O 5-Fluorouracil (5-FU) é um agente antitumoral amplamente empregado no tratamento de diversos tipos de cânceres. Embora haja muitos trabalhos publicados com este antineoplásico, estudos sobre seus mecanismos de ação ainda tornam-se necessários a fim de se obter protocolos clínicos mais eficazes. Desta forma, novos aspectos sobre seu mecanismo de citotoxicidade foram investigados neste trabalho. Na primeira parte foram avaliadas as vias de reparação de DNA que participam em resposta a danos induzidos pelo 5-FU e seus efeitos comparados com o seu metabólito ativo FdUMP em Saccharomyces cerevisiae. Os resultados apontam que as lesões induzidas pelo 5-FU podem ser processadas pela vias de reparo por excisão de bases (BER), reparação de bases mal-emparelhadas (MMR), reparo pós-replicativo (PRR) e recombinação homóloga (HR), enquanto que os danos induzidos pelo FdUMP seriam reconhecidos e removidos apenas pelas vias BER e MMR. Estas diferenças no recrutamento das vias de reparo relacionam-se aos diferentes tipos de lesões que são geradas pelos antimetabólitos: o 5-FU induz quebras de fita simples (SSBs) e duplas (DSBs), enquanto que o FdUMP forma principalmente SSBs. Na segunda parte foi investigada a participação de modeladores da cromatina na citotoxicidade do 5-FU em S. cerevisiae. Os resultados em conjunto sugerem que os remodeladores da cromatina dependentes de ATP e algumas acetiltransferases de histona podem influenciar na citotoxicidade do agente 5-FU, possivelmente atuando no relaxamento da cromatina, e assim facilitando os processos de reparação de DNA por HR e PRR. Na terceira parte foi avaliada a resposta ao dano no DNA por ATR/Chk1 e ATM/Chk2 em células tumorais humanas. Os resultados mostraram que o 5-FU ativa principalmente a via ATR/Chk1. Ao se investigar os efeitos do 5-FU em combinação com o AZD7762, um inibidor de Chk1/2, observou-se aumento de sensibilidade ao agente antitumoral, diretamente relacionado ao aumento de células em sub-G1, diminuição em G2/M e indução de mitose prematura. Os resultados em conjunto obtidos neste trabalho nos permitem uma melhor compreensão destes mecanismos de ação do 5-FU, e fornece subsídios para melhora de protocolos terapêuticos. / 5-Fluorouracil (5-FU) is an antitumor drug employed in the treatment of several cancer types. Despite many studies have been conduced with this antineoplasic drug, investigations concerning on its action mechanism become necessary in order to obtain more efficient clinical protocols. Therefore, new aspects about its cytotoxicity mechanism were investigated in this work. First, DNA repair pathways involved in the repair of 5-FU-induced lesions were evaluated and compared to the effects of its active metabolite FdUMP in Saccharomyces cerevisiae. Our data showed that lesions induced by 5-FU may be processed by base excision repair (BER), mismatch repair (MMR), post-replication repair (PRR) and homologous recombination (HR), while FdUMP lesions are recognized and removed only by BER and MMR. These differences in repair pathways recruitment are related to the different lesion types induced by the antimetabolites: 5-FU induces single- and double stranded breaks (SSBs and DSBs), while FdUMP induces mainly SSBs. In the second part we investigated the participation of chromatin remodeling in the 5- FU cytotoxicity in S. cerevisiae. Together, our data suggest that ATP-dependent chromatin remodeling and some histone acetyltransferases may influence 5-FU cytotoxicity, probably acting in chromatin relaxation and facilitating DNA repair process by HR and PRR. In the third part, the DNA damage response by ATR/Chk1 and ATM/Chk2 were evaluated in human tumor cells. The data showed that 5-FU activates mainly ATR/Chk1 pathway. When we investigate the effects of 5-FU in combination with AZD7762, the Chk1/2 inhibitor, we observed increased sensitivity to this antitumor agent, directly related to enhanced number of sub-G1 cells, decrease in the G2/M cells, and premature mitose induction. Our data permit a better comprehension of 5-FU action mechanisms and provide clues to improve the current therapeutics protocols.

O 5-Fluorouracil (5-FU) é um agente antitumoral amplamente empregado no tratamento de diversos tipos de cânceres. Embora haja muitos trabalhos publicados com este antineoplásico, estudos sobre seus mecanismos de ação ainda tornam-se necessários a fim de se obter protocolos clínicos mais eficazes. Desta forma, novos aspectos sobre seu mecanismo de citotoxicidade foram investigados neste trabalho. Na primeira parte foram avaliadas as vias de reparação de DNA que participam em resposta a danos induzidos pelo 5-FU e seus efeitos comparados com o seu metabólito ativo FdUMP em Saccharomyces cerevisiae. Os resultados apontam que as lesões induzidas pelo 5-FU podem ser processadas pela vias de reparo por excisão de bases (BER), reparação de bases mal-emparelhadas (MMR), reparo pós-replicativo (PRR) e recombinação homóloga (HR), enquanto que os danos induzidos pelo FdUMP seriam reconhecidos e removidos apenas pelas vias BER e MMR. Estas diferenças no recrutamento das vias de reparo relacionam-se aos diferentes tipos de lesões que são geradas pelos antimetabólitos: o 5-FU induz quebras de fita simples (SSBs) e duplas (DSBs), enquanto que o FdUMP forma principalmente SSBs. Na segunda parte foi investigada a participação de modeladores da cromatina na citotoxicidade do 5-FU em S. cerevisiae. Os resultados em conjunto sugerem que os remodeladores da cromatina dependentes de ATP e algumas acetiltransferases de histona podem influenciar na citotoxicidade do agente 5-FU, possivelmente atuando no relaxamento da cromatina, e assim facilitando os processos de reparação de DNA por HR e PRR. Na terceira parte foi avaliada a resposta ao dano no DNA por ATR/Chk1 e ATM/Chk2 em células tumorais humanas. Os resultados mostraram que o 5-FU ativa principalmente a via ATR/Chk1. Ao se investigar os efeitos do 5-FU em combinação com o AZD7762, um inibidor de Chk1/2, observou-se aumento de sensibilidade ao agente antitumoral, diretamente relacionado ao aumento de células em sub-G1, diminuição em G2/M e indução de mitose prematura. Os resultados em conjunto obtidos neste trabalho nos permitem uma melhor compreensão destes mecanismos de ação do 5-FU, e fornece subsídios para melhora de protocolos terapêuticos. / 5-Fluorouracil (5-FU) is an antitumor drug employed in the treatment of several cancer types. Despite many studies have been conduced with this antineoplasic drug, investigations concerning on its action mechanism become necessary in order to obtain more efficient clinical protocols. Therefore, new aspects about its cytotoxicity mechanism were investigated in this work. First, DNA repair pathways involved in the repair of 5-FU-induced lesions were evaluated and compared to the effects of its active metabolite FdUMP in Saccharomyces cerevisiae. Our data showed that lesions induced by 5-FU may be processed by base excision repair (BER), mismatch repair (MMR), post-replication repair (PRR) and homologous recombination (HR), while FdUMP lesions are recognized and removed only by BER and MMR. These differences in repair pathways recruitment are related to the different lesion types induced by the antimetabolites: 5-FU induces single- and double stranded breaks (SSBs and DSBs), while FdUMP induces mainly SSBs. In the second part we investigated the participation of chromatin remodeling in the 5- FU cytotoxicity in S. cerevisiae. Together, our data suggest that ATP-dependent chromatin remodeling and some histone acetyltransferases may influence 5-FU cytotoxicity, probably acting in chromatin relaxation and facilitating DNA repair process by HR and PRR. In the third part, the DNA damage response by ATR/Chk1 and ATM/Chk2 were evaluated in human tumor cells. The data showed that 5-FU activates mainly ATR/Chk1 pathway. When we investigate the effects of 5-FU in combination with AZD7762, the Chk1/2 inhibitor, we observed increased sensitivity to this antitumor agent, directly related to enhanced number of sub-G1 cells, decrease in the G2/M cells, and premature mitose induction. Our data permit a better comprehension of 5-FU action mechanisms and provide clues to improve the current therapeutics protocols.

O 5-fluorouracil (5-FU) é um antineoplásico análogo pirimídico empregado no tratamento de muitos tipos de cânceres. Três diferentes mecanismos de citotoxicidade são atribuídos a este agente: incorporação de fluoronucleotídeos no DNA ou RNA e a inibição da enzima timidilato sintase. O 5-FU pode ser convertido ao seu metabólito ativo, o 5-fluoro-2´-deoxiuridina-5´-monofosfato (FdUMP), que por sua vez, pode inibir a enzima timidilato sintase (TS), responsável pela síntese de timidina monofosfato a partir de uridina monofosfato; a inibição de TS leva ao desbalanço do pool de nucleotídeos, diminuindo a concentração de dTTP, aumentando a de dUTP e, como conseqüência, levando à incorporação de uracil na cadeia de DNA. No presente estudo comparamos a atividade citotóxica de 5-FU e de seu metabólito FdUMP e as vias de reparação de DNA envolvidas na eliminação das lesões induzidas por estas substâncias. A atividade citotóxica foi avaliada em células de adenocarcinoma de cólon humano, linhagem SW620. As vias de reparação foram estudadas em linhagens de Saccharomyces cerevisiae deficientes em genes de reparo para excisão de bases (BER), excisão de nucleotídeos (NER), recombinação homóloga (HR), recombinação não-homóloga (NHEJ) e síntese translesão (TLS). Para se investigar a possível sobreposição das vias de reparo, foram empregados quádruplos mutantes em BER e NER, HR ou TLS. Os resultados em células tumorais humanas mostraram que tanto 5-FU, quanto FdUMP desencadeiam morte celular por apoptose. Ao avaliar a progressão do ciclo celular, observou-se que 5-FU leva a parada em G1, enquanto que FdUMP, parada em G2. Com a finalidade de se investigar se estas paradas de ciclo celular estariam relacionadas a quebras de DNA, foram empregados ensaios de fosforilação da histona H2AX e os testes de cometa alcalino e de micronúcleos. Observou-se que ambas as drogas induzem fragmentação no DNA, uma vez que foram observadas quebras de fita simples e formação de micronúcleos. Logo, a diferença na progressão do ciclo celular não está relacionada com a habilidade das drogas em induzir quebras. Desta forma, sugere-se que o efeito diferencial de 5-FU e FdUMP na progressão do ciclo celular depende do tipo de lesão induzida pelas drogas e as vias de reparação de DNA implicadas no reconhecimento das mesmas. Ao empregar linhagens de S. cerevisiae proficientes e deficientes em reparo tratadas com 5-FU e FdUMP, observou-se que a proteína Apn1 é de extrema importância no reparo das mesmas, uma vez que apn1Δ foi o mais sensível de todos mutantes e ntg1Δntg2Δapn1Δ apresentou grande sensibilidade aos tratamentos com ambas as drogas. As lesões causadas por 5-FU seriam reconhecidas principalmente pela Ntg2, o que resulta em significativa sensibilidade em ntg2Δ e ntg1Δntg2Δ. Entretanto, para o reconhecimento dos danos por FdUMP são necessárias a participação tanto de Ntg1 quanto Ntg2, como visto na elevada sensibilidade do duplo mutante ntg1Δntg2Δ. As deficiências em Ung1 e Rad27 não revelaram diferenças significativas em relação às linhagens selvagens, bem como nos mutantes em NER (rad1Δ e rad10Δ), HR (rad52Δ), NHEJ (rad50Δ) e TLS (rev1Δ e rev3Δ), para ambas as drogas. No emprego de quádruplos mutantes, verificou-se que ntg1Δntg2Δapn1Δrad52Δ mostrou uma acentuada sensibilidade quando tratado com 5-FU. Estes resultados sugerem que os danos gerados por 5-FU poderiam ser reconhecidos e removidos pela DNA glicosilase Ntg2 e AP endonucleases Apn1 do BER, levando a quebras de fita simples e dupla de DNA, que seriam reparadas por HR (Tipo RAD52). Entretanto, para o tratamento com FdUMP não foram observadas diferenças significativas quando comparado com a linhagem selvagem. Ao analisar a sensibilidade dos mutantes ntg1Δntg2Δapn1Δrad1Δ e ntg1Δntg2Δapn1Δrev3Δ, verificou-se que os mesmos não foram sensíveis ao tratamento com FdUMP, entretanto apresentaram moderada sensibilidade quando tratados com 5-FU. O conjunto desses resultados nos leva a sugerir que uma pequena parte dos sítios AP produzidos pelo tratamento com 5-FU poderia ser processada por NER e TLS, sendo a participação de HR a mais importante. As lesões geradas por FdUMP seriam reparadas principalmente por BER, com a participação de Ntg1, Ntg2 e Apn1, porém não pode ser descartado o possível envolvimento da reparação de bases mal-emparelhadas - MMR, uma vez que se observou previamente, uma parada no ciclo celular em G2 em células de adenocarcinoma de cólon humano SW620. / 5-fluorouracil (5-FU) is an antineoplastic drug pyrimidic analogue employed in the treatment of several cancers. Three different mechanisms of cytotoxicity are attributed to this agent: misincorporation of fluoronucleotides in DNA or RNA and inhibition of thymidilate sintase enzime. 5-FU could be converted to its active metabolite, 5-fluoro-2´-deoxiuridina-5´-monofosfato (FdUMP), that could inhibit the thymidilate sintase (TS), related to thymidine synthesis from uridine; TS inhibition leads to nucleotide pool imbalance, decreasing thymine concentration and increasing uracil, as consequence, it leads to uracil incorporation into DNA. The present study compared the cytotoxic activity of 5-FU and its active metabolite FdUMP, and the DNA repair pathways involved in removing lesions induced by these substances. Cytotoxicity was evaluated in human colon adenocarcinoma cells, SW620. DNA repair pathwayas were studied in Saccharomyces cerevisiae deficient in base excision repair (BER), nucleotide excision repair (NER), homologous recombination (HR), non-homologous end joining (NHEJ) and translesion synthesis (TLS). To investigate the overlapping of DNA repair pathways, we employed quadruple mutants in BER and NER, HR or TLS. Results in human tumor cells showed that both 5-FU and FdUMP induce cell death by apoptosis. When we investigated the cell cycle progression, we observed that 5-FU lead G1 arrest, while FdUMP induced G2 arrest. In order to investigate if these arrests would be related to DNA breaks, alkaline comet assay, fosforilation of H2AX histone and micronucleus assay were employed. We observed that both drugs induce DNA fragmentation, since single strand breaks and micronucleus were evidenced. Thus, the difference in cell cycle progression is not related to the ability of 5-FU and FdUMP in induce breaks. This way, we suggest that the differential effect of 5-FU and FdUMP in cell cycle progression depends on the type of lesion originated by drugs and the DNA repair pathways implicated in recognize them. By employing S. cerevisiae strains proficient and deficient in DNA repair treated with 5-FU and FdUMP, it was observed that Apn1 protein is extremely important in repairing these lesions, since apn1Δ was the most sensitive of all mutants employed and ntg1Δntg2Δapn1Δ showed high sensitivity to treatments with both drugs. Lesions caused by 5-FU would be recognized mainly by Ntg2, what results in significant sensitivity in ntg2Δ and ntg1Δntg2Δ. However, for recognition of FdUMP damage it is necessary the participation of both Ntg1 and Ntg2, as observed in high sensitivity of ntg1Δntg2Δ double mutant. Deficiencies in Ung1 and Rad27 did not reveal significant differences in relation to WT, as well as mutants in NER (rad1Δ e rad10Δ), HR (rad52Δ), NHEJ (rad50Δ) e TLS (rev1Δ e rev3Δ), for both drugs. When we employed quadruple mutants, we verified that ntg1Δntg2Δapn1Δrad52Δ showed higher sensitivity when treated with 5-FU. These data suggest that damage generated by 5-FU could be recognized and removed by DNA glycosylases Ntg2 and AP endonuclease Apn1 from BER, generating DNA single and double strand breaks, that could be repaired by HR (RAD52 Type). However, for FdUMP, we did not observe significant differences in comparison to WT. By investigating the sensitivity of ntg1Δntg2Δapn1Δrad1Δ and ntg1Δntg2Δapn1Δrev3Δ, we observed that they were not sensitized by FdUMP, however, they present a slight sensitivity when treated with 5-FU. These results lead us to suggest that a small part of AP sites generated by 5-FU could be processed by NER and TLS, and HR would be the most significant. Lesions by FdUMP would be repaired mainly by BER, with participation of Ntg1, Ntg2 and Apn1, however, we can not discharge the possible involvement of mismatch repair pathway - MMR, since we previous observed G2 arrest in SW620 human colon adenocarcinoma cells.

O acúmulo de mutações, alterações incorporadas ao patrimônio genético de células somáticas e germinais, pode causar redução de populações naturais que são críticas para a cadeia alimentar, pondo em risco a sobrevivência de determinadas espécies. Embora o dano causado pela contaminação química ocorra em nível molecular, existem efeitos emergentes nas populações, tais como perda da diversidade genética, que não é previsível com base somente no conhecimento dos mecanismos de toxicidade não genéticos. Alguns compostos de origem antrópica tendem a adsorver no material orgânico do sedimento, sendo concentrados ao longo do tempo. Contaminantes ambientais podem ser mais associados com a porção fina dos sedimentos (silte ou argila) do que com a grosseira (areia ou cascalho). O presente estudo avaliou a atividade mutagênica e citotóxica de extratos moderadamente polares de sedimento em três pontos durante 5 coletas realizadas nos anos de 1999 e 2000 no arroio Bom Jardim, que drena a região do Complexo Petroquímico, localizado no município de Triunfo, Rio Grande do Sul. Foi utilizado na avaliação da mutagenicidade e citotoxicidade o ensaio Salmonella/microssoma, método de microssuspensão. A análise de granulometria mostrou um conteúdo de partículas finas em média menor no ponto em frente ao complexo, sendo este também o ponto amostral com menor percentual de material orgânico extraído. Observou-se baixa atividade mutagênica nos diferentes locais estudados, variando de 3,3% até 8,3%, sendo a citototoxicidade o mais importante efeito biológico observado na região, variando de 20% até 40%, somados os resultados dos ensaios em presença e ausência de metabolização externa. Os pontos com maior contaminação estão localizados em frente e a jusante da área industrial, havendo uma distribuição gradativa e sazonal das respostas à medida que o local se aproxima da foz do arroio. Em ensaios com ausência de fração de metabolização hepática, as respostas para mutagênese e citotoxicidade foram mais freqüentes, sendo os danos do tipo erro no quadro de leitura os mais presentes. A determinação da atividade mutagênica e citotóxica em amostras de sedimento mostrou-se importante na determinação da qualidade ambiental, apesar da composição química desta matriz ser bastante complexa. O ensaio Salmonella/microssoma monitorando danos moleculares e, principalmente citotoxicidade, foi uma ferramenta importante no diagnóstico da presença de poluentes. A possibilidade de avaliar danos precoces, através deste ensaio, promove a melhoria da qualidade ambiental e motiva ações de preservação do patrimônio genético da fauna e flora atingidas pela atividade antrópica.

Submitted by Heitor Rapela Medeiros (heitor.rapela@ufpe.br) on 2015-03-03T19:14:55Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Evanilson A. Feitosa.pdf: 2523769 bytes, checksum: 9d6b1fa981e3f9b8be339f3f00482c8b (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-03T19:14:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação Evanilson A. Feitosa.pdf: 2523769 bytes, checksum: 9d6b1fa981e3f9b8be339f3f00482c8b (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012-02-24 / FACEPE / Hirtella racemosa Lam. (Chrysobalanaceae), popularmente conhecida como ajururana, ajirú-do-mato ou murtinha, é um arbusto que se desenvolve em biomas como caatinga, restinga e cerrado. Com o objetivo de avaliar o potencial fitoquímico e farmacológico da espécie, este trabalho compreende três tópicos referentes ao estudo farmacognóstico: farmacobotânica, fitoquímica e atividades biológicas. Para caracterização botânica da espécie foram realizados cortes histológicos que revelaram a presença, no caule, de periderme com 2-4 camadas de súber, lenticelas, idioblastos contendo drusas no córtex e floema. Na folha, foi observada a presença de pelos tectores simples, estômatos do tipo paracítico, idioblastos contendo drusas no parênquima. O estudo fitoquímico realizado em CCD (cromatografia em camada delgada) identificou constituintes terpênicos, flavonoídicos, saponinas e proantocianidinas nas folhas. Foi realizada a extração dos metabólitos em aparelho de Soxhlet, utilizando solventes de polaridades distintas para posterior avaliação das atividades biológicas de H. racemosa. Procedeu-se ao ensaio de toxicidade aguda não revelando-se tóxica na dose de 2000 mg/Kg. No ensaio de peritonite induzida por carragenina, para avaliação de atividade anti-inflamatória, foi observada atividade na dose de 200 mg/Kg para os extratos utilizados. Experimentos in vitro utilizando culturas de células cancerígenas demonstraram potencial citotóxico contra a linhagem de câncer de pulmão humano (NCI-H-292) e potencial moderado contra linhagens de carcinoma de cólon (HT29) e laringe (HEp-2). A partir de todos os resultados obtidos com esta pesquisa, torna-se possivel expressar que os estudos botânicos, fitoquímico e avaliação preliminar das atividades anti-inflamatória e citotóxica de H. racemosa, contribuem para o conhecimento de uma espécie com potenciais químico e farmacológico inexplorados, podendo vir a colaborar futuramente no arsenal terapêutico.

Submitted by Ramon Santana (ramon.souza@ufpe.br) on 2015-03-04T14:42:08Z No. of bitstreams: 2 Tese Jose Antonio Pereira Jr.pdf: 3933563 bytes, checksum: 376666e17ed53d90fbfd8bacea4c41ce (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-04T14:42:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese Jose Antonio Pereira Jr.pdf: 3933563 bytes, checksum: 376666e17ed53d90fbfd8bacea4c41ce (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013 / CAPES (Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior) / O uso de cogumelos para fins medicinais é muito antigo, onde o basidiomiceto Ganoderma lucidum tem posição de destaque no Japão e na tradicional medicina chinesa, sendo relatadas atividades antitumorais, antivirais, antibacteriana, dentre outras. Várias espécies com superfície lacada são confundidas com G. lucidum, entre elas Ganoderma parvulum Murrill, uma espécie tropical que pode representar potencial econômico, respeitando-se a biodiversidade local. O presente trabalho objetivou avaliar a atividade antibacteriana, concentração inibitória mínima (CIM) e a atividade citotóxica dos extratos metanólico e em acetato de etila de G. parvulum, a atividade antibacteriana e a CIM do óleo essencial, bem como fornecer dados para caracterização da droga fúngica. Para os extratos estudados, tanto a atividade antibacteriana como citotóxica foram observadas apenas para o extrato em acetato de etila. A atividade antibacteriana foi considerada moderada frente a Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis e Micrococcus luteus. A atividade citotóxica em dose única de 50 μg/ml de extrato foi de 71,94 ± 2,04% contra a linhagem de células HT-29 e 90,02 ± 2,17% contra a linhagem de células HEp-2. O óleo essencial teve atividade antimicrobiana contra as bactérias gram-positivas (Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis e Micrococcus luteus) e gram-negativas (Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae e Pseudomonas aeruginosa), contudo bactérias gram-positivas foram mais susceptíveis ao óleo essencial. Quanto à prospecção micoquímica, os compostos majoritários foram representados pelos esteróides e terpenóides, apresentando também flavonóides, derivados cinâmicos e fenilpropanoglicosídeos. A composição do óleo essencial foi analisada por cromatografia gasosa acoplada a espectroscopia de massas (CG-MS), onde os principais compostos foram o ácido benzóico, o sesquiterpeno aristolona mono-oxigenado, o 2,6-bis (1,1-dimetiletil)-4-metilfenol e o N-(2-hidroxi-4-oxo-4H-quinazolina-3-il)-benzamida. A morfoanatomia foi considerada fundamental para a identificação de G. parvulum, onde características como o tamanho do basidioma, tamanho do basidiósporo, o sistema hifálico, a coloração do contexto e linhas de deposição de material resinoso, foram características essenciais para distinção de G. parvulum. O tamanho das partículas do pó indicou se tratar de um pó moderadamente espesso por simples agregação das partículas, o teor de cinzas totais foi de 1,67 ± 0,14% e a perda por dessecação foi de 13% ± 0,07, dentro dos níveis encontrados para o gênero. Na análise microscópica do pó, a observação de hifas esqueléticas e de esporos de parede dupla e truncados, característicos do gênero, foram importantes para a identificação da droga. Os dados sobre teor de cinzas, perda por dessecação, análise granulométrica e microscópica do pó são inéditos para G. parvulum, bem como as atividades biológicas dos extratos estudados e do óleo essencial.

MAGALHÃES, Nereide Stela Santos, também é conhecida em citações bibliográficas por: SANTOS MAGALHÃES, Nereide Stela / Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-09-04T18:26:28Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Laércio Brandão de Arruda.pdf: 1177291 bytes, checksum: fb483cdf7e380354cf9068578179be9d (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-09-17T23:19:30Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Laércio Brandão de Arruda.pdf: 1177291 bytes, checksum: fb483cdf7e380354cf9068578179be9d (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-17T23:19:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Laércio Brandão de Arruda.pdf: 1177291 bytes, checksum: fb483cdf7e380354cf9068578179be9d (MD5) Previous issue date: 2013-08-30 / CAPES / Este estudo descreve como nanocápsulas convencionais e furtivas foram desenvolvidas e caracterizadas, para viabilizar o carreamento daβ-lapachona para sua utilização na terapêutica do câncer. Primeiramente, aβ-lapachona foi encapsulada em nanocápsulas de Poli-(ɛ)-caprolactona (PCL) e em nanocápsulas do copolímero Poli (ɛ-caprolactona)-polietileno glicol (PCL-PEG), seguindo o método de deposição interfacial do polímero pré-formado. Estas nanocápsulas foram caraterizadas pelo tamanho de partícula, índice de poli dispersão, eficiência de encapsulação e cinética de liberação in vitro. A avaliação da citotoxicidade foi realizada seguindo o método MTT, através de viabilidade celular de linhagem de células de leucemia promielocítica aguda (HL-60), câncer de mama(MCF-7), carcinoma de laringe humana (HEp-2) e carcinoma mucoepidermoide de pulmão humano (NCI-H292). E por fim, a atividade antitumoral in vivo da β-lapachona foi avaliada em camundongos machos Swiss inoculados com células de Sarcoma 180 (S-180),e estes animais receberam doses diárias de20 mg/kg/dia de β-lapachona encapsulado em nanocápsulas furtivas (NC-PCL-PEG/ β-lap) ou β-lapachona (β-lap) em suspensão por 7 dias. Os resultados demonstraram que o método de preparação foi eficiente na formação de nanocápsulas monodispersas (PDI<0,3), com tamanhos compreendidos entre150 e200 nm e com uma eficiência de encapsulação do fármaco de 98 ± 0,91% e 97 ± 1,3% para as nanocápsulas convencionais e furtivas, respectivamente. O perfil da cinética de liberação in vitro evidenciou uma liberação máxima da β-lapachona, através das nanocápsulas, em torno de 62,18 ± 3,93% e 66.29 ± 1,74% para PCL/β-lap ePCL-PEG/β-lap, respectivamente. No estudo de citotoxicidade, aβ-lapachona apresentou um efeito antiproliferativo relevante apenas na linhagem deMCF-7 (IC₅₀0,39μg/mL), onde ficou praticamente igual ao padrão DOX (IC₅₀ 0,32 μg/mL). De maneira geral aβ-lapachona, quando encapsulada, apresentou valores de IC₅₀ maiores que aβ-lapachona livre, com exceção na linhagem NCI-H292, o que provavelmente, deve-se ao fato de um mecanismo de captura celular diferenciado. Dessa forma o ensaio de MTT se mostrou bastante eficiente na avaliação de citotoxicidade da β-lapachona livre e encapsulada em relação ao padrão de análise (DOX). Nos estudos in vivo a atividade antitumoral da β-lapachona nanoencapsulada promoveu uma inibição da massa tumoral acima de 49,29%, quando comparado ao grupo controle, e de aproximadamente 15% quando comparado com o fármaco livre. / This study describes how conventional and stealth nanocapsules were developed and characterized to facilitate the conduction of β-lapachone for their use in cancer therapy. First, the β-lapachone has been encapsulated in nanocapsules Poly (ɛ)-caprolactone (PCL) and nanocapsules in the copolymer poly (caprolactone ɛ) - polyethylene glycol (PCL-PEG) by the method of pre-polymer interfacial deposition formed. These nanocapsules have been featured by the particle size, polydispersity index, encapsulation efficiency and in vitro release profile. The cytotoxicity assayment was performed following the method MTT cell viability through the line age of acute promyelocytic leukemia cells (HL-60), breast cancer (MCF-7), human laryngeal carcinoma(HEp-2) and human pulmonary mucoepidermoid carcinoma (NCI-H292). Finally, the in vivo antitumor activity of β-lapachone was evaluated in male Swiss mice inoculated with Sarcoma180 cells (S-180), and these animals received daily doses of 20mg/kg/day of β-lapachone encapsulated stealth nanocapsules (NC-PEG-PCL/β-lap)or β-lapachone(β-lap)in suspension for 7 days. The results showed that the preparation method was efficient in the formation of nanocapsules monodisperse(PDI<0.3),with sizes ranging between 150 and 200 nm and having a drug encapsulation efficiency of 98% and 97% for conventional and nanocapsules furtive, respectively. The profile of the in vitro release kinetics showed a maximum release of β-lapachone through the nanocapsules, around 62.18 ± 3.93%and 66.29 ± 1.74% for PCL/β-lap and PCL-PEG/β-lap, respectively. At cytotoxicity assayment β-lapachone presents a relevant antiproliferative effect only on MCF-7 cell line (IC₅₀ 0,39 μg/mL) where the result was barely equal when compared with standard analysis DOX (IC₅₀ 0,32 μg/mL). Thus, the MTT assay was very efficient in evaluating β-lapachone cytotoxicity of free and encapsulated compared to standard analysis (DOX). In studies in vivo antitumor activity of β-lapachone nanocoated promoted an inhibition of tumor mass up to 49.29% when compared to the control group, and approximately 15% when compared to the free drug.

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Nas últimas duas décadas, melhorias em diagnóstico e terapêutica foram realizadas, levando a queda de 23% na taxa de mortalidade por câncer; No entanto, o câncer ainda é uma das principais causas de morte mundialmente. Portanto, pesquisa básica e clínica são necessárias para reduzir a mortalidade relacionada ao câncer. Um total de 49 compostos híbridos contendo porções de piridil,1,3-tiazol e tiossemicarbazonas foram testados para avaliar o seu potencial anticâncer sendo realizado um estudo farmacológico de suas propriedades antitumorais em vários modelos biológicos in vitro, frente a linhagens de células tumorais humanas HL-60 (leucemia), MCF-7 (adenocarcinoma de mama), HepG2 (carcinoma hepatocelular), NCI-H292 (carcinoma de pulmão) e células não tumorais (PBMC, células mononucleares de sangue periférico humano) e in vivo em um modelo xenográfico de câncer de hepatocelular. Os compostos foram classificados em quatro grupos de acordo com a estrutura química de que são derivados: grupo TAP (TAP 01- 12) são 2-piridil 2,3-tiazois com um metil em C6. Os grupos TP (TP 01-12) são piridiltiazolil, os TS (TS 01 - 13) são tiossemicarbazonas e TZ (TZ 01 - 12) são compostos de benziltiazolil. A maioria dos compostos foi altamente citotóxico em pelo menos uma linhagem celular testada (IC₅₀≤ 3 μM), exceto o grupo benziltiazolil (TZ), sendo HL-60 a linhagem mais sensível e HepG2 a mais resistente. Os compostos TAP-07 ((2-(1-(piridin-2-il)ethileno)hidraziil)-4-(4-clorofenil)-1,3-thiazol) e TP-07 (2-(2-(piridin-2-ilmetileno)hidrazinil)-4-(4-clorofenil)-1,3-tiazol) apresentaram atividade citotóxica em todas as linhagens de células tumorais, incluindo HepG2 (IC₅₀ 2,2 e 5,6 μM, respectivamente) sem efeitos antiproliferativos para células normais (PBMC) (IC₅₀> 30 μM), tornando TAP-07 e TP-07, os compostos com o índice de seletividade mais favorável. TAP-07 e TP-07 induziram apoptose em células HepG2 e apresentaram atividade antitumoral in vivo (40mg/Kg) no modelo xenográfico de câncer de hepatocelular em camundongos C.B-17 com imunodeficiência combinada severa. Os diagnósticos sistêmicos verificados por técnicas bioquímicas e histopatológicas não revelaram sinais significativos de toxicidade após o tratamento com TAP-07 e TP-07. No conjunto, dos compostos avaliados, os resultados indicaram a atividade antitumoral em câncer de fígado de derivados de 2-piridil-2,3-tiazol. / Cancer is the major public health problem worldwide. In the last two decades, improvements in diagnostics and therapeutics have been done, leading to 23% drop in the cancer death rate; however, cancer still is a leading cause of death worldwide. Therefore, basic and clinical research is necessary to reduce the mortality related to cancer (Siegel et al., 2016). A total of 49 hybrid compounds containing pyridyl,1,3-thiazole and thiosemicarbazones groups were tested to assess their anticancer potential in vitro against human tumor and non-tumor cell lines: HL-60 (leukemia), MCF-7 (breast adenocarcinoma), HepG2 (hepatocellular carcinoma), NCI-H292 (lung carcinoma) (PBMC, human peripheral blood mononuclear cells) and in vivo with a hepatocellular xenograft cancer model. The compounds were classified at four groups according to the chemical structure they are derived from: TAP group are 2-pyridyl 2,3-thiazoles with a methyl at C6; TP compounds are pyridyl thiazolyl and TZ are benzyl thiazolyl compounds while TS compounds are thiosemicarbazones. Most of them were highly potent in at least one cell line tested (IC₅₀≤ 3 μM), except TZ compounds, being HL-60 the most sensitive and HepG2 the most resistant cell line. Among them, TAP-07 (2-(1-(pyridin-2-yl)ethylene)hydrazinyl)-4-(4-chlorophenyl)-1,3-thiazole) and TP-07 (2-(2-(pyridin-2-ylmethylene)hydrazinyl)-4-(4-chlorophenyl)-1,3-thiazole) presented cytotoxic activity in all tumor cell lines, including HepG2 (IC₅₀ 2.2 and 5.6 μM, respectively) without antiproliferative effects to normal cells (PBMC) (IC₅₀ > 30 μM), making TAP-07 and TP-07, the compounds with the most favorable selectivity index. TAP-07 and TP-07 induced apoptosis in HepG2 cells and presented in vivo (50 mg/kg) antitumor activity in hepatocellular xenograft cancer model at C.B-17 severe combined immunodeficient mice. Systemic toxicological evaluation verified by biochemical and histopathological techniques reveled no major signs of toxicity after treatment with TAP-07 and TP-07. Together the results indicated the anti-liver cancer activity of 2-pyridyl 2,3-thiazole derivatives.

Resveratrol (3, 4, 5-trihidroxiestilbeno) é um polifenol produzido por uma grande variedade de plantas em resposta ao estresse e encontrado predominantemente em cascas de uvas. Este princípio ativo apresenta vários benefícios à saúde, como a capacidade antioxidante, relacionada à prevenção de diversos tipos de câncer e do envelhecimento precoce da pele. No entanto, apresenta baixa biodisponibilidade quando administrado por via oral, o que torna interessante sua aplicação tópica. O principal objetivo deste trabalho foi a incorporação de resveratrol em hidrogéis poliméricos para obtenção de um sistema de liberação utilizado topicamente contra o desenvolvimento de desordens cutâneas, como o envelhecimento cutâneo e o câncer de pele. As matrizes poliméricas compostas por poli(N-vinil-2-pirrolidona) (PVP), poli(etileno glicol) (PEG) e ágar ou PVP e propano-1,2,3-triol (glicerina) e irradiadas a 20 kGy foram caracterizadas pelos ensaios de fração gel e intumescimento; sua biocompatibilidade preliminar foi avaliada in vitro por meio do ensaio de citotoxicidade utilizando o método de incorporação do vermelho neutro. Devido à baixa solubilidade do resveratrol em água, verificou-se o efeito da adição de 2% de etanol às matrizes. Todas as matrizes estudadas, contendo ou não álcool, apresentaram alto grau de reticulação, capacidade de intumescimento e não apresentaram toxicidade em ensaio preliminar de biocompatibilidade. Os dispositivos foram obtidos pela incorporação de resveratrol nas matrizes poliméricas, realizada de forma direta e indireta, ou seja, antes e após irradiação, respectivamente. Os dispositivos obtidos pelo método direto foram submetidos aos ensaios de fração gel, intumescimento e citotoxicidade e apresentaram-se semelhantes às respectivas matrizes. Os dispositivos contendo 0,05% de resveratrol obtidos pelo método direto e os dispositivos contendo 0,1% de resveratrol obtidos pelo método indireto foram submetidos ao ensaio de cinética de liberação durante 24 h. A quantificação do resveratrol liberado foi realizada por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC). Apenas os dispositivos obtidos pelo método indireto apresentaram capacidade de liberar o resveratrol incorporado, que apresentou capacidade antioxidante após liberação. / Resveratrol (3, 4, 5-trihydroxystilbene) is a polyphenolic produced by a wide variety of plants in response to injury and found predominantly in grape skins. This active ingredient has been shown to possess benefits for the health, such as the antioxidant capacity which is related to the prevention of several types of cancer and skin aging. However, the oral bioavailability of resveratrol is poor and makes its topical application interesting. The purpose of this study was to immobilize resveratrol in polymeric hydrogels to obtain a release device for topical use. The polymeric matrices composed of poli(N-vinyl-2-pyrrolidone) (PVP), poly(ethyleneglycol) (PEG) and agar or PVP and glycerol irradiated at 20 kGy dose were physical-chemically characterized by gel fraction and swelling tests and its preliminary biocompatibility by in vitro test of cytotoxicity using the technique of neutral red uptake. Due to low solubility of resveratrol in water, the addition of 2% ethanol to the matrices was verified. All matrices showed a high crosslinking degree, capacity of swelling and the preliminary cytotoxicity test showed nontoxicity effect. The devices were obtained by resveratrol immobilizaton in polymeric matrices, carried out in a one-or-two-steps process, that is, before or after irradiation, respectively. The one step resveratrol devices were characterized by gel fraction, swelling tests and preliminary biocompatibility, and their properties were maintained even after the resveratrol incorporation. The devices containing 0,05% of resveratrol obtained by one-step process and 0,1% of resveratrol obtained by two-steps process were submitted to the release test during 24 h. Resveratrol quantification was done by high performance liquid chromatography (HPLC). The results obtained in the kinetics of release showed that only the devices obtained by two-step process release the resveratrol, which demonstrate antioxidant capacity after the release.

Orientador: Reinaldo Marchetto / Banca: Marlus Chorilli / Banca: Luis Geraldo Vaz / Resumo: A celulose bacteriana (CB) é sintetizada por vários tipos de bactérias, com maior eficiência pela Gluconacetobacter xylinus. A CB é um biomaterial que têm uma estrutura de rede de nano fibras tridimensional com propriedades como biocompatibilidade, não toxicidade, estabilidade mecânica e alto teor de umidade, que a torna promissora para diversas aplicações, sendo que na engenharia de tecidos sua multifuncionalidade abrange a substituição temporária de tecido epitelial em casos de queimaduras, úlceras, lesões, carreador de fármacos, dentre outros propósitos. Apesar da CB apresentar potencial para ser utilizado como curativo, faz-se necessário a realização de modificações de sua superfície, com a incorporação de moléculas de adesão celular, para ajustar as deficiências da CB nativa, a fim de melhorar a adesão, migração, proliferação e diferenciação celular, tornando-se promissora para aplicações biomédicas. Deste modo, este trabalho objetivou desenvolver um curativo à base de CB contendo peptídeo promotor de adesão celular RGD (Arginina-Glicina-Ácido aspártico), sequência encontrada em várias proteínas da matriz extracelular (MEC), e avaliar in vitro sua viabilidade e proliferação de fibroblastos, com a finalidade de aplicação em regeneração tecidual de pele. O peptídeo RGD utilizado (JGB2) foi escolhido por meio de estudos computacionais, sendo sintetizado pelo método da fase sólida (estratégia Fmoc), purificado por CLAE e caracterizado por espectrometria de massas. Membranas ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Bacterial celulose (BC) is synthesizedby some bacteria, with greater efficiency by Gluconacetobacter xylinus.BC is a biomaterial that has a network 3-D structure of nanofibers with properties like biocompatibility, non-toxicity, mechanical stability, and high moisture content, whichmakes it promising fora wide range of applications, being that in the engineering of tissue its multifunctionality includes the temporary substitution of epithelial tissue in cases of burns, ulcers, injuries, drug carriers, among other purposes. Although CB present potential to be used as a dressing, it is necessary to perform modifications of its surface with the incorporation of cell adhesion moleculesto adjust the deficiencies of the native CB, in order to improve cell adhesion, migration, proliferation and differentiation, making it a promising material for biomedical applications.In this way, this work aimed to develop a dressing based on BC containing peptide promoter of cell adhesion RGD (Arginine-Glycine-Aspartic acid), sequence found in several extracellular matrix proteins (ECM) and to evaluate in vitroits viability and proliferation of fibroblasts, with the purpose of application in skin tissue regeneration. The RGD peptide used (JGB2) was chosen by means of computational studies, synthesized by the solid phase method (Fmoc strategy), purified by HPLC and characterized by mass spectrometry. CB membranes were produced by G. xylinuns, purified and functionalized by the esterification of tw... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre