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Produção de inulinase por Kluyveromyces marxianus e purificação da enzima por cromatografia de troca ionica em coluna de leito expandido

Kalil, Susana Juliano 08 March 2000 (has links)
Orientador: Maria Isabel Rodrigues / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-03T22:56:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kalil_SusanaJuliano_D.pdf: 27960580 bytes, checksum: f8052c2378f9cdb4809a1a569343f121 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Frutose é o açúcar natural mais doce, sendo uma alternativa segura para substituir a sacarose. A lnulinase tem um importante papel na produção de uutose através da hidrólise enzimática da inulina, que pode ser realizada em uma única etapa e render até 95% de conversão. Este trabalho teve por objetivos otimizar as condições de produção da enzima inulinase produzida por Kluyveromyces marxianus ATCC 16045, otimizar as condições de reação sobre a sacarose e a inulina e recuperar a enzima em coluna de leito expandido utilizando a resina de troca iônica Strearnline SP. Técnicas de planejamento experimental e análise de superficie de resposta foram utilizadas para otimizar o meio de cultura para produção da enzima e as condições de determinação da atividade enzimática. Na produção da enzima foram estudadas as variáveis concentração de sacarose, extrato de levedura, peptona, K2HP04 e pH. Para tanto utilizou-se um planejamento fatorial uacionário (25-1)para determinar as variáveis mais importantes, sendo selecionadas três para serem utilizadas em um planejamento fatorial completo. A enzima obtida foi utilizada nos ensaios de determinação enzimática para verificar os efeitos da concentração de substrato (sacarose ou inulina), pH e temperatura na atividade de inulinase. Usando-se sacarose como substrato, verificou-se que a temperatura e o pH são as variáveis mais importantes e no caso da inulina somente a temperatura, dentro das faixas estudadas. A atividade enzimática passou de 9 para Ii OU/rnL após o estudo de otimização da produção da enzima. O caldo bruto clarificado foi utilizado para determinar a isoterma e cinética de adsorção da inulinase extracelular em resina de troca iônica Strearnline SP. Através dos dados experimentais de adsorção e mediante modelagem matemática, obteve-se os parâmetros cinéticos intrínsecos e os de transporte de massa. Os valores encontrados foram: kl=6,25.1O-3rnLlU.mÍn. e k2=2,09.1O-3mÍn.-1 independentemente da concentração de meio na solução. Os parâmetros coeficiente de transferência de massa (Ks) e difusividade efetiva (Def) foram 5,03.10-2, 5,03.10-4, 5,03.10-4cm/s e 1,105.10-6, 6,58.10-7 , 3,25.10-7 cm2/s para 45%, 60% e 100% de caldo bruto na solução estudada respectivamente. Os ensaios no leito expandido com o meio não clarificado permitiram determinar o expoente de Richardson -Zaki (5,3) e a velocidade terminal (17,6 cm/min.). Através dos ensaios de adsorção obteve-se as curvas de ruptura e determinou-se o grau de expansão mais adequado para a purificação da enzima (expansão de 2 vezes). Através dos testes de purificação da inulinase diretamente do caldo bruto, obteve-se uma recuperação de 74% e um fator de purificação de 10,4 vezes para a eluição do tipo degrau. / Abstract: Fructose is the sweetest sugar, being a safe alternative for sucrose. Inulinase may play an important role in fiuctose production, by enzymatic hydrolysis of inulin. The reaction occurs in a single step and it is possible to obtain up to 95% of conversion. In this work the optimization of the conditions for both inulinase production by Kluyveromyces marxianus ATCC 16045 and inulinase reaction on sucrose and inulin are proposed, as well as, the enzyme purification using an expanded bed with the ion exchanger Strearnline SP is studied. Factorial design and surface response analysis were used to optimize the culture conditions for inulinase production and the enzymatic reaction parameters. In the enzyme production the following variables were studied: sucrose, yeast extract, peptone and K2HPO4concentration and pH. The technique of factorial fiactional design (25-1)was used, resulting in the selection of three variables utilization in a complete factorial designo The inulinase produced in fermentation for Kluyveromyces marxianus was used to verify the effects of substrate concentration, pH and temperature on enzymatic reaction. Using sucrose as substrate it was verified that temperature and pH were the most important variables. However, when inulin was used as substrate only the temperature was selected. The enzymatic activity increased fiom 9 U/rnL to 110 U/rnL after production optimizationby Surface Response Analysis. In terms of enzyme purification, the filtrate of crude broth was used for the determination of the adsorption isotherm and the adsorption kinects of inulinase on the ion exchanger Strearnline SP. The kinetics parameters were: kl=6.25.1O-3rnL/U.min. and k2=2.09.1O-3min.-1. For 45%,60% and 100% of crude broth of the solution, the film coefficient (Ks) of 5.03.10-2, 5.03.10-4, 5.03.10-4 cm/s and the effective diffusion coefficient (Def) of 1.105.10-6,6.58.10-7 , 3.25.10-7 cm% were determined using the experimental results and mathematical modeling. The trials on expanded bed with crude broth were carried out to determine the Richarson - Zaki exponent (5.3) and terminal settling velocity (17.6 cm/min.). The studies of inulinase adsorption performance were used to obtain the breakthrough curves and established the best degree of bed expansion for enzyme recuperation. The inulinase was purified directly fiom an unclarified broth in 74% with a purification factor of 10.4 for elution step. / Doutorado / Doutor em Engenharia de Alimentos
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Estudo de bioequivalencia de duas formulações de diclofenaco em voluntarios sadios

Silva, Lara Cristina 31 May 1999 (has links)
Orientador: Gilberto de Nucci / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-25T10:39:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_LaraCristina_M.pdf: 2182987 bytes, checksum: 2bdcb2030921ff01f4e2f4a70fd6f42a (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: O resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The abstract is available with the full electronic digital document / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Farmacologia
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Aprimoramento da metodologia para determinação de carotenoides em alimentos

Kimura, Mieko 25 July 2018 (has links)
Orientador: Delia Rodriguez-Amaya / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-25T23:15:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kimura_Mieko_D.pdf: 17703920 bytes, checksum: 25a02fd1a3ce56562c993c7459615650 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Devido à grande importância que os carotenóides representam em várias áreas do conhecimento, é consenso mundial que uma maior disponibilidade de dados confiáveis sobre a sua composição em alimentos é necessária. No entanto, a determinação de carotenóides não é uma tarefa simples e apesar dos avanços na instrumentação analítica, discrepâncias nos resultados quantitativos podem ser encontrados na literatura internacional. Assim, o aprimoramento da metodologia para determinação de carotenóides continua prioritário e é o grande objetivo de muitos pesquisadores no mundo inteiro. Atualmente, a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) é a técnica preferida para a determinação de carotenóides devido ao menor tempo envolvido na análise, reutilização da coluna, menor exposição à luz e oxigênio e melhor capacidade de separação, principalmente dos componentes minoritários. Entretanto, esta técnica está sujeita a varias fontes de erros como: incompatibilidade entre solvente de injeção e fase móvel, identificação equivocada, indisponibilidade, impureza e instabilidade dos padrões de carotenóides, quantificação de picos altamente sobrepostos, baixa recuperação da coluna cromatográfica, erros na preparação das soluções padrões e procedimento de calibração e erros de cálculo. Ilustrações dos possíveis erros na quantificação de carotenóides por CLAE são apresentados e discutidos no capítulo 1. Para se obter uma identificação e quantificação correta é imprescindível que uma boa resolução dos componentes durante a separação cromatográfica seja alcançada. A cromatografia clássica foi considerada por muito tempo, mais arte que ciência, uma vez que o seu êxito dependia largamente da habilidade e experiência do analista. A introdução da CLAE e os avanços na fabricação de colunas tornaram a cromatografia moderna mais ciência, mas que ainda depende da habilidade do analista para escolher adequadamente a combinação coluna e fase móvel. Os vários parâmetros que devem ser considerados para se chegar às combinações apropriadas são discutidos no capítulo 2. As melhores condições dependem do objetivo da análise, isto é, determinação da composição total ou apenas dos carotenóides principais, e da composição de cada tipo de amostra. Ilustrações de várias combinações para quatro tipos de amostras são apresentadas ¿Observação: O resumo, na íntegra poderá ser visualizado no texto completo da tese digital. / Abstract: Not informed. / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos
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Avaliação da radiação gama como agente de imobilização de algumas fases estacionarias sobre suportes para uso em cromatografia gasosa

Basso, Martha Adaime 14 July 2018 (has links)
Orientador : Carol Hollingworth Collins / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-14T03:17:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Basso_MarthaAdaime_D.pdf: 8799468 bytes, checksum: 125568d3f750041857b2bbd47bcc40cc (MD5) Previous issue date: 1989 / Doutorado
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Analise por cromatografia liquida de alta eficiencia de compostos peralogenados do tipo CxBRyCLz (x = 1 ou 2; Y + Z = 4 ou 6)

Leone, Priscila de Almeida 15 July 2018 (has links)
Orientador : Carol Hollingworth Collins / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-15T01:59:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Leone_PrisciladeAlmeida_M.pdf: 5214338 bytes, checksum: 707f797ee6fcbee27c197d9beda5f685 (MD5) Previous issue date: 1988 / Mestrado
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Tratamento termico na imobilização de fases estacionarias para cromatografia liquida de alta eficiencia / Thermal treatment for the immobilization of stationary phases for high performance liquid chromatography

Vigna, Camila Rosa Moraes 07 March 2004 (has links)
Orientador: Carol Hollingworth Collins / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-04T04:16:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vigna_CamilaRosaMoraes_M.pdf: 3265030 bytes, checksum: cfba60975ab2867d42279c2358e8e067 (MD5) Previous issue date: 2004 / Mestrado / Quimica Analitica / Mestre em Química
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Desenvolvimento de metodologia analítica para determinação de folatos em alimentos

Paiva, Emmanuela Prado de 31 January 2012 (has links)
Made available in DSpace on 2014-06-12T23:04:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo9587_1.pdf: 3117616 bytes, checksum: 149954eac9b67ed47b28898dbdb58267 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2012 / Vitamina B9 é constituída por um grupo de compostos com características químicas similares denominadas folatos. Sua principal função é atuar como cofatores ou coenzimas na transferência de unidades de carbono para síntese de ácidos nucleicos. Sua ausência na dieta humana pode desencadear distúrbios distintos, a exemplo dos distúrbios de formação do tubo neural. Tendo em vista a gravidade das doenças associadas, tem aumentado à necessidade do controle dos valores declarados nos rótulos de alimentos e tabelas de composição e, consequentemente, o desenvolvimento de metodologias analíticas seletivas e apropriadas a matrizes de diferente composição química. A cromatografia líquida de alta eficiência tem se destacado como método analítico mais utilizado para este fim, pois apresenta resultados eficientes para diferentes formas de folatos. Entretanto, a maioria dos protocolos de estudo de extração de folatos exige o uso de enzimas, soluções extratoras em diferente pH, controle de temperatura e tempo de exposição na etapa de extração. Essas condições têm gerado resultados contraditórios, o que motivou este estudo a desenvolver um protocolo analítico simplificado para as etapas de identificação, extração e quantificação. Com soluções padrão contendo seis formas de folatos foi possível desenvolver um método cromatográfico em eluíção isocrática com tempo de eluíção dos padrões de 15 minutos em detector de arranjo de diodo. Foram testadas três colunas com diferentes dimensões recheadas com octadesilsilano em mais de dez combinações de fases móveis alcançando-se Rs, α e k compatíveis com um protocolo capaz de ser executado em matrizes alimentares e explicado através da teoria de ácido-base Lewis. Este método foi testado em espinafre e utilizado para o estudo do protocolo de extração, através de estudo piloto isolando fatores, a saber: uso de enzimas, concentração molar da solução extratora, agentes desproteinizante, antioxidantes, temperatura e tempo de exposição e o espinafre usado como modelo de estudo fracionado em liquor e fibra. De posse dos elementos principais foi desenhado um planejamento fatorial 24 objetivando verificar a melhor condição de extração, e posteriormente o método desenvolvido foi testado em seis matrizes alimentícias de origem vegetal. Para a etapa de extração, as condições de tempo e temperatura exercem influência sobre as condições de extração, e as condições mais brandas de exposição podem garantir uma maior extratibilidade. Ademais o fracionamento da matriz potencializou a extração do 5-metil-tetraidrofolato na fração liquor
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Avaliação das ações moluscicida e antimicrobiana de extratos hidroalcóolicos de Ziziphus joazeiro mart. Expostos a altas taxas de doses de radiação Gama de 60Co

MENDES, Fabrício de Oliveira 31 January 2010 (has links)
Made available in DSpace on 2014-06-12T23:13:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2669_1.pdf: 2659010 bytes, checksum: 992aad8837827034d6ba94b90f78f6cd (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Faculdade de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / Atualmente existe o interesse de analisar a ação das radiações ionizantes em extratos vegetais de plantas utilizadas tanto na medicina popular como em outros fins. A descoberta de compostos derivados de plantas que possam ajudar no controle microbiológico e/ou erradicação de caramujos vetores de parasitas importantes em saúde pública, tal como a esquistossomose e outras moléstias, é de grande valia, principalmente se a planta for facilmente encontrada na região afetada. Pode-se destacar Ziziphus joazeiro, popularmente conhecido como juá, uma espécie nativa da caatinga arbórea, árvore explorada comercialmente e bastante valorizada, devido à sua utilização por importantes indústrias farmacêuticas, na fabricação de cosméticos, xampus anticaspa e creme dental. No entanto, não existem, até o momento, muitos relatos na literatura sobre a atividade de Ziziphus joazeiro como biocida. Os objetivos do presente trabalho foram avaliar a ação de extratos hidroalcóolicos de cascas e folhas de Ziziphus joazeiro quanto a ação moluscicida e antimicrobiana e avaliar o efeito da radiação gama de ⁶⁰Co nestes extratos, com a hipótese de que a radiação potencializará estes efeitos. Os resultados mostraram que o Ziziphus joazeiro não apresentou atividade moluscicida, porém apresentou atividade antimicrobiana para as bactérias gram-positivas Micrococcus luteus e Bacillus subtilis, e a álcool-ácido-resistente Mycobacterium smegmatis. As análises estatísticas mostraram que não ocorreu ação da radiação gama com relação à potencialização das ações moluscicidas e antimicrobiana. Também foi observado que os extratos analisados não apresentaram ação tóxica ao ambiente e que mantiveram as suas características fitoquímicas mesmo após a exposição à radiação
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Estudo da Fotoestabilidade de Vitaminas em Formulações para Nutrição Parenteral Pediátrica

AZEVEDO FILHO, Clayton Anderson de 17 December 2012 (has links)
Submitted by Heitor Rapela Medeiros (heitor.rapela@ufpe.br) on 2015-03-03T18:44:22Z No. of bitstreams: 2 AzevedoFilhoCA_Tese_2012.pdf: 4376283 bytes, checksum: 86e9722ae8d9ae768d8b18c7ae14170a (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-03T18:44:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 AzevedoFilhoCA_Tese_2012.pdf: 4376283 bytes, checksum: 86e9722ae8d9ae768d8b18c7ae14170a (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012-12-17 / FACEPE, CAPES, PROPESQ/UFPE e CNPq / Formulações de nutrição parenteral (NP) são soluções ou emulsões, estéreis e apirogênicas, compostas por carboidratos, aminoácidos, lipídeos, eletrólitos e elementos traços. Essas preparações são geralmente suplementadas com vitaminas antes do começo da terapia, sendo administrado de forma contínua por um período de 12 a 18h/dia. As vitaminas são usadas para atender as necessidades diárias e suprir deficiências, principalmente em neonatos, muito embora sejam instáveis e tenham na degradação química a mais comum causa da perda destes componentes nas bolsas de NP. Fatores tais como a luz, temperatura e duração do tempo de estocagem podem levar à degradação das vitaminas. Vários autores relatam a fotossensibilidade das vitaminas, em especial as vitaminas A, E, C, B2 e B6, que são nutrientes imprescindíveis no crescimento e na regulação das diferentes funções fisiológicas. Atualmente, pouco se relata sobre a fotoestabilidade das vitaminas principalmente em condições controladas de exposição à radiação UV. O Núcleo de Pesquisas em Nutrição Parenteral (NP)2 da Universidade Federal de Pernambuco (Brasil) desenvolveu uma câmara de fotoestabilidade a fim de estudar o efeito da radiação UV (UVA e UVB) sobre os componentes das formulações de nutrição parenteral. Esta câmara está qualificada e atende aos requisitos do Quality Guideline (Q1B) opção 2 de acordo com o International Conference on Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use (ICH). Um novo procedimento de quantificação de vitaminas lipossolúveis e hidrossolúveis extraídas de formulações de NP foi desenvolvido por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). As vitaminas hidrossolúveis extraídas foram separadas em uma coluna SB C18 (150 mm x 4.6 mm, 3.5 μm) em uma única corrida em eluição gradiente de fase móvel consistindo de tampão fosfato 0.05 mol.L-1 pH 4.75 (solvente A) e metanol (solvente B). As vitaminas lipossolúveis foram separadas na mesma coluna em uma única corrida aplicando eluição isocrática com metanol como fase móvel. Repetibilidade e precisão intermediária do método foi determinado a partir das extrações (em triplicata) em dois dias diferentes no mesmo nível de concentração. As variabilidades das concentrações em dois dias aleatórios foram de CV (%) = 0.32 a 11.54% para vitaminas lipossolúveis e CV (%) = 0.73 a 10.60% para vitaminas hidrossolúveis. O presente método é adequado para a análise quantitativa de 9 vitaminas em formulações de NP: (vitamina A (retinol e palmitato de retinila), vitamina D3 (colecalciferol), vitamina E (DL-α-tocoferol e acetato de DL-α-tocoferol), vitamina B2 (riboflavina), vitamina B6 (piridoxina), vitamina C (ácido ascórbico) e vitamina B3 (niacinamida). Os experimentos de fotodegradação foram realizados em formulações contidas em tubos de vidro e em bolsas plásticas. Intensidade de luz UV de uma Unidade de Terapia Intensiva Neonatal de um hospital público em Recife (Brasil) foram monitorados diariamente e a dose de radiação UV foi determinada e simulada em uma câmara de fotoestabilidade. Um período de 10h de dose UV na Unidade Neonatal determinada foi equivalente a 15,67 min de exposição UV na câmara de fotoestabilidade. A fotodegradação das vitaminas nas formulações de NP neonatal (contidas em bolsas de EVAC e em frascos de vidro) foi monitorada por um período de 0–60 min. A determinação simultânea de 7 vitaminas presentes nessas misturas de NP foi realizada e o perfil fotodegradativo de cada uma delas foi discutido.
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Composição de carotenoides de produtos de maracuja, manga e açai

Silva, Sandra Regina da 31 July 2018 (has links)
Orientador: Adriana Zerlotti Mercadante / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-31T19:36:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_SandraReginada_D.pdf: 29343911 bytes, checksum: 865db1d94cca7ffdd5f0bf50c9178d50 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Neste trabalho determinou-se a composição de carotenóides e o valor de vitamina A de maracujá-amarelo in natura, de diferentes produtos comerciais de maracujá (polpa congelada, sucos pasteurizado e concentrado congelado açucarado, bebidas à base de suco e soja e à base de suco e iogurte) e de polpa congelada de açaí. Os carotenóides pró-vitamínicos A de produtos comerciais de manga (polpa congelada, sucos pronto para beber, pasteurizado e concentrado congelado) foram investigados. Todas as 99 amostras foram adquiridas em Campinas, São Paulo. Em todas as amostras os carotenóides foram extraídos com acetona e após transferência para éter de petróleo/éter etílico, o extrato foi saponificado. Os carotenóides foram separados em cromatógrafo líquido de alta eficiência equipado com detector de arranjo de diodos e coluna C18 e como fases móveis acetonitri/almetanol/acetato de etila nas proporções de 75:15:1O para maracujá e açaí e de metanollacetato de etila, 90:10 para os produtos de manga. Em todas as amostras de maracujá e em seus produtos foram encontrados os seguintes carotenóides: beta-criptoxantina, prolicopeno, 'dzeta'-caroteno, cis-'dzeta'-caroteno, all-trans-'dzeta'-caroteno, e 13-cis-beta-caroteno, além de outros carotenóides minoritários. ... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital. / Abstract: In this work the carotenoid composition and vitamin A value of fresh yellow passion fruit, different commercial products of passion fruit (frozen pulp, pasteurized, ready-to-drink and sweetened concentrated frozen juices, and soft drinks made with soy and yogurt), and of frozen pulp of açaí were determined. The provitamin A carotenoids from many mango commercial products (frozen pulp, ready-to-drink, pasteurized and sweetened concentrated frozen juices) were investigated. All 99 samples were acquired in Campinas, São Paulo. The carotenoids trom ali samples were extracted with acetone, transterred to petroleum ether/diethyl ether and saponified. The carotenoids were separated by high performance liquid chromatography equipped with diode array detector and 'C IND. 18' column with the following mobile phases acetonitrile/methanollethyl acetate (75: 15:10) for passion fruit and açaí, and methanollethyl acetate (90:10) for mango products. In all samples of fresh passion fruit and its different products the following carotenoids were found: beta-cryptoxathin, prolycopene, cis 'dzeta'-carotene, 'dzeta'-carotene, all-trans-beta-carotene, 13-cis-beta-carotene, and other minor carotenoids. ... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations. / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

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