Made available in DSpace on 2011-12-27T14:14:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 000386680-0.pdf: 5694528 bytes, checksum: b449d9dde8f5f2112de1c98de09f8c96 (MD5) license.txt: 581 bytes, checksum: 44ea52f0b7567232681c6e3d72285adc (MD5) / The undiscriminated use of antifungal drugs has been associated to Candida sp. antifungal resistance, requiring new alternative methods for treatment of oral candidosis. The application of photodynamic therapy (PDT) have been investigated on inactivation of human-host pathogenic microorganisms. The present study was conducted to evaluate in vitro PDT action on Candida sp. and epithelial cells. Thirtyeight Candida sp. cultures obtained from patients' oral candidosis and HEp-2 cell cultures were submitted to PDT. Indium-gallium-aluminum-phosphide (InGaAIP) laser was applied in 100 J/cm2, 270 J/cm2 and 450 J/cm2 doses associated with 100 mg/mL of methylene blue photosensitiser. After PDT, the viability of CFUs (colony formation units) and epithelial cells were quantified. The three doses applied led to a significant inactivation of Candida sp. The 450 J/cm2 dose was the most efficacious, leading to 72.42% Candida sp. CFUs inactivation (P<0.05), followed by 270 J/cm2 and 100 J/cm2, for which inactivation rates were 45.87% and 22.83%, respectively. Candida albicans was significant more susceptible to treatment, showing 50.44 % CFUs inactivation rate, while other Candida species showed 41.18% (P<0.05). After PDT, HEp-2 cells showed almost the same viability irrespectively the three different doses applied (P>0.05). HEp-2 cells viability, evaluated just after PDT, unrespective the dose applied, was of 70.81%, being significatively lower than that observed in the control-group (86.21%). Methylene blue and laser PDT on 100, 270 and 450 J/cm2 doses led to significant inactivation of Candida sp., being C. albicans more susceptible than other Candida species. Epithelial cells photodynamic inactivation rate was 2.24-fold lower than the rate observed in Candida sp. This fact suggests a safety margin to in vivo application. Further in vitro and in vivo studies employing animal models are needed to better confirm these results. / O uso indiscriminado de antifúngicos tem acarretado resistência da Candida sp., o que requer novas alternativas de tratamento para a candidose oral. A aplicação da terapia fotodinâmica (PDT) tem sido investigada na inativação de microrganismos patogênicos ao hospedeiro humano. O presente estudo teve por objetivo avaliar, in vitro, a ação da PDT sobre a viabilidade da Candida sp. e de células epiteliais. Culturas de Candida sp. obtidas a partir da coleta de amostras de 38 pacientes portadores de candidose oral e culturas de células HEp-2 foram submetidas à PDT. Foi empregado o laser diodo fosfeto de índio-gálio-alumínio (InGaAlP) nas dosimetrias de 100 J/cm2, 270 J/cm2 e 450 J/cm2 associado ao fotossensibilizador azul de metileno na concentração de 100 Rg/mL. Após o tratamento, a viabilidade das unidades formadoras de colônias (UFCs) e das células epiteliais foi quantificada. As três dosimetrias empregadas determinaram inativação significativa da Candida sp. (p<0,05). A dosimetria de 450 J/cm2 foi a mais eficaz, inativando 72,42% das UFCs de Candida sp., seguida pelas dosimetrias de 270 J/cm2 e 100 J/cm2 com inativação média de 45,84% e 22,83% respectivamente. A Candida albicans foi significativamente mais sensível ao tratamento, com inativação média de 50,44% das UFCs, enquanto as outras espécies de Candida apresentaram inativação média de 41,18% (p<0,05).Depois de submetidas à PDT, as células HEp-2 exibiram viabilidade semelhante nas diferentes dosimetrias (p>0,05). A viabilidade média das células HEp-2, avaliada imediatamente após a PDT, independentemente da dosimetria aplicada, foi de 70,81%, sendo esta significativamente menor do que a do grupo-controle, que foi de 86,21% (p<0,05). A PDT com azul de metileno e laser nas dosimetrias de 100 J/cm2, 270 J/cm2 e 450 J/cm2 determinou inativação significativa da Candida sp., sendo a C. albicans mais sensível que as outras espécies. As células epiteliais HEp-2 foram menos sensíveis à PDT do que a Candida sp., apresentando média de inativação fotodinâmica 2,24 vezes menor que a das células fúngicas, fato que indica a existência de uma margem de segurança para aplicação in vivo. São necessários novos estudos in vitro e em modelos animais para melhor fundamentarem-se os resultados obtidos.

Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-24T02:33:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Totti_MarildaAparecidaGoncalves_D.pdf: 5573911 bytes, checksum: db09b48095e15ef68b81ad95bb3c3fac (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: A presença de Candida albicans e o desenvolvimento de candidose na cavidade bucal de camundongos normais e xerostômicos foram avaliados após uma e quatro inoculações com 108 células viáveis de C. albicam; na boca dos animais. A xerostomia foi obtida pela retirada das glândulas salivares maiores dos camundongos (sialoadenectomia) e a recuperação da levedura foi realizada após 1, 2, 3,5, 8, 15 dias e a seguir intervalos regulares de 15 dias. A comprovação da levedura recuperada foi feita através de identificação da espécie e da verificação do fator killer. Candidose foi verificada no epitélio de 6 regiões do dorso da língua dos camundongos em cortes histológicos sagitais corados por H.E e P.A.S. Os resultados obtidos demonstraram: a) que a xerostomia produzida pela sialoadenectomia em camundongos, propiciou recuperação de C. albicans na cavidade bucal dos animais, em maior número e por períodos mais prolongados; b) as quantidades de C. albicans na cavidade bucal de camundongos sialoadenectomizados foram maiores estatisticamente significativas nas recuperações de 30 até 195 dias após 4 inoculações da levedura; c) candidose ocorreu em maior número de animais e as lesões foram mais extensas nos camundongos sialoadenectomizados, em relação aos normais / Abstract: The presence of Candida albicans and candidosis development in the oral cavity of normal and sialoadenectomized mice were evaluated after one and four inoculations, with 108 viable cells of C. albicans in the mouth of the animals. The xerostomia was obtained by surgical removal of the major salivary glands from mice (sialoadenectomy) and the recovery of the yeast was accomplished after 1, 2, 3, 5, 8, 15 days and then in intervals of 15 days. The confirmation of the yeast recovered was established through identification of the species and the verification of the killer factor. Candidosis was verified in the epithelium of six are as of the dorsal mice tongue in sagital histological sections stained with hematoxylin & eosin and periodic acid-Schifr. The results obtained showed: a) that xerostomia produced by the sialoadenectomy in the mice propitiated recovery of C. albicans in the oral cavity of the animals in higher number and for more wide periods; b) The quantity of C. Albicans in the oral cavity of sialoadenectomized mice were larger and statistically significant in the recoveries of 30 to 195 days after four inoculations of the yeast; c) candidosis occured in higher number of animals and the lesions were more extensive in the sialoadenectomized mice in relation to the normal / Doutorado / Biologia e Patologia Buco-Dental / Doutor em Odontologia

Orientador: Rinaldo Poncio Mendes / Coorientador: Maria Sueli Parreira de Arruda / Banca: Daniela Vanessa Moris de Oliveira / Banca: Vânia Nieto Brito de Souza / Banca: Vanessa Soares Lara / Banca: Angela Satie Nishkako / Resumo: Diabetes mellitus (DM) é um importante fator de predisposição para o desenvolvimento de infecções, incluindo a candidíase. Embora a incidência e a gravidade das doenças infecciosas em pacientes diabéticos estejam com frequência relacionadas a disfunções da resposta imune, seus mecanismos ainda não foram bem esclarecidos. No presente estudo avaliou-se a influência da condição de hipoinsulinemia-hiperglicemia (HH) na evolução da candidíase experimental sistêmica. Parâmetros histológicos, microbiológicos e imunológicos envolvendo medula óssea, cérebro, baço e fígado, níveis plasmáticos de quimiocina e de citocinas, atividade macrofágica e distribuição de granulócitos e subpopulações de monócitos do sangue periférico foram avaliados. Para tanto, camundongos suiços, HH-induzidos ou não pela aloxana, foram inoculados com Candida albicans pela veia da cauda e avaliados 12, 24 e 96 horas e 7 dias após infecção. A presença de fungos foi avaliada em: sangue, medula óssea, rins, fígado, cérebro e baço. A atividade macrofágica foi estudada pela resposta de fagócitos peritoneais cultivados ou não com C. albicans mortas pelo calor, avaliando-se a produção de peróxido de hidrogénio e de óxido nítrico e os níveis de TNF-α, IL-6, IL-10, IFN-γ, IL-12p70 e CCL2 em sobrenadande de cultura. Os níveis plasmáticos destas citocinas também foram determinados. A distribuição de granulócitos e das subpopulações de monócitos circulantes foi determinada por citometria de fluxo. Os resultados mostraram aumento da mortalidade em camundongos HH; apesar da ausência de diferenças de resposta tecidual entre os grupos infectados; notamos diferenças importantes na carga fúngica presente nos diversos tecidos examinados (especificar). Estes animais também exibiam elevados níveis plasmáticos de IL-6 e TNF-α, e uma produção exacerbada de TNF-α pelos macrófagos. Após infecção ... / Abstract: Diabetis mellitus (DM) is an important predisposing factor for the development of infections, including candidiasis. Although the incidence and severity of infectious diseases in diabetic patients are related to dysfunction in the immune function, the mechanisms involved in the high susceptibility to this fungal infection are not clear. In the present study, we evaluated the influence of hypoinsulinemia-hyperglycemia (HH) on plasma levels of chemokine/cytokines, macrophage activity and distribution of peripheral blood granulocytes and monocytes subsets in a murine model of systemic candidiasis. C. albicans was intravenously inoculated in alloxan-induced HH mice, which were evaluated 12, 24 and 96 hours, and 7 days after infection. Colony-forming unit analysis and/or histopathological examination were performed on blood, bone-marrow, kidney, brain, liver and spleen. Peritoneal phagocytes were cultured with or without heat-killed C. albicans, and the production of hydrogen peroxide and nitric oxide were determined. The levels of TNF-α, IL-6, IL-10, IFN-γ, IL-12p70 and CCL2 were measured in the culture supernatants and also in the plasma of the mice. The distribution of peripheral blood granulocytes and monocytes subsets were performed by flow cytometry. Our findings showed an increased mortality in the infected HH mice, but they showed no significant differences in fungal recovery. Upon histopathological examination, no differences were observed between both infected groups, but strong discrepancies in fungal load were found among the tissues examined. High plasma levels of IL-6 and TNF-α as well as an excessive TNF-α-mediated macrophage response were also observed in the infected HH-induced mice. Soon after the fungal challenge, increased percentage of granulocytes and inflammatory monocytes was observed. C.albicans-infected HH mice presented a higher percentage of granulocytes than the non-HH ... / Doutor

Orientador: Juliana Campos Junqueira / Banca: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Ewerton Garcia de Oliveira Mima / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar in vitro e in vivo as interações entre as diferentes espécies de Candida por meio da formação de biofilme em placas de 96 poços, indução de candidose experimental em modelo de Galleria mellonella e de camundongos imunossuprimidos. Foram estudadas as cepas padrão das seguintes espécies: C. albicans (ATCC 18804), C. krusei (ATCC 6258) e C. glabrata (ATCC 90030). A partir de cada espécie, foram formados biofilmes monotípicos e heterotípicos no fundo da placa de 96 poços por 48 h. A seguir, a quantidade de biofilme formado foi analisada pela determinação do número de unidades formadoras de colônias (UFC/mL). G. mellonella foi inoculada com suspensões homotípicas e heterotípicas de Candida (105 células/mL) e incubadas a 37°C. Durante 5 dias, o número de lagartas mortas foi avaliado diariamente para análise da curva de sobrevivência. Em outro experimento, após 0, 2, 4, 8, 12 e 24 h da infecção por Candida, a hemolinfa das lagartas foi extraída para contagem das células fúngicas (UFC/mL). Para a indução da candidose bucal em camundongos, os animais foram inoculados com suspensões microbianas homotípicas ou heterotípicas contendo 108 células/mL. Após 48 h da última inoculação, amostras do dorso da língua foram coletadas e semeadas em ágar cromogênico HiCrome para contagem de UFC/mL recuperadas da cavidade bucal. Em seguida, os animais foram eutanasiados e as línguas retiradas para análise macroscópica e microscópica. A análise dos dados de UFC/mL dos biofilmes in vitro, de Candida na hemolinfa de G. mellonella e da recuperação dos camundongos foi feita por Análise de Variância, Teste de Tukey ou t de Student. A análise da curva de sobrevivência foi realizada utilizando o teste Log-rank (Mantel-Cox). Para avaliação dos escores obtidos na análise macroscópica e histológica foram aplicados os testes de Krusk-Wallis ou Mann-Whitney ... / Abstract: The aim of this study was to evaluate in vitro and in vivo interactions between different Candida species through the formation of biofilms in 96-well plates, induction of experimental candidiasis in Galleria mellonella model and immunosuppressed mice. We studied the standard strains of the following species: C. albicans (ATCC 18804), C. krusei (ATCC 6258) and C. glabrata (ATCC 90030). Monotypic biofilms of each species and heterotypic biofilms were performed on the bottom of 96-well plate for 48 h. Then, the amount of biofilm was analyzed by determining the number of colony forming units (CFU/mL). The larvae of G. mellonella were inoculated with homotypic and heterotypic suspensions of Candida (105 cells/mL) and incubated at 37°C. For 5 days, the number of dead larvae was assessed daily for survival curve analysis. In another experiment, after 0, 2, 4, 8, 12 and 24 h of infection with Candida, hemolymph of worms was extracted for counting the fungal cells (CFU/mL). For induction of oral candidiasis in mice, the animals were inoculated with homotypic or heterotypic microbial suspensions containing 108 cells/mL. After 48 h of the last inoculation, samples of the tongue were collected and seed in HiCrome chromogenic agar for counting of CFU/mL recovered from the oral cavity. Then, the animals were euthanized and their tongues removed for macroscopic and microscopic analysis. The analysis of Candida biofilms in vitro CFU/mL, the hemolymph of G. mellonella and recovery of mice were made by ANOVA, Tukey test or Student's t test. The analysis of the survival curve was performed using GraphPad Prism using the Log-rank test (Mantel - Cox). Kruskal-Wallis or Mann-Whitney were applied for evaluation scores of macroscopic and histological analysis (p≤0,05). The results of biofilms in vitro have demonstrated a lower number of CFU/mL of C. albicans biofilms in heterotypic biofilm compared ... / Mestre

Orientador: Taís Maria Bauab / Banca: Marlus Chorilli / Banca: Margarete Teresa Gottardo de Almeida / Resumo: O uso indiscriminado e generalizado de drogas antifúngicas levou a um rápido desenvolvimento de cepas resistentes aos medicamentos empregados na terapêutica clínica, caracterizando-se como a principal causa de inúmeros casos de inadequação do pacienta à terapia medicamentosa disponível. Os produtos naturais vêm ganhando destaque nos últimos anos por fornecer uma nova abordagem medicamentosa para o tratamento de processos patológicos, dentre esses, os infecciosos. No decorrer da evolução genética e fisiológica dos micro-organismos, as ciências microbiológicas encontram-se em expansão, preocupando-se em introduzir novas triagens terapêuticas frente às afecções fúngicas, com especial atenção àquelas adquiridas por espécies do gênero Candida. Isto se deve das Candidas serem as leveduras mais frequentemente envolvidas nas infecções micóticas capazes de causar dano ao organismo humano, como a candidíase vulvovaginal. O uso de produtos naturais na descoberta de novos antifúngicos mostra-se de extrema importância, a exemplo, destaca-se a espécie Syngonanthus nitens que vem se mostrando ativa na descoberta do potencial antifúngico contra Candida spp. A nanotecnologia farmacêutica apresenta-se como uma importante ferramenta para aprimorar a biodisponibilidade de produtos de origem natural, ao oferecer sistemas de liberação de fármacos modernos como os sistemas precursores de cristais líquidos mucoadesivos (SPCLM) empregados para veiculação de extratos vegetais. As plantas pertencentes a família Eriocaulaceae mostram-se promissoras na atividade antifúngica, o que instiga o aprofundamento destas investigações, assim como a descoberta de novos métodos de aplicabilidade. Frente ao atual cenário, este trabalho teve o objetivo de avaliar o potencial antifúngico do extrato metanólico de escapos de Syngonanthus nitens incorporado e não incorporado em SPCLM voltado ao tratamento da candidíase vulvovaginal. O ... / Abstract: The indiscriminate and widespread use of antifungal drugs with potential led to a rapid development of resistant strains to drugs used in clinical, therapeutic and this is characterized as the main cause of numerous cases of inappropriate patient to drug therapy available. Natural products have been gaining prominence in recent years for providing a new drug therapy for the treatment of pathological processes, among these, infectious. During the genetic and physiological evolution of micro-organisms, microbiological sciences are expanding, worrying to introduce new therapeutic trials ahead to fungal diseases, with special attention to those acquired by Candida species, this being one of yeasts more often involved in mycotic infections can cause harm to human body, such as vulvovaginal candidiasis. The use of natural products in the discovery of new antifungal is extremely important, the example, is the Syngonanthus nitens species (gold grass) that has proved active in the discovery of antifungal potential against Candida spp. The pharmaceutical nanotechnology presents itself as an important tool to improve the bioavailability of natural product origin, offering modern drug release systems as precursors of mucoadhesive liquid crystal systems (PMLCS) employees for placement of plant extracts. The plants belonging to family Eriocaulaceae show promise in antifungal activity, which encourages the deepening of these investigations, as well as the discovery of new methods of applicability. Front of the current scenario, this work aimed to evaluate the antifungal potential of the methanol extract of Syngonanthus nitens scapes incorporated and not incorporated in PMLCS focusing on the treatment of vulvovaginal candidiasis. The study was conducted by applying in vitro and in vivo antifungal methods intended to elucidate the profile, having obtained satisfactory results as regards the applicability thereof in the treatment and prevention of VVC. The ... / Mestre

Nas últimas décadas, houve aumento progressivo das infecções hospitalares por leveduras principalmente, do gênero Candida. A fonte de infecção pode ser endógena ou exógena, desde que esporos unicelulares de leveduras, permanecem viáveis por meses sobre superfícies bióticas ou abióticas. Diversas espécies de leveduras são encontradas em pele e mucosas de indivíduos sadios. Em estado saprofítico ainda, as leveduras encontram-se no trato gastrintestinal humano mas, a relação entre a presença desses microorganismos e sua patogenicidade está associada a diversos fatores predisponentes, tais como: número e variedade de sítios topográficos colonizados, uso prolongado de antibióticos, infecções associadas causadas por outros microorganismos e particularmente, distúrbios imunológicos ou metabólicos. Leveduras do trato gastrintestinal podem ser transmitidas, via fecal-oral diretamente ou de modo indireto, de indivíduo para indivíduo. A transmissão de uma cepa em estado saprofítico para um hospedeiro suscetível, pode resultar em colonização seguida de infecção. A gravidade do quadro clínico depende de condições do hospedeiro e características do agente etiológico que engloba fatores de virulência e resistência a antifúngicos. Esses atributos são importantes em Candida albicans na qual, enzimas com atividade de fosfolipase e proteinase são marcadores de virulência. De outro modo, fenótipos de resistência, ocorrem, com maior freqüência, em espécies não-Candida albicans. Dada a possibilidade de instalação de doença endógena e a dispersão de cepas virulentas e resistentes, a partir de colonização gastrintestinal, estudos que contribuam para a determinação desses agentes constituintes da microbiota de pacientes internados, são importantes para o conhecimento da história natural das infecções nosocomiais por leveduras. Os objetivos deste trabalho foram avaliar o trato intestinal como fonte potencial de infecção hospitalar por leveduras, descrevendo as espécies prevalentes nas primeiras horas de internação e possíveis alterações temporais, quanto a fenótipo de virulência e resistência a antifúngicos. Foram analisadas 281 amostras de leveduras isoladas de 66 crianças internadas em unidades de pediatria e semi-intensiva de hospitais públicos das cidades de São Paulo e Guarulhos, Brasil. As amostras foram isoladas de fezes coletadas nas primeiras horas de internação e durante o período de internação. A identificação das leveduras quanto a gênero e espécie foram realizadas por métodos tradicionais, analisando aspectos morfológicos e fisiológicos. A capacidade de produção de enzimas, fosfolipase e proteinase, foram verificadas conforme proposto por Price et al. 1982 e Ruchël et al., 1982. A sensibilidade aos antifúngicos: anfotericina B (AMB), fluconazol (FZ), itraconazol (IZ), cetoconazol (CZ) e nistatina (NIS) foram analisada pela técnica de difusão por discos (CECON São Paulo, Brasil). Amostras resistentes ou com sensibilidade intermediária, foram re-avaliadas pelo método de microdiluição segundo NCCL (1997) modificado por EUCAST (2002). As espécies isoladas foram: Candida tropicalis (32,7%), C.albicans (29,9%), C.parapsilosis (27, 1%), Trichosporon cutaneum e T.inkin (3,2%), Rhodotorula mucilaginosa e R.glutinis (0,7%), C.krusei (3,6%), C.guilliermondii (2,1%), C.glabrata (0,4%) e C.kefyr (0,4%). A atividade enzimática foi observada na maioria das 84 amostras de C. albicans, sendo 96% de fosfolipase e 95% de proteinase. Entre as espécies não-albicans do gênero Candida foi verificada atividade em 97% de fosfolipase e 67% de proteinase. Amostras menos sensíveis às drogas azólicas, ou seja, amostras resistentes ou com sensibilidade dependente da dose, foram encontradas em 4,3% das 281 amostras de leveduras, sendo maior porcentagem observada em C.krusei (90%). Conclui-se que existem leveduras de diversas espécies em fezes de população pediátrica hospitalizada, com fenótipos de virulência e resistência a antifúngicos. A manutenção desses fenótipos durante o período de internação pode representar fator de risco para infecção hospitalar endógena, ou ainda, fonte de dispersão de patógenos em potencial, no meio ambiente hospitalar. / At the last decades the nosocomial infections caused by yeasts raised significantly especially by Candida yeasts. The infections source can be endogen or exogenous, since spores of unicellular and multicellular are kept viable for months and several yeasts species are found in skin and mucosa of healthy people. In a saprophytic state yeasts are found in the human gastrointestinal tract but the relationship between the presence of these microorganisms and their pathology is associated with several facts such as: number, variety of sites colonized, effective use of antibiotics, associated infections caused by another microorganisms and mainly disturbance in due to lack of immunity and metabolic. Yeasts in the gastrointestinal tract can be transmitted fecal-oral direct or indirectly from an individual to another. The transmission of a strain in a saprophytic state to a host can result in colony followed by infection. The infection can be serious depending on the host conditions and the etiologic agent that includes virulent factor and resistance to antifungal drugs. These attributes are important to Candida albicans in which enzymes with phospholipase activity are responsible for virulent factors. Resistance phenotypes, otherwise it should occur more frequently in non-albicans species. Concerning the possibility of an endogen disease and the spread of virulent and resistant strains, from the gastrointestinal colony, studies that contribute to determine these agents that constitute the microbiota of patients, are important to know the natural story of nosocomial infections caused by yeasts. This work aims at evaluating the intestinal tract as a source of hospital infections by yeasts describing the remaining species in the first hours and a possible change depending on the time that may happen to virulent phenotypic and resistance to ant fungi. Two hundred eighty one yeast samples from sixty-six children attended in pediatric and semi-intensive units in 2 public hospitals located in São Paulo and Guarulhos cities in Brazil were analyzed. The fecal samples were collected at the first hours after and during their arrival at the hospital. To identify the yeasts according to their gender and species traditional methods were used, analyzing morphological and physiological aspects. The ability to produce enzymes phospholipase and proteinase was verified the same way it was proposed by Price et al. 1982 and Ruchel et al. 1982. The sensibility to antifungals: amphotericin B (AMB), f1uconazole (FZ), ketoconazole (CZ) e nistatin (NIS), was analyzed by the diffusion technical by disks (CECON São Paulo, Brazil). Resistant samples or with intermediate sensibility were confirmed by micro-dilution method according to NCCLS (1997) modified by EUCAST (2002). The isolated species were: Candida tropicalis (30%), C.parapsilosis (27%), C.krusei (4%), Trichosporon cutaneum e T.inkin (3%), Rhodotorula mucilaginosa e R.glutinis (2%), C.guilliermondii (2%), C.glabrata (1%) and C.kefyr (1%). Enzymatic activity was verified in most of the 84 C.albicans samples being 96% of phosfolipase and 95% of proteinase production. Among the non-albicans species of Candida it was observed 97% of phospholipase and 67% of proteinase activity. Less sensitive samples to azoic drugs including resistant or SDD sensibility, which depends on the achieved dose, were found in 4.3% of the 281 samples of yeast. The hugest percentage was observed in C.krusei (90%). We can conclude that different yeast species occur in stools of pediatric population hospitalized, including virulent strains and antifungal resistant phenotypes. The persistent of these phenotypes in the intestinal tract during hospitalization period may represents a risk facto r contributing to endogen infection, or play a role in dissemination of potential pathogens inside a nosocomial environment.

Orientador: Alberto Carlos Botazzo Delbem / Banca: Sandra Helena Penha de Oliveira / Banca: Cínthia Pereira Machado Tabchoury / Banca: Nuno Gonçalo Pereira Mira / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antimicrobiana/antibiofilme e a viabilidade celular de nanopartículas de prata (NPsAg) obtidas por uma síntese 'green' associadas ou não ao β-glicerofosfato de cálcio (GPCa) contra Streptococcus mutans e espécies de Candida (cepas de referência e isolados clínicos orais incluindo cepas resistentes ao fluconazol). O efeito destes nanocompostos em combinação com o tirosol (TIR), fluconazol (FLC), nistatina (NIT) e anfotericina B (AnB) também foi avaliado. Além disso, nós avaliamos comparativamente as alterações do transcriptoma de células de C. glabrata CBS138 após exposição às NPsAg e ao Íon prata (Ag+). Inicialmente, as NPsAg foram sintetizadas por meio da redução do nitrato de prata com extratos de diferentes partes (casca, folha e semente) de uma romã (Punica granatum L.) associadas ou não ao GPCa. A Concentração Inibitória Mínima (CIM) e as Concentrações Fungicida/Bactericida Mínima (CFM e CBM) dos nanocompostos (NPsAg e NPsAg-GPCa) associados ou não ao TIR contra S. mutans e C. albicans foram determinadas pelo método de microdiluição. E, a ação das NPsAg combinadas com FLC, NIT e AnB também foi avaliada em condição planctônica contra isolados clínicos orais de espécies de Candida. O efeito dos nanocompostos associados ou não ao TIR sobre a viabilidade celular de fibroblastos da linhagem L929 e a produção de citocinas foi avaliado através dos ensaios de MTT e ELISA, respectivamente. O número de hifas foi quantificado em biofi... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to evaluate the antimicrobial/antibiofilm activities and the cell viability of silver nanoparticles (AgNPs) obtained by a 'green' synthesis associated or not to β-calcium glycerophosphate (CaGP) against Streptococcus mutans and Candida species (reference strains and oral clinical isolates including azole-resistant strains). The effect of these nanocompounds in combination with tyrosol (TYR), fluconazole (FLC), nystatin (NYT) and amphotericin B (AmB) also was evaluated. Furthermore, we evaluated, comparatively, the transcriptome alterations of cells of C. glabrata CBS138 after exposition to AgNPs and to silver ion (Ag+). Initially, AgNPs were synthesized by reducing silver nitrate with extracts of different parts (peel, leaves and seeds) of a pomegranate (Punica granatum L.) associated or not to CaGP. Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Fungicidal/Bactericidal Concentrations (MFC and MBC) of the nanocomposites (AgNPs and AgNPs-CaGP) associated or not to TYR against S. mutans and C. albicans were determined by the microdilution method. And, the action of the AgNPs combined with FLC, NYT and AmB also was evaluated in planktonic condition against oral clinical isolates of Candida species. The effect of the nanocomposites associated or not to TYR on cell viability of fibroblasts (L929) and cytokines production was evaluated through MTT and ELISA assays, respectively. The number of cells undergoing filamentation was quantified in C. albicans... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by Fabiano Malheiro (fabianomalheiro22@hotmail.com) on 2017-06-01T15:06:07Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Aplicação de Terapia Fotodinâmica (PDT) usando luz LED azul sobre culturas de candida albicans in vitro.pdf: 903559 bytes, checksum: d57e4b195e3104bd65820ee04210e36d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-01T15:06:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Aplicação de Terapia Fotodinâmica (PDT) usando luz LED azul sobre culturas de candida albicans in vitro.pdf: 903559 bytes, checksum: d57e4b195e3104bd65820ee04210e36d (MD5) Previous issue date: 2014-08-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / O fungo Candida albicans é frequentemente encontrado como componente da microbiota da cavidade oral, sendo agente etiológico da candidíase eritematosa crônica (estomatite por dentadura). Condição esta, uma infecção oportunista, de caráter crônico que acomete grande parte dos usuários de próteses. O tratamento tradicional com antifúngicos, muitas vezes é duradouro, colaborando para o surgimento de cepas resistentes desse fungo. Assim sendo, torna-se necessária uma alternativa de tratamento efetiva contra a candidíase oral e que não apresente efeitos colaterais. O objetivo desse estudo foi desenvolver um novo dispositivo a partir de um fotopolimerizador odontológico, baseado na tecnologia LED com emissão de luz azul. Além disso, verificar a ação da PDT com azul de metileno associada ao uso dessa fonte sobre culturas de Candida albicans. Após o crescimento e identificação das colônias foram selecionadas 04 cepas de Candida albicans e 01 cepa ATCC (62342) e realizadas diluições obedecendo-se a escala 0,5 de Macfarland (1x108 UFC). Desse inóculo, foram colocados 100 µl em cada poço de uma placa de microtitulação de 96 poços. As amostras das colônias de Candida albicans foram distribuídas em triplicata nas placas de cultura. No grupo testado foram colocados 90 µl de PBS, adicionado a 10 µl de azul de metileno. As placas foram incubadas durante 30 minutos e, após esse período, foi realizada a irradiação com LED azul. Para realizar a PDT a placa foi dividida em 6 setores de dimensões iguais. Cada setor foi irradiado durante 6 minutos na dosimetria de 122 J/cm2, potência de 260 mW e comprimento de onda de 455 nm em aplicação única, totalizando 36 minutos de aplicação em cada placa. Após esse desafio, foram realizadas diluições seriadas 1:10 em 4 alíquotas sucessivas. Dessa diluição foram semeados 25 µl em placas de Petri e incubadas a 37ºC por 48 horas. Após esse período foram feitas as contagens das colônias por dois examinadores previamente treinados e calibrados. Os resultados foram analisados estatisticamente usando ANOVA seguido por teste de Tukey com 5% de nível de significância e não mostraram diferença estatisticamente significante (p>0,05) entre os diferentes grupos e o grupo controle. Constatando-se que a PDT usando fonte de luz LED é uma alternativa viável, no entanto no presente estudo não foi possível constatar a ação dessa terapia. / The fungus Candida albicans is often found as the microflora of the oral cavity component, as the etiological agent of erythematous candidiasis (denture stomatitis), this condition is an opportunistic infection, a chronic condition that affects most users of prostheses. Traditional treatment with antifungals, often lasting, contributing to the manifestation of resistant strains of this fungus. Therefore, it is necessary effective alternative treatment for oral candidiasis and who does not produce side effects. The aim of this study was to develop a new device from a dental curing light, based on the LED technology with blue light emission. As well, check the action of PDT with methylene blue associated with the use of this source on cultures of Candida albicans. After the growth and identification of colonies were selected 04 strains of Candida albicans and 01strain ATCC (62342) and made dilutions obeying the scale of 0.5 Macfarland (1x108 CFU). In this inoculum, 100 mL were placed in each well of a 96-well microtiter plate wells. Samples of colonies of Candida albicans were triplicate distributed in culture plates. On the test group 90 µl of PBS, added to 10 µl of methylene blue were placed. The plates were incubated for 30 minutes and, thereafter, irradiation was performed with blue LED. To perform PDT the plate was divided into 6 sectors of equal dimensions. Each sector was irradiated for 6 minutes dosimetry of 122 J/cm² power of 260 mW and wavelength of 455 nm in a single application, totaling 36 minutes of application on each plate. After this challenge, serial dilutions 1:10 in 4 successive aliquots were performed. This dilution were seeded 25 µl in Petri dishes and incubated at 37 ° C for 48 hours. After this period the numbers of colonies were made by two previously trained and calibrated examiners. The results were statistically analyzed using ANOVA followed by Tukey test at 5% significance level and showed no statistically significant difference (p> 0.05) between the different groups and the control group. The authors verified that PDT using LED light source is a viable alternative, however in this study it was not possible to observe the action of this therapy.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-28Bitstream added on 2014-06-13T20:58:44Z : No. of bitstreams: 1 carmello_jc_me_arafo.pdf: 701741 bytes, checksum: 55eb9d8f5746ef34ede24573f0c2455a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este trabalho teve por objetivo avaliar a efetividade da terapia fotodinâmica (PDT) mediada pelo fotossensibilizador (FS) Photodithazine® (PDZ), associado à luz do tipo LED (660nm). Para tanto, foram utilizados 55 camundongos com aproximadamente 6 semanas de vida, os quais foram submetidos a indução de candidose no dorso da língua. Inicialmente os animais foram imunossuprimidos e no dia seguinte se realizou a inoculação de C. albicans na língua dos mesmos por meio de swabs embebidos na suspensão (107 Ufc/mL). Para a realização da terapia fotodinâmica o FS foi avaliado nas concentrações de 75, 100, 125 e 150mg/L. Tais grupos experimentais foram denominados de (P+L+ 75mg/L, P+L+ 100mg/L, P+L+ 125mg/L, P+L+ 150mg/L) associados a uma dose de luz de 37,5 J/cm2. Para a verificação apenas do efeito da PDZ, a mesma foi aplicada na língua dos animais, sem iluminação (grupos denominados de P+L- 75mg/L, P+L- 100mg/L, P+L- 125mg/L, P+L- 150mg/L). O efeito da luz foi avaliado por meio da iluminação das línguas com dose de luz de 37,5J/cm2, (grupo denominado de P-L+ 37,5J/cm2). Um grupo recebeu apenas inoculação por Candida (grupo P-L-, controle positivo), outro grupo não recebeu nenhum tratamento e nem inoculação fúngica (grupo CN – controle negativo). Após os experimentos realizou-se a recuperação de C. albicans das línguas dos animais por meio de swabs que foram esfregados sobre as mesmas durante 1 minuto. Esses swabs foram embebidos em tubos de ensaio com 1mL de solução salina, e diluições seriadas foram realizadas e colocadas em placas de petri com SDA. Após 48 horas de incubação a 37º C as células fúngicas foram quantificadas e o número de Ufc/mL foi determinado e analisado pelo teste ANOVA (P<.05). Os camundongos foram sacrificados e tiveram as línguas removidas cirurgicamente para realização da análise histológica. Os resultados demonstraram... / The aim of this investigation was to evaluate the effectiveness of photodynamic therapy (PDT) mediated by photossensitizer Photodithazine® (PDZ) associated with LED light (660nm) for the photoinactivation of C. albicans in a murine model of oral candidosis. Fifty-five 6-week-old female Swiss mice were immunossuppressed and in the next day small cotton pads were soaked in a C. albicans cell suspension (107CFU/mL) and swabbed in the oral cavity of mice. PDT was performed and the PS was applicated topically on the dorsum of the tongue of mice at concentrations 75, 100, 125 and 150mg/L (P+L+75, P+L+100, P+L+125 and P+L+150mg/L) associated with LED at a fluence of 37,5J/cm2. The effect of PS only was tested by application of PDZ for the same period of pre-irradiation time and irradiation at the same concentration as that for the P+L+ group, without the LED illumination (P+L-75, P+L-100, P+L-125 and P+L-150mg/L). To verify the effect of the light only, the group was exposed to the same LED dose mentioned previously (P-L+ 37,5J/cm2), 1 group). The positive control did not receive any PS or light (P-L-). The negative control group (CN) of animals was evaluated and mice did not receive any treatment. After treatment the dorsum of the tongue was swabbed for 1 minute with a cotton pad to recover C. albicans cells and the microbiological evaluation was performed. The yeast colony counts were quantified and the number of CFU/mL was determined and analyzed by ANOVA test (P<.05). Animals were killed 24 hours after treatment and the tongue of all mice were surgically removed for histological analysis. The results of this investigation demonstrated that PDT was effective in reducing C. albicans recovered from the tongue of mice at concentrations 100, 125 and 150mg/L of PS when compared with the animals from the positive control group (P-L-) (P<0.05). There was no difference between these concentrations... (Complete abstract click electronic access below)

Objetivos: definir os dados demográficos, as doenças de base e os fatores de risco associados aos episódios de candidemia ocorridos na Santa Casa Complexo Hospitalar entre 17/02/1995 e 31/12/2003; identificar as espécies envolvidas nestes episódios de candidemia e determinar a mortalidade global entre estes pacientes. Métodos: estudo de coorte retrospectivo não-controlado com inclusão de todos os casos consecutivos de candidemia diagnosticados na instituição entre 17/02/1995 e 31/12/2003. Como critério de inclusão no estudo, foi exigida a presença de sinais ou sintomas temporalmente relacionados ao isolamento de Candida em hemocultivo coletado de veia periférica. Resultados: 210 pacientes com candidemia foram incluídos (infecção nosocomial em 91,0%). O sexo feminino foi mais prevalente (51,4%) e a idade mediana foi de 41,0 anos. A doença de base mais prevalente foi câncer (neoplasias sólidas 30,5% e hematológicas 9,0%). Candida albicans foi a espécie mais freqüente (38,1%), seguida de Candida parapsilosis (27,6%) e Candida tropicalis (15,7%); candidemia por Candida glabrata ocorreu em 3,8%, e por Candida krusei, em 2,4%. Procedimentos cirúrgicos foram realizados em 43,8%, cateter venoso central estava presente em 74,8%, cateter urinário em 57,1%, ventilação mecânica em 48,6% e nutrição parenteral em 33,8%; o número mediano de antimicrobianos foi 4,0 por paciente (glicopeptídeos 54,3%, carbapenêmicos 25,7%). A maioria dos pacientes com candidemia comunitária (52,6%) havia sido hospitalizada nos 60 dias anteriores à candidemia; em 21,1%, Candida foi isolada de cateter; insuficiência renal crônica (p<0,001) e hemodiálise (p=0,027) foram mais freqüentes no grupo de candidemia comunitária do que no nosocomial; a distribuição das espécies de Candida foi semelhante entre os grupos. Comparadas aos adultos, as crianças com candidemia nosocomial foram mais expostas a antimicrobianos de amplo espectro (p<0,001), ventilação mecânica invasiva (p=0,002) e nutrição parenteral (p<0,001). Candidemia nosocomial por Candida parapsilosis foi mais freqüente em crianças (p=0,002), bem como o isolamento de Candida de cateteres (p=0,019); crianças foram mais freqüentemente tratadas com anfotericina B do que adultos (p<0,001), os quais receberam mais fluconazol (p=0,013). Entre os pacientes com câncer e candidemia nosocomial, tratamento prévio com corticosteróides (p=0,004), quimioterapia (p<0,001) e cefepima (p=0,004) foram mais comuns naqueles com malignidades hematológicas; cirurgias foram mais comuns em pacientes com tumores sólidos (p<0,001), principalmente do trato gastrointestinal (p=0,016); a distribuição das espécies de Candida foi semelhante entre os grupos. Candidemia breakthrough (“de escape”) ocorreu em 10,5% dos pacientes com candidemia nosocomial; a maioria destes vinha em uso de anfotericina B em doses terapêuticas, por período mediano de 6,5 dias; o isolamento de Candida de sítios outros que o sangue foi mais freqüente nestes pacientes (p=0,028). A mortalidade dos pacientes com candidemia foi 50,5%, sem diferenças estatisticamente significativas entre pacientes com candidemia comunitária ou nosocomial, com câncer ou outros diagnósticos e com infecção breakthrough ou não-breakthrough; a mortalidade foi maior em adultos do que em crianças (p=0,005). Conclusões: espécies não-Candida albicans foram os principais agentes de candidemia; assim como em outros estudos brasileiros, a prevalência de espécies como Candida glabrata e Candida krusei foi baixa. Fatores de risco já descritos na literatura foram freqüentemente encontrados, e a distribuição dos mesmos variou de acordo com as diferentes características dos pacientes estudados. A mortalidade em pacientes com candidemia foi semelhante \à descrita na literatura.