Made available in DSpace on 2016-06-02T20:35:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6545.pdf: 4887269 bytes, checksum: 9f56f6adbfb0cee1dfc910d155e230f0 (MD5) Previous issue date: 2014-11-06 / Financiadora de Estudos e Projetos / Brazil remains the world's largest orange producer, accounting for 32% of the total production of oranges and 50% orange juice. The State of São Paulo holds 97% of Brazilian exports of orange juice, possessing one of the largest citrus producing areas of the world. Citrus plants can be affected by various pathogenic agents which highlights the fungus Colletotrichum acutatum, causal agent of citrus post-bloom fruit dropwhich under certain environmental conditions, is in a limiting factor in many citrus production areas. Given the above and seen the importance of disease in the cultivation of citrus, realizes the need for information related to the chemical study of C. acutatum. Thus, this study presents the chemical study of fungal plant pathogen, in addition, discusses the study of plant-microbe interactions, identifying volatiles by HS-SPME-GC-MS as well as characteristic signals compounds produced by plants when infected. Chemical studies of C. acutatum to the isolation of certain diketopiperazines, phenolic compounds, steroids, nucleosides and glycerides. In order to encourage the production of metabolites by the fungus and understand more your metabolism, some modulators (chemical and epigenetic) were used, in addition to the growth of microorganisms in mixed cultures, where it was possible to isolate some metabolites such as 2,5-dihidroximetilfurano and IAA. Aiming to observe the behavior of the flowers as the production of metabolites when infected, the study of plant-fungus interaction, where the pathogen was inoculated in flowers of Citrus sinensis, and these were collected at 2, 4 and 7 days. The volatile components of infected flowers were identified by HS-SPME-GC-MS and compared with the healthy flowers. A methodology for biological assays as mycelial growth, spore germination and appressorium formation was implemented. / O Brasil mantém-se como maior produtor mundial de laranja, sendo responsável por 32% da produção total de laranja e 50% de suco de laranja. O Estado de São Paulo detém 97% das exportações brasileiras de suco de laranja, possuindo uma das maiores áreas citrícolas do mundo. As plantas cítricas podem ser afetadas por vários agentes fitopatogênicos onde se destaca o fungo Colletotrichum acutatum, agente causal da Podridão Floral dos Citros (PFC), que sob determinadas condições ambientais, constitui-se em um fator limitante à produção em várias áreas citrícolas. Diante do exposto e visto a importância da PFC no cultivo de citros, percebe-se a necessidade de informações relacionadas ao estudo químico de C. acutatum. Assim, o presente trabalho apresenta o estudo químico do fungo C. acutatum, além disso, aborda o estudo da interação planta-microrganismo, identificando compostos voláteis por HS-SPME-GC-MS, bem como sinais característicos de compostos produzidos pela planta quando infectada. O estudo químico de C. acutatum, proporcionou o isolamento de algumas dicetopiperazinas, compostos fenólicos, esteroides, nucleosideos e glicerídeos. Com a finalidade de incentivar a produção de metabolitos pelo fungo e entender mais o seu metabolismo, foram utilizados alguns moduladores (químicos e epigenéticos), além do crescimento do microrganismo em culturas mistas, onde foi possível isolar alguns metabolitos como o 2,5-dihidroximetilfurano e o IAA. Visando observar o comportamento das flores quanto a produção de metabolitos quando infectadas, foi realizado o estudo de interação fungo-planta, onde o patógeno foi inoculado em flores de Citrus sinensis, e estas foram coletadas com 2, 4 e 7 dias. Os componentes voláteis das flores infectadas foram identificados por HS-SPME-GC-MS e comparados com as flores sadias. Uma metodologia para ensaios biológicos como crescimento micelial, germinação de esporos e formação de apressórios foi implantada.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-28Bitstream added on 2014-06-13T20:37:27Z : No. of bitstreams: 1 souza_a_me_jabo.pdf: 1098095 bytes, checksum: 90c36824f4f63db09ab3ab57ecb91613 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A mangueira (Mangifera indica L.) conta com diversos problemas de ordem fitossanitária, destacando-se como um dos mais importantes, a antracnose, causada na maioria das vezes pelo fungo C. gloeosporioides. Dada a importância comercial dessa doença, esse trabalho teve por objetivo realizar a caracterização genética e patogênica de uma população de isolados de Colletotrichum spp. oriundos de tecidos com sintomas de antracnose de diferentes variedades e órgãos das plantas de manga, dos principais municípios produtores do Estado de São Paulo, além de compará-los geneticamente com isolados obtidos de citros. O sequenciamento da região ITS1-5.8S-ITS2 possibilitou a identificação de 183 isolados de uma população obtida de mangueiras como C. gloeosporioides, com exceção de apenas um deles, o qual foi identificado como C. acutatum. Já os isolados de citros, sendo três obtidos de folhas assintomáticas e dois de flores com sintomas de podridão, foram classificados em C. gloeosporioides e C. acutatum, respectivamente. Os resultados obtidos mediante o emprego de marcadores fAFLP indicaram uma alta variabilidade genética entre isolados de uma mesma população e a ocorrência de fluxo gênico. Além disso, tais resultados corroboraram aqueles obtidos pelo sequenciamento da região ITS1-5.8S-ITS2, por agruparem os isolados do estudo segundo a sua espécie. Os isolados representativos da população, inclusive aqueles obtidos de citros, de ambas as espécies de Colletotrichum, causaram sintomas típicos de antracnose quando inoculados em folhas de mangueiras „Palmer‟ e „Tommy Atkins‟, indicando que, provavelmente, não há especificidade de hospedeiros para essas espécies / The mango crop (Mangifera indica L.) is attacked by several diseases and in this context, the anthracnose is one of the most important. This disease is caused by the fungus C. gloeosporioides in most situations. Due to economic importance of the anthracnose on mango, the aim of this study was to analyze the genetic and pathogenic variability of Colletotrichum spp. isolates obtained from different organs and varieties of mango plants with anthracnose symptoms, and from different municipalities of São Paulo State that are among the major producers of mango. The isolates from mango were also compared with isolates obtained from citrus. Sequencing of ITS1-5.8S-ITS2 region from 183 isolates obtained from mango allowed the identification of them as C. gloeosporioides, however, one of them, was identified as C. acutatum. The isolates from citrus, obtained from syptomless leaves and flowers with rot symptoms, were identified as C. gloeosporioides and C. acutatum, respectively. The results obtained by applying fAFLP markers indicated high level of genetic variability among isolates within population and the occurrence of gene flow. Moreover, these results corroborated those achieved by sequencing of the ITS1-5.8S-ITS2 region, because the isolates were grouped according to its species. Representative isolates of the population, including those obtained from citrus, belonging to both species of Colletotrichum, caused typical symptoms of anthracnose disease on mango leaves of Palmer and Tommy Atkins varieties, indicating the lack of host specificity for these species

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-06-19Bitstream added on 2014-06-13T20:37:29Z : No. of bitstreams: 1 lopes_mv_me_jabo_prot.pdf: 799999 bytes, checksum: a3da99204a58afdd2f525f466e3bf214 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Funep/Oxiquimica / O objetivo do presente trabalho foi analisar as condições climáticas do Estado de São Paulo e desenvolver mapas de zonas de risco de epidemias de cancro cítrico, podridão floral e pinta preta do citros. Foram utilizados dados meteorológicos referentes aos anos de 2002, 2003, 2004 e 2005, os quais foram utilizados os modelos de previsão. Para o cancro cítrico desenvolvido por Campbell e Madden (1990) e Hau e Kranz (1990); podridão floral dos citros desenvolvido por Timmer e Zitko (1993) e Timmer e Brown (2000); pinta preta desenvolvido por Hau e Kranz (1990) e Bergamin Filho (1995. Após a contabilização dos índices, foram calculadas as porcentagens de dias favoráveis à ocorrência das doenças durante o ano e em períodos pré-definidos. A partir destas informações, foram gerados os mapas temáticos do Estado de São Paulo, com a distribuição espacial da porcentagem de dias favoráveis à ocorrência das doenças. A região Noroeste do Estado foi a que apresentou a maior porcentagem de dias favoráveis à ocorrência de cancro cítrico. As regiões Sul e Leste foram as que apresentaram maior favorabilidade de ocorrência da podridão floral do s citros. Para a pinta preta a região Sul com pontos no centro do Estado foi a que apresentou maior porcentagem de dias favoráveis a ocorrência da doença. / The objective of the present work was to analyze the climatic conditions of the State of São Paulo and to develop maps of zones of risk of epidemics of citrus canker, postbloom fruit drop of citrus and citrus black spot. They had been used given meteorological referring to the years of 2002, 2003, 2004 and 2005, which had been used the forecast models. For the citrus canker developed by Campbell and Madden (1990) and Hau and Kranz (1990); postbloom fruit drop of citrus developed by Timmer and Zitko (1993) and Timmer and Brown (2000); it citrus black spot developed for Hau and Kranz (1990) and Bergamin Filho (1995). The frequency of the data was hourly and when some station presented imperfection in the series of data, these had been surpassed of the station next. After the accounting of the indices, had been calculated the percentages of days favorable to the occurrence of the diseases in the year and in the periods. From these information, the thematic maps of the State of São Paulo had been generated, with the space distribution of the percentage of days favorable to the occurrence of the diseases. The region the Northwest of the State was the one that presented the biggest percentage of days favorable to the occurrence of citrus canker. The regions South and East had been the ones that had presented greater favorable of occurrence of the postbloom fruit drop of citrus. For the citrus black spot the South region with points in the center of the State was the one that presented greater percentage of favorable days the occurrence of the diseases.

Orientador: Edson Luiz Furtado / Banca: Cesar Junior Bueno / Banca: Marli de Fátima Stradioto Papa / Resumo: A cultura da seringueira [Hevea brasiliensis (Willd. ex Adr. Jussieu) Muell. Arg.] vem sendo atacada por várias doenças de importância econômica, dentre as quais está a antracnose, causada pelo fungo Colletotrichum sp. (teleomorfo: Glomerella sp.). Este fungo causa vários danos na planta como lesões nos folíolos, nos ponteiros, nos ramos, nos frutos e cancros no painel de sangria. Somente Colletotrichum gloeosporioides foi relatado como agente causal desta doença no Brasil. O presente trabalho teve como objetivo identificar isolados de Colletotrichum spp. de seringueira de diversas regiões de plantio do Estado de São Paulo. O trabalho foi conduzido em cinco fases: a) caracterização cultural, na qual foram observadas a coloração e o aspecto das culturas in vitro. Produção de conídios e taxa de crescimento em seis temperaturas (10, 15, 20, 25, 30 e 35 °C); b) caracterização morfológica, na qual foi medido comprimento, largura e observado o formato dos conídios; c) teste de patogenicidade em folíolos destacados e em discos de folíolos, com quatro isolados de seringueira e dois de citros; d) crescimento em benomyl em quatro concentrações de princípio ativo; e) Identificação molecular para culturas monospóricas e multispóricas com primers específicos para as espécies de Colletotrichum gloeosporioides e Colletotrichum acutatum e os primers ITS1 e ITS4 os quais amplificaram uma pequena região (18S) e uma grande região (28S), e estes também permitiram a amplificação da região 5.8S do rDNA e os espaçadores internos transcritos (ITS1 e ITS2), e f) testes de crescimento em meio de cultivo acrescido com fungicidas: flutriafol, tebuconazol, epoxiconazol + piradostrobina, clorotalonil + tiofonato-metílico, captana, mancozebe, carbendazim, azoxistrobina + ciproconazol e propiconazol. Neste teste foram utilizados quatro isolados de diferentes órgãos da planta... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The rubber cultivation [Hevea brasiliensis (Willd. ex Adr. Jussieu) Muell. Arg.] is being attacked by several diseases of economic importance, among which is the anthracnose; this is caused by the fungus Colletotrichum spp. (teleomorph: Glomerella spp). This fungus causes several damages in the plant such as injuries in the leaves, branches, fruits and cankers in the taping panel. Only Colletotrichum gloeosporioides was reported as the causal agent of this disease in Brazil. The aim of this study was to identify isolates of the fungus Colletotrichum spp. from rubber trees, localized in different regions of Sao Paulo state. The study was carried out by six phases: a) culture characterization, in which the color and the culture appearance were observed in vitro, conidial production and growth rate at six temperatures (10, 15, 20, 25, 30, 35 °C); b) morphological characterization, which consist of measuring the length and width, and observed the shape of the conidia; c) pathogenicity test on selected leaves and disks of leaves, with four isolates from rubber and two isolates from citrus; d) growth in fungicide benomyl at four concentrations of active ingredient; e) molecular identification for monosporic and multisporic cultures with specific primers to the species of Colletotrichum gloeosporioides and Colletotrichum acutatum and ITS1 and ITS4 primers which amplified a small region (18S) and a large region (28S), and these also allowed the amplification of 5.8S rDNA and internal transcribed spacers (ITS1 and ITS2); f) Growth tests in culture medium supplemented with fungicides: flutriafol, tebuconazole, epoxiconazole + piradostrobina, chlorothalonil + tiofonato-methyl, captan, mancozeb, carbendazim, azoxystrobin + cyproconazole and propiconazole. In this test, four isolates were used from... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2016-11-29T12:20:35Z No. of bitstreams: 1 Ana Leticia Rocha Monteiro.pdf: 843207 bytes, checksum: 5edb6fa96d360ea08be8b1ddf9cade76 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-29T12:20:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana Leticia Rocha Monteiro.pdf: 843207 bytes, checksum: 5edb6fa96d360ea08be8b1ddf9cade76 (MD5) Previous issue date: 2015-02-24 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Anthracnose is a major post-harvest diseases of strawberry, causing various losses and limiting the quality of the fruit. Besides the lack of studies on climatic conditions that favor the disease, lack of active ingredients registered for the management of the disease in Brazil defines the need to search for alternative control. This study aimed to study the influence of inoculum concentration, temperature and leaf wetness period and to evaluate the effect of gamma radiation on the severity of anthracnose caused by Colletotrichum acutatum in postharvest strawberry, and influence of this treatment on the physical attributes -chemical such as pH, total soluble solids (TSS), titratable acidity (TA) and TSS / TA. Inoculum concentrations tested were 102, 10³, 104, 105,106 and 107 spores / mL, for the fruits wet period were submitted to: 0, 12, 24, and 36 h of incubation, the influence of temperature on disease severity The fruits were incubated under controlled temperature for 12, 15, 20 and 25 ° C. In the control fruits with gamma radiation received doses: 0.25, 0.50, 0.75, 1.0, and 1.25 kGy in two stages: immediate and six hours after the inoculation of the fungus. The control treatment did not receive doses of gamma radiation. Disease severity was significantly influenced by the higher concentration of inoculum (107 spores / ml), incubation temperature and the wetness of the fruit, with larger lesions in the fruits exposed to 25 ° C and 36 h. The irradiation the best treatments were performed immediately after inoculation, highlighting the dose of 1.25 kGy. Treatment with gamma radiation did not alter the chemical characteristics of fruits analyzed in this study. Thus, these treatments can be given for the post-harvest treatment of strawberry. / A antracnose é uma das principais doenças pós-colheita do morango, causando diversas perdas e limitando a qualidade do fruto. Além da falta de estudos das condições climáticas que favorecem a doença, a falta de princípios ativos registrados para o manejo da doença no Brasil define a necessidade da busca de controle alternativo. Neste estudo objetivou-se estudar a influência da concentração de inóculo, temperatura e do período de molhamento, bem como, avaliar o efeito da radiação gama na severidade da antracnose causada por Colletotrichum acutatum em morango pós-colheita, além da influência desse tratamento nos atributos físico-químicos como pH, sólidos solúveis totais (SST), acidez titulável (AT) e a relação SST/AT. As concentrações de inóculo testadas foram 102, 10³, 104, 105,106 e 107 conídios/mL, para o período de molhamento os frutos foram submetidos a: 0, 12, 24, e 36 h de incubação, na influência da temperatura na severidade da doença os frutos foram incubados com temperatura controlada para 12, 15, 20 e 25 °C. No controle com radiação gama os frutos receberam as doses de: 0,25, 0,50, 0,75, 1,0 e 1,25 kGy em dois tempos: imediatamente e seis horas após a inoculação do fungo. A testemunha não recebeu doses de radiação gama. A severidade da doença foi significativamente influenciada pela mais alta concentração de inóculo (107 conídios/mL), temperatura de incubação e pelo período de molhamento dos frutos, com maiores áreas de lesão nos frutos expostos a 25 ºC e 36 h. Quanto a irradiação os melhores tratamentos foram realizados imediatamente após as inoculações, com destaque para a dose de 1,25 kGy. Os tratamentos com a radiação gama não alteraram as características químicas das frutas analisadas neste estudo. Assim, estes tratamentos podem ser indicados para o tratamento pós-colheita de morango.

A antracnose é uma das doenças mais importantes do pimentão em vários países. Por muitos anos, somente C. gloeosporioides foi relatado como agente causal da antracnose desta cultura no Brasil. Entretanto, recentemente C. acutatum e C. capsici também tem sido associados a esta doença em algumas regiões do país. Neste trabalho, 56 isolados de Colletotrichum obtidos de pimentão e procedentes de diferentes regiões produtoras do país foram caracterizados e identificados por meio de algumas características morfológicas e culturais, e pela análise por PCR utilizando oligonucleotídeos espécie-específicos. Isolados representativos de cada espécie identificada na população amostrada também foram caracterizados quanto à patogenicidade em frutos de pimentão verdes e maduros, feridos e não feridos e quanto a sensibilidade aos fungicidas azoxistrobina, carbendazim, tiabendazol, tebuconazol, captana, clorotalonil e cloreto de benzalcônio. Os resultados demonstram que C. acutatum é a espécie predominante nas principais regiões produtoras de pimentão do país, representando cerca de 72% da população amostrada. C. capsici foi encontrada com freqüência aproximada de 14%, nos estados de São Paulo e Minas Gerais. C. gloeosporioides representou apenas 5% da população amostrada e teve distribuição restrita ao estado de São Paulo e ao Distrito Federal. Um único isolado de C. coccodes foi encontrado no Rio Grande do Sul. Além dessas espécies, isolados identificados como C. boninense foram encontrados em São Paulo e no Rio Grande do Sul, com freqüência de 7% na população amostrada. Este parece ser o primeiro relato de C. boninense infectando pimentão no Brasil e em outras partes do mundo. A caracterização patogênica mostrou que isolados representativos de todas as espécies foram patogênicos aos frutos maduros feridos e não feridos. Nos frutos verdes feridos, apenas os isolados de C. acutatum e de C. capsici promoveram sintomas. Não foram observados sintomas nos frutos verdes sem ferimentos durante o período de avaliação do experimento (12 dias) para nenhum dos isolados. C. acutatum demonstrou ser a espécie mais agressiva, apresentando os menores períodos de latência e a maior esporulação tanto em frutos verdes (feridos) como nos maduros (feridos e não feridos). Os isolados pertencentes a diferentes espécies de Colletotrichum apresentaram sensibilidade diferenciada para todos os fungicidas sistêmicos avaliados. Os isolados de C. acutatum foram mais sensíveis a azoxistrobina, enquanto os isolados de C. gloeosporioides demonstraram a menor sensibilidade para este fungicida. Os isolados de C. gloeosporioides e C. boninense foram os mais sensíveis aos benzimidazóis (carbendazim e tiabendazol), enquanto o isolado de C. coccodes teve a menor sensibilidade para estes fungicidas. O fungicida tebuconazol promoveu o maior controle sobre o crescimento micelial dos isolados. Para este fungicida, C. capsici demonstrou ser a espécie menos sensível. Os resultados deste trabalho demonstram a presença de pelo menos cinco espécies de Colletotrichum responsáveis pela antracnose do pimentão no país e evidenciam a presença de importantes diferenças entre essas, que devem ser consideradas durante o manejo da doença. / In several countries, anthracnose is one of the most serious diseases in pepper. C. gloeosporioides has, for many years, been reported as the causal agent of anthracnose in Brazil. C. acutatum and C. capsici have only recently been reported as agents of anthracnose in some regions of the country. In this study, 56 isolates of Colletotrichum obtained from pepper from different areas of the country were characterized and identified based on the morphological characteristics of the conidia, as well as culture characteristics and PCR analysis with species-specific pairs of primers. Isolates representative of each identified species in the sampled population were also characterized according to their pathogenicity in pepper fruits (unripe, ripe, wounded and nonwounded) and also according to their sensitivity to fungicide (azoxystrobin, carbendazim, thiabendazole, tebuconazole, captan, chlorothalonil and benzalkonium chloride). The results have showed that C. acutatum is the most prevalent species found in the main production areas of pepper, present in about 72% of the sampled population. C. capsici was equivalent to 14% of the sampled population and found in the states of São Paulo and Minas Gerais. C. gloeosporioides was present in only 5% of the samples and it was restricted to the state of São Paulo and Distrito Federal. Only one isolate of C. coccodes was found in Rio Grande do Sul. Besides theses species, isolates of C. boninense were found in São Paulo and Rio Grande do Sul, with an occurrence of 7% in the sampled population. This seems to be the first report of C. boninense infecting pepper in Brazil and other parts of the world. The pathogenic characterization showed that representative isolates of all species were pathogenic in ripe, wounded, or nonwounded fruits. In wounded green fruit, only isolates of C. acutatum and C. capsici caused infection resulting in disease symptoms. No disease symptoms were observed in green nonwounded fruits inoculated with all Colletotrichum isolates, after 12 days of inoculation. C. acutatum was the most aggressive species with the shortest periods of latency and the highest rate of sporulation in either green wounded fruits or ripe fruits (wounded and nonwounded). Isolates of different species of Colletotrichum showed different sensitivity to the systemic fungicides evaluated. The isolates of C. acutatum were more sensitive to azoxystrobin, whereas C. gloeosporioides showed the lowest sensitivity to this fungicide. C. gloeosporioides and C. boninense isolates were the most sensitive to benzimidazoles fungicides (carbendazim and thiabendazole), whereas C. coccodes isolates showed the lowest sensitivity to these fungicides. The tebuconazol fungicide exerted the highest effect on mycelial growth for all Colletotrichum species. C. capsici showed to be less sensitive to this fungicide. The results of this work have shown the presence of at least five species of Colletotrichum responsible for anthracnose in pepper in Brazil and have made evident the importance of the differences between these species, which must be taken into account for the control of the disease.

O aumento da tolerância aos fungicidas convencionais, observado em diversos gêneros de fungos de interesse, e a preocupação crescente com o meio ambiente têm estimulado o desenvolvimento de novas alternativas para o controle de fitopatógenos. Dentre as novas estratégias antimicrobianas que têm sido avaliadas, o tratamento fotodinâmico antimicrobiano (TFA) é uma das mais promissoras. O TFA baseia-se no uso de um fotossensibilizador (FS) que se acumula seletivamente nas células do microrganismo alvo. A ativação do FS pela luz, na presença de oxigênio molecular, induz à formação de espécies reativas de oxigênio, como o oxigênio singlete, que provocam a morte do microrganismo alvo, com poucos danos ao hospedeiro. Apesar de muito promissor, o TFA ainda não foi explorado para o controle de fitopatógenos. No presente estudo, foi avaliada, in planta, a eficácia do TFA com o fotossensibilizador azul de metileno (MB) e radiação solar em conídios do fungo fitopatogênico Colletotrichum acutatum. Os experimentos foram conduzidos com MB de diferentes fabricantes, em duas concentrações (25 e 50 ?M) e em diferentes formulações, ao longo das diferentes estações do ano, em dias com e sem nebulosidade e em diferentes temperaturas. O TFA com MB e radiação solar foi extremamente eficaz, matando aproximadamente 100% dos conídios em todas as condições avaliadas. Os efeitos da aplicação do MB na planta hospedeira Citrus sinensis também foram avaliados. O FS foi aplicado repetidas vezes em folhas e em flores de mudas de laranjeira. Nenhum dano foi observado nas folhas ou nas pétalas após os tratamentos com o MB. Pela primeira vez, foi feito o estudo mecanístico dos efeitos do TFA com MB em conídios de C. acutatum. Foram avaliados os efeitos do TFA na permeabilidade da membrana plasmática dos conídios e na formação de espécies reativas de oxigênio tardias, por meio da utilização das sondas fluorescentes iodeto de propídio (PI) e dihidroetídio (DHE), respectivamente. O TFA com MB danificou a membrana plasmática, reduzindo a sua permeabilidade seletiva e induziu a formação de espécies reativas de oxigênio tardias nos conídios. Também foi conduzido um estudo de longa duração, no qual foi avaliada a tolerância dos conídios de C. acutatum ao TFA com o novo azul de metileno, após cada um de 45 ciclos sucessivos de TFA, seguido pela seleção dos sobreviventes. Foram observados aumentos gradativos na tolerância ao TFA a partir do 21° ciclo de seleção. Além do aumento na tolerância, também foi observado um aumento da pigmentação dos conídios, provavelmente decorrente da seleção de mutantes que acumulam mais carotenóides. / The increasing tolerance to conventional fungicides observed in several genera of pathogenic fungi and the growing concern about the environment have stimulated the development of new alternatives to control of plant pathogens. Among the new antimicrobial strategies that have been evaluated, antimicrobial photodynamic treatment (APDT) is one of the most promising. APDT is based on the use of a photosensitizer (PS) that selectively accumulates in the target microbial cells. Activation of the PS by light in the presence of molecular oxygen induces the formation of reactive oxygen species, such as singlet oxygen, which cause damages to the target microorganism without significant harm to the host. Although very promising, APDT has not yet been used to control plant-pathogenic fungi. In the present study, the effectiveness of the APDT with the photosensitizer methylene blue (MB) and solar radiation on conidia of the plant-pathogenic fungus Colletotricum acutatum was evaluated in planta. The experiments were conducted with MB from different brands, in two concentrations (25 and 50 ?M) and different formulations, throughout the different seasons of the year, on cloudy and sunny days and at different temperatures. APDT with MB and solar radiation was extremely effective, killing around 100% of conidia in all conditions evaluated. The effects of the MB on the host plant Citrus sinensis were also evaluated. The PS was applied repeatedly on the leaves and flowers of the plants. No damage was observed on the leaves or the petals after treatment with MB. For the first time the mechanistic study evaluating the effects of APDT on C. acutatum conidia was carried out. The effects of APDT on the permeability of the conidial plasma membrane and on the production of secondary reactive oxygen species were evaluated by using the fluorescent probes propidium iodide (PI) and dihydroethidium (DHE), respectively. APDT with MB damaged the plasma membrane, reducing its selective permeability and induced the formation of secondary reactive oxygen species in conidia. It was also conducted a long term study which assessed the tolerance of conidia of C. acutatum to APDT, after each of 45 successive cycles of APDT with new methylene blue followed by the selection of the survivors. A gradual increase in APDT tolerance was observed from the 21st cycle. Besides the increase in tolerance to APDT, it was also observed an increase in the pigmentation of conidia probably due to the selection of mutants that accumulate more carotenoids.

A citricultura brasileira se destaca no mercado global de citros, apresentando altos valores de produção e produtividade. Dentre as diversas doenças que afetam a cultura, a podridão floral dos citros (PFC) vem ganhando destaque com o deslocamento de áreas produtoras para regiões mais favoráveis à ocorrência desta doença. A PFC, causada por espécies dos complexos Colletotrichum acutatum e C. gloeosporioides, é especialmente problemática em anos de temperaturas amenas e alta umidade. Os citricultores realizam pulverizações preventivas para o controle da PFC todos os anos, embora condições climáticas favoráveis à doença ocorram apenas ocasionalmente. Além do impacto econômico, as frequentes pulverizações com fungicidas aumentam a pressão de seleção sobre isolados resistentes, o que pode interferir na eficiência do controle químico. A utilização de sistemas de previsão de epidemias pode evitar que pulverizações desnecessárias de fungicidas sejam realizadas caso não haja condições favoráveis à ocorrência da doença. Para o desenvolvimento destes sistemas, é imprescindível determinar um limiar de ação para a aplicação de fungicidas nos pomares. Dessa forma, o presente trabalho teve por objetivos: (i) estabelecer um limiar de ação para a aplicação de fungicidas com base na germinação de conídios de C. acutatum que permita o controle a doença igualmente ou de forma mais eficiente do que o sistema de pulverização adotado pelos citricultores do sudoeste paulista; (ii) caracterizar a sensibilidade de isolados dos complexos C. gloeosporioides e C. acutatum à trifloxistrobina e ao tebuconazol in vitro e molecularmente, para identificar possíveis mudanças de sensibilidade das espécies a estes fungicidas. Para a definição do limiar de ação, tratamentos baseados em índices de risco foram comparados ao tratamento testemunha e ao calendário fixo de aplicações, usualmente adotado pelos produtores. A aplicação de fungicidas quando limiar de 15% de germinação de conídios era atingido, foi eficiente em controlar a doença e reduzir o número de aplicações de fungicidas. Nos ensaios de sensibilidade a fungicidas dois métodos foram utilizados para a determinação da CE50: o da diluição em gradiente espiral para trifloxistrobina e tebuconazol e o da inibição da germinação de conídios para a trifloxistrobina. Foram utilizados isolados coletados entre 1999 e 2016. A CE50 média da coleção de isolados de acordo com o método da diluição em gradiente espiral variou de 0,158 a 0,297 μg/ml e 0,1 a 0,182 μg/ml para trifloxistrobina e tebuconazol, respectivamente. Para a trifloxistrobina, de acordo com o método da inibição da germinação, a CE50 média foi de 0,002 μg/ml. Não foram verificadas características moleculares nem valores de CE50 atrelados à mudança de sensibilidade dos isolados. / Brazilian citrus industry represents a significant share in the global citrus market. Amongst several diseases that affect the crop, postbloom fruit drop (PFD) has been gaining prominence in Sao Paulo with the displacement of citrus areas to regions in which weather conditions are more favorable to the occurrence of this disease. PFD, caused by species of the complexes Colletotrichum acutatum and C. gloeosporioides, is especially problematic in years of mild temperatures and high humidity. Citrus growers spray the orchards preventively for PFD control every year, although favorable climatic conditions do not occur regularly. In addition to the economic impact, this practice increases the selection pressure of fungicide resistant isolates, and may decrease the efficiency of chemical control in a long term. The use of disease forecasting systems is able to prevent unnecessary fungicide sprays. For the development of such systems, it is essential to determine an action threshold for the application of fungicides in the orchards. The objectives of this work were: (i) to establish an action threshold for fungicide sprays based on the germination of C. acutatum conidia; (ii) to characterize the sensitivity of C. gloeosporioides and C. acutatum isolates to trifloxystrobin and tebuconazole in vitro and molecularly. Regarding the definition of the action threshold, treatments based on risk indices were compared to the control treatments and calendar based sprays, usually adopted by growers. The 15% conidia germination threshold was efficient in controlling the disease and reducing the number of fungicide applications. In the fungicide sensitivity tests, two methods were used to determine the EC50, the spiral gradient dilution for trifloxystrobin and tebuconazole, and the method of conidial germination inhibition for trifloxystrobin. Isolates collected between 1999 and 2016 were used. The mean EC50 of the isolate collection determined by the spiral gradient dilution method ranged from 0.158 to 0.297 μg/ml and from 0.1 to 0.182 μg/ml for trifloxystrobin and tebuconazole, respectively. Mean EC50 of trifloxystrobin estimated by the conidial germination inhibition method was 0.002 μg/ml. No mutations or EC50 values indicated shifts of fungicide sensitivity on the isolates.

A citricultura brasileira se destaca no mercado global de citros, apresentando altos valores de produção e produtividade. Dentre as diversas doenças que afetam a cultura, a podridão floral dos citros (PFC) vem ganhando destaque com o deslocamento de áreas produtoras para regiões mais favoráveis à ocorrência desta doença. A PFC, causada por espécies dos complexos Colletotrichum acutatum e C. gloeosporioides, é especialmente problemática em anos de temperaturas amenas e alta umidade. Os citricultores realizam pulverizações preventivas para o controle da PFC todos os anos, embora condições climáticas favoráveis à doença ocorram apenas ocasionalmente. Além do impacto econômico, as frequentes pulverizações com fungicidas aumentam a pressão de seleção sobre isolados resistentes, o que pode interferir na eficiência do controle químico. A utilização de sistemas de previsão de epidemias pode evitar que pulverizações desnecessárias de fungicidas sejam realizadas caso não haja condições favoráveis à ocorrência da doença. Para o desenvolvimento destes sistemas, é imprescindível determinar um limiar de ação para a aplicação de fungicidas nos pomares. Dessa forma, o presente trabalho teve por objetivos: (i) estabelecer um limiar de ação para a aplicação de fungicidas com base na germinação de conídios de C. acutatum que permita o controle a doença igualmente ou de forma mais eficiente do que o sistema de pulverização adotado pelos citricultores do sudoeste paulista; (ii) caracterizar a sensibilidade de isolados dos complexos C. gloeosporioides e C. acutatum à trifloxistrobina e ao tebuconazol in vitro e molecularmente, para identificar possíveis mudanças de sensibilidade das espécies a estes fungicidas. Para a definição do limiar de ação, tratamentos baseados em índices de risco foram comparados ao tratamento testemunha e ao calendário fixo de aplicações, usualmente adotado pelos produtores. A aplicação de fungicidas quando limiar de 15% de germinação de conídios era atingido, foi eficiente em controlar a doença e reduzir o número de aplicações de fungicidas. Nos ensaios de sensibilidade a fungicidas dois métodos foram utilizados para a determinação da CE50: o da diluição em gradiente espiral para trifloxistrobina e tebuconazol e o da inibição da germinação de conídios para a trifloxistrobina. Foram utilizados isolados coletados entre 1999 e 2016. A CE50 média da coleção de isolados de acordo com o método da diluição em gradiente espiral variou de 0,158 a 0,297 μg/ml e 0,1 a 0,182 μg/ml para trifloxistrobina e tebuconazol, respectivamente. Para a trifloxistrobina, de acordo com o método da inibição da germinação, a CE50 média foi de 0,002 μg/ml. Não foram verificadas características moleculares nem valores de CE50 atrelados à mudança de sensibilidade dos isolados. / Brazilian citrus industry represents a significant share in the global citrus market. Amongst several diseases that affect the crop, postbloom fruit drop (PFD) has been gaining prominence in Sao Paulo with the displacement of citrus areas to regions in which weather conditions are more favorable to the occurrence of this disease. PFD, caused by species of the complexes Colletotrichum acutatum and C. gloeosporioides, is especially problematic in years of mild temperatures and high humidity. Citrus growers spray the orchards preventively for PFD control every year, although favorable climatic conditions do not occur regularly. In addition to the economic impact, this practice increases the selection pressure of fungicide resistant isolates, and may decrease the efficiency of chemical control in a long term. The use of disease forecasting systems is able to prevent unnecessary fungicide sprays. For the development of such systems, it is essential to determine an action threshold for the application of fungicides in the orchards. The objectives of this work were: (i) to establish an action threshold for fungicide sprays based on the germination of C. acutatum conidia; (ii) to characterize the sensitivity of C. gloeosporioides and C. acutatum isolates to trifloxystrobin and tebuconazole in vitro and molecularly. Regarding the definition of the action threshold, treatments based on risk indices were compared to the control treatments and calendar based sprays, usually adopted by growers. The 15% conidia germination threshold was efficient in controlling the disease and reducing the number of fungicide applications. In the fungicide sensitivity tests, two methods were used to determine the EC50, the spiral gradient dilution for trifloxystrobin and tebuconazole, and the method of conidial germination inhibition for trifloxystrobin. Isolates collected between 1999 and 2016 were used. The mean EC50 of the isolate collection determined by the spiral gradient dilution method ranged from 0.158 to 0.297 μg/ml and from 0.1 to 0.182 μg/ml for trifloxystrobin and tebuconazole, respectively. Mean EC50 of trifloxystrobin estimated by the conidial germination inhibition method was 0.002 μg/ml. No mutations or EC50 values indicated shifts of fungicide sensitivity on the isolates.