Submitted by MARCIA ROVADOSCHI (marciar@unifra.br) on 2018-08-16T14:17:32Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_FlabioDaRosaPonsJunior.pdf: 2017674 bytes, checksum: ce2baac29e6f32b9170ceef6e8aa57e7 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-16T14:17:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_FlabioDaRosaPonsJunior.pdf: 2017674 bytes, checksum: ce2baac29e6f32b9170ceef6e8aa57e7 (MD5) Previous issue date: 2011-08-30 / The fungal infections in humans occur in several ways, can this is superficial and systemic mycoses mycoses. The use of new antifungal made important progress in the treatment of different types of fungal infections. Among the drugs used to treat, there is ketoconazole, azole derivative, a synthetic molecule that acts by inhibiting biosynthesis of ergosterol molecule, exerting fungicidal. Treatment with ketoconazole requires frequent applications of the product, which causes skin irritation, the adherence to treatment. Initial studies have shown that drugs have nanocarrier improvement in selectivity, reducing side effects by modifying the release and increasing the effectiveness of the asset. This study aimed to characterize, evaluate the physical and chemical stability and antimicrobial activity of systems composed of nanoparticles or microparticles incorporated into formulations containing ketoconazole shampoo. All studies were carried out comparing ketoconazole as nanostructured and microstructured with the free form. The samples were stored under conditions of 25 ± 2 ° C, 4 ± 2 ° C and 40 ± 2 ° C and 75 ± 5% RH and exposed to UV light for 90 days and analyzed at 0, 7, 15, 30, 60 and 90 days in relation to the determination of pH, particle diameter, polydispersity index, zeta potential, rate of association and the drug dosing, antimicrobial activity and viscosity for the samples of shampoo. The average particle size for the nanocapsules was less than 370 nm, for microparticles less than 52 micrometers. All samples consist of the nanocarrier showed negative zeta potential. The values for the rate of association were 92.10% for the nanocapsules and 97.69% for the microparticles. Regarding the content of the suspensions and tested for stability, the samples comprising nanocapsules showed the loss of a smaller amount of assets (17.9% and 19.7%) in conditions of 25 ± 2 ° C and ± 4 2 ° C respectively. For formulations of shampoo made by nanocarrier systems, the same place, but with losses (9.3% and 13.6%) for the same conditions of suspension. In the analysis of antimicrobial activity, suspensions of nanocapsules had power of 98.15% and 100.25% of microparticles. Samples of shampoo were analyzed by microbiological assay sensitivity, which analyzed both qualitatively and showed that the samples have antifungal activity. The validation of analytical methodologies for the suspensions showed satisfactory results for all parameters. The results obtained, it can be concluded that the suspensions have demonstrated good stability, even when incorporated into a topical pharmaceutical vehicle, thus representing a better technological feasibility for the pharmaceutical area. / As infecções fúngicas nos seres humanos ocorrem de formas variadas, podendo tratar-se de micoses superficiais ou micoses sistêmicas. O uso de novos antifúngicos permitiu importantes progressos na terapêutica dos diferentes tipos de infecções micóticas. Dentre os fármacos utilizados para o tratamento, destaca-se o cetoconazol, derivado dos azóis, uma molécula sintética que age inibindo na biossíntese da molécula do ergosterol, exercendo ação fungicida. O tratamento com cetoconazol exige aplicações freqüentes do produto, o que provoca irritação cutânea, dificultando a adesão ao tratamento. Estudos iniciais têm demonstrado que fármacos nanocarreados apresentam melhora na seletividade, reduzindo efeitos colaterais, modificando a liberação e aumentando a eficácia do ativo. Este trabalho teve como objetivo, caracterizar, avaliar a estabilidade físico–química e a atividade antimicrobiana de sistemas compostos de nanopartículas ou micropartículas contendo cetoconazol incorporadas em formulações de xampu. Todos os estudos foram realizados comparando-se o cetoconazol na forma nanoestruturada e microestruturada com a forma livre. As amostras foram armazenadas nas condições de 25 ± 2 °C, 4 ± 2 °C e 40 ± 2 °C e 75 ± 5% UR e expostas à luz UV, durante 90 dias, sendo analisadas em períodos 0, 7, 15, 30, 60 e 90 dias, em relação à determinação do pH, diâmetro de partícula, índice de polidispersão, potencial zeta, taxa de associação e doseamento do fármaco, atividade antimicrobiana e viscosidade para as amostras de xampu. O tamanho médio das partículas para as nanocápsulas foi inferior a 370 nm, para as micropartículas inferior a 52 μm. Todas as amostras compostas pelos nanocarreadores apresentaram potencial zeta negativo. Os valores para a taxa de associação foram de 92,10 % para as nanocápsulas e 97,69 % para as micropartículas. Em relação ao teor das suspensões submetidas aos testes de estabilidade, as amostras compostas por nanocápsulas foram as que apresentaram uma menor perda de quantidade do ativo (17,9 % e 19,7 %) nas condições de 25 ± 2 °C e 4 ± 2 °C respectivamente. Para as formulações de xampu compostas pelos sistemas de nanocarreadores, o mesmo ocorreu, porém com perdas de (9,3 % e 13,6 %) para as mesmas condições das suspensões. Na análise da atividade antimicrobiana, as suspensões de nanocapsulas apresentaram potência de 98,15 % e as de micropartículas 100,25 %. As amostras de xampu foram analisadas pelo ensaio microbiológico de sensibilidade, o qual analisado de forma qualitativa e demonstrou que as amostras possuem atividade antifúngica. As validações das metodologias analíticas para as suspensões apresentaram resultados satisfatórios para todos os parâmetros analisados. Através dos resultados obtidos, pode-se concluir que as suspensões demonstraram ter boa estabilidade, mesmo quando incorporadas em um veículo farmacêutico de uso tópico, representando assim, uma melhor viabilidade tecnológica para a área farmacêutica.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-06-26T15:20:38Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_ObtencaoCaracterizacaoCarreadores.pdf: 6025793 bytes, checksum: 60fe002a9bf16f503fa1d1022eaf6c14 (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2017-06-27T14:54:26Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_ObtencaoCaracterizacaoCarreadores.pdf: 6025793 bytes, checksum: 60fe002a9bf16f503fa1d1022eaf6c14 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-27T14:54:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_ObtencaoCaracterizacaoCarreadores.pdf: 6025793 bytes, checksum: 60fe002a9bf16f503fa1d1022eaf6c14 (MD5) Previous issue date: 2016-05-16 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Os Carreadores Lipídicos Nanoestruturados (CLN) têm sido propostas como uma categoria de carreadores para ingredientes farmacêuticos e cosméticos e crescente interesse devido a uma série de vantagens quando comparadas a formulações convencionais. As gorduras vegetais amazônicas são consideradas matrizes lipídicas de grande potencial para a produção de CLN de administração tópica, em função da baixa toxicidade e biocompatibilidade, alem de suas propriedades emoliente, protetora e hidratante na pele. O murumuru (Astrocaryum murumuru Mart.) é uma palmeira amazônica e à utilização de sua gordura é promissora pois agrega valor aos produtos, favorece o crescimento da região, alem de utilizar esses recursos de maneira sustentável. O objetivo deste estudo foi obter e caracterizar os CLN a partir da gordura vegetal de Murumuru (Astrocaryum murumuru Mart.) pela técnica de homogeneização sob alta pressão a quente, utilizando o cetoconazol como fármaco modelo. A cromatografia gasosa revelou o ácido láurico (48,1 %), ácido mirístico (26,6 %) e ácido oleico (8,4 %), como os principais constituintes. A caracterização físico-química mostrou valores de acidez, iodo, saponificação, peróxido, refração e densidade dentro dos limites e padrões recomendados. As matérias-primas isoladas e os CLN obtidos foram avaliados por calorimetria diferencial exploratória, sendo que os resultados sobre as materias-primas isoladas utilizadas corroboram com o descrito na literatura e os CLN evidenciaram uma estrutura cristalina menos ordenada. Nas formulações testadas, as nanopartículas apresentaram tamanho médio entre 98,60 e 161,56 nm, índice de polidispersidade entre 0,115 e 0,276, potencial zeta superiores a -30 mV e eficiência de encapsulação próximo a 100 %. A microscopia eletrônica de transmissão indicou aspecto esférico das nanopartículas e o perfil de liberação apresentou um modelo cinético de ordem zero, com liberação de cerca de 70,9 % do fármaco encapsulado em 8 horas. As nanopartículas permaneceram estáveis durante um período de 60 dias. O estudo realizado mostrou que a gordura de murumuru obteve um sistema eficaz, com pequenos tamanhos de partículas e penetrabilidade na pele, tornando possível à veiculação da formulação em usos farmacêuticos e cosmético. / The nanostructured lipid carrier (NLC) have been proposed as a carrier’s category for pharmaceutical and cosmetic ingredients and an increasing of interest due to a series of advantages when compared to conventional formulations. The Amazonian vegetable fats are considered lipids arrays of great potential for the production of NLC from topical administration, according to the low toxicity and biocompatibility, beyond their emollient properties, protector and moisturizer in the skin. The murumuru (Astrocaryum murumuru Mart.) is an amazon palm and the utility of its fat is promising, because it adds value to the products, favour the growth in the region, in addition to using these resources in a sustainable way. The objective of this research was to obtain and characterize the NLC from the vegetable fat of Murumuru (Astrocaryum murumuru Mart.) by the homogenization technique under high pressure to hot, using ketoconazole as a drug modelling. The gas chromatography showed lauric acid (48,1 %), myristic acid (26,6 %) and oleic acid (8,4 %), as main constituents. The physical-chemical characterization showed acid, iodine, saponification, peroxide, refraction and density values within the limits and standards recommended. The isolated raw materials and the NLC obtained were evaluated using differential scanning calorimetry, where the results about the isolated raw materials used support as was described in Literature and the NLC demonstrated a crystalline structure less ordained. In the tested formulations, the nanoparticles showed average size between 98,60 and 161,56 nm, polydispersibility index between 0,115 and 0,276, zeta potential higher than -30mV and encapsulation efficiency near 100 %. The Transmission Electron Microscopy indicated spherical aspect of the nanoparticles and the! clearance profile showed a zero order kinetic model, with the release of 70,9 % of the encapsulated drug in 8 hours. The nanoparticles remained stable during a period of 60 days. This research showed that the murumuru fat obtained an effective system, with small sizes particles and penetrability in the skin, making possible the formulation propagation in pharmaceutical and cosmetic uses.

Cetoconazol é um agente antifúngico que possui ação tópica e sistêmica, podendo ser incorporado em diferentes formas farmacêuticas. Como exemplo, pode-se citar o xampu de cetoconazol, que é efetivo no tratamento da dermatite seborréica e pitiríase versicolor. É reconhecido que o cetoconazol, nas formas farmacêuticas xampu e solução, rapidamente altera a coloração se tornando avermelhado. A exposição de fármacos à radiação pode influenciar a estabilidade da formulação, levando a modificações nas propriedades físico-químicas do produto. O objetivo deste trabalho foi avaliar a fotoestabilidade do cetoconazol em xampu e solução. As formulações foram expostas à radiação UV-A (352 nm), UV-C (254 nm) e luz diurna. Métodos foram desenvolvidos e validados para a determinação quantitativa do cetoconazol: cromatografia líquida de alta eficiência e ensaio microbiológico utilizando o método de cilindros em placa. Estudos comparativos entre xampu de cetoconazol e xampu de cetoconazol contendo produtos de degradação foram feitos para avaliar a atividade antifúngica e a segurança biológica in vivo (teste de Draize) e in vitro (teste de citotoxicidade). Os resultados demonstraram diminuição na atividade antifúngica, mas não demonstraram alteração na segurança biológica. Os métodos utilizados para análise do cetoconazol (ensaio microbiológico e CLAE) demonstraram ser lineares, precisos e exatos, sendo úteis no controle de qualidade do fármaco. Os resultados indicam alteração do cetoconazol em presença da luz. Dois produtos de degradação foram isolados e identificados: 1-acetil-4-{4-[2-(2-clorofenil)-2-(1H-imidazolil-1- metil)-1,3-dioxolanil-4-metoxi]fenil}piperazina e 1-acetil-4-{4-[2-(4-clorofenil)-2- (1H-imidazolil-1-metil)-1,3-dioxolanil-4-metoxi]fenil}piperazina. Conseqüentemente, adequada proteção da luz deve ser adotada durante armazenamento das duas formas farmacêuticas contendo o fármaco. / Ketoconazole is an antifungal agent with topic and systemic action and can be incorporated into several dosage forms. As an example, it could be mentioned ketoconazole shampoo, which is effective against seborrhoeic dermatitis and pityriasis versicolor. It is remarkable that ketoconazole is rapidly altered in shampoo and solution dosage forms, since its colour turns into red. Exposure of a drug to radiation can influence the stability of the formulation, leading to changes in the physicochemical properties of the product. The aim of this work was to assess the photostability of ketoconazole in shampoo and solution. The formulations were exposed to UV-A (352 nm) and UV-C (254 nm) radiations and daylight. Methods were developed and validated for the quantitative determination of ketoconazole: high performance liquid chromatography and microbiological assay using the cylinder-plate method. Comparative studies between ketoconazole shampoo and ketoconazole shampoo containing degradation products were conducted to evaluated the antifungal activity and biological reactivity in vivo (Draize test) and in vitro (cytotoxity test). The results showed a decrease in antifungal activity but not an alteration on the biological reactivity. The methods used for ketoconazole analysis (microbiological assay and HPLC) were linear, precise and accurate, providing valuable methods for the quality control of this drug. The results indicate alteration in ketoconazole in presence of light. Two photodegradation products were isolated and identified: 1-acetyl-4-{4-[2-(2-chlorophenyl)-2-(1H-imidazol- 1-ylmethyl)-1,3-dioxolan-4-ylmethoxy]phenyl}piperazine and 1-acetyl-4-{4-[2- (4-chlorophenyl)-2-(1H-imidazol-1-ylmethyl)-1,3-dioxolan-4-ylmethoxy]phenyl} piperazine. Consequently, adequate light protection should be adopted for storage of these two dosage forms containing the drug.

Cetoconazol é um agente antifúngico que possui ação tópica e sistêmica, podendo ser incorporado em diferentes formas farmacêuticas. Como exemplo, pode-se citar o xampu de cetoconazol, que é efetivo no tratamento da dermatite seborréica e pitiríase versicolor. É reconhecido que o cetoconazol, nas formas farmacêuticas xampu e solução, rapidamente altera a coloração se tornando avermelhado. A exposição de fármacos à radiação pode influenciar a estabilidade da formulação, levando a modificações nas propriedades físico-químicas do produto. O objetivo deste trabalho foi avaliar a fotoestabilidade do cetoconazol em xampu e solução. As formulações foram expostas à radiação UV-A (352 nm), UV-C (254 nm) e luz diurna. Métodos foram desenvolvidos e validados para a determinação quantitativa do cetoconazol: cromatografia líquida de alta eficiência e ensaio microbiológico utilizando o método de cilindros em placa. Estudos comparativos entre xampu de cetoconazol e xampu de cetoconazol contendo produtos de degradação foram feitos para avaliar a atividade antifúngica e a segurança biológica in vivo (teste de Draize) e in vitro (teste de citotoxicidade). Os resultados demonstraram diminuição na atividade antifúngica, mas não demonstraram alteração na segurança biológica. Os métodos utilizados para análise do cetoconazol (ensaio microbiológico e CLAE) demonstraram ser lineares, precisos e exatos, sendo úteis no controle de qualidade do fármaco. Os resultados indicam alteração do cetoconazol em presença da luz. Dois produtos de degradação foram isolados e identificados: 1-acetil-4-{4-[2-(2-clorofenil)-2-(1H-imidazolil-1- metil)-1,3-dioxolanil-4-metoxi]fenil}piperazina e 1-acetil-4-{4-[2-(4-clorofenil)-2- (1H-imidazolil-1-metil)-1,3-dioxolanil-4-metoxi]fenil}piperazina. Conseqüentemente, adequada proteção da luz deve ser adotada durante armazenamento das duas formas farmacêuticas contendo o fármaco. / Ketoconazole is an antifungal agent with topic and systemic action and can be incorporated into several dosage forms. As an example, it could be mentioned ketoconazole shampoo, which is effective against seborrhoeic dermatitis and pityriasis versicolor. It is remarkable that ketoconazole is rapidly altered in shampoo and solution dosage forms, since its colour turns into red. Exposure of a drug to radiation can influence the stability of the formulation, leading to changes in the physicochemical properties of the product. The aim of this work was to assess the photostability of ketoconazole in shampoo and solution. The formulations were exposed to UV-A (352 nm) and UV-C (254 nm) radiations and daylight. Methods were developed and validated for the quantitative determination of ketoconazole: high performance liquid chromatography and microbiological assay using the cylinder-plate method. Comparative studies between ketoconazole shampoo and ketoconazole shampoo containing degradation products were conducted to evaluated the antifungal activity and biological reactivity in vivo (Draize test) and in vitro (cytotoxity test). The results showed a decrease in antifungal activity but not an alteration on the biological reactivity. The methods used for ketoconazole analysis (microbiological assay and HPLC) were linear, precise and accurate, providing valuable methods for the quality control of this drug. The results indicate alteration in ketoconazole in presence of light. Two photodegradation products were isolated and identified: 1-acetyl-4-{4-[2-(2-chlorophenyl)-2-(1H-imidazol- 1-ylmethyl)-1,3-dioxolan-4-ylmethoxy]phenyl}piperazine and 1-acetyl-4-{4-[2- (4-chlorophenyl)-2-(1H-imidazol-1-ylmethyl)-1,3-dioxolan-4-ylmethoxy]phenyl} piperazine. Consequently, adequate light protection should be adopted for storage of these two dosage forms containing the drug.

Cetoconazol é um agente antifúngico que possui ação tópica e sistêmica, podendo ser incorporado em diferentes formas farmacêuticas. Como exemplo, pode-se citar o xampu de cetoconazol, que é efetivo no tratamento da dermatite seborréica e pitiríase versicolor. É reconhecido que o cetoconazol, nas formas farmacêuticas xampu e solução, rapidamente altera a coloração se tornando avermelhado. A exposição de fármacos à radiação pode influenciar a estabilidade da formulação, levando a modificações nas propriedades físico-químicas do produto. O objetivo deste trabalho foi avaliar a fotoestabilidade do cetoconazol em xampu e solução. As formulações foram expostas à radiação UV-A (352 nm), UV-C (254 nm) e luz diurna. Métodos foram desenvolvidos e validados para a determinação quantitativa do cetoconazol: cromatografia líquida de alta eficiência e ensaio microbiológico utilizando o método de cilindros em placa. Estudos comparativos entre xampu de cetoconazol e xampu de cetoconazol contendo produtos de degradação foram feitos para avaliar a atividade antifúngica e a segurança biológica in vivo (teste de Draize) e in vitro (teste de citotoxicidade). Os resultados demonstraram diminuição na atividade antifúngica, mas não demonstraram alteração na segurança biológica. Os métodos utilizados para análise do cetoconazol (ensaio microbiológico e CLAE) demonstraram ser lineares, precisos e exatos, sendo úteis no controle de qualidade do fármaco. Os resultados indicam alteração do cetoconazol em presença da luz. Dois produtos de degradação foram isolados e identificados: 1-acetil-4-{4-[2-(2-clorofenil)-2-(1H-imidazolil-1- metil)-1,3-dioxolanil-4-metoxi]fenil}piperazina e 1-acetil-4-{4-[2-(4-clorofenil)-2- (1H-imidazolil-1-metil)-1,3-dioxolanil-4-metoxi]fenil}piperazina. Conseqüentemente, adequada proteção da luz deve ser adotada durante armazenamento das duas formas farmacêuticas contendo o fármaco. / Ketoconazole is an antifungal agent with topic and systemic action and can be incorporated into several dosage forms. As an example, it could be mentioned ketoconazole shampoo, which is effective against seborrhoeic dermatitis and pityriasis versicolor. It is remarkable that ketoconazole is rapidly altered in shampoo and solution dosage forms, since its colour turns into red. Exposure of a drug to radiation can influence the stability of the formulation, leading to changes in the physicochemical properties of the product. The aim of this work was to assess the photostability of ketoconazole in shampoo and solution. The formulations were exposed to UV-A (352 nm) and UV-C (254 nm) radiations and daylight. Methods were developed and validated for the quantitative determination of ketoconazole: high performance liquid chromatography and microbiological assay using the cylinder-plate method. Comparative studies between ketoconazole shampoo and ketoconazole shampoo containing degradation products were conducted to evaluated the antifungal activity and biological reactivity in vivo (Draize test) and in vitro (cytotoxity test). The results showed a decrease in antifungal activity but not an alteration on the biological reactivity. The methods used for ketoconazole analysis (microbiological assay and HPLC) were linear, precise and accurate, providing valuable methods for the quality control of this drug. The results indicate alteration in ketoconazole in presence of light. Two photodegradation products were isolated and identified: 1-acetyl-4-{4-[2-(2-chlorophenyl)-2-(1H-imidazol- 1-ylmethyl)-1,3-dioxolan-4-ylmethoxy]phenyl}piperazine and 1-acetyl-4-{4-[2- (4-chlorophenyl)-2-(1H-imidazol-1-ylmethyl)-1,3-dioxolan-4-ylmethoxy]phenyl} piperazine. Consequently, adequate light protection should be adopted for storage of these two dosage forms containing the drug.

O cetoconazol é um derivado imidazólico com atividade antifúngica, empregado no tratamento de grande variedade de infecções cutâneas. O objetivo deste trabalho foi a padronização e a validação dos métodos analíticos empregando-se a espectrofotometria no ultravioleta ( UV ) por derivada de primeira ordem e a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) para a determinação do cetoconazol em formulações farmacêuticas sob a forma de creme obtidas no comércio e formuladas em laboratório. O estudo da estabilidade física das formulações obtidas em laboratório foi realizado após o armazenamento sob diferentes condições de tempo, temperatura e umidade. O método espectrofotométrico no UV por derivada de primeira ordem foi padronizado a 257nm , no intervalo de concentração de 5,0 a 30,0 µg/mL em metanol. O coeficiente de correlação linear foi de 0,9997, o percentual de recuperação foi de 100,24%. A média do desvio padrão relativo foi de 0,56% para a amostra simulada e 0,41% para a amostra comercial. A determinação de cetoconazol por CLAE foi realizada empregando-se uma coluna LiChrospher® 100 RP- 18 ( 5µm ) e fase móvel constituída por uma mistura de trietilamina em metanol( 1:500 ) e solução de acetato de amônio em água (1:200 ) na proporção de 75 : 25 v/v, com vazão de 1,0 mL/min e detecção no UV a 225 nm. O terconazol foi utilizado como padrão interno. O coeficiente de correlação linear foi de 0,9981, o percentual de recuperação foi de 100,88%, a média do desvio padrão foi de 2,13% para a amostra simulada e 1,25% para a amostra comercial. A amostra simulada apresentou comportamento pseudoplástico e tixotropia em decorrência das medidas reológicas obtidas experimentalmente. / Ketoconazole is an imidazole antifungal agent used in the treatment of great variety of skin infectious diseases. The aim of this research was the standardization and the validation of two analytical methods, first derivative ultraviolet ( UV ) spectrophotometry and high performance liquid chromatography( HPLC ) to determine ketoconazole in commercial and simulated cream dosage forms preparations. The validated methods were used to study the stability of the simulated cream after storage under high temperatures and high percentage of humidity. First derivative UV spectrophotometry was standardized at 257 nm, in a range of concentration from 5.0 to 30.0 µg/mL in methanol. The coefficient of correlation was 0.9997 and the recovery average was 100.24%. The average relative standard deviation ( RSD ) was 0.56% for simulated preparation and 0.41 % for commercial preparation. The determination of ketoconazole by HPLC was performed using a LiChrospher® 100 RP-18(5µm ) column, a mobile phase consisting of triethylamine in methanol (1:500) and ammonium acetate solution in water(1:200 ) 75:25 ( v/v ), a flow rate of 1.0 mL/min and UV detection at 225nm. Terconazole was used as internal standard. The coefficient of correlation was 0.9981, the recovery average was 100.88%, the average relative standard deviation ( RSD ) was 2.13% for the simulated preparations and 1.25% for the commercial preparations. The rheological measurements showed that the simulated preparation presented pseudoplastic and thixotropic behavior.

O cetoconazol é um derivado imidazólico com atividade antifúngica, empregado no tratamento de grande variedade de infecções cutâneas. O objetivo deste trabalho foi a padronização e a validação dos métodos analíticos empregando-se a espectrofotometria no ultravioleta ( UV ) por derivada de primeira ordem e a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) para a determinação do cetoconazol em formulações farmacêuticas sob a forma de creme obtidas no comércio e formuladas em laboratório. O estudo da estabilidade física das formulações obtidas em laboratório foi realizado após o armazenamento sob diferentes condições de tempo, temperatura e umidade. O método espectrofotométrico no UV por derivada de primeira ordem foi padronizado a 257nm , no intervalo de concentração de 5,0 a 30,0 µg/mL em metanol. O coeficiente de correlação linear foi de 0,9997, o percentual de recuperação foi de 100,24%. A média do desvio padrão relativo foi de 0,56% para a amostra simulada e 0,41% para a amostra comercial. A determinação de cetoconazol por CLAE foi realizada empregando-se uma coluna LiChrospher® 100 RP- 18 ( 5µm ) e fase móvel constituída por uma mistura de trietilamina em metanol( 1:500 ) e solução de acetato de amônio em água (1:200 ) na proporção de 75 : 25 v/v, com vazão de 1,0 mL/min e detecção no UV a 225 nm. O terconazol foi utilizado como padrão interno. O coeficiente de correlação linear foi de 0,9981, o percentual de recuperação foi de 100,88%, a média do desvio padrão foi de 2,13% para a amostra simulada e 1,25% para a amostra comercial. A amostra simulada apresentou comportamento pseudoplástico e tixotropia em decorrência das medidas reológicas obtidas experimentalmente. / Ketoconazole is an imidazole antifungal agent used in the treatment of great variety of skin infectious diseases. The aim of this research was the standardization and the validation of two analytical methods, first derivative ultraviolet ( UV ) spectrophotometry and high performance liquid chromatography( HPLC ) to determine ketoconazole in commercial and simulated cream dosage forms preparations. The validated methods were used to study the stability of the simulated cream after storage under high temperatures and high percentage of humidity. First derivative UV spectrophotometry was standardized at 257 nm, in a range of concentration from 5.0 to 30.0 µg/mL in methanol. The coefficient of correlation was 0.9997 and the recovery average was 100.24%. The average relative standard deviation ( RSD ) was 0.56% for simulated preparation and 0.41 % for commercial preparation. The determination of ketoconazole by HPLC was performed using a LiChrospher® 100 RP-18(5µm ) column, a mobile phase consisting of triethylamine in methanol (1:500) and ammonium acetate solution in water(1:200 ) 75:25 ( v/v ), a flow rate of 1.0 mL/min and UV detection at 225nm. Terconazole was used as internal standard. The coefficient of correlation was 0.9981, the recovery average was 100.88%, the average relative standard deviation ( RSD ) was 2.13% for the simulated preparations and 1.25% for the commercial preparations. The rheological measurements showed that the simulated preparation presented pseudoplastic and thixotropic behavior.

O cetoconazol, inicialmente descrito como um agente antifúngico, revelou-se um potente inibidor da esteroidogênese adrenal, podendo, assim, ser utilizado no manejo da doença de Cushing, como terapia primária ou após insucesso cirúrgico, enquanto aguarda o efeito da radioterapia. Durante o tratamento com cetoconazol, uma redução dos níveis de cortisol é observada, usualmente não acompanhada por uma elevação do ACTH plasmático, como poderia ser esperada. Este fenômeno paradoxal, caracterizado pela redução do cortisol com níveis de ACTH inadequadamente normais ou não elevados, pode estar relacionado a uma ação adicional do cetoconazol nas células hipofisárias produtoras de ACTH. Para se testar essa hipótese, alguns estudos in vitro realizados na década de 80, avaliando a secreção de ACTH na vigência do cetoconazol, sugeriram a sua ação em células adenohipofisárias. Em adição, foi evidenciado que o cetoconazol ativou vias de apoptose em linhagens tumorais não hipofisárias. O presente estudo tem como objetivo avaliar o efeito in vitro do cetoconazol na viabilidade celular e na expressão de genes envolvidos na apoptose e replicação do DNA em linhagens tumorais hipofisárias imortalizadas corticotróficas (AtT-20), gonadotróficas (alfaT3.1), mamossomatotróficas (GH3) e mamotróficas (MMQ), utilizando-se a técnica de RT-qPCR. Os resultados mostraram que, na presença do cetoconazol, ocorreu uma redução da viabilidade celular nas linhagens hipofisárias, de forma concentração-dependente, às custas do estímulo da via extrínseca e intrínseca da apoptose, com aumento da expressão dos receptores de morte celular (ex.: Fas, TNFR) e/ou caspases (ex.: -2, -3, -6 ,-7 ,-9). Estes resultados foram associados a um aumento da expressão gênica dos inibidores do ciclo celular p21 (nas linhagens GH3 e alfaT3.1) e p27 (nas linhagens GH3 e MMQ), com uma redução acentuada da expressão destes genes após retirada do cetoconazol do meio de cultura. Concluímos que o cetoconazol tem o potencial de reduzir a viabilidade celular em linhagens tumorais hipofisárias possivelmente devido a uma ação citotóxica (pelo aumento de genes pró-apoptóticos) e citostática (pelo aumento de genes inibidores do ciclo celular) / Ketoconazole, initially described as an antifungal agent, proved to be a potent inhibitor of steroidogenesis, allowing its use in the management of Cushing\'s disease as primary or after unsuccessfully surgery and waiting the effect of radiotherapy. During treatment with ketoconazole, there a reduction in the cortisol levels is observed, usually not accompanied by an elevation of plasmatic ACTH, as could be expected. This paradoxical phenomenon, characterized by reduced cortisol with ACTH levels inappropriately normal or not elevated, could be related to an additional action of ketoconazole on ACTH-producing pituitary cells. In agreement with this hypothesis, some in vitro studies in the 80\'s, evaluating ACTH secretion in the presence of ketoconazole, suggested its action in pituitary cells. In addition, ketoconazole activated apoptosis pathways in non-pituitary tumor cell lines. Therefore, the present study aims to revisit this topic and evaluate the in vitro effect of ketoconazole on cell viability and expression of genes involved in apoptosis and DNA replication by RT-qPCR in immortalized pituitary tumoral corticotroph (AtT-20), gonadotroph (alphaT3.1), mammosomatotroph (GH3), mammotroph (MMQ) cell line. As a result, there was a reduction in pituitary cell viability with ketoconazole, in a concentration-dependent manner, due to stimulation of the extrinsic and intrinsic pathway of apoptosis, with increased expression of cell death receptors (eg. Fas, TNFR) and/or caspases (eg. -2, -3, -6, -7, -9). These results were associated with an increased gene expression of the cell cycle inhibitors p21 (in GH3 and alphaT3.1 cell line), and also p27 (in GH3 and MMQ cell line), with a significant reduction in the expression of these genes after removal of ketoconazole in the media. In conclusion, the ketoconazole have the potential of reduce cell viability in pituitary tumoral lineages possibly due to a cytotoxic effect (by increasing of pro-apoptotic genes) and cytostatic (by increasing of inhibitors of cell cycle genes)

O cetoconazol, inicialmente descrito como um agente antifúngico, revelou-se um potente inibidor da esteroidogênese adrenal, podendo, assim, ser utilizado no manejo da doença de Cushing, como terapia primária ou após insucesso cirúrgico, enquanto aguarda o efeito da radioterapia. Durante o tratamento com cetoconazol, uma redução dos níveis de cortisol é observada, usualmente não acompanhada por uma elevação do ACTH plasmático, como poderia ser esperada. Este fenômeno paradoxal, caracterizado pela redução do cortisol com níveis de ACTH inadequadamente normais ou não elevados, pode estar relacionado a uma ação adicional do cetoconazol nas células hipofisárias produtoras de ACTH. Para se testar essa hipótese, alguns estudos in vitro realizados na década de 80, avaliando a secreção de ACTH na vigência do cetoconazol, sugeriram a sua ação em células adenohipofisárias. Em adição, foi evidenciado que o cetoconazol ativou vias de apoptose em linhagens tumorais não hipofisárias. O presente estudo tem como objetivo avaliar o efeito in vitro do cetoconazol na viabilidade celular e na expressão de genes envolvidos na apoptose e replicação do DNA em linhagens tumorais hipofisárias imortalizadas corticotróficas (AtT-20), gonadotróficas (alfaT3.1), mamossomatotróficas (GH3) e mamotróficas (MMQ), utilizando-se a técnica de RT-qPCR. Os resultados mostraram que, na presença do cetoconazol, ocorreu uma redução da viabilidade celular nas linhagens hipofisárias, de forma concentração-dependente, às custas do estímulo da via extrínseca e intrínseca da apoptose, com aumento da expressão dos receptores de morte celular (ex.: Fas, TNFR) e/ou caspases (ex.: -2, -3, -6 ,-7 ,-9). Estes resultados foram associados a um aumento da expressão gênica dos inibidores do ciclo celular p21 (nas linhagens GH3 e alfaT3.1) e p27 (nas linhagens GH3 e MMQ), com uma redução acentuada da expressão destes genes após retirada do cetoconazol do meio de cultura. Concluímos que o cetoconazol tem o potencial de reduzir a viabilidade celular em linhagens tumorais hipofisárias possivelmente devido a uma ação citotóxica (pelo aumento de genes pró-apoptóticos) e citostática (pelo aumento de genes inibidores do ciclo celular) / Ketoconazole, initially described as an antifungal agent, proved to be a potent inhibitor of steroidogenesis, allowing its use in the management of Cushing\'s disease as primary or after unsuccessfully surgery and waiting the effect of radiotherapy. During treatment with ketoconazole, there a reduction in the cortisol levels is observed, usually not accompanied by an elevation of plasmatic ACTH, as could be expected. This paradoxical phenomenon, characterized by reduced cortisol with ACTH levels inappropriately normal or not elevated, could be related to an additional action of ketoconazole on ACTH-producing pituitary cells. In agreement with this hypothesis, some in vitro studies in the 80\'s, evaluating ACTH secretion in the presence of ketoconazole, suggested its action in pituitary cells. In addition, ketoconazole activated apoptosis pathways in non-pituitary tumor cell lines. Therefore, the present study aims to revisit this topic and evaluate the in vitro effect of ketoconazole on cell viability and expression of genes involved in apoptosis and DNA replication by RT-qPCR in immortalized pituitary tumoral corticotroph (AtT-20), gonadotroph (alphaT3.1), mammosomatotroph (GH3), mammotroph (MMQ) cell line. As a result, there was a reduction in pituitary cell viability with ketoconazole, in a concentration-dependent manner, due to stimulation of the extrinsic and intrinsic pathway of apoptosis, with increased expression of cell death receptors (eg. Fas, TNFR) and/or caspases (eg. -2, -3, -6, -7, -9). These results were associated with an increased gene expression of the cell cycle inhibitors p21 (in GH3 and alphaT3.1 cell line), and also p27 (in GH3 and MMQ cell line), with a significant reduction in the expression of these genes after removal of ketoconazole in the media. In conclusion, the ketoconazole have the potential of reduce cell viability in pituitary tumoral lineages possibly due to a cytotoxic effect (by increasing of pro-apoptotic genes) and cytostatic (by increasing of inhibitors of cell cycle genes)

Cetoconazol é um fármaco antimicótico largamente utilizado e veiculado por diversas formas farmacêuticas. Apesar de ser comprovadamente eficaz, é uma substância muito hepatotóxica quando administrado por via oral. Por esse motivo justifica-se o seu emprego em preparações tópicas e sistemas transdérmicos. Essa substância apresenta razoáveis níveis de penetração elou permeação cutânea, mas esses níveis podem ser melhorados através da incorporação, às formulações, de substâncias denominadas promotores de permeação/penetração (enhancers). Essas substâncias têm a função de modificar a difusão dos fármacos através da pele. Neste trabalho, foi estudada a liberação/permeação do cetoconazol de cremes O/A contendo os promotores de permeação/penetração, propilenoglicol e uma solução alcóolica de mentol, empregados em associação e isoladamente na concentração de 0 a 5% p/p. O estudo foi conduzido in vitro, utilizando célula de Franz modificada com o emprego de membrana sintética de acetato de celulose. Foram preparadas e testadas dez formulações, a partir de uma fórmula de creme O/A não-iônico. Dentre as dez formulações estudadas aquela que apresentou melhores resultados quanto aos parâmetros de fluxo e coeficiente de permeabilidade, após uma hora do início do experimento, foi uma formulação que apresenta 1% p/p de propilenoglicol e 1% p/p de solução alcoólica de mentol. / Ketoconazole is an antifungal drug and is largely employed in many delivery systems and dosage forms. Oral administration is not recommended because of its hepatotoxic effects, so topical preparations are employed. This drug shows skin penetration and/or permeation levels, but these levels may be enhanced by the addition of enhancers. These substances modify the diffusion of drugs through skin. In this work, the liberation/permeation of ketoconazole from, O/W creams was studied. These creams have propylene glycol and na alcoholic menthol solution as enhancers, in a range from 0 to 5%w/w. It was an in-vitro experiment, employing Franz modified cells and synthetic cellulose membrane Ten nonionic O/W creams were made and tested. Among the ten tested formulations the one which showed best results in flux and permeability coefficient, after 1 hour, was a formulation which has 1 % w/w of menthol alcoholic solution concentrations.