A suinocultura brasileira encontra-se atualmente em um nível técnico de destaque no contexto mundial. Entretanto, diversas estratégias são utilizadas para restringir a compra dos produtos brasileiros por países estrangeiros, em especial barreiras sanitárias. Os objetivos desse trabalho foram determinar a microbiota fúngica da pele de suínos sem lesões aparentes e estabelecer os possíveis agentes micóticos de importância nesta espécie. Foram obtidas 261 amostras de animais com 20 a 120 dias de idade, provenientes de 11 granjas do Rio Grande do Sul. As amostras foram obtidas apenas dos animais com ausência de qualquer patologia. Essas foram semeadas em Agar Sabouraud com cloranfenicol. Obteve-se o crescimento de 509 culturas, sendo 305 (59,92%) fungos filamentosos e 204 (40,08%) leveduras. A distribuição do número de diferentes colônias isoladas por amostra demonstra uma predominância de monocultura no grupo 1 (animais de 20 a 60 dias de idade) em relação ao grupo 2 (animais acima de 60 dias de idade). Dentre os fungos filamentosos septados, ocorreu predominância dos hialohifomicetos (43,03%) em relação aos feohifomicetos (10,41%), enquanto que observou-se apenas 6,48% de filamentosos asseptados. O Aspergillus (22,90%) foi o gênero de hialohifomiceto mais isolado, com predominância do A. flavus (5,70%). Dentre os feohifomicetos, o gênero Cladosporium foi o mais prevalente (9,04%). No que concerne os zygomicetos, o gênero mais isolado foi Mucor (4,13%). Em relação às leveduras, o gênero Candida foi o mais isolado (14,73%), sendo a distribuição de freqüência das espécies: C. albicans (13,56%), C. parapsilopsis (0,59%), C. famata (0,20%), C. tropicalis (0,20%) e outras espécies de Candida (0,20%). A reduzida quantidade de diferentes fungos isolados por amostra nos animais do grupo 1, em relação ao grupo 2, pode ter sido influenciada pela menor quantidade de grãos utilizada na fabricação de ração nos animais mais novos, maior freqüência de limpeza e desinfecção das instalações, bem como a não mistura de animais provenientes de diferentes origens. A alta prevalência do gênero Candida observada em suínos, um gênero normalmente comensal do trato gastrintestinal, se torna importante quando esses animais são acometidos por doenças imunossupressoras. Estudos clínicos longitudinais e/ou infecções experimentais talvez possam definir a importância destes agentes em suínos. / Brazilian pig production has reached a technical and techological level that stands out in international pig production. However, several strategies have been used to limit access of Brazilian pig products to international market, including health barriers. The objective of our work was to determine the fungal flora of the healthy pig skin and to determine possible micotic agents important for this animal species. 261 samples from 20-120 day old pigles were obtained from 11 pig farms from the State of Rio Grande do Sul, Brazil. All sampled animals were negative for any skin lesions. The samples were cultured in Sabouraud agar and cloranfenicol. Cultures were obtained from 509 materials, with 305 (59,95%) filamentous fungi and 204 (40,08%) yeasts. The distribution of different fungi isolated each simple shows a high prevalence on group 1 (20-60 days old) in relation to group 2 (more than 60 days old). Among septated filamentous fungi, there was a great preponderance of hialohifomycetes (43,03%) in relation to feohifomycetes (10,41%), while only 6,48% were aseptated filamentous. Aspergillus (22,90%) was the most isolated genus of hialohifomycetes and A. flavus (5,70%) was the more prevalent specie isolated. As to zygomycetes, the most isolated genus was Mucor (4,13%). Regarding yeasts, the genus Candida was the most prevalent (14,73%) and the species distribution was: C. albicans (13,56%), C. parapsilopsis (0,59%), C. famata (0,20%), C. tropicalis (0,20%) and other Candida species (0,20%). The little quantity isolated per sample could have been influenced by quantity of grains used in pig feed in these different stages of production, types of facilities, stress and environmental changes could be important to imbalance the flora, as well as favoring diffusion of mycosis in the herds. The limited number of different fungi isolated from animal flora on group 1 may have been influenced by the smaller use of grains in the feed mill in this stage, a better cleaning and disinfection of premises, as well as avoiding mixing pigs of different source. Clinical longitudinal studies and/ or experimental infections perhaps may help to define the importance of these fungi to that species.

Espécies de Candida com relevância clínica diferem entre si com relação a aspectos como prevalência clínica, virulência e perfil de resistência a antifúngicos. Formulamos a hipótese de que estas diferenças podem ocorrer devidas em parte à capacidade relativa distinta destas espécies de resistirem ao estresse oxidativo que é imposto por fagócitos durante a patogênese da candidíase. Nesse contexto, poucos são os estudos de resposta ao estresse oxidativo (REO) em espécies que não Candida albicans. Assim, esse trabalho teve por objetivo investigar a REO in vitro em isolados de referência e clínicos de 8 espécies de Candida – C. albicans, C. dubliniensis, C. famata, C. glabrata, C. guilliermondii, C. krusei, C. parapsilosis e C. tropicalis. Para tal, foi avaliado o grau de resistência a oxidantes, a capacidade de adaptação, a indução de enzimas antioxidantes, os níveis de glutationa total, a capacidade antioxidante total e a indução de dano oxidativo a proteínas e lipídios através de metodologias atuais. C. albicans, C. glabrata e C. krusei apresentaram maior resistência ao estresse oxidativo nas condições testadas, C. parapsilosis e C. tropicalis resistência média e C. dubliniensis, C. famata e C. guilliermondii foram mais sensíveis. Todas as espécies demonstraram capacidade adaptativa e indução de enzimas antioxidantes. Os níveis de glutationa total mostraram redução intracelular frente ao estresse oxidativo. A capacidade antioxidante total foi variável entre espécies. Outros testes (efeito de meio condicionado e de moléculas quorum-sensing – tirosol e farnesol - no crescimento, capacidade de proteção cruzada e oxidante total) foram empregados sem sucesso. Ainda, verificamos em isolados de C. albicans a relação entre capacidade de resistirem a oxidantes e produção de fosfolipase e protease. Os resultados indicaram ausência de correlação entre estes fatores. Espécies com sistema antioxidante mais frágil são também as que ocorrem com menor frequência em infecções sistêmicas ou resistem menos ao efeito dos antifúngicos. É interessante investigar se C. albicans, C. glabrata e C. krusei tiram vantagem efetiva de um sistema antioxidante mais potente para causarem candidíase disseminada ou resistirem a drogas. A caracterização detalhada da REO pode proporcionar a descoberta de novos alvos para a ação de antifúngicos no futuro. / Candida species with clinical relevance differ in therms of clinical prevalence, virulence and profile of resistance to antifungal agents. We hypothesized that these differences may be due in part to the relative ability of these species to resist oxidative stress that is imposed by phagocytes in the pathogenesis of candidiasis. In this context, there are few studies of the oxidative stress response (OSR) in different species than C. albicans. Thus, this study aimed to investigate the in vitro OSR considering isolates of eight Candida species – C. albicans, C. dubliniensis, C. famata, C. glabrata, C. guilliermondii, C. krusei, C. parapsilosis and C. tropicalis. To this purpose, we evaluated the resistance degree to oxidants, the adaptability, the induction of antioxidant enzymes, levels of total glutathione, total antioxidant status and induction of oxidative damage to proteins and lipids by current methodologies. C. albicans, C. glabrata and C. krusei showed greater resistance to oxidative stress in the conditions tested; C. parapsilosis and C. tropicalis showed an intermediate resistance and C. dubliniensis, C. famata and C. guilliermondii were more sensitive to oxidative stress. All species showed adaptive capacity and induction of antioxidant enzymes. The levels of total glutathione showed intracellular reduction against oxidative stress. The total antioxidant capacity was variable between species. Other tests (effect of conditioned medium and quorum-sensing molecules - farnesol and tirosol – on growth, ability of cross-protection and total oxidant status) were tested without success. Still, we found in isolates of C. albicans the relationship between ability to resist oxidation and production of phospholipase and protease. The results indicated no correlation between these factors. Species with weaker antioxidant system are also those that occur less frequently in systemic infections or are less resistant to the effect of antifungal agents. It is interesting to investigate if C. albicans, C. glabrata and C. krusei take effective advantage of a more powerful antioxidant system to cause disseminated candidiasis or resist drugs. The detailed characterization of the OSR can provide the discovery of new targets for the action of antifungals in the future.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-05-25 / Infecções hematogênicas por espécies de Candida são complicações importantes em pacientes internados, dada a sua elevada mortalidade e morbidade. Em diferentes casuísticas realizadas em hospitais gerais, câncer é a doença de base isoladamente mais prevalente. Objetivos: Avaliar incidência, aspectos epidemiológicos e prognósticos de candidemia em pacientes com tumores sólidos, comparando o padrão epidemiológico em pacientes cirúrgicos e não cirúrgicos. Métodos: Estudo observacional retrospectivo com documentação sistemática dos episódios de infecção de corrente sanguínea por Candida spp. em pacientes com tumores sólidos assistidos no período de março de 2006 a dezembro de 2008 em dois hospitais oncológicos doBrasil.Resultados: Foram analisados 100 casos de candidemia em pacientes com tumores sólidos. As taxas de incidência encontradas foram de 1,40 a 2,44 casos por 1000 internações. Cirurgia foi procedimento realizado em 53% dos pacientes. As neoplasias mais prevalentes foram trato gastrointestinal (19%), ginecológica (18%), cabeça e pescoço (14%) e mama (10%). As neoplasias mais prevalentes em pacientes cirúrgicos foram cólon, reto e canal anal (22,6%) e ginecológico (30,2%), enquanto que para os pacientes não cirúrgicos foram mama (17%) e cabeça e pescoço (19,1%). A apresentação clínica de candidemia foi como sepse grave e choque séptico em 44,7% dos casos. Candidemia ocorreu em pacientes expostos aos fatores de risco classicamente descritos para candidemia, em particular o uso de cateter venoso central, antimicrobianos e bloqueadores H2. O uso de sonda vesical de demora e nutrição parenteral foram mais freqüentes no grupo de pacientes cirúrgicos, enquanto que no grupo de pacientes não cirúrgicos foram mais freqüentes a presença de neutropenia e mucosite, uso de corticosteróides e tratamento com quimioterapia na época da identificação da levedura na hemocultura. Candida albicans C. parapsilosis e C. tropicalis foram as espécies mais prevalentes. Apesar da baixa freqüência de ocorrência de Candida glabrata na nossa casuística em relação ao hemisfério norte, somando-se Candida glabrata e Candida krusei foi obtido um índice de 11,8%, que é superior ao encontrado em casuísticas de hospitais gerais terciários de São Paulo. A mortalidade geral em 30 dias encontrada foi de 45%. Em regressão logística, os fatores relacionados ao pior prognóstico foram uso de corticosteróides e internação em UTI. Apesar de não haver diferença significativa de mortalidade entre pacientes não cirúrgicos e cirúrgicos, no primeiro grupo a classificação de sepse grave ou choque séptico, o uso de cateter venoso de curta permanência e a manutenção do cateter foram relacionados a pior prognóstico. Conclusões: A taxa de incidência de candidemia foi de 2,81 a 3,87 casos por 1000 internações, havendo grande número de pacientes submetidos a cirurgia. Candidemia em pacientes adultos com neoplasias sólidas ocorreu mais freqüentemente em tumores de trato gastrointestinal e ginecológico, em pacientes com quadro clínico grave e em pacientes expostos aos fatores de risco classicamente descritos para candidemia. Houve predominância de Candida albicans, Candida parapsilosis e Candida tropicalis. Foram relacionados a pior prognóstico o uso de corticosteróides e internação em UTI. / Hematogenic infections by Candida species are important complications in oncology patients given their high mortality and morbidity. In different studies performed in general hospitals, cancer is the most prevalent disease for candidemia patients. Objectives: to assess the incidence, prognostic factors and epidemiological aspects of bloodstream infection by Candida spp in patients with solid tumors, comparing the epidemiological pattern of candidemia in surgical and non-surgical patients. Methods: retrospective observational study with systematic documentation of episodes of bloodstream infection by Candida spp. in patients with solid tumors admitted from March 2006 to December 2008 in two Brazilian cancer hospitals. Results: One hundred cases of candidemia in patients with solid tumors were analyzed. The incidence rates were 2.81 to 3.87 per 1000 hospital admissions. Surgery was performed in 53% of the patients. Candidemia was more prevalent in patients with gastrointestinal tract cancer (19%), gynecological (18%), head and neck (14%) and mama cancer (10%). The most prevalent malignancies in surgical patients were colon, rectum and anus (22.6%) and gynecological (30.2%), while for non-surgical patients the most prevalent were breast (17%) and head and neck cancer (19.1%). The clinical presentation of candidemia was as severe sepsis and septic shock in 44.7% of cases. Candidemia occurred in patients exposed to the risk factors classically described, specially the use of central venous catheter, broad spectrum antimicrobials and H2 blockers. Using urinary catheter and parenteral nutrition were more frequent in surgical patients, whereas in non-surgical patients the presence of neutropenia and mucositis, the use of corticosteroids and chemotherapy were more frequent. Candida albicans, C. parapsilosis and C. tropicalis. were the most prevalent species. Global mortality in 30 days was 45%. Factors related to worse prognosis were the use of corticosteroids and hospitalization in ICU. Although there was no significant difference in mortality among non-surgical and surgical patients, in the first group classification of severe sepsis or septic shock, central venous catheter use and maintaining the catheter were related to worst prognosis. Conclusions: Candidemia in adult patients with solid malignancies occurred more frequently in tumors of the gastrointestinal and gynecological tract, in patients with severe clinical illness and in patients exposed to the classical risk factors for candidemia. There was a predominance of Candida albicans, Candida parapsilosis and Candida tropicalis. The use of corticosteroids and hospitalization in ICU were related to worse prognosis. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-19Bitstream added on 2014-06-13T19:04:27Z : No. of bitstreams: 1 moreira_tms_dr_arafcf.pdf: 1452278 bytes, checksum: 746ea7e0008db7d637ec414f27c288bf (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O gênero Candida é causa frequente de infecção da mucosa oral e vaginal, sendo motivo de preocupação na área de saúde devido à reincidência das infecções, crescimento de infecções sistêmicas, resistência de diversas cepas e toxicidade dos antifúngicos. Plantas medicinais são usadas popularmente no tratamento de candidíases e por este motivo, busca-se, além de avaliar a composição fitoquímica do óleo de Melaleuca alternifolia (Myrtaceae) e do extrato de Plinia cauliflora (Myrtaceae), verificar o mecanismo de ação destas amostras sobre diferentes espécies de Candida. A constituição do óleo essencial de M. alternifolia está descrita na literatura e por cromatografia gasosa identificou-se a presença de substâncias importantes da sua composição na amostra utilizada. Foi traçado o perfil cromatográfico do extrato das folhas e das frações de P. cauliflora para conhecer sua constituição. Foram isoladas duas miricetinas e duas quercetinas glicosiladas e o elagitanino casuarinina. Na avaliação da atividade anti-Candida, o óleo essencial apresentou-se fungicida, com concentração citotóxica de 50% na mesma faixa. Entre as amostras avaliadas de P. cauliflora, o extrato, a fração butanólica e a fração enriquecida com o derivado elágico apresentaram a melhor atividade, foram fungistáticas e a concentração citotóxica foi maior que a concentração ativa. O óleo essencial mostrou-se inibidor da formação de hifas, reduziu a quantidade de ergosterol, sem se ligar a este composto e promoveu alterações significativas principalmente na parede celular da forma filamentosa. Por outro lado, as frações mais ativas de P. cauliflora inibiram o desenvolvimento de hifas, mas estimularam a síntese de ergosterol e indicaram ter mais de um alvo de ação, ligando-se ao ergosterol e agindo externamente por modificação do arranjo da parede celular das espécies... / Candida genus is often the reason of oral and vaginal mucosal infections and it is cause of concern in the health area due to the relapsing of infections, rising in the number of systemic infections, resistance of several strains and high toxicity of synthetized antifungal agents. Medicinal plants have been used in the treatment of candidiasis, and this is the reason to evaluate the phytochemical composition of essential oil from Melaleuca alternifolia (Myrtaceae) and extract of Plinia cauliflora (Myrtaceae) in order to verify their mechanism of action against different species of Candida. The constitution of the essential oil is already described in the literature and it was possible to confirm the compounds by gas chromatography in the sample utilized. It was studied the fingerprint of the extract of P. cauliflora leaves and fraction applying chromatographic techniques. It was isolated two glucosilated myricetin and quercetin and the ellagitannin casuarinin. The essential oil showed fungicidal activity against Candida with 50% of cytotoxicity in the same concentration rate of the activity. Among samples of P. cauliflora, extract, butanolic fraction and the riched fraction with the ellagic acid derivate showed the better activity but it was fungistatic. The cytotoxic concentration was higher than the concentration of action. The essential oil showed to inhibit hyphae formation, to reduced the amount of ergosterol without binding to it and there were significative changes mainly in the hyphal cell wall. The more active fractions of P. cauliflora inhibited hiphae development, stimulated ergosterol synthesis and indicated to have more than just one target since they bound directly to ergosterol and showed to act externally by changing cell wall assemble without changes in the composition. Thus, the fungicidal activity of M. alternifolia essential oil is mainly due... (Complete abstract click electronic access below)

A suinocultura brasileira encontra-se atualmente em um nível técnico de destaque no contexto mundial. Entretanto, diversas estratégias são utilizadas para restringir a compra dos produtos brasileiros por países estrangeiros, em especial barreiras sanitárias. Os objetivos desse trabalho foram determinar a microbiota fúngica da pele de suínos sem lesões aparentes e estabelecer os possíveis agentes micóticos de importância nesta espécie. Foram obtidas 261 amostras de animais com 20 a 120 dias de idade, provenientes de 11 granjas do Rio Grande do Sul. As amostras foram obtidas apenas dos animais com ausência de qualquer patologia. Essas foram semeadas em Agar Sabouraud com cloranfenicol. Obteve-se o crescimento de 509 culturas, sendo 305 (59,92%) fungos filamentosos e 204 (40,08%) leveduras. A distribuição do número de diferentes colônias isoladas por amostra demonstra uma predominância de monocultura no grupo 1 (animais de 20 a 60 dias de idade) em relação ao grupo 2 (animais acima de 60 dias de idade). Dentre os fungos filamentosos septados, ocorreu predominância dos hialohifomicetos (43,03%) em relação aos feohifomicetos (10,41%), enquanto que observou-se apenas 6,48% de filamentosos asseptados. O Aspergillus (22,90%) foi o gênero de hialohifomiceto mais isolado, com predominância do A. flavus (5,70%). Dentre os feohifomicetos, o gênero Cladosporium foi o mais prevalente (9,04%). No que concerne os zygomicetos, o gênero mais isolado foi Mucor (4,13%). Em relação às leveduras, o gênero Candida foi o mais isolado (14,73%), sendo a distribuição de freqüência das espécies: C. albicans (13,56%), C. parapsilopsis (0,59%), C. famata (0,20%), C. tropicalis (0,20%) e outras espécies de Candida (0,20%). A reduzida quantidade de diferentes fungos isolados por amostra nos animais do grupo 1, em relação ao grupo 2, pode ter sido influenciada pela menor quantidade de grãos utilizada na fabricação de ração nos animais mais novos, maior freqüência de limpeza e desinfecção das instalações, bem como a não mistura de animais provenientes de diferentes origens. A alta prevalência do gênero Candida observada em suínos, um gênero normalmente comensal do trato gastrintestinal, se torna importante quando esses animais são acometidos por doenças imunossupressoras. Estudos clínicos longitudinais e/ou infecções experimentais talvez possam definir a importância destes agentes em suínos. / Brazilian pig production has reached a technical and techological level that stands out in international pig production. However, several strategies have been used to limit access of Brazilian pig products to international market, including health barriers. The objective of our work was to determine the fungal flora of the healthy pig skin and to determine possible micotic agents important for this animal species. 261 samples from 20-120 day old pigles were obtained from 11 pig farms from the State of Rio Grande do Sul, Brazil. All sampled animals were negative for any skin lesions. The samples were cultured in Sabouraud agar and cloranfenicol. Cultures were obtained from 509 materials, with 305 (59,95%) filamentous fungi and 204 (40,08%) yeasts. The distribution of different fungi isolated each simple shows a high prevalence on group 1 (20-60 days old) in relation to group 2 (more than 60 days old). Among septated filamentous fungi, there was a great preponderance of hialohifomycetes (43,03%) in relation to feohifomycetes (10,41%), while only 6,48% were aseptated filamentous. Aspergillus (22,90%) was the most isolated genus of hialohifomycetes and A. flavus (5,70%) was the more prevalent specie isolated. As to zygomycetes, the most isolated genus was Mucor (4,13%). Regarding yeasts, the genus Candida was the most prevalent (14,73%) and the species distribution was: C. albicans (13,56%), C. parapsilopsis (0,59%), C. famata (0,20%), C. tropicalis (0,20%) and other Candida species (0,20%). The little quantity isolated per sample could have been influenced by quantity of grains used in pig feed in these different stages of production, types of facilities, stress and environmental changes could be important to imbalance the flora, as well as favoring diffusion of mycosis in the herds. The limited number of different fungi isolated from animal flora on group 1 may have been influenced by the smaller use of grains in the feed mill in this stage, a better cleaning and disinfection of premises, as well as avoiding mixing pigs of different source. Clinical longitudinal studies and/ or experimental infections perhaps may help to define the importance of these fungi to that species.

Espécies de Candida com relevância clínica diferem entre si com relação a aspectos como prevalência clínica, virulência e perfil de resistência a antifúngicos. Formulamos a hipótese de que estas diferenças podem ocorrer devidas em parte à capacidade relativa distinta destas espécies de resistirem ao estresse oxidativo que é imposto por fagócitos durante a patogênese da candidíase. Nesse contexto, poucos são os estudos de resposta ao estresse oxidativo (REO) em espécies que não Candida albicans. Assim, esse trabalho teve por objetivo investigar a REO in vitro em isolados de referência e clínicos de 8 espécies de Candida – C. albicans, C. dubliniensis, C. famata, C. glabrata, C. guilliermondii, C. krusei, C. parapsilosis e C. tropicalis. Para tal, foi avaliado o grau de resistência a oxidantes, a capacidade de adaptação, a indução de enzimas antioxidantes, os níveis de glutationa total, a capacidade antioxidante total e a indução de dano oxidativo a proteínas e lipídios através de metodologias atuais. C. albicans, C. glabrata e C. krusei apresentaram maior resistência ao estresse oxidativo nas condições testadas, C. parapsilosis e C. tropicalis resistência média e C. dubliniensis, C. famata e C. guilliermondii foram mais sensíveis. Todas as espécies demonstraram capacidade adaptativa e indução de enzimas antioxidantes. Os níveis de glutationa total mostraram redução intracelular frente ao estresse oxidativo. A capacidade antioxidante total foi variável entre espécies. Outros testes (efeito de meio condicionado e de moléculas quorum-sensing – tirosol e farnesol - no crescimento, capacidade de proteção cruzada e oxidante total) foram empregados sem sucesso. Ainda, verificamos em isolados de C. albicans a relação entre capacidade de resistirem a oxidantes e produção de fosfolipase e protease. Os resultados indicaram ausência de correlação entre estes fatores. Espécies com sistema antioxidante mais frágil são também as que ocorrem com menor frequência em infecções sistêmicas ou resistem menos ao efeito dos antifúngicos. É interessante investigar se C. albicans, C. glabrata e C. krusei tiram vantagem efetiva de um sistema antioxidante mais potente para causarem candidíase disseminada ou resistirem a drogas. A caracterização detalhada da REO pode proporcionar a descoberta de novos alvos para a ação de antifúngicos no futuro. / Candida species with clinical relevance differ in therms of clinical prevalence, virulence and profile of resistance to antifungal agents. We hypothesized that these differences may be due in part to the relative ability of these species to resist oxidative stress that is imposed by phagocytes in the pathogenesis of candidiasis. In this context, there are few studies of the oxidative stress response (OSR) in different species than C. albicans. Thus, this study aimed to investigate the in vitro OSR considering isolates of eight Candida species – C. albicans, C. dubliniensis, C. famata, C. glabrata, C. guilliermondii, C. krusei, C. parapsilosis and C. tropicalis. To this purpose, we evaluated the resistance degree to oxidants, the adaptability, the induction of antioxidant enzymes, levels of total glutathione, total antioxidant status and induction of oxidative damage to proteins and lipids by current methodologies. C. albicans, C. glabrata and C. krusei showed greater resistance to oxidative stress in the conditions tested; C. parapsilosis and C. tropicalis showed an intermediate resistance and C. dubliniensis, C. famata and C. guilliermondii were more sensitive to oxidative stress. All species showed adaptive capacity and induction of antioxidant enzymes. The levels of total glutathione showed intracellular reduction against oxidative stress. The total antioxidant capacity was variable between species. Other tests (effect of conditioned medium and quorum-sensing molecules - farnesol and tirosol – on growth, ability of cross-protection and total oxidant status) were tested without success. Still, we found in isolates of C. albicans the relationship between ability to resist oxidation and production of phospholipase and protease. The results indicated no correlation between these factors. Species with weaker antioxidant system are also those that occur less frequently in systemic infections or are less resistant to the effect of antifungal agents. It is interesting to investigate if C. albicans, C. glabrata and C. krusei take effective advantage of a more powerful antioxidant system to cause disseminated candidiasis or resist drugs. The detailed characterization of the OSR can provide the discovery of new targets for the action of antifungals in the future.

Orientador: José Moacir Marin / Banca: Everlon Cid Rigobelo / Banca: Simone Barone Salgado Marques / Resumo: A mastite representa um dos mais sérios problemas existentes nas fazendas de leite. Os objetivos deste estudo foram identificar leveduras envolvidas nos casos de mastite bovina; avaliar a sensibilidade in vitro de cepas de Candida spp. frente a quatro desinfetantes utilizados no pré e pós-dipping e avaliar a resistência destas leveduras frente à pasteurização e fervura. Cinquenta e cinco amostras (12,8%) foram positivas para o gênero Candida. As espécies mais isoladas foram C. krusei (34,6%), C. parapsilosis (25,4%), C. tropicalis (18,2%) e C. albicans (12,8%). As drogas utilizadas foram clorexidina (2,0%), iodo (0,8%), iodo glicerinado (0,8%) e hipoclorito de sódio (1,0%) em 4 intervalos específicos de tratamento (15″, 30″, 60″ e 300″). Cem por cento das cepas de Candida foram sensíveis a clorexidina nos tempos de 30″, 60″ e 300″, ao iodo glicerinado em 60″ e 300″, ao hipoclorito de sódio em 60″ e 300″ e ao iodo apenas em 300″. Em relação aos tratamentos térmicos, a pasteurização rápida foi o procedimento no qual houve maior índice de resistência (64,44%) por parte das estirpes de leveduras. A mastite provocada por fungos está se tornando um problema crescente devido ao aumento da participação deste microrganismo no desenvolvimento de mastite em bovinos. Além disso, resistência apresentada ao tratamento térmico pelas cepas de Candida representa um problema para o consumo de leite, significando um risco para a saúde pública. Uma conclusão adicional é a importância da realização periódica de avaliações de sensibilidade dos microrganismos aos desinfetantes utilizados, de forma a garantir a eficácia da desinfecção dos tetos / Abstract: Mastitis is one of the most serious problems in dairy farms. The objectives of this study were to identify yeasts involved in cases of bovine mastitis; evaluate the in vitro susceptibility of strains of Candida spp. Against four disinfectants used in the pre and post-dipping and evaluate the resistance of these strains before pasteurization and boiling. Fifty-five samples (12,8%) were positive for Candida. The most isolated species were C. krusei (34,6%), C. parapsilosis (25,4%), C. tropicalis (18,2%) and C. albicans (12,8%). As active drugs were used chlorhexidine (2,0%), iodine (0,8%), glycerin iodine (0,8%) and sodium hypochlorite (1,0%) at specific intervals of four treatment (15", 30", 60" and 300"). One hundred percent of Candida was found to be sensible to chlorhexidine at 30″, 60″, and 300″, to iodine glycerin at 60″ and 300″, to sodium hypochlorite at 60″, and 300″, to iodine only at 300″. In relation to thermal treatments, pasteurization was the quick procedure in which there was a higher resistance index (64,44%) by yeast strains. Moreover, t he resistance of Candida spp. strains after thermal treatment presents a problem for milk consumption what represents a potential risk for public health. A further conclusion was that it is important to undertake a periodic evaluation of the sensibility of microorganisms to the disinfectants commonly used, to guarantee the efficacy of the process of teat disinfecting / Mestre

Espécies de Candida com relevância clínica diferem entre si com relação a aspectos como prevalência clínica, virulência e perfil de resistência a antifúngicos. Formulamos a hipótese de que estas diferenças podem ocorrer devidas em parte à capacidade relativa distinta destas espécies de resistirem ao estresse oxidativo que é imposto por fagócitos durante a patogênese da candidíase. Nesse contexto, poucos são os estudos de resposta ao estresse oxidativo (REO) em espécies que não Candida albicans. Assim, esse trabalho teve por objetivo investigar a REO in vitro em isolados de referência e clínicos de 8 espécies de Candida – C. albicans, C. dubliniensis, C. famata, C. glabrata, C. guilliermondii, C. krusei, C. parapsilosis e C. tropicalis. Para tal, foi avaliado o grau de resistência a oxidantes, a capacidade de adaptação, a indução de enzimas antioxidantes, os níveis de glutationa total, a capacidade antioxidante total e a indução de dano oxidativo a proteínas e lipídios através de metodologias atuais. C. albicans, C. glabrata e C. krusei apresentaram maior resistência ao estresse oxidativo nas condições testadas, C. parapsilosis e C. tropicalis resistência média e C. dubliniensis, C. famata e C. guilliermondii foram mais sensíveis. Todas as espécies demonstraram capacidade adaptativa e indução de enzimas antioxidantes. Os níveis de glutationa total mostraram redução intracelular frente ao estresse oxidativo. A capacidade antioxidante total foi variável entre espécies. Outros testes (efeito de meio condicionado e de moléculas quorum-sensing – tirosol e farnesol - no crescimento, capacidade de proteção cruzada e oxidante total) foram empregados sem sucesso. Ainda, verificamos em isolados de C. albicans a relação entre capacidade de resistirem a oxidantes e produção de fosfolipase e protease. Os resultados indicaram ausência de correlação entre estes fatores. Espécies com sistema antioxidante mais frágil são também as que ocorrem com menor frequência em infecções sistêmicas ou resistem menos ao efeito dos antifúngicos. É interessante investigar se C. albicans, C. glabrata e C. krusei tiram vantagem efetiva de um sistema antioxidante mais potente para causarem candidíase disseminada ou resistirem a drogas. A caracterização detalhada da REO pode proporcionar a descoberta de novos alvos para a ação de antifúngicos no futuro. / Candida species with clinical relevance differ in therms of clinical prevalence, virulence and profile of resistance to antifungal agents. We hypothesized that these differences may be due in part to the relative ability of these species to resist oxidative stress that is imposed by phagocytes in the pathogenesis of candidiasis. In this context, there are few studies of the oxidative stress response (OSR) in different species than C. albicans. Thus, this study aimed to investigate the in vitro OSR considering isolates of eight Candida species – C. albicans, C. dubliniensis, C. famata, C. glabrata, C. guilliermondii, C. krusei, C. parapsilosis and C. tropicalis. To this purpose, we evaluated the resistance degree to oxidants, the adaptability, the induction of antioxidant enzymes, levels of total glutathione, total antioxidant status and induction of oxidative damage to proteins and lipids by current methodologies. C. albicans, C. glabrata and C. krusei showed greater resistance to oxidative stress in the conditions tested; C. parapsilosis and C. tropicalis showed an intermediate resistance and C. dubliniensis, C. famata and C. guilliermondii were more sensitive to oxidative stress. All species showed adaptive capacity and induction of antioxidant enzymes. The levels of total glutathione showed intracellular reduction against oxidative stress. The total antioxidant capacity was variable between species. Other tests (effect of conditioned medium and quorum-sensing molecules - farnesol and tirosol – on growth, ability of cross-protection and total oxidant status) were tested without success. Still, we found in isolates of C. albicans the relationship between ability to resist oxidation and production of phospholipase and protease. The results indicated no correlation between these factors. Species with weaker antioxidant system are also those that occur less frequently in systemic infections or are less resistant to the effect of antifungal agents. It is interesting to investigate if C. albicans, C. glabrata and C. krusei take effective advantage of a more powerful antioxidant system to cause disseminated candidiasis or resist drugs. The detailed characterization of the OSR can provide the discovery of new targets for the action of antifungals in the future.

A suinocultura brasileira encontra-se atualmente em um nível técnico de destaque no contexto mundial. Entretanto, diversas estratégias são utilizadas para restringir a compra dos produtos brasileiros por países estrangeiros, em especial barreiras sanitárias. Os objetivos desse trabalho foram determinar a microbiota fúngica da pele de suínos sem lesões aparentes e estabelecer os possíveis agentes micóticos de importância nesta espécie. Foram obtidas 261 amostras de animais com 20 a 120 dias de idade, provenientes de 11 granjas do Rio Grande do Sul. As amostras foram obtidas apenas dos animais com ausência de qualquer patologia. Essas foram semeadas em Agar Sabouraud com cloranfenicol. Obteve-se o crescimento de 509 culturas, sendo 305 (59,92%) fungos filamentosos e 204 (40,08%) leveduras. A distribuição do número de diferentes colônias isoladas por amostra demonstra uma predominância de monocultura no grupo 1 (animais de 20 a 60 dias de idade) em relação ao grupo 2 (animais acima de 60 dias de idade). Dentre os fungos filamentosos septados, ocorreu predominância dos hialohifomicetos (43,03%) em relação aos feohifomicetos (10,41%), enquanto que observou-se apenas 6,48% de filamentosos asseptados. O Aspergillus (22,90%) foi o gênero de hialohifomiceto mais isolado, com predominância do A. flavus (5,70%). Dentre os feohifomicetos, o gênero Cladosporium foi o mais prevalente (9,04%). No que concerne os zygomicetos, o gênero mais isolado foi Mucor (4,13%). Em relação às leveduras, o gênero Candida foi o mais isolado (14,73%), sendo a distribuição de freqüência das espécies: C. albicans (13,56%), C. parapsilopsis (0,59%), C. famata (0,20%), C. tropicalis (0,20%) e outras espécies de Candida (0,20%). A reduzida quantidade de diferentes fungos isolados por amostra nos animais do grupo 1, em relação ao grupo 2, pode ter sido influenciada pela menor quantidade de grãos utilizada na fabricação de ração nos animais mais novos, maior freqüência de limpeza e desinfecção das instalações, bem como a não mistura de animais provenientes de diferentes origens. A alta prevalência do gênero Candida observada em suínos, um gênero normalmente comensal do trato gastrintestinal, se torna importante quando esses animais são acometidos por doenças imunossupressoras. Estudos clínicos longitudinais e/ou infecções experimentais talvez possam definir a importância destes agentes em suínos. / Brazilian pig production has reached a technical and techological level that stands out in international pig production. However, several strategies have been used to limit access of Brazilian pig products to international market, including health barriers. The objective of our work was to determine the fungal flora of the healthy pig skin and to determine possible micotic agents important for this animal species. 261 samples from 20-120 day old pigles were obtained from 11 pig farms from the State of Rio Grande do Sul, Brazil. All sampled animals were negative for any skin lesions. The samples were cultured in Sabouraud agar and cloranfenicol. Cultures were obtained from 509 materials, with 305 (59,95%) filamentous fungi and 204 (40,08%) yeasts. The distribution of different fungi isolated each simple shows a high prevalence on group 1 (20-60 days old) in relation to group 2 (more than 60 days old). Among septated filamentous fungi, there was a great preponderance of hialohifomycetes (43,03%) in relation to feohifomycetes (10,41%), while only 6,48% were aseptated filamentous. Aspergillus (22,90%) was the most isolated genus of hialohifomycetes and A. flavus (5,70%) was the more prevalent specie isolated. As to zygomycetes, the most isolated genus was Mucor (4,13%). Regarding yeasts, the genus Candida was the most prevalent (14,73%) and the species distribution was: C. albicans (13,56%), C. parapsilopsis (0,59%), C. famata (0,20%), C. tropicalis (0,20%) and other Candida species (0,20%). The little quantity isolated per sample could have been influenced by quantity of grains used in pig feed in these different stages of production, types of facilities, stress and environmental changes could be important to imbalance the flora, as well as favoring diffusion of mycosis in the herds. The limited number of different fungi isolated from animal flora on group 1 may have been influenced by the smaller use of grains in the feed mill in this stage, a better cleaning and disinfection of premises, as well as avoiding mixing pigs of different source. Clinical longitudinal studies and/ or experimental infections perhaps may help to define the importance of these fungi to that species.

Submitted by Elizete da Silva Dias (elizetedias@ufam.edu.br) on 2017-06-22T15:28:23Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) TESE - ANDREIA FERREIRA DE SOUZA.pdf: 2861845 bytes, checksum: fa54456b6bc990f480efa541a3b7cdfe (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-06-23T14:30:14Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) TESE - ANDREIA FERREIRA DE SOUZA.pdf: 2861845 bytes, checksum: fa54456b6bc990f480efa541a3b7cdfe (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-06-23T14:32:11Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) TESE - ANDREIA FERREIRA DE SOUZA.pdf: 2861845 bytes, checksum: fa54456b6bc990f480efa541a3b7cdfe (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-23T14:32:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) TESE - ANDREIA FERREIRA DE SOUZA.pdf: 2861845 bytes, checksum: fa54456b6bc990f480efa541a3b7cdfe (MD5) Previous issue date: 2016-11-18 / Item withdrawn by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-07-14T13:45:46Z Item was in collections: Doutorado (ID: 91) No. of bitstreams: 4 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf.txt: 65 bytes, checksum: 84fdbdbfeca4f7e4764b2f14d97a84ad (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf.jpg: 2921 bytes, checksum: b6f7c946b94a5bc7f226fe694f68a640 (MD5) / The C. albicans is the most frequently isolated fungus in humans healthy, being considered the main opportunistic pathogenic species, However, in recent decades, it has been observed a significant increase of other non-albicans species, involved both in colonization as in human infectious processes. The clinical manifestation but prevalent, This fungus, the woman is Vulvovaginal candidiasis (VVC). This study had the objective of making the molecular characterisation and polyphasic taxonomy of Candida species isolated from vaginal exsudate and describe their susceptibility profiles antifungals and extracts of Vatairea guianensis. The identification was performed by methods Classics (Microcultive, CHROMagar, Auxonograme), MALDI-TOF, multiplex PCR and molecular. In the analysis of genetic variability was made to AFLP.The colonization of Candida sp. in the vagina was statistically significant in patients aged 35 years or more, which made use of underwear fair and/or synthetic, in use of antibiotic therapy and who had CVV recurrent episodes. Of the 202 samples 37.1% (N = 75) was possible isolating yeasts Candida sp. C. albicans was the most isolated species (64%), followed by C. parapsilosis (20%), C. glabrata (5.3%), C. tropicallis (4%), C. haemolinus (4%) and C. krusei (1.3%) and C. lusitaniae (1.3%). Combinations of methods are required phenotypic and also carrying out additional evidence to the identification of Candida spp. molecular methods available confirm that the use phenotypic methods for clinical diagnosis must be cautious, have low accuracy in determination of Candida species not albicans and the identification of new species. The MALDI-TOF proved as an excellent tool for species identification of Candida sp, as it associates simple technique, procedures partially automated and mainly the speed of the result Microbiology, the limitation of this method is in the absence of a complete database. C. haemulonii, an emerging and rare species, was first identified in isolates of vaginal exudate asymptomatic women in Manaus. The vast majority of isolates of Candida sp., vaginal exudate, presented resistance to antifungals fluconazole, itraconazole, ketoconazole and Nystatin. The extracts of the seeds of V. guianensis presented only fungistatica activity in 04 isolates of Candida sp. vaginal exsudate. Thus, this research contributed to the epidemiological knowledge of species of Candida in vaginal flora of assintomaticas patients, and may guide the diagnosis in pathological conditions and being used in monitoring of emerging infections and drug resistant, because the variation of species according to geographical location should be taken into account between the epidemiological factors of CVV. / A C. albicans é o fungo mais frequentemente isolado em humanos sadios, sendo considerada a principal espécie patogênica oportunista, entretanto, nas últimas décadas, tem sido observado um significativo aumento de outras espécies não-albicans, implicadas tanto na colonização como em processos infecciosos humanos. A manifestação clínica mais prevalente, deste fungo, na mulher é a Candidíase Vulvovaginal (CVV). OBJETIVOː realizar a caracterização molecular e a taxonomia polifásica de espécies de Candida oriundas de isolados de exsudato vaginal e descrever seus perfis de susceptibilidade a antifúngicos e aos extratos de Vatairea guianensis. METODOLOGIAː A identificação foi realizada por métodos clássicos (Microcultivo, CHROMagar, Auxonograma), MALDI-TOF, multiplex PCR e a molecular. A variabilidade fenotipica foi feita por AFLP, e os testes de susceptibilidade em placa de Elisa por microdiluição com os antifungicos e os extratos de Vatairea guianensis. RESULTADOː A colonização de Candida sp. na vagina foi estatisticamente significativa em pacientes com idade igual ou maior que 35 anos, que faziam uso de roupas íntimas justas e/ou sintéticas, em uso de antibioticoterapia e que tinham episodios CVV recorrente. Das 202 amostras 37,1 % (N=75) foi possível isolar leveduras Candida sp. Na analise da variabilidade genética foi feito a AFLP. Candida albicans foi a espécie mais isolada (64 %), seguida por C. parapsilosis (20 %), C. glabrata (5,3 %), C. tropicallis (4 %), C. haemolinus (4%) e C. krusei (1,3 %) e C. lusitaniae (1,3 %). São necessárias combinações entre métodos fenotípicos e também a realização de provas complementares para a identificação de Candida spp. Os métodos moleculares disponíveis confirmam que o uso de métodos fenotípicos para o diagnóstico clínico deve ser cauteloso, pois possuem baixa acurácia na determinação de espécies Candida não albicans e na identificação de novas espécies. CONCLUSÃOː O MALDI-TOF se mostrou como uma excelente ferramenta para a identificação de espécies de Candida sp, pois associa simplicidade da técnica, procedimentos parcialmente automatizados e principalmente a rapidez do resultado microbiológico, a limitação deste método esta na ausência de um completo banco de dados. C. haemulonii, uma espécie emergente e rara, foi pela primeira vez identificada em isolados do exsudato vaginal de mulheres assintomáticas em Manaus. A grande maioria dos isolados de Candida sp., do exsudato vaginal, apresentou resistência aos antifúngicos fluconazol, itraconazol, cetoconazol e a nistatina. Os extratos das sementes de Vaitarea guianensis apresentou apenas atividade fungistatica em 04 isolados de Candida sp. do exsudato vaginal. Assim, esta pesquisa contribuiu para o conhecimento epidemiológico das espécies de Candida na flora vaginal de pacientes assintomaticas, podendo orientar o diagnóstico em condições patológicas e sendo utilizado na monitorização de infecções emergentes e resistentes às drogas, pois a variação das espécies de acordo com a localização geográfica deve ser levada em conta entre os fatores epidemiológicos de CVV.