SILVA FILHO, Pedro Martins da. Síntese de nanoparticulas de sílicas carregadas positivamente e estudo de adsorção de fármacos aniônicos. 2016. 77 f. Dissertação (Mestrado em Química)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Aline Mendes (alinemendes.ufc@gmail.com) on 2017-01-13T21:11:19Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_pmsilvafilho.pdf: 3989772 bytes, checksum: 3cfb52fe73b196b199b3fc9a0b7c5c3d (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-01-19T12:49:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_pmsilvafilho.pdf: 3989772 bytes, checksum: 3cfb52fe73b196b199b3fc9a0b7c5c3d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-19T12:49:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_pmsilvafilho.pdf: 3989772 bytes, checksum: 3cfb52fe73b196b199b3fc9a0b7c5c3d (MD5) Previous issue date: 2016 / For this work silica-based mesoporous nanomaterials were synthesized to be used in transportation and controlled released of drugs. It is divided in three stages, where the first concerns the study (I) of two different synthetic routes in literature and the development of a third one, and the subsequent choice of the most advantageous. (II) The study of different functionalizations with silylating agent 3-aminopropyltrethoxysilane (APTES), through graft and the reaction medium, and through co-condensation (II). Modification of the amino group obtained from the APTES, through a process of quatenization in order to produce a material with a positive surface charge that doesn't depend on the medium. The second part consists of the study of the adsorption of the material functionalized with primary and quaternary amine through the adsorption isotherms and kinetics. The third part concerns the studies of the release in aqueous and biologic media, as well as indications of possible usages of the material obtained. In this work were produced nanometric materials in size between 65 nm and 120 nm with positive superficial charge of + 22.1 mV and 25 mV. The material revealed high adsorption of the drug used in this study, which was composed of 700 mg g-1 for primary amine and 800 mg g -1 for quaternary amine. The release tests indicate that the material is active, with release of the active ingredient of the chosen drug, sodium nitroprusside. / No presente trabalho foram sintetizados nanomateriais mesoporosos à base de sílica visando aplicação em carreamento e liberação controlada de fármacos. Dividiu-se o trabalho em três etapas, sendo a primeira referente ao (I) estudo de duas diferentes rotas sintéticas presentes na literatura e a elaboração de uma terceira rota, com posterior escolha da mais vantajosa. (II) Estudo de diferentes funcionalizações com o agente sililante 3- aminopropiltrietoxisilano (APTES), via enxerto e o meio reacional, e via co-condesação. (III) Modificação do grupo amino proveniente do APTES, através de um processo de quaternização afim de obter um material com carga superficial positiva, que não dependa do meio. A segunda parte consiste no estudo de adsorção do material funcionalizada com amina primaria e quaternária através das isotermas de adsorção e da cinética de adsorção. A terceira parte consiste em estudos de liberação em meio aquoso e biológicos, assim com propostas para o uso do material. No Trabalho foram obtidos materiais nanometricos de tamanho entre 65 e 120 nm, com carga superficial positiva de + 22,1 mV e 25 mV. O material apresentou alta absorção para o fármaco em estudo, sendo de 710 mg g -1 para amina primaria e 800 mg g-1 para a amina quaternária. Os testes de liberação indicaram que o material apresenta-se ativo, com liberação do princípio ativo do fármaco escolhido, o nitroprussiato de sódio.

Submitted by BRUNA CAMBRAIA GARMS null (bruna_garms@hotmail.com) on 2017-06-02T13:07:53Z No. of bitstreams: 1 versão final.pdf: 2844448 bytes, checksum: a15abf0209a24a9ec16d82711c103761 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-06-02T13:51:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 garms_bc_me_araiq.pdf: 2844448 bytes, checksum: a15abf0209a24a9ec16d82711c103761 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-02T13:51:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 garms_bc_me_araiq.pdf: 2844448 bytes, checksum: a15abf0209a24a9ec16d82711c103761 (MD5) Previous issue date: 2017-05-05 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O látex natural (LN) é um polímero natural de grande interesse na área biomédica devido à capacidade de promover o aumento da vascularização e epitelização de tecidos. Considerando as propriedades físico, química e biológica do LN, bem como sua capacidade em atuar como dispositivo de liberação buscou-se, com o presente estudo, desenvolver membranas de LN associadas à moxifloxacina (MXF), antibiótico de amplo espectro de ação, com o intuito de tratar lesões infectadas de difícil cicatrização. A caracterização do material foi realizada por técnicas de microscopia eletrônica de varredura (MEV), espectroscopia no infravermelho por transformada de Fourier (FTIR) e ensaios mecânicos. Além disso, foi avaliado o potencial de liberação da MXF em diferentes pHs. Ensaios microbiológicos e de citotoxicidade foram realizados com as membranas carregadoras. A presença de cristais do fármaco na superfície e no interior do material foi observada por MEV de superfície e de corte transversal. Os espectros de FTIR identificaram as bandas de absorção características dos compostos, sugerindo que a integridade dos compostos foi mantida, o que evidencia a rápida liberação inicial do composto. Além disso, o módulo de elasticidade das membranas com e sem MXF foram similares (0,8 MPa), indicando que a elasticidade das membranas é suficiente para aplicações biomédicas. Os cristais da MXF visualizados nas micrografias da superfície da amostra, tendem a solubilizar rapidamente nas primeiras horas de liberação, promovendo o efeito denominado burst release. Em relação à posterior redução na velocidade de liberação, este comportamento deve-se aos cristais do fármaco alojados no interior da membrana, que foram liberados através da matriz de forma sustentada. O percentual de liberação de MXF em pH 7,4 foi de 65,44%, enquanto em pH 5,6, o percentual foi de 53,13% em 12 dias. Os ensaios de citotoxicidade mostraram alta viabilidade celular em linhagens de fibroblastos e queratinócitos inferindo a baixa toxicidade do material. Finalmente, ensaios de sensibilidade bacteriana comprovam a capacidade de liberação de MXF por meio da matriz de liberação utilizada sem que haja comprometimento da atividade do fármaco. Assim, os resultados apresentados demonstram que a membrana de LN+MXF representa um promissor biomaterial para o tratamento de lesões cutâneas. / The natural rubber latex (LN) is a natural polymer which has aroused large interest in the biomedical fields. Mostly, due its ability to promote vascularization increasing and tissue epithelization. Considering the physical, chemical and biological properties of LN, as well as its ability to act as a release device, the present study aimed to develop LN membranes associated with moxifloxacin (MXF), a wide-spectrum antibiotic, in order to treat infected wounds. The techniques performed in the biomaterial characterization were FTIR, mechanical tests and electronic microscopy. Moreover, the potential of MXF release was evaluated at different pHs. In addition, microbiological assays and cell viability were performed with carrier membranes. The presence of drug crystals on the surface and inside the material was observed by electronic microscopy. The FTIR spectra identified the characteristic absorption bands of the compounds, suggesting that their integrity was maintained, which resulted in rapid early release of the compound. Furthermore, the modulus of elasticity of the membranes with and without MXF were similar (0.80 MPa), indicating the membranes have sufficient elasticity for biomedical applications. The MXF crystals visualized by electronic microscopy on the surface of the material, tend to solubilize quickly during the first hours of release, which promote the burst release effect. Results showed that the MXF released after 295 hours, was 66.44% at pH 7.4, and 53.13% at acidic pH 5.6. Regarding to the subsequent decrease in release rate, this behavior is due to the drug crystals found inside the membrane, which were released through the matrix in a sustained manner. Cytotoxicity assays have shown high cell viability in fibroblast and keratinocyte lines, inferring the low toxicity of the material. Finally, bacterial sensitivity assays confirm the release capacity of MXF through the polymeric matrix without compromising the activity of the drug. Thus, the results presented in this study has shown that the LN+MXF membrane represents a promising biomaterial for the treatment of infected wounds.

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:13:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2944_1.pdf: 3279609 bytes, checksum: 44b4267bdabd7dfcfaddc9463aa0c227 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O efavirenz (EFZ), utilizado como parte do tratamento de primeira escolha na terapia antirretroviral para a AIDS, possui baixa molhabilidade e solubilidade aquosa, apresentando problemas de absorção no trato gastrointestinal e baixa biodisponibilidade. Uma das abordagens utilizadas para o contorno desses entraves se dá através da obtenção de dispersões sólidas (DS), técnica esta utilizada para o EFZ. Para o desenvolvimento deste trabalho, realizou-se inicialmente o desenvolvimento e a validação, segundo o ICH e a RE n˚ 899/03 (ANVISA), de um método para o doseamento do EFZ por espectrofotometria no UV-Vis, utilizando como sistema os solventes álcool etílico/água (60:40) (λ = 247 nm), permitindo a quantificação do fármaco através de um método prático, confiável e de baixo custo para a rotina laboratorial. Visando o desenvolvimento das DS, realizou-se inicialmente um diagrama de solubilidade de fases com carreadores de diferentes classes (polímeros, surfactantes, ácidos orgânicos, poliol e hidrotopo) nas concentrações de 0,01 %; 0,05 %; 0,1 %; 0,3 %; 0,5 %; 0,7 % e 1 %, p/v. De acordo com os resultados apresentados, os surfactantes apresentaram os maiores incrementos de solubilidade, com destaque para o polissorbato (aumento de 928 vezes). Contudo, visando uma DS com consistência adequada para uma formulação sólida, optou-se pela utilização do PVP K-30, por apresentar dentre os polímeros o melhor incremento de solubilização (cerca de 25 %) como o mais adequando para a preparação das dispersões. Dessa forma, obtiveram-se os sistemas binários utilizando o PVP K-30, através dos métodos de malaxagem e solvente (rotaevaporação) nas proporções 1:1; 2:1 e 4:1 (fármaco: polímero). Esses foram avaliados e caracterizados através das técnicas de DSC, IV-TF, MEV, DR-X e ensaio de dissolução. Através dessas análises observou-se que as DS rotaevaporadas apresentaram resultados insatisfatórios no incremento da taxa de dissolução, apesar do estado amorfo apresentando por essas amostras, enquanto que a DS malaxada 4:1 e as misturas físicas (MF) apresentaram um alto incremento na taxa de dissolução, devido a diminuição da tensão superficial entre sólido-líquido e o aumento da molhabilidade do fármaco. A DS malaxada 4:1 e sua respectiva MF, também foram avaliadas com relação as suas características de densidade e compressibilidade, e de estabilidade através de TG e IV antes e após a serem submetidas a condições de estocagem em câmara de estabilidade acelerada (40 ˚C/75 % UR) durante 30 dias. Através desses estudos, pode-se observar vantagens na densidade dos sistemas binários em relação ao fármaco isolado, assim como foi observada uma maior estabilidade térmica do EFZ nesses sistemas, não havendo diferenças entre as amostras submetidas a condições adversas de estocagem e as analisadas no tempo inicial (T0). Para a obtenção de uma forma farmacêutica sólida a partir das dispersões, serão necessários alguns estudos adicionais para o ajuste de uma formulação. Neste caso, a obtenção da forma farmacêutica cápsula mostrou-se promissora

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:49:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2051_1.pdf: 8092045 bytes, checksum: 8577d67df344268f1c0c079e1d25d53a (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O câncer é uma das doenças que mais atinge a população mundial. Seu tratamento geralmente é invasivo, oneroso e extremamente tóxico ao paciente. A liberação de agentes terapêuticos no tumor é um grande problema no tratamento da doença por causa da estrutura da massa tumoral. Uma das propostas atuais é melhorar as propriedades dos fármacos já existentes, como carreadores de fármacos, com o objetivo de melhorar a eficácia do tratamento e diminuir a alta toxicidade aos tecidos sadios causada por esse tipo de tratamento. Vários materiais têm sido pesquisados para este fim. A proposta deste trabalho é a utilização de metal-organic frameworks (MOFs), uma nova classe de material poroso, como um carreador de fármaco, permitindo a incorporação de um agente terapêutico em suas cavidades com uma taxa de liberação suficientemente lenta para que o mesmo permaneça em concentrações ótimas na corrente sanguínea. Neste trabalho foi sintetizada e caracterizada uma MOF, [Zn(BDC)(H2O)2], por espectroscopia na região do infravermelho, análise elementar, análise termogravimétrica, difração de raios- X, microscopia eletrônica de varredura e espectroscopia de energia dispersiva, Primeiramente foram realizados ensaios de toxicidade aguda a fim de observar alguma toxicidade da MOF em cobaias e foi visto que a mesma apresenta tal toxicidade. A esta MOF foi incorporado um fármaco antitumoral (6- mercaptopurina) em diferentes proporções e foram avaliados como sistemas carreadores de fármacos através de ensaios de perfil de liberação, mostrando que a MOF se mostra eficiente para este fim. Os sistemas em diferentes proporções foram testados em ensaios antitumorais in vitro e in vivo onde apresentaram atividade de inibição do crescimento tumoral. A avaliação histológica dos órgãos dos animais que passaram por esses experimentos mostraram que a MOF quando incorporada ao fármaco não apresenta alterações histológicas graves

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-01-20Bitstream added on 2014-06-13T20:57:40Z : No. of bitstreams: 1 santos_fk_me_arafcf.pdf: 504042 bytes, checksum: ff6921c63666c7dee3c57494e9ca1b8f (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A esquistossomose é uma doença que atinge cerca de 200 milhões de pessoas no mundo todo. A alta incidência desta doença está ligada à falta de condições sanitárias, ao diagnóstico tardio e, principalmente, à falta de tratamento medicamentoso eficiente. O praziquantel é o fármaco de primeira escolha para o tratamento da esquistossomose. No entanto, falhas no tratamento com este fármaco e relatos de isolamento de S. mansoni tolerantes podem comprometer a eficiência do PZQ. Assim, o PZQ representa um fármaco em que pesquisas para melhorar as suas propriedades biofarmacêuticas são necessárias, pois apresenta baixa solubilidade em meio aquoso e biodisponibilidade baixa ou errática. O presente trabalho vê como finalidade desenvolver carreadores lipídicos nanoestruturados (NLC) contendo praziquantel empregando como sistema lipídico o monoestearato de glicerila (GMS) e o ácido oléico (AO) e como sistema tensoativo a associações de monoestearato de polioxietileno sorbitano 60 (TWEEN60), fosfatidilcolina, Poloxamer (Pluronic F-127 PLU). Os NLCs foram preparados através de dois diferentes métodos, de sonicação e alta velocidade de cisalhamento a quente. Os sistemas foram caracterizados através da avaliação dos parâmetros de distribuição de tamanho, potencial zeta, índice de polidispersidade e eficiência de encapsulação. O transporte intestinal do fármaco foi avaliado através do modelo do saco intestinal invertido. Ambos os métodos de obtenção empregados mostraram-se eficazes para o preparo dos NLCs em escala nanometrica, com índice de polidispersidade homogeneo e um... / The Schistosomiasis is a debilitating disease with high misfit in the quality of people life reached about 200 million people worldwide. The high incidence of this disease is linked to poor sanitary conditions, late diagnosis, and especially the lack of effective drug treatment. Praziquantel is the drug of first choice for treatment of schistosomiasis. However, treatment failures with this drug and reports of isolation of S. mansoni tolerance may compromise the efficiency of PZQ. Thus, the PZQ represents an example in which surveys to improve the biopharmaceutical properties are needed, since it has low solubility in aqueous and low or erratic bioavailability. This work aims to develop nanostructured lipid carriers (NLC) containing praziquantel employing as lipid system the glycerin monostearate (GMS) and oleic acid (OA) as a surfactant system and some combination of polyoxyethylene sorbitan monostearate 60 (TWEEN60), phosphatidylcholine and Poloxamer (Pluronic F-127 PLU) as a surfactant system. NLCs were prepared by two different methodologies, the sonication and high shear rates to warm. The systems were characterized by determination of size distribution, zeta potential, polydispersity index and encapsulation efficiency. The intestinal transport of the drug was evaluate by using the model of inverted intestinal sac. Both methods were effective for the preparation of NLCs with an average diameter in the nanometer range, the polydispersity index indicating homogeneity of particle size and a zeta... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:29:43Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2158_1.pdf: 4377748 bytes, checksum: 4f4e8e539da2963aba96d1dbd8a2c94d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Nanopartículas lipídicas sólidas constituídas de lipídios puros (NLS) ou mistura de lipídios sólidos e líquidos (CLN) têm sido propostas como uma categoria de carreadores para ingredientes cosméticos de atual e crescente interesse devido a uma série de vantagens quando comparadas a formulações convencionais. As ceras naturais são consideradas matrizes lipídicas de grande potencial para a produção de NLS de administração tópica, em função da baixa toxicidade e biocompatibilidade, além de melhorar a aparência da pele, aumentar a elasticidade e ainda possuir uma função de barreira física. O presente trabalho teve por objetivo desenvolver um nanocarreador do tipo CLN baseado no uso de cera de carnaúba, veiculando benzofenona-3 (BZ-3) como um ativo modelo lipofílico. Inicialmente as principais matérias primas utilizadas (cera de carnaúba e benzofenona-3) foram caracterizadas fisicoquimicamente (calorimetria exploratória diferencial, espectrometria no infra-vermelho, difratometria de raios-x). Prosseguindo a etapa de caracterização, caracterizou-se a mistura de cera de carnaúba e oleato de isodecila verificando-se o efeito da associação do óleo à cera de carnaúba (redução do ponto de fusão). CLN constituídas de cera de carnaúba e oleato de isodecila foram primeiramente desenvolvidos sem ativo, investigando-se, com o auxílio de um planejamento estatístico de experimentos o efeito de variáveis de formulação (24 fatorial, 16 experimentos) e de processo (24 fatorial, 16 experimentos) sobre as características dos produtos como tamanho de partículas e índice de polidispersão. Verificou-se que o tipo de emulsificante, a proporção cera:óleo, a pressão de homogeneização e o número de ciclos foram os fatores que influenciaram significativamente estas características dos CLN. Por fim, investigou-se o efeito da incorporação de BZ-3 em CLNs formulados e preparados em condições assegurando as melhores características dos sistemas como faixa de tamanho (200-300nm) e índice de polidispersão (< 0,2). O parâmetro de estudo foi o teor de BZ-3 nas nanopartículas constituídas da mistura cera de carnaúba-oleato de isodecila (1:1) que correspondeu à 0, 4,8; 9,1; 23,1 e 33,3 &#956;gBZ-3/mg fase lipídica. Foram determinados os seguintes parâmetros: eficiência de encapsulação, estabilidade física das nano-suspensões, pH, viscosidade, potencial zeta, capacidade de liberação e de penetração in vitro. De acordo com os resultados obtidos, a matriz lipídica composta de cera de carnaúba e oleato de isodecila na proporção mássica de 1:1 possui uma capacidade máxima de incorporação de BZ-3 de cerca de 4-5 % BZ-3 (massa BZ-3/massa nanopartículas). Por fim, o conjunto de resultados obtidos demonstra que os CLN de cera de carnaúba e oleato de isodecila são sistemas promissores para a veiculação de filtros UV (efeito oclusivo, baixa penetração na pele, capacidade de encapsular um filtro solar como BZ-3)

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de NÃvel Superior / O influxo de K+ na faixa de alta afinidade à controlado por transportadores dos tipos canal e carreador, os quais diferem na sua sensibilidade ao Ãon NH4 +. A atividade de ambos os componentes, nÃo-sensÃvel (canal) e sensÃvel (carreador) ao Ãon NH4 + dependem da enzima de membrana plasmÃtica, H+-ATPase. Objetivou-se a caracterizaÃÃo fisiolÃgica e molecular da absorÃÃo de K+ de alta afinidade em sorgo forrageiro [Sorghum bicolor (L.) Moench] sob a influÃncia do estado nutricional da planta e de diferentes fontes de nitrogÃnio inorgÃnico na soluÃÃo de crescimento. Sementes do genÃtipo CSF20 foram germinadas e cultivadas em soluÃÃes nutritivas contendo dois nÃveis de K+ (0,2 e 1,4 mM) e trÃs diferentes regimes de nitrogÃnio inorgÃnico (NO3 - e NH4 + a 4 mM, e a mistura NO3 -/NH4 +, ambos a 2 mM). ApÃs 15 dias de cultivo (t0) em soluÃÃes nutritivas completas, as plantas foram submetidas à deficiÃncia de K+ por 1 (t1), 2 (t2) e 3 (t3) dias. No t0, os teores de K+ da parte aÃrea foram reduzidos ignificativamente pela presenÃa do Ãon NH4 +, enquanto que, nas raÃzes a reduÃÃo foi significativa apenas nos cultivos com 0,2 mM de K+. Conforme o aumento do perÃodo de deficiÃncia, os teores de K+ nas raÃzes e na parte aÃrea tenderam a diminuir em razÃo da diluiÃÃo provocada pelo crescimento da planta. Em plantas cultivadas com 0,2 mM de K+ e com NO3 - e NO3 -/NH4 +, as eficiÃncias de absorÃÃo de K+ foram similares. Entretanto, a presenÃa do Ãon NH4 + como Ãnica fonte de nitrogÃnio, afetou severamente esse parÃmetro. O efeito do Ãon NH4 + na eficiÃncia de absorÃÃo foi mais ameno quando as plantas foram cultivadas a 1,4 mM de K+. A eficiÃncia de transporte de K+ nÃo diferiu em nenhum dos tratamentos testados. As curvas de depleÃÃo de K+ mostraram que as plantas cultivadas com NO3 -/NH4 + e NH4 + apresentaram maior capacidade para esgotar o K+ (100 &#956;M) da soluÃÃo de depleÃÃo quando comparadas Ãquelas crescidas com NO3 -. No t2, maiores taxas de Imax foram observadas nas plantas cultivadas com NH4 + como Ãnica fonte de nitrogÃnio. O Km para o K+, das plantas provindas dos cultivos com 0,2 e 1,4 mM de K+, apresentou valores menores nas plantas tratadas com NH4 + e NO3 -/NH4 +. A induÃÃo da absorÃÃo de alta afinidade de K+ foi influenciada pelo conteÃdo de K+ dos tecidos aÃreos. Ensaios com inibidores mostraram que o influxo de K+ foi significativamente inibido pelo Ãon NH4 + a 1 mM em plantas cultivadas com NO3 - como Ãnica fonte de nitrogÃnio. Entretanto, a capacidade de absorÃÃo de K+ foi reduzida pela presenÃa de TEA nas plantas cultivadas em soluÃÃes contendo o Ãon NH4 + como Ãnica fonte de nitrogÃnio. Esses resultados sugerem que em plantas de sorgo sob deficiÃncia de K+ e na presenÃa do Ãon NH4 + no meio de crescimento, canais de K+ podem contribuir significativamente para o influxo de K+. Por outro lado, na ausÃncia do Ãon NH4 + durante o crescimento, um sistema de transporte mediado por carreadores de K+ seria a via principal para o influxo desse nutriente. A atividade de transporte de H+ da H+-ATPase de membrana plasmÃtica isolada de raÃzes mostrou que a deficiÃncia de K+ (t2) estimulou a capacidade de formaÃÃo do gradiente de H+ em presenÃa do Ãon NH4 + nas plantas provindas dos cultivos com 1,4 mM de K+, enquanto que naquelas provindas dos cultivos com 0,2 mM de K+, o Ãon NH4 + teve efeito na velocidade inicial do transporte de H+ e na hidrÃlise do ATP. A deficiÃncia de K+ na presenÃa do NO3 - nÃo estimulou as atividades da bomba de 11 H+. ImunodetecÃÃo com anticorpos especÃficos contra H+-ATPases de membrana plasmÃtica de plantas mostrou a induÃÃo de duas isoformas nas membranas plasmÃticas oriundas de plantas cultivadas com 0,2 mM de K+, independentemente da fonte de nitrogÃnio e dos perÃodos de deficiÃncia. SeqÃencias gÃnicas correspondentes a genes de H+-ATPases de membrana plasmÃtica (SBA1 e SBA2), canais (SbAKT1) e carreadores de K+ (SbHAK1) foram selecionadas no genoma do sorgo e seus nÃveis de expressÃo em raÃzes analisados por PCR em tempo real. Os genes SBA1 e SBA2 pertencem, respectivamente, aos grupos II e I da famÃlia das H+-ATPases. Em raÃzes provindas dos cultivos com 0,2 mM de K+ e na presenÃa do Ãon NH4 + os nÃveis dos transcritos de SBA1 e SBA2 foram significativamente expressos a partir do tempo t2 de deficiÃncia de K+, enquanto que na presenÃa do Ãon NO3 - eles foram reduzidos conforme o aumento do tempo de deficiÃncia. Na dose mais alta de K+, os transcritos de SBA1 tiveram sua expressÃo incrementada pela deficiÃncia de K+ em presenÃa do Ãon NH4 + como Ãnica fonte de nitrogÃnio. Ambos os genes tiveram um incremento transitÃrio dos nÃveis dos transcritos no t1 de deficiÃncia de K+ na presenÃa do Ãon NO3 -. Transcritos dos genes SbAKT1 e SbHAK1 nÃo foram detectados. AnÃlises filogenÃticas mostraram que SbAKT à um canal de K+ da famÃlia Shaker, compartilhando origem evolutiva comum com vÃrios canais de K+ de gramÃneas. Os resultados sugerem que a homeostase iÃnica do K+ à alterada pelo Ãon NH4 + em plantas de sorgo. No entanto, a adaptaÃÃo das plantas à presenÃa do Ãon NH4 + envolve a induÃÃo de um sistema altamente eficiente para a aquisiÃÃo de K+, com a participaÃÃo de canais de K+ e da H+-ATPase de membrana plasmÃtica / K+ influx in the range of high affinity is mediated by K+ carriers and channels, which can be distinguished by its differential sensibility to NH4+. The activity of the NH4+-sensitive component (carrier) and NH4+-insensitive component (channel) depend upon plasma membrane H+-ATPase. This work aimed the physiological and molecular characterization of system mediating K+ uptake in the high-affinity range of concentration in sorghum [(Sorghum bicolor (L.) Moench)]. The effect of K+ starvation and nitrogen inorganic source of the growth solution on high-affinity K+ uptake was also studied. Seeds of sorghum, genotype CSF20, were germinated and placed in modified one-fourth Hoagland solutions, which were formulated to contain 0,2 and 1,4 mM K+ and three nitrogen inorganic source, NO3- and NH4+ (4 mM) and NO3-/NH4+ in combination (2mM/2mM). Plants were grown for 15 days (t0) in complete nutritive solutions and then incubated in a K+-free solutions for one (t1), two (t2) and three (t3)days. At t0, K+ content of shoot was significantly decreased in plants grown in the presence of NH4+. In roots, the presence of NH4+ did altered the K+ content only of plants cultivated in solutions with lowest K+ concentration. The K+ content of the plant tissues was progressively reduced according to increasing of starvation period and increasing of dry matter (dilution). The highest reductions were observed in K+ content of the shoot. At the lowest level of K+ (0,2 mM), plants grown in solutions containing NO3- and NO3-/NH4+ showed similar uptake efficiency of K+. Whereas, the presence of NH4 as sole nitrogen source, reduced severely the absorption rates of K+. The effect of NH4+ on uptake efficiency of K+ was alleviated by increasing the external K+ concentration to 1,4 mM K+. At both levels of K+, the translocation rate of K+ was not altered by the presence of NH4 + and by K+ starvation. Assays of depletion in the external medium of K+ (100 &#956;M) showed that plants growing in the presence of NO3-/NH4+ and NH4+ were more efficient to deplete external K+ than plants grown with NO3- , as sole nitrogen source. Kinetic parameters were significantly different at second day (t2) of deprivation. In the presence of NH4 +, as sole nitrogen source, Imax values were higher than those of plants grown in NO3-/NH4 + and NO3 -. On the other hand, Km values were lower in plants from solutions containing NH4+ and NO3 -/NH4 + than those cultivated in NO3-, as sole nitrogen source. High-affinity uptake of K+ responded to changes in plant K+ status, mainly to K+ content of aerial parts. K+ uptake by plants growing in NO3- was significantly inhibited by inclusion of NH4 at 1 mM in depletion solution, whereas it was not inhibited in plants grown with NH4 +, as sole nitrogen source. TEA (tetraethylammonium) inhibited the K+ influx of plants cultivated in solution containing NH4 +, as sole nitrogen source. The results suggest that factors such as presence of K+ or NH4 + during plant growth determine the relative contribution of each component to high-affinity uptake system of K+. In K+-starved plants grown in the presence of NH4 +, K+ channel could contribute to K+ uptake in the range of high-affinity concentration. On the other hand, in K+-starved plants grown without NH4 +, K+ carrier could constitute the principal route for K+ uptake. Active H+-transport driven by plasma membrane H+-ATPase of sorghum roots was stimulated by K+ deficiency and NH4 + in plants from solutions with high K+ level. However, these factors affected the initial rate 13 of H+-pumping and hydrolytic activity of ATP, but not H+-gradient formation, in plants from solutions containing 0,2 mM K+. These activities were not changed when plants were cultivated in growth solutions containing NO3 - and submitted to K+-starvation. Two specific isoforms of PM H+-ATPase by immuno-detection were detected, independent of the nitrogen source and deficiency period. No change in enzyme activity was observed in NO3 --grown. cDNA sequences corresponding to plasma membrane H+-ATPase (SBA1 and SBA2), K+ channels (SbAKT) and K+ carrier (SbHAK1) from sorghum genome were identified. The expression level of these genes was analyzed by real-time PCR. SBA1 and SBA2 genes were included at subfamily II and I of plasma membrane H+-ATPase, respectively. In plants cultivated in solutions containing 0,2 mM K+ and with NH4+, the accumulation of SBA1 and SBA2 transcripts was observed after 48 h (t2) of K+ deficiency. Whereas, the expression level of these genes was reduced in plants cultivated with NO3 -. In roots came from solutions containing 1,4 mM K+ level, the accumulation of SBA1 transcripts was only observed in the presence of NH4 + and after 48 h (t2) of K+ deficiency. The transcript level of both genes increased only at t1 in roots cultivated in solution containing NO3 -, as sole nitrogen source. Transcipts of SbAKT and SbHAK1 were not detectable by real-time PCR. Phylogenetic analysis revealed that SbAKT belongs to Shaker channel family of plants and is also closely related to members of other gramineous species. The results suggest that K+ homeostasis in NH4+-grown sorghum plants may be regulated by a high capacity for K+ uptake, which is dependent upon the H+ -pumping activity of PM H+-ATPase and K+ channels

Nos últimos anos têm crescido cada vez mais o número de pesquisas envolvendo nanotecnologia para obtenção de medicamentos com liberação controlada, pois esses sistemas podem: proteger o fármaco de incompatibilidades tanto biológicas quanto físico-químicas assim como controlar a biodisponibilidade do fármaco. Embora com todas essas vantagens não existem métodos in vitro realmente capazes de prever com precisão a liberação dos fármacos por esses sistemas, por esse motivo, é muito importante o desenvolvimento de métodos de liberação in vitro para determinar a cinética de liberação desses sistemas.O presente trabalho teve como objetivo desenvolver e validar os métodos de eletroforese capilar (CE) e cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) para determinar a eficiência de encapsulação do fármaco imatinibe em nanopartículaspreviamente elaboradas e caracterizadas, assim como estudar sua liberação in vitro por CE. As nanopartículas foramdesenvolvidas pelo método de nanoprecipitaçãoe caracterizadas quanto ao tamanho, potencial zeta, morfologia e eficiência de encapsulação. A eletroforese capilar é uma técnica alternativa muito promissora em relação ao HPLC devido ao seu baixo custo, menor tempo de corrida e menos poluente ao meio ambiente. Os métodos de quantificação por CE e HPLCforam desenvolvidose validadossegundo as diretrizes do ICH, Farmacopeia Americana e ANVISA, permitindo desenvolver um estudo de liberação.As nanoesferas desenvolvidas apresentaram diâmetro médio próximo a 150nm, com índice de polidispersão menor que 0,1 e aproximadamente 90% de eficiência de encapsulação. Ambos métodos se mostraram lineares com coeficientes de determinação superiores a 0,99, os métodos se mostraram precisos (%DPR< 2), exatos(101,0±4,2% e 98,0±2,5% para HPLC e CE, respectivamente)e seletivos.O método de CE permitiu desenvolver um método de estudo de liberação independente das membranas de diálise. / In recent years, there has been a growing number of researches involving nanotechnology to obtain controlled release drugs, these systems can: protect the drug against biological and physico-chemical incompatibilities; controlling the bioavailability of the drug. Although with all these advantages there are no in vitro methods really capable of accurately predicting drugs release by such systems, therefore, the development of in vitro release methods to determine the release kinetics of such systems is very important. The objective of the present work was to develop and validate capillary electrophoresis (CE) and HPLC methods to determine the encapsulation efficiency of the imatinib drug in previously elaborated and characterized nanoparticles, as well as to study its release in vitro by CE method. The nanoparticles were synthesized using the nanoprecipitation method and characterized by size, zeta potential, morphology and encapsulation efficiency. Capillary electrophoresis is a very promising alternative to HPLC because of its low cost, less runtime and less polluting environment. The CE and HPLC methodswere developed and validated according ICH, American Pharmacopoeia and ANVISA guidelines.Developed nanospheres had an average diameter close to 150nm, with polydispersity index less than 0.1 and approximately 90% encapsulation efficiency. Both methods were linear with determination coefficients higher than 0.99, the methods were precise (%RSD < 2), accurate (101.0±4,2% and 98.0±2,5% for HPLC and CE, respectively) and selective. Capillary electrophoresis method allowed to develop a drug release study independent of dialysis membranes.

A pele desempenha um importante papel na homeostasia e é uma via muito utilizada na administração de fármacos. O envelhecimento compromete sua função protetora e contribui para o aparecimento de sintomas como a rugosidade, flacidez, secura, prurido, hiperpigmentação dificuldade de cicatrização e a incidência de melanomas. Os raios UV são a principal causa do envelhecimento devido à geração de espécies reativas de oxigênio (ROS) e peroxidação lipídica. Os danos causados pelos ROS podem ser mitigados pelo uso de antioxidantes tópicos como a curcumina e timol (TML). No entanto, a baixa permeabilidade e estabilidade são fatores limitantes para sua aplicação. Para superar esses desafios, ECUR e TML podem ser encapsulados em nanopartículas, como os carreadores lipídicos nanoestruturado (CLN). Assim, os objetivos desse projeto foi desenvolver um CLN estável com manteiga Illipê, óleo de calêndula e TPGS para co-encapsular ECUR e TML e incorporação em uma formulação tópica. O padrão analítico dos curcuminóides foi isolado de amostra comercial, identificado por LC-MS e RMN e a metodologia analítica para quantificação CUR e TML foi validada. Os CLNs foram produzidos por emulsão quente e sonicação e otimizados utilizando a ferramenta de DoE Box-Behnken. Foram caracterizados em relação às propriedades físicas, citotoxicidade em cálulas HaCaT e atividade antioxidante. O CLN otimizado apresentou tamanho em torno de 130 nm, índice de polidispersão abaixo de 0,200 e potencial zeta negativo. A eficiência de encapsulação foi acima de 97% tanto para TML quanto CUR. CLN com e sem ativos demonstrou baixo índice de recristalização e forma esférica caracterização por DSC e AFM e não foram citotóxicos para células HaCaT, mostrando viabilidade celular superior a 80% na concentração 1,48x1012 partículas/ml, correspondente a 0,8 ?g/ml de TML/CUR co-encapsulados. Além disso, TML/CUR livre e co-encapsulado mostrou alta atividade antioxidante em ensaios in vitro para inibição de xantina oxidade e auto-oxidação do pirrogalol, indicando sua potente capacidade de inibição da enzima superóxido dismutase mesmo quando encapsulados. O emulgel tópico foi desenvolvido e apresentou estabilidade física após a incorporação do CLN no teste de estabilidade acelerada. O perfil reológico do emulgel demonstrou característica plástica e reoplexa e se manteve estável com o tempo e sob as variações de temperatura de analise, indicando alta estabilidade física da formulação. O perfil de liberação de ECUR e TML indicou cinética de liberação correspondente ao modelo de Higuchi sem influência da co-encapsulação na liberação da CUR e com liberação mais lenta do TML encapsulado. Os dados de permeação sugerem que os ativos possam permear na pele. A extensão e a intensidade da permeabilidade dos ativos promovida pelo CLN determinarão a aplicabilidade da formulação que poderá ser interessante para o desenvolvimento de um produto cosmético, dermocosmético, ou mesmo para um medicamento transdérmico. Em conclusão, o CLN desenvolvido apresentou características físicas e biológicas interessantes para a aplicação tópica. / Skin plays an important role in homeostasis and it is an important route for drug delivery. Aging compromises its protective function and contributes to the appearance of symptoms such as roughness, sagging, dryness, pruritus, hyperpigmentation, scarring deficient and the incidence of melanomas. UV rays are the main cause of photo-aging due of ROS generation and lipid peroxidation. ROS damage can be mitigated by using topical antioxidants as curcumin and thymol. However, low permeability and physico-chemical stability are disadvantages for its clinical application. To overcome these challenges, ECUR and TML can be encapsulated in nanoparticles such as nanostructured lipid carriers (NLC). This project aimed to develop a stable NLC composed by Illipê butter, calendula oil and TPGS to co-encapsulate ECUR and TML, followed by the NLC incorporation into a cosmetic formulation. Curcuminoid\'s analytical standard was isolated from commercial sample, identified by LC-MS and NMR, and the analytical methodology for quantification CUR and TML was validated. NLCs were produced by sonication emulsification method and their development was designed by Box-Behnken DoE and characterized in relation to physical properties, HaCaT cell cytotoxicity and antioxidant activity. Optimized NLC with size around 130 nm, polydispersity index (PdI) below 0.200 and negative zeta potential was obtained. The encapsulation efficiency (EE%) was above 97% for both TML and CUR. Empty and co-encapsulated NLC showed in DSC and AFM characterization low recrystallization index and spherical shapes and were not cytotoxic for HaCaT cells, showing cell viability over 80% at the maximum concentration evaluated (1.48x1012 particles / ml, wich corresponds to 0.8 ?g / ml co-encapsulated TML / CUR). Furthermore, free and co-encapsulated TML / CUR showed high antioxidant activity in in vitro assays due inhibition of xanthine oxidation and pyrogallol autoxidation, indicating their potent superoxide dismutase inhibition even when co-encapsulated. The cosmetic emulgel was developed and physically stable after NLC incorporation in accelerated stability. Emulgel rheological profile showed a plastic and rheopexy characteristic, which remained storage stability. The rheological profile did not change due variations in the temperature analysis, indicating good formulation physical stability and cosmetic acceptability. The release profile of ECUR/TML release kinetics corresponded to the Higuchi model without influence of co-encapsulation with slower release of the encapsulated TML. Permeation data suggest that the active substances may permeate deep into skin. The actives permeability extent and intensity promoted by CLN will determine the applicability of the formulation that can be interest for the development of a cosmetic, dermocosmetic product or even for a transdermal drug. In conclusion, the developed CLN presented interesting physical and biological characteristics for topical application.

O carcinoma da bexiga urinária (CB) é a segunda doença maligna mais frequente do trato urinário. Devido a baixa eficácia dos tratamentos intravesicais atuais (imunoterapia com BCG e quimioterapia), seja pelo baixo tempo de residência do fármaco na bexiga ou pela baixa permeabilidade no urotélio, novas estratégias que aumentem esse tempo de residência do fármaco e sua penetração na bexiga têm sido investigadas. Dentre estas estratégias pode-se citar os sistemas de liberação sustentada nanoestruturados, que liberam o fármaco gradativamente, protegem o fármaco encapsulado, aumenta a biodisponibilidade, aumentando a eficácia da terapia e diminuindo os efeitos adversos. Nesta linha, o objetivo desse trabalho foi produzir e utilizar carreadores lipídicos nanoestruturados (CLN) como sistema de carreamento de doxorrubicina (DOXO) e a sua avaliação biológica em células de câncer de bexiga. Os CLN, compostos por manteiga de Illipê (lipídeo sólido), ácido oleico (óleo) e o estabilizante Pluronic F68, foram preparados pelo método de emulsão a quente e sonicação. A caracterização físico-química do CLN foi realizada determinando o diâmetro hidrodinâmico médio e potencial zeta (carga superficial) por espalhamento de luz dinâmico (DLS), cristalinidade por calorimetria exploratória diferencial (DSC), eficiência de encapsulamento por espectrofotometria UV-vis, ensaio de citotoxicidade em células RT4 e análise de permeação ex vivo e in vivo das formulações aplicadas em bexiga de porco por microscopia confocal. O diâmetro hidrodinâmico médio dos CLN sem o fármaco foi de 103 nm e seu PdI (índice de polidispersão) igual a 0,2. O encapsulamento da DOXO aumentou o diâmetro dos CLN para 112 nm e o valor de PdI foi de 0,2. O baixo valor de PdI indica formulações com baixa polidispersão. Os valores de potencial zeta dos CLN sem e com DOXO foram ambos negativos, variando de -5 mV a -25 mV. Nos termogramas das amostras de CLN-DOXO não foi observado o pico referente a fusão da DOXO em 197,93ºC, indicando que o fármaco provavelmente está molecularmente disperso na matriz lipídica. Nos ensaios de citotoxicidade, a formulação CLN-DOXO mostrou-se mais citotóxica do que a DOXO livre em baixas concentrações (31-250 ng/mL). O valor de IC50 reduziu 2,1 vezes quando a DOXO foi encapsulada. Essa maior atividade antitumoral in vitro pode estar relacionada ao aumento do uptake celular como confirmado pelos ensaios de citometria de fluxo. No estudo de permeação ex vivo em bexiga de porco foram observadas permeações muito semelhantes das formulações de DOXO livre e encapsulada em CLN. Porém no ensaio in vivo a DOXO encapsulada permeou mais que a DOXO livre. Os resultados obtidos apontam para um promissor sistema de liberação de doxorrubicina para a terapia do câncer de bexiga. / Urinary bladder carcinoma (BC) is the second most common malignant disease of the urinary tract. Due to the low efficacy of current intravesical treatments (BCG immunotherapy and chemotherapy), either because of the low residence time of the drug in the bladder or due to low permeability in the urothelium, new strategies that increase the residence time of the drug and its penetration into the bladder have been investigated. These strategies include nanostructured sustained release systems, which release the drug gradually, protect the encapsulated drug, increase the bioavailability; increasing the effectiveness of the therapy and reducing side effects. In this line, the aim of this work was to produce and apply nanostructured lipid carriers (NLC) as a doxorubicin delivery system (DOXO) and its biological evaluation in bladder cancer cells. The NLC, composed by Illipe butter (solid lipid), oleic acid (oil) and Pluronic F68 stabilizer, were prepared by the hot emulsion and sonication method. The physical-chemical characterization of these NLC was performed by measured the mean hydrodynamic diameter and zeta potential (surface charge) by dynamic light scattering (DLS), crystallinity by differential scanning calorimetry (DSC), encapsulation efficiency by UV-vis spectrophotometry, cytotoxicity assay in RT4 cells and ex vivo and in vivo permeation assay of formulations applied to pig bladder by confocal microscopy. The mean hydrodynamic diameter of NLC without the drug was 103 nm and its PdI (polydispersity index) was 0.2. The encapsulation of DOXO increased the NLC diameter to 112 nm and the PdI value was 0.2. The low value of PdI indicates formulations with low polydispersion. The zeta potential values of the NLC without and with DOXO were both negative (-5 mV to -25 mV). In the thermograms of the NLC-DOXO sample the fusion peak of DOXO at 197.93 was not observed, indicating that the drug is molecularly dispersed in the lipid matrix. In the cytotoxicity assays, the NLC-DOXO formulation was more cytotoxic than free DOXO at low concentrations (31-250 ng/mL). The IC50 value was reduced 2.1 fold when DOXO was encapsulated. This increased in vitro antitumor activity may be related to increased cell uptake as confirmed by flow cytometry analysis. In the ex vivo permeation study in the pig bladder, a very similar permeation was observed between free and encapsulated DOXO. However, in the in vivo assay the encapsulated DOXO permeated more than free DOXO. The results indicates a promising release system of doxorubicin to bladder cancer therapy.