A classificação de fungos microscópicos é limitada pela escassez de detalhes morfológicos e incertezas na caracterização bioquímica. Nesse trabalho desenvolvemos um método simples, baseado na amplificação de um segmento de cerca de 2.800 bares de bases seguida de digestão com DdeI e análise do padrão após eletroforese em agarose. Demonstramos que o método discrimina tão bem quanto a sequência de DNA do segmento após analisar mais de 400 amostras que foram classificadas em 33 espécies. Essa tecnologia facilita a busca por novos representantes da imensa diversidade existente, espécies que podem ser exploradas quanto ao seu valor potencial para a medicina e a indústria. Outras metodologias moleculares foram desenvolvidas para discriminar entre espécies próximas e na identificação de novas espécies. Em seguida, o trabalho esteve voltado para o desenvolvimento de um ensaio laboratorial que nos permitisse estudar a transição dimórfica em Candida albicans. Desenvolvemos dois novos ensaios, um biológico e outro sobre membrana artificial, para estudar a indução ou inibição da produção de hifas. A expressão de genes associados ao processo foi acompanhada de maneira quantitativa. Fracionando cromatograficamente o soro fetal bovino, obtivemos resultados indicativos de frações estimuladoras e inibidoras da transição morfológica. / Fungal identification is limited by few morphological details and uncertainty in the biochemical tests. In the present work we developed a simple procedure, based upon DNA amplification of a 2,800 base pairs region followed by the amplicon digestion with DdeI and electrophoretic analyzes in agarose gels. After analyzing more than 400 samples encompassing 33 species, we demonstrate that this method discriminates as well as DNA sequencing of the region. This technology simplifies the search for new representatives among the great diversity of fungi of medical and industrial interest. We devised also molecular methods to discriminate between closely related species and described a new putative species. Next our work was dedicated to develop an in vitro assay for the study of the dimorphic transition in Candida albicans. We devised two biological assays and one that used an artificial membrane to investigate the induction and inhibition of hyphal production. The expression of genes associated with the morphological transition was examined in a quantitative way. We fractionated bovine fetal serum by column chromatography and obtained results pointing to fractions that stimulate or inhibit hyphal production.

Este estudo caracterizou e relacionou as leveduras do gênero Candida isoladas das mucosas oral e vaginal de mulheres com lesões causadas por HPV de alto risco para câncer do colo do útero. Foram examinadas 42 mulheres tratadas no ambulatório de Patologia do Trato Genital Inferior do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo sendo, 30 com lesões uterinas de alto grau (G1) com média de idade de 36,5 anos ± 11,1 e 12 com lesões uterinas de baixo grau (G2) com média de idade de 34,75 anos ± 15,5. Condições clínicas e dados laboratoriais sobre HPV foram coletados do prontuário médico das pacientes; os dados sócio-demográficos obtidos a partir de um questionário apropriado. Para o estudo de associação entre as variáveis foi utilizada a análise de razão de chance (Odds Ratio) a partir do programa STATA 13.1. Foram identificadas associação entre lesões uterinas de baixo grau com cultura positiva em mucosa oral (OR= 0,215) e com presença de doenças crônicas (OR = 0,167), sendo que pacientes com lesões uterinas de alto grau possuem maior prevalência para diabetes e os resultados indicaram 23% de prevalência de Candida spp. em mucosa oral e 27% em mucosa vaginal, em pacientes do G1,no G2 foi de 42% em mucosa oral e de 33% em mucosa vaginal. Entre as espécies encontradas em mucosa oral e vaginal das pacientes, Candida albicans foi a mais isolada com 88%, seguida de C. tropicalis (8%)e C. glabrata (4%). As cepas de C. albicans isoladas de ambas as mucosas apresentaram sensibilidade a todos os antifúngicos testados, ao contrário da cepa de C. tropicalis isolada no Grupo 2, em mucosa vaginal, que apresentou um perfil de resistência ao fluconazol. Assim, torna-se importante o acompanhamento e supervisão por meio de exames clínicos e laboratoriais das pacientes com HPV, reforçando a necessidade sobre cuidados, tratamento e prevenção de infecções relacionadas ao HPV e a Candida spp. / This study characterized and related yeasts of the genus Candida isolated from the oral and vaginal mucous membranes of women with lesions caused by high-risk HPV for cervical cancer. Forty-two women treated at the Lower Genital Tract Pathology Clinic of the University of São Paulo Medical School\'s Hospital of Clinics were examined, with 30 high-grade (G1) uterine lesions with a mean age of 36.5 years ± 11, 1 and 12 with low grade (G2) uterine lesions with a mean age of 34.75 years ± 15.5. Clinical conditions and laboratory data on HPV were collected from patients\' medical records; the socio-demographic data obtained from an appropriate questionnaire. For the study of association between the variables, Odds Ratio analysis was used from the STATA 13.1 program. An association between low grade uterine lesions with positive culture in oral mucosa (OR = 0.215) and presence of chronic diseases (OR = 0.167) was identified. Patients with high grade uterine lesions had a higher prevalence for diabetes and the results indicated 23% prevalence of Candida spp. In oral mucosa and 27% in vaginal mucosa, in G1 patients, in G2 it was 42% in oral mucosa and 33% in vaginal mucosa. Among the species found in oral and vaginal mucosa of patients, Candida albicans was the most isolated with 88%, followed by C. tropicalis (8%) and C. glabrata (4%). The strains of C. albicans isolated from both mucosa presented sensitivity to all tested antifungal agents, unlike the C. tropicalis strain isolated in Group 2, in vaginal mucosa, which presented a resistance profile to fluconazole. Thus, monitoring and supervision through clinical and laboratory testing of HPV patients is important, reinforcing the need for care, treatment and prevention of HPV-related infections and Candida spp.

As infecções causadas por leveduras representam um grave problema em Saúde Pública. O objetivo desta pesquisa é o estudo aderência de Candida spp. (C. albicans ATCC18804, C. albicans SC5314, C. albicans cepa de campo, C. glabrata ATCC2001) sobre cateter urinário de Látex siliconizado (LS) e Silicone total (ST); avaliação da sensibilidade ao M-EDTA® dos biofilmes formados e quantificação dos genes ALS1 e ALS3 expressos por células sésseis de C. albicans. Os biofilmes de Candida spp. foram produzidos sobre cateteres urinários (LS e ST) segmentados em 1,0 cm de comprimento e separadamente introduzidos em poços de placas de poliestireno, sendo incubados a 35±1°C em contato com as suspensões de leveduras por 6, 24 e 48 e 72 horas. Os segmentos de cateter foram examinados por MEV, por cultura microbiológica, para avaliação da viabilidade celular e redução do sal de tetrazólio (XTT), para medir a atividade metabólica das células em biofilme. A sensibilidade das células sésseis ao M-EDTA® foi determinada após a exposição dos biofilmes ao produto; a expressão dos genes ALS1 e ALS3 de C. albicans SC5314 foi analisada por reação em cadeia de polimerase quantitativo (qPCR) e o resultado da recuperação de células viáveis de biofilme de Candida spp. foi expresso em log média ± desvio-padrão. Do biofilme de C. albicans ATCC18804 formado sobre LS, a recuperação foi de 4,48±2,52 e sobre ST; 4,76±1,62. A média de recuperação do biofilme de C. albicans SC5314 sobre LS foi de 4,35±0,39 e sobre ST, de 4,21±0,22. Para C. albicans cepa de campo, a média no LS foi 5,15±0,18 e no ST; 4,79±0,17. Do biofilme de C. glabrata ATCC2001 formado sobre o LS, a recuperação média foi de 4,69±0,19 e sobre ST, de 4,75±0,68. A atividade metabólica das células em biofilme foi expressa em valores de absorbância. Células de C. albicans ATCC18804 aderidas ao LS apresentaram atividade de 0,070±0,06 e sobre ST; 0,0681±0,06. A atividade metabólica do biofilme de C. albicans SC5314 sobre o LS foi de 0,0622±0,05 e sobre ST; 0,0785±0,05. Das células de C. albicans cepa de campo aderidas ao LS detectou-se atividade de 0,1064±0,01 e sobre ST, de 0,904±0,03. Células de C. glabrata ATCC2001 aderidas ao LS apresentaram uma atividade de 0,0785±0,04 e sobre ST; 0,0755±0,03. A observação ao MEV mostrou células leveduriformes de C. albicans SC5314 aderidas ao LS e ao ST formando monocamadas. Candida albicans ATCC18804, C. albicans cepa de campo e C. glabrata ATCC2001 formaram monocamadas de células leveduriformes e produziram filamentos sobre a superfície LS e ST, sugerindo uma estrutura tridimensional do biofilme. A exposição ao M-EDTA® dos biofilmes de C. albicans ATCC18804, C. albicans SC5314, C. albicans cepa de campo e C. glabrata ATCC2001 mostrou que os mesmo foram sensíveis à ação do produto. Após o crescimento de C. albicans SC5314 em biofilme, não houve detecção de expressão dos genes ALS1 e ALS3. Em conclusão, todas as espécies de Candida formaram biofilme sobre os biomateriais. Os biofilmes foram sensíveis a ação do M-EDTA® e C. albicans SC5314 não expressou os genes ALS1 e ALS3. / Infections caused by yeasts represent a serious problem in Public Health. The aim of this research was to study the Candida spp. (C. albicans ATCC18804, C. albicans SC5314, C. albicans wild type, C. glabrata ATCC2001) attachment onto urinary catheters made of Siliconized latex (LS) and Total silicon (ST); evaluating the susceptibility of biofilms to M-EDTA® and quantifying genes ALS1 and AL3 expressed by sessile cells of C. albicans. The Candida spp. biofilms were produced over the surface of urinary catheters (LS and ST). The catheters were cut in 1.0cm in length, introduced in wells of polystyrene plates and incubated at 35±1°C in contact with yeasts suspensions during 6, 24, 48 and 72 hours. The catheter samples were examined by SEM, by microbiology culture to evaluate the viable cells and reduction of tetrazolium salt (XTT) to measure the metabolic activity of Candida spp. cells into biofilms. The sensitivity of sessile cells to M-EDTA® was determinated after the exposition of biofilms to the product. The C. albicans SC5314 expression of ALS1 and ALS3 genes was analyzed by quantitative polymerase chain reaction (qPCR). The results of Candida spp. viable cells recovery were determined in log average ± standard deviation. From C. albicans ATCC18804 biofilm cells formed onto LS, the recovery was 4.48±2.52 e onto ST; 4.76±1.62. The average of recovery from C. albicans SC5314 biofilm formed onto LS was 4.35±0.39 and onto ST; 4.21±0.22. For C. albicans wild type, the recovery onto LS was 5.15±0.18 and above ST; 4.79±0.17. C. glabrata ATCC2001 biofilm formed onto LS, the medium was 4.69±0.19 and onto ST; 4.75±0.68. The metabolic activity from cells into biofilms was determined in absorbance values. C. albicans ATCC18804 cells attachment on LS had an activity of 0.070±0.06 and on ST; 0.0681±0.06. The metabolic activity of C. albicans SC5314 biofilm formed onto LS was 0.0622±0.05 and onto ST; 0.0785±0.05. From C. albicans wild type attached onto LS, the activity detected was 0.1064±0.01 and on ST; 0.904±0.03. C. glabrata ATCC2001 cells attached on LS had an activity of 0.0785±0.04 and on ST; 0.0755±0.03. The SEM observations showed C. albicans SC5314 yeast cells attached on LS and ST forming a monolayer. C. albicans ATCC18804, C. albicans wild type and C. glabrata ATCC2001 formed yeast monolayer and produced filaments over the surface of LS and ST, suggesting the three-dimensional structure of biofilm. The M-EDTA® exposition of C. albicans ATCC18804, C. albicans SC5314, C. albicans wild type and C. glabrata ATCC2001 showed that the biofilms were sensitive to the product action. After the C. albicans SC5314 biofilm growth, there was not expression of the ALS1 and ALS3 genes. In conclusion, all the Candida species formed biofilms on the biomaterials. The biofilms were sensitive to M-EDTA® and the C. albicans SC5314 didn´t express the ALS1 and ALS3 genes.

A candidíase é uma infecção fúngica oportunista freqüente, causada por leveduras do gênero Candida. A utilização de anti-sépticos como medida complementar na higiene oral é cada vez mais difundida. Sendo assim, é de grande importância a avaliação das metodologias que são utilizadas para avaliação da atividade antifúngica. A avaliação in vitro da sensibilidade de leveduras a anti-sépticos tem sido pouco relatada e os resultados nem sempre são concordantes, pois as metodologias são divergentes. O objetivo desse estudo foi avaliar três metodologias: macro e microdiluição em caldo e difusão em ágar por meio de poços, com utilização dos meios de cultura RPMI 1640 e Mueller-Hinton para suscetibilidade dos anti-sépticos bucais Listerine®, Malvatricin® Dentes Sensíveis, Noplak®Max, Oral B®, Periogard®, Plax® e Reach® frente a C. albicans ATCC 64548, C. glabrata ATCC 90030, C. krusei ATCC 6258, C. parapsilosis ATCC 22019 e C. tropicalis ATCC 750. Em relação à comparação das concentrações inibitórias mínimas de cada meio de cultura, os índices kappa foram bons ou excelentes (0,73 a 1,00). Na metodologia da difusão em ágar o coeficiente de correlação de concordância entre os resultados dos meios de cultura também foi excelente (0,95 a 0,99). Concluímos que ambos os meios de cultura podem ser utilizados na avaliação da suscetibilidade de anti-sépticos bucais frente espécies de Candida, pois apresentaram índices de concordância e correlação de bom à excelente. Quanto à correlação entre as metodologias de macro e microdiluição, o kappa foi excelente (1,00) para todas as cepas no meio Mueller-Hinton e variou de 0,42 a 0,72 (bom a excelente) no meio RPMI-1640. As CIMs geradas pela macro e microdiluição em caldo são concordantes possibilitando a utilização de ambas as metodologias na avaliação de anti-sépticos bucais, no entanto a microdiluição detectou a ação inibitória de anti-sépticos voláteis em menores concentrações. A utilização da difusão em ágar é discutível visto que os anti-sépticos voláteis Listerine® e Malvatricin® não apresentaram atividade inibitória nesta metodologia. Todos os anti-sépticos avaliados apresentaram atividade fungistática e fungicida in vitro pelas metodologias de diluição frente a cepas ATCC de Candida quando avaliado na formulação disponibilizada pelos fabricantes. Os anti-sépticos bucais Oral B® e Periogard® apresentaram ações inibitórias (CIM) e fungicidas (CFM) de 1,25% para todas as cepas, meios e metodologias. O Noplak® e o Plax®, CIM e CFM variando de 1,25% a 2,5% para todas as cepas, meios e metodologias. Os anti-sépticos Listerine® e Malvatricin® apresentaram CIM de 5% a 50% e CFM de 5% a 100% dependendo do meio e metodologia. O anti-séptico Reach® apresentou CIM e CFM variando de 1,25% a 50% dependendo da cepa avaliada. Estudos com maior número de isolados, maior diversidade de espécies, concentrações intermediárias de anti-séptico e resultados interlaboratoriais poderão contribuir na padronização de métodos para avaliação de anti-sépticos bucais. / Candidosis is a frequent opportunistic fungal infection caused by yeasts of the gender Candida. The use of mouthwashes as a preventive measure in oral hygiene has been more and more diffused. Therefore it is of great importance the evaluation of the methodologies that are used on the antifungal evaluation. The in vitro evaluation of yeast susceptibility to mouthwashes has been little reported and the results are not always in agreement. The goal of this study was to evaluate three methodologies: broth macro and microdilution and agar well diffusion, using the media RPMI 1640 and Mueller-Hinton on the susceptibility of the mouthwashes Listerine®, Malvatricin® Dentes Sensíveis, Noplak®Max, Oral B®, Periogard®, Plax® e Reach® against C. albicans ATCC 64548, C. glabrata ATCC 90030, C. krusei ATCC 6258, C. parapsilosis ATCC 22019 e C. tropicalis ATCC 750. The kappa indexes for the comparison between the minimal inhibitory concentrations obtained with each culture medium were good to excellent (0,73 to 1,00). On the agar well diffusion method, the concordance correlation coefficients between the results obtained with the different media were also excellent (0,95 to 0,99). We concluded that both culture media can be used to evaluate the susceptibility of mouthwashes against species of Candida because they have concordance and correlations that go from good to excellent. The kappa indexes for the correlation between the broth macro and microdilution methodologies were excellent (1,00) for all the isolates in the Mueller-Hinton media and varied from 0,42 to 0,72 (good to excellent) with RPMI 1640. The MICs generated by broth macro and microdilution agree which makes it possible to use both methodologies on the evaluation of mouthwashes; however the microdilution detects the inhibitory action of volatile mouthwashes at smaller concentrations. The use of the agar well diffusion method is not advised since the volatile mouthwashes Listerine® and Malvatricin® have not presented inhibitory action in that methodology. All the evaluated mouthwashes presented fungistatic and fungicide activity at the formulation available in the market. The mouthwashes Oral B® and Periogard® presented MICs and MFCs of 1,25% for all strains, methodologies and media. Noplak® and Plax®, MIC and MFC that ranged from 1,25% to 2,5% for all strains, methodologies and media. The mouthwashes Listerine® and Malvatricin® MICs ranged from 5% to 50% and MFCs from 5% to 100% depending on media and methodology. The mouthwash Reach® presented MICs and MFCs ranging from 1,25% to 50% depending on the strain evaluated. Studies with a higher number of strains, bigger variety of species, intermediary concentrations of mouthwashes and interlaboratory results can contribute to the standardization of methods to evaluate mouthwashes.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:55:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Descricao dos episodios de candidemia de origem nosocomial.pdf: 1812015 bytes, checksum: 9c5089ff58847dbbef9c102928ca12c2 (MD5) Previous issue date: 2006-09-04 / Este trabalho foi um estudo descritivo, que descreveu os episódios de candidemia nosocomial ocorridos no Hospital Universitário Cassiano Antônio de Moraes (HUCAM), entre 1.º de março de 2003 e 28 de fevereiro de 2006. Seu objetivo foi definir as taxas de prevalência e mortalidade desses espisódios, identificar as espécies envolvidas e relacionar a freqüência dos fatores de risco entre adultos e recém-nascidos (RNs), bem como entre os episódios de candidemia por Candida albicans (CA) e por Candida não-albicans (CNA). A metodologia Incluiu os casos de forma consecutiva, à medida que foi detectada hemocultura positiva para esses fungos. A coleta de dados dos pacientes foi realizada com base no prontuário médico, por meio de formulário padronizado e analisados utilizando o programa Social Package Statistical Science e englobando 45 casos de candidemia, sendo dezenove casos (42%) em neonatos. Foi observado que a incidência de candidemia nosocomial no HUCAM foi de 2,0/10.000 pacientes-dia, 1,9/1.000 altas e 16/10.000 admissões, sendo maior nos pacientes internados em unidades de terapia intensiva. As espécies não-albicans predominaram e Candida parapsilosis foi mais incidente entre os RNs; os grupos de pacientes susceptíveis mais envolvidos foram aqueles com internação em torno de três semanas, com síndrome séptica aguda e em uso de antibióticos; a freqüência dos fatores de risco foi similar entre os adultos e os RNs, assim como entre os episódios devidos a CA e os devidos a CNA; maior utilização de nutrição parenteral total foi encontrada entre os RNs e de diálise, entre os adultos (p < 0,05); a taxa de mortalidade global foi de 44% entre os adultos e de 58% entre os RNs; e a taxa de mortalidade atribuída foi de 16% entre os adultos e 26% entre os RNs. Foi concluído que a incidência de candidemia no HUCAM foi alta e associada com substancial mortalidade. / This work was a descriptive study, which described the episodes of nosocomial candidemias occurring at Hospital Universitário Cassiano Antônio de Moraes (HUCAM), between March 1st, 2003 and February 28th, 2006. Its aim was to define the rates of prevalence and mortality of these epidsodes, to identify the species involved and to relate the frequency of the risk factors among adults and newborn (NBs), as well as the epidsodes among candidemias caused by Candida albicans (CA) and Candida non-albicans (CNA). The methodology included the cases in a consecutive way, as positive hemoculture was detected for these fungi. The date collection of patients was based on the medical records, through a standard form and it was analyzed using the Social Package Statistical Science program, including 45 cases of candidemias, being nineteen cases (42%) in NBs. It was observed that the incidence of nosocomial candidemia at HUCAM was 2.0/10.000 patient-day, 1.9/1.000 discharges and 16/10.000 admissions, being greater in patients interned in intensive therapy unity. the CNA predominated and C. parapsilosis was more incidente among the NBs; the group of susceptible more involved were those interned for 3 weeks with acute septical syndrome and in use of antibiotics; the frequency of risk factor was similar among the episodes due to CA and the ones due to CAN; greater utilization of total parenteral nutrition was found in the NBs and the dialysis, among the adults (p< 0,005); the total mortality rate was 44% among adults and 58% among the NBs. And the attributed mortality rate was 16 in adults and 26% in NBs. It was concluded that incidence of candidemias at HUCAM was high and associated with substantial mortality.

Submitted by MARCIA ROVADOSCHI (marciar@unifra.br) on 2018-08-17T11:49:31Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_PriscillaMacielQuatrin.pdf: 1623111 bytes, checksum: e569ab53372c02dcc62e1bcb718f7425 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-17T11:49:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_PriscillaMacielQuatrin.pdf: 1623111 bytes, checksum: e569ab53372c02dcc62e1bcb718f7425 (MD5) Previous issue date: 2016-08-30 / Candida species are the main cause responsible for fungal infections worldwide, with C. albicans most often associated with infectious processes. Pseudomonas aeruginosa is a Gram-negative bacterium found commonly in immunocompromised patients. The persistence of infection is often related to antimicrobial resistance and the formation of biofilms. In this context, the aim of this study was to produce and characterize nanoemulsions containing oil of E. globulus and verify their antimicrobial and antibiofilm activity against P. aeruginosa strains and Candida spp. The nanoemulsions produced had size of about 75 nm, polydispersity of 0.22, zeta potential of - 9.42 and pH of approximately 5.0. It was made the characterization of oil and nanoemulsions containing E. globulus oil, which was observed to remain the major components was performed, including the 1-8-cineole (75.78%), p-cymene (7.55%) , α-Pinene (7.39%) and limonene (6.41%). The antimicrobial activity has been assessed from the macrodilution tests and cell viability curve, where there was minimal fungicidal concentration of 0.7 mg/ml for C. albicans and 1.4 mg/ml for C. tropicalis and C. glabrata . But nanoemulsions showed no antimicrobial activity against P. aeruginosa. The antibiofilm activity was analyzed by testing with crystal violet, atomic force microscopy and staining calcofluor, demonstrating in all techniques, reduction of biofilms formed on different Candida species tested. / As espécies de Candida são as principais responsáveis por ocasionar infecções fungicas em todo o mundo, sendo a C. albicans a mais frequentemente associada a processos infecciosos. A Pseudomonas aeruginosa é uma bactéria Gram-negativa comumente encontrada em pacientes imunocomprometidos. A persistência das infecções estão muitas vezes relacionadas à resistência aos antimicrobianos e a formação de biofilmes. Neste contexto, o objetivo do presente estudo foi produzir e caracterizar nanoemulsões contendo o óleo de E. globulus e verificar sua atividade antimicrobiana e antibiofilme frente as cepas de P. aeruginosa e Candida spp. As nanoemulsões produzidas apresentaram tamanho de aproximadamente 75 nm, índice de polidispersão de 0,22, potencial zeta de – 9,42 e pH de aproximadamente 5.0. Foi realizada a caracterização do óleo e das nanoemulsões contendo o óleo de E. globulus, onde se observou a permanência dos componentes majoritários, dentre eles o 1-8-Cineol (75,78%), p-Cimeno (7,55%), α-Pineno (7,39%) e Limoneno (6,41%). A atividade antimicrobiana foi determinda a partir dos testes de macrodiluição e curva de viabilidade celular, onde se observou a concentração fungicida mínima de 0,7 mg/mL para C. albicans e 1,4 mg/ml para C. tropicalis e C. glabrata. Porém as nanoemulsões não apresentaram atividade antimicrobiana frente a P. aeruginosa. A atividade antibiofilme foi analisada através do ensaio com cristal violeta, microscopia de força atômica e coloração por calcofluor, demonstrando, em todas as técnicas, redução dos biofilmes formados nas diferentes espécies de Candida testadas.

Este estudo caracterizou e relacionou as leveduras do gênero Candida isoladas das mucosas oral e vaginal de mulheres com lesões causadas por HPV de alto risco para câncer do colo do útero. Foram examinadas 42 mulheres tratadas no ambulatório de Patologia do Trato Genital Inferior do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo sendo, 30 com lesões uterinas de alto grau (G1) com média de idade de 36,5 anos ± 11,1 e 12 com lesões uterinas de baixo grau (G2) com média de idade de 34,75 anos ± 15,5. Condições clínicas e dados laboratoriais sobre HPV foram coletados do prontuário médico das pacientes; os dados sócio-demográficos obtidos a partir de um questionário apropriado. Para o estudo de associação entre as variáveis foi utilizada a análise de razão de chance (Odds Ratio) a partir do programa STATA 13.1. Foram identificadas associação entre lesões uterinas de baixo grau com cultura positiva em mucosa oral (OR= 0,215) e com presença de doenças crônicas (OR = 0,167), sendo que pacientes com lesões uterinas de alto grau possuem maior prevalência para diabetes e os resultados indicaram 23% de prevalência de Candida spp. em mucosa oral e 27% em mucosa vaginal, em pacientes do G1,no G2 foi de 42% em mucosa oral e de 33% em mucosa vaginal. Entre as espécies encontradas em mucosa oral e vaginal das pacientes, Candida albicans foi a mais isolada com 88%, seguida de C. tropicalis (8%)e C. glabrata (4%). As cepas de C. albicans isoladas de ambas as mucosas apresentaram sensibilidade a todos os antifúngicos testados, ao contrário da cepa de C. tropicalis isolada no Grupo 2, em mucosa vaginal, que apresentou um perfil de resistência ao fluconazol. Assim, torna-se importante o acompanhamento e supervisão por meio de exames clínicos e laboratoriais das pacientes com HPV, reforçando a necessidade sobre cuidados, tratamento e prevenção de infecções relacionadas ao HPV e a Candida spp. / This study characterized and related yeasts of the genus Candida isolated from the oral and vaginal mucous membranes of women with lesions caused by high-risk HPV for cervical cancer. Forty-two women treated at the Lower Genital Tract Pathology Clinic of the University of São Paulo Medical School\'s Hospital of Clinics were examined, with 30 high-grade (G1) uterine lesions with a mean age of 36.5 years ± 11, 1 and 12 with low grade (G2) uterine lesions with a mean age of 34.75 years ± 15.5. Clinical conditions and laboratory data on HPV were collected from patients\' medical records; the socio-demographic data obtained from an appropriate questionnaire. For the study of association between the variables, Odds Ratio analysis was used from the STATA 13.1 program. An association between low grade uterine lesions with positive culture in oral mucosa (OR = 0.215) and presence of chronic diseases (OR = 0.167) was identified. Patients with high grade uterine lesions had a higher prevalence for diabetes and the results indicated 23% prevalence of Candida spp. In oral mucosa and 27% in vaginal mucosa, in G1 patients, in G2 it was 42% in oral mucosa and 33% in vaginal mucosa. Among the species found in oral and vaginal mucosa of patients, Candida albicans was the most isolated with 88%, followed by C. tropicalis (8%) and C. glabrata (4%). The strains of C. albicans isolated from both mucosa presented sensitivity to all tested antifungal agents, unlike the C. tropicalis strain isolated in Group 2, in vaginal mucosa, which presented a resistance profile to fluconazole. Thus, monitoring and supervision through clinical and laboratory testing of HPV patients is important, reinforcing the need for care, treatment and prevention of HPV-related infections and Candida spp.

A classificação de fungos microscópicos é limitada pela escassez de detalhes morfológicos e incertezas na caracterização bioquímica. Nesse trabalho desenvolvemos um método simples, baseado na amplificação de um segmento de cerca de 2.800 bares de bases seguida de digestão com DdeI e análise do padrão após eletroforese em agarose. Demonstramos que o método discrimina tão bem quanto a sequência de DNA do segmento após analisar mais de 400 amostras que foram classificadas em 33 espécies. Essa tecnologia facilita a busca por novos representantes da imensa diversidade existente, espécies que podem ser exploradas quanto ao seu valor potencial para a medicina e a indústria. Outras metodologias moleculares foram desenvolvidas para discriminar entre espécies próximas e na identificação de novas espécies. Em seguida, o trabalho esteve voltado para o desenvolvimento de um ensaio laboratorial que nos permitisse estudar a transição dimórfica em Candida albicans. Desenvolvemos dois novos ensaios, um biológico e outro sobre membrana artificial, para estudar a indução ou inibição da produção de hifas. A expressão de genes associados ao processo foi acompanhada de maneira quantitativa. Fracionando cromatograficamente o soro fetal bovino, obtivemos resultados indicativos de frações estimuladoras e inibidoras da transição morfológica. / Fungal identification is limited by few morphological details and uncertainty in the biochemical tests. In the present work we developed a simple procedure, based upon DNA amplification of a 2,800 base pairs region followed by the amplicon digestion with DdeI and electrophoretic analyzes in agarose gels. After analyzing more than 400 samples encompassing 33 species, we demonstrate that this method discriminates as well as DNA sequencing of the region. This technology simplifies the search for new representatives among the great diversity of fungi of medical and industrial interest. We devised also molecular methods to discriminate between closely related species and described a new putative species. Next our work was dedicated to develop an in vitro assay for the study of the dimorphic transition in Candida albicans. We devised two biological assays and one that used an artificial membrane to investigate the induction and inhibition of hyphal production. The expression of genes associated with the morphological transition was examined in a quantitative way. We fractionated bovine fetal serum by column chromatography and obtained results pointing to fractions that stimulate or inhibit hyphal production.

Early childhood caries (ECC) is closely related to high numbers of mutans streptococci, lactobacilli and Candida albicans . Oral colonization of these microorganisms was monitored in a prospective clinical study in order to investigate the effect of comprehensive treatment under general anesthesia and the sustainability of microbial changes. Saliva samples were collected from 50 healthy infants with ECC before and in regular intervals up to 12 months after treatment. Microorganisms were detected by cultivation on selective agars (CRT ® bacteria and Sabouraud/CandiSelect TM ) and scored. Additionally, plaque on upper front teeth and the dmft were recorded. Parents were repeatedly interviewed regarding the children’s diet and oral hygiene, accompanied by corresponding advice. Plaque frequency and the numbers of mutans streptococci, lactobacilli and yeasts were significantly reduced as a result of treatment (p < 0.0001, Wilcoxon test). Nevertheless, this effect was not permanent. An ordinal regression model on the follow-up period revealed that the odds for bacteria and yeasts to reach a higher score increased linearly over time (p < 0.01) with an odds ratio of 2.244 per year. One third (34%) of the children developed new dentinal lesions within 1 year postoperatively. High scores of lactobacilli before treatment predicted caries relapse (p < 0.05). Nutritional and oral hygiene habits changed only slightly despite advising. Elimination and restoration of ECC lesions under general anesthesia proved to be an effective procedure in reducing cariogenic bacteria and yeasts. A satisfactory and sustainable success, however, could be achieved neither regarding microbiologic parameters nor with respect to the relapse rate. More suitable strategies are needed.

Magister Chirurgiae Dentium - MChD (Oral Medicine and Periodontics) / Candida species are frequently isolated from oral mucosal surfaces of healthy individuals and is the most common genus responsible for up to 75% of all candidal infections. The most common problems associated management of oral candidiasis are antifungal drug resistance and side effects Natural medicine is an emerging field and is being explored to overcome drug resistance and to reduce side effects. Gymnemagenin (will be known as Gymnemic acid; GA) is a purified extract from Gymnema sylvestre, a slow growing, perennial, medicinal plant found in Central and Western India, Tropical Africa and Australia is regarded as one of the plants with potent antimicrobial and antifungal activity.