Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-01-17 / A sexagem de espermatozoides, para a obtenção de doses de sêmen com alta percentagem de gametas portadores do cromossomo X ou Y, torna ainda mais relevante o papel da inseminação artificial na maximização do progresso genético entre gerações, na produtividade e retorno econômico em algumas atividades pecuárias, na reprodução assistida em mamíferos e no aconselhamento genético da espécie humana. Várias são as técnicas descritas na tentativa de separar os espermatozoides por sexo, porém todas ainda estão em processo de adequação e nenhuma oferece 100% de acuidade. Baseando–se na hipótese que durante o processo de espermatogênese existem proteínas que se expressam diferentemente na membrana de espermatozoides portadores do cromossomo X ou Y, a técnica por separação utilizando anticorpos sexo-específicos vem sendo bastante estudada. Dessa forma este trabalho objetivou em estudar as proteínas de membrana expressas nos espermatozoides sexados e não sexados / The sexing of sperm, to obtain doses of semen with a high percentage of gametes carrying the X or Y chromosome, even more relevant the role of artificial insemination in maximizing the genetic progress between generations, productivity and economic returns in some farming activities; in assisted reproduction in mammals, and in genetic counseling of the human species. Several techniques are described in an attempt to separate the sperm by sex, but all are still in process and no fitness offers 100% accuracy. Based on the hypothesis that during the process of spermatogenesis there are proteins that are differently expressed in the sperm membrane carrying the X or Y chromosome the separation technique using sex-specific antibodies have been extensively studied. Thus this work aimed to study membrane proteins expressed in sexed sperm and not sexed

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-28Bitstream added on 2014-11-10T11:57:53Z : No. of bitstreams: 1 000791419.pdf: 1434246 bytes, checksum: 1849bc5793379ee01767a6f8895f18e9 (MD5) / Doses de sêmen enriquecidas com espermatozoides portadores do cromossomo X são utilizadas na inseminação artificial (IA) e na produção in vitro de embriões (PIVE). Todavia ensaios de campo, utilizando este tipo de sêmen, demonstraram redução na taxa de prenhez, que pode ser justificada pelas injúrias espermáticas durante o processo de sexagem, além de alterações no DNA, interferindo na expressão de genes paternos, afetando o desenvolvimento embrionário e acarretando perda gestacional após 90 dias. Assim, os objetivos desse trabalho foram: comparar a taxa de clivagem e de blastocistos produzidos in vitro utilizando sêmen convencional e sêmen com espermatozoides sexados por citometria de fluxo e verificar a existência de diferenças na expressão de genes relacionados ao reconhecimento da gestação (AKR1B1, PTGS1, PTGS2, mPGES-1, mPGES-2, TNF-α) em embriões produzidos in vitro utilizando os dois tipos de sêmen. Os embriões bovinos foram produzidos por fecundação in vitro, quarenta e oito horas após a fecundação foi avaliada a taxa de clivagem, e no sétimo dia após a fecundação foi avaliada a taxa de blastocisto. Posteriormente esses blastocistos foram submetidos à extração de RNA para a avaliação da expressão gênica. Não foi observada diferença significativa (P>0,05) para as taxas de clivagem e blastocisto entre os grupos experimentais. Em relação ao padrão de expressão, a citometria de fluxo não alterou os níveis de transcritos dos genes AKR1B1, PTGS1, PTGS2, mPGES-2 e TNF-α sugerindo que embriões produzidos com espermatozoides sexados por citometria de fluxo não possuem alterações prejudiciais em genes envolvidos no reconhecimento da gestação. Porém o gene mPGES-1 foi 4,54 vezes menos expresso nos embriões produzidos com espermatozoides sexados por citometria de fluxo, sugerindo a possibilidade de ocorrência de perda gestacional, pois estudos ... / Doses of semen enriched with carriers of X chromosome sperm are used in artificial insemination (AI) and in embryos produced in vitro (PIVE). However, field studies using this type of semen demonstrated a reduction in pregnancy rate, which can be justified by injuries during sperm sexing and alterations in DNA, interfering with the expression of paternal genes affecting embryonic development and resulting in pregnancy loss after 90 days. The aims of this study were to compare the cleavage and blastocyst rates produced in vitro using conventional semen and sexed semen by flow cytometry, and check differences in the expression of genes related to pregnancy recognition (AKR1B1, PTGS1, PTGS2, mPGES-1, mPGES-2, TNF-α ) in embryos produced in vitro using the two types of semen. Bovine embryos were produced by in vitro fertilization, forty eight hours after fertilization the cleavage rate was evaluated, and on the seventh day after fertilization the blastocyst rate was performed. Subsequently, these blastocysts were subjected to RNA extraction for evaluation of gene expression. No significant differences (P>0.05) for cleavage and blastocyst rates between the experimental groups were observed. Related to the expression pattern, the flow cytometry did not alter the transcript levels of AKR1B1, PTGS1, PTGS2, mPGES-2 e TNF-α genes, suggesting that embryos produced with sexed semen by flow cytometry do not have detrimental changes in genes involved in pregnancy recognition. However the mPGES-1 gene was expressed 4,54 times less in embryo produced with sexed semen by flow cytometry, suggesting the possibility of pregnancy loss, since studies suggest that are required levels of expression of mPGES for maintenance and recognition of pregnancy

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-18Bitstream added on 2014-11-10T11:57:30Z : No. of bitstreams: 1 000790208_20160218.pdf: 1204228 bytes, checksum: 10f416eb0759a57de353af13f253e5a5 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-02-18T10:00:17Z: 000790208_20160218.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-02-18T10:01:03Z : No. of bitstreams: 1 000790208.pdf: 3676280 bytes, checksum: dafede75e9a0efb9c14bb464917e791b (MD5) / A produção de anticorpos monoclonais (mAbs) é de extrema importância na área médica, sendo considerada a grande inovação da indústria biotecnológica. O método descrito por Köhler e Milstein exige a seleção celular por vias bioquímicas através do meio HAT (meio com hipoxantina, aminopterina e timidina). Com o crescente emprego da luz na área médica este trabalho buscou avaliar o emprego do LED (abreviação de Light Emitting Diode) com comprimento de onda de 475nm na seleção das células envolvidas na produção de anticorpos monoclonais com vistas a oferecer uma nova opção na seleção de hibridomas. Culturas celulares de Mieloma Murino (NS1) e MRSA 3-75 e 4-27 em meio completo 10% SFB foram segregadas em seis grupos para cada tipo celular (12 amostras), sendo: G1: controle (não irradiado); G2: 1 J/cm2; G3: 3 J/cm2; G4: 5 J/cm2; G5: 10 J/cm2; G6: 20 J/cm2. Com vistas a determinar o comportamento das células frente ao efeito da luz, foram avaliadas a taxas de viabilidades das células por Citometria de fluxo e MTT (3-(4,5-dimethyl thiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide), perfil secretor dos hibridomas por ELISA e nanodrop e taxa crescimento celular pela coloração de Azul de Tripan. Os resultados mostraram que houve bioinibição de NS1 e MRSA 3-75 e 4-27 em doses superiores a 5 J/cm2 promoveram aumento da morte por necrose e apoptose tardia com supressão da produção de anticorpos (hibridomas) em todos os grupos experimentais. Os Hibridomas MRSA 4-27 apresentaram bioestimulação quanto a produção de anticorpos em 31% na dose de 1 J/cm2 porém, o MRSA 3-75 não apresentou alteração no perfil secretor. O LED no comprimento de onda de 475nm não promoveu fotoseleção de mielomas e hibridomas após exposição à luz. Mas, bioestimulou o crescimento celular (NS1) e promoveu aumento da secreção de imunoglobulinas (MRSA 4-27), principal interesse dos laboratórios de bioengenharia que utilizam esta tecnologia / The production of monoclonal antibodies (mAbs) for medicine is highly important, being considered the greatest innovation of the biotechnologic industry over the years. The method described by Köhler e Milstein demands cellular selection through biochemistry ways using HAT (culture medium with hypoxanthine, aminopterin and tymidhine). By the increasing use of lights in the medical areas, this paper searches to evaluate the application of LED (Light Emitting Diode) - wave length of 475nm - in the selection of cells involved on monoclonal antibodies production, in order to offer a new option for hybridoma selection. Cell culture of Murine Myeloma (NS1) and MRSA 3-75 and 4-27 in complete culture medium with 10% of fetal bovine serum (FBS) were separated in six groups for each cellular type (12 samples), being: G1: control group (not irradiated), G2: 1 J/cm2; G3: 3 J/cm2; G4: 5 J/cm2; G5: 10 J/cm2; G6: 20 J/cm2. To determine the behavior of cells, the following tests were made: viability tests by Flow Cytometry and MTT (3-(4,5-dimethyl thiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide), ELISA and Emission Spectrometry to check hydridomas’ secretory profile and Tripan blue stain to determine cellular growth rate. The results show that there were bioinstimualtion of NS1 and MRSA 3-75 and 4-27 in doses above of 5 J/cm2, which promoted the increase of death by necrosis and late apoptosis with the reduction of monoclonal antibodies production (hybridoma) in all experimental groups. The MRSA 4-27 hybridomas presented biostimulation as for the anitbodies production in 31% at the dose of 1 J/cm2, although the MRSA 3-75 didn’t present any alteration of secretory profile. The LED with wave length of 475nm didn’t promoted photoselection of hybridomas and myelomas after the exposure to light. However, it biostimulated the cellular growth (NS1) and the increased the secretion of immunoglobulins (MRSA 4-27), which is the main interest of ...

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Submitted by Automação e Estatística (sst@bczm.ufrn.br) on 2018-07-03T13:51:51Z No. of bitstreams: 1 ElionaiMouraCordeiro_DISSERT.pdf: 5123400 bytes, checksum: 64cad460a8333cb5f9cc23b82a4e1c1d (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2018-07-10T14:53:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 ElionaiMouraCordeiro_DISSERT.pdf: 5123400 bytes, checksum: 64cad460a8333cb5f9cc23b82a4e1c1d (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-10T14:53:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ElionaiMouraCordeiro_DISSERT.pdf: 5123400 bytes, checksum: 64cad460a8333cb5f9cc23b82a4e1c1d (MD5) Previous issue date: 2018-03-22 / Neste trabalho é apresentada a proposta de desenvolvimento de uma metodologia - juntamente com a apresentação dos resultados de sua aplicação - que utiliza uma técnica de aprendizagem de máquina, SVM, para análise automatizada de dados de citometria de fluxo em amostras de ambientes aquáticos, na identificação de bacterioplâncton. As amostras utilizadas na execução desta metodologia foram coletadas em 19 lagos de montanhas de elevada altitude que foram classificados manualmente no Laboratório de Limnologia do Departamento de Oceanografia e Limnologia da UFRN. Previamente, iniciou-se com alguns testes de configuração da função kernel e uma análise quantitativa com base no número médio de acertos na classificação automatizada, na qual percebeu-se que a taxa de erro de predição variou entre 1,86% e 3,35%, em média. Foram realizadas duas etapas de desenvolvimento da metodologia proposta, onde foram criados modelos de predição e realizados uma série de testes com as bases de dados criadas a partir das informações disponíveis. Os resultados obtidos foram expostos a uma série de análises quantitativas e qualitativas, inclusive utilizando PCA para entender a importância de cada variável nos conjuntos de dados das mostras. Para uma avaliação qualitativa da metodologia proposta, foi aplicada uma análise estatística para comparar ambas estratégias de modelos de predição, que tem por base a classificação final apontada pelo algoritmo de Support Vector Machine. / This master tesis shows the proposal to develop a methodology - together with the presentation of the results of its application - that uses a machine learning technique, SVM, for automated analysis of flow cytometry data in samples of aquatic environments, identification of bacterioplankton. The samples used in the execution of this methodology were collected in 19 high altitude mountain lakes that were manually classified in the Laboratory of Limnology of the Department of Oceanography and Limnology of UFRN. Previously, it started with some tests of kernel configuration and a quantitative analysis based on the average number of hits in the automated classification, in which it was noticed that the prediction error rate varied between 1.86 % and 3, 35 % on average. Two stages of development of the proposed methodology were carried out, where prediction models were created and a series of tests were carried out with the databases created from the available information. The results were exposed to a series of quantitative and qualitative analyzes, including using PCA to understand the importance of each variable in the sample data sets. For a qualitative evaluation of the proposed methodology, a statistical analysis was applied to compare both strategies of prediction models, which is based on the final classification indicated by the algorithm of Support Vector Machine.

Orientador: Helio Langoni / Banca: Paulo Francisco Domingues / Banca: José Carlos de Figueiredo Pantoja / Banca: Alice Maria Melville Paiva Della Libera / Banca: Nilson Roberti Benites / Resumo: Foram realizadas caracterizações microbiológicas dos estafilococos coagulase-positivo - ECP (Staphylococcus aureus, Staphylococcus intermedius e Staphylococcus hyicus), a pesquisa de Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae e Escherichia coli pela multiplex-PCR, California Mastitis Test (CMT), a contagem de células somáticas (CCS) automática pelo Somacount 300® calibrado para o leite bovino e CCS microscópica padronizada por Prescott e Breed (1910) em amostras de leite de 257 cabras, 513 metades mamárias e 10 tanques de expansão, além da aplicação de questionário epidemiológico nas 10 propriedades estudadas do estado de São Paulo. A prevalência de mastite subclínica em nível de cabra pela lactocultura foi de 43,6% e de mastite clínica 5,84%. Das 178 metades mamárias positivas na lactocultura, os patógenos mais prevalentes foram: Estafilococos coagulase-negativo - ECN (70%), S. aureus (13,5%), S. intermedius (7,9%) e Enterobacteriaceae (4%). Nenhuma das amostras mostrou-se negativa ao CMT, sendo a distribuição dos escores nas metades mamárias: 1+ (42,69%), 2+ (29,63%) e 3+ (27,68%). As prevalências dos patógenos na multiplex-PCR das metades mamárias foram: S. aureus (9,7%), S. agalactiae (5,5%) e E. coli (16,6%) e nos tanques de expansão: S. aureus (60%), S. agalactiae (10%) e E. coli (40%). Os resultados encontrados indicam que o CMT apresenta baixa sensibilidade e especificidade nos escores 2+ e 3+ para o diagnóstico de mastite subclínica. O Somacount 300® calibrado para o leite bovino superestima em 2,1 vezes a CCS microscópica, sendo que ambas não apresentaram nenhum ponto de corte eficiente para maximização simultânea da sensibilidade e especificidade. A multiplex-PCR apresenta boa acurácia para detecção de S. areus, S. agalactiae e E. coli no leite caprino mastítico Houve algumas diferenças estatísticas significantes nas análises univariadas dos fatores de risco para mastite ... / Abstract: Microbiological characterizations of the coagulase-positive staphylococci - CPS (Staphylococcus aureus, Staphylococcus intermedius and Staphylococcus hyicus), the research of Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae and Escherichia coli by multiplex-PCR, California Mastits Test (CMT), the automatic somatic cell count (SCC) by Somacount 300® equipment calibrated for bovine milk and the microscopic SCC standardized by Prescott and Breed (1910) in milk samples from 257 goats, 513 half-udders and 10 bulk tanks were carried out beyond the application of the epidemiological questionnaire in 10 properties studied of São Paulo State. The prevalence of subclinical and clinical mastitis by microbiological culture was 43.6% and 5.84% respectively. 178 half-udders were positive by microbiological culture, and coagulase-negative staphylococci - CNS (70%), S. aureus (13.5%), S. intermedius (7.9%) e Enterobacteriaceae (4%) were the most prevalent pathogens. No sample was negative to CMT. The distribution of scores CMT in half-udders were: 1+ (42.69%), 2+ (29.63%) and 3+ (27.68%). The prevalence of pathogens in multiplex-PCR in half-udders were: S. aureus (9.7%), S. agalactiae (5.5%) and E. coli (16.6%) and in bulk tanks: S. aureus (60%), S. agalactiae (10%) and E. coli (40%). The results indicate that the CMT scores 2+ and 3+ showed low sensitivity and specificity for the diagnosis of subclinical mastitis. The Somacount 300® calibrated to bovine milk overestimated the microscopic SCC in 2.1 fold, being that both showed no efficient cut-off point for simultaneous maximization of the sensitivity and the specificity. The multiplex-PCR presented good accuracy for the detection of S. aureus, S. agalactiae and E. coli in the mastitic caprine milk. There were some significant differences in the univariate analysis of risk factors for subclinical mastitis, however, when the analysis was adjusted for property, the ... / Doutor

Orientador: Fabiana Ferreira de Souza / Resumo: Os objetivos deste estudo foram validar a sonda fluorescente (MitoStatus Red) para análise de potencial mitocondrial em espermatozoide de cães por citometria de fluxo, associada a análise de integridade de membrana plasmática e do acrossomo (experimento I). Além disso, foi conduzida análise proteômica (abordagem shotgun) do plasma seminal de cães, sua correlação com a congelabilidade do sêmen e capacidade de ligação das células espermáticas em membrana perivitelina da gema de ovo (TL) (experimento II). No experimento I foram utilizado 10 ejaculados, com motilidade espermática >75% e as concentrações de 20 nM, 50 nM, 100 nM e 200 nM da sonda MitoStatus Red foram comparadas na citometria de fluxo. Concluiu-se que 20 nM foi a concentração ideal, sem danos as estruturas celulares. No experimento II foram utilizados 10 animais, 2 ejaculados/animal (n = 20). Os ejaculados foram avaliados por cinética espermática, citometria de fluxo (potencial mitocondrial, integridade de membrana plasmática e de acrossomo) e TL. A análise proteômica do plasma seminal foi avaliada por espectrometria de massas. Os ejaculados foram divididos em 3 clusters (cluster Low, cluster Medium, cluster Hight) de acordo com os parâmetros espermáticos pré e pós-descongelação. Os grupos foram correlacionados com as proteínas encontradas no plasma seminal. Concluiu-se que existe relação entre presença ou ausência de proteínas do plasma seminal de acordo com a qualidade espermática. / Mestre

A piometra é uma condição mórbida caracterizada pela inflamação do útero com acúmulo de exsudatos, resultante de ações hormonais e geralmente associada à presença de bactérias no lúmen uterino. A anemia é a alteração hematológica mais frequentemente observada em cadelas com piometra e está associada à cronicidade da doença, diminuição da eritropoiese, devido ao efeito toxêmico na medula óssea, diminuição da disponibilidade de ferro ou perda de sangue para o útero. Adicionalmente, o efeito das toxinas bacterianas e os radicais livres gerados pelo metabolismo oxidativo dos neutrófilos podem resultar na modificação da estrutura antigênica da membrana do eritrócito, permitindo a ligação de imunoglobulinas em sua superfície e acelerando a destruição eritrocitária. Essa hipótese pode ser comprovada pela detecção de imunocomplexos na superfície eritrocitária de cadelas com piometra. O diagnóstico de piometra foi estabelecido em 33 cadelas atendidas no Serviço de Obstetrícia/Ginecologia do Hospital Veterinário da Universidade de São Paulo com base na anamnese, exame físico e exames subsidiários (ultrassonografia, hemograma e concentrações séricas de ureia e creatinina). As amostras sanguíneas foram coletadas em dois momentos. A primeira anterior a ovariosalpingohisterectomia (OSH) e a segunda, sete a dez dias após a OSH. A quantificação de hemácias com deposição de imunocomplexos IgG e IgM foi realizada utilizando-se anticorpos anti-IgG e anti-IgM (Bethyl®Laboratories) conjugadas a fluoresceína de isotiocianato (FITC), e a leitura realizada com citômetro de fluxo (FACS Calibur; Becton, Dickinson and Company© 2007 BD), sendo os resultados expressos em percentual de hemácias marcadas. Foram utilizados o Teste de Shapiro-Wilk para a avaliação da distribuição de dados e a comparação entre os grupos controle, pré e pós-OSH foi realizada valendo-se do Teste t ou Teste t pareado e Correlação de Pearson, e do Teste U de Mann-Whitney e Correlação de Spearman, para as variáveis com distribuição normal e não-normal, respectivamente. O valor de alfa estipulado foi de 0,05. Analisando os valores hematológicos de cada um dos cães incluídos no estudo, observa-se que 19 (57,6%) apresentavam anemia normocítica normocrômica não regenerativa no momento pré-OSH e cinco (15,2%) no momento pós-OSH. Em cães do grupo controle foram observadas 0,14 - 0,77% (0,43±0,18%) de hemácias marcadas com anticorpos anti-IgG FITC e 0,29 - 9,58% (0,68±0,29%) para anticorpos anti-IgM FITC. Já nos cães com piometra, foram encontradas 0,14 - 4,19% (0,96±0,86%) de hemácias marcadas com anticorpos anti-IgG FITC e 0,29 - 9,58% (1,37±1,71%) com anticorpos anti-IgM FITC, antecedendo a OSH. No momento pós-OSH observou-se 0,18 - 16,2% (2,77±3,67%) de hemácias marcadas para anticorpos anti-IgG FITC e 0,15 - 19,8% (4,01±4,46%) para anticorpos anti-IgM FITC. O percentual de hemácias marcadas com anticorpos anti-IgG FITC diferiu entre os grupos controle e piometra, pré-OSH (p<0,001) e pós-OSH (p<0,001). Em relação a anticorpos anti-IgM FITC, não foram observadas diferenças entre os grupos controle e pré-OSH (p=0,09), porém, após a OSH houve aumento na marcação de hemácias, quando comparado ao grupo controle (p<0,001). Apenas alguns animais apresentaram mais de 5% de hemácias marcadas, e isto ocorreu, principalmente, no momento pós-OSH. Entretanto, não resultou no agravamento da anemia, indicando que a piometra em cadelas está associada à deposição de imunoglobulinas G ou M na superfície das hemácias, sem, no entanto, promover hemólise ou agravamento da anemia / The pyometra is a morbid condition characterized by inflammation of the uterus with exudates accumulation resulting from hormonal action and usually associated with the presence of bacteria in the uterine lumen. Anemia is the hematologic changes most frequently observed in bitches with pyometra and is associated with chronic disease, diminished erythropoiesis due to toxemic effect on the bone marrow, decreased iron availability or loss of blood to the uterus. Additionally, the effect of bacterial toxins and free radicals generated by neutrophil oxidative metabolism may result in the modification of antigenic structure of the erythrocyte membrane, allowing the binding of immunoglobulins on their surface and accelerating erythrocyte destruction. This hypothesis can be confirmed by detection of immune complexes in the erythrocyte surface dogs with pyometra. The diagnosis of pyometra was established in 33 dogs attended by the Obstetrics Service/Gynecology of Veterinary Hospital of the University of São Paulo based on history, physical examination and additional tests (ultrasound, blood count and serum concentrations of urea and creatinine). Blood samples were collected in two stages. The first prior to ovariohysterectomy (OSH) and the second, seven to ten days after OSH. Quantification of erythrocyte with deposition of IgG and IgM immune complexes was performed using antibodies anti-IgG and anti-IgM (Bethyl® Laboratories) conjugated to fluorescein isothiocyanate (FITC), and the reading performed with flow cytometry (FACS Calibur; Becton, Dickinson and Company© 2007 BD), and the results expressed as a percentage of red blood cells marked. The Shapiro-Wilk test was used to assess the distribution of data and the comparison between the control group, pre- and post-OSH was carried out making use of the t test or paired t test and Pearson correlation, and test U Mann-Whitney and Spearman correlation for the variables with normal and non-normal distribution, respectively. The stipulated alpha value was 0.05. The analysis of the hematological values of each of the dogs enrolled in the study, it was observed that 19 (57.6%) with anemia normocytic normochromic non-regenerative in the pre-OSH moment and 5 (15.2%) in the post-OSH moment. In control group of dogs were observed from 0.14 to 0.77% (0.43± 0.18%) of red blood cells marked with antibodies anti-IgG FITC and 0.29 to 9.58% (0.68± 0.29%) for antibodies anti-IgM FITC. Already in dogs with pyometra were found 0.14 to 4.19% (0.96 ± 0.86%) of red blood cells marked with antibodies anti-IgG FITC and 0.29 to 9.58% (1.37 ± 1.71%) with antibodies anti-IgM FITC, prior to OSH. In the post-OSH time it was observed 0.18 to 16.2% (2.77 ± 3.67%) of red blood cells marked for antibodies anti-IgG FITC and 0.15 to 19.8% (4.01 ± 4.46%) for antibodies anti-IgM FITC. The percentage of red blood cells marked with antibodies anti-IgG FITC differ between groups control and pyometra, pre-OSH (p<0.001) and post-OSH (p<0.001). Regarding the antibodies anti-IgM FITC, no differences were observed between the control and pre-OSH (p=0.09), however, after the OSH was no increase in labeling of red blood cells compared to the control group (p<0.001). Only a few animals have more than 5% of marked red blood cells, and this was mainly in the post-OSH time. However, not result in the worsening of anemia, indicating that pyometra in dogs is related to the deposition of immunoglobulin G or M on the surface of erythrocytes, without, however, promote hemolysis or worsening of anemia

Submitted by Raquel Vasconcelos Guimarães de Castro null (rvgcastro@hotmail.com) on 2016-06-10T17:22:52Z No. of bitstreams: 1 Definitivo v11 VERSÃO IMPRESSA.pdf: 3954271 bytes, checksum: fbf5e7559a791827787906302174080b (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-06-15T17:22:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 castro_rvg_me_jabo.pdf: 3954271 bytes, checksum: fbf5e7559a791827787906302174080b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-15T17:22:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 castro_rvg_me_jabo.pdf: 3954271 bytes, checksum: fbf5e7559a791827787906302174080b (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A pele é um órgão extenso e de fácil acesso, e possui vários tipos celulares diferentes que estão em constante renovação. Dentre estas células, alguns tipos de células-tronco com potencial proliferativo, de autorrenovação e de diferenciação, são responsáveis pela manutenção da homeostase deste órgão e pela cura de feridas. Estudos anteriores sugerem a existência de um nicho de células-tronco presente no “bulge” dos folículos pilosos, que contém populações positivas para CD200 e CD34. Este trabalho foi realizado com o intuito de: 1- Obter tecidos derivados da pele de cães adultos e fetos, isolar e cultivar as células in vitro derivadas destes, empregando um método de isolamento celular através de digestão enzimática simples 2- Comprovar a presença de células do “bulge”, positivas para CD200 e CD34 após cultivo celular in vitro, comparando com a análise do tecido; Uma coloração por hematoxilina e eosina foi realizada da pele de cães adultos e fetos, e biopsias e células cultivadas in vitro foram caracterizadas pela presença das proteínas CD200 e CD34 através de imunofluorescência, imunocitoquímica e citometria de fluxo. Os resultados da imunofluorescência foram negativos para ambos CD200 e CD34 nas peles de feto e adulto. Na imunocitoquímica, as células foram positivas para CD34 e CD200, tanto em fetos quanto adultos. Adicionalmente, o marcador de pluripotência OCT4 foi testado, sendo expresso em células de feto. Por citometria de fluxo, a porcentagem média de células marcadas duplamente por CD200 e CD34 nos adultos foi de 3,1% e nos fetos de 0,33% (n=3). A marcação somente por CD200 foi encontrada somente nos adultos, sendo de 2,8% (n=3). Os resultados sugerem ser possível a obtenção de células-tronco do “bulge” do folículo piloso através do método de digestão enzimática simples, utilizado neste trabalho. Este estudo é o primeiro passo para novas pesquisas que envolvam esse nicho, na pele de cães. / Skin is an extensive and easily accessible organ, possessing various cell types which are in constant renovation. Some stem cell types found in the skin have the potential of self-renewal, proliferation and differentiation, processes which are responsible for the organ’s maintenance of homeostasis and the healing of wounds. Previous studies suggested the presence of a stem cell niche at the bulge region of the hair follicle, which contains cell populations positive for CD200 and CD34. Thus, this work sought to identify these cell populations in canine cultures using the following methods: 1. 1- Collecting samples of adult and fetus canine skin, isolating and culturing these cells in vitro using a method of simple enzymatic digestion; 2- Testing the cell cultures for CD200 and CD34 in vitro, comparing them with analyzed tissue material. Hematoxylin and eosin staining were conducted for the biopsies and analysis of fetal and adult canine skin, with the extracted cell cultures being characterized for the presence of the proteins CD200 and CD34 through immunofluorescence, immunocytochemistry and flow cytometry. In both adult and fetal tissue samples, CD200 and CD34 immunofluorescence results were negative. In immunocytochemistry, both fetal and adult cultures cells tested positive for CD34 and CD200. The pluripotency marker OCT4 was also tested, and was positive for fetal culture cells. Flow cytometer results showed that, for samples with a double staining of CD200 and CD34 the average percentage of marked cells was 3.1% in adults and 0.33% in fetal cells (n=3). For the CD200 marker alone, positive cells were found only in adult cultures, representing 2.8% of the total population (n=3). In conclusion, the results suggest that obtaining bulge stem cells from both fetuses and adults, with use of CD200 and CD34 markers, is validated through the simple enzymatic digestion and cell culture methods utilized in this study. The present work is the first step towards developing new research involving this niche in dogs.