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Uso da ozonioterapia como terapia complementar em cães diagnosticados com parvovirose

Traldi, Rafael Franchi January 2019 (has links)
Orientador: Stélio Pacca Loureiro Luna / Resumo: A parvovirose canina destaca-se como um dos principais agentes etiológicos nas gastroenterites infecciosas em cães jovens, apresentando alta virulência e mortalidade em decorrência da gravidade do estado clínico geral dos pacientes. Seu tratamento clínico é sintomático, principalmente através da reposição eletrolítica e do controle do vômito e diarreia. Este fato aliado ao aumento crescente do índice de óbitos, estimulou o estudo de novas abordagens terapêuticas para o desenvolvimento de novos protocolos. A Ozonioterapia se destaca neste cenário em decorrência de suas múltiplas propriedades farmacológicas, atuando como antiviral, imunoestimulatório, anti-inflamatório, analgésico, dentre outros. Neste estudo, objetivou-se avaliar a Ozonioterapia como tratamento complementar em cães que apresentaram PCR positivo de fezes para parvovirose. Para isso, 25 animais aleatoriamente divididos em 2 grupos por meio de sorteio foram avaliados, sendo 7 animais do grupo controle (GC=7) e 18 animais do grupo ozônio (GO=18). Os animais tinham até dois anos de idade, vacinados e não vacinados contra parvovirose, machos ou fêmeas, sem distinção de raça ou porte. Durante o período de tratamento, os animais tiveram o hemograma, consistência das fezes, presença ou ausência de sangue nas fezes, presença ou ausência de êmese e o desfecho, com a alta ou óbito, como parâmetros. O desfecho pode ser considerado a variável de maior relevância clínica, demonstrando diferença significativa entre os grupos,... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Canine parvovirosis stands out as one of the main etiological agents in infectious gastroenteritis in young dogs, presenting high virulence and mortality due to the severity of the patient’s general clinical condition. Its clinical treatment is symptomatic, mainly through electrolyte replacement and control of vomiting and diarrhea. This fact, combined with the increasing death rate, has stimulated the study of new therapeutic approaches for the development of new protocols. Ozone therapy stands out in this scenario due to its multiple pharmacological properties, acting as an antiviral, immunostimulatory, anti-inflammatory, analgesic agent, among others. The aim of this study was to evaluate ozone therapy as a complementary treatment in dogs with positive stool PCR for parvovirus. For this, 25 animals randomly divided into 2 groups by lot were evaluated, being 7 animals from the control group (CG = 7) and 18 animals from the ozone group (GO = 18). The animals were up to two years old, vaccinated and unvaccinated against parvovirus, male or female, regardless of breed or size. During the treatment period, the animals had blood count, stool consistency, presence or absence of blood in the stool, presence or absence of emesis and the outcome, with discharge or death, as parameters. The outcome can be considered the most clinically relevant variable, demonstrating a significant difference between the groups, where the animals in the control group were 20 times (95% CI 2.2 - 180.9... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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Dimorfismo Sexual del Diente Canino en Población Santiaguina Actual aplicando Morfometría Geométrica

Rodríguez Vera, Felipe January 2017 (has links)
Antropólogo físico / En comparación a otros primates, el diente canino en Homo sapiens se encuentra disminuido en tamaño. Esto se ha explicado cómo una disminución en el dimorfismo sexual debido a la relajación de la selección sexual. Aun así, distintas investigaciones han demostrado que el dimorfismo sexual en el diente persiste en humanos. Distintas evidencias sugieren que el canino podría presentar dimorfismo de forma. Como la forma y el tamaño de un diente presentan cierta independencia, la reducción en el dimorfismo de tamaño del canino puede no corresponder con una reducción del dimorfismo en la forma del mismo. A pesar de ello, esta hipótesis no se ha contrastado. Utilizando Morfometría Geométrica, el principal resultado de esta memoria fue que existe dimorfismo sexual tanto de forma como de tamaño en el canino en una muestra de población santiaguina actual, siendo el canino femenino de menor tamaño y con una forma cuadrangular, mientras que el masculino es de mayor tamaño y una forma romboidal. Asimismo, se descubrió que el canino funciona como un módulo, concentrándose el dimorfismo sexual en la cara bucal de la corona, siendo este no significativo en la cara palatal
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Detección de virus distemper canino en carnívoros silvestres en cautiverio y de vida libre clínicamente sanos en Chile

Vega Klein, Consuelo Andrea January 2019 (has links)
Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El virus distemper canino (VDC) es el agente causal de una de las enfermedades infecciosas más relevantes en carnívoros a nivel mundial. En las últimas décadas se han reportado diversos brotes con alta mortalidad en especies silvestres, los que provocaron una gran disminución en las poblaciones afectadas, poniendo en riesgo la conservación de especies amenazadas. Con el objetivo de determinar la presencia de VDC en diferentes especies silvestres en Chile, se realizó un estudio longitudinal de detección del gen de la Fosfoproteína (gen P) mediante n-RT-PCR. Se analizaron 136 muestras de sangre entera de carnívoros clínicamente sanos provenientes de un zoológico de la Región Metropolitana y de zorros chilotes (Lycalopex fulvipes) de vida libre. Como resultado, no se detectó el gen P en ninguna de las muestras analizadas, siendo todas clasificadas como negativas. La evidencia encontrada, en conjunto con estudios previos, sugiere que el contacto de los zorros chilotes con perros infectados con VDC podría tener graves consecuencias en cuanto a su salud y conservación, causando disminución poblacional o extinciones locales a lo largo de su distribución. Se recomienda realizar estudios serológicos y moleculares de carnívoros silvestres y domésticos en zonas habitadas por zorro chilote que permitan comprender la epidemiología del virus en ambientes naturales para diseñar medidas preventivas adecuadas para proteger ésta especie. Finalmente, se recomienda continuar la vigilancia del virus mediante pruebas serológicas que confirmen la utilidad de la vacunación como medida preventiva en zoológicos y mantener protocolos sistemáticos de vacunación. / Canine distemper virus (CDV) is the causal agent of one of the most relevant infectious diseases in carnivores worldwide. In the last decades, several outbreaks with high mortality in wildlife species have been reported, which caused a large decline of the affected populations, putting at risk the conservation of threatened species. In order to determine the presence of CDV in different wild species in Chile, a longitudinal study of detection of the Phosphoprotein gene (P gene) was carried out by n-RT-PCR. A total of 136 whole blood samples were analyzed, collected from different clinically healthy carnivores from a zoo in the Metropolitan Region and free-ranging Darwin’s foxes (Lycalopex fulvipes). As a result, the presence of P gene was not detected in any of the analyzed samples, so all were classified as negative. The evidence found, in conjunction with previous studies, suggests that the contact of Darwin’s foxes with CDV infected dogs could have severe consequences in their health and conservation status, causing population decline or local extinctions throughout its distribution. It is recommended to perform serological and molecular studies in wild and domestic carnivores in areas inhabited by Darwin’s foxes that allow understanding the epidemiology of the virus in natural environments, in order to design adequate preventive measures to protect this specie. Finally, it is recommended to continue monitoring the virus through serological tests that confirm the efficacy of vaccination as a preventive method in zoos and maintain systematic vaccination protocols. / Proyecto Buin Zoo para la conservación del zorro chilote
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Uso de la reacción en cadena de la polimerasa asociada a transcripción reversa para la detección del linaje América-1 del virus distemper canino

Correa Navarro, Vivian Betsabet January 2019 (has links)
Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El Distemper Canino (DC) es una de las patologías que provoca mayor tasa de morbilidad y mortalidad en los caninos domésticos a nivel mundial y representa también una importante enfermedad en varias familias de mamíferos terrestres: Canidae, Procyonidae, Mustelidae, Mephitidae, Hyaenidae, Ursidae, Ailuridae, Viverridae, Felidae y algunos mamíferos marinos, como la foca cáspica (pusa caspica). Esta enfermedad es causada por el Virus Distemper Canino (VDC), un virus ARN de hebra simple y polaridad negativa, cuyo genoma constituido por seis genes, codifica para seis proteínas estructurales. Entre ellas, la Hemaglutinina codificada por el gen H, presenta la mayor variabilidad aminoacídica, induce la producción de anticuerpos neutralizantes sintetizados por el sistema inmune del hospedero. Basado en la variabilidad del gen H, se ha descrito que a nivel mundial existirían al menos catorce linajes distintos del VDC y en nuestro país se ha descrito la presencia de al menos dos linajes circulando entre nuestros perros enfermos con la patología: América-1 y Europa-1/Sudamérica-1. Así, el objetivo de esta memoria de título fue implementar la detección del linaje América-1 del Virus Distemper Canino mediante la Reacción en Cadena de la Polimerasa asociada a transcripción reversa (RT-PCR) mediante partidores diseñados in silico. Para esto, los partidores se diseñaron a partir de las secuencias nucleotídicas usadas en el árbol filogenético del gen H de VDC realizado por (Ke et al., 2015, las que se encuentran en la base de datos Genbank®, Los partidores diseñados resultaron ser eficaces para la detección del VDC y la RT-PCR fue capaz de detectar un fragmento específico del gen H de las muestras positivas, por lo tanto se podría sugerir que estos partidores diseñados in silico efectivamente se pueden ocupar para detectar el linaje América-1 del VDC. / The Canine Distemper is one of the pathologies that causes the highest rate of morbidity and mortality in domestic dogs worldwide and represents an important disease in several families of terrestrial mammals: Canidae, Procyonidae, Mustelidae, Mephitidae, Hyaenidae, Ursidae, Ailuridae, Viverridae, Felidae and some marine mammals, like the cape seal (pusa caspica). This disease is caused by Canine Distemper Virus (CDV), a single-stranded RNA virus with negative polarity, whose genome consists of six genes codifying for six structural proteins. Among them, the Hemagglutinin encoded by the H gene, has the highest amino acid variability, inducing the production of neutralizing antibodies synthesized by the host's immune system. Based on the variability of the H gene, it has been described that worldwide there would be at least fourteen different VDC lineages and in our country the presence of at least two lineages circulating among our sick dogs has been described with the pathology: America-1 and Europe-1/South America-1. The objective of this title report was to implement the detection of the America-1 lineage of the Canine Distemper Virus through the Polymerase Chain Reaction associated with reverse transcription (RT-PCR) by means of in silico designed primers. For this, the primers were designed using the nucleotide sequences used in the phylogenetic tree constructed using the VDC H gene performed by Ke et al., 2015, and stored in the Genbank® database. The designed primers were found to be effective for the detection of VDC and the RT-PCR was able to detect a specific fragment of the H gene from the positive samples, therefore it could be suggested that these in silico designed primers can effectively be used to detect the VDC lineage America-1.
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Validity and Reliability in Canine Selection Tests Substance Detectors, Before, During and After Training in a Binomial Academic Program

Rojas, Jorge U. 01 January 2017 (has links)
La Policía Nacional de Colombia en el desarrollo de programas educativos que emplean equipos caninos (Perro-Manejador), utiliza pruebas de selección, fundamentales para determinar cuáles animales son Aptos o No Aptos para iniciar el adiestramiento, continuarlo y finalizar su certificación. Por lo anterior lo que buscó esta investigación es que los instrumentos se validen para que sean confiables y predecir los perros que aprueban o desaprueban las evaluaciones comportamentales, aportando al desarrollo de los programas académicos. Para alcanzar el propósito del estudio, se efectúo un análisis univariado utilizando tablas de contingecia de 2 por 2, estimando la Sensibilidad y Especificidad de cada una de las pruebas realizadas en los caninos detectores de sustancias narcóticas y explosivas (n=549). Determinando los valores predictivos de los Test: Instrumento No 1 (Test-retest), Instrumento No 2 (Potenciación y Asociación) e Instrumento No 3 (certificación final). Estableciendo el nivel de acuerdo entre los evaluadores (Kappa de Cohen), correlacionando las 17 variables comportamentales individuales y agrupadas para predecir los caninos Aptos y No Aptos para el servicio policial. Dentro de los principales hallazgos se evidencia una sensibilidad y especificidad altas, con resultados estadísticamente significativos para la mayoría de las variables comportamentales analizadas individualmente (P
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SOROPREVALÊNCIA DE INFECÇÕES VÍRICAS EM CÃES DE SANTA MARIA, RS; SELEÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE LINHAGENS CELULARES RESISTENTES AO VÍRUS DA DIARRÉIA VIRAL BOVINA / SEROPREVALENCE OF VIRAL INFECTIONS IN DOGS OF SANTA MARIA, RS; SELECTION AND CHARACTERIZATION OF CELL LINES RESISTANT TO BOVINE VIRAL DIARRHEA VIRUS

Dezengrini, Renata 20 February 2006 (has links)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The present study reports a serologic survey of the main viral infections of dogs in Santa Maria, RS, Brazil, and the production of cell lines of canine, swine and leporine origin resistant to bovine viral diarrhea virus (BVDV). Canine distemper virus (CDV), parvovirus (CPV), adenovirus (CAV) and coronavirus (CCoV) infections have been associated with significant morbidity and mortality among dogs worldwide. The aim of this study was to determine the prevalence of antibodies against these viruses in the canine population of Santa Maria. To this purpose, 817 blood samples were collected from non-vaccinated dogs of 14 neighborhoods and tested by virus neutralization (CDV, CAV and CCoV) and by hemagglutining inhibition (CPV). Specific antibodies to CDV were detected in 27.3% (223/817) of the samples, to CPV in 68.7% (561/817), to CAV in 43% (353/817) and to CCoV in 50.4% (412/817) of the dogs. These results indicate that CDV, CPV, CAV and CCoV infections are spread among dogs in Santa Maria. However, a significant part of the population is seronegative and therefore unprotected against these viruses. This indicates a need for extending the vaccination programs against these viruses. During the standardization of serologic tests and expansion of cell cultures for virus amplification, the canine MDCK cell line was found to be contaminated with BVDV, the main viral contaminant of cultured cells. The inadverted contamination of cultured cells with BVDV may represent a serious problem for diagnostic virology, research and production of biologicals. The second part of this dissertation reports the production and characterization of three cell lines resistant BVDV, obtained out of each parental cell line (canine MDCK, porcine PK-15 and leporine RK-13) that were contaminated with BVDV. Initially, the cells were submitted to four rounds of infection with a highly cytolytic BVDV strain. The cells surviving infection were then cloned out, expanded and assayed for their susceptibility to BVDV. The resistance to BVDV was investigated by search for viral proteins by immunofluorescence and by cocultivation with susceptible cells following inoculation of BVDV at high titers. All three cell lines were resistant to three standard BVDV strains (Singer, NADL e Oregon) and 10 field isolates. Inoculation of these cells with BVDV at a multiplicity of infection of 10 TCID50/cell resulted in frequencies of infection of <10-5 for MDCK-R and PK-15R cells and of 3,3x10-4 for RK- 13R. Compared to the parental ones, the resistant cells were >10.000 (MDCK-R), >20.000 (PK-15R) and 600 (RK-13R) times less susceptible to BVDV. The inoculation of virus in the resistant cells in the presence of polyethylene-glicol (PEG) resulted in an increase in susceptibility in the order of >437 (MDCK-R), >346 (PK-15R) and 87 (RK-13R) times. These results indicate that the resistance of these cell lines is probably due to a block in viral entry which can be overcome by addition of PEG. On the other hand, each resistant cell line retained the susceptibility to other three viruses of interest which replicate in the parental cells. Thus, these cells may be useful for virology diagnostic, virus propagation and for vaccine production, without the risk of being inadvertedly contaminated with BVDV. / O presente trabalho relata um inquérito sorológico das principais infecções víricas de cães em Santa Maria, RS, Brasil e a obtenção de linhagens celulares de origem canina, suína e leporina resistentes ao vírus da Diarréia Viral Bovina (BVDV). As infecções pelo vírus da cinomose (CDV), parvovírus (CPV), adenovírus (CAV) e coronavírus (CCoV) são importantes causas de morbidade e de mortalidade em cães em todo o mundo. Com o objetivo de determinar a prevalência de anticorpos contra esses vírus na população canina da cidade de Santa Maria, coletou-se amostras de sangue de 817 cães não-vacinados, em 14 bairros. Estas foram testadas pela técnica de soroneutralização (CDV, CAV e CCoV) ou inibição da hemaglutinação (CPV). Anticorpos específicos contra o CDV foram detectados em 27,3% (223/817) das amostras, contra o CPV em 68,7% (561/817), contra o CAV em 43% (353/817) e contra o CCoV em 50,4% (412/817) dos cães. Esses resultados demonstram que esses vírus estão difundidos na população canina dos bairros da cidade. Por outro lado, demonstram também que uma parte considerável da população é soronegativa e, portanto está desprotegida contra esses agentes, indicando a necessidade de se ampliar os programas de vacinação para essas infecções. Durante a padronização das técnicas sorológicas e expansão dos cultivos celulares para amplificação dos vírus, detectou-se a contaminação da linhagem de células caninas MDCK com o BVDV, o principal vírus contaminante de cultivos celulares. A contaminação inadvertida de cultivos celulares com o BVDV pode representar um sério problema para o diagnóstico virológico, pesquisa e produção de imunobiológicos. A segunda parte dessa dissertação descreve a produção e caracterização de três linhagens celulares resistentes ao BVDV, obtidas a partir das células parentais de origem canina (MDCK), suína (PK-15) e leporina (RK-13) que estavam contaminadas com o BVDV. Essas células foram submetidas a quatro ciclos de infecção com uma cepa citolítica de BVDV. As células que sobreviveram a infecção lítica foram clonadas, expandidas e testadas para a sua susceptibilidade ao BVDV e outros vírus de interesse. A resistência ao BVDV foi investigada pela pesquisa de antígenos virais por imunofluorescência indireta e por cocultivo com células susceptíveis após a inoculação do vírus em altos títulos. As três linhagens celulares demonstraram ser resistentes a três cepas-padrão (Singer, NADL e Oregon) e a 10 isolados de campo do BVDV. A inoculação do BVDV nessas células com uma multiplicidade de infecção de 10 DICC50/célula resultou em freqüências de infecção de <10-5 para as células MDCK-R e PK-15R; e de 3,3x10-4 para as células RK-13R. Comparando-se com as células parentais, verificou-se que as linhagens resistentes são >10.000 (MDCK-R), >20.000 (PK-15R) e 600 (RK-13R) vezes menos susceptíveis ao BVDV. A inoculação do vírus nas células resistentes na presença de polietilenoglicol (PEG) resultou em um aumento na susceptibilidade dessas células na ordem de >437 (MDCK-R), >346 (PK-15R) e 87 vezes (RK-13R). Esses resultados indicam que a resistência dessas linhagens ao BVDV reside em um bloqueio na penetração do vírus, que pode ser parcialmente revertido pela adição do PEG. Por outro lado, cada linhagem resistente conservou a susceptibilidade a outros três vírus que replicam nas células parentais. Essas características tornam essas linhagens celulares potencialmente úteis para o diagnóstico, amplificação de vírus e produção de vacinas, sem o risco de contaminação acidental com o BVDV.
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Factores de riesgo asociados a tasas de infección de distemper canino en perro doméstico (Canis familiaris) y carnívoros silvestres en la Reserva de la Biósfera de Janos, Chihuahua, México

Almuna Morales, Rocío January 2016 (has links)
Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El crecimiento y expansión de la población humana ha ocasionado un mayor contacto entre los humanos, sus animales domésticos y la fauna silvestre. La interacción física entre estas especies ha favorecido la diseminación de enfermedades infecciosas entre ellas y tienen consecuencias para la salud y la conservación. En asociación con lo anterior, la presencia del perro doméstico (Canis familiaris) en áreas protegidas, puede afectar la conservación de carnívoros silvestres debido, principalmente, a la transmisión de enfermedades mediante “salto taxonómico”, como del virus distemper canino (VDC), que ha sido reportado en todas las familias de carnívoros terrestres y algunos marinos. Esta enfermedad representa una amenaza para estos depredadores y los perros pueden actuar como reservorio del agente infeccioso, manteniendo el virus en sus poblaciones y diseminándolo hacia otros hospederos. El objetivo presente estudio es determinar los factores de riesgo asociados a la presencia de VDC en perros y carnívoros silvestres de la Reserva de la Biósfera de Janos. Se realizó el diagnóstico de VDC mediante serología y se corroboró que el agente se encuentra circulando tanto en poblaciones de perros como de carnívoros silvestres. Los resultados muestran que existe una interacción física entre especies domésticas y silvestres, sin embargo, no sugieren la existencia de un riesgo de infección interespecífico entre los individuos seropositivos. / Human population growth and expansion have caused a habitat overlap between humans, their domestic animals and wildlife population. Physical interactions between these species has enabled the spread of infectious diseases and has had implications for public health and conservation. In addition, the presence of domestic dogs (Canis familiaris) in protected areas may impact wild carnivore’s conservation due to, mainly, disease transmission caused by spillover infection. A good example of this is canine distemper virus (CDV), that has been reported in every family of terrestrial and some marine carnivores. The disease poses a threat for these predators and dogs are the principal reservoir of the infectious agent, keeping the virus among their population and spreading it towards other hosts. The objective of the present study is to determine the risk factors related to the presence of CDV in dogs and wild carnivores of the Janos Biosphere Reserve. The virus diagnosis was made by serological testing and it was found that the virus is circulating in both dogs and wild carnivore population. The results show that there is a physical interaction between domestic and wild species, however, they suggest that there is no risk of interspecies infection between positive individuals. / Financiamiento: Proyecto Conacyt CB-179482 (Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología de México)
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Detección del gen de la glicoproteína B del virus herpes canino a través de la reacción de la polimerasa en cadena

Carrasco Madrid, Leidy Cecilia January 2010 (has links)
Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El virus herpes canino tipo 1 (CaHV1) provoca una enfermedad hemorrágica mortal en cachorros menores de cuatro semanas, mientras que en cachorros mayores de cuatro semanas produce algunos signos clínicos de menor gravedad como rinitis, faringitis o conjuntivitis. En adultos, es capaz de producir afecciones oculares y trastornos en la reproducción, y es un patógeno participante de la denominada “tos de las perreras”. El gen que codifica para gB, una glicoproteína presente en la envoltura viral, se encuentra descrito en una gran variedad de virus herpes, debido a que es esencial para el proceso de ingreso del virus a la célula y así definir la ruta de neuroinvasión. Este trabajo se realizó en los laboratorios de Virología y Microbiología del Departamento de Medicina Preventiva Animal de la Facultad de Ciencias Veterinarias y Pecuarias de la Universidad de Chile y su propósito fue contribuir a la caracterización molecular del aislado viral RP5, y confirmar la presencia de un virus herpes nativo, mediante la detección del gen de la glicoproteína B usando la reacción de la polimerasa en cadena (PCR). Los resultados obtenidos permiten demostrar una alta sensibilidad de la técnica implementada y una especificidad superior a otro protocolo de PCR implementado en otra memoria de título. Así, un porcentaje de identidad nucleotídica de 97% respecto de la secuencia publicada en GenBank permite calificar este protocolo como un serio aspirante a convertirse en un método diagnóstico para CaHV1 en Chile y por otra parte concluye que el aislado RP5 nativo corresponde a CaHV1. Finalmente, con este estudio confirmatorio el aislado RP5 podrá ser nombrado oficialmente como AFLC-61, la cepa chilena de CaHV1 / Financiamiento: Programa AUCAI, Universidad de Chile
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Determinación del gen UL37 del virus herpes canino mediante la reacción de la polimerasa en cadena (PCR)

Fuentes Arce, Alexis Andrés January 2010 (has links)
Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / En Chile, el virus herpes canino (CaHV-1) se ha detectado mediante técnicas clásicas de virología como aislamiento en cultivos celulares y posterior citólisis de las células afectadas, mediante inmunofluorescencia, por la presencia de cuerpos de inclusión o mediante estudios de cinética viral, lo cual ha permitido completar el análisis biológico de un aislado nacional denominado RP5. En contraste, en el presente trabajo se realizó la detección molecular del gen UL37 de CaHV-1, gen que codifica para la proteína UL37, presente en el tegumento del virus y que participa del ciclo replicativo viral. Para tal efecto, se utilizaron 6 inóculos virales obtenidos de sobrenadantes de cultivos celulares de la línea MDCK infectados con RP5. Para el PCR se utilizaron los partidores CHV-1: 5’-AAGAGCTCGTGTTAGTGAAAAT 3´ y CHV-2: 5’-TAAACCCGCTGGA TGATAC- 3’ (Erles et al., 2004). La visualización del amplicón se realizó mediante electroforesis en gel de agarosa al 2 %. La electroforesis se llevó a cabo a 90 volts por 90 minutos. Como marcador de tamaño molecular se utilizó un estándar que contiene fragmentos de ADN entre 100 y 1000 pb. Luego de la electroforesis, el gel se incubó en bromuro de etidio (0,5 μg/ml), posteriormente lavado, colocado en un transiluminador de luz ultravioleta y finalmente fotografiado. Todos los sobrenadantes de cultivos celulares utilizados resultaron positivos al PCR descrito, observándose una banda de alrededor de 500 pb, lo cual concuerda con lo descrito en la literatura al utilizar esta metodología. Para tener una aproximación de la sensibilidad de la técnica empleada, se realizaron diluciones al décimo (10-1-10-8) del inóculo viral RP5 (DICT50 = 1,58 x 106/mL) y se determinó la dilución a la cual el PCR descrito no detectó el gen de la proteína UL37. Así, siete de las ocho diluciones resultaron positivas al PCR, observándose una banda de alrededor de 500 pb. Lo anterior indica que este método permitiría detectar hasta 0,00079 DICT50, lo que comparado con las 100DICT50 que se requieren para lograr la infección en células, sugiere una alta sensibilidad asociada al PCR. El producto amplificado fue purificado, secuenciado y se determinó el porcentaje de identidad nucleotidica respecto a un fragmento del gen de la UL37 de virus herpes canino (GenBank accession number AY582738). Así, se determinó que entre la secuencia del GenBank y la secuencia de consenso del amplificado nacional existe un 94% de identidad nucleotídica. Adicionalmente, se comparó la secuencia obtenida con las de otras seis secuencias del gen UL37 presentes en cepas de herpes virus existentes en el Genbank y no se estableció un porcentaje de identidad mayor al obtenido respecto de las secuencias comparadas, lo cual sugiere que la secuencia obtenida en esta memoria de título pertenece al CaHV1. Así, podemos concluir que esta metodología permite la detección de un amplicón de ADN con características compatibles con las descritas para el gen de la proteína UL37 del CaHV-1 mediante una herramienta molecular que cumple con las características del diagnóstico actual: rápido, sensible, específico y de bajo costo. Lo anterior, sin duda, permitirá contribuir para resolver un problema existente en los planteles reproductores caninos, al tener la posibilidad de ofrecer la detección del CaHV1 en pequeños animales como mascotas de compañía, un área de sostenido crecimiento
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Determinación de líneas celulares permisivas al virus herpes canino, por visualización de efecto citopático

Saldías Gatica, Lissette Monserrat January 2012 (has links)
Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / En la actualidad los avances científicos y tecnológicos permiten realizar pruebas diagnósticas cada vez más sensibles y sencillas. Sin embargo el aislamiento viral sigue siendo la prueba más importante y utilizada cuando se inicia un estudio en virología. Para ello es necesario contar en el laboratorio con células que permitan la penetración y posterior multiplicación de las partículas virales. Si bien existe una amplia variedad de líneas celulares, es fundamental conocer cuáles son las líneas celulares específicas para un determinado virus que permitan llevar a cabo los objetivos antes mencionados. En el caso del Virus Herpes Canino tipo 1, denominado actualmente como CaHV1 (Davison et al., 2009), se ha descrito sólo una línea susceptible, por lo que conocer la existencia de otras líneas útiles para su investigación es de gran relevancia, permitiendo un manejo más robusto en el estudio de este virus. El objetivo de este trabajo fue probar la factibilidad de emplear otras líneas celulares que permitieran trabajar en el laboratorio con el CaHV1. Se trabajó con 6 líneas celulares de uso habitual en el laboratorio de cultivos celulares del Instituto de Salud Pública (ISP): MDCK, Hep-2, L20b, MNA, Vero, RD, las cuales fueron sometidas a subcultivos y a un inóculo de origen nacional del CaHV1, buscando efecto citopático de lisis celular. Se observó efecto citopático de lisis celular característico del CaHV1 en la línea de origen canino MDCK, situación confirmatoria de los resultados obtenidos en investigaciones anteriores. Los cambios en las líneas celulares: Hep-2, RD, Vero, MNA observados durante el periodo post-infección, no pudieron ser cualitativamente identificados como característicos de efecto citopático de lisis celular provocada por CaHV1, de tal modo que los resultados experimentales demostrarían que la línea celular MDCK, por el momento, es la única viable para el diagnóstico del CaHV1 en el laboratorio

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