Orientador: Theo Guenter Kieckbusch / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-25T02:35:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sundfeld_Esdras_M.pdf: 6848250 bytes, checksum: 479ecf5a0a8361d494a869aa8f0d2c2d (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Existem fatores econômicos, regulamentares, mercadológicos, de estilo de vida, nutricionais e dietéticos para justificar a intensidade das pesquisas dedicadas 'a formulação de produtos isentos de colesterol ou ao desenvolvimento de tecnologias que reduzam o teor de colesterol nos alimentos. Este trabalho contempla o desenvolvimento de processos baseados na utilização de "quilaja" - extratos de grau alimentício de saponinas de Quillaja saponaria Molina. São estudadas duas alternativas: 1) o processo líquido-líquido (LL), envolvendo o contato do óleo de manteiga com uma solução aquosa de quilaja, e 2) o processo sólido-líquido-líquido (SLL), em que ao meio bifásico resultante do processo LL é adicionada a terra diatomácea; em ambos os casos, a etapa final é a separação e recuperação, por centrifugação, do óleo com teor reduzido de colesterol. A primeira etapa deste trabalho teve caráter tecnológico. Extratos de quilaja em pó e óleo de manteiga comercialmente disponíveis foram utilizados para avaliar os efeitos de variáveis nos níveis de remoção de colesterol obtidos do processo SLL; também foram comparados os processos LL e SLL. No processo SLL observou-se que: 1) ocorre uma distribuição de colesterol entre todas as três fases (oleosa, aquosa e sólida), resultando uma fase oleosa com teor de colesterol reduzido relativamente ao óleo de manteiga inicial, e 2) níveis crescentes de remoção de colesterol foram obtidos com a diminuição do pH e com o aumento tanto da concentração da solução de quilaja quanto da quantidade de terra diatomácea. As curvas de distribuição de colesterol no equilíbrio entre as fases resultantes dos processos LL e SLL indicaram que o segundo processo é mais efetivo. Observou-se que a procedência da quilaja tem importante impacto nos níveis de remoção de colesterol, e que produtos de fontes comerciais distintas apresentam diferenças substancias na sua composição química. Na segunda etapa, foram utilizadas soluções de colesterol em decano como substitutivos do óleo de manteiga e um extrato de saponinas mais purificado como sistema bifásico modelo. O objetivo foi definir a concentração de micela crítica (CMC) da solução aquosa de quilaja e a distribuição de colesterol no sistema bifásico modelo, verificando-se o efeito das variáveis no processo de formação de micelas e na remoção de colesterol. Também, buscou-se obter evidências do envolvimento de micelas na separação de colesterol. De maneira geral, a formação de micelas foi favorecida (redução da CMC) com a redução do pH e da temperatura, e com a adição de cloreto de sódio. No sistema bifásico modelo, as análises indicaram que o colesterol removido da fase decano se encontrava efetivamente solubilizado no seio da fase aquosa em concentrações de até quase mil vezes a sua solubilidade aparente em água pura. De maneira geral, a solubilização de colesterol na fase aquosa foi aumentada com o aumento da concentração de quilaja em solução, redução da temperatura e adição de cio reto de sódio; o efeito do pH depende do nível de temperatura empregado. Como regra geral, a concentração fixa de surfatante, condições que favorecem a formação de micelas (reduzindo a CMC) também favorecem a solubilização de solutos em soluções aquosas micelares. Houve coincidência nas tendências de redução da CMC e de aumento da solubilização de colesterol na fase aquosa com a variação de temperatura, pH e adição de sal em algumas condições experimentais enquanto que, em outras, tendências opostas ou conflitantes foram observadas. Em um experimento específico, observou-se que não ocorreu redução no teor de colesterol na fase decano em contato com soluções de quilaja abaixo da CMC. Na ausência de evidências diretas e considerando os resultados obtidos, a hipótese de que a solubilização em micelas seja um dos mecanismos envolvidos na separação de colesterol não pode ser rejeitada. Por outro lado, devem também ser consideradas alternativas de solubilização associadas as outras estruturas coloidais (cristais líquidos) que poderiam ser formadas em soluções aquosas pelos compostos anfifílicos dos extratos de qui/aia. Além do desenvolvimento técnico-científico, os resultados poderão colaborar para o desenvolvimento econômico através da produção de gordura de leite sem colesterol, abrindo a possibilidade de formulação de uma variada gama de produtos lácteos e não-lácteos com baixos teores ou isentos de colesterol, atraentes a segmentos específicos do mercado consumidor / Abstract: There are economic, regulatory, marketing, lifestyle, nutritional and dietary factors to justify the intensive research devoted to the formulation of cholesterol-free products or to the development of technologies to reduce cholesterol content in foods. The current work considers the development of processes based on the use of "quillaja" - food grade extracts of saponins from Quillaja saponaria Molina. Two alternatives are studied: 1) the liquid-liquid (LL) process, involving the contact of butter oil with an aqueous quillaja solution, and 2) the solid-liquid-liquid (SLL) process, where diatomaceous earth is added to the two-phase medium resulting from the LL process; in both cases, the final step is the separation and recovery of the cholesterol-reduced oil by centrifugation. The first part of the current work had a technological character. Commercially available powdered quillaja extracts and butter oil were used to determine the effects of variables on the levels of cholesterol removal obtained by the SLL process; also, the LL and SLL processes were compared. It was observed that in the SLL process: 1) there is a distribution of cholesterol among ali three phases (oil, aqueous and solid), resulting in an oil phase with reduced cholesterol content relative to theoriginal butteroil, and 2) increased levels of cholesterol removal were obtained by reducing the pH and by increasing the concentration of quillaja solution as well as the amount of diatomaceous earth. The equilibrium distribution curves of cholesterol among phases resulting from the LL and SLL processes indicated that the second process is more effective. It was observed that the source of quillaja has an important impact on the levels of cholesterol removal, and that products from distinct commercial sources exhibit substantial differences in their chemical composition. In the second part, a more purified quillaja extract and cholesterol solutions in decane as replacers for the butter oil were used as a two-phase model system. The objective was to define the critical micelle concentration (CMC) of the aqueous quillaja solution and the distribution of cholesterol in the two-phase model system, to verify the effect of variables in micelle formation process and cholesterol removal. Also, evidences of the involvement of micelles in cholesterol separation were sought. In general, micelle formation was favoured (Iowering the CMC) by lowering pH and temperature and by adding sodium chloride. In the two.phase model system, analyses indicated that cholesterol removed from the decane phase was effectively solubilized in the bulk of the aqueous phase, in concentrations up to nearly one thousand times its apparent solubility in pure water. In general, cholesterol solubilization in the aqueous phase was promoted by increasing the concentration of quillaja solution, reducing the temperature and by adding sodium chloride; the pH effect depends upon the level of temperature used. As a general rule, at fixed surfactant concentration, conditíons that favour micelle formation (foweríng CMC) also promote solubilization of solutes in micellar aqueous solutions. There was coincidence in the trends of CMC reduction and cholesterol solubilization increase in the aqueous phase with varying temperature, pH and addition of salt in some experimental conditions, while in others opposing or conflicting trends were observed. In one specific experiment, it was observed that no cholesterol was removed from the decane phase in contact with quillaja solutions below the CMC. In the absence of direct evidences and considering results obtained, the hypothesis that the solubilization in micelles is one of the mechanisms operating in cholesterol separation cannot be rejected. On the other hand, solubilization alternatives associated with other colloidal structures (liquid crystals) that might be formed in aqueous solutions by amphíphilic compounds from quillaja extracts shall be considered as well. In addition to the technical and scientific development, the results may collaborate to the economic development through the production of cholesterol-free milk fat, opening the possibility for the formulation of a wide range of cholesterol reduced and cholesterol-free dairy and non-dairy products, attractíve to specific segments of the consumer market / Mestrado / Mestre em Engenharia de Alimentos

Doctor en Farmacología / La cardiopatía coronaria (CC), es la principal causa de muerte en Chile y en países desarrollados. La etiología más frecuente es la ateroesclerosis, reconociéndose ésta como una enfermedad dinámica y progresiva en la que se combina la disfunción endotelial, inflamación y la acumulación de lípidos y elementos fibrosos en las arterias en forma de placas. Los inhibidores de la 3-hidroxi 3-metilglutaril coenzima A reductasa (HMG-CoA), estatinas son uno de los medicamentos más efectivos en el tratamiento de la hipercolesterolemia. Estos han sido ampliamente utilizados en la clínica, para reducción el colesterol total y LDL (cLDL). Además el tratamiento con estatinas también ha mostrado reducir los niveles plasmáticos de la proteína C reactiva (PCR) de una manera independiente de la reducción del colesterol, de igual manera estos fármacos han mostrado poseen propiedades antioxidantes. Aunque los beneficios del tratamiento con estatinas han sido establecidos tanto en la prevención primaria como secundaria de la CC, diferencias farmacológicas interindividuales se observan con este tratamiento, las que se atribuyen a diferencias genéticas. Estudios relacionados con la variaciones genéticas en el gen de la HMGCoA reductasa (HMGCR), el blanco directo del tratamiento con estatinas y su influencia con los cambios en los niveles de los lípidos plasmáticos han sido limitados. Estudios previos han indicado que el polimorfismo (TTA)n de número variable de repeticiones en tandem (VNTR) en el gen HMGCR se asocia a patologías como la CC y la hipercolesterolemia. Se ha descrito el polimorfismo de repetición (TTA)n en el gen de la HMGCR y la absorción de colesterol en respuesta al consumo de esteres de estanol. El objetivo del presente estudio consistió en evaluar la influencia del polimorfismo (TTA)n en el gen de la HMG-CoA reductasa en la magnitud de la reducción del cLDL por atorvastatina en pacientes chilenos con CC. El objetivo secundario fue determinar los cambios en los niveles plasmáticos de colesterol total, PCR ultrasensible (PCRu) y F2-isoprostanos después del tratamiento con atorvastatina y su relación con la presencia del polimorfismo (TTA)n en pacientes con CC. Este estudio fue aprobado por el Comité de Ética del Hospital Clínico de la Universidad de Chile y todos los pacientes dieron su consentimiento para la participación en el estudio. Sesenta y cuatro pacientes con CC documentada, completaron este estudio, ellos recibieron 40 mg/día de atorvastatina por 8 semanas. Los niveles lípidos plasmáticos; colesterol total, colesterol HDL (cHDL) y triglicéridos se determinaron utilizando métodos enzimáticos, el cLDL se calculó utilizando la formula de Friedewald. Los niveles de PCRu se determinaron con una reacción antígeno-anticuerpo utilizando la técnica de látex y los niveles de F2-isoprostanos se midieron utilizando inmunoensayo. La genotipificación de los pacientes participantes del estudio se realizó mediante la técnica de reacción de la polimerasa en cadena (PCR). Los principales resultados de este estudio fueron: • La distribución del polimorfismo (TTA)n en el gen de la HMG-CoA reductasa en 64 pacientes fue: genotipo >10/>10 en 22 pacientes (34%), genotipo >10/10 en 14 pacientes (22%) y genotipo 10/10 en 28 pacientes (44%) • Atorvastatina redujo significativamente los niveles plasmáticos de cLDL en todos los pacientes (p< 0,0001), después de 8 semanas de tratamiento. Esta reducción fue independiente del tipo de alelo (TTA)n en el gen de la HMGCR. • Los niveles de la PCRu disminuyeron en los pacientes tratados con atorvastatina, sólo los alelos (TTA)n >10/>10 y 10/10 en el gen HMGCR (p<0,05). • Los niveles plasmáticos de F2-isoprostanos y colesterol total disminuyeron significativamente después del tratamiento con atorvastatina, para todos los alelos (p< 0,001). A partir de estos resultados se concluye que no hubo asociación entre el polimorfismo (TTA)n presente en el gen de la enzima HMG-CoA reductasa y la magnitud de la reducción de los niveles plasmáticos de cLDL, colesterol total, PCRu y F2-isoprostanos en una muestra de pacientes chilenos con CC crónica estable tratados por 8 semanas con atorvastatina / Coronary Artery Disease (CAD) is the main cause of death in Chile and in developed countries. The most frequent ethiology is the atherosclerosis. Atherosclerosis is recognized as a dynamic and progressive disease, in which ethiology participate a combination of endothelial dysfunction and inflammation and is characterized by the accumulation of lipid and fibrous elements in the large arteries, as plaques fibrous. One of the drugs that has shown to be more effective on the treatment of hipercholesterolaemia, are the inhibitors of 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A (HMG-CoA) reductase, statins have been clinically used for lowering total and lowdensity lipoprotein cholesterol (LDL-C). Statins therapy also lowers C-reactive protein (CRP) levels in a LDL cholesterol-independent manner. Statins also have antioxidant properties. Although the beneficial effects of statins treatment in the primary and secondary prevention of CAD have been established, interindividual pharmacological differences observed with this treatment have been attributed to genetic differences. Studies about genetic variations in HMG-CoA reductase gene (HMGCR), the direct target of statin therapy, and the relation with the changes in lipid levels with statin therapy are limited. Previous studies have indicated that variable number of tandem repeats (VNTR) polymorphism (TTA)n of the HMGCR gene was associated with pathologies such as CAD and hypercholesterolemia. Moreover, it has been reported an almost significant difference between the (TTA)n repeat polymorphism in the HMGCR gene and cholesterol absorption in response to plant stanol consumption. The aim of the present study was to evaluate the role of HMG-CoA reductase gene (HMGCR) (TTA)n repeat polymorphism in relation to the LDL-C lowering efficacy of atorvastatin in Chilean patients with CAD. A secondary objective was to determine the change in levels of total cholesterol, high-sensitivity CRP (hsCRP) and free F2- isoprostanes after atorvastatin treatment and its relation with the presence of HMGCR (TTA)n polymorphism in patients with CAD. This study was approved by the Ethics Committee of the Clinical Hospital of the University of Chile, and all patients gave their informed consent. Sixty-four patients with documented CAD completed the trial receiving 40 mg of atorvastatin daily for 8 weeks. Lipid levels as, total cholesterol, high-density lipoprotein cholesterol (HDL-C) and serum triglyceride levels were determined using enzymatic methods. LDL-C was calculated using the Friedewald´s formula. The hsCRP levels were determined by latex method assay and free F2-isoprostanes were performed using enzyme immunoassay (EIA). Genotyping was done by the polymerase chain reaction. The results of this study were: • The genotype distribution of the HMGCR (TTA)n polymorphism was: Allele >10/>10 in 22 of 64 patients (34%) Allele >10/10 in 14 of 64 patients (22%) Allele 10/10 in 28 of 64 patients (44%). • Atorvastatin significantly reduced LDL-C levels in all patients (p<0.0001), regardless the type of HMGCR (TTA)n polymorphism. • Reduction on hsCRP were observed in atorvastatin-treated patients with HMGCR (TTA)n alleles >10/>10 and 10/10 (p<0.05). • Free F2-isoprostanes and total cholesterol were also reduced significantly after treatment for all alleles (p<0.001). In summary we found in a sample of patients with chronic stable CAD, no associations were found in the atorvastatin-induced reduction of LDL-C, total cholesterol, hsCRP and free F2- isoprostanes with the HMGCR (TTA)n polymorphism

Orientador: Miguel Arcanjo Areas / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T02:00:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cardoso_SilvanaMariaGuida_D.pdf: 5978462 bytes, checksum: 2eefe89ea1d98d730c4a3d13c284f88b (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: A hipercolesterolemia é um importante fator de risco para doenças cardiovasculares porque promove aumento da produção de radicais livres, principalmente, pela oxidação da lipoproteína de baixa densidade (LDL) e pela geração de espécies reativas que reagem com o oxigênio na parede vascular. As drogas com efeitos hipocolesterolêmicos podem expor o paciente a efeitos adversos especialmente no fígado, rins e músculo esquelético. Como alternativa, produtos de origem vegetal têm recebido considerável atenção para o tratamento da hipercolesterolemia. Observa-se uma relação inversa entre a associação da ingestão de fibras alimentares e de polifenóis com o risco de doenças cardiovasculares. Fibras alimentares, especialmente as solúveis, reduzem os níveis de colesterol plasmático exercendo efeito protetor contra as doenças cardíacas. Por outro lado, a propriedade protetora mais importante dos polifenóis é a sua atividade antioxidante. Este trabalho avaliou o efeito da polpa de laranja, fonte natural de fibras, em hamsters submetidos à dieta hipercolesterolêmica. Os animais foram distribuídos em três grupos (n=8/grupo): Grupo I: alimentados com dieta controle; Grupo II: hamsters com dieta hipercolesterolêmicas (20g colesterol/Kg dieta), e Grupo III: dieta hipercolesterolêmica contendo 20% de polpa de laranja. Foram determinadas as concentrações plasmáticas do colesterol total, triacilgliceróis, HDL e VLDL+LDL colesterol, bem como a pressão arterial média e a análise morfométrica da parede da aorta abdominal. Avaliou-se, também, o teor de polifenóis na polpa de laranja, a peroxidação lipídica (TBARS) nos eritrócitos e a atividade da superóxido dismutase (SOD), glutationa peroxidase (GSH-Px), catalase (CAT), glutationa redutase (GR) e glutationa (GSH). A polpa de laranja, em cuja composição foi demonstrada a presença de polifenóis, reduziu as concentrações plasmáticas de triacilglicerois, VLDL+LDL, colesterol total e TBARS, bem como a atividade da SOD, GSH-Px, CAT e GR. Além disso, a polpa de laranja também reduziu a pressão arterial média e o espessamento da parede da aorta. Em conclusão, a polpa de laranja exerceu efeito protetor contra as alterações induzidas pela hipercolesterolemia devido, principalmente, a suas propriedades físico-químicas e provavelmente, à presença de polifenóis entre seus constituintes / Abstract: Hypercholesterolemia is a high cardiovascular risk factor because cholesterol exerts a prooxidant effect and leads to enhanced production of oxygen free radicals, especially by oxidizing low-density lipoprotein (LDL) and generating species that can react with oxygen in the vascular wall. For most cholesterol lowering drugs to be effective they must be used for several weeks, but the procedure may expose the patient to various side effects, especially liver, kidney and esqueletic muscle injury. As an alternative, the use of products of plant origin for treating hypercholesterolemia has received considerable attention. Therefore, there is a negative relationship between the association of dietary fibers and polyphenol intake and the risk of cardiovascular diseases. Dietary fibers, especially the soluble type, decrease serum cholesterol levels and this may contribute to their protective role against heart disease. In contrast, the most important therapeutic property of polyphenols is their antioxidant activity. We studied induced hypercholesterolemia and its modulation by orange pulp, a natural source of fiber, in hamsters. The animals were distributed into three groups (n=8/group): Group I: fed a control diet; Group II: fed a hypercholesterolemic diet (20g of cholesterol/kg diet); and Group III: fed a hypercholesterolemic diet containing 20% orange pulp. Total cholesterol, triglycerides, total serum HDL- and VLDL+LDL-cholesterol concentrations were evaluated. In addition, concentration of polyphenols in orange pulp, erythrocyte lipid peroxidation (TBARS) and the activities of superoxide (SOD), glutathione peroxidase (GSH-Px), catalase (CAT), glutathione reductase(GR) and glutathione (GSH), mean arterial pressure and morphometrical examination in the abdominal aortic wall were all evaluated. Orange pulp reduced the triglycerides, VLDL+LDL, total plasma cholesterol concentration, TBARS levels, and the SOD, GSH-Px, CAT and GR activities, and mean arterial pressure, and abdominal aorta wall thickness. In conclusion, orange pulp had a protective effect against alterations induced by hypercholesterolemia.This protection was probably due to the direct physical action on the gastrointestinal tract and, probably, by the presence the polyphenols in orange pul / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Roberto Herminio Moretti / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-03T16:03:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigues_RosanedaSilva_D.pdf: 9084135 bytes, checksum: c74f65e7a7f8b4dd0db1a29fdde77b65 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Bebidas de extrato de soja com suco de frutas têm-se mostrado uma excelente alternativa para o aproveitamento e a introdução da soja na dieta humana. Aos consumidores, além dos benefícios nutricionais e funcionais atribuídos à soja, as bebidas devem atender a características sensoriais esperadas, mantendo os constituintes presentes nas matérias-primas de origem. O trabalho teve por objetivos avaliar extratos de soja obtidos de diferentes matérias-primas (grãos, farinha integral e isolado protéico de soja). O extrato mais aceito sensorialmente foi utilizado para a elaboração de bebida à base de soja e polpa de pêssegos, com teor protéico superior a produtos similares existentes no mercado, preservando ao máximo a sua qualidade tecnológica e sensorial. A bebida foi avaliada quanto às suas propriedades como alimento funcional relativamente a sua influência sobre os níveis de colesterol sanguíneo e crescimento de bactérias bífidas intestinais, utilizando coelhos como modelo experimental. Extratos com 3% de proteína foram obtidos a partir de grãos (em equipamento conhecido como "vaca mecânica"), a partir de farinha integral e isolado protéico (por dissolução em água), e pasteurizados a 74 '+ ou -" '2 GRAUS. C' por 15seg. As matérias primas e os correspondentes extratos diferiram entre si quanto à composição físicoquímica. Observou-se menores perdas dos teores de sacarose e oligossacarídeos no extrato proveniente da farinha comparativamente ao dos grãos e ausência de oligossacarídeos no extrato obtido do isolado. Os perfis de aminoácidos nos grãos e na farinha integral foram similares e quantitativamente superiores ao do isolado. Na elaboração do extrato a partir dos grãos de soja, ocorreu redução de 15 e 11% de aminoácidos essenciais e não-essenciais, respectivamente. O teor de isoflavonas foi maior na farinha, no isolado protéico e nos grãos de soja, nesta ordem, verificando-se a redução de 0,3, 4,9 e 8,1% no teor total, bem como alteração nas frações glicosídicas, malonil-glicosídicas e agliconas que passaram da relação 40:57:3, 28:65:7 e 16:83:1, respectivamente, nas matérias-primas, para 62:28:10, 76:17:7 e 66:31:3, nos extratos correspondentes. Os extratos diferenciaram-se também quanto ao comportamento reológico, apresentando maior viscosidade aquele oriundo dos grãos, farinha e isolado, nesta ordem. Os extratos obtidos dos grãos e de isolado protéico de soja mostraram similar aceitação em relação aos atributos avaliados (cor, aroma, sabor, textura e impressão global), superando o extrato obtido de farinha integral de soja. Considerando a boa aceitação e a composição físico-química e nutricional, o extrato obtido de grãos de soja foi escolhido para utilização na formulação de bebida com polpa de pêssegos. Foram formuladas 18 bebidas à base de extrato de grãos de soja e polpa de pêssegos, açúcar e estabilizante, de acordo com um planejamento experimental fatorial completo ('2 POT. 2' com 4 pontos centrais e 6 axiais) e análise de superfície de resposta, às quais adicionou-se corante urucum, aroma de pêssego, ácido cítrico e conservador do tipo parabenos, seguido de pasteurização (80-85°C, 20seg). As variáveis independentes proteína de soja (1,5 a 2,5%), estabilizante (0,12 a 0,16%) e açúcar (8 a 12%) tiveram efeito significativo (p '< ou =' 0,05) sobre os teores de sólidos solúveis, acidez, cor, viscosidade e aceitabilidade das bebidas. O percentual de proteína de soja foi o fator determinante da aceitação, considerando os atributos cor, aroma, sabor, textura e impressão global. O percentual de estabilizante teve maior efeito sobre os atributos textura e impressão global, enquanto que o percentual de açúcar foi mais efetivo em relação ao sabor e à impressão global. A bebida mais aceita foi a formulada com extrato de soja contendo 2% de proteína, polpa de pêssegos, 10% de açúcar e 0,14% de estabilizante, correspondente ao ponto central do planejamento experimental. A mesma foi utilizada em ensaio biológico com coelhos (4 grupos de 6 animais cada) durante 105 dias (Fase 1). Um grupo de animais (controle) foi alimentado com ração comercial, um outro grupo recebeu ração comercial mais 50mL da bebida e dois grupos foram induzidos à hipercolesterolemia pela ingestão diária de 200mg de colesterol associado com a ração comercial, um destes recebendo juntamente a bebida. A bebida mostrou-se efetiva para o controle dos níveis séricos de colesterol total, HDL-colesterol e triacilglicerídeos e a formação de placas lipídicas na aorta dos animais induzidos à hipercolesterolemia. Nos animais normocolesterolêmicos, observou-se que a bebida proporcionou redução nos níveis de HDL e aumento de triacilglicerídeos. Nos coelhos hiper e normocolesterolêmicos a bebida aumentou os níveis séricos de glicose, mas não interferiu no ganho de peso. Ocorreu o incremento de um ciclo logarítmico na contagem de bifidobactérias avaliadas nas fezes dos animais que ingeriram a bebida. Os efeitos observados foram confirmados na continuidade do ensaio por mais 120 dias (Fase 2), quando inverteu-se a dieta dos. grupos hipercolesterolêmicos: os animais induzidos à hipercolesterolemia (dieta composta por ração e 0,2% de colesterol) por 105 dias receberam em continuidade a bebida por 120 dias, e os animais que consumiram dieta composta por ração comercial, acrescida de colesterol e bebida durante 105 dias, tiveram suprimida a bebida nos 120 dias subseqüentes. / Abstract: Beverages based on soymilk and fruit juice have been an excellent option for the utilization and introduction of soy in the human diet. To the consumers, besides nutritional and functional benefits attributed to the soy, the beverages must attend the expected sensorial characteristics, keeping the original constituents of the raw materiais. Soy extracts (soymilk) obtained from different raw materiais (soybeans, whole soy flour and isolated soy protein) were evaluated. The most sensorially accepted extract was used to elaborate a beverage based on soymilk and peaches pulp. The protein content was higher than the similar products in the market, preserving the maximum technological and sensory quality. The beverage was evaluated regarding its influence like functional food related to the cholesterol blood levels and growth of intestinal bifidobacteria, using rabbits as the experimental model. Extracts with 3% of protein were obtained from three different sources: soybeans (in a specific equipment), whole soy flour and isolated soy protein (for dissolution in water), and pasteurized at 74 '+ ou -' '2 GRAUS. C' for 15sec. The raw materiais and the respective extracts were different regarding the physical-chemical composition. It was observed that the saccharose. and oligosaccharides contents had lower losses in the extract originated from the flour comparatively to the one from the soybeans and the absence of oligosaccharides in the extract obtained from the isolated. The aminoacid profiles in the soybean and in the whole soy flour were similar and their amount was higher in the isolated soy protein. In the extract elaboration from the soybean a reduction of 15 and 11% of essential and non-essential aminoacid, respectively, was verified. Flour, isolated protein and soybean, in this order, showed a higher Isoflavones content and a reduction of 0.3, 4.9 and 8.1% in the total content in the extract. The fractions of beta-glucosides, malonyl-glucosides and aglycones changed from the relation 40:57:3, 28:65:7 and 16:83:1, respectively, in the raw materiais, to 62:28: 1O, 76: 17:7 and 66:31:3, in the corresponding extracts. The extracts were also different according to the reological behavior. The viscosity was higher in soybean, flour and isolated extracts, in this order. The extracts obtained from the soybean and isolated soy protein had similar acceptance based on the evaluated attributes (color, aroma, flavor, texture and overall impression), overcoming the extract obtained from the whole soy flour. Considering the good acceptance and the physicalchemical and nutritional composition, the extract obtained from soybean was chosen to elaborate the beverage with peaches pulp. Eighteen beverages formulations made of soybean extract and peaches pulp, sugar and stabilizer, according to an complete factorial design (23 with 4 central points and 6 axial points) and surface response analysis were formulated. Pigment ("urucum"), peach aroma, citric acid and paraben preservatives were added, followed by pasteurization (80-85 'DEGREE .C', 20sec). The independent variables soy protein (1.5 at 2.5%), stabilizer (0.12 at 0.16%) and sugar (8 at 12%) had significant effect (p '< or =' 0,05) in the soluble solid, acidity, color, viscosity and acceptability of the beverage. The percentage of soy protein was the acceptance determinant factor, considering the attributes color, aroma, flavor, texture and overall impressionoThe percentage of stabilizer had higher effect on the attributes texture and overall impression, while the percentage of sugar was more effective regarding the flavor and the overall impression.The most accepted beverage was the one formulated with soybean extract using 2% of protein, peaches pulp, 10% of sugar and 0,14% of stabilizer, corresponding to the experimental design central point. This beverage was used in biological assay with rabbits (4 groups of 6 animal each) during 105 days (Phase 1). The control group was fed with commercial meal, other group received commercial meal more 50mL of the beverage and the other two groups were induced to hypercholesterolemia by the daily ingestion of 200mg of cholesterol added to the commercial meal, one of these also receiving the beverage. The beverage was effective for the total cholesterol controllevels in the blood, HDL-cholesterol and triglycerides and the aorta's lipidic plaques formation in the animais induced to hypercholesterolemia. In the normocholesterolemic animais the beverage provided reduction in HDL's levels and increased the triglycerides. In the hyper and normocholesterolemic rabbits the beverage increased the glucose blood levels, but it didn't interfere in the weight gain. Bifidobacteria counting evaluation in the animais' feces that ingested the beverage increased in one logarithmic cycle. The observed effects were confirmed by the assay continuity for more 120 days (Phase 2). Hypercholesterolemic groups diet was inverted: the animais induced to hypercholesterolemia (diet composed by meal and 0,2% of cholesterol) during 105 days received in continuity the beverage for 120 days, and the animais that consumed diet composed by commercial meal plus cholesterol and beverage during 105 days, had suppressed the beverage during 120 subsequent days. / Doutorado / Doutor em Tecnologia de Alimentos

Orientador : Luis Guilhermo Bravo Navarrete / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-17T14:13:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Shiraishi_RosaToyoko_M.pdf: 5147485 bytes, checksum: 340f11853caccc16d93a004058a80945 (MD5) Previous issue date: 1978 / Mestrado

El receptor de acetilcolina nicotínico (AChR) es un canal iónico de la familia de canales iónicos activados por ligando (LGIC) que está presente en el sistema nervioso central y en la unión neuromuscular (UNM). Su estabilidad en la membrana celular es importante, ya que determina el nivel de respuesta colinérgica y puede ser alterada ante diversas situaciones fisiológicas y patológicas. Se ha propuesto que la endocitosis del AChR es el mecanismo más importante de neuromodulación de la UNM y de sinapsis centrales, tanto en condiciones fisiológicas como en diversas patologías. En este trabajo estudiamos la endocitosis del AChR heterólogamente expresado en células CHO-K1. Demostramos que la unión del antagonista competitivo α-bungarotoxina (αBTX) o el entrecruzamiento con anticuerpos induce la internalización de los AChR de la superficie celular. Este proceso ocurre en dos etapas: primero los complejos AChR-αBTX son secuestrados en un compartimiento tubular conectado con la superficie, como lo demuestra la diferente accesibilidad de la αBTX fluorescente unida al AChR a sondas de alto y bajo peso molecular. Subsecuentemente el AChR es internalizado a través de un mecanismo independiente de clatrina, de dinamina y de caveolina. La desorganización de la actina inhibe estos dos procesos, lo que indica que ambos requieren la integridad del citoesqueleto. La función del AChR depende de la composición de los lípidos que lo rodean en la membrana y entre éstos el colesterol (Col) parece ser necesario para mantener la estructura del AChR (revisión en Barrantes, 2007). El Col también es necesario para la formación y estabilización de los agregados del AChR en la membrana de células C2C12. Debido a la importancia de este lípido sobre distintos aspectos del AChR estudiamos su influencia en la estabilidad del receptor en la membrana de las células CHO-K1/A5. Descubrimos que la depleción de Col (Col-) mediada por ciclodextrinas acelera la internalización del AChR en una forma dependiente de la dosis (Borroni et al., 2007). Experimentos realizados con una proteína dominante negativa de dinamina (dinK44AHA) y una forma truncada de Eps15 (Eps15 95G295) indicaron que la internalización del AChR en células Col- es independiente de clatrina y de dinamina. El bloqueo de la funcionalidad de la GTPasa Arf6 por la expresión de una versión dominante negativa de dicha proteína (Arf6 T27N-HA) demostró que la depleción de Col vuelve la internalización del AChR sensible a la actividad de Arf6. La inhibición de la formación de ácido fosfatídico con alcoholes primarios también disminuyó la endocitosis del AChR en células Col- indicando la importancia de este lípido. Al igual que en células con niveles normales de Col, la internalización del AChR en células Col- depende de la actividad de la pequeña GTPasa Rac1. Sin embargo, ni el secuestro del PI4,5P2 a través de la sobre expresión de la proteína de fusión del dominio PH de la fosfolipasa Cδ, PH-PLCδ-GFP, ni la desorganización del citoesqueleto a través de agentes farmacológicos afectaron la internalización del AChR en condiciones de depleción de Col celular. Estos resultados resaltan la importancia del Col como modulador de la estabilidad del AChR en la membrana. / The nicotinic acetylcholine receptor (AChR) is an integral membrane protein belonging to the superfamily of the ligand-gated ion channel. present at the neuromuscular junction and central nervous synapses. Its stability at the cell membrane is important in determining cholinergic responses and can be altered under pathological conditions. El receptor de acetilcolina nicotínico (AChR) es una proteína integral de membrana de la superfamilia de canales iónicos activados por ligando (LGIC). Está presente en el sistema nervioso central y en la unión neuromuscular (UNM). Su estabilidad en la membrana celular es importante, ya que determina el nivel de respuesta colinérgica y puede ser alterada ante diversas situaciones fisiológicas y patológicas. Endocytosis of the AChR is proposed to be a major mechanism of neuromodulation at neuromuscular junctions and in the pathology of synapses in the central nervous system. Here we have studied the endocytosis of AChR heterologously in CHO-K1 fibroblasts. Binding of the competitive antagonist α-bungarotoxin (αBTX) or antibody-mediated crosslinking induces the internalization of cell-surface AChR to late endosomes. Internalization occurs via sequestration of AChR-αBTX complexes in narrow, tubular, surface-connected compartments, as indicated by differential surfaceaccessibility of fluorescently-tagged αBTX-AChR complexes to small and large molecules. Internalization takes place by a clathrin and caveolin-independent pathway, and does not require the function of dynamin. However the integrity of the actin cytoskeleton is required for AChR sequestration and internalization since perturbation of actin polymerization inhibits these processes. This pathway resembles a recently elucidated dynamin-independent internalization mechanism employed for downregulation of long-term resident plasma membrane proteins, and may provide insights into AChR dynamics at ligand-gated synapses and in pathological conditions such as the autoimmune disease mysthenia gravis.

El receptor de acetilcolina nicotínico (AChR) es un canal iónico activado por ligandos, presente en el sistema nervioso central y en la unión neuromuscular. Su estabilidad en la membrana celular es de suma importancia, ya que determina el nivel de respuesta colinérgica, que puede ser alterada ante diversas situaciones fisiológicas y patológicas. En esta Tesis utilizamos como modelo experimental a las células CHO-K1/A5, una línea celular que expresa de forma estable al AChR muscular adulto. En el primer capítulo nos centramos en el estudio de la posible acción de los diacilgliceroles (DAG) sobre la expresión/distribución del AChR. Realizamos los experimentos con el dioctanoilglicerol (DOG), y definimos dos tiempos de tratamiento, a los que denominamos tiempos cortos (3-4 hs) y largos (18 hs) de incubación. A tiempos cortos, el DOG aumenta los niveles de AChR presentes en la superficie celular, mientras que a tiempos largos los disminuye con el concomitante aumento de los AChR intracelulares. A su vez, el incremento de los DAG endógenos como consecuencia de la alteración de diversas vías metabólicas, afecta de igual manera al AChR a tiempos cortos. Como el tratamiento con un éster de forbol, molécula análoga al DAG por su capacidad de interaccionar con los dominios C1 de diversas proteínas, resultó en los mismos cambios sobre la distribución del AChR, concluimos que los efectos del DOG eran debidos a su papel como segundo mensajero lipídico. Mediante el empleo de inhibidores enzimáticos y de anticuerpos específicos para las proteínas quinasas C (PKC) clásicas, las PKC noveles y las PKD, determinamos que los DAG a tiempos cortos de incubación favorecerían la inhibición de las PKCc al favorecer su desfosforilación, y esto disminuiría la internalización del AChR. Por otra parte, el estímulo con DOG a tiempos largos de las distintas PKC estudiadas, provocaría el efecto opuesto. El segundo capítulo se centró en el estudio de la distribución de los clústeres de AChR, generados por la unión de anticuerpos, en dominios lipídicos con diferentes valores de polarización generalizada (GP). Esta medición se realizó gracias a la tinción de las células con di-4-ANEPPDHQ, una sonda fluorescente capaz de poner en evidencia los cambios en la polaridad de la membrana, relacionados a un orden de membrana determinado. La depleción del colesterol (Col) disminuye los valores promedio de la GP de la membrana, aumentando en consecuencia la asociación de los clústeres de AChR a dominios de membrana más desordenados. Por otra parte, la despolimerización del citoesqueleto de actina con Latrunculina A, produce el efecto contrario al aumentar la asociación de los acúmulos de AChR con dominios de membrana más ordenados. Estos resultados indican que la distribución del AChR en la superficie celular depende del contenido de Col y de la integridad del citoesqueleto de actina. Por otra parte, el AChR se internaliza en pequeñas vesículas con valores bajos de la GP y bajo contenido de Col, situación que se mantiene frente a la depleción del Col producida por el tratamiento con metil-β-ciclodextrina, demostrando entonces que la endocitosis del AChR requiere de la disociación previa del receptor con dominios ricos en Col presentes en la membrana. / The nicotinic acetylcholine receptor (AChR) is a ligand-gated ion channel, present at the neuromuscular junction and central nervous synapses. Its stability at the cell membrane is important in determining cholinergic responses and can be altered under physiological and pathological conditions. In this thesis, we used CHO-K1/A5 cells, a cell line that expresses the adult muscle AChR in a stable manner. In the first chapter, we focus on the study of the possible effects of diacylglycerols (DAGs) on expression/distribution of AChR. We performed experiments with dioctanoylglycerol (DOG), and define two treatment times, which we name short (3-4 h) and long (18 h) incubation times. DOG increases AChR levels on the cell surface at short incubation times. At long treatment times however, surface AChRs decrease with the concomitant increase of intracellular AChRs. Besides, endogenous DAGs increase due to the alteration of various metabolic pathways, equally affecting AChR at short times. Since treatment with a phorbol ester, a DAG analogous because of its ability to interact with the C1 domain of different proteins, resulted in similar changes on AChR distribution, we conclude that DOG effects were due to its role as a lipid second messenger. By using specific enzyme inhibitors and antibodies to classical and novel protein kinases C (PKC) and PKD, we determined that DAGs inhibit PKCc by promoting its dephosphorylation at shorter incubation times, and thus the internalization of AChR decreases. Moreover, DOG stimulation of different PKCs at long treatment times, causes the opposite effect. The second chapter is focused on the study of AChR clusters distribution, generated by antibody binding, at lipid domains with different generalized polarization (GP) values. This measurement was performed by staining cells with di-4-ANEPPDHQ, a fluorescent probe that senses changes in the polarity of the membrane, related to membrane order. Cholesterol depletion diminishes the mean cell membrane di-4- ANEPPDHQ GP and concomitantly the number of AChR clusters associated with more disordered membrane domains increases. Depolymerization of the filamentous actin cytoskeleton by Latrunculin A has the opposite effect, with more AChR clusters associated with more ordered domains. In conclusion, the distribution of AChR submicron-sized clusters at the cell membrane depends on cholesterol content and cytoskeleton integrity. AChR internalizes via small vesicles having lower GP and lower cholesterol content than cell surface. This also occurs upon cholesterol depletion by methyl-β-cyclodextrin. Thus, AChR endocytosis is primed by receptor dissociation from Chol-rich plasmalemma domains.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2017-05-23T04:21:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 345667.pdf: 5164258 bytes, checksum: a6d6e4f807243c1d227b1ae23222193a (MD5) Previous issue date: 2016 / A hipercolesterolemia familiar é uma doença do metabolismo das lipoproteínas causada principalmente por mutações no gene do receptor de lipoproteína de baixa densidade (LDL). A resultante perda da função do receptor de LDL (LDLr) tem como principal consequência o aumento das concentrações plasmáticas de colesterol. Estudos clínicos reportam, com certa frequência, a comorbidade entre a hipercolesterolemia e transtornos de humor, como a depressão. Além disso, aumento na permeabilidade da barreira hematoencefálica, redução na proliferação celular hipocampal adulta e prejuízos comportamentais de aprendizado e memória foram reportadas em camundongos LDLr-/- (nocautes para o LDLr, modelo animal de hipercolesterolemia familiar). O primeiro objetivo deste estudo foi verificar o comportamento de camundongos LDLr-/- em testes preditivos para a depressão. Sabendo que a neurogênese hipocampal adulta é importante para a manutenção do humor e da cognição, o segundo objetivo foi verificar se a comorbidade entre a hipercolesterolemia e a depressão envolve alterações na neurogênese hipocampal adulta. Nossos resultados demonstraram que os camundongos LDLr-/- apresentaram comportamento tipo-depressivo (anedonia, diminuição do auto-cuidado e da motivação) em testes preditivos para depressão. Este comportamento tipo-depressivo foi revertido pelo tratamento antidepressivo repetido (fluoxetina, 7 dias). Os camundongos LDLr-/- também apresentaram aumento na atividade da monoamina oxidase (MAO) A no córtex cerebral e no hipocampo. Neste estudo as análises comportamentais também revelaram comprometimento de função cognitiva dependente do giro denteado (GD) hipocampal, o que corroborou a redução na proliferação e neurogênese das células precursoras neuronais (CPNs) observada nesta estrutura. Em outra etapa experimental, em cultivo primário de CPNs isoladas do GD de camundongos C57BL/6 adultos, foi caracterizada uma maior expressão gênica de enzimas de síntese de colesterol e do LDLr no estágio proliferativo, enquanto os genes do LRP1 e de enzimas de degradação têm sua expressão aumentada durante a diferenciação celular. Corroborando os resultados obtidos em camundongos LDLr-/-, tanto a exposição destas células à LDL humana isolada, quanto o silenciamento gênico do LDLr (LDLr siRNA), reduziram a proliferação de CPNs. O tratamento com LDL também reduziu a diferenciação neuronal de CPNs, induziu acúmulo de gotículas lipídicas intracelulares e inibiu a expressão gênica de enzimas de síntese do colesterol e do LDLr. Por sua vez, o LDLr siRNA reduziu também os níveis de RNAm do LRP1. A análise de microarray revelou que a LDL inibiu fortemente processos celulares relacionados ao metabolismo do colesterol. O tratamento com siRNA alterou a expressão relativa de muitos genes, no entanto a análise de ontologia não revelou associação significativa destes genes com processos celulares específicos. Ainda, ambos os tratamentos aumentaram a capacidade de reserva das CPNs no teste de função mitocondrial. Em conjunto, estes resultados caracterizam o fenótipo tipo-depressivo e a redução da neurogênese hipocampal adulta em um modelo experimental de hipercolesterolemia familiar, sendo que a neurogênese parece ser influenciada tanto pela presença da LDL no nicho neurogênico quanto pela função do LDLr. Conjuntamente, estes dados destacam o papel do metabolismo do colesterol na neurogênese adulta e reforçam as observações clínicas que associam a hipercolesterolemia à depressão.<br> / Abstract : Familial hypercholesterolemia is a lipoprotein metabolism disorder caused primarily by mutations in the low-density lipoprotein receptor (LDLr) gene, causing loss of function of the LDLr and increased plasma cholesterol. Clinical studies frequently report comorbidity between hypercholesterolemia and depression. Supporting those observations, pre-clinical studies from our group have shown impairments in the CNS of LDLr-/- mice (knockout mice for the LDLr, a murine model of familial hypercholesterolemia). Increased blood brain barrier permeability, reduced hippocampal cell proliferation, and learning and memory impairments in behavioral tasks are some of the CNS abnormalities observed in these mice. The first aim in this study was to verify the behavior of LDLr-/- mice in predictive tasks for depression. Considering that adult neurogenesis is thought to play a role in both mood regulation and cognition, the following objective in this study aimed to avaluate if an impairment in proliferation and differentiation of hippocampal adult neural stem cells (aNSC) may be underlying the co-morbidity between hypercholesterolemia and depression. Endorsing this hypothesis, in the present study we show that LDLr-/- mice present a depressive-like behavior (anhedonia, reduction in self-care and motivational behavior). This depressive-like behavior was abolished by repeated antidepressant treatment (fluoxetine, 7 days). In addition, the LDLr-/- mice presented increased MAO-A activity in the cerebral cortex and hippocampus. Moreover, a deficit in dentate gyrus (DG)-dependent cognitive task was observed in these mice using a DG-dependent behavioral test, corroborating the reduction in DG cell proliferation and neurogenesis. Primary culture of aNSCs isolated from the DG of adult C57BL/6 mice demonstrated that the expression of enzymes involved in cholesterol synthesis (HMG-CoA reductase and squalene synthase) and of LDLr peaks during the proliferation stage of the neurogenic process. On the other hand, the expression of LRP1, cholesterol 24-hydroxylase, and sterol 27-hydroxylase is up-regulated during the differentiation stage. In agreement with the observations from the LDLr-/- mice, exposure to both human LDL as well as silencing of the LDLr (using an LDLr siRNA) reduced cell proliferation and/or neuronal differentiation of aNSCs monolayers. LDL treatment was also associated with an increase in the number of lipid droplets and a down-regulation of mRNA levels of the LDLr and enzymes involved in cholesterol synthesis, whereas LDLr siRNA also reduced LRP1 gene expression. Microarray analysis showed that LDL down-regulated cholesterol metabolism. On the other hand, LDLr siRNA altered the relative expression of hundreds of genes, however a gene ontology analysis failed to define a clear relationship with cellular functions. In addition, both treatments increased the reserve capacity of aNSCs to respond to mitochondrial stress. Altogether, this study describes the depressive-like phenotype and deficits in adult hippocampal neurogenesis in an experimental model of familial hypercholesterolemia. These deficits may result from LDL being present in the neurogenic niche and from compromised LDLr function. In conclusion, the present data implicate cholesterol metabolism as a modulator of adult hippocampal neurogenesis and support the observed co-morbidity between hypercholesterolemia and depression.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2015-11-27T15:54:40Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1344208 bytes, checksum: 6d23294279e04319b061a4c91551a9fe (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-27T15:54:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1344208 bytes, checksum: 6d23294279e04319b061a4c91551a9fe (MD5) Previous issue date: 2015-02-20 / O consumo de alimentos com compostos fenólicos tem aumentado na redução de risco de doenças como câncer, diabetes, hipercolesterolemia. Na procura de novas fontes com potencial terapêutico, este trabalho teve como um dos objetivos quantificar os compostos fenólicos presentes no extrato da inflorescência de capim gordura mediante a quantificação de fenóis totais por Follin ciocalteu, antocianinas totais e determinação antioxidante pelo método ABTS•+. A capacidade para reduzir o nível de colesterol sérico foi feita por meio da avaliação do perfil lipídico no plasma sanguíneo e mediante a histomorfometria foi determinada sua capacidade hepatoprotetora nos coelhos de raça Nova Zelândia. No estudo foram utilizados 25 coelhos de raça Nova Zelândia que tiveram um período de adaptação de 5 dias e mantidos em condições controladas, e foram divididos em 5 grupos que receberam os seguintes tratamentos: Grupo 1 (R), 125g de ração e água a vontade; Grupo 2 (RCA), 125g de ração contendo 1% de colesterol, 0,1% ácido cólico e água a vontade; Grupo 3 (RE), 125g de ração, água a vontade e 2mL de extrato (0,88mg/2mL); Grupo 4 (RCAE1), 125g de ração contendo 1% de colesterol, 0,1% ácido cólico, água a vontade e 2mL de extrato de capim gordura (0,88mg/2mL); Grupo 5 (RCAE2), 125g de ração contendo 1% de colesterol, 0,1% ácido cólico, água a vontade e 1mL de extrato de capim gordura (0,44mg/1mL). Foram realizadas três coletas de sangue antes de iniciar o experimento (dia 0), nos dias 30 e 60, na última coleta foi feita a coleta do fígado dos animais. As analises sanguíneos foram realizadas mediante método colorimétrico e se avaliaram os parâmetros de colesterol total, colesterol de baixa densidade (LDL), colesterol de alta densidade (HDL), colesterol de muito baixa densidade (VLDL), triacilgliceróis, proteínas totais, albumina, creatinina, glicose, aspartato aminotransferase (AST), alanina transferase (ALT), gamma GT e fosfatasse alcalina. Na análise histológica foi realizada a histomorfometria do fígado. O extrato da inflorescência de capim gordura apresentou um teor de fenóis totais de 603 mg AGE.100g-1, para antocianinas foi de 99,4 mg.100g-1 cianidina 3 glicosídeos e a atividade antioxidante do extrato foi de 3672 μMTrolox. 100 g-1 de inflorescência sendo valore similares a frutos de consumo diário. Na avaliação do efeito hipocolesterolêmico se observou que os tratamentos que tiveram dieta com colesterol e adição do extrato fenólico da inflorescência de capim gordura, apresentaram diminuição do colesterol total e LDL de 59 e 60% aos 30 dias do experimento respectivamente. Além disso, se observou que os tratamentos com dieta rica em colesterol e extrato fenólico, tiveram efeito hepatoprotetor. Com estes resultados obtidos o extrato fenólico da inflorescência de capim gordura, pode se considerar uma nova fonte natural de antioxidante com aplicação industrial e clínica. / The consumption of foods with phenolic compounds has increased in reducing risk of diseases like cancer, diabetes, hypercholesterolemia. The search for new sources with therapeutic potential, this work aimed to quantify the phenolic compounds present in the capim gordura’s inflorescence (Melinis minutiflora) by the total phenols quantification by Follin Ciocalteu, anthocyanin quantification and antioxidant determination by the ABTS•+. Was determined the ability to reduce serum cholesterol level by assessing the lipid profile in blood plasma and was determined its hepatoprotective capacity by histomorphometry in New Zealand white rabbits. Were used 25 male New Zealand rabbits, had an adaptation period of five days, under controlled conditions, and were divided into five groups to the following treatments: Group 1 (R), 125g of food and water; Group 2 (RCA), 125g diet containing 1% cholesterol, 0.1% cholic acid and water; Group 3 (SR), 125g of feed, 2 mL of extract and water (0.88mg/2mL); Group 4 (RCAE1) 125g diet containing 1% cholesterol, 0.1% cholic acid, 2ml of extract and water (0.88mg/2mL); Group 5 (RCAE2), 125g diet containing 1% cholesterol, 0.1% cholic acid, water and 1 mL of extract (0,44mg / 1mL). These were submit to three-blood samples collection; before to starting the experimental study (0 days), to 30 days and 60 days, on the last collection in addition the liver tissues was collect. Blood analyzes were performed by colorimetric method and evaluated the parameters of total cholesterol, low density cholesterol(LDL), high density lipoprotein cholesterol (HDL), very low density lipoprotein cholesterol (VLDL), triglycerides, total protein, albumin, creatinine, glucose, aspartate aminotransferase (AST), alanine transferase (ALT), gamma GT and alkaline phosphatase. The histological analysis was performed morphometric of the liver. The inflorescence extract presented a total phenol content of 603 mg AGE.100g-1 for anthocyanins was 99.4 mg.100g-1 cyanidin 3 glycosides and the antioxidant activity of the extract was γ67β μMTrolox. 100 g-1 inflorescence being value similar to fruit daily consumption. In assessing the hypocholesterolemic effect was observe that the treatments had high cholesterol diet and phenolic extract addition, showed a decrease in total and LDL cholesterol of 59 and 60% at 30 days of the experiment respectively. Furthermore, it was observe that the treatment with a high cholesterol diet and phenolic extract had hepatoprotective effect. With these results, the inflorescence extract, can be considered a new source of natural antioxidant that could have industrial and clinical application.

La apoA-I cumple un rol muy importante en el transporte reverso del colesterol (TRC), es el componente mayoritario de las lipoproteínas de alta densidad (HDL) que desempeñan diversas funciones en las distintas etapas del TRC. Resultados previos de este laboratorio permiten postular la hipótesis de que la región central de la apoA-I, formada por el par de hélices tipo Y, estaría involucrada en la interacción con la membrana celular, que sería importante para el eflujo de lípidos y la movilización de depósitos intracelulares de colesterol (como el disponible a ser esterificado por ACAT) hacia la membrana plasmática. Como la conformación del dominio central es influenciada por el tamaño y composición lipídica (contenido de colesterol) de las HDL, también se postula que esto podría modular la capacidad de interacción con la membrana celular y el consecuente eflujo lipídico. El objetivo general de este trabajo fue someter a prueba esta hipótesis y aportar información relevante para entender los mecanismos implicados en las etapas iniciales del TRC, como en la interacción de las HDL con membranas celulares y el eflujo celular de lípidos. Como objetivos específicos, nos propusimos: 1) Reconstituir partículas discoidales HDL similares a las pre-β-HDL del plasma, de diferente composición y tamaño, mediante la técnica de diálisis con el detergente colato. Estas fueron comparadas en cuanto a su capacidad de unirse a la membrana celular, y de promover el eflujo de colesterol y fosfolípidos de dos líneas celulares diferentes: CHO-K1 (células de ovario de hámster chino) y RAW 264.7 (macrófagos murinos). 2) Estudiar en comparación con apoA-I salvaje, la funcionalidad y las respuestas celulares a dos mutantes de deleción de un residuo de lisina en las regiones de hélices tipo Y: una con la deleción en la región central de la hélice 4 (ΔK107) y la segunda con la deleción en la posición homóloga de la hélice 10 (ΔK226). La primera de estas mutantes es una variante natural cuyos portadores presentan un metabolismo alterado de las HDL e incrementado riesgo aterogénico, por lo que los resultados de estos estudios también podrían ayudar a la comprensión de los síntomas presentados por estos pacientes. Es de esperar que estas mutaciones desplacen en ~100º la orientación relativa entre las caras hidrofílica e hidrofóbica de la hélice anfipática a ambos lados de la mutación, lo que puede afectar tanto la interacción con lípidos como con los receptores celulares.