Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 702747 bytes, checksum: 881b24ba4fe9f249940d1ad2d3923f73 (MD5) Previous issue date: 2008-02-08 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Although the first birth of pups with use of frozen semen has been reported almost 40 years ago, still today the conception rate with thawed canine semen is generally inferior to the observed in other species. Many factors influencing the semen quality through the cryopreservation process are known, including the centrifugation protocol, the extender composition, the association between the cryoprotectors, the cooling rate, the time of equilibrium and the freezing rate, as well as the association between thawing and freezing rates. Individual variations in the semen freezability are found in many species, including the dog. Some authors attribute these variations to the differences in the spermatic membrane lipid composition and spermatozoon sensitivity of the glycerol toxic effects. In present work 36 semen samples where collected, from 12 dog of the: Beagle, Schnauzer, Doberman and Boxer breeds, by digital manipulation. After the collection the semen was centrifuged, reextended in Tris-Citrato extender added with 1, 2, 4 and 6% of glycerol and packaged in 0,25mL straws. After that the semen were cooled for 1 hour until 4oC, then half of the straws of each treatment was immediately freezed and the remain was kept by more 1 hour in equilibrium at 4oC before the freezing. Two freezing rates had been tested in termical box contend liquid nitrogen through the positioning of the straws 5 and 10 cm above the surface of nitrogen per 10 minutes. The thawing was carried through immersion in water 38oC per 1 minute. The semen was evaluated at the moment of the collection, after the centrifugation and immediately after thawing for spermatozoa movement through motility, progressive status, and sperm index and for plasma membrane integrity and viability through hiposmotic swelling tests and live/dead stain. The sperm longevity was evaluated through the thermorresistece test. In the present work the individual averages of sperm motility and progressive status in the fresh semen had varied from 3.5 to 5.0 and 63 to 90% respectively, while the breed averages had varied of 4.4 the 4.9 and 80 to 90% respectively. The semen centrifugation resulted in significant fall of 13% in progressive status and 14% in the motility and spermatic index. The analysis of the parameters of plasma membrane viability and integrity in the semen after centrifugation shows significant reduction of 38% and 14% in the reactive cells to the hiposmotic swelling test and to the supravital coloration respectively. The results of the hiposmotic swelling test, live/dead stain and thermorresistence in the thawed semen demonstrate better performance when protocols of freezing were used with equilibrium time. Influence of the freezing rate, in isolated form, was not observed on the seminal parameters evaluated and significant variations had been only observed when equilibrium time and glycerol concentration were associated. Isolate the increase in the percentage of glycerol from 1 to 6% in the extender composition, promotes prompt improvement to plasma membrane integrity and to spermatic index in the thawed samples. However, when associates the observed results of biggest levels of glycerol to the presence of equilibrium time and to the slow rate of freezing, significant increases are observed in all the studied parameters. Individual variation was observed in spermatic index of thawed semen, but not in the fresh semen. Already the parameters of plasma membrane integrity and viability had presented individual variation in both. When the parameter breeds is evaluated, any significant alterations were observed on the evaluated parameters in fresh semen, however in the thawed semen, significant variations in the plasma membrane integrity and viability had been observed. The dogs of the Schnauzer breed had presented significantly shorter sperm longevity after the thawing. The Doberman and Boxer breeds had presented the best results of freezability in in vitro evaluation. With the exception of the test of live/dead stain, the studied parameters had presented significant correlations between the data collected in fresh semen with those observed in thawed semen. / O presente trabalho busca descrever a análise in vitro do sêmen fresco e as diferenças individuais e raciais na congelabilidade do sêmen de cães das raças Beagle, Schnauzer, Doberman e Boxer. Foi também avaliado o efeito da centrifugação, do tempo de equilíbrio, da taxa de congelamento e de diferentes concentrações de glicerol, sobre a qualidade o sêmen canino criopreservado em meio diluidor a base de Tris-Citrato. Foram ainda analisadas as correlação dos parâmetros de avaliação in vitro do sêmen antes e depois o congelamento. Para tanto, foram utilizados 12 cães das raças Beagle (n=3), Schnauzer (n=3), Doberman (n=3) e Boxer (n=3), sendo 3 ejaculados coletados por indivíduo, totalizando 36 ejaculados. Após a coleta o sêmen foi centrifugado, ressuspendido em meio Tris-Citrato contendo 1, 2, 4 e 6% de glicerol e evasado em palhetas de 0,25mL. Após o envase o sêmen foi resfriado por 1 hora a 40C e em seguida metade das palhetas de cada tratamento foi encaminhada para o congelamento e o restante foi mantido por mais 1 hora em equilíbrio a 4oC, antes do congelamento. Duas taxas de congelamento foram testadas em caixa de isopor contendo nitrogênio líquido através do posicionamento das palhetas a 5 e 10 cm da superfície do nitrogênio por 10 minutos. O descongelamento foi realizado através de imersão em água a 38oC por 1 minuto. O sêmen foi avaliado no momento da coleta, após a centrifugação e ao descongelamento quanto à movimentação dos espermatozóides através de vigor, motilidade e índice espermático e quanto à integridade e viabilidade da membrana plasmática pelos testes hiposmótico e de coloração supravital. A longevidade espermática foi estimada no sêmen descongelado através do teste de termorresistência (TTR). No presente trabalho as médias individuais de vigor e motilidade espermáticos no sêmen fresco variaram de 3,5 a 5,0 e de 63 a 90% respectivamente enquanto as médias raciais variaram de 4,4 a 4,9 e de 80 a 90% respectivamente. A centrifugação do sêmen resultou em queda de cerca de 13% no vigor espermático, 14% na motilidade e no índice espermático. A análise dos parâmetros de viabilidade e integridade de membrana plasmática no sêmen após centrifugação mostra diminuição de 38% e 14% nas células reativas ao teste hiposmótico e de coloração supravital respectivamente. Os resultados dos testes hiposmótico, de coloração supravital e de termorresistência no sêmen descongelado demonstram de maneira geral melhor desempenho dos protocolos de congelamento com a presença do tempo de equilíbrio. Não foi observada influência da taxa de congelamento de forma isolada sobre os parâmetros seminais avaliados. Variações significativas só foram observadas quando se associou à variação da taxa de congelamento, variações no tempo de equilíbrio e concentração de glicerol. Isoladamente, o aumento no percentual de glicerol de 1 para 6% na composição do meio diluidor, promove melhoria pontual na integridade da membrana citoplasmática e no índice espermático ao descongelamento. Porém, quando se associa os resultados observados dos maiores níveis de glicerol à presença do tempo de equilíbrio e à taxa lenta de congelamento, aumentos significativos são observados em todos os parâmetros estudados. Variação individual foi observada no índice espermático no sêmen descongelado, mas não no sêmen fresco. Já os parâmetros de integridade e viabilidade da membrana plasmática apresentaram variação individual em ambos. Quando se avalia a variável raça não se observa alterações significativas quanto aos parâmetros avaliados no sêmen fresco, porém no sêmen descongelado, observaram-se variações significativas na integridade e viabilidade da membrana plasmática. Os cães da raça Schnauzer apresentaram significativamente menor longevidade espermática após o descongelamento. As raças Doberman e Boxer apresentaram os melhores resultados de congelabilidade na avaliação in vitro. A exceção do teste de coloração supravital, os parâmetros estudados apresentaram correlações significativas entre os dados coletados no sêmen fresco com aqueles observados no sêmen descongelado.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 997073 bytes, checksum: 2d3fccca81d549c09ca60efb028b795b (MD5) Previous issue date: 2008-09-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The study of testicular morphology and the spermatogenic process in wild animals is fundamentally important for the knowledge about the physiologic patterns, by which the assisted reproduction protocols are established. The objectives of this study were to describe morphometry data of testis and seminiferous tubule, quantify and describe the arrangement of the elements in intertubular tissue, and yet to quantify the relationship of population seminiferous epithelium, and index of Sertoli cells of adults oncilla (Leopardus tigrinus). So, testis fragments taken from five adult oncilla proceeding from Cetas-UFV and a conservation breeder center of this species located in Belo Horizonte city. In L. tigrinus studied the average body weight was 2.59 kg, 0.06% of which are allocated in testicular mass, and 0.04% was specifically in seminiferous tubules, that represented 81.29% of parenchyma testis. The average diameter of the seminiferous tubules was 228.29 μm and the average thickness of seminiferous epithelium was 78.86 μm. The oncilla show an average of 16.99 meters of seminiferous tubules per gram of testis. In the intertubular compartment of this species, the volume of Leydig cells and its nuclear average diameter respectively are 765.61μm3 e 7μm. The Leydig cell occupied 0.005% body weight and their average number per gram of testicular were much higher than that observed in most wild carnivorous and domestic animals have had already studied. In seminiferous epithelium of these animals in each cross section of seminiferous tubules in stage I, there was an average of 1.72 spermatogonia type A, 24.04 primary spermatocytes in pre-leptotene, 23.88 primary spermatocytes in pachytene, round spermatids 88.86, 6.73 and Sertoli cells. As the number of rounded spermatids were 3.52, computed to each primary spermatocytes in pachytene, an average loss of 12% were observed in meiotic process. The general yield of spermatogenic process in this species was 51.93 cells. The index of Sertoli cell in oncilla was 21.15 cells of germinative line, of which 13.48 are rounded spermatids. / O estudo da morfologia testicular e do processo espermatogênico em animais silvestres é de fundamental importância para o conhecimento de padrões fisiológicos, pelos quais pode-se estabelecer protocolos em reprodução assistida. Os objetivos deste estudo foram descrever dados de morfometria testicular e do túbulo seminífero, quantificar e caracterizar o arranjo dos elementos do tecido intertubular e ainda, quantificar as relações populacionais do epitélio seminífero e índice de células de Sertoli em gato-do-mato-pequeno (Leopardus tigrinus) adultos. Para tal, foram utilizados cinco animais machos adultos provenientes do Centro de Triagem de Animais Silvestres da UFV e de um criatório conservacionista desta espécie situado na cidade de Belo Horizonte, os quais foram submetidos a biópsias testiculares a fim de se obter material biológico para avaliação histológica. Nos L. tigrinus estudados o peso corporal médio foi de 2,59 Kg, dos quais 0,060% estão alocados em massa testicular, e 0,04% especificamente em túbulos seminíferos, o que representa 81,29% do parênquima testicular. O diâmetro médio dos túbulos seminíferos foi de 228,29μm e a espessura média do epitélio seminífero foi de 78,86μm. Os gatos-do-mato-pequenos apresentam em média 16,99 metros de túbulo seminífero por grama de testículo. No compartimento intertubular desta espécie, o volume das células de Leydig e o seu diâmetro nuclear médio forma respectivamente 765,61μm3 e 7μm. As células de Leydig ocuparam em média 0,005% do peso corporal e seu número médio por grama de testículo apresentou-se bastante superior ao observado na maioria dos carnívoros silvestres e ainda dos animais domésticos já estudados. No epitélio seminífero destes animais, em cada secção transversal do túbulo seminífero de gato-do-mato-pequeno no estádio I, observou-se em média 1,72 espermatogônias do tipo A, 24,04 espermatócitos primários em préleptóteno, 23,88 espermatócitos primários em paquíteno, 88,86 espermátides arredondadas, e 6,73 células de Sertoli. Quanto ao número espermátides arredondadas 3,52 foram computadas em relação ao número de espermatócitos primários em paquíteno, gerando perda média de 12%, e o rendimento geral da espermatogênese desta espécie foi de 51,93 células. O índice de célula de Sertoli em gato-do-mato-pequeno foi de é de 21,15 células da linhagem germinativa, das quais 13,48 são espermátides arredondadas.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 290398 bytes, checksum: fcac0b1c33f378861ed137c93a04628c (MD5) Previous issue date: 2004-03-05 / Universidade Federal do Espírito Santo / The objective of this study was evaluate the relationship between complementary tests (hypoosmotic swelling test - HOST, thermo resistance test - TRT, and acrossome reaction test AR test) with the conventional evaluation tests (physical and morphologic aspects) of bovine frozen/thawed semen, the values were correlated with the conception rate. Twenty-three frozen specimens from 13 Nelore bulls were used. The semen was collected and diluted in standard egg yolk, packing in 0,25mL straws with concentration of 25 x 106 viable spermatozoa per by pallet. The physical evaluation of the semen was constituted of post-thawed spermatic motility and vigour. The spermatic defects were classified in major, minor and total defects. For HOST, 20 mL of frozen/thawed semen, was added to 1,0 mL of a fructose solution in the concentration of 100mOsm/L previously heated to 37ºC, later on incubation for one hour. TRT consisted of submitting the post-thawed semen specimens to the incubation in water bath at 37ºC for 3 hours (T0: 0 hour; T1: 60 minute; T2: 120 minute; T3: 180 minute), being evaluated spermatic motility and vigour at each time (T). For the AR test the technique of naphthol yellow and erithrosin B was used to identify the percentage of spermatozoa with acrossome reacted after the frozen/thawed. To check the correlations between HOST, TRT and AR test with spermatic motility and pregnancy rate comparisons inside each bull and among different bulls were done by Qui-square at a significance rate of 5%. Analysis of regression logistics was made to evaluating the fixed effects as: effect of the bull, frozen semen specimens, retreat, reproductive status and inseminators. The average values for the spermatic motility of frozen/thawed semen evaluated by TRT were of 53.48% (T0), 43.69% (T1), 35.88% (T2), and 33.04% (T3). The percentage of reactive cells found in HOST was 37.89%. Positive correlation of average intensity were found for spermatic motility postthawed and the HOST (0,21). Weak and positive correlation of the T3 motility with HOST was high (0.64), demonstrating that the spermatozoa maintained the functionality of its plasmatic membrane after the cryopreservation, stayed viable for more time. The percentage of cells that presented acrossome reaction post-thawed was 9.85%. Negative correlations of average and high intensity (-0.25 and 0.46, respectively) were found for acrossome reaction test and the spermatic motility post-thawed and after 3 hours of incubation. No correlation (p>0,05) of TRT, HOST, AR test and post-thawed motility with the conception rate was found. There was any parameter which considered separately, could evaluate the fertilizer capacity of the semen, since the spermatic viability is multifatorial question associated with the characteristics of structural and functional integrity of their components. No significant correlation (p>0,05) of TRT, HOST, AR test and post-thawed motility with the pregnancy rate was found. The characteristics analysed may not be considered alone to evaluate the fertilizing capacity of the frozen/thawed semen. / O objetivo deste estudo foi avaliar a relação entre os testes complementares (teste hiposmótico - teste HO, teste de termo-resistência lento - TTR e teste de reação acrossômica - RA) com os testes de avaliações convencionais (aspectos físicos e morfológicos) de sêmen bovino congelado/descongelado, relacionando os valores com os índices de prenhez. Utilizou-se 23 partidas de sêmen congelado/descongelado de 13 touros adultos da raça Nelore. O sêmen foi coletado e diluído em meio tris-gema de ovo, envazado em palhetas finas (0,25 mL) com concentração de 25 x 106 espermatozóides total por dose. A avaliação física do sêmen constituiu-se de motilidade espermática progressiva retilínea e vigor espermático pósdescongelamento. Os defeitos espermáticos foram classificados em maiores, menores e totais. Para o teste HO, 20mL de sêmen congelado/descongelado, foi adicionado a 1,0 mL de uma solução de frutose na concentração de 100mOsm/L previamente aquecida à 37ºC, e posteriormente incubado por uma hora. O TTR consistiu em submeter as partidas de sêmen pós-descongelamento à incubação em banho Maria à 37ºC durante 3 horas (T0: 0 hora; T1: 60 minutos; T2: 120 minutos; T3: 180 minutos), avaliando-se a motilidade e o vigor espermático. Para realização do teste de reação acrossômica foi utilizada a técnica do Naftol amarelo/eritrosina B para identificar a porcentagem de espermatozóides com acrossoma reagido após o processo de congelamento/descongelamento. Realizou-se a correlação simples de Pearson entre os testes HO, TTR e RA com a motilidade espermática pós-descongelamento e a taxa de prenhez. A taxa de prenhez entre partidas dentro e entre touros foi avaliada pelo teste de Qui-quadrado a 5% de probabilidade de erro. Análise de regressão logística foi efetuada no intuito de avaliar os efeitos fixos tais como: efeito do touro, partida, retiro, status reprodutivo e inseminadores. Os valores médios da motilidade espermática progressiva retilínea pós-descongelamento avaliados pelo TTR foram de 53,48% (T0), 43,69% (T1), 35,88% (T2) e 33,04% (T3). A porcentagem de células reativas ao teste HO encontrada foi de 37,89%. Correlação positiva e de média intensidade foi encontrada para a motilidade espermática progressiva retilínea pós-descongelamento e o teste HO (0,21). Entretanto, a correlação da motilidade no T3 com o teste HO foi alta (0,64), demonstrando que os espermatozóides que mantiveram a integridade de sua membrana plasmática após a criopreservação, permaneceram viáveis por mais tempo. A porcentagem de células que apresentaram acrossoma reagido pósdescongelamento foi de 9,85%. Correlações negativas de média e alta intensidade (-0,25 e -0,46, respectivamente) foram encontradas para o teste de reação acrossômica com a motilidade espermática progressiva retilínea pós-descongelamento e após 3 horas de incubação. Não houve correlação (p>0,05) do TTR, teste HO, RA e motilidade pós-descongelamento com a taxa de gestação. Não houve neste estudo, um parâmetro que considerado isoladamente, avaliasse a capacidade fertilizante do sêmen, visto que a viabilidade espermática é uma questão multifatorial associada a características de integridade estrutural e funcional de seus componentes. Portanto, as características estudadas, não podem ser consideradas isoladamente para avaliar com acurácia, a capacidade fertilizante do sêmen congelado/descongelado.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 410014 bytes, checksum: 670794b294aeae950000e5e2848a5f4f (MD5) Previous issue date: 2004-08-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aim of this study was to evaluate the vitrification of immature bovine oocytes, using differents equilibrium times and differents concentrations of ethylene glicol (EG) during equilibrium period, with a vitrification solution containing EG associated with two disaccharides. It was evaluated the influence of each treatment on the oocytes maturation rates, after thawing. The experiment was conducted in the LRA-DVT-UFV. It was tested three equilibrium solutions (ES), containing 3, 20 or 40% of EG, three equilibrium times (ET), 0,5, 5 and 15 minutes, and two vitrification solutions (VS), containing 40% of EG + 1,0 mol L-1 of trehalose or 40% of EG + 1,0 mol L-1 of sucrose. The three ES, the three ET and the two VS were combined among each other, completing 18 treatments. The controlled treatment had fresh oocytes non vitrified maturated in vitro. It was used 2.103 immature oocytes, distributed in 19 treatments. The selected oocytes were kept in the ES (basemedium with 3, 20 or 40% of EG) for a determined ET (0,5, 5 or 15 minutes). After the end of the ET, the oocytes were transfered to the VS (base-medium with 40% of EG + 1,0 mol L-1 of trehalose or 40% of EG + 1,0 mol L-1 of sucrose), for one minute. During this time, the oocytes were loaded in 0,25 mL straw and dipped directly in liquid nitrogen. The oocytes were thawed by exposing the straw for five seconds to air, followed by immersion in water bath at 37 °C for 30 to 45 seconds, and were gradually rehydrated in trehalose solutions (for treatments 1 to 9) or sucrose solutions (for treatments 10 to 18). After rehydratation, the recovery rate and morfology of the oocytes were evaluated. The oocytes were cultured for 22 to 24 hours. The recovery rate was not affected by ES, ET and VS, but the morfology of the oocytes was. The ES containing 40% of EG showed the highest rate of normal oocytes (NORM) (76,94%). The ET of 15 minutes showed the highest rate of NORM (80,58%) and lowest rate of oocytes with citoplasmic retraction (CITRET) (16,02%). Vitrifications solutions containing trehalose also showed the highest rate of NORM (76,80%) and the lowest rate of CITRET (19,93%). The combinations ET for 15 minutes and ES containing 3, 20 ou 40% of EG showed the lowest rates of CITRET (17,40; 20,78 and 9,88%, respectively). The combination (treatment 14) VS with sucrose, ET for five minutes, ES with 20% of EG showed the highest rate of MII (metaphase II) (44,55%). The lowest rate of MII in the treatments that used sucrose, were found in the combinations ES with 40% of EG and ET for 15 and five minutes (0,95 and 0,00%, respectively). The highest rate of MII in the treatments that used trehalose was 5,32%. The highest rates of CC (cromatin condensation) were found in the treatments that used trehalose. It was observed that the rate of MII of treatment 14 was significally different from the controlled treatment (44,55% and 74,95%, respectively). The results point out that morfologic evaluation of immature oocytes after thawing and rehydratation, based on citoplasmic retraction, do not reflect the potencial of the oocytes fo in vitro maturation. The use of trehalose in the VS influenced negatively the oocyte maturation. The use of sucrose in the VS influenced positively the oocyte maturation. Elevated concentrations of EG (40%) associated with a long ET (five and 15 minutes) did not favor the oocyte development. The protocol using 20% of EG in the ES, with ET of five minutes and the VS containing 40% of EG + 1,0 mol L-1 of sucrose, showed good rates of in vitro maturation, for immature bovine oocyte. / O objetivo do presente trabalho foi avaliar a vitrificação de ovócitos imaturos de bovinos, utilizando diferentes tempos e concentrações de etilenoglicol (EG) no equilíbrio, com a solução de vitrificação contendo o EG associado com dois dissacarídeos. Avaliou-se a influência de cada tratamento sobre a taxa de maturação dos ovócitos, após o descongelamento. O experimento foi realizado no LRA-DVT-UFV. Foram testados três soluções de equilíbrio (SE), contendo 3, 20 ou 40% de EG, três tempos de equilíbrio (TE), 0,5, 5 e 15 minutos, e duas soluções de vitrificação (SV), contendo 40% de EG + 1,0 mol L-1 de trealose ou 40% de EG + 1,0 mol L-1 de sacarose. As três SE, os três TE e as duas SV foram combinadas entre si, perfazendo um total de 18 tratamentos. O tratamento controle continha ovócitos frescos não congelados, maturados in vitro. Foram utilizados 2.103 ovócitos imaturos, distribuídos em 19 tratamentos. Os ovócitos selecionados foram mantidos imersos na SE (meiobase com 3, 20 ou 40% de EG) por um determinado TE (0,5, 5 ou 15 minutos). Após o término do TE os ovócitos foram tranferidos para a SV (meio-base com 40% de EG e 1,0 mol L-1 de trealose ou 40% de EG e 1,0 mol L-1 de sacarose), por um minuto. Durante este tempo, os ovócitos foram envasados em palheta de 0,25 mL e colocados diretamente no nitrogênio líquido. Os ovócitos foram descongelados por meio da exposição das palhetas por cinco segundos ao ar, seguida da imersão em Banho Maria a 37 °C por 30 a 45 segundos, e reidratados gradativamente em soluções de trealose (para os tratamentos 1 a 9) ou sacarose (para os tratamentos 10 a 18). Após a reidratação, foi avaliado a taxa de recuperação e a morfologia dos ovócitos.Os ovócitos foram cultivados durante 22 a 24 horas. Observou-se que a SE, TE e a SV não influenciaram a taxa de recuperação, mas influenciaram a morfologia dos ovócitos. A SE que continha 40% EG proporcionou maior taxa de ovócitos normais (OVNORM) (76,94%). O TE de 15 minutos proporcionou maior taxa de OVNORM (80,58%) e menor taxa de ovócitos com retração citoplasmática (OVRET) (16,02%). As soluções de vitrficação contendo a trealose também proporcionaram maior OVNORM (76,80%) e menor OVRET (19,93%). As combinações TE por 15 minutos e SE com 3, 20 ou 40% de EG proporcionaram as menores OVRET (17,40; 20,78 e 9,88%, respectivamente). A combinação (tratamento 14) SV com sacarose, TE por cinco minutos, SE com 20% de EG proporcionou a maior taxa de MII (metáfase II) (44,55%). As piores taxas de MII para os ovócitos dos tratamentos que envolveram a sacarose, foram encontradas nas combinações de SE com 40% de EG e TE por 15 e 5 minutos (0,95 e 0,00%, respectivamente). A maior taxa de MII para os ovócitos dos tratamentos que envolveram a trealose foi de 5,32%. As maiores taxas de CC (condensação da cromatina) foram observadas nos tratamentos que envolveram a trealose. Observou-se que a taxa de MII do tratamento 14 foi significativamente diferente do tratamento controle (44,55% e 74,95%, respectivamente). Conclui-se que a avaliação morfológica de ovócitos imaturos após o descongelamento e reidratação, com base na retração citoplasmática, não reflete o verdadeiro potencial de maturação in vitro dos ovócitos. O uso da trealose na SV influenciou negativamente a maturação ovocitária. O uso da sacarose na SV influenciou positivamente a maturação ovocitária. Concentrações elevadas de EG (40%) associado a um longo TE (cinco e 15 minutos) não favoreceram o desenvolvimento ovocitário. O protocolo utilizando 20% de EG na SE, com TE de cinco minutos e com a SV contendo 40% de EG + 1,0 mol L-1 de sacarose, proporcionou índices razoáveis de maturação in vitro, para ovócitos imaturos de bovinos.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 273286 bytes, checksum: 9542fd937bde4847604c5b52aa572841 (MD5) Previous issue date: 2013-02-26 / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / The maintenance of naturalized swine breeds is very important for the Brazilianpork production industry, due to the potential source of new genetic variants. The Piau breed is considered one of the best and the most important Brazilian domestic naturalized swine breeds. Thus, research towards developing protocols for freezing semen is essential in order to create germplasm banks and protect the endangered swine breeds. Protocols for boar semen cryopreservation require the centrifugation of semen in order to separate sperm cells from the seminal plasma, nevertheless it has not been main focus on many studies. The aim on this study was to evaluate the effect of centrifugation and freezing curve in cryopreservation protocol on after thawing sperm viability of Piau swine breed (Sus scrofa), through assessment in vitro tests. Six ejaculates from five Piau boars were used, with ages ranging from 1.5 to 5.0 years, approved by andrologic examination, 30 samples in total. The semen collections were performed using the method of stimulation with a gloved hand with the aid of a dummy or a sow in natural estrus. Two centrifugations (800 G for ten minutes and 2400 G for three minutes) and two freezing curves (with conventional nitrogen vapor- freezing 1 and controlled by a programmed freezing machine- freezing 2) were tested. So the treatments were divided into M3- centrifugation at 2400 G for 3 minutes and freezing 2; M10- centrifugation at 800 G for 10 minutes and freezing 2; R3-centrifugation at 2400 G for 3 minutes and freezing 1; R10- centrifugation 800 for 10 minutes and freezing 1. After thawing, the averages recorded for total sperm motility and vigor of semen were 44.0 ± 10.3 and 3.1 ± 0.4; 44.3 ± 7.7 and 3.0 ± 0.3; 39.2 ± 10.2 and 2.9 ± 0.4; 38.0 ± 9.2 and 2.9 ± 0.4 respectively for treatments M3, M10, R3 and R10, with no difference between the groups (p> 0.05). The mean values in the different treatments did not differ regarding supravital test (39.9 ± 7.9; 40.1 ± 8.1; 37.3 ± 7.0; 36.5 ± 6.8, respectively to M3, M10, R3 and R10), hypoosmotic, the number of sperm bound perivitelline membrane of chicken egg yolk and morphology (p> 0.05). No interaction between freezing curve and centrifugation force was detected, hence the further individual analysis. In the present study it was observed that both the curve and the freezing spin regime influence on after thawing sperm quality, and shorter centrifugation periods and freezing rates decrease with temperature controlled by machine are the most suitable to decrease sperm injuries. / A manutenção das chamadas raças naturalizadas de suínos é muito importante, pois constituem fontes potenciais de novas variantes genéticas de extrema importância para a suinocultura nacional. A raça Piau é considerada uma das melhores e mais importantes raças naturalizadas brasileiras. Desta forma, a pesquisa em desenvolvimento de protocolos de congelamento de sêmen é imprescindível para formação de bancos de germoplasma e proteção de raças suínas em risco de extinção. Protocolos de criopreservação de sêmen suíno necessitam de centrifugação para separar os espermatozóides do plasma seminal, mas essa não tem sido muito enfocada nos estudos. O objetivo no presente estudo foi avaliar o efeito do tempo de centrifugação e da curva de congelamento em protocolo de criopreservação sobre a viabilidade espermática pós-descongelamento de suínos da raça Piau (Sus scrofa), por meio de testes de avaliação in vitro. Foram utilizados seis ejaculados de cinco varrões da raça Piau, com idades variando de 1,5 a 5,0 anos, aprovados por meio de exame andrológico, totalizando 30 amostras. As coletas de sêmen foram realizadas utilizando o método da estimulação com a mão enluvada com auxílio de um manequim ou uma fêmea em estro natural. Foram testadas duas centrifugações (800 G por dez minutos e 2400 G por três minutos) e duas curvas de congelamento (convencional com vapor de nitrogênio - congelamento 1 e controlada por uma máquina de congelamento programada- congelamento 2). Dessa forma os tratamentos foram divididos em M3-Centrifugação à 2400 G por 3 minutos e congelamento 2; M10- Centrifugação à 800 G por 10 minutos e congelamento 2; R3-Centrifugação à 2400 G por 3 minutos e congelamento 1; R10-Centrifugação à 800 G por 10 minutos e congelamento 1. Após o descongelamento, as médias registradas para motilidade espermática total e vigor do sêmen foram 44,0±10,3 e 3,1±0,4; 44,3±7,7 e 3,0±0,3; 39,2±10,2 e 2,9±0,4; 38,0±9,2 e 2,9±0,4 respectivamente para os tratamentos M3, M10, R3 e R10, não havendo diferença entre os mesmos (p>0,05). Os valores médios nos diferentes tratamentos não apresentaram diferença em relação aos testes supravital (39,9±7,9; 40,1±8,1; 37,3±7,0; 36,5±6,8; respectivamente para M3, M10, R3e R10), hiposmótico, número de espermatozóides ligados a membrana perivitelínica da gema de ovo de galinha e morfologia espermática (p>0,05). Não houve interação entre curva de congelamento e centrifugação, sendo então analisadas de forma independente. No presente estudo foi observado que tanto a curva de congelamento quanto o regime de centrifugação influenciam na qualidade espermática pós-descongelamento, sendo que centrifugações com tempos mais curtos e curvas de congelamento com queda de temperatura controlada por máquina são as mais indicadas para mininizar as injúrias espermáticas.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1148814 bytes, checksum: fed3d8d370f810a216a50acab2db6ae6 (MD5) Previous issue date: 2013-04-30 / The experiment was conducted at the Animal Reproduction Section of Veterinary Department, UFV, Viçosa, MG. The aim of the study was develop a technique of cryopreservation in order to improve the viability of goat semen after thawing. Were used four treatments: T1, cooling time of 1 h; T2, cooling time of 2 h; T3, cooling time of 4 h; and T4, with cooling time of 6 h before freezing. The semen was collected from four adult goats with three years old, totaling five collections using as dummy an adult male and the artificial vagina method, with the collections being conducted during the natural breeding season (April and May 2012). Were evaluated physical characteristics of semen immediately after collection and after thawing. After thawing, were also performed four complementary tests: heat resistance (TTR), hyposmotic (HOST), membrane integrity (INT), and morphological. The average values obtained for the fresh semen as the volume (mL), motility (%), sperm vigor (0-5) and sperm concentration (x109 total) were within the standards set by the Brazilian College of Animal Reproduction (1998), 1,5; 85%, 3,78; 3,3 billion / ml, respectively. The postthaw sperm motility and sperm vigor in the T2 showed mot. (38.0 ± 3.3) and vigor (2.2 ± 0.1), T3 mot. (52.3 ± 4.7) vigor (2.4 ± 0.1) and T4 mot. (47.0 ± 5.0) and vigor (2.4 ± 0.1), also proved within the values recommended by CBRA (1998). It was observed that the semen had resistance until the time 180 minutes in all treatments throughout the TTR. However, semen samples in treatments 3 and 4 were the ones that obtained better results. Regression analysis was performed to strengthen the results of the TTR time zero, where a greater curve was observed on time 265 minutes cooling, in other words, around 4 h and 25 minutes. The complementary tests (HOST, morphological and INT) performed in this study with different cooling times showed differences (P <0.05) between treatments only in INT test (29,7±3,3; 39,8±4,6; 50,0±5,1 e 56,5±4,1). Positive correlation was observed between motility and sperm vigor, and between motility and test INT. It is concluded that the cooling time of goat semen in times of 4 and 6 h has promoted better sperm cell viability after thawing of semen, increasing longevity of the spermatozoa. / O experimento foi realizado no Setor de Reprodução Animal do Departamento de Veterinária da UFV, Viçosa-MG. O objetivo do estudo foi desenvolver uma técnica de criopreservação visando melhorar a viabilidade do sêmen de caprino após descongelamento. Foram utilizados 4 tratamentos: T1, tempo de resfriamento de 1 h; T2, tempo de resfriamento de 2 h; T3, tempo de resfriamento de 4 h; e T4, com tempo de resfriamento de 6 h antes do congelamento. O sêmen foi coletado de quatro caprinos adultos com três anos idade, realizando-se cinco coletas/animal, utilizando um macho adulto como manequim e metodo de vagina artificial, com as coletas sendo realizadas durante a estação de monta natural (abril e maio de 2012. Foram avaliadas as características físicas do sêmen imediatamente após a coleta e após o descongelamento. Após o descongelamento, foram realizados também quatro testes complementares: termorresistência (TTR), hiposmótico (HOST), de integridade de membrana (INT), e morfológico. Os valores médios obtidos para o sêmen fresco quanto a volume (mL), motilidade espermática progressiva (%), vigor espermático (0-5) e concentração espermática (x109 totais), se encontraram dentro dos padrões preconizados pelo Colégio Brasileiro de Reprodução Animal (1998), respectivamente de 1,5; 85%, 3,78; 3,3 bilhões/mL. A motilidade espermática pós-descongelamento e o vigor espermático nos tratamentos T2 mot. (38,0±3,3) e vigor (2,2±0,1) , T3 mot. (52,3±4,7) vigor (2,4±0,1) e T4 mot. (47,0±5,0) e vigor (2,4±0,1), também se mostraram nos padrões recomendados pelo CBRA (1998). Foi observado que o sêmen teve resistência até o tempo de 180 minutos em todos os tratamentos ao longo do TTR. Porém, as amostras de sêmen nos tratamentos 3 e 4 foram os que obtiveram melhores resultados. Foi realizada análise de regressão para reforçar os resultados do tempo zero do TTR, onde se observou uma curva maior no tempo de 265 minutos de resfriamento, ou seja, por volta de 4hs e 25minutos. Os valores médios dos parâmetros seminais analisados nos testes complementares (HOST, morfológico e INT) realizados no presente estudo se mostraram diferentes (P<0,05) entre os tratamentos somente no teste INT (29,7±3,3; 39,8±4,6; 50,0±5,1 e 56,5±4,1). Foi observada correlação positiva entre motilidade e vigor espermático, e entre motilidade e teste INT. Conclui-se que o tempo de resfriamento do sêmen de caprino em tempos de 4 e 6 h promoveu melhor viabilidade da célula espermática após o descongelamento do sêmen, aumentado a longevidade do espermatozoide.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3118832 bytes, checksum: 81687fa6c0330c0e46d76f4e683d9673 (MD5) Previous issue date: 2002-08-12 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This study aimed at the evaluation of the effects from cryopreservation on the in vitro matured and immature oocytes, using the conventional method. The experiment was carried out in the Animal Reproduction Laboratory - DVT-UFV, by using oocytes from cows ovaries from slaughterhouse, which were distributed into six treatments. Treatment 1 (T1): non-frozen oocytes (fresh ones) provided with the cumulus oophorus cells (COC) which were immediately submitted to the processes MIV, FIV and CIV. Treatment 2 (T2): non-frozen oocytes (fresh ones), deprived unprovided of the cumulus oophorus cells (naked), which were immediately submitted to MIV, FIV and CIV. Treatment 3 (T3): immature oocytes provided with the cumulus oophorus cells, which were submitted to cryopreservation just after selection. Later, they were thawed and those considered as normal ones were submitted to MIV, FIV and CIV. Treatment 4 (T4): naked oocytes submitted to cryopreservation. Later, they were thawed and those considered as normal ones were submitted to MIV, FIV and CIV. Treatment 5 (T5): oocytes provided with the cumulus oophorus cells, matured in vitro, and then they were frozen. Later, they were thawed and those considered as normal ones were submitted to recultivation for 2 hours in a maturation medium, and then submitted to FIV and CIV. Treatment 6 (T6): naked, in vitro matured oocytes which were submitted to cryopreservation. After thawing, those oocytes which were considered as normal ones were submitted to recultivation for 2 hours, and then to FIV and CIV. Those oocytes of the treatments 3, 4, 5 and 6 were frozen in a solution containing 1.8 mol L-1 ethylene glycol (EG) in Talp-Hepes (base medium) added with 0.4% BSA-V by the conventional method. The oocytes were dehydrated by immersion into three solutions (phases) at increasing concentrations of the cryoproctetor, (0.6; 1.2 and 1.8 mol L-1 of EG) during a maximum permanence time of five minutes for each phase, at environmental temperature. Thawing was accomplished by immersion into water bath at 30oC for 20 seconds. Later, the oocytes were rehydrated at three stages, that is, 0.9 mol L-1 EG + 0.3 mol L -1 sucrose, 0.3 mol L-1 sucrose, and without both EG and sucrose for six minutes each one. After thawing, the oocytes recovery rates were 92.6, 97.5, 96.6 and 93,2% for the treatments 3, 4, 5 and 6, respectively. In relation to the recovered oocytes, the following were also found: a cytoplasm withdrawal rate of 3.3, 0.8, 0.3 and 6.2%, and a cellular content loss of 2.2, 13.1, 3.8 and 16.1%, also for treatments 3, 4, 5 and 6, respectively. The frozen immature oocytes presented a maturation rate of 9.2 and 5.8% (treatments 3 and 4, respectively); these results were much inferior to those obtained by the fresh oocytes, that is, 82.5 (T1) and 75.4% (T2). The fecundation rates were 56.2, 0.0, 38.7, 8.6, 63.6 and 16.7%, while the clivage rates were 36.3, 7.9, 0.4, 0.0, 0.0, and 0.0% for treatments 1, 2, 3, 4, 5 and 6, respectively. Only the unfrozen and no-naked oocytes (T1) exhibited development of morula and blastocyst (34.5%), after fecundation. These results point out that the adopted freezing protocols affected the viability of the oocytes. / Este estudo objetivou avaliar os efeitos da criopreservação pelo método convencional em ovócitos imaturos e maturados in vitro. O experimento foi conduzido no Laboratório de Reprodução Animal - DVT-UFV, utilizando-se ovócitos provenientes de ovários de vacas abatidas em matadouro e distribuídos aleatoriamente em seis tratamentos. Tratamento 1 (T1): ovócitos não congelados (frescos) providos de células do cumulus oophorus (COC), os quais foram imediatamente submetidos à MIV, FIV e CIV. Tratamento 2 (T2): ovócitos não congelados (frescos) e desprovidos de células do cumulus oophorus (desnudados), os quais foram imediatamente submetidos ao MIV, FIV e CIV. Tratamento 3 (T3): ovócitos imaturos, providos de células do cumulus oophorus, submetidos à criopreservação imediatamente após a seleção. Posteriormente, esses ovócitos foram descongelados e aqueles considerados normais foram submetidos à MIV, FIV e CIV. Tratamento 4 (T4): ovócitos desnudados e submetidos à criopreservação. Posteriormente, foram descongelados e aqueles considerados normais foram submetidos à MIV, FIV e CIV. Tratamento 5 (T5): ovócitos providos de células do cumulus oophorus, maturados in vitro e, em seguida, congelados. Posteriormente, foram descongelados e aqueles considerados normais foram submetidos ao recultivo em meio de maturação por duas horas e, então, submetidos à FIV e CIV. Tratamento 6 (T6): ovócitos desnudos, maturados in vitro e, posteriormente, submetidos a criopreservação. Após a descongelação, os considerados normais foram submetidos ao recultivo por duas horas seguido de FIV e CIV. A congelação dos ovócitos dos tratamentos 3, 4, 5 e 6 foi realizada em solução contendo 1,8 mol L-1 de etileno glicol (EG) em Talp-Hepes (meio base) acrescido de 0,4% de BSA-V, utilizando-se o método convencional. Os ovócitos foram desidratados por imersão em três soluções (etapas), contendo concentrações crescentes do crioprotetor, (0,6; 1,2 e 1,8 mol L-1 de EG) sendo o tempo de permanência máxima de cinco minutos em cada etapa, em temperatura ambiente. A descongelação foi realizada por imersão em banho-Maria a 30oC por 20 segundos. Posteriormente, os ovócitos foram reidratados em três etapas (0,9 mol L-1 de EG + 0,3 mol L 1 de sacarose; 0,3 mol L-1 de sacarose, e sem EG e sem sacarose), com duração de seis minutos cada uma. Após a descongelação foram recuperados 92,6, 97,5, 96,6 e 93,2%, dos ovócitos dos tratamentos 3, 4, 5 e 6, respectivamente. Em relação aos ovócitos recuperados, verificou-se uma taxa de citoplasma retraído de 3,3; 0,8; 0,3 e 6,2% e perda de conteúdo celular de 2,2; 13,1; 3,8 e 16,1%, também para os tratamentos 3, 4, 5 e 6, respectivamente. Os ovócitos congelados imaturos apresentaram taxa de maturação de 9,2 e 5,8% (tratamentos 3 e 4, respectivamente), resultados estes bem inferiores aos obtidos para os ovócitos frescos, sendo 82,5 (T1) e 75,4% (T2). Foram encontradas taxas de fecundação de 56,2; 0,0; 38,7; 8,6; 63,6 e 16,7% e de clivagem de 36,3; 7,9; 0,4; 0,0; 0,0 e 0,0%, para os tratamentos 1, 2, 3, 4, 5 e 6, respectivamente. Somente os ovócitos não congelados e não desnudados (T1) apresentaram desenvolvimento para mórulas e blastocistos (34,5%), após a fecundação. Estes resultados indicam que o protocolo de congelação adotado comprometeu a viabilidade do ovócito.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 210893 bytes, checksum: c6cc2b6809ce21fbf9389200ea196914 (MD5) Previous issue date: 2003-04-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The objective of this study was to evaluate the efficacy of different associations of natural antioxidants in freezing the bovine semen. Eighteen ejaculates from three bulls were used to test the following associations: T1 TRIS egg yolk extender (control group); T2 control + equex; T3 control + Vitamin E + equex; T4 control + Vitamin C; T5 control + Vitamin E + equex and Vitamin C. The ejaculate was equally distributed in five treatments with a final concentration of 1000 x 106 sperm cells/ml and they were envased in 0.5 mL straws. The straws were cooled for five hours and then frozen in liquid N2. The thawing of the samples was made by immersion of the straws in a 370 C water-bath for 30 seconds. Motility, vigor, pathology, longevity and integrity of sperm cells were evaluated by hiposmotic and termoresistance test pre and pos-freezing. There was no difference (P > 0.05) in motility among treatments neither pre nor pos-freezing. In the pos-thawed semen T5 showed the best vigor (3.51; P < 0.05). There was significant (P < 0.05) difference between medium values obtained in T 2, T3, T4, T5 (29.67; 36.55; 31.83; 35.78; respectively) and the value obtained in T1 (control; 25.17). Treatments 2, 3, 4, 5 showed higher values for functional and structural integrity of sperm plasma membrane than showed treatment 1, as observed in the fluorescent test. It may be concluded that the use of antioxidants in bovine semen extender for cryopreservation protects sperm plasma membrane, although it did not increase the sperm motility. / Este estudo teve o objetivo de avaliar a eficácia de diferentes associações de antioxidantes naturais no congelamento de sêmen bovino. Dezoito ejaculados de três touros foram utilizados para testar as seguintes associações dos componentes: T1- meio Tris-gema (controle), T2-controle + equex, T3- controle + vitamina E + equex, T4- controle + vitamina C, T5- controle + vitamina E + equex e vitamina C. O ejaculado foi distribuído igualmente em cinco tratamentos, com concentração final de 100 x 106 espermatozóides por mL, envasados em palhetas de 0,5 mL. Estas palhetas permaneceram resfriadas por cinco horas quando foram congeladas em nitrogênio líquido. O descongelamento foi realizado submergindo as palhetas em banho-maria a 37°C por no mínimo trinta segundos. Os parâmetros de turbilhonamento, motilidade espermática progressiva retilínea, vigor, patologia espermática, longevidade e integridade das células espermáticas pelos testes de termo-resistência e hiposmótico foram avaliados antes e após o congelamento. A motilidade espermática progressiva retilínea não diferiu entre os valores médios observados nos tratamentos nem antes, nem após o congelamento (p>0,05). Já o vigor observado no tratamento 5 foi maior após descongelamento, comparado aos demais grupos experimentais, (3,51; p<0,05). Na avaliação da integridade funcional e estrutural da membrana plasmática dos espermatozóides, os valores médios obtidos nos tratamentos 2, 3, 4 e 5 (29,67, 36,55, 31,83, 35,78%, respectivamente) diferiram favoravelmente aos obtidos no tratamento 1 (controle; 25,17%), com a utilização do teste de fluorescência. Pode-se concluir que a utilização dos antioxidantes no diluente de sêmen bovino para o processo de criopreservação protege a membrana plasmática dos espermatozóides, embora não tenha aumentado a motilidade espermática progressiva retilínea. E que o equex foi eficaz como emulsificador do tocoferol e também protegeu a membrana plasmática quando utilizado sozinho.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:54:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 869208 bytes, checksum: 49cc1ade4a40ef37c41af4eebf8c42a1 (MD5) Previous issue date: 2010-07-23 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The objectives of this study were to examine whether vitamin E has an effect on the structural integrity of goat sperm plasma membrane, as well to investigate the potential use of this vitamin in extenders medium for cryopreservation of goat semen. Two adult Parda Alpina breed males were used, totalizing 8 semen samples for each one. After collection, the physical characteristics of the semen, the sperm morphology and the functional integrity of sperm membrane by hypoosmotic swelling test were evaluated. Then the semen was diluted as follows: BIOXCELL® (Control), BIOXCELL® + Equex, BIOXCELL® + Vitamin E (25&#956;M), BIOXCELL® + Vitamin E (50&#956;M) and BIOXCELL® + Vitamin E (100&#956;M). After the final dilutions, the progressive motility, sperm vigor and hypoosmotic swelling test were performed for each treatment. The semen was packaged in 0.25 ml straws, the straws were cooled to 5 oC for 1 hour in plastic container containing ethyl alcohol. The pre-freezing was done in liquid nitrogen vapor for 15 minutes. After this period, the straws were immersed in liquid nitrogen. The samples were thawed in a water bath at 37 oC for 30 seconds, packaged in plastic tubes and homogenized for immediate analysis of sperm motility and vigor, hypoosmotic swelling test and thermoresistance test. In fresh semen, the physical and morphological characteristics remained within normal parameters. No correlation of motility with other variables were detected. The average volume correlated negatively with sperm vigor, minor defects and total defects (r = -0.55, r = -0.52 and r = -0.53, respectively) and positive correlation with the hypoosmotic swelling test (r = 0, 44). A negative correlation (r = -0.48) was found between sperm concentration and major defects. The minor defects and total defects values were markedly positive correlated (r = 0.98). The treatments did not differ (P > 0.05) for progressive motility, spermatic vigor and hypoosmotic swelling test of semen. The motility and vigor after thawing and during the TTR did not differ (P > 0.05) among treatments. No significant difference (P > 0.05) among treatments after the completion of the hypoosmotic swelling test was detected. Correlation was observed between motility and vigor in all treatments in the diluted semen (pre-cooled) and at all times of the TTR. No correlation between the vigor and the hypoosmotic swelling test in any of the treatments on 0H and 2H of TTR times was found, however a correlation at 1H time Equex treatment (r = 0.51) and the Control, Equex and Vit. E 50&#956;M treatment at time 3H (r = 0.44, 0.69, 0.57, respectively) were found. The thawed semen samples from Equex treatment and Vit. E 100&#956;M treatment showed correlation between motility and hypoosmotic swelling test. It is concluded that: The vitamin E did not affect any of parameters under study. / O objetivo deste estudo foi verificar se a vitamina E afeta a integridade estrutural da membrana plasmática dos espermatozóides caprinos, bem como verificar o potencial uso desta vitamina em meios diluentes de criopreservação de sêmen caprino. Foram utilizados 2 machos adultos da raça Parda alpina. Para as coletas de sêmen foi utilizada vagina artificial onde se obteve 8 ejaculados por animal. Após a coleta, fez-se a avaliação física do sêmen, morfológica dos espermatozóides e da integridade funcional da membrana espermática pelo teste hiposmótico. Em seguida, o sêmen foi diluído com os seguintes tratamentos: BIOXCELL® (Controle), BIOXCELL® + Equex, BIOXCELL® + Vitamina E 25&#956;M, BIOXCELL® + Vitamina E 50&#956;M e BIOXCELL® + Vitamina E 100&#956;M. Após as diluições finais, foram avaliados a motilidade progressiva e vigor espermático e realizado teste hiposmótico de cada tratamento. O sêmen foi envasado em palhetas de 0,25mL, as palhetas foram resfriadas a 5 oC, durante 1 hora em refil plástico contendo álcool etílico. O pré-congelamento foi realizado em vapor de nitrogênio líquido durante 15 minutos. Após esse período, as palhetas foram imersas no nitrogênio para o congelamento final do sêmen. As partidas foram descongeladas em banho-maria a 37 oC por 30 segundos, acondicionadas em tubos plásticos e homogeneizadas para a análise imediata de motilidade e vigor espermático, teste hiposmótico e teste de termorresistência. No sêmen fresco, as características físicas e morfológicas mantiveram-se dentro de parâmetros normais. Não houve correlação da motilidade progressiva com outras variáveis. O volume apresentou correlação negativa com o vigor espermático, defeitos menores e defeitos totais (r = -0,55, r = -0,52 e r = - 0,53, respectivamente) e correlação positiva com o teste hiposmótico (r = 0,44). Houve correlação média negativa (r = -0,48) entre a concentração de espermatozóides e os defeitos maiores. Os valores de defeitos menores e defeitos totais apresentaram correlação forte e positiva (r = 0,98). A motilidade progressiva, o vigor espermático e o teste hiposmótico do sêmen diluído não diferiram entre os tratamentos (P > 0,05). As médias gerais de motilidade e vigor logo após o descongelamento e ao longo do TTR não diferiram (P > 0,05) entre os tratamentos. A integridade funcional da membrana espermática, avaliada pelo teste hiposmótico, não diferiu (P > 0,05) entre os tratamentos. Foi observada correlação positiva entre motilidade e vigor dos espermatozóides em todos os tratamentos no sêmen diluído (pré-resfriado) e em todos os tempos do TTR. Não houve correlação entre o vigor e o teste hiposmótico dos espermatozóides em nenhum dos tratamentos no sêmen diluído e nos tempos 0H e 2H do TTR, havendo correlação média positiva no tratamento Equex no tempo 1H (r = 0,51) e nos tratamentos Controle, Equex e Vit. E 50&#956;M no tempo 3H (r = 0,44, 0,69, 0,57, respectivamente). Houve correlação entre a motilidade e o teste hiposmótico do sêmen diluído no Tramento Vit. E 50&#956;M (r = 0,68). As amostras de sêmen dos tratamentos Equex e Vit. E 100&#956;M descongeladas mostraram correlações entre motilidade e teste hiposmótico. Conclui-se que: Nenhum dos parâmetros avaliados neste estudo foi afetado pela Vitamina E.

Submitted by Suzane Peres Campanholi null (supc@hotmail.com) on 2016-06-02T21:33:16Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Mestrado Suzane - Versão final pro repositório UNESP.pdf: 1223510 bytes, checksum: 26ebdc009120ee189335639e58233246 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-06-06T16:46:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 campanholi_sp_me_jabo.pdf: 1223510 bytes, checksum: 26ebdc009120ee189335639e58233246 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-06T16:46:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 campanholi_sp_me_jabo.pdf: 1223510 bytes, checksum: 26ebdc009120ee189335639e58233246 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O plasma seminal já foi descrito como benéfico e ao mesmo tempo prejudicial aos espermatozoides e isto está relacionado com o tempo de contato entre eles. A criopreservação do sêmen em touros pode ser prejudicada por exposição contínua dos espermatozoides ao plasma seminal (PS) e a aplicação de métodos para sua remoção pode aumentar a qualidade dos espermatozoides recuperados pós-descongelação, melhorando os resultados de biotécnicas que utilizam sêmen criopreservado. Pelo fato da centrifugação causar muitos danos aos espermatozoides, a filtragem com Sperm Filter® apresenta-se como um novo método de remoção do PS que almeja melhores resultados, porém não foi encontrado relato da sua aplicação em bovinos até o momento. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito dos métodos de centrifugação e filtragem com Sperm Filter® sobre a criopreservação do sêmen bovino. Para isso, o sêmen de 38 touros Nelore foi colhido por eletroejaculação. Após a colheita, o sêmen foi fracionado em três alíquotas iguais para divisão em três grupos: controle (N), em que o sêmen foi diluído com PS; centrifugação (C), em que o PS foi removido por centrifugação a 600 X g por 10 minutos; e filtragem (F), em que o PS foi removido por filtragem com Sperm Filter®. As amostras foram criopreservadas, e pós-descongelação foram avaliados a cinética espermática, a integridade das membranas plasmática e acrossomal, o potencial mitocondrial, o estresse oxidativo e a capacidade fecundante através da produção in vitro de embriões (PIVE). Com relação à cinética, maiores valores da velocidade do trajeto (P = 0,0005) e velocidade progressiva (P = <0,0001) foram observados nos grupos C e F e os parâmetros frequência de batimento, retilinearidade e linearidade foram superiores no grupo F (P = 0,0008; P = 0,0133 e P = 0,0005, respectivamente). A integridade de membrana foi prejudicada pela centrifugação e filtragem do sêmen (P < 0,0001), porém o estresse oxidativo foi reduzido com esses métodos de remoção do PS (P < 0,0001). Na PIVE, as maiores taxas de desenvolvimento embrionário (blastocistos e blastocistos eclodidos) foram observadas no grupo N e F (P = 0,008 e P = 0,0042, respectivamente). Portanto, a remoção do plasma seminal pelo método da centrifugação reduz a qualidade do sêmen criopreservado bovino, interferindo negativamente na fertilidade dos espermatozoides e o método da filtragem com Sperm Filter® apresentou melhor resultado evidenciado por altas taxas de desenvolvimento embrionário. / Seminal plasma has been described as beneficial and harmful to the spermatozoa and this is related to the contact time between them. Cryopreservation of semen from bulls can be undermined by continuous exposure of sperm to the seminal plasma (SP) and the application of methods for removal can increase the quality of post-thaw sperm recovered, improving fertilization. Centrifugation cause a lot of damage to sperm and filtering with Sperm Filter® is a new SP removal method that aims to better results, but has not yet been applied in bull. The aim of this study was to evaluate the effect of the methods of centrifugation and filtering with Sperm Filter® on cryopreservation of bovine semen. For this, semen of 38 Nelore bulls was collected by electroejaculation. Semen was fractioned into three equal aliquots for division into three groups: control (N), wherein the semen was diluted with SP; centrifugation (C), in which the SP was removed by centrifugation at 600 X g for 10 minutes; and filtration (F), in which the SP was removed by filtration with Sperm Filter®. Samples were cryopreserved and was evaluated after thawing sperm kinetics, the integrity of plasma and acrosomal membranes, mitochondrial potential, oxidative stress and the fertilizing capacity by in vitro embryo production (IVP). The kinetics, higher values of the path velocity (P = 0.0005) and progressive speed (P = <0.0001) were observed in the groups C and F and the beat frequency parameters, straightness and linearity were higher in group F (P = 0.0008, P = 0.0133 and P = 0.0005, respectively). Membrane integrity was impaired by centrifugation and filtration of semen (P <0.0001), though oxidative stress was reduced with these SP removal methods (P <0.0001). In IVP, the highest rate of embryonic development (blastocyst and hatched blastocyst) were observed in the C and F group (P = 0.008 and P = 0.0042, respectively). Therefore, removal of seminal plasma by the method of centrifugation reduces the quality of semen cryopreserved cattle, a negative effect on fertility of sperm, and the method of filtering with Sperm Filter® showed better results evidenced by high rates of embryonic development.