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Caracteriza??o estrutural de um novo condroitim antitromb?tico altamente sulfatado contendo o res?duo de GlcA 2,3-O-dissulfato do Litopenaeus vannameiCavalcante, R?mulo dos Santos 07 August 2015 (has links)
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Previous issue date: 2015-08-07 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / Por muitos anos as doen?as cardiovasculares e os dist?rbios tromboemb?licos v?m representando a principal causa de mortes por doen?as no mundo. Diante desta realidade e das complica??es do uso da heparina, v?rios estudos relatando a ocorr?ncia de glicosaminoglicanos com potencial antitromb?tico j? foram descritos. No entanto, com o aprimoramento e o surgimento de novas t?cnicas de caracteriza??o estrutural, tem sido poss?vel identificar novas mol?culas antitromb?ticas e compreender outros aspectos da rela??o estrutura-atividade destes compostos. Nesse contexto, este trabalho descreve a ocorr?ncia de um condroitim sulfato altamente sulfatado (CSAS) e com grande potencial terap?utico no cefalot?rax do camar?o Litopenaeus vannamei. Essa mol?cula foi isolada mediante prote?lise, tratamento com acetona e purificado por cromatografias de troca-i?nica e gel filtra??o. Estruturalmente, o CSAS do camar?o apresentou uma massa molecular m?dia de ~ 26 kDa e n?o foi completamente digerido pelas condroitinases AC e ABC liases. A partir dos espectros de RMN unidimensional TOCSY seletivo e bidimensional ?H/??C HSQC foi poss?vel identificar a presen?a do raro res?duo de ?cido glucur?nico 2,3-O-disulfatado (GlcA,2,3S), al?m dos 2-O- e 3-O-sulfatado. A avalia??o do CSAS do camar?o sobre o sistema de coagula??o mostrou uma grande capacidade de inibi??o da trombina (~ 94% de inibi??o) e uma insignificante atividade anticoagulante pelos m?todos de TTPA, TP e atividade anti-Xa. Esses dados, somados a incapacidade de estabiliza??o da antitrombina III pelo CSAS do camar?o, sugerem que sua atividade anticoagulante ? mediada pelo cofator II da heparina. Al?m disso, foi observado que esta mol?cula tamb?m apresenta um baixo efeito hemorr?gico e um grande potencial antitromb?tico observado pelos m?todos de indu??o de trombose venosa em ratos (~ 70% de redu??o dos trombos formados) e de est?mulo da s?ntese de GAGs antitromb?ticos em c?lulas endoteliais. Este trabalho relata pela primeira vez a ocorr?ncia de um CSAS
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Atividade biológica do condroitim sulfato nos estágios iniciais de colestase extra-hepáticaGuedes, Pedro Luiz Rodrigues 30 July 2013 (has links)
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Previous issue date: 2013-07-30 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Condroitim sulfato (CS) é um glicosaminoglicano (GAG), presente na matriz extracelular (MEC) de vários tecidos de mamíferos, utilizado para o tratamento da osteoartrite e, recentemente, tem despertado grande interesse devido ao seu potencial anti-inflamatório. Vários modelos experimentais in vivo de inflamação são empregados para o estudo da atividade anti-inflamatória, entre eles o modelo de fibrose induzida por colestase extra-hepática. A colestase produz lesão hepatocelular com edema do trato portal, infiltrado leucocitário, proliferação de células epiteliais biliares e fibrose do trato portal. O objetivo deste trabalho foi analisar os efeitos do CS no modelo de colestase extra-hepática emperimental induzido por laqueadura do ducto biliar (BDL) em ratos Wistar. Para isso foram utilizados animais (n = 82) de 6 a 8 semanas de idade eutanasiados 2, 7 ou 14 dias após o procedimento cirúrgico divididos nos grupos: BDL, BDL tratado com CS, Sham e Sham tratado com CS. Foram avaliados peso corporal e do fígado dos animais, concentrações séricas de bilirrubina direta (BD), globulinas, atividades de gama glutamil transpeptidase (Gama GT), fosfatase alcalina (FA), alanina transaminase (ALT) e aspartato transaminase (AST), alterações morfológicas no tecido, atividade de mieloperoxidase (MPO), atividade de metaloproteases (MMP-9, MMP-2 e pró MMP-2) e conteúdo de GAGs no fígado dos animais, além da análise histopatológica do tecido hepático. O CS obtido para a realização do trabalho apresentou teores superiores a 92%, com peso molecular de aproximadamente 40 kDa e um conteúdo dissacarídico com predominância de Δdi4S (65%). BDL gerou vários sintomas relacionados à lesão celular e ao processo inflamatório como aumento dos níveis séricos de BD e globulinas, aumento das atividades de Gama GT, FA, ALT e AST, infiltrado inflamatório e modificação morfométrica, com proliferação ductular, e na MEC do fígado dos animais induzidos. CS levou a redução do aumento inicial das transaminases indicando proteção dos tecidos lesados no procedimento cirúrgico. O tratamento levou à redução do infiltrado inflamatório no tecido, expresso pela diminuição significativa da atividade de MPO no homogenato. A remodelação tecidual também foi reduzida, havendo diminuição da atividade de MMP-9, pró MMP-2 e MMP-2 e ainda dos níveis dos GAGs dermatam sulfato e heparam sulfato presentes, produzidos por células estreladas em resposta ao dano no tecido. Estes resultados mostram que o CS reduziu os efeitos da lesão hepática do modelo e foi capaz de retardar a fibrogênese hepática. / Chondroitin sulfate (CS) is a glycosaminoglycan (GAG) present in the extracellular matrix (ECM) of many mammalian tissue, used for osteoarthritis treatment and, recently, has aroused great interest due to its anti-inflammatory potential. Several in vivo inflammation experimental models are employed to study anti-inflammatory activity, including extra-hepatic cholestasis induced fibrosis. Cholestasis produces hepatocellular injury with portal tract edema, leukocyte infiltration, biliary epithelial cells proliferation and portal tract fibrosis. The aim of this work was to analyze CS effects on an extra-hepatic cholestasis experimental model induced by bile duct ligation (BDL) on Wistar rats. For this purpose 6 to 8 weeks old animals (n = 82) were euthanized 2, 7 or 14 days after surgical procedure, previously divided into groups: BDL, CS treated BDL, Sham, CS treated Sham. To analyze disease evolution body and liver weight, serum concentrations of direct bilirubin (BD), globulins, activities of gamma glutamyl transferase (Gama GT), alkaline phosphatase (FA), alanine and aspartate aminotransferases (ALT and AST), morphological changes on tissue, mieloperoxidase (MPO) activity, matrix metalloproteinases (MMP-9, pró MMP-2 and MMP-2) activities and liver GAGs content, besides histopathological analysis of the tissue. CS acquired presented over 92% tenor, molecular weight of approximately 40 kDa and disaccharide content of Δdi4S predominantly (65%).BDL caused many symptoms related to cellular damage and inflammatory process such as increasing BD and globulins, elevation of Gama GT, FA, ALT and AST activities, inflammatory infiltrate and changes on liver morphometry, with ductular proliferation, and on the ECM. CS reduced initial burst on aminotransferases, indicating protection of tissues injured on surgery procedure. Treatment led to reduction of inflammatory infiltrate, showed by significant decreasing on MPO activity. Tissue remodeling was also reduced, with decrease of MMP-9, pro MMP-2 and MMP-2 activities and also of GAGs dermatam sulfate and heparam sulfate levels, produced by hepatic stellate cells in response of tissue damage. These results show that CS reduced cholestasis hepatic injury effects, being capable to slow down liver fibrogenesis.
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Avaliação da atividade anti-inflamatória de condroitim sulfato e glucosamina em modelo experimental de colite ulcerativa em ratosOliveira, Luiz Gustavo de 22 March 2013 (has links)
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Previous issue date: 2013-03-22 / Doenças inflamatórias intestinais, entre elas colite ulcerativa e doença de Crohn, compreendem um amplo espectro de afecções que apresentam em comum inflamação crônica do trato gastrointestinal. Colite ulcerativa afeta exclusivamente o cólon e o reto, possui etiologia ainda pouco conhecida podendo estar relacionada com fatores ambientais, genéticos e de resposta imune. O tratamento se baseia em medicamentos como aminossalicilatos, glicocorticóides e imunossupressores, porém seus efeitos colaterais atrapalham a adesão do paciente ao tratamento por longos períodos. Condroitim sulfato (CS) e glucosamina (GlcN) são atualmente indicados para o tratamento de doenças inflamatórias, como a osteoartrite, principalmente por apresentarem efeito anti-inflamatório ao diminuírem a ação do fator de transcrição NF-kB diminuindo a expressão de metaloproteases (MMP), TNF-α, iNOS entre outros mediadores inflamatórios. O objetivo deste trabalho foi analisar os efeitos da associação de CS e GlcN na colite ulcerativa experimental induzida por dextran sulfato de sódio (DSS) em ratos Wistar. Para isso foram avaliados o índice de atividade da doença (IAD), parâmetros hematológicos e bioquímicos, morfológicos e a atividade de MMP-2 e -9 da matriz extracelular no intestino grosso, concentração de NO tecidual e concentração de glicosaminoglicanos. Os animais foram divididos em quatro grupos: (1) controle, (2) controle + CS/GlcN, (3) DSS , (4) DSS + CS/GlcN. Observamos que o tratamento com CS/GlcN melhorou a severidade da colite aguda em ratos, verificado pela redução do score histológico e melhora de parâmetros hematológicos. CS/GlcN também reduziu a destruição de células caliciformes observados pelo azul de alcian, bem como a produção de óxido nítrico, a atividade de mieloperoxidase e metaloproteases, principalmente de MMP-9. Além disso, foi observado uma redução na concentração de GAGs total no grupo DSS + CS/GlcN quando comparado ao grupo DSS. Portanto, a administração de CS/GlcN apresentou melhoras em alguns dos parâmetros avaliados principalmente na atividade de MMP-9, mostrando um potencial destes compostos para futura utilização no tratamento dessa patologia. / Inflammatory bowel disease, including ulcerative colitis and Crohn's disease comprising a broad spectrum of diseases those have in common chronic inflammation of the gastrointestinal tract. Ulcerative colitis affects only the colon and rectum, has still poorly understood etiology and this could may be related to environmental factors, genetic and immune response. Treatment is based on drugs as aminosalicylates, immunosuppressants and glucocorticoids, but its side effects hinder patient compliance with treatment for long periods. Chondroitin sulphate (CS) and glucosamine (GlcN) are currently indicated for treatment of inflammatory diseases such as osteoarthritis, mainly because of the anti-inflammatory effect by decreasing the activity of transcription factor NF-kB and decreasing the expression of metalloproteases (MMP), TNF-α, iNOS and other inflammatory mediators. The objective of this study was to analyze the effects of the combination of CS and GlcN in experimental ulcerative colitis model induced by dextran sulfate sodium (DSS) in rats. To do so we evaluated the disease activity index (DAI), haematological and biochemical parameters, morphological changes and activity of MMP-2 and -9, NO and glycosaminoglycans concentration in the large intestine. Animals were divided into four groups: (1) control, (2) control + CS / GlcN, (3) DSS-induced colitis, (4) DSS + CS / GlcN. We observed that treatment with CS/GlcN improved the severity of acute colitis in rats verified by histological score reduction and improvement in hematological parameters. CS/GlcN also reduced goblet cells destruction observed by alcian blue, as well as nitric oxide production, the activity of myeloperoxidase and metalloproteases, especially MMP-9. Moreover, we observed a reduction in the concentration of total GAG + DSS group CS / GlcN when compared to DSS. Therefore, administration of CS/GlcN showed improvements in some of the parameters evaluated mainly on the activity of MMP-9, showing a potential future use of these compounds for the treatment of this pathology.
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