CARVALHO, J. I. X. Estudo fitoquímico e avaliação do potencial de inibição da enzima acetilcolisnesterase de Simarouba versicolor (SIMAROUBACEAE). 2008. 142 f. Dissertação (Mestrado em Química) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2008. / Submitted by Daniel Eduardo Alencar da Silva (dealencar.silva@gmail.com) on 2014-11-17T19:26:28Z No. of bitstreams: 1 2008_dis_jixcarvalho.pdf: 3655081 bytes, checksum: ec12d653ac81e4f65525b03340666f97 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2016-03-18T20:32:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_dis_jixcarvalho.pdf: 3655081 bytes, checksum: ec12d653ac81e4f65525b03340666f97 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-18T20:32:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_dis_jixcarvalho.pdf: 3655081 bytes, checksum: ec12d653ac81e4f65525b03340666f97 (MD5) Previous issue date: 2008 / The present paper describes the chemical and pharmacological study of the stem bark of the species Simarouba versicolor, which belongs to the family Simaroubaceae. The species are found, mainly in open areas of well drained soils such as cerrado and caatinga. Known popularly as “pau Paraiba”, “mata-cachorro” or “Brazilian simaruba”, the bark of its trunk has insecticidal and antihelminthic properties. It aims to establish a possible extract inhibition of enzyme activity of acetyl cholinesterase (AChE) Relationship. It was accomplished a triage of the parts extracts (leaves, stems, branches, stem bark and heartwood) of the species Simarouba Versicolor by the Ellman test. The ethanol extract of stem bark showed high inhibition of AChE, from this extract, the chloroform fraction and ethyl acetate were identified as being responsible for the inhibition of the enzyme. The chemical prospect of the chloroform fraction resulted in the isolation of three compounds, a mixture of steroid β-sitosterol and stigma sterol, a quassinoid, the 11-acetylamarolide and the alkaloid 4.5-dimetoxicantin-6-one. In the ethyl acetate fraction it was isolated the 3-β-O-β-D-glucopyranosyl sitosterol. The Structure determination of these compounds was performed by spectroscopic analysis through the methods of IR, MS, RMN1H and 13C-BB using uni and bidimensional techniques and by comparison with the data reported in the literature. In qualitative analysis of the AChE inhibition the extracts and isolated constituents 11- acetylamarolide and 4.5-dimetoxicantin-6-one showed good results. The extracts also showed cytotoxic activity in three tumor lines tested. / O presente trabalho descreve o estudo químico e farmacológico da casca do caule da espécie Simarouba versicolor, pertencente á família Simaroubaceae. A espécie ocorre preferencialmente em áreas abertas de solos bem drenados, como cerrados e caatinga. Conhecida popularmente como “pau paraíba”, “mata-cachorro” ou “simaruba do Brasil”, a casca do seu caule possui propriedades inseticida e antihelmíntica. Com o objetivo de estabelecer uma possível relação extrato atividade de inibição da enzima acetilcolinesterase (AChE). Foi realizada uma triagem dos extratos das partes (folhas, talos, Galhos, Casca do caule e Cerne) da espécie Simarouba versicolor, através do ensaio de Ellman. O extrato etanólico da casca do caule apresentou elevada inibição da AChE, desse extrato, as frações clorofórmica e acetato de etila foram identificadas como sendo responsáveis pela inibição da enzima. A prospecção química da fração clorofórmica resultou no isolamento de três compostos, uma mistura de esteróides β- sitosterol e estigmasterol, um quassinóide, a 11-acetilamarolida e o alcalóide 4,5- dimetóxicantin-6-ona. Na fração acetato de etila foi isolado o 3-β-O-β-D-glicopiranosil sistosterol. A determinação estrutural desses compostos foi realizada através de análise espectroscópica pelos métodos de IV, EM, RMN1H e 13C-BB utilizando técnicas uni e bidimensionais e por comparação com dados descritos na literatura. Na análise qualitativa de inibição AChE os extratos e os constituintes isolados 11-acetilamarolida e 4,5-dimetóxicantin-6-ona apresentaram bons resultados. Os extratos também apresentaram atividade citotóxica em três linhagens tumorais testados.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2017-06-27T04:08:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 346602.pdf: 6050100 bytes, checksum: 2fcdd95fe82dd7e1cb5253f48d30332f (MD5) Previous issue date: 2016 / Esta tese relata o desenvolvimento de um sistema de liberação de fármaco (DDS), a doxorrubicina (Dox), composto de micropartículas híbridas de carbonato de cálcio e carragenina (CaCO3/?-Car), sintetizadas em matriz de nanocelulose bacteriana (BNC), aqui denominado CarDS. A caracterização do CarDS revelou uma distribuição uniforme das micropartículas híbridas de CaCO3/?-Car entre as fibras de BNC, proporcionando alta incorporação de Dox (80%) e perfis de liberação modulados pela concentração de Dox incorporada, assim como pela variação do pH local. A razão entre as micropartículas e as fibras de BNC permanece a mesma, quando aumentadas as dimensões do sistema. A presença das micropartículas diminuiu a área superficial, a capacidade de absorção de água, a taxa de reidratação e altera as propriedades mecânicas. O CarDS é atóxico a células de fibroblastos da linhagem L929. As células de fibroblastos são capazes de aderir, proliferar e interagir com biomaterial (CarDS). Os índices hemolíticos permanecem dentro da normalidade, evidenciando a não citotoxicidade e hemocompatibilidade do CarDS. A bioequivalência da Dox liberada pelo sistema (DoxDS) em comparação com Dox em solução (DoxSol) na toxicidade de células de câncer de mama evidenciaram a atividade do fármaco pela diminuição da atividade metabólica e índices proliferativos, causando alterações características na morfologia, ciclo celular e morte celular por apoptose/necrose durante o tratamento com DoxDS quando cultivadas in vitro. Por fim, os resultados aqui relatados comprovam que o CarDS desenvolvido poderia ser uma alternativa para auxiliar na terapia adjuvante da recidiva do câncer de mama e, como consequência, na redução dos efeitos colaterais ocasionados pelo fármaco em nível sistêmico.<br> / Abstract : This thesis reports the development of a drug (doxorubicin) delivery system (DDS) with hybrid microparticles of calcium carbonate and carrageenin (CaCO3/?-Car), synthesized in bacterial nanocellulose matrix (BNC), here called CarDS. Characterization of CarDS revealed a uniform distribution of the CaCO3/?-Car hybrid microparticles between the BNC fibers, providing a high Dox incorporation (80%) and release profiles modulated by the incorporated Dox concentration, as well as by the variation of the local pH. The ratio of the microparticles to the BNC fibers remains the same when the system dimensions are increased. Presence of the microparticles decreased the surface area, its water absorption capacity and rehydration rate, that the presence of the microparticles altered its mechanical properties, making the biomaterial more malleable and easy to apply. CarDS is non-toxic to fibroblast cells of the L929 lineage. Fibloblast cells are able to adhere, proliferate and interact with the biomaterial (CarDS). Hemolytic indices remained within the normal values, showing its non cytotoxicity and hemocompatibility of CarDS. The bioequivalence of Dox released by the system (DoxDS) compared to Dox in solution (DoxSol) in the toxicity of breast cancer cells showed the activity of the drug by the decrease of the metabolic activity and proliferative indices, causing characteristic alterations in the morphology, cell cycle, and cell death by apoptosis/necrosis during the treatment with DoxDS when cultured in vitro. Finally, the results reported suggest that the developed CarDS could be used as an aid in the adjuvant therapy of recurrent breast cancer and consequently reduce the side effects caused by the drug at systemic level, and therefore be suitable for breast cancer therapies.

Submitted by Bruna Pastrello null (bpastrello@yahoo.com.br) on 2016-03-29T18:01:37Z No. of bitstreams: 1 dissertação_bruna_pastrello_posmat.pdf: 1672543 bytes, checksum: 3f480624c1164579a2d8fe66299bb619 (MD5) / Rejected by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: O título informado durante a submissão e o título presente na folha de rosto do trabalho estão diferentes. O arquivo submetido está sem a ficha catalográfica. A versão submetida por você é considerada a versão final da dissertação/tese, portanto não poderá ocorrer qualquer alteração em seu conteúdo após a aprovação. Por favor, corrija as informações e realize uma nova submissão Agradecemos a compreensão. on 2016-03-30T18:01:46Z (GMT) / Submitted by Bruna Pastrello null (bpastrello@yahoo.com.br) on 2016-03-31T15:49:11Z No. of bitstreams: 1 dissertação_bruna_pastrello_repositorio.pdf: 1715474 bytes, checksum: 666cc788bba92cfd8f794f6a11977194 (MD5) / Rejected by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: O título da capa e da folha de rosto estão diferentes. Corrija estas informações e realize uma nova submissão contendo o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2016-03-31T16:08:00Z (GMT) / Submitted by Bruna Pastrello null (bpastrello@yahoo.com.br) on 2016-04-01T21:43:34Z No. of bitstreams: 1 dissertação_bruna_pastrello_repositorio.pdf: 1715585 bytes, checksum: 92a28b31b61344acfed65ba5ca1ee62d (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-04-05T13:41:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pastrello_b_me_bauru.pdf: 1715585 bytes, checksum: 92a28b31b61344acfed65ba5ca1ee62d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-05T13:41:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pastrello_b_me_bauru.pdf: 1715585 bytes, checksum: 92a28b31b61344acfed65ba5ca1ee62d (MD5) Previous issue date: 2016-03-03 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O óxido de zinco (ZnO) é um semicondutor muito utilizado na área tecnológica, principalmente em dispositivos fotovoltaicos e, mais recentemente, vem sendo utilizado em aplicações biomédicas. Porém, os efeitos citotóxicos, principalmente quando em tamanho nanométrico, associados ao seu uso, não devem ser descartados. Assim, este trabalho teve por objetivo estudar o efeito tempo de sonicação na morfologia de nanopartículas de ZnO e como estas diferenças poderiam afetar a estrutura da albumina, provocar a hemólise de eritrócitos e a ativação de neutrófilos humanos, quando em contato com este material. Amostras de ZnO foi obtido através do método de síntese ultrassônica, caracterizada por métodos ópticos e suas morfologias observadas em microscópio de varredura eletrônica. Foram obtidas duas morfologias distintas: nanoflores e nanoagulhas. Em todos os testes biológicos a concentração final de ZnO foi 0,1mg/mL em todos os experimentos, onde incubou-se o mesmo com albumina humana e com células sanguíneas (eritrócitos e neutrófilos). Não se observou alterações significativas na estrutura da albumina quando incubada com ZnO, como evidenciado por estudos de fluorescência intrínseca e extrínseca. Uma exceção foi uma pequena agregação da proteína quando incubada com o ZnO (nanoflor) avaliado por espalhamento de luz (Rayleigh). Embora pouco efetiva, esta morfologia do ZnO também foi mais eficaz na indução de hemólise de eritrócitos (22%), se comparado às nanoagulhas (11%), após 48 horas de reação (controle negativo=3,7%). A mesma tendência foi observada para estimulação de neutrófilos avaliada por luminol (nanoflores 26,9%, nanoagulhas 8,9% e controle negativo=8,7%). Em conclusão, podemos afirmar que ZnO nanoestruturado apresentou baixa toxicidade nos modelos aqui estudados, o que reforça a sua potencial aplicação in vivo. / Zinc oxide (ZnO) is a semiconductor that has been highly explored in multiple areas of science, especially in photovoltaic devices and, more recently, in biomedical applications. However, the cytotoxic effects, especially in nanosize, associated with its use cannot be ruled out. Therefore, this work aimed to study how the sonication time can influence the morphology obtained for the zinc oxide and how these differences could affect the structure of albumin, cause hemolysis of erythrocytes and activation of human neutrophils. ZnO was obtained by ultrasonic synthesis method and characterized by optical methods and their morphologies observed in scanning electron microscope. Two differents morphologies were obtained: nanoflowers and nanoneedle. ZnO was incubated with human serum albumin and blood cells (erythrocytes and neutrophils) in final concentration of 0.1mg/ml. The results showed no significant modification in albumin structure when incubated with ZnO, evidenced by intrinsic and extrinsic fluorescence studies. One exception was a small protein aggregation observed in light scattering (Rayleigh). Although somewhat effective, this morphology of ZnO was also more effective at inducing hemolysis of erythrocytes (22%) compared to nanoagulhas (11%), after 48 hours of reaction (negative control = 3.7%). The same trend was observed for stimulation of neutrophils measured by luminol (nanoflowers 26.9% and nanoneedle 8.9%) (negative control = 8.7%). In conclusion, it can be said that ZnO nanostructured showed low toxicity in the models studied, which reinforces the in vivo applications.

Made available in DSpace on 2016-04-01T17:55:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-06-18. Added 1 bitstream(s) on 2016-04-01T18:01:07Z : No. of bitstreams: 1 000860673.pdf: 1122445 bytes, checksum: 86f140efaf5384055fe303ac33ccce6d (MD5) / Na Endodontia, estudos têm demonstrado avanços nas terapias reparativas e regenerativas que visam à recuperação da vitalidade e função do tecido pulpar. Para isso são realizadas técnicas conservadoras como o capeamento pulpar e pulpotomia. Os materiais bioativos comumente empregados durante o capeamento pulpar são o MTA e o Ca(OH)2 PA. Porém, um novo material denominado Biodentine, a base silicato de tricálcio, está sendo comercializado com o mesmo propósito. Contudo, os efeitos biológicos deste cimento ainda não são claros, principalmente em se tratando da polpa a ser regenerada. Desta forma, este trabalho avaliou os efeitos destes materiais sobre células progenitoras. A biocompatibilidade da Biodentine, MTA e Ca(OH)2 foi analisada por ensaios de citotoxicidade (XTT e SRB), após 1, 3 e 5 dias do contato das células com os materiais. Os processos funcionais de mineralização foram verificados pela quantificação da atividade da enzima fosfatase alcalina (ALP) envolvida no processo de mineralização, bem como pela observação da formação de nódulos mineralizados pelo ensaio de alizarin vermelho. Os resultados foram submetidos aos testes estatísticos (ANOVA e Tukey 5%) e demonstraram uma significativa biocompatibilidade da Biodentine nos ensaios de citotoxicidade. Contudo, o cimento de Ca(OH)2 foi o material que estimulou a maior atividade de ALP. Além disso, todos os cimentos propiciaram a formação de nódulos mineralizados a partir do sétimo dia, no teste do alizarin vermelho. Pôde-se concluir que a Biodentine pode ser uma importante alternativa como material capeador nos procedimentos regenerativos / With the use of principles of regenerative therapies in Endodontics, new tissue engineering strategies have showed success in the de novo formation of pulp tissue in animal models. The commonly used materials on the original dental pulp tissue are the MTA and calcium hydroxide. In addition, a new material known as Biodentine, based on tricalcium silicate, is new to the market, with the same purpose of the others. However, the biological effects and mechanisms of this bioactive material are not elucidated. This project evaluated the effects of these biomaterials on dental pulp stem cells. The biocompatibility of them was assessed by XTT and SRB assays, at 1, 3 and 5 days. The alkaline phosphatase activity assay and alizarin red staining of mineralized nodules was assessed by functional mineralization. The results were subjected to statistical analysis (ANOVA and Tukey 5%) and demonstrated a significant Biodentine's biocompatibility in cytotoxicity assays. However, Ca(OH)2 cement was the material that was most stimulated ALP activity. In addition, all cements enabled the formation of mineralized nodules from the seventh day, in alizarin red test

O 5-fluorouracil (5-FU) é um antineoplásico análogo pirimídico empregado no tratamento de muitos tipos de cânceres. Três diferentes mecanismos de citotoxicidade são atribuídos a este agente: incorporação de fluoronucleotídeos no DNA ou RNA e a inibição da enzima timidilato sintase. O 5-FU pode ser convertido ao seu metabólito ativo, o 5-fluoro-2´-deoxiuridina-5´-monofosfato (FdUMP), que por sua vez, pode inibir a enzima timidilato sintase (TS), responsável pela síntese de timidina monofosfato a partir de uridina monofosfato; a inibição de TS leva ao desbalanço do pool de nucleotídeos, diminuindo a concentração de dTTP, aumentando a de dUTP e, como conseqüência, levando à incorporação de uracil na cadeia de DNA. No presente estudo comparamos a atividade citotóxica de 5-FU e de seu metabólito FdUMP e as vias de reparação de DNA envolvidas na eliminação das lesões induzidas por estas substâncias. A atividade citotóxica foi avaliada em células de adenocarcinoma de cólon humano, linhagem SW620. As vias de reparação foram estudadas em linhagens de Saccharomyces cerevisiae deficientes em genes de reparo para excisão de bases (BER), excisão de nucleotídeos (NER), recombinação homóloga (HR), recombinação não-homóloga (NHEJ) e síntese translesão (TLS). Para se investigar a possível sobreposição das vias de reparo, foram empregados quádruplos mutantes em BER e NER, HR ou TLS. Os resultados em células tumorais humanas mostraram que tanto 5-FU, quanto FdUMP desencadeiam morte celular por apoptose. Ao avaliar a progressão do ciclo celular, observou-se que 5-FU leva a parada em G1, enquanto que FdUMP, parada em G2. Com a finalidade de se investigar se estas paradas de ciclo celular estariam relacionadas a quebras de DNA, foram empregados ensaios de fosforilação da histona H2AX e os testes de cometa alcalino e de micronúcleos. Observou-se que ambas as drogas induzem fragmentação no DNA, uma vez que foram observadas quebras de fita simples e formação de micronúcleos. Logo, a diferença na progressão do ciclo celular não está relacionada com a habilidade das drogas em induzir quebras. Desta forma, sugere-se que o efeito diferencial de 5-FU e FdUMP na progressão do ciclo celular depende do tipo de lesão induzida pelas drogas e as vias de reparação de DNA implicadas no reconhecimento das mesmas. Ao empregar linhagens de S. cerevisiae proficientes e deficientes em reparo tratadas com 5-FU e FdUMP, observou-se que a proteína Apn1 é de extrema importância no reparo das mesmas, uma vez que apn1Δ foi o mais sensível de todos mutantes e ntg1Δntg2Δapn1Δ apresentou grande sensibilidade aos tratamentos com ambas as drogas. As lesões causadas por 5-FU seriam reconhecidas principalmente pela Ntg2, o que resulta em significativa sensibilidade em ntg2Δ e ntg1Δntg2Δ. Entretanto, para o reconhecimento dos danos por FdUMP são necessárias a participação tanto de Ntg1 quanto Ntg2, como visto na elevada sensibilidade do duplo mutante ntg1Δntg2Δ. As deficiências em Ung1 e Rad27 não revelaram diferenças significativas em relação às linhagens selvagens, bem como nos mutantes em NER (rad1Δ e rad10Δ), HR (rad52Δ), NHEJ (rad50Δ) e TLS (rev1Δ e rev3Δ), para ambas as drogas. No emprego de quádruplos mutantes, verificou-se que ntg1Δntg2Δapn1Δrad52Δ mostrou uma acentuada sensibilidade quando tratado com 5-FU. Estes resultados sugerem que os danos gerados por 5-FU poderiam ser reconhecidos e removidos pela DNA glicosilase Ntg2 e AP endonucleases Apn1 do BER, levando a quebras de fita simples e dupla de DNA, que seriam reparadas por HR (Tipo RAD52). Entretanto, para o tratamento com FdUMP não foram observadas diferenças significativas quando comparado com a linhagem selvagem. Ao analisar a sensibilidade dos mutantes ntg1Δntg2Δapn1Δrad1Δ e ntg1Δntg2Δapn1Δrev3Δ, verificou-se que os mesmos não foram sensíveis ao tratamento com FdUMP, entretanto apresentaram moderada sensibilidade quando tratados com 5-FU. O conjunto desses resultados nos leva a sugerir que uma pequena parte dos sítios AP produzidos pelo tratamento com 5-FU poderia ser processada por NER e TLS, sendo a participação de HR a mais importante. As lesões geradas por FdUMP seriam reparadas principalmente por BER, com a participação de Ntg1, Ntg2 e Apn1, porém não pode ser descartado o possível envolvimento da reparação de bases mal-emparelhadas - MMR, uma vez que se observou previamente, uma parada no ciclo celular em G2 em células de adenocarcinoma de cólon humano SW620. / 5-fluorouracil (5-FU) is an antineoplastic drug pyrimidic analogue employed in the treatment of several cancers. Three different mechanisms of cytotoxicity are attributed to this agent: misincorporation of fluoronucleotides in DNA or RNA and inhibition of thymidilate sintase enzime. 5-FU could be converted to its active metabolite, 5-fluoro-2´-deoxiuridina-5´-monofosfato (FdUMP), that could inhibit the thymidilate sintase (TS), related to thymidine synthesis from uridine; TS inhibition leads to nucleotide pool imbalance, decreasing thymine concentration and increasing uracil, as consequence, it leads to uracil incorporation into DNA. The present study compared the cytotoxic activity of 5-FU and its active metabolite FdUMP, and the DNA repair pathways involved in removing lesions induced by these substances. Cytotoxicity was evaluated in human colon adenocarcinoma cells, SW620. DNA repair pathwayas were studied in Saccharomyces cerevisiae deficient in base excision repair (BER), nucleotide excision repair (NER), homologous recombination (HR), non-homologous end joining (NHEJ) and translesion synthesis (TLS). To investigate the overlapping of DNA repair pathways, we employed quadruple mutants in BER and NER, HR or TLS. Results in human tumor cells showed that both 5-FU and FdUMP induce cell death by apoptosis. When we investigated the cell cycle progression, we observed that 5-FU lead G1 arrest, while FdUMP induced G2 arrest. In order to investigate if these arrests would be related to DNA breaks, alkaline comet assay, fosforilation of H2AX histone and micronucleus assay were employed. We observed that both drugs induce DNA fragmentation, since single strand breaks and micronucleus were evidenced. Thus, the difference in cell cycle progression is not related to the ability of 5-FU and FdUMP in induce breaks. This way, we suggest that the differential effect of 5-FU and FdUMP in cell cycle progression depends on the type of lesion originated by drugs and the DNA repair pathways implicated in recognize them. By employing S. cerevisiae strains proficient and deficient in DNA repair treated with 5-FU and FdUMP, it was observed that Apn1 protein is extremely important in repairing these lesions, since apn1Δ was the most sensitive of all mutants employed and ntg1Δntg2Δapn1Δ showed high sensitivity to treatments with both drugs. Lesions caused by 5-FU would be recognized mainly by Ntg2, what results in significant sensitivity in ntg2Δ and ntg1Δntg2Δ. However, for recognition of FdUMP damage it is necessary the participation of both Ntg1 and Ntg2, as observed in high sensitivity of ntg1Δntg2Δ double mutant. Deficiencies in Ung1 and Rad27 did not reveal significant differences in relation to WT, as well as mutants in NER (rad1Δ e rad10Δ), HR (rad52Δ), NHEJ (rad50Δ) e TLS (rev1Δ e rev3Δ), for both drugs. When we employed quadruple mutants, we verified that ntg1Δntg2Δapn1Δrad52Δ showed higher sensitivity when treated with 5-FU. These data suggest that damage generated by 5-FU could be recognized and removed by DNA glycosylases Ntg2 and AP endonuclease Apn1 from BER, generating DNA single and double strand breaks, that could be repaired by HR (RAD52 Type). However, for FdUMP, we did not observe significant differences in comparison to WT. By investigating the sensitivity of ntg1Δntg2Δapn1Δrad1Δ and ntg1Δntg2Δapn1Δrev3Δ, we observed that they were not sensitized by FdUMP, however, they present a slight sensitivity when treated with 5-FU. These results lead us to suggest that a small part of AP sites generated by 5-FU could be processed by NER and TLS, and HR would be the most significant. Lesions by FdUMP would be repaired mainly by BER, with participation of Ntg1, Ntg2 and Apn1, however, we can not discharge the possible involvement of mismatch repair pathway - MMR, since we previous observed G2 arrest in SW620 human colon adenocarcinoma cells.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-10-23T19:18:43Z No. of bitstreams: 1 2017_LarizzaHellenSantanaMatos.pdf: 5243956 bytes, checksum: 709a3338ac77e8199576d4994ea2209b (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-10-24T14:42:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_LarizzaHellenSantanaMatos.pdf: 5243956 bytes, checksum: 709a3338ac77e8199576d4994ea2209b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-24T14:42:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_LarizzaHellenSantanaMatos.pdf: 5243956 bytes, checksum: 709a3338ac77e8199576d4994ea2209b (MD5) Previous issue date: 2017-10-24 / O câncer é uma doença complexa e multifatorial que possui alta incidência e mortalidade em todo mundo. Os fármacos utilizados na terapia convencional apresentam inúmeros efeitos adversos e resistências, portanto existe a necessidade de desenvolvimento de novos antineoplásicos mais seguros e eficazes. O monastrol surgiu como uma opção para o tratamento do câncer e derivados diidropirimidinonas foram sintetizados e seu efeito antitumoral investigado. Os compostos 4p e 4bc apresentaram em estudos prévios atividade citotóxica contra linhagens de adenocarcinoma (MCF-7 e MDA-MB-231), sendo seletiva para as células tumorais. Diante dos resultados in vitro o presente estudo tem como objetivo a avaliação toxicológica aguda in vivo desses derivados e traçar o perfil da biodisponibilidade. Inicialmente foi avaliada a toxicidade após administração oral do 4p e 4bc, logo depois através de um estudo adicional pela via intravenosa apenas para o 4bc, não sendo observada morte, sinais clínicos de toxicidade em todas as doses e vias avaliadas. Com base nesse estudo para a exposição oral os compostos foram classificados como categoria 5 pela GHS. Também não foram reveladas alterações clinicamente relevantes no consumo de ração, água, ganho de peso e índice dos órgãos em ambos os estudos. Os exames histológicos e anatomopatológicos revelaram normalidade em todos os grupos dos ensaios. Através dos exames hematológicos e bioquímicos os parâmetros que se apresentavam fora da normalidade para a administração oral (Leucócitos, Monócitos, Contagem de plaquetas, Ureia) e intravenosa (Leucócitos, Monócitos, Contagem de plaquetas, Ureia e AST) foram relatados para todos os grupos, indicando não ser um efeito da exposição aos DHPMs. A diferença significativa e clinicamente relevante reportada entre todos os grupos tratados e os controles foi revelada após a administração pela via intravenosa do 4bc, para os parâmetros triglicerídeos e glicose. Não foram determinados os compostos no sangue após exposição aguda oral e intravenosa através da cromatografia líquida de alta eficiência e ensaio de luminescência. Os resultados sugerem baixa toxicidade aguda pelas vias avaliadas, sendo necessária a continuidade dos estudos e toxicidade e avaliar mais profundamente o perfil farmacocinético dos derivados 4p e 4bc. / Cancer is a complex and multifactorial disease that has a high incidence and mortality worldwide. Drugs used in conventional therapy have numerous adverse effects and resistance. The development safer and more effective antineoplastic agents. Monastrol emerged as an option for the treatment of cancer and dihydropyrimidinone derivatives were synthesized and its antitumor effect investigated. Compounds 4p and 4bc showed selective cytotoxicity for tumor cells in previous studies against adenocarcinoma (MCF-7 and MDA-MB-231) lines. In view of the in vitro results, the present study has as its objective the acute toxicological evaluation in vivo of these derivatives and to trace the bioavailability profile. Initially toxicity was assessed following oral administration of 4p and 4bc, and then further study by intravenous route only for 4bc, and no clinical signs of toxicity were observed at all doses and routes evaluated. Based on this study for oral exposure the compounds were classified as category 5 by the GHS. Further analysis showed no clinically relevant changes in feed intake, water intake, weight gain and organ index. Histological and anatomopathological studies revealed normality in all groups of the trials. Hematological and biochemical tests revealed abnormal parameters for oral administration (Leukocytes, Monocytes, Platelet Count, Urea) and intravenous (Leukocytes, Monocytes, Platelet Count, Urea and AST) were reported for all groups, indicating not to be an effect of exposure to DHPMs. The significant and clinically relevant difference reported between all treated groups and controls was revealed following intravenous administration of 4bc for the triglycerides and glucose parameters. No compounds were determined in the blood after acute oral and intravenous exposure through high performance liquid chromatography and luminescence assay. The results suggest low acute toxicity by the routes evaluated, and the continuity of the studies and toxicity is necessary and more deeply evaluate the pharmacokinetic profile of derivatives 4p and 4bc.

O acúmulo de mutações, alterações incorporadas ao patrimônio genético de células somáticas e germinais, pode causar redução de populações naturais que são críticas para a cadeia alimentar, pondo em risco a sobrevivência de determinadas espécies. Embora o dano causado pela contaminação química ocorra em nível molecular, existem efeitos emergentes nas populações, tais como perda da diversidade genética, que não é previsível com base somente no conhecimento dos mecanismos de toxicidade não genéticos. Alguns compostos de origem antrópica tendem a adsorver no material orgânico do sedimento, sendo concentrados ao longo do tempo. Contaminantes ambientais podem ser mais associados com a porção fina dos sedimentos (silte ou argila) do que com a grosseira (areia ou cascalho). O presente estudo avaliou a atividade mutagênica e citotóxica de extratos moderadamente polares de sedimento em três pontos durante 5 coletas realizadas nos anos de 1999 e 2000 no arroio Bom Jardim, que drena a região do Complexo Petroquímico, localizado no município de Triunfo, Rio Grande do Sul. Foi utilizado na avaliação da mutagenicidade e citotoxicidade o ensaio Salmonella/microssoma, método de microssuspensão. A análise de granulometria mostrou um conteúdo de partículas finas em média menor no ponto em frente ao complexo, sendo este também o ponto amostral com menor percentual de material orgânico extraído. Observou-se baixa atividade mutagênica nos diferentes locais estudados, variando de 3,3% até 8,3%, sendo a citototoxicidade o mais importante efeito biológico observado na região, variando de 20% até 40%, somados os resultados dos ensaios em presença e ausência de metabolização externa. Os pontos com maior contaminação estão localizados em frente e a jusante da área industrial, havendo uma distribuição gradativa e sazonal das respostas à medida que o local se aproxima da foz do arroio. Em ensaios com ausência de fração de metabolização hepática, as respostas para mutagênese e citotoxicidade foram mais freqüentes, sendo os danos do tipo erro no quadro de leitura os mais presentes. A determinação da atividade mutagênica e citotóxica em amostras de sedimento mostrou-se importante na determinação da qualidade ambiental, apesar da composição química desta matriz ser bastante complexa. O ensaio Salmonella/microssoma monitorando danos moleculares e, principalmente citotoxicidade, foi uma ferramenta importante no diagnóstico da presença de poluentes. A possibilidade de avaliar danos precoces, através deste ensaio, promove a melhoria da qualidade ambiental e motiva ações de preservação do patrimônio genético da fauna e flora atingidas pela atividade antrópica.

Orientador: Marcia Carneiro Valera / Co-orientador: Samira Esteves Afonso Camargo / Banca: Ana Paula Martins Gomes / Banca: Bruno das Neves Cavalcanti / Banca: Renato de Toledo Leonardo / Banca: Renato Miotto Palo / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a citotoxicidade, produção de espécies reativas de oxigênio, análise de marcadores celulares e presença de TNFα em macrófagos após exposição a agentes clareadores. Foram utilizadas culturas celulares de macrófagos RAW 264.7 expostas a dois géis clareadores: Peróxido de hidrogênio 40% e Peróxido de Carbamida 20% e ao Peróxido de Hidrogênio puro (10%) que atuou como controle positivo, em diversos períodos de avaliação. Esses clareadores foram utilizados sozinhos e aditivados à NAC e ao BSO. A viabilidade celular foi determinada pelo ensaio MTT, assim como a sobrevivência celular foi avaliada pelo ensaio cristal violeta. A liberação de espécies reativas de oxigênio foi mensurada utilizando uma sonda fluorescente sensível a oxidação-H2DCF-D. Para a verificação da presença dos marcadores celulares CD14, CD40 e CD54, envolvidos no processo inflamatório e na resposta imune, foi utilizada a citometria de fluxo, enquanto que a produção de TNFα foi quantificada por ELISA. A análise estatística foi realizada através do teste Mann-Whitney com nivel de significancia a 5%. Os resultados obtidos permitiram concluir que: todos os peróxidos diminuiram a viabilidade e a sobrevivência celular, sendo a toxicidade desses clareadores porporcional às suas concentrações; todos os peróxidos estimularam a produção de ROS, sendo que a NAC apresentou tendência a diminuir essa produção, enquanto que o BSO apresentou efeito oposto; a expressão dos marcadores celulares foram aumentadas pelo uso do LPS, sendo o marcador mais expresso o CD54, seguido pelo CD40 e CD14; a estimulação por LPS aumentou a produção de TNFα e os peróxidos tiveram a tendência a aumentar essa produção / Abstract: The aim of this study was to evaluate the cytotoxicity, production of reactive oxygen species, analysis of cellular markers and the presence of TNFa in macrophages after exposure to bleaching agents. Cultures of RAW 264.7 macrophages were exposed to two bleaching gels: 40% Hydrogen Peroxide 20% Carbamide Peroxide; 10% pure Hydrogen Peroxide served as positive control, in different periods. These bleaching agents were used alone and associated with NAC and BSO. Cell viability was determined by MTT assay, and cell survival was assessed by crystal violet assay. The release of reactive oxygen species was measured using a fluorescent probe sensitive to oxidation-H2DCF-D. To verify the presence of the surface markers CD14, CD40, and CD54, involved in the inflammatory and immune response, it was used a flow cytometry, while the production of TNFa was measured by ELISA. Statistical analysis was performed using the Mann-Whitney test with a significance level of 5%. Results conclued that: all peroxides decreased the viability and cell survival, and toxicity of these bleaching was in proportion to their concentrations; all peroxides stimulated ROS production, and NAC showed a tendency to reduce this production while the BSO showed the opposite effect; the expression of surface markers were increased by the use of LPS, and the more expressed surface markers was the CD54, followed by CD40 and CD14; LPS stimulation increased the production of TNFα and peroxides had the tendency to increase this production, with the exception of higher concentrations, where most of the cells were dead / Doutor

Orientador: Hérida Regina Nunes Salgado / Coorientador: Marcos Antonio Corrêa / Banca: Gislaine Leonardi Ricci / Banca: Lorena Rigo Gaspar Cordeiro / Resumo: Os compostos fenólicos ocorrem de maneira universal no reino vegetal, sendo os ácidos cinâmicos integrantes desse grupo de compostos orgânicos. O ácido cafeico (AC) é um desses representantes, com potente ação antioxidante e induz a produção de colágeno, prevenindo o envelhecimento precoce da pele. As clássicas emulsões são muito utilizadas pelo consumidor pelo sensorial agradável e refrescante que proporcionam, no entanto, preparações desenvolvidas na forma de filme ou película seca apresentam-se como uma alternativa tecnológica pela sua facilidade e segurança no transporte, já que o peso e risco de vazamento são inconvenientes praticamente eliminados. O objetivo deste trabalho foi estudar da eficácia, citotoxicidade, estabilidade, liberação, permeação e retenção do ácido cafeico veiculado em um filme e uma emulsão através de experimentos in vitro. Dentre os estudos realizados constam as avaliações do Fator de Proteção Solar in vitro, da atividade inibidora da tirosinase, da atividade antioxidante através de duas metodologias analíticas (DPPH e ABTS), avaliação do potencial citotóxico, caracterização qualitativa do AC por ultravioleta e infravermelho, validação de uma metodologia analítica para quantificação de AC por CLAE e espectrofotometria no UV e estudos de liberação, permeação e retenção cutânea in vitro. O AC apresentou elevada atividade antioxidante, pode ser usado como um aditivo para incremento do FPS de formulações e sua atividade despigmentante poderia até ser considerada quando for aplicado em elevadas concentrações. Pelos estudos de citotoxicidade in vitro realizados verificou-se que o AC é seguro nas concentrações utilizadas. Também foi observada uma elevada liberação do ativo da formulação e permeação reduzida, indicando que ele foi capaz de permanecer retido na epiderme/derme, local onde deve ter ação. Os métodos analíticos desenvolvidos foram validados ... / Abstract: Phenolic compounds occur universally in the plant kingdom and cinnamic acids are part of this group of organic compounds. The caffeic acid is one of these representatives with powerful antioxidant activity, increasing collagen production and preventing premature aging of the skin. The classic emulsions are widely used by the consumer by providing pleasant refreshing sensorial, however, preparations developed in the form of dry film are presented as a technological alternative for its ease and safety in transportation. The aim of this study was to evaluate the efficacy, cytotoxicity, stability, release, permeation and retention of caffeic acid in a film and an emulsion through in vitro experiments. Among the studies are the evaluations of the Sun Protection Factor, the inhibiting tyrosinase activity, antioxidant activity using two analytical methodologies (DPPH and ABTS), evaluation of the cytotoxic potential, qualitative characterization of caffeic acid by ultraviolet and infrared absorptions, validation of analytical methods for quantification of caffeic acid by HPLC and UV spectrophotometry, and release studies, skin permeation and retention in vitro. Caffeic acid showed high antioxidant activity. It can be used as an additive to increase the SPF of formulations and its depigmenting activity could even be considered when applied at high concentrations. It was found that the caffeic acid is safe in the concentrations used, for in vitro cytotoxicity studies. A high release of active compound and reduced permeation was also observed, indicating that it was able to remain retained in the epidermis/dermis, where it should have action. The analytical methods developed were validated ensuring all parameters of linearity, specificity, precision, accuracy and robustness established. The emulsion was subjected to various stress conditions and remained stable throughout the 90 days in the accelerated stability study. / Mestre

Orientador: Carlos Henrique Ribeiro Camargo / Banca: Bruno das Neves Cavalcanti / Banca: Marcia Carneiro Valera / Banca: Vivien Thiemy Sakai / Banca: José Flávio Affonso de Almeida / Resumo: Na Endodontia, estudos têm demonstrado avanços nas terapias reparativas e regenerativas que visam à recuperação da vitalidade e função do tecido pulpar. Para isso são realizadas técnicas conservadoras como o capeamento pulpar e pulpotomia. Os materiais bioativos comumente empregados durante o capeamento pulpar são o MTA e o Ca(OH)2 PA. Porém, um novo material denominado Biodentine, a base silicato de tricálcio, está sendo comercializado com o mesmo propósito. Contudo, os efeitos biológicos deste cimento ainda não são claros, principalmente em se tratando da polpa a ser regenerada. Desta forma, este trabalho avaliou os efeitos destes materiais sobre células progenitoras. A biocompatibilidade da Biodentine, MTA e Ca(OH)2 foi analisada por ensaios de citotoxicidade (XTT e SRB), após 1, 3 e 5 dias do contato das células com os materiais. Os processos funcionais de mineralização foram verificados pela quantificação da atividade da enzima fosfatase alcalina (ALP) envolvida no processo de mineralização, bem como pela observação da formação de nódulos mineralizados pelo ensaio de alizarin vermelho. Os resultados foram submetidos aos testes estatísticos (ANOVA e Tukey 5%) e demonstraram uma significativa biocompatibilidade da Biodentine nos ensaios de citotoxicidade. Contudo, o cimento de Ca(OH)2 foi o material que estimulou a maior atividade de ALP. Além disso, todos os cimentos propiciaram a formação de nódulos mineralizados a partir do sétimo dia, no teste do alizarin vermelho. Pôde-se concluir que a Biodentine pode ser uma importante alternativa como material capeador nos procedimentos regenerativos / Abstract: With the use of principles of regenerative therapies in Endodontics, new tissue engineering strategies have showed success in the de novo formation of pulp tissue in animal models. The commonly used materials on the original dental pulp tissue are the MTA and calcium hydroxide. In addition, a new material known as Biodentine, based on tricalcium silicate, is new to the market, with the same purpose of the others. However, the biological effects and mechanisms of this bioactive material are not elucidated. This project evaluated the effects of these biomaterials on dental pulp stem cells. The biocompatibility of them was assessed by XTT and SRB assays, at 1, 3 and 5 days. The alkaline phosphatase activity assay and alizarin red staining of mineralized nodules was assessed by functional mineralization. The results were subjected to statistical analysis (ANOVA and Tukey 5%) and demonstrated a significant Biodentine's biocompatibility in cytotoxicity assays. However, Ca(OH)2 cement was the material that was most stimulated ALP activity. In addition, all cements enabled the formation of mineralized nodules from the seventh day, in alizarin red test / Doutor