 a 18,5% para os níveis de concentração de 1,0; 1,5 e 2,0 μg g-1. Coeficientes de correlação entre 0,9992 e 0,9997 foram obtidos para um intervalo de concentração entre 0,2 e 5,0 μg g-1. Os limites de detecção e quantificação ficaram na faixa de 0,60 a 0,90 μg g-1 e 1,0 μg g-1, respectivamente. Também foram feitos testes de recuperação dos pesticidas com a planta desidratada utilizando os adsorventes aminopropil e o polímero de coordenação [Zn(BDC)(H2O)2]n. Foram realizadas análises pela técnica de CLAE-UV/DAD com a planta in natura, utilizando o adsorvente sílica, com valores de recuperação dos pesticidas na faixa de 78,3 a 110,1% e coeficientes de variação entre 9,9 e 15,6% para o nível de concentração de 2,0 μg g-1.

O difosfato de cloroquina é um fármaco antimalárico, de conhecida fotossensibilidade. O presente trabalho teve como objetivo desenvolver, caracterizar e avaliar a fotodegradação de complexos binários e ternários de difosfato cloroquina. Para tanto, foi desenvolvida uma metodologia analítica que permitiu identificar e quantificar o fármaco por CLAE com detecção UV, que mostrou seletividade, além de adequada especificidade, sensibilidade, linearidade, precisão exatidão, frente a seus respectivos produtos de degradação e fotodegradação. Os complexos com β-ciclodextrina e HP-β-ciclodextrina obtidos não foram capazes proteger o fármaco da degradação promovida pela luz nos meios água, HCI 0,1N e tampão fosfato pH 6,8. Em HCI 0,1N verificou-se que alguns complexos capazes, inclusive, de acelerar a degradação promovida pela luz. Foram também realizados estudos de recristalização do fármaco em diferentes solventes para avaliar o impacto sobre suas características físico-químicas, os quais resultaram possíveis modificações cristalinas observadas mediante técnica de DSC quando foram utilizados etanol e clorofórmio como solventes para o processo. / The chloroquine diphosphate is an antimalarial drug of know photosensibility. The present work had as objective to development, characterize and evaluate photodegradation of binary and ternary complex of chloroquine diphosphate. For such a way, an analytical methodology was developed that allowed to identify and quantify the drug for CLAE with detection UV, that showed good selectivity, beyond adjusted specificity, sensitivity, linearity, precision and accuracy, front its respective products of degradation and photodegradation. The complexes with &#946-ciclodextrin and HP-&#946-ciclodextrin had not been capable to protect the drug of the degradation promoted by the light in solvent water, HCl 0,1N and buffer phosphate pH 6,8. In HCl 0,1N is verified that some complex are capable to speed up the degradation promoted by the light. Also studies of recrystallization of the drug in different solvents were carried trough to evaluate the impact on its physical-chemistry characteristics, which had resulted in possible observed by DSC crystalline modifications technique when ethanol and chloroform had been used as solvent for the process.

O difosfato de cloroquina é um fármaco antimalárico, de conhecida fotossensibilidade. O presente trabalho teve como objetivo desenvolver, caracterizar e avaliar a fotodegradação de complexos binários e ternários de difosfato cloroquina. Para tanto, foi desenvolvida uma metodologia analítica que permitiu identificar e quantificar o fármaco por CLAE com detecção UV, que mostrou seletividade, além de adequada especificidade, sensibilidade, linearidade, precisão exatidão, frente a seus respectivos produtos de degradação e fotodegradação. Os complexos com β-ciclodextrina e HP-β-ciclodextrina obtidos não foram capazes proteger o fármaco da degradação promovida pela luz nos meios água, HCI 0,1N e tampão fosfato pH 6,8. Em HCI 0,1N verificou-se que alguns complexos capazes, inclusive, de acelerar a degradação promovida pela luz. Foram também realizados estudos de recristalização do fármaco em diferentes solventes para avaliar o impacto sobre suas características físico-químicas, os quais resultaram possíveis modificações cristalinas observadas mediante técnica de DSC quando foram utilizados etanol e clorofórmio como solventes para o processo. / The chloroquine diphosphate is an antimalarial drug of know photosensibility. The present work had as objective to development, characterize and evaluate photodegradation of binary and ternary complex of chloroquine diphosphate. For such a way, an analytical methodology was developed that allowed to identify and quantify the drug for CLAE with detection UV, that showed good selectivity, beyond adjusted specificity, sensitivity, linearity, precision and accuracy, front its respective products of degradation and photodegradation. The complexes with &#946-ciclodextrin and HP-&#946-ciclodextrin had not been capable to protect the drug of the degradation promoted by the light in solvent water, HCl 0,1N and buffer phosphate pH 6,8. In HCl 0,1N is verified that some complex are capable to speed up the degradation promoted by the light. Also studies of recrystallization of the drug in different solvents were carried trough to evaluate the impact on its physical-chemistry characteristics, which had resulted in possible observed by DSC crystalline modifications technique when ethanol and chloroform had been used as solvent for the process.

A circulação extracorpórea com hipotermia (CEC-H) é um procedimento comumente utilizado em cirurgias cardíacas, que representa um fator de risco para o paciente por promover extensa hemodiluição e profundas alterações fisiológicas. Nestas cirurgias, utiliza-se a cefuroxima como antimicrobiano para profilaxia de infecções, estando sua concentração inibitória mínima (CIM90) na faixa de 4 a 16 µg/mL dependendo da espécie e cepa bacteriana. Vários esquemas posológicos tem sido propostos para a profilaxia com este antimicrobiano. Assim, o objetivo do presente estudo foi investigar a farmacocinética e a disponibilidade sistêmica da cefuroxima, administrada I.V., bolus, na dose de 1,5g a 17 pacientes submetidos à cirurgia cardíaca com ou sem CEC-H. Desenvolveu-se método analítico simples seletivo e sensível em CLAE-UV para determinar a cefuroxima no plasma e tecido subcutâneo destes pacientes. Os resultados evidenciaram que independente das alterações causadas pela CEC-H, obtiveram-se baixas concentrações plasmáticas, inferiores ao CIM90, a partir da 9a hora após a administração da medicação nos dois grupos de pacientes investigados. Esta baixa disponibilidade sistêmica da cefuroxima após administração de 1,5 g pode favorecer o desenvolvimento de infecções pós-cirúrgicas e o desenvolvimento de cepas bacterianas resistentes. Por outro lado, a disposição cinética da cefuroxima foi alterada pela CEC-H, evidenciando-se ligeiro mas significativo prolongamento da meia vida biológica e redução da depuração plasmática nos pacientes submetidos a este procedimento. A ausência de alterações no volume de distribuição está de acordo com a penetração do antibiótico no tecido, uma vez que a quantidade de cefuroxima presente no subcutâneo foi comparável em ambos os grupos de pacientes investigados. Os dados obtidos permitem recomendar mudanças no regime posológico para manter níveis plasmáticos adequados e garantir a profilaxia com cefuroxima. / Cardiopulmonary bypass and hypothermia (HCPB) is a procedure commonly used during heart surgery, representing a risk factor for the patient by promoting extensive hemodilution and profound physiological changes. Cefuroxime is used for the prophylaxis of infection after heart surgery and its minimum inhibitory concentration (MIC90) may vary from 4 to 16 µg/mL depending on the bacterial species and strain. Several dose schemes have been suggested for prophylaxis with this antimicrobial agent. Thus, the objective of the present study was to assess in a comparative manner the systemic availability of cefuroxime administered intravascularly at the dose of 1.5 g in bolus to 17 patients submitted to heart surgery with or without HCPB. An improved, simple, selective and sensitive micromethod based on HPLC-UV is described to determine cefuroxime in plasma and fat tissue. Despite the differences recorded during the study period as a consequence of HCPB, antibiotic concentrations lower than MIC90 were obtained as early as after the 9th h for the surgical patients of the two groups of patients investigated. Thus, the low systemic availability of cefuroxime after the administration of a 1.5 g dose may be the factor responsible for postoperative infections and may favor the development of resistant bacterial strains. By the other hand, cefuroxime kinetic disposition was altered by HCPB showing a slight prolongation of biological half-life e reduction of plasma clearance. Unchanged apparent volume of distribution was according antibiotic tissue penetration since in both groups of patients the amount of cefuroxime obtained was comparable. The data obtained permit us to recommend a change in the dose scheme in order to maintain adequate plasma levels of the drug and thus guarantee prophylaxis with cefuroxime.

O paciente grande queimado está entre os de maior risco de contrair infecção hospitalar, sendo que, aproximadamente 80% dos óbitos nestes pacientes são decorrentes de infecção. Devido à prevalência de S. aureus meticilina resistente (MRSA) nas unidades de queimados prescreve-se a vancomicina como fármaco de 1ª linha. Entretanto como a farmacocinética se encontra profundamente alterada geralmente ocorre a falência terapêutica e surgimento de resistência antimicrobiana. O objetivo do presente estudo foi monitorar as concentrações plasmáticas através da análise em CLAE-UV e realizar a modelagem farmacocinética da vancomicina, administrada nestes pacientes. Para tanto, validou-se método analítico que se mostrou linear, preciso, exato e suficientemente sensível para o monitoramento das concentrações plasmáticas da vancomicina nos pacientes. Investigaram-se 9 pacientes adultos grandes queimados após cirurgia de debridamento; os pacientes foram informados em detalhes sobre o estudo e assinaram o TCLE, e incluídos no protocolo. Coletaram amostras sangüíneas seriadas para a farmacocinética (PK solutions 2.0). A estatística descritiva (Microsoft Excell, Office for Windows, versão 2000) forneceu os resultados expressos através da média +/- DP: 16 mg/L±11, para o pico (referência 20-40mg/L) e 2,6 mg/L±1,5 para o vale (referência,5-10mg/L), abaixo da CME nestes pacientes. Os parâmetros farmacocinéticos foram o volume aparente de distribuição que se mostrou aumentado em cerca de 3,5 vezes, (1,4 L/Kg ± 0,8 versus 0,33-0,45L/kg, referência, a depuração plasmática mostrou-se aumentada em cerca de 2,5 vezes (3,2±1,65 mL/min.kg versus 1,3 - 1,5mL/min.kg, referência, enquanto a constate de eliminação e a meia-vida biológica se mantiveram inalteradas. Este estudo indica que o regime posológico e tipo de infusão endovosa devam ser revistos, utilizando a farmacocinética como ferramenta importante. Recomenda-se ainda que a terapia dose ajustada seja baseada no controle terapêutico destes pacientes em todas as fases da internação, principalmente após cada cirurgia de debridamento. / Nosocomial infections shows high incidence in burn patient, and approximately 80% of mortality of them is due to severe infections and sepse. High prevalence of methycilin resistant S. aureus (MRSA) occurs in the intensive care units for burn patients and vancomycin is largely prescribed as first choice drug for severe infections and sepse. In general occurs therapeutic fail, since the pharmacokinetics is altered in these patients and arise the antimicrobial resistance. The main of the present study was to perform therapeutic plasma vancomycin monitoring by HPLC-UV and also PK- modelling after 1g every 12 hours, 1 hour infusion. Bioanalitical method was validated showing good linearity, precision, accuracy, good stability and robustness. Additionally method required 200µL of plasma and showed sensitivity enough for vancomycin plasma monitoring. Nine large burn patients were included in the study after they signed the informed written consent term to participate of the protocol. The follow up was done after debridment surgery. Blood samples were collected from venous catheter at time dose interval to investigate the pharmacokinetics (PK solutions 2.0) and also to determine the peak and trough. Descriptive statistics was performed applying Microsoft Excell, Office for Windows, versão 2000. Data obtained were 16 mg/L±11 peak (reference 20-40mg/L) and 2.6 mg/L±1.5 trough that was lower than MEC since the reference ranges from 5 to 10mg/L). Pharmacokinetic parameters were volume apparent of distribution, that was increased by 3.5 times (1.4 L/Kg ± 0,8 against the reference values 0.33-0.45L/kg), plasma clearance was also increased by 2.5 times (3.2±1.7mL/min.kg versus 1.3 - 1.5mL/min.kg, reference values), while elimination rate constant and biological half-life remained unchanged in those patients. Based on data obtained in the study, author recommends a revision on dose schedule and also concerning intravenous drug infusion using the pharmacokinetics as a powerful tool and the therapeutic plasma vancomycin monitoring for dose adjustments in all phases of the follow up of burn patient, mainly after each surgery debridement.