O objetivo do estudo foi avaliar, o efeito do laser de Diodo 808nm como coadjuvante ao tratamento periodontal na redução de periodontopatógenos Porphyromonas gingivalis, Treponema denticola e Tannerella forsythia pela técnica da Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real. Foram selecionados vinte e quatro pacientes portadores de periodontite crônica neste estudo de boca dividida, duplo cego e randomizado. Dois sítios uniradiculares de cada paciente foram utilizados e divididos em dois grupos experimentais: TESTE - raspagem alisamento polimento corono radicular (RAPCR) associado à duas aplicações de laser de Diodo de alta potência (comprimento de onda de 808nm, 1,5 Watts, 597,1 W/cm2, durante 20 segundos no modo contínuo). A primeira aplicação foi realizada 24 horas após RAPCR e a segunda após sete dias; CONTROLE foi realizado o mesmo procedimento porém sem a aplicação do laser. O biofilme subgengival foi coletado antes do tratamento e seis semanas após a segunda aplicação do laser. A avaliação microbiológica foi feita através da Reação em Cadeia da Polimerase em tempo real para a quantificação de Porphyromonas gingivalis, Treponema denticola e Tannerella forsythia. A comparação entre os grupos não demonstram diferenças estatisticamente significantes (p<0,05). Concluiu-se que, dentro dos limites deste estudo, a aplicação do laser de Diodo de 808nm como coadjuvante ao tratamento periodontal não reduziu de forma significativa os periodontopatógenos: Porphyromonas gingivalis, Treponema denticola e Tannerella forsythia quando comparado à RAPCR. / The aim of this study was to evaluate, by real-time polymerase chain reaction, the effect of Diode laser 808nm as an adjuvant in the reduction of Porphyromonas gingivalis, Treponema denticola and Tannerella forsythia in to periodontal treatment. Twenty-four patients with chronic periodontitis the study designs was split-mouth, double blind and ramdomized controlled trial. Two sites from uniradicular teeth of each patient were used and divided in two experimental groups: TEST scalling and root planing (SRP) associated with two high power Diode laser application (wavelength of 808nm, 1,5W at the display (597,1 W/cm2) for 20 seconds in the continuous-wave mode) the first laser application was 24 hours after SRP and the second seven days later; CONTROL a similar procedure without laser application. The subgingival biofilm was colleted before treatment and six weeks after the second laser application. The microbiologic evaluation was done by real-time polymerase chain reaction for the quantification of Porphyromonas gingivalis, Treponema denticola and Tannerella forsythia. The comparison between the groups did not show significant differences (p<0,05). Within the limits of this study, it can be concluded that Diode laser 808nm application as an adjuvant in the periodontal treatment did not reduce the periodontal pathogens Porphyromonas gingivalis, Treponema denticola e Tannerella forsythia when compared by scaling root planning.

O objetivo do presente trabalho foi comparar fumantes e não fumantes com periodontite crônica com relação a presença e quantidade de patógenos periodontais, através da reação em cadeia da polimerase em tempo real. Quarenta fumantes e quarenta não fumantes, pareados por idade, sexo e profundidade clínica de sondagem dos sítios de coleta microbiológica, foram incluídos no estudo. Foi realizado exame periodontal completo, e coletado um pool de biofilme subgengival dos sítios mais profundos de cada quadrante, em cada sujeito de pesquisa. Para confirmar os dados sobre tabagismo, os sujeitos foram submetidos à avaliação das concentrações de monóxido de carbono expirado, através de um monoxímetro. A presença e quantificação de Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia e Treponema denticola foi determinada pela reação em cadeia da polimerase em tempo real. Fumantes apresentaram maior média de profundidade clínica de sondagem (p = 0,001) e nível clinico de inserção (p = 0,006), e menos sítios com sangramento à sondagem (p = 0,001) do que os não fumantes. Foi observada associação entre fumo e presença de A. actinomycetemcomitans (p < 0,001). Contagens médias de A. actinomycetemcomitans (p < 0,001), P. gingivalis (p = 0,042) e T. forsythia (p < 0,001) foram significantemente maiores nos fumantes. Os resultados permitiram concluir que o fumo altera a composição da microbiota subgengival em indivíduos com periodontite crônica, com diferenças na presença e quantidade dos patógenos periodontais investigados. / The aim of the present investigation is to compare smokers and nonsmokers with chronic periodontitis, regarding the presence and quantity of periodontal pathogens, using real-time polymerase chain reaction. Forty current smokers and forty never-smokers, matched for age, sex and sampling sites mean probing depth, were included in this investigation. A full-mouth periodontal examination was performed, and a pooled subgingival plaque sample was collected from the deepest site, in each quadrant, of each subject. To confirm smoking status, subjects had their expired air carbon monoxide concentrations measured with the help of a carbon monoxide monitor. The presence and quantification of Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia and Treponema denticola were determined by real-time polymerase chain reaction. Smokers presented greater overall mean probing depth (p = 0,001) and mean clinical attachment level (p = 0,006), and fewer bleeding on probing sites (p = 0,001). An association was observed between smoking status and presence of A. actinomycetemcomitans (p < 0.001). Counts of A. actinomycetemcomitans (p < 0,001), P. gingivalis (p = 0,042) and T. forsythia (p< 0,001) were significantly higher in smokers. We concluded that smoking changes the composition of the subgingival microbiota in chronic periodontitis patients, with differences in the presence and quantification of investigated periodontopathogens.

A ativação do receptor ativado por protease do tipo 1 (PAR-1) pela trombina desempenha um papel fundamental na deposição de matriz vascular após injúria tecidual, reparação óssea e na homeostase dos tecidos periodontais, assim como na proliferação de fibroblastos gengivais. O principal objetivo deste estudo foi investigar a expressão de PAR-1 em pacientes com periodontite crônica, antes e 45 dias após tratamento periodontal não-cirúrgico. Amostras de fluido gengival (FG), de saliva e parâmetros clínicos, como profundidade de sondagem (PS), perda do nível clínico de inserção (NCI), sangramento à sondagem (SS), índice gengival (IG) e índice de placa (IP) foram coletados de pacientes com saúde periodontal (Controle) e pacientes com periodontite crônica moderada antes (PC) e 45 dias após o tratamento não-cirúrgico periodontal (PCT). A expressão gênica de PAR-1 (mRNA) em FG foram avaliadas por qPCR (Reação de Polimerase em Cadeia em Tempo Real). A análise por citometria de fluxo foi realizada para identificar quais células expressam PAR-1 em FG. Biomarcadores inflamatórios salivares também foram determinados. Os parâmetros clínicos foram significativamente melhorados após terapia periodontal não-cirúrgica (p<0,01). A análise por qPCR mostrou que antes da terapia, níveis de PAR-1 (mRNA) em periodontite crônica foram menores aos controles. O tratamento periodontal levou ao aumento da expressão de PAR-1 em periodontite crônica (p<0,05). A expressão de PAR-1 foi inversamente correlacionada com a expressão dos níveis salivares de IL-6, IL-8, TNF-, IFN-, e MMP-2. Em conclusão, o presente trabalho demonstrou que a expressão de PAR-1 aumentou após o tratamento periodontal em células do FG, e que a expressão de PAR-1 está associada com a diminuição da expressão dos níveis salivares de biomarcadores inflamatórios. Portanto, dentro dos limites do presente estudo, nossos dados sugerem a importância do papel mediador de PAR-1 na reparação do tecido periodontal. / Activation of protease-activated receptor type 1 (PAR-1) thrombin plays a key role in matrix deposition after vascular tissue injury, bone repair and homeostasis of periodontal tissues, as well as the proliferation of gingival fibroblasts. The main objective of this study was to investigate the expression of PAR-1 in patients with chronic periodontitis before and 45 days after non-surgical periodontal treatment. Samples of gingival fluid (GF), saliva and clinical parameters such as probing depth (PD), loss of clinical attachment level (CAL), bleeding on probing (BOP), gingival index (GI) and plaque index (PI) were collected from patients with periodontal health (Control) and patients with moderate chronic periodontitis before (PC) and 45 days after non-surgical periodontal treatment (PCT). The gene expression of PAR-1 (mRNA) in GF were assessed by qPCR (Polymerase Chain Reaction in Real Time). The flow cytometry analysis was performed to identify cells which express PAR-1 in GF. Salivary inflammatory biomarkers were also determined. Clinical parameters were significantly improved after therapy (p<0,01). The qPCR analysis showed that before therapy, PAR-1 (mRNA) levels in chronic periodontitis were smallest to controls. Periodontal treatment led to increased PAR-1 expression in chronic periodontitis (p<0,05). PAR-1 expression was inversely correlated to IL-6, IL-8, TNF-, IFN-, and MMP-2 salivary levels. In conclusion, the present study showed that the expression of PAR-1 increased after periodontal treatment in FG cells, and that expression of PAR-1 is associated with decreased expression of salivary levels of inflammatory biomarkers. Therefore, within the limits of this study, our data suggest the importance of the mediating role of PAR-1 in the repair of periodontal tissue.

Objetivos: Avaliar o impacto da terapia periodontal supragengival nos parâmetros clínicos e microbiológicos de pacientes portadores de Diabetes Mellitus tipo 2 (DMT2) em um período de 6 meses, através da utilização do PCR (reação em cadeia da polimerase) em tempo real. Material e Métodos: A amostra foi composta por 20 pacientes portadores de DMT2. Os indivíduos foram randomizados em dois grupos diferentes e receberam duas formas de tratamento periodontal. O grupo teste, composto por 10 indivíduos, recebeu terapia periodontal supragengival (TPS) e o grupo controle, também com 10 indivíduos, recebeu terapia periodontal intensiva (TPI), considerada como o padrão ouro. Ambos os grupos receberam orientação de higiene (OHB), durante os 6 meses da realização do estudo. Foram coletadas amostras de biofilme subgengival em um sítio raso e outro profundo, antes do tratamento periodontal e após seis meses do seu término, perfazendo um total de 4 amostras por paciente. Foram avaliadas quatro bactérias periodontais (Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia e Treponema denticola) e também foi feita a contagem Universal das bactérias presentes. O estudo avaliou um total de 80 amostras. Foram também coletados os dados clínicos periodontais. A quantidade de bactérias pré e pós tratamento foi determinada pela técnica de PCR em tempo real. Os dados clínicos e microbiológicos foram analisados por métodos estatísticos não-paramétricos. Resultados: A análise dos dados demográficos e clínicos no baseline, mostrou não haver diferenças entre os grupos TPS e TPI. Existem diferenças significativas entre os tratamentos com relação à melhora do sangramento (p<0,001) e profundidade clínica de sondagem (PCS) (p=0,011), em ambos à melhora pelo tratamento TPI é maior. Quanto a melhora dos parâmetros clínicos periodontais em cada um dos grupos após 6 meses, apenas a supuração não melhorou para o grupo TPS. Os demais parâmetros clínicos melhoram significativamente em ambos os tratamentos. Com relação aos dados microbiológicos, nas bolsas rasas os grupos são diferentes para a medida de A. actinomycetemcomitans e P. gingivalis na avaliação de 6 meses. No entanto, quando comparamos as diferenças (log final- log inicial), não houve diminuição significativa entre os grupos para nenhuma das bactérias. Com relação à diminuição do número de bactérias em cada um dos tratamentos, houve uma diminuição significativa para T. forsythia no grupo TPI. Nas bolsas profundas, quando comparamos as diferenças (log final- log inicial), não houve diminuição significativa entre os grupos para nenhuma das bactérias avaliadas, bem como após 6 meses em cada um dos tratamentos. Quando fazemos a razão do número de cópias de cada bactéria com relação ao número de cópias total (Universal) nas bolsas rasas, existe diferença significativa entre os grupos para P. gingivalis (p= 0,043) e A. actinomycetemcomitans (p= 0,019) na avaliação de 6 meses. Com relação à diminuição das proporções para cada um dos tratamentos após 6 meses, TPI foi capaz de reduzir significativamente o número de T. forsythia nas bolsas rasas (p=0,004) e o número de P. gingivalis nas bolsas profundas (p=0,037). / Objectives: To evaluate the supragingival periodontal therapy in clinical and microbiological parameters in subjects with type 2 diabetes mellitus (T2DM) in a 6 month period by using real-time PCR. Material and Methods: The study included 20 individuals with T2DM. The subjects were divided into two groups and received two different forms of periodontal treatment. A group of 10 individuals received supragingival periodontal treatment (SPT) and another, also with 10 patients received intensive periodontal treatment (IPT), the gold standard. Samples were collected from subgingival biofilm in shallow sites and deep sites before and after six months of the periodontal treatment, a total of four samples per patient. We evaluated four periodontal pathogens (Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, and Treponema denticola) and was also made Universal count of bacteria present. The study evaluated a total of 80 samples. Clinical parameters were also acessed. The amount of bacteria before and after treatment was determined by real time PCR. Clinical and microbiological data were analyzed by non-parametric statistical methods. Results: The analysis of demographic and clinical data at baseline, showed no differences between groups SPT and IPT. There are significant differences between the treatments with regard to improvement of bleeding (p<0.001) and probing depth (PD) (p=0.011) in both the IPT improvement is greater. Regarding the improvement of clinical periodontal parameters after 6 months for each group, only the suppuration has not improved for the SPT group. The other clinical parameters improved significantly in both treatments. Regarding the microbiological data in the shallow sites, the groups are different for the measurement of A. actinomycetemcomitans and P. gingivalis in the evaluation of 6 months. However, when comparing the differences (end log inicial log), there was no significant decrease between groups for any of the bacteria. With respect to reducing the number of bacteria in each of the treatments, there was a significant decrease in T. forsythia for IPT. In the deep sites, the groups are different for the measurement of A. actinomycetemcomitans at baseline. However, when comparing the differences (end log inicial log), there was no significant decrease between groups for any of the bacteria evaluated. There was also no significant decrease in the number of bacteria after 6 months in each treatment. When we make the ratio of the number of copies of each bacteria with respect to the number of complete copies (Universal) in shallow sites, there is a significant difference between groups for P. gingivalis (p=0.043) and A. actinomycetemcomitans (p = 0.019) in the evaluation of 6 months. With regard to reduction for each treatment after 6 months, IPT was able to significantly reduce the number of T. forsythia in shallow sites (p = 0.004) and the number of P. gingivalis in deep sites (p= 0.037).

O objetivo deste ensaio-clínico, aleatório, duplo-cego foi avaliar as alterações clínicas e no número de bactérias obtidas com o uso do laser de Nd:YAG associado à raspagem em furcas grau II de pacientes com periodontite crônica. Num modelo de boca dividida, sessenta e duas furcas (62) grau II foram selecionadas de trinta e um (31) pacientes que receberam tratamento periodontal prévio da boca toda com exceção dos sítios experimentais. As trinta e uma (31) furcas do grupo Controle receberam duas sessões, com intervalo semanal, de raspagem, alisamento e polimento corono-radicular manual associado ao ultrassom. O grupo Teste recebeu o mesmo tratamento que o Controle, seguido da aplicação do laser de Nd:YAG (100mJ/pulso; 15Hz; 1,5W; 60seg, 141,50J/cm2). Os parâmetros clínicos avaliados antes, um, três, e seis meses depois do tratamento foram: Índice Gengival (IG), Índice de Placa (IP), Distância Junção Esmalte Cemento - Margem Gengival (JEC-MG), Profundidade Clínica de Sondagem do Componente Horizontal (FH) e Vertical (FV) da Furca e Nível Clínico de Inserção (NCI). Os parâmetros microbiológicos coletados antes, imediatamente após, um, três, e seis meses depois do tratamento foram: número de Unidades Formadoras de Colônias (UFCs) de bactérias totais; número total de UFCs de bactérias pigmentadas de preto; porcentagem de pacientes com Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis e Prevotella intermedia Os resultados demonstraram uma redução significativa das UFCs de bactérias totais em ambos os grupos, sendo esta maior no grupo Teste imediatamente após o tratamento. Após um e três meses, houve um aumento desse número, porém não alcançando os níveis iniciais para ambos os grupos. Já aos seis meses houve um novo aumento do número de UFCs de bactérias totais alcançando níveis próximos dos inicias no grupo Teste, enquanto o grupo Controle manteve-se semelhante aos três meses. As UFCs de bactérias pigmentadas de preto e a porcentagem de pacientes com as bactérias estudadas, se comportaram da mesma forma para ambos os grupos, tendo uma redução imediatamente após o tratamento, e um retorno à níveis próximos dos iniciais após seis meses. Para os valores de, IP, IG, FV, FH e NCI foi observado uma redução ao longo do experimento, porém sem diferença entre os grupos, e para distância JEC-MG houve um aumento ao longo do estudo também sem diferença entre os grupos. Conclui-se que o laser de Nd:YAG associado à raspagem promoveu redução bacteriana nas furcas grau II imediatamente após o tratamento, porém essa redução adicional não foi observada durante os demais tempos experimentais e que ambos os tratamento promoveram melhoras na maioria dos parâmetros clínicos avaliados ao longo do estudo. / The purpose of this clinical trial, randomized, double-blinded was to evaluated the bacterial reduction and the clinical improvement achieved with the Nd:YAG associated to conventional treatment on furcation sites of patients with chronic periodontitis. In a split mouth design study, sixty two (62) class II furcations were selected from thirty one (31) patients that received previous full mouth periodontal treatment, except for the experimental sites. The thirty one (31) furcations of the Control group underwent twice manual and ultrasonic root debridment in weekly intervals. The Test group received the same treatment as the Control group followed by the Nd:YAG laser irradiation (100mJ/pulse; 1.5W; 15Hz; 60sec, 141.50J/cm2). The clinical parameters evaluated before, one, three, and six months after the treatment were: Gingival Index (GI), Plaque Index (PI), Clinical Pocket Depth of Furcation Horizontal (HF) and Vertical (VF) Components, Cement Enamel Junction Gingival Margin distance (CEJ-GM) and Clinical Attachment Level (CAL). The microbiological parameters evaluated before, immediately, one, three and six months after the treatment were: Colony Forming Units (CFU) of total bacteria number; CFU of dark pigmented bacteria and the percentage values of patients with Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis and Prevotella intermedia. The results showed a CFU total bacteria number significant reduction for both groups immediately after the treatment, but it was significant higher for the Test group. After one and three months, an increase of this number was observed, however not reaching the initial levels for both groups. At the six months an increase almost equal to baseline levels in Test group was showed, while the Control group still similar to the three months results. The CFU of dark pigmented bacteria and the percentage values of patients with the studied bacteria, reduced after the treatment and returned to values close to the initial ones six months after the baseline for both groups. The VF, HF, CAL, PI and GI values reduced throughout the study, however with no difference between then, and for CEJGM distance an increase was noted throughout the study without significant difference between the groups. It was concluded that the Nd: YAG laser associated with scaling and root planning promoted bacterial reduction on class II furcation immediately after its application, although this reduction was not observed six months after and that both treatments promoted improvements of most clinical parameters throughout the study.

Aggregatibacter actinomycetemcomitans e Fusobacterium nucleatum são microrganismos gram-negativos presentes nos processos inflamatórios e nas diferentes formas da doença periodontal. Ambos formam parte da microbiota residente da cavidade bucal humana podendo levar ao desenvolvimento de infecções endógenas ou exógenas. Neste estudo, as avaliações qualitativa, quantitativa e genotípica de A. actinomycetemcomitans e F. nucleatum isolados de pacientes com gengivite, periodontite crônica e indivíduos sadios foram realizadas. Biofilmes subgengivais de 70 pacientes com gengivite, 75 com periodontite crônica e 95 indivíduos saudáveis foram avaliados. A. actinomycetemcomitans foi isolado em 2 (2,8%) pacientes com gengivite, 4 (5,3%) com periodontite e 5 (5,3%) sadios; e F. nucleatum em 13 (18,6%) pacientes com gengivite, 20 (26,6%) com periodontite crônica e 19 (20%) sadios. Ambos os microrganismos foram isolados em 5 (7,1%) pacientes com gengivite, 9 (12%) com periodontite crônica e 3 (3,15%) sadios. Por PCR, os DNA de A. actinomycetemcomitans foram detectados em 23 (32,8%) pacientes com gengivite, 20 (26,6%) com periodontite crônica e 38 (40%) indivíduos saudáveis; e de F. nucleatum em 17 (24,3%) pacientes com gengivite, 11 (14,6%) com periodontite e 19 (20%) sadios. Em associação esses microrganismos foram detectados em 23 (32,8%) pacientes com gengivite, 40 (53,3%) com periodontite crônica e 17 (17,8%) sadios. A. actinomycetemcomitans isolados de pacientes com gengivite pertenceram aos biotipos I, II, IV, V e X, e aos sorotipos a, c, e e. Em pacientes com periodontite foram encontrados os biotipos II, VI e X, e os sorotipos a, b, e c, sendo o sorotipo c o mais predominante (80%); e em indivíduos sadios os biotipos II e X, e os sorotipos b e c. Os valores quantitativos de A. actinomycetemcomitans para os três grupos analisados variaram em número de cópias de 0 a 1,14 x 108, e de F. nucleatum de 0 a 3,98 x 106. Os resultados obtidos por AP-PCR mostram a heterogeneidade dos isolados de A. actinomycetemcomitans e de F. nucleatum nos diferentes grupos clínicos de pacientes avaliados. Esses resultados comparativos poderão ser levados em consideração pelos clínicos para melhor direcionar o tratamento da doença periodontal, colaborando de forma efetiva para o seu monitoramento. / Aggregatibacter actinomycetemcomitans and Fusobacterium nucleatum are gram-negative microorganisms observed in inflammatory processes and different forms of periodontal disease. Both are part of the human oral resident microbiota which may cause endogenous or exogenous infections. In this study, a qualitative, quantitative and genotypic analysis of A. actinomycetemcomitans and F. nucleatum isolated from patients with gingivitis, chronic periodontitis and healthy subjects were determined. Subgingival biofilms of 70 patients with gingivitis, 75 with chronic periodontitis and 95 healthy subjects were evaluated. A. actinomycetemcomitans was isolated in 2 (2,8%) patients with gingivitis, 4 (5,3%) with periodontitis and 5 (5,3%) healthy individuals; and F. nucleatum in 13 (18,6%) patients with gingivitis, 20 (26,6%) with chronic periodontitis and 19 (20%) healthy. Both microorganisms were identified in 5 (7,1%) patients with gingivitis, 9 (12%) with chronic periodontitis and 3 (3,15%) healthy. By PCR, DNA of A. actinomycetemcomitans were detected in 23 (32,8%) patients with gingivitis, 20 (26,6%) with chronic periodontitis and 38 (40%) healthy individuals; and F. nucleatum 17 (24,3%) patients with gingivitis, 11 (14,6%) with periodontitis and 19 (20%) healthy. In association, microorganisms were detected in 23 (32,8%) patients with gingivitis, 40 (53,3%) with chronic periodontitis and 17 (17,8%) healthy. A. actinomycetemcomitans isolated from patients with gingivitis belonged to biotype I, II, IV, V, X, and serotypes a, c and e. In patients with periodontitis biotypes II, VI and X and serotypes a, b, and c were found and serotype c was the most predominant (80%); and healthy individuals biotypes II and X, and serotypes b and c. Quantitative values for A. actinomycetemcomitans in the three patients groups were ranged from 0 to 1.14 x 108 and F. nucleatum 0 to 3.98 x 106. The results of this study by AP-PCR showed the heterogeneity of A. actinomycetemcomitans and F. nucleatum in the different clinical status. These comparative results can be considered by dentists for the treatment of periodontal disease and its effective monitoring.

O objetivo do presente trabalho foi investigar o efeito da hiperglicemia na alteração da homeostase imunológica mediada pelas células dendríticas (DCs) em resposta a uma bacteremia induzida por raspagem e alisamento radicular (RAR) em indivíduos com periodontite crônica generalizada (GCP). Foram selecionados 60 indivíduos igualmente divididos em quatro grupos: controles normoglicêmicos saudáveis, normoglicêmicos com GCP (NG+GCP), pré-diabéticos com GCP (PD+GCP) e diabéticos tipo 2 com GCP (T2DM+GCP). Os indivíduos com GCP receberam RAR, o que induziu uma bacteremia aguda e os controles saudáveis receberam apenas raspagem supragengival. Todos os participantes foram avaliados no início do estudo, 24hs, 1 mês e 3 meses após a raspagem. A frequência de células dendríticas mielóides (mDCs) CD1c+, mDCs CD141+, células dendríticas plasmocitoides (pDCs) CD303+ e a expressão dos receptores CCR6 (presente em altos níveis em células dendríticas imaturas) e CCR7 (presente em altos níveis em células dendríticas maduras) foram avaliados por citometria de fluxo. Foi utilizada técnica de PCR em tempo real para investigar a presença de Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) no biofilme e abrigada pelas DCs. No início do estudo, os indivíduos hiperglicêmicos com GCP tinham níveis de DCs significativamente mais baixos do que os indivíduos normoglicêmicos com ou sem GCP. Após a bacteremia induzida por RAR, observou-se um aumento significativo nos níveis de CD1c+ e CD1c+CCR6+ em todos os grupos com GCP, independentemente do status de glicemia, e esses níveis voltaram aos níveis basais após 1 mês. Em comparação com o grupo NG+GCP, o grupo T2DM+GCP apresentou níveis significativamente mais baixos de DCs ao longo de todos os períodos experimentais. Não foram observadas alterações significativas para CD303+, CD1c+ CCR7+ e CD141+ em resposta à bacteremia; CD303+ e CD141+ foram significativamente mais baixos para T2DM+GCP comparado ao grupo NG+GCP ao longo do estudo. A quantidade de P. gingivalis nas DCs estava aumentada no grupo NG+GCP no início do estudo e após 24h da RAR comparado ao controle, mas não nos grupos hiperglicêmicos. Os resultados premitiram concluir que a hiperglicemia parece afetar negativamente a presença de mDCs e pDCs no sangue periférico e a abilidade dessas células em capturar P. gingivalis. Considerando que a magnitude da expansão de mDCs em resposta a um desafio bacteriano foi semelhante, os indivíduos hiperglicêmicos permaneceram imunocomprometidos em comparação com indivíduos normoglicêmicos. / The objective of this study was to investigate the effect of hyperglycemia in the disruption of dendritic cells (DCs) mediated immune homeostasis in response to an acute short-term bacteremia in subjects with generalized chronic periodontitis (GCP). Sixty subjects equally divided into four groups were selected: normoglycemic healthy controls, normoglycemics with GCP (NG+GCP), pre-diabetics with GCP (PD+GCP), and type-2 diabetes mellitus with GCP (T2DM+GCP). Subjects with GCP received full-mouth scaling and root planning (SRP), which induced an acute bacteremia, while healthy controls received only a prophylaxis. All participants were examined at baseline, 24hs after SRP, 1 month, and 3 months. The frequency of CD1c+ myeloid DCs (mDCs), CD141+ mDCs, CD303+ plasmacytoid DCs (pDCs) and their expression of immature DC tissue homing receptor CCR6+ and secondary lymphoid organ (SLO)-homing receptor CCR7+ were analyzed by flow cytometry. The presence of Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) mRNA within blood DCs was analyzed by real time PCR. At baseline, hyperglycemic subjects with GCP showed lower DC levels than normoglycemic subjects with or without GCP. After SRP induced bacteremia, a significant increase in CD1c+ and CD1c+CCR6+ levels was observed in all GCP groups, which returned to baseline levels after 1 month. Compared to NG+GCP, T2DM+GCP had significantly lower levels of DCs throughout the experimental periods. No significant changes were observed for CD303+, CD1c+CCR7+ and CD141+ in response to the bacteremia; CD303+ and CD141+ were significantly lower for T2DM+GCP than NG+GCP throughout the study. P. gingivalis carriage state of DCs was increased in the NG+GCP group, but not in the hyperglycemic groups. Hyperglycemia appears to negatively affect the pool of mDCs and pDCs and the ability of blood DCs to captures bacteremic P. gingivalis. Whereas the magnitude of mDCs expansion in response to a bacterial challenge was similar, hyperglycemic subjects remained immunocompromised in comparison to normoglycemic subjects.

Estudos atuais revelam que, mesmo na era da terapia antirretroviral (TARV), a infecção pelo HIV-1 é associada com quadros graves e frequentemente refratários de periodontite crônica (PC), despertando para a possibilidade da existência de outros fatores associados ao desenvolvimento da PC nesses pacientes. Acredita-se que fatores relacionados à população microbiana, incluindo as infecções por Candida spp, e a expressão de peptídeos microbianos possam estar envolvidos na patogênese da PC em pacientes infectados pelo HIV-1. O objetivo desse estudo foi determinar a influência do tratamento periodontal não-cirúrgico, na contagem oral de Candida spp, e nos níveis salivares de lactoferrina (Lf) e histatina, por meio de um estudo quase-experimental. Pacientes infectados (Grupo 1) e não infectados pelo HIV-1 (Grupo 2 - controle), todos com PC, foram submetidos à terapia periodontal não cirúrgica. Os pacientes do grupo 1 apresentaram contagem de linfócitos T CD4+ < 200cel/mm3, e estavam em TARV regular. Foi avaliada a contagem de unidades formadoras de colônias (UFC) de Candida spp por meio de enxaguado bucal e níveis salivares de Lf e histatina antes (Tempo 0-1) e após a terapia periodontal (Tempo 2 e 3; 30 e 90 dias após o tratamento, respectivamente). Pacientes do grupo 1 apresentaram contagem de UFC superiores à verificada nos pacientes do grupo 2 (p=0, 268; ANOVAF). Houve tendência a redução de UFC após o tratamento periodontal em ambos os grupos, mas sem diferenças estatisticamente significantes. Os níveis de Lf foram semelhantes entre os grupos, e reduziram 30 dias após o tratamento periodontal (p=0,0111; Mann Whitney). Os níveis salivares de histatina ao tempo 0 foram mais elevados no grupo 1 quando comparado ao grupo 2 (p= 0,6481; Tukey-kramer), mas tiveram comportamento distinto após o tratamento periodontal: foram mais elevados no grupo 1 e reduziram no grupo 2. Estes resultados sugerem a associação entre a presença de Candida spp e a PC, e também a importância da manutenção da higiene oral na prevenção da candidíase. Além disso, Lf salivar pode ser um marcador da PC, tanto em pacientes não-infectados, quanto infectados pelo HIV. / Current studies reveal that, even in the era of antiretroviral therapy (ART), HIV-1 infection is associated with severe and frequently refractory chronic periodontitis (CP), which leads to the possibility of other factors associated with the development of CP in these patients. It is believed that factors related to the microbial population, including Candida spp infections, and the expression of microbial peptides may be involved in the pathogenesis of CP in patients infected with HIV-1. The aim of this study was to determine the influence of non-surgical periodontal treatment on the oral count of Candida spp and on the salivary levels of lactoferrin (Lf) and histatin, by means of a quasi-experimental study. Patients infected (Group 1) and non-HIV-1 infected (Group 2 - control), all with CP, underwent non-surgical periodontal therapy. Patients in group 1 had a CD4 + T-cell count <200cel / mm³, and were on regular ART. The counts of colony forming units (CFU) of Candida spp were evaluated by oral rinsing and salivary levels of Lf and histatin before (Time 0-1) and after periodontal therapy (Time 2 and 3, 30 and 90 days after the treatment, respectively). Patients in group 1 had a higher CFU count than in patients in group 2 (p = 0.268; ANOVAF). There was a tendency to reduce CFU after periodontal treatment in both groups, but without statistically significant differences. Lf levels were similar between groups, and reduced 30 days after periodontal treatment (p = 0.0111; Mann Whitney). Salivary levels of histatin at time 0 were higher in group 1 when compared to group 2 (p = 0.6481; Tukey-Kramer), but had distinct behavior after periodontal treatment: they were higher in group 1 and reduced in group 2. These results suggest the association between the presence of Candida spp and CP, and also the importance of maintaining oral hygiene in the prevention of candidiasis. In addition, Lf salivary can be a marker of CP in both uninfected and HIV infected patients.

O objetivo deste estudo foi avaliar clinicamente em humanos sistemas semissólidos (géis) e filmes contendo sal de metronidazol e conjugado de benzoato de metronidazol associados à raspagem e alisamento radicular (RAR), para o tratamento de periodontite. Foram avaliados o pH do fluido crevicular, os níveis clínicos de inserção óssea de suporte aos dentes envolvidos no tratamento periodontal, antes e após os tratamentos, além do perfil de liberação dos fármacos por meio de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Participaram do estudo 45 pacientes da Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto USP, de ambos os gêneros, os quais possuíam ao menos 2 dentes com periodontite crônica, compondo um total para o estudo de 96 dentes, divididos aleatoriamente em 3 grupos: grupo 1 raspagem e alisamento radicular (RAR) controle ativo; grupo 2 RAR + filme com metronidazol; grupo 3 RAR + gel de metronidazol. As concentrações de metronidazol e o tempo de liberação do fármaco no fluido crevicular gengival foram monitorados, avaliando-se ainda os efeitos dessas formulações com relação a parâmetros clínicos da periodontite. Os efeitos dos tratamentos foram avaliados pelo acompanhamento longitudinal de parâmetros clínicos (profundidade de sondagem, nível clínico de inserção e sangramento à sondagem). Os resultados da análise das concentrações de metronidazol e benzoato de metronidazol na bolsa periodontal dos pacientes foram considerados em avaliação paralela intragrupos e demonstraram que o filme e o gel foram detectados em concentração efetiva até 48 horas após a aplicação in situ, porém não foi observada diferença significante entre os grupos avaliados. Quanto aos valores de pH após o tratamento, eles variaram entre 6 e 8. No nível clínico de inserção houve diferença estatística significante entre os três grupos avaliados, sendo que o grupo que recebeu apenas tratamento periodontal convencional apresentou os melhores valores. Houve redução progressiva do sangramento à sondagem nos tempos T15 e T30 nos três grupos considerados. No que se refere aos parâmetros clínicos, ambas as terapias (gel e filme) foram eficazes em promover a redução na profundidade à sondagem, ganho no nível clínico de inserção e apresentaram melhora na saúde periodontal considerando-se o menor sangramento após a sondagem que o grupo controle (RAR somente). / The objective of this study was to clinically evaluate in humans semisolid (gels) and films systems containing metronidazole and metronidazole benzoate conjugate salts associated with scaling and root planing (SRP) for the treatment of chronic periodontitis. It was evaluated the pH of crevicular fluid and clinical bone attachment levels of the teeth involved in periodontal disease, before and after treatment, in addition to the release profile of drugs by high-performance liquid chromatography (HPLC). The study included 45 patients (both genders), from School of Dentistry of Ribeirão Preto, University of São Paulo, which had at least two teeth with chronic periodontitis, making a total for the study of 96 teeth which were randomly divided into 3 groups: Group 1 - scaling and root planing (SRP) - active control; Group 2 - RAR + film with metronidazole; Group 3 - SRP + gel with metronidazole. The metronidazole concentration and the drug release profile time in gingival crevicular fluid were monitored by evaluating the effects of such formulations, further with respect to clinical parameters of periodontitis. The effects of the treatments were evaluated for longitudinal monitoring of clinical parameters (probing depth, clinical attachment level and bleeding on probing). The results of the analysis of metronidazole and metronidazole benzoate concentrations in periodontal pockets of the patients were considered in a intragroup parallel evaluation and showed that the film and the gel were both detected in effective concentration till 48 hours after in situ application, but there was no difference significant between the groups. As for pH values after treatment, they ranged from 6 to 8. In clinical attachment level it was no statistically significant difference among the three groups, and the group that received only conventional periodontal treatment showed the best values. There was a progressive reduction in bleeding on probing in T15 and T30 times in all the three groups considered. With regard to clinical parameters, both therapies have been effective in promoting reduction in probing depth and gain in clinical attachment level as the control group, and both therapies showed improvement in periodontal health considering minor bleeding after probing that the (SRP alone) control group.

Porphyromonas gingivalis é um dos principais organismos associados à periodontite crônica e apresenta intensa diversidade, que poderia refletir em sua virulência. A maioria dos estudos sobre a virulência de P. gingivalis foi realizada com cepas de referência, e pouco se conhece sobre este aspecto em isolados clínicos. A capacidade de indução de abscessos difusos em modelos animais experimentais parece estar associada a cepas capsuladas, enquanto a expressão de fímbrias e a capacidade de internalização em células epiteliais não fagocíticas, foram relacionadas à cepa não capsulada. Em P. gingivalis, o lócus de biossíntese do polissacarídeo capsular (BPC) apresenta características de ter sido adquirido por transferência horizontal de genes. O objetivo do presente estudo foi testar a hipótese de que a estrutura populacional de P. gingivalis relaciona-se com a variabilidade do lócus BPC e características fenotípicas como produção de cápsula e hidrofobicidade. Foram analisadas 28 cepas de P. gingivalis pertencentes aos 5 genótipos fimA quanto a, presença da cápsula por microscopia óptica, hidrofobicidade e detecção de genes do lócus BPC por PCR. A análise filogenética foi realizada por tipagem através de seqüenciamento de genes housekeeping (multilocus sequence typing, MLST). Dezesseis entre 28 amostras estudadas apresentaram cápsula, e não foram detectadas diferenças na hidrofobicidade dos isolados clínicos capsulados e não capsulados. O gene pg0106 foi detectado por PCR em 78% das amostras capsuladas e em 80% das amostras não capsuladas, enquanto pg0111 foi detectado em apenas 25% de amostras capsuladas. Apenas um isolado clínico e a amostra padrão W83 foram classificados como K1, por apresentarem o gene pg0118. Através do MLST foi possível identificar grande variabilidade entre as amostras de P.gingivalis. Foi observada relação entre STs e o tipo fimA ou hidrofobicidade, mas nenhum cluster foi associado à presença da cápsula ou aos genes do lócus de biossíntese do polissacarídeo capsular. Os dados indicam associação entre o lócus BPC e produção de cápsula, porém a diversidade deste lócus parece ser maior do que a relatada na literatura. O lócus BPC e a produção de cápsula não se relacionam com a origem filogenética da cepa, indicando a intensa recombinação que ocorre em P. gingivalis. / Porphyromonas gingivalis is one of main organisms associated with chronic periodontitis and is largely diverse, which could reflect in its virulence. Most studies on the virulence of P.gingivalis were performed with reference strains, and little is known about this aspect in clinical isolates. The ability to induce diffuse abscesses in experimental animal models seems to be associated with encapsulated strains, while expression of fimbriae and the ability to internalize into non phagocytic epithelial cells were related to noncapsulated strains. In P.gingivalis, the locus of biosynthesis of the capsular polysaccharide (GP) has characteristics of having been acquired by horizontal gene transfer. This study aimed to test the hypothesis that the structure population of P.gingivalis is related to the variability of the GPC locus and phenotypic characteristics such as capsule production and hydrophobicity. 28 P.gingivalis isolates representing fimA genotypes were screened for presence of capsule by light microscopy, hydrophobic properties and detection of genes in the GPC locus by PCR. The phylogenetic analysis was performed by sequencing of housekeeping genes typing (multilocus sequence typing, MLST). Sixteen of 28 studied samples had capsule, and there were no differences in the hydrophobic properties of capsulated and non capsulated clinical isolates. The pg0106 gene was detected by PCR in 78% of capsulated isolates and in 80% of not capsulated while pg011 was detected in only 25% of encapsulated isolates. One clinical isolate and reference strain W83 were classified as K1, due to the presence of pg0118 gene. MLST detected large variations within the P.gingivalis population. MLST clustering analysis revealed a relation between sequence type (STs) and fimA genotype or hydrophobic property, but there was no association of STs with the presence of capsule or the genes encoding for the biosynthesis of capsular polysaccharide. The data indicated an association between GPC locus and capsule production but the diversity of this locus appeared to be greater than that reported in the literature. The GPC locus and capsule production were not related to the phylogenetic origin of the strain, indicating intense recombination in P. gingivalis.