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Aplicação das tecnicas de biologia molecular no diagnostico da osteogenesis imperfecta

Reis, Fernanda de Castro 18 February 2005 (has links)
Orientador: Edi Lucia Sartorato / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T04:21:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Reis_FernandadeCastro_D.pdf: 7069046 bytes, checksum: 4006acb8e366e7771cb736c45bdedef5 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Osteogenesis Imperfecta (01) é a denominação de um grupo heterogêneo de doenças hereditárias associadas a anormalidades tanto na síntese quanto na estrutura do colágeno tipo I. Esta é a proteína mais abundante encontrada nos ossos, pele, tendões e ligamentos, revestimento dos vasos sanguíneos, e outros tecidos conjuntivos, exceto a cartilagem. Em mais de 90% dos casos, o fenótipo é resultante de mutações espontâneas ou de transmissão dominante em famílias afetadas em um dos dois Zoeiresponsáveis pela síntese do colágeno tipo I, onde se localizam os genes COLIAI e COLIA2. O defeito molecular resulta em uma grande variedade de formas clínicas, desde assintomáticas até letais no período neonatal. As formas mais leves da doença são freqüentemente provocadas por mutações que inativam um dos alelos do gene COLIAI resultando numa quantidade normal, porém reduzida de colágeno tipo I. Por outro lado, as formas mais graves da doença resultam de mutações dominante negativas nos genes COLIAI ou COLIA2, as quais produzem defeitos estruturais na molécula de colágeno. A correlação genótipofenótipo observada em pacientes com 01 depende, portanto da natureza e posição das mutações. O principal objetivo do presente estudo foi identificar mutações no gene COLIAI em indivíduos portadores dos diversos tipos de 01, uma vez que o diagnóstico molecular não é um exame de rotina oferecido pelos laboratórios e, portanto, não há estudo da prevalência dessas mutações em nosso país. A metodologia empregada para tal diagnóstico foi o seqüenciamento automático direto do produto da PCR do gene COLIAI. Os exons 6 a 52, que compreendem o domínio da tripla hélice e o domínio C-terminal da molécula do colágeno tipo I, foram seqüenciados em 13 pacientes portadores de 01. Foram identificadas seis mutações associadas ao fenótipo, sendo quatro novas (c.1885de1G,p.P239A, p.G592S, p.G649D) e duas já descritas (p.R237X e p.G382S), além de polimorfismos em exons e introns e outras substituições. Este foi o primeiro estudo molecular realizado com 01 no Brasil. Os resultados obtidos neste trabalho indicam que não existem mutações prevalentes em nossa amostra e que as características das mutações encontradas estão de acordo com os dados da literatura, onde substituições de glicina por outro aminoácido no domínio da tripla hélice do gene COLIAI são as principais responsáveis pelos tipos mais graves de 01, tipos II,III e IV / Abstract: Osteogenesis imperfecta (01), commonly known as "brittle bone disease", is a dominant autosomal disorder and is caused by mutations in type I collagen genes, COLIAl and COLIA2, which are responsible for the synthesis of the main protein of bone, skin, ligaments, tendon and most other connective tissues. 01 is a genetic disorder of increased bone ffagility and low bone mass. Severity varies widely, ranging ffom intrauterine ffactures and perinatal lethality to very mild forms without ffactures. The mild forms are usually caused by mutations which inactivate one allele of COLIAl gene resuIting in a reduced amount of normal type I collagen. On the other hand, the severe and lethal forms result ffom dominant negative mutations in COLIAl or COLIA2, which produce structural defects in the collagen molecule. The varied clinical characteristics of 01 reflect different classes of mutations in different regions of type I collagen genes. These aIterations vary in type and location, aIthough the most common in COLlloci are single-base substitutions in the part ofthe gene coding for the triple helix domain, which changes a codon for a glycine to a codon for an amino acid with a bulkier side chain. Therefore, the presence of glycine at every third amino acid is essential to allow the a-chains to adopt the characteristic collagen triple helix. The main objective ofthe present study was to search for mutations in the COLIAl gene in patients previously diagnosed as having 01. Also, providing information about the characteristics of mutations in this gene in our sample. Therefore, here we report the resuIts ofthe molecular investigation on the COLIAI gene in 13 Brazilian 01 patients. Mutational analysis was performed by direct sequencing ofPCR product for each exon. We have found six mutations, four are novel (c.1885deIG, p.P239A, p.G592S, p.G649D) and two were previously described (p.R237X and p.G382S). This is the first molecular study of 01 in Brazil. Our findings showed that there are no prevalent mutaÍions in our sample, and that their distribution is similar to that reported by other authors, with a preponderance of substitutions on glycine residues in the triple helix domain causing 01 types II, III and IV / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas
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Estudo morfológico e morfométrico do efeito de filmes bioativos de colágeno contendo própolis vermelha sobre o processo de reparo cicatricial de queimaduras de terceiro grau em ratos

ALMEIDA, Enrik Barbosa de 31 January 2009 (has links)
Made available in DSpace on 2014-06-12T23:01:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4256_1.pdf: 3871680 bytes, checksum: e5beff7ed752ba7421b4be7e51f0d984 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Universidade Tiradentes / O trabalho objetivou avaliar morfologicamente o processo de reparo cicatricial de queimaduras de terceiro grau tratadas com biofilmes de colágeno acrescido de extrato hidroalcoólico de própolis vermelha. Para tanto, foram preparados biofilmes de colágeno tipo I extraído de tendão bovino contendo extrato hidroalcoólico de própolis vermelha a 0,1%. Posteriormente, foram realizadas queimaduras de terceiro grau de 1cm2 no dorso de 30 ratos Wistar, que foram distribuídos em seis grupos (n=5): G1 e G4 animais sem tratamento sacrificados no 14° e 21° dias; G2 e G5 animais tratados com membrana de colágeno sacrificados no 14° e 21° dias; G3 e G6 animais tratados com membrana de colágeno contendo própolis vermelha sacrificados no 14° e 21° dias. Os espécimes removidos foram fixados, processados e emblocados em parafina e secções histológicas foram coradas em HE, tricrômico de Masson e azul de toluidina. No 14° dia, a intensidade da rea ção inflamatória foi menor em G3, e o perfil leucocitário mostrou considerável infiltração plasmocitária. No 21° dia, houve patente redução da inflamação, que se apresentou predominantemente plasmocitária em todos os grupos. O quantitativo médio de vasos sanguíneos se mostrou estatisticamente maior entre os grupos tratados com própolis (7,84±4,42 para G3 e 10,88±5,36 para G6) que nos os demais grupos, independente do momento do sacrifício (p<0,05). Em relação ao perímetro vascular médio, tanto no 14° e 21° dias, houve diferença significativa entre a média de todos os grupos (p<0,05), os grupos G3 (362,32±161,36) e G6 (296,97±144,35) apresentaram sempre as menores médias. O número médio de mastócitos foi estatisticamente menor no grupo controle (34,9±9,43) sacrificado no 14° dia do que nos grupos experiment ais (68,25±12,81 para G2 e 62,25±8,05 para G3), mas não houve diferença entre os grupos no 21° dia. A fibroplasia foi mais intensa nos grupos tratados com biofilmes de colágeno associados à própolis vermelha (G3 e G6), e menos expressiva nos grupos controle (G1 e G4). Quanto ao grau de epitelização, tanto no 14° e 21°dias houve uma maior tendência a epitelização nos grupos tratados com própolis G3 e G6, mas não foi observada diferença significativa em relação aos demais grupos experimentais. Concluiu-se que a aplicação de biofilmes de colágeno tipo I bovino reconstituído contendo extrato de própolis vermelha favoreceu o processo de cicatrização de queimaduras em rato
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Desorganização macromolecular dos feixes de colageno sob a influencia da histamina : estudo experimental

Vidal, Benedicto de Campos, 1930- 18 July 2018 (has links)
Tese (livre-docência) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-18T03:41:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vidal_BenedictodeCampos_LD.pdf: 3322679 bytes, checksum: 9c9ae620d77b5f7840f770157d557180 (MD5) Previous issue date: 1967 / Resumo: Não informado / Abstract: Not informed / Tese (livre-docencia) - Univer / Livre-Docente em Odontologia
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Filmes de colágeno - polissacarídeo sulfatado como matrizes com propriedades antitrombogênicas: preparação e caracterização. / Collagen - sulfated polysaccharide films with antithrombogenic properties: preparation and characterization.

Macedo, Ana Angélica Mathias January 2006 (has links)
MACEDO, A. A. M. Filmes de colágeno - polissacarídeo sulfatado como matrizes com propriedades antitrombogênicas: preparação e caracterização. 2006. 77 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2006. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2014-10-06T18:24:22Z No. of bitstreams: 1 2006_dis_aammacedo.pdf: 1291383 bytes, checksum: 82d27442aec13166192157ba1d4a7a47 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2015-01-19T17:43:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_dis_aammacedo.pdf: 1291383 bytes, checksum: 82d27442aec13166192157ba1d4a7a47 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-19T17:43:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_dis_aammacedo.pdf: 1291383 bytes, checksum: 82d27442aec13166192157ba1d4a7a47 (MD5) Previous issue date: 2006 / This work reports the preparation and characterization of collagen-sulfated polysaccharide films and applications in coating of cardiovascular prostheses. The films were prepared by adding the sulfated polysaccharide solution on soluble collagen (0, 5, 10, 20 and 25 %). The blends of collagen-sulfated polysaccharide were casted in acrylic molds, and dried at low temperature. The physico-chemical properties of collagen-sulfated polysaccharide films, were studied using infrared spectroscopy that showed absorptions typical of collagen and sulphated polysaccharide; the thermal analysis (DSC) showed that the structural integrity of collagen was unmodified during the extraction process and the polysaccharide present in the samples did not decrease the thermal stability of the collagen, which was higher for the concentrations of 20 %. In the thermal analysis (DTG), the addition of the polysaccharide caused a small decrease of the stability of thermal degradation and when was adding 5 % of the sulfated polysaccharide to the collagen, a reduction in its stability occurs, however, in the concentrations of 10, 20 and 25 %, the stability of thermal degradation of the film increased. In the impedance spectroscopy, the results are associated possibly, to the interactions between the macromolecules. The blood compatibility was analyzed by platelet adhesion and the results showed that the films possess hemocompatibility and antitrombogenic properties. / Este trabalho aborda sobre o preparo e a caracterização de filmes de colágeno-polissacarídeo sulfatado e sua aplicação para revestimento de próteses vasculares. Os filmes foram obtidos a partir da mistura de solução de colágeno e polissacarídeo sulfatado, nas concentrações 0, 5, 10, 20 e 25 % do polissacarídeo. As soluções de colágeno-polissacarídeo sulfatado foram formatadas em moldes de acrílico em condições de baixa umidade e temperatura. A caracterização físico-química dos filmes de colágeno-polissacarídeo sulfatado foi estudada por espectrometria no infravermelho que mostraram bandas típicas do colágeno e bandas típicas do polissacarídeo sulfatado; a análise térmica por DSC mostra que a integridade estrutural do colágeno foi preservada no processo de extração e que a adição do polissacarídeo nas amostras não diminuiu a estabilidade térmica do colágeno tendo sido maior na concentração de 20 %. Na análise térmica por DTG, a adição do polissacarídeo causa um pequeno decréscimo da estabilidade de degradação térmica e ao adicionarmos 5 % do polissacarídeo sulfatado ao colágeno, ocorre uma redução em sua estabilidade, porém, a partir daí, nas concentrações 10, 20 e 25 %, a estabilidade de degradação térmica do filme vai aumentando. Na espectroscopia de impedância, os resultados estão associados, possivelmente, a interações entre as macromoléculas. A compatibilidade sangüínea foi analisada por adesão de plaquetas e os resultados mostraram que os filmes possuem hemocompatibilidade e propriedades antitrombogênicas.
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Caracterización inmunoestructural del colágeno tipo I en la caries dentinaria

Flores Encina, Christopher Eduardo January 2011 (has links)
Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Introducción La remoción de la dentina cariada se sustenta en los estudios de Takao Fusayama de la década de los ‘70, quién propuso que el colágeno de la dentina intertubular presente en ella se encuentra denaturado, lo que imposibilita su remineralización. Sin embargo, las técnicas utilizadas en dichos estudios no son lo suficientemente sensibles para la determinación del estado de organización ultraestructural de las moléculas de colágeno triple helicoidales. Objetivo En el presente estudio, se evaluó las características antigénicas del colágeno tipo I presente en la dentina intertubular infectada en caries dentinarias rápidamente progresivas, mediante el uso de un anticuerpo monoclonal. Material y Método Veinte molares extraídos por caries y almacenados en etanol 96%, fueron caracterizados clínica e histopatológicamente. Cada especimen fue procesado para la obtención de cortes mineralizados y desmineralizados, los cuales fueron inmunomarcados con un anticuerpo monoclonal de ratón anti-colágeno tipo I, considerando sus respectivos controles. Todos los cortes fueron contrastados con tinción Gram. Como control positivo de la inmunotinción negativa del colágeno denaturado, se utilizó dentina expuesta a hipoclorito de sodio 5%. Todos los cortes fueron observados y fotografiados tras cada paso experimental. La determinación de la intensidad de la inmunorreacción, se realizó mediante un estudio densitométrico cuyos resultados fueron analizados estadísticamente con la prueba t de Student para muestras pareadas, considerando un p<0,05. Resultados Todos los especímenes presentaron caries dentinarias rápidamente progresivas. La dentina intertubular, presente en la dentina cariada profusamente infectada por bacterias Gram positivas, presentó inmunorreacción similar a la encontrada en la dentina sana en los cortes desmineralizados y en el ligamento periodontal y pulpa, en los cortes mineralizados. Los controles negativos presentaron una inmunorreacción negativa. La dentina expuesta a hipoclorito de sodio presentó inmunorreacción positiva creciente hacia la profundidad del tejido, siendo completamente negativa en la superficie. La diferencia densitométrica de la intensidad de inmunorreacción de los especímenes experimentales respecto de sus controles, fue estadísticamente significativa con un valor p<0,05 (p = 0,00243E ). Conclusiones -11 El colágeno tipo I presente en la dentina intertubular infectada en caries dentinarias rápidamente progresivas, preserva sus características antigénicas, no encontrándose denaturado. Esto da sustento al desarrollo de técnicas operatorias mínimamente invasivas.
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Estudo da cristalinidade e mecanismos de sorção de água em biopolímeros

Labaki, Lucila Chebel, 1943- 12 July 1990 (has links)
Orientador: Iris Concepcion Linares de Torriani / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Fisica Gleb Wataghin / Made available in DSpace on 2018-09-27T18:35:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Labaki_LucilaChebel_D.pdf: 5276212 bytes, checksum: eeb47863f9e8afca8b7242d02bb2461c (MD5) Previous issue date: 1990 / Resumo: Uma investigação da cristalinidade e mecanismos de sorção de água em bipolimeros estruturais: colágeno e celulose, foi realizada por métodos de difração de raios X e levantamento de isotermas de sorção de água. Foi desenvolvido um método computacional para medida do índice de cristalinidade e tamanho de cristalito em polímeros. Esse método foi aplicado para fibras de celulose nativa. Medidas de orientação média dos cristalitos e do ângulo espiral, característico do algodão nativo, foram realizadas, verificando-se uma correlação entre os valores obtidos. Foi observado que a resistência intrínseca das fibras cresce com a orientação, quando é controlada a maturidade da fibra. O índice de cristalinidade decresce e o tamanho de cristalito cresce com o maior grau de hidratação a que é submetida a amostra. A fração de água fortemente ligada à celulose, obtida pelo ajuste das isotermas experimentais à equação de Guggenheim, relaciona-se diretamente com o tamanho de cristalito, e a acessibilidade às moléculas de água aumenta com a crescente fração de substância amorfa. Amostras de pó de colágeno nativo foram submetidas a repelidos ciclos de hidratação e secagem gradual. Os efeitos de histerese, conhecidos em isotermas de sorção de água dessa proteína, foram observados pela variação. Com a umidade relativa, da intensidade integrada das reflexões de raios X a alto ângulo, que constituem as principais características do padrão de difração. Uma perda gradual de estrutura foi observada em cada processo de secagem e reidratação. Pelos dados de difração foi observado também um aumento das regiões amorfas das fibrilas. A secagem parcial da amostra, até um teor de umidade não inferior a 0.13 g H2O per g proteína, não produz a curva de histerese nos gráficos dos parâmetros estudados. Ciclos de secagem-hidratação numa única etapa parecem não afetar irreversivelmente a ordem, pois as amostras recuperam sua estrutura original. A diferença entre esse resultado e os do processo de hidratação gradual pode ser atribuída à cinética da hidratação de biopolímeros / Abstract: X-ray diffraction and water sorption isotherms were used in this study of crystallinity and sorption mechanisms in the structural biopolymers: collagen and cellulose. A computational method was developed in order to determine the crystallinity index and crystallite size in polymers. This method was employed in native cellulose fibers (cotton). Measurements of the mean crystallite orientation and spiral angle, characteristic of native cotton. were carried out and correlations between the obtained values were verified. It has been observed that the tensile strength of the fibers increases with increasing orientation, if the maturity of the fiber is controlled. The Crystallinity index is reduced and crystallite size increases with hydration. The fraction of water strongly bound to cellulose, which was obtained by fitting the measured sorption isotherms to Guggenheim¿s equation, is directly related to the crystallite size; accessibility to water molecules increases with the fraction of amorphous substance. Powdered native collagen samples were submitted to repeated cycles of gradual drying and hydration. Hysteresis effects, known to exist in water sorption isotherms of this fibrous protein were observed in the plots of relative humidity versus integrated intensity of the wide angle X-ray reflections which constitute the main features of the diffraction pattern. A gradual reduction of structured material was observed after each drying and rehydration process. An increase in the amorphous regions of the fibrils could also be inferred from the diffraction data. Partially drying the samples down to a moisture content not smaller than 0.13 g H20 per g protein did not produce a hysteresis loop in the plots of the parameters studied. One step drying-rehydration cycles did not, seem to affect, irreversibly the order of the samples which seemed to recover their original structure. The difference between this result, and those of the gradual hydration process may be attributed to the kinetic properties of biopolymers hydration / Doutorado / Física / Doutor em Ciências
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Avaliação "in vitro" dos processos de proliferação e diferenciação de celulas osteoblasticas e a mineralização sobre matrizes anionicas de colageno para reparo osseo

Moreira, Patricia da Luz 24 February 2005 (has links)
Orientadores: Selma Candelaria Genari, Arnaldo Rodrigues dos Santos Junior / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-11-01T13:28:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moreira_PatriciadaLuz_D.pdf: 3814298 bytes, checksum: 2db04befdb0b52e0f94903ade4934ce7 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Colágeno tem sido extensivamente descrito como um material importante na engenharia de tecido ósseo devido a sua biocompatibilidade, baixa antigenicidade e alta força de tensão. No entanto, suportes de colágeno na sua forma pura apresentam algumas desvantagens e, melhorias em suas propriedades físicas, químicas e biológicas são necessárias para suprir essas inadequações. Recentemente, a hidrólise seletiva de carboxiamidas de resíduos de asparagina e glutamina tem sido empregada, por um lado, na obtenção de um aumento no número de sítios negativos e por outro lado, na melhora nas propriedades piezoelétricas do colágeno. Suportes de colágeno aniônico foram obtidos a partir da hidrólise alcalina do pericárdio bovino por 24 (BP24) e 48 (BP48) horas. Osteoblastos bovinos foram cultivados sobre substratos e matrizes de colágeno nativas para o melhor entendimento das interações celulares responsáveis pela boa osteocondutividade e biocompatibilidade descritas em testes in vivo. Os parâmetros analisados foram a adesão e morfologia celular, o processo de mineralização, produção de condroitin sulfato, fosfatase alcalina, e osteocalcina pelas células. A adesão celular verificada para as matrizes BP24 e BP48 foi considerada tão boa quanto àquela descrita para substratos controles, enquanto a proliferação celular (por análise histológica) nas matrizes BP48 mantidas em meio comum demonstrou-se superior àquela encontrada para as matrizes de colágeno nativas e BP24 mantidas nas mesmas condições de cultura. As matrizes BP48 quando estimuladas a mineralizar, demonstraram um decréscimo na proliferação celular, que deve estar relacionado ao início do processo de diferenciação. Todas as membranas permitiram uma proliferação celular em múltiplas camadas, apresentando semelhanças morfológicas, mas quando estimuladas a mineralizar apresentaram osteoblastos com maior número de vesículas em sua superfície. O processo de mineralização foi verificado em todas as matrizes mantidas em meio de mineralização e, principalmente na superfície das mesmas. A análise por EDS comprovou que esses depósitos são compostos por fosfatos de cálcio. A produção de fosfatase alcalina (ALP) pelos osteoblastos foi verificada em todas as matrizes, no entanto, matrizes mantidas em meio de mineralização apresentaram maior produção de ALP, devido à falta do suplemento nutricional para deposição mineral. Novamente, a matriz BP48 favoreceu a produção de ALP, o que deve também estar relacionado ao maior grau de mineralização da mesma. A detecção de osteocalcina em todas as matrizes mantidas em meio de mineralização, devese ao fato de uma maior diferenciação dos osteoblastos. Baseado nos resultados obtidos, a matriz de colágeno aniônico BP48 demonstrou ser mais adequada para o processo de regeneração óssea por apresentar influência na diferenciação osteoblástica e na produção de matriz óssea comparada àquela obtida para a matriz de colágeno nativo, que apresenta propriedades piezoelétricas reduzidas / Abstract: Collagen has been extensively described as an important material in bone tissue engineering due to its biocompatibility, biodegradability, low antigenicity, and high tensile strength. However, collagen scaffolds in their pure form have some drawbacks and improvements in its physical, chemical and biological properties are necessary to overcome those inadequacies. Recently, the selective hydrolysis of carboxyamides groups of asparagine and glutamine residues of collagen has been employed to increase the number of negative sites and enhance the piezoelectric properties. Anionic collagen scaffolds were prepared by hydrolysis of bovine pericardium for both 24 h (BP24), and 48 h (BP48). Bovine osteoblasts were cultured on them and on native matrices to understand the cellular interactions responsible for the good osteoconductivity and biocompatibility reported with in vivo tests. Cellular adhesion and morphology, mineralization process, chondroitin sulfate, alkaline phosphatase (ALP) and osteocalcin were the parameters evaluated. Cellular adhesion was considered satisfactory in all matrices, while cellular proliferation (through histological analysis) in BP48 matrices kept in common medium has shown to be higher than the one found for BP24 and native collagen matrices. When BP48 was stimulated to mineralize, they showed a decrease at the proliferation, which may be related to the beginning of the differentiation process of these cells. All matrices allowed multilayered cellular proliferation, presenting several similar characteristics, but when they were stimulated to mineralize, they presented a higher amount of surface¿s vesicles. Mineralization process was observed at all matrices kept in mineralization medium and, mainly at their surfaces. EDS analysis showed that these deposits were composed of calcium phosphates. ALP production was observed in all matrices, despite the fact that matrices kept in common medium showed a higher production of ALP, due to the lack of nutritional supplement for mineral deposition. BP48 matrix favored ALP production, which may be related to its degree of mineralization. Osteocalcin detection in all matrices kept in the mineralization medium should be due to the fact of a higher differentiation of those osteoblasts. Based on these results, BP48 matrix has shown to be more adequate to the bone regeneration process because of its good influence on osteoblastic differentiation and bone matrix production compared to the results obtained for native matrices, which present reduced piezoelectric properties / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural
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Avaliação da biocompatibilidade e bioatividade de membranas colágeno polianiônico mineralizadas e reticuladas em modelos animais / Evaluation of biocompatibility and bioactivity of collagen polyanionic membranes mineralized and crosslinked in animal models

Veríssimo, Denusa Moreira January 2012 (has links)
VERÍSSIMO, Denusa Moreira. Avaliação da biocompatibilidade e bioatividade de membranas colágeno polianiônico mineralizadas e reticuladas em modelos de animais. 2012. 168 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-07-26T16:19:08Z No. of bitstreams: 1 2012_tese_dmveríssimo.pdf: 6961527 bytes, checksum: af03b746912fd2ba6a02fb512fada0d0 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-08-06T11:53:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_tese_dmveríssimo.pdf: 6961527 bytes, checksum: af03b746912fd2ba6a02fb512fada0d0 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-06T11:53:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_tese_dmveríssimo.pdf: 6961527 bytes, checksum: af03b746912fd2ba6a02fb512fada0d0 (MD5) Previous issue date: 2012 / The aim of this study was to evaluate polyanionic collagen (PAC) membranes reticulated and impregnated with hydroxyapatite, manufactured by the Physics Department, Federal University of Ceará. This study was divided into two stages, initially it was evaluated the biocompatibility and biodegradation of six different membranes of PAC, divided into the following groups: three with 0, 25 and 75 cycles of impregnation with apatite (PAC, PAC 25, PAC 75 ) and three more whose membranes were crosslinked with glutaraldehyde (GA) (GA PAC, PAC 25GA, PAC 75GA) inserted into the subcutaneous tissue of rats. Histopathological analyzes of inflammatory infiltration, myeloperoxidase activity (MPO), cytokine, thickness of fibrous capsule, immunohistochemistry for metalloproteinase and degradation of the membranes were evaluated after 1, 7, 15, 30, 60 and 120 days. Subsequently, it was evaluated the effect of the three best membranes in guided bone regeneration using bone critical defects in rat calvaria (DOC), where the membranes were placed over the defect. Bone formation was evaluated based on digital radiography (DR), computed tomography (CT) and histological analysis, 24 hours, 4, 8 and 12 weeks after surgery. MPO and cytokine were performed after 24 hours. In the subcutaneous tissue, the membranes crosslinked with GA showed thick fibrous capsule, less inflammatory reaction and remained intact after 120 days. In the bone regeneration model in rat calvaria, after 12 weeks, PAC GA and PAC 25GA groups showed significant reduction in radiolucent area compared to the baseline group. Histological analysis showed that in PAC GA and PAC 25GA groups, membranes were still intact, surrounded by a thick fibrous capsule and in PAC 75GA group, membranes showed early resorption. There was no statistical difference between groups in MPO activity and IL-1β. We conclude that the crosslinked membranes were more biocompatible and remained free from degradation during the observation period. These membranes induced closure of bone defects and did not induce inflammatory reaction. The impregnation of hydroxyapatite did not accelerate the healing of surgical defect. Our results suggest that the crosslinked membranes CPA may be useful in cases where new bone formation is dependent on a longer duration of mechanical barrier. / O objetivo desse estudo foi avaliar membranas de colágeno polianiônico (CPA) reticuladas e impregnadas com hidroxiapatita, manufaturadas pelo Departamento de Física da Universidade Federal do Ceará. Dividiu-se o trabalho em 2 etapas, onde inicialmente avaliou-se a biocompatibilidade e a biodegradação de 6 diferentes membranas de CPA, divididas nos seguintes grupos: três com 0, 25 e 75 ciclos de impregnação com hidroxiapatita (CPA, CPA 25, CPA 75) e mais três cujas membranas foram reticuladas com glutaraldeído (GA) (CPA GA, CPA 25GA, CPA 75GA) inseridas em tecido subcutâneo de ratos. Análises histopatológicas do infiltrado inflamatório, atividade de mieloperoxidase (MPO), dosagem de citocinas, espessura de cápsula fibrosa, imunohistoquímica para metaloproteinase e biodegradação das membranas foram avaliadas após 1, 7, 15, 30, 60 e 120 dias. Posteriormente, avaliou-se o efeito das 3 melhores membranas na regeneração óssea guiada usando defeito ósseo crítico em calvária de ratos (DOC), onde as membranas foram posicionadas sobre o defeito. Formação óssea foi avaliada com base na radiografia digital (RD), tomografia computadorizada (TC) e análise histológica, 24 horas, 4, 8 e 12 semanas após o procedimento cirúrgico. MPO e dosagem de citocinas foram realizadas após 24 horas. No subcutâneo, as membranas reticuladas com GA mostraram espessa cápsula fibrosa e menor reação inflamatória permanecendo intactas após 120 dias. No modelo de regeneração óssea em calvária de ratos, após 12 semanas, os grupos CPA GA e CPA 25GA apresentaram redução significativa da área radiolúcida quando comparadas ao grupo basal. A análise histológica mostrou que nos grupos CPA GA e CPA 25GA as membranas ainda estavam intactas, envolvidas por uma espessa cápsula fibrosa e as membranas do grupo CPA 75GA apresentaram início de reabsorção. Não foi encontrada diferença estatística entre os grupos quanto a atividade MPO e citocina IL-1β. Concluímos que as membranas reticuladas mostraram-se mais biocompatíveis e se mantiveram livre de biodegradação no período de observação. Essas membranas induziram o fechamento dos defeitos ósseos e não induziram reação inflamatória. A impregnação de hidroxiapatita não acelerou a cicatrização do defeito cirúrgico. Nossos resultados sugerem que as membranas de CPA reticuladas poderão ser úteis nos processos em que a formação de um novo osso depende de uma duração mais prolongada da barreira mecânica.
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Efeito da remoção de colágeno na resistência de união de cimentos resinosos à dentina / Effect of dentin deproteinization on bond strength of resin cements to dentin

Souza, Lidiane Costa de January 2013 (has links)
SOUZA, Lidiane Costa de. Efeito da remoção de colágeno na resistência de união de cimentos resinosos à dentina. 2013. 42 f. Dissertação (Mestrado em Odontologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-11-22T10:59:44Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_lcsouza.pdf: 494069 bytes, checksum: 3109e08bbcc1225683d8f99adf329e66 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2013-11-22T11:00:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_lcsouza.pdf: 494069 bytes, checksum: 3109e08bbcc1225683d8f99adf329e66 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-11-22T11:00:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_lcsouza.pdf: 494069 bytes, checksum: 3109e08bbcc1225683d8f99adf329e66 (MD5) Previous issue date: 2013 / Introduction: The self-adhesive resin cements have been introduced to the market in order to reduce the clinical steps and, thus, reducing the operative time and sensitivity. Although the concept of one-step applying be very attractive, some studies show limitations of resin cements concerning the potential of demineralization and superficial interaction with the dentin. Objective: To evaluate the effect of removing dentin collagen with 5% NaOCl on the bond strength of resin cements/dentin interface. Methods: Thirty-two freshly extracted third molars were sliced to expose sound dentin, to remove the roots and were randomly divided into four groups according to the type of cement used (conventional or self-adhesive) and strategy of cementing used: RelyX ARC/Single Bond 2 applied following the manufacturer´s instructions – control (RAc), RelyX ARC/Single Bond 2 applied on deproteinized dentin (RAd); RelyX U200 applied following the manufacturer´s instructions – control (RUc); RelyX U200 applied on deproteinized dentin (RUd). Blocks of composite resin were cemented on dentin surface and the specimens were prepared for microtensile bond test. The sticks of each group were subdivided into two subgroups: immediate test and test after 20,000 thermal cycles. Results: Three-way Anova showed that collagen removal increased the bond strength values for both cements, although the RAd group showed a decrease in the bond strength values after thermocycling. Chi-square test showed significant increase of premature failures for the groups, except for the group of RUd. Conclusion: The collagen removal improved the immediate bond strength for both cements tested, but, after thermocycling, this union was preserved only in the RelyX U200 group. / Introdução: Os cimentos resinosos autoadesivos foram introduzidos no mercado a fim de reduzir os passos clínicos e, assim, diminuir o tempo e a sensibilidade operatória. Apesar de o conceito de aplicação única ser bastante atrativo, alguns estudos mostram limitações desses materiais no que se diz respeito ao potencial de desmineralização e interação superficial com a dentina. Objetivo: Avaliar o efeito da remoção de colágeno dentináro com NaOCl a 5% na resistência de união da interface formada entre cimentos resinosos e a dentina. Metodologia: Trinta e dois terceiros molares recém- -extraídos tiveram a dentina coronária exposta, as raízes removidas e foram divididos aleatoriamente em quatro grupos de acordo com o tipo de cimento (convencional ou autoadesivo) e com a estratégia de cimentação utilizada (manutenção ou remoção de colágeno da dentina): RelyX ARC/Single Bond 2 aplicado de acordo com a recomendações do fabricante - controle (RAc); RelyX ARC/Single Bond 2 aplicado após a remoção de colágeno (RAd); RelyX U200 aplicado de acordo com a recomendações do fabricante - controle (RUc); RelyX U200 aplicado após a remoção de colágeno (RUd). Blocos de resina compostas foram cimentados sobre a superfície dentinária e os espécimes foram seccionados para o teste de microtração. Os palitos de cada grupo foram subdivididos em dois subgrupos: teste imediato e teste após 20.000 ciclos térmicos. Resultado: O teste Anova mostrou que a remoção de colágeno aumentou os valores de resistência de união para ambos os cimentos, embora, para o grupo RAd, houve um decréscimo nos valores de resistência de união para os palitos termociclados. O teste qui-quadrado mostrou um significante aumento de falhas prematuras para os grupos, exceto para o grupo RUd. Conclusão: A remoção de colágeno melhorou a resistência de união imediata para os materiais testados, mas só ocorreu preservação desta união, após termociclagem, quando o RelyX U200 foi utilizado.
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Efeito da remoção de colágeno e da termociclagem na resistência de união de dois adesivos convencionais à dentina / Effect of deproteinization and thermocycling on microtensile bond strength of two etch-and-rinse adhesive systems on dentin

Magalhães, Deborah Cavalcante Bezerra January 2014 (has links)
MAGALHÃES, Deborah Cavalcante Bezerra. Efeito da remoção de colágeno e da termociclagem na resistência de união de dois adesivos convencionais à dentina. 2014. 51 f. Dissertação (Mestrado em Odontologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-01-29T16:10:53Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_dcbmagalhães.pdf: 681863 bytes, checksum: 309eaa2b85d3bbe54840dcef371c12b7 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-01-29T16:13:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_dcbmagalhães.pdf: 681863 bytes, checksum: 309eaa2b85d3bbe54840dcef371c12b7 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-29T16:13:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_dcbmagalhães.pdf: 681863 bytes, checksum: 309eaa2b85d3bbe54840dcef371c12b7 (MD5) Previous issue date: 2014 / The increase of the adhesive infiltration in the dentin may reduce the gaps in bond interface. The sodium hypochlorite (NaOCl) has been employed for removing the demineralized dentin collagen, transforming it into a more permeable substrate, thus facilitating the diffusion of the adhesive resins intra and intertubular level. Objective: To assess the effect of dentin collagen removal by 10% NaOCl for 60 s on microtensile bond strength of two simplified conventional adhesive systems to this substrate, immediately after or after thermocycling. Methods: Forty freshly extracted third molars had the dentin surface exposed and were divided into four groups according to the type of adhesive solvent used (water/ethanol - Adper Single Bond 2 or acetone - Stae) and the proposed dentin surface treatment (acid-etch or acid-etched + 10% NaOCl). Then, the restoration incrementally with resin Z100 (3M ESPE) was performed. After 24 hours of storage in distilled water at 37 ºC all teeth were sectioned for microtensile test. The specimens in each group were subdivided into two subgroups: immediate test and test after 10,000 cycles. µTBS data were analyzed by two-way ANOVA and Tukey´s test (p<0.05). Failure mode was analyzed and classified as cohesive in dentin, cohesive in resin and mixed/adhesive. Results: The use of NaOCl resulted in a significant decrease on immediate and long-term microtensile bond strength for Single Bond 2 (p<0.001), while Stae was unaffected by the deproteinization and the thermocycling (p=0.194). Conclusion: The collagen removal promoted by 10% NaOCl for 60 s as well as the thermocycling, showed an adverse effect for the water/ethanol-based adhesive. These treatments have no influence on the microtensile bond strength of acetone-based adhesive to dentin. / O aumento da infiltração do adesivo no substrato dentinário pode diminuir as falhas na interface adesiva. O hipoclorito de sódio (NaOCl) tem sido empregado para remoção do colágeno da dentina desmineralizada transformando-a em um substrato mais permeável e facilitando a difusão do adesivo. Objetivo: Avaliar o efeito da remoção do colágeno da dentina por meio da aplicação do NaOCl 10% por 60 s na resistência de união de dois sistemas adesivos convencionais simplificados a esse substrato, de forma imediata ou após envelhecimento por termociclagem. Metodologia: Quarenta terceiros molares recém-extraídos tiveram a dentina superficial exposta e foram divididos em quatro grupos de acordo com o solvente do sistema adesivo utilizado (etanol/água - Adper Single Bond 2 ou acetona - Stae) e o tipo de tratamento da dentina (condicionamento ácido seguido ou não da remoção de colágeno). Platôs foram construídos de forma incremental com a resina composta Z100 (3M-ESPE). Após 24 horas de armazenamento em água destilada a 37ºC, os dentes foram seccionados para o teste de microtração. Os palitos de cada grupo foram subdivididos em dois subgrupos: teste imediato e teste após 10.000 ciclos térmicos. Os dados foram submetidos aos testes de ANOVA two-way e de Tukey (p<0.05). As falhas foram analisadas em lupa e classificadas como coesivas em dentina, coesivas em resina e mistas/adesivas. Resultados: O uso do NaOCl resultou em significante diminuição da resistência de união imediata e após termociclagem para o Single Bond 2 enquanto que o Stae não foi afetado pelo tratamento da dentina ou pela termociclagem. Conclusão: A remoção do colágeno através da aplicação do hipoclorito de sódio, bem como a termociclagem, mostraram efeito adverso para o adesivo convencional de dois passos à base de etanol/água. Tais tratamentos não tiveram influência na resistência de união dos adesivos à base de acetona à dentina.

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