Tese (Doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Nanociência e Nanobiotecnologia, 2018. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-07-10T18:41:17Z No. of bitstreams: 1 2018_CláudiaBatistaSiqueiraLeite.PDF: 5231365 bytes, checksum: f6671cf4fdf2ba9095257300d4182f37 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-07-14T17:09:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2018_CláudiaBatistaSiqueiraLeite.PDF: 5231365 bytes, checksum: f6671cf4fdf2ba9095257300d4182f37 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-14T17:09:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018_CláudiaBatistaSiqueiraLeite.PDF: 5231365 bytes, checksum: f6671cf4fdf2ba9095257300d4182f37 (MD5) Previous issue date: 2018-07-10 / O tratamento das condropatias, ou lesões de cartilagens, ainda é um grande desafio na reabilitação, principalmente pelas próprias características da cartilagem, que promovem um baixo potencial de regeneração. A degeneração das cartilagens, acompanhada de alterações das estruturas ósseas vizinhas, é conhecida como osteoartrite. Essa afecção trata-se de uma causa frequente de dor, limitação funcional e pode levar à incapacidade, ocasionando considerável perda da qualidade de vida. A alternativa de tratamento com agentes modificadores de estrutura – como os sulfatos de Glucosamina (GS) e a Condroitina (CS) – é comumente prescrita para os pacientes e vem sendo muito pesquisada. Meta-análises apontam que esses fármacos, usados via oral, têm efeitos incertos como modificadores da estrutura articular. O objetivo do estudo foi propor uma nova abordagem terapêutica para a recuperação das lesões condrais e osteocondrais do joelho de humanos. Essa abordagem é formada por aplicação transdérmica (nanoemulsão associada ao ultrassom e oclusão) e exercícios terapêuticos. O delineamento metodológico iniciou-se, primeiramente, com o desenvolvimento e a caracterização da Nanoemulsão de GS e CS, seguidos das análises in vitro do potencial citotóxico, de irritabilidade e de permeação da nanoemulsão. O ensaio clínico, por meio de estudo piloto, foi a fase final do processo metodológico. Uma nanoemulsão transparente, do tipo óleo-em-água (O/A), mostrou estabilidade por 150 dias na temperatura ambiente e a 4ºC. Seus reagentes foram o Cremophor ELP (9%), o Óleo de Rícino (3%), Água Ultrapura (78%), GS (5%) e CS (5%). Seu diâmetro hidrodinâmico de 29,3 nm, potencial zeta de -2,44 mV, índice de polidispersão de 0,11 e pH de 4,23 evidenciaram características desejáveis para realização de análises seguintes. A Cryo-Tem mostrou morfologia esférica e diâmetros menores do que 100 nm. O sistema em estudo não apresentou citotoxicidade in vitro na linhagem NIH-3T3, por um período de 24 horas, utilizando o ensaio MTT. No teste de membrana corioalantóide, tanto a nanoemulsão como seu homólogo em branco apresentaram-se no limite inferior da faixa considerada “moderadamente irritante”. A Análise Elementar (CHN) foi utilizada para quantificação dos fármacos após teste de permeação em célula de difusão. Quando utilizado a Nanoemulsão, houve menor retenção de carbono no estrato córneo, maior retenção de carbono na pele viável e maior dose de carbono foi quantificada no líquido receptor. Esses índices foram significativamente maiores em comparação à formulação controle. O estudo piloto foi de fundamental importância para detectar algumas necessidades de ajustes na metodologia da pesquisa, como a alteração no número de sessões por semana, no tempo total de intervenção, na rotina de aplicação dos instrumentos de avaliação e na forma de avaliação dos dados numéricos. Além disso, o estudo piloto mostrou relevância clínica da proposta terapêutica, mesmo que ainda não tenha sido possível identificar significância estatística no resultado entre os grupos. O Grupo-Nano teve superioridade em 4 dos 5 domínios (grupos de sintomas) avaliados, quando comparado com o Grupo-Controle. Além do mais, o Grupo-Nano mostrou em Ressonância Nuclear Magnética uma recuperação total de lesão de cartilagem patelar. Mediante os fatos expostos, a Nanoemulsão O/A de GS e CS, não tóxica e estável, associada ao ultrassom, à cinesioterapia e à oclusão, foi capaz de melhorar a absorção transdérmica e mostrar uma relevância clínica no alívio dos sintomas e na recuperação da estrutura articular em humanos com lesões condrais do joelho. / The treatment of chondropathy, or lesions in cartilage, is still a major challenge in rehabilitation, principally due to the characteristics of cartilage itself, which promote low regeneration potential. The degeneration of cartilage, accompanied by alterations in the neighboring bone structures, is known as osteoarthritis. This condition is a frequent cause of pain and of functional limitations, and it can lead to incapacity, occasioning a considerable loss in the quality of life. The treatment option with structure-modifying agents, such as sulfates of Glucosamine (GS) and Chondroitin (CS), is commonly prescribed for patients and has been researched frequently. Meta-analyses indicate that these drugs, used via oral, have uncertain effects as articular structure modifiers. The objective of this study was to propose a new therapeutic approach to recovery from chondral and osteochondral lesions in the human knee. This approach consists of transdermal application (nanoemulsion associated with ultrasound and occlusion) and therapeutic exercises. The methodological design started with the development and characterization of the Nanoemulsion of GS and CS, followed by in vitro analyses of cytotoxic potential, irritability and nanoemulsion permeation. The clinical assay, by means of a pilot study, was the final phase of the methodological process. A transparent nanoemulsion, of the oil-in-water type (O/W), showed stability for 150 days at ambient temperature and at 4ºC. Its reagents were Cremophor ELP (9%), and Castor Oil (3%), Ultrapure Water (78%), GS (5%) and CS (5%). Its hydrodynamic diameter was 29.3 nm, polydispersion index 0.11, zeta potential -2.44 mV and pH 4.23, and these values demonstrated desirable characteristics for carrying out the next analyses. Cryo- Tem showed spherical morphology and diameters smaller than 100 nm. The system under study did not present cytotoxicity in vitro in the NIH-3T3 lineage, for a period of 24 hours, using the MTT assay. In the Hen's Egg Test – Chorioallantoic Membrane (HET-CAM) method, both the nanoemulsion and its blank homologue were at the lowest limit of the category considered “moderate irritability”. Elemental Analysis (CHN) was used to quantify the drugs after the permeation test in a diffusion cell. When the Nanoemulsion was used there was less retention of carbon in the stratum corneum, greater retention of carbon in the viable skin, and a greater dose of carbon was quantified in the receiver liquid. These indices were significantly higher than those for the control formulation. The pilot study was of fundamental importance in detecting some of the adjustments needed in the research methodology, such as the alteration in the number of sessions per week, in the total intervention time, in the routine for applying evaluation tools and in the way in which numerical data should be evaluated. In addition, the pilot study showed the clinical importance of the therapeutic proposal, although it has still not been possible to identify statistical significance in the result between groups. The Nano-Group was superior in 4 of the 5 domains (groups of symptoms) evaluated, when compared with the Control-Group. Moreover, the Nano-Group showed complete recovery of the patellar cartilage lesion, grade II, in nuclear magnetic resonance imaging. In this context, the O/W Nanoemulsion of GS and CS, which is non-toxic and stable, when associated with ultrasound, kinesiotherapy and occlusion, was capable of improving transdermal absorption and showed clinical significance in relieving symptoms and in improving articular structure in humans with chrondral lesions of the knee.

Submitted by Elaine Talita Santos null (elaine.unesp@hotmail.com) on 2017-04-21T13:49:17Z No. of bitstreams: 1 Tese_Elaine_Talita_Santos.pdf: 1660112 bytes, checksum: d57b365aef5020504d238b52de9f4b1c (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-04-25T18:54:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 santos_et_dr_jabo.pdf: 1660112 bytes, checksum: d57b365aef5020504d238b52de9f4b1c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-25T18:54:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 santos_et_dr_jabo.pdf: 1660112 bytes, checksum: d57b365aef5020504d238b52de9f4b1c (MD5) Previous issue date: 2017-02-06 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste estudo foi verificar quais os efeitos do aditivo com glicosaminoglicanos (sulfato de condroitina e de glucosamina) e vitamina C in ovo e na dieta em frangos de corte. Para isso realizaram-se dois experimentos de incubação e um de criação, respectivamente. Foram incubados 490 ovos férteis de frangos de corte, distribuídos em delineamento inteiramente casualizado com cinco tratamentos: ovos não injetados e ovos injetados com 0, 2, 4 e 6 μg de aditivo/100 μL de água no quarto dia da incubação, com 14 repetições de sete ovos por tratamento. Os dados foram submetidos a análise de variância pelo procedimento Modelo Linear Geral (GLM) do SAS. Avaliou-se o efeito dos tratamentos em relação aos parâmetros de incubação, qualidade do pinto pós-eclosão e características ósseas. A nutrição in ovo com glicosaminoglicanos (GAGs) e vitamina C não interferiu nos parâmetros de incubação e promoveu melhora do desenvolvimento ósseo nos pintos pós eclosão. No segundo experimento de incubação foram incubados 2.160 ovos férteis de frangos de corte, distribuídos em um delineamento casualizado com dois tratamentos: ovos não injetados e ovos injetados 4 μg de aditivo/100 μL de água no quarto dia da incubação, com 15 repetições de 72 ovos por tratamento. Após a eclosão, 760 aves foram alojadas e distribuídas em esquema fatorial 2x2. Sendo dois tratamentos na incubação (ovos não injetados e ovos injetados com 4 μg de aditivo) e dois tratamentos durante a criação (dieta sem a inclusão de aditivo e dieta com 0,74 g de aditivo/100 kg de ração). O objetivo desse estudo foi determinar se a nutrição in ovo ou na dieta com glicosaminoglicanos (sulfato de condroitina e sulfato de glucosamina) e vitamina C influenciaria sobre a macroscopia óssea e da cartilagem, composição mineral, densitometria, resistência e histologia do fêmur e da tíbia, parâmetros sanguíneos, desempenho e rendimento de carcaça e de cortes de frangos de corte aos 42 dias de idade. Os efeitos de 4 μg de aditivo in ovo e 0,74 g de aditivo por kg de ração foram submetidos à análise de variância usando o procedimento do Modelo Linear Geral (GLM) do SAS®. Concluí-se que a nutrição in ovo ou durante a criação de frangos de corte, com sulfato de condroitina, sulfato de glucosamina e vitamina C, age no desenvolvimento ósseo e cartilaginoso das aves de forma positiva, quando utilizados isoladamente, e podem contribuir na diminuição de problemas ósseos em frangos de corte. / The purpose of this study was to verify the additive effects with glycosaminoglycans (chondroitin sulfate and glucosamine) and vitamin C in ovo feeding and diet of broilers. Two incubation experiments and one rearing experiment were carried out, respectively. A total of 490 Cobb® fertile broiler eggs were incubated and distributed in completely randomized experimental design, with five treatments: un-injected egg, in injection egg of 0, 2, 4 and 6 μg additive/100 μL water on day four of incubation. Data were subjected to analysis of variance by the General Linear Model procedure (GLM) of SAS®. Were evaluated the treatments effect in relation the incubation parameters, chick quality post hatching and bone characteristics. In ovo feeding with glycosaminoglycans (GAGs) and vitamin C did not interfere on incubation parameters and promoted improvement of bone development in chicks after hatching. Two thousand hundred sixty (2,160) Cobb® fertile broiler eggs were distributed into five teen trays (repetitions) with seventy-two eggs/treatment/tray. After hatching, 760 birds were housed and distributed in a 2x2 factorial design. Were two incubation treatments (un injected eggs and eggs injected with 4 μg of additive) and two rearing treatments (with 0.74 g of additive/100 kg of feed). The purpose of this study was to determine if in ovo feeding or feed nutrition with glycosaminoglycans (chondroitin sulfate and glucosamine sulfate) and vitamin C would influence on bone and cartilage macroscopic, mineral composition, densitometry, breaking strength and histology of the femur and tibia, blood parameters, performance and carcass yield of broilers at 42 days of age.The effects of 4 μg additive in ovo feeding and 0.74 g/kg additive in feed nutrition were submitted to analysis of variance using the General Linear Model procedure (GLM) of SAS®. We conclude that in ovo feeding or during broiler rearing, with chondroitin sulfate, glucosamine sulfate and vitamin C, act on the bone and cartilaginous system development of birds positively, when used isolated and may represent the solution to bone problems in broilers. / FAPESP: 2013/04158-8

Foram sintetizadas duas novas séries de tensoativos de açúcar derivados da 2-D-glucosamina: os metil 2-acilamido-2-deóxi-6-O-sulfonato-D-glucopiranosídeos de sódio (aniônicos) e os cloretos de metil 2-acilamido-2,6-dideóxi-6-trimetilamônio-D-glucopiranosídeos (catiônicos). Os tensoativos aniônicos foram obtidos pela acilação da 2-D-glucosamina com cloretos de acila (com 8, 12 e 16 carbonos), seguida pela metilação desses derivados com metanol em meio ácido, e posterior sulfatação dos metil glucosídeos com complexo trióxido de enxofre-piridina. Os tensoativos catiônicos foram obtidos pela tosilação dos metil glucosídeos, seguida pela quaternização com trimetilamina e troca do contra-íon tosilato por cloreto com resina de troca-iônica. Esses tensoativos apresentaram c.m.c. similares a de outros tensoativos iônicos de cadeia hidrofóbica de igual comprimento, mas energias livres de transferência do grupo polar para a micela muito mais favoráveis. Esse fato foi atribuído à formação de ligações de hidrogênio entre os grupos polares do tensoativo na micela, e à hidrofobicidade do açúcar. As micelas formadas apresentaram números de agregação maiores que os obtidos para outros tensoativos, provavelmente devido às interações atrativas entre os grupos polares. / Two new sugar-based surfactant series were synthesized from 2-D-glucosamine: sodium methyl 2-acylamido-2-deoxi-6-O-sulfonate-D-glucopyranosides (anionic) and methyl 2-acylamido-2,6-dideoxi-6-trimethylamonium-D-glucopyranoside chlorides (cationic). The anionic surfactants were obtained by the acylation of 2-D-glucosamine with acyl chlorides (with 8, 12 and 16 carbons), followed by the methylation of these derivatives with methanol in acidic media, and the sulfation of the methyl glucosides with sulfur trioxide-pyridine complex. The cationic surfactants were obtained by the tosylation of methyl glucosides followed by the quaternization with trimethylamine and exchange of the tosylate contra-ion with chloride ions on an ion exchange resin. These surfactants showed c.m.c. similar to other ionic surfactants with equal hydrophobic chain lengths, but more favorable free energies of transfer of the polar head to the micelle. This fact is attributed to hydrogen bonding between the head groups of the surfactant in the micelle, and the hydrophobicity of the sugar moiety. The micelles of these surfactants showed aggregation numbers larger than those obtained for other surfactants, problably because of head-group attractive interactions.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-10-28 / Diversos fatores associados à menopausa contribuem para mudanças na pele, incluindo envelhecimento cronológico do organismo e a ausência de hormônios esteróides. Sabe-se que a supressão dos hormônios sexuais causa alterações na matriz extracelular. O ácido hialurônico (HA) é um glicosaminoglicano de alto peso molecular e é o maior componente da matriz extracelular da pele. A pele contém aproximadamente 50% de todo HA do organismo. Diversas funções biológicas foram atribuídas ao ácido hialurônico, tais como: estabilização da matriz extracelular, retenção de água, lubrificação de articulações, proliferação celular e regulação das atividades celular. A glicosamina sulfato (Glc) e o condroitim sulfato (CS), ambos componentes da matriz extracelular, têm sido utilizados no tratamento da osteoartrite. A glicosamina sulfato é um amino açúcar que está presente em todo tecido humano e é precursora na biossíntese dos glicosaminoglicanos e proteoglicanos. O condroitim sulfato é um glicosaminoglicano formado por unidades dissacarídicas repetidas contendo galactosamina sulfato e ácido glucurônico. Entretanto, os efeitos da glicosamina sulfato apenas ou associada ao condroitim sulfato (Glc/CS) ainda são desconhecidos na pele. O presente trabalho analisa a distribuição do ácido hialurônico na pele de ratas ooforectomizadas e tratadas com Glc ou Glc/CS. Ratas wistar (n = 50) foram divididas em dois grupos: não ooforectomizados (controle) e ooforectomizados (experimental). Os animais receberam por gavagem 0,0214 mg Dinaflex® (glicosamina sulfato) ou de Condroflex® (glicosamina sulfato + condroitim sulfato) por grama de peso do animal dissolvidos em 250 μl de água durante 45 e 60 dias. As peles foram retiradas e foram analisados os seguintes parâmetros: 1) espessura da derme e epiderme; 2) localização histoquímica do ácido hialurônico na epiderme e derme; 3) quantificação bioquímica do ácido hialurônico na pele. Os resultados mostraram que: 1) Animais ooforectomizados apresentam diminuição na concentração de ácido hialurônico na pele; 2) Animais ooforectomizados e tratados com água ou glicosamina sulfato ou glicosamina sulfato associada ao condroitim sulfato, por 45 e 60 dias não apresentam alterações na concentração de ácido hialurônico na pele; 3) A administração terapêutica destes compostos deve levar em consideração as peculiaridades de cada tecido, uma vez que a literatura mostra que a cartilagem responde a administração terapêutica destes açucares. / Several factors contribute to the skin changes that are associated with menopause, including chronologic aging of the organism and the withdrawal of steroid hormones. It is known that sexual hormone suppression leads to alterations in the skin extracellular matrix. Hyaluronic acid (HA) high molecular weight glycosaminoglycan and a major component of the extracellular matrix. In the skin, which contains 50% of the total body HA. Several biological functions have been assigned to HA, among them the stabilization of the extracellular matrix, water homeostasis, joint lubrification, proliferation cell and regulation of the cellular activities. Glucosamine sulfate (Glc) and chondroitin sulfate (CS), both components to the extracellular matrix, have been used for treatment of osteoarthritis. The Glucosamine sulfate is an amino monosaccharide that is present in all human tissues and is precursors for the biosynthesis of the glycosaminoglycan and ploteoglycans. The chondroitin sulfate is a glycosaminoglycan formed for repeating disaccharide units containing galactosamine sulfate and glucuronic acid. However, the glucosamine sulfate and its association with chondroitin sulfate (Glc/CS) and their effects on the aged skin tissue are still unknown. This study was done to observe the profile of the hyaluronic acid in the skin after ovariectomy in rats treated and untreated with Glc or Glc/CS. Wistar rats (n = 50) were divided in two groups: not ovariectomized (control) and ovariectomized (experimental). The animals received by gavage either water (0,25ml) or 0,0214 mg/g of animal weight of Dinaflex® 1,5g (glucosamine sulfate) or Condroflex® 1,5g + 1,2g (glucosamine sulfate + chondroitin sulfate) during 45 and 60 days. Their skins were dissected and analyzed the following parameters: 1) thickness of dermis and epidermis; 2) histochemical localization of the hyaluronic acid; 3) biochemical quantification of the hyaluronic acid. Through this study we conclude that: 1) ovariectomized animals decreased the amount of hyaluronic acid in the skin; 2) ovariectomized animals and treated with water or Glc or Glc/CS for 45 and 60 days to administration they do not present alterations in the acid hyaluronic concentration: 3) the therapeutical administration of these composites must take in consideration the peculiarities of each tissue. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Foram sintetizadas duas novas séries de tensoativos de açúcar derivados da 2-D-glucosamina: os metil 2-acilamido-2-deóxi-6-O-sulfonato-D-glucopiranosídeos de sódio (aniônicos) e os cloretos de metil 2-acilamido-2,6-dideóxi-6-trimetilamônio-D-glucopiranosídeos (catiônicos). Os tensoativos aniônicos foram obtidos pela acilação da 2-D-glucosamina com cloretos de acila (com 8, 12 e 16 carbonos), seguida pela metilação desses derivados com metanol em meio ácido, e posterior sulfatação dos metil glucosídeos com complexo trióxido de enxofre-piridina. Os tensoativos catiônicos foram obtidos pela tosilação dos metil glucosídeos, seguida pela quaternização com trimetilamina e troca do contra-íon tosilato por cloreto com resina de troca-iônica. Esses tensoativos apresentaram c.m.c. similares a de outros tensoativos iônicos de cadeia hidrofóbica de igual comprimento, mas energias livres de transferência do grupo polar para a micela muito mais favoráveis. Esse fato foi atribuído à formação de ligações de hidrogênio entre os grupos polares do tensoativo na micela, e à hidrofobicidade do açúcar. As micelas formadas apresentaram números de agregação maiores que os obtidos para outros tensoativos, provavelmente devido às interações atrativas entre os grupos polares. / Two new sugar-based surfactant series were synthesized from 2-D-glucosamine: sodium methyl 2-acylamido-2-deoxi-6-O-sulfonate-D-glucopyranosides (anionic) and methyl 2-acylamido-2,6-dideoxi-6-trimethylamonium-D-glucopyranoside chlorides (cationic). The anionic surfactants were obtained by the acylation of 2-D-glucosamine with acyl chlorides (with 8, 12 and 16 carbons), followed by the methylation of these derivatives with methanol in acidic media, and the sulfation of the methyl glucosides with sulfur trioxide-pyridine complex. The cationic surfactants were obtained by the tosylation of methyl glucosides followed by the quaternization with trimethylamine and exchange of the tosylate contra-ion with chloride ions on an ion exchange resin. These surfactants showed c.m.c. similar to other ionic surfactants with equal hydrophobic chain lengths, but more favorable free energies of transfer of the polar head to the micelle. This fact is attributed to hydrogen bonding between the head groups of the surfactant in the micelle, and the hydrophobicity of the sugar moiety. The micelles of these surfactants showed aggregation numbers larger than those obtained for other surfactants, problably because of head-group attractive interactions.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2724286 bytes, checksum: dfc4a98088cd85fae126679628671081 (MD5) Previous issue date: 2011-02-28 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The aim of this research was to evaluate the influence of chondroprotective veterinary supplement (nutraceutic) composed of glucosamine and chondroitin sulfate in the repair of osteochondral defects induced in femoral lateral condyle of dogs, by clinical, radiographic, macroscopic, histologic and morfometric analysis. We also aimed to test the safety of the supplement with tests of blood glucose, blood count, liver and kidney function, activated partial tromboplastine and time prothrombin time. Fortyeigth adult dogs with body weight ranging from 10 kg to 25 kg were used. They were divided into four treatments (I, II, III and IV), according to the postoperative period of evaluation (15, 30, 60 and 90 days) and each containing six animals. Within each treatment, six animals (GI) received the supplement daily, while the other six formed the control group (GII). No significant differences were observed between groups for each treatment. Therefore, the conditions in which this study was conducted, the chondroprotective did not cause adverse effects and the treated group did not differ from the control on the repair process of such defects. / O presente trabalho teve como objetivo avaliar a influência de um suplemento condroprotetor (nutracêutico) veterinário comercial, à base de sulfato de condroitina e glucosamina, na reparação de falhas osteocondrais induzidas no côndilo femoral lateral de cães, por meio de análises clínica, radiográfica, macroscópica, histológica e morfométrica. Objetivou-se ainda testar a segurança do produto, por meio dos exames de glicemia, hemograma, funções hepática e renal, tempo de tromboplastina parcial ativada e tempo de protombina. Foram utilizados 48 cães adultos, entre 10 e 25 kg de peso corporal e sem raça definida, distribuídos aleatoriamente entre quatro tratamentos (I, II, III e IV), de acordo com o período de pós-operatório (15, 30, 60 e 90 dias) e contendo cada um deles 12 animais. Dentro de cada tratamento, seis animais (GI) receberam diariamente o condroprotetor, enquanto os outros seis constituíram o grupo controle (GII). Não houve diferença significativa entre os grupos de cada tratamento e, portanto, nas condições em que o presente estudo foi realizado, o condroprotetor não ocasionou efeitos adversos e o grupo tratado não diferiu do controle quanto ao processo de reparação dos defeitos.

La presente investigación tiene como objetivo la obtención de Quitosano aprovechando las escamas en la industria de pescado en el Perú, para obtener un producto con valor agregado y reducir la contaminación ambiental producida por las industrias de pescado. Se efectuó el estudio de mercado en el que se examinó la oferta y demanda del polímero en el mercado internacional, donde por medio de criterios se eligió al país destino, siendo elegido Estados Unidos, por consiguiente, se calculó la demanda insatisfecha de dicho país, que resultó ser 22 551,40 toneladas, de los cuales el proyecto cubrirá el 0,4%. Se realizó el análisis de macro y micro localización en donde se estableció que la planta se ubicaría en la provincia de Ilo. De acuerdo al proceso de producción se establecieron los requerimientos de máquinas, materia prima y mano de obra para una capacidad diseñada de 220 kg/día. Se obtuvo un área total de planta de 641.82 m2 usando el método de Guerchet. Se aplicó el método de Richard Muther para la ubicación de las áreas. Por último, se calculó la rentabilidad económica del proyecto con un TMAR de 32%, y se obtuvo un VAN de S/ 664 064,80 y un TIR de 68,1%.

Made available in DSpace on 2018-06-27T18:56:32Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Maura Zubiaurre dos Santos.pdf: 1338832 bytes, checksum: 234dfe007337129aa96815091aad7c42 (MD5) Maura Zubiaurre dos Santos.pdf.txt: 74878 bytes, checksum: fe3a8ab94635867f402fde8650d28b72 (MD5) Maura Zubiaurre dos Santos.pdf.jpg: 3071 bytes, checksum: 63c016cce951cddaa53f7b933b5a025c (MD5) Previous issue date: 2010-03-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / In the present work, several compounds derived from monosacharide D-Glucosamine were synthetized. These compounds were used successfully against gram-positive and gram-negative microorganisms. In the synthesis of compounds, classical methods in organic chemistry were used.The products were readily prepared from D-Glucosamine in few easy steps. In the first step, we have obtained he imine derivatives 2a or 2b. The resultant imines were protected in the OH groups at C1, C3, C4 and C6 positions with acetyl group. Selective desprotection of C2 aminogroup and coupling with cmnamic acid fford compound 5. All compounds were tested as antimicrobial agents against gram-positive and gram-negative microorganisms. Best results were obtained when compound 2b was used. / No presente trabalho, foram sintetizados vários compostos derivados da D-Glucosamina. Estes compostos foram usados com sucesso contra microorganismos grampositivos e gram-negativos. Na síntese dos compostos, foram utilizados métodos clássicos em química orgânica. Os produtos foram facilmente preparados a partir da D-glucosamina em poucas etapas. Na primeira etapa, foram obtidas as iminas derivadas 2a ou 2b. As iminas resultantes foram protegidas nos grupamentos OH ligados nas posições C1, C3, C4 e C6, por grupos acetila. Desproteção seletiva do grupamento amino ligado na posição C2, e posterior acoplamento com ácido cinâmico, forneceu o composto 5. Todos os compostos foram testados como agentes antimicrobiannos contra microorganismos gram-positivos e gram-negativos. Os melhores resultados foram obtidos quando o composto 2b foi utilizado.

Submitted by MARCIA ROVADOSCHI (marciar@unifra.br) on 2018-08-14T19:20:28Z No. of bitstreams: 2 Dissertacao_MauraZibiaurreDosSantos.pdf: 1335791 bytes, checksum: 7c6832365c99c38917af3d9b5b44e517 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-14T19:20:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao_MauraZibiaurreDosSantos.pdf: 1335791 bytes, checksum: 7c6832365c99c38917af3d9b5b44e517 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2010-03-26 / In the present work, several compounds derived from monosacharide D-Glucosamine were synthetized. These compounds were used successfully against gram-positive and gram-negative microorganisms. In the synthesis of compounds, classical methods in organic chemistry were used. All steps of synthesis are shown in the Scheme below. The products were readily prepared from D-Glucosamine in few easy steps. In the first step, we have obtained he imine derivatives 2a or 2b. The resultant imines were protected in the OH groups at C1, C3, C4 and C6 positions with acetyl group. Selective desprotection of C2 aminogroup and coupling with cmnamic acid fford compound 5. All compounds were tested as antimicrobial agents against gram-positive and gram-negative microorganisms. Best results were obtained when compound 2b was used. / No presente trabalho, foram sintetizados vários compostos derivados da D-Glucosamina. Estes compostos foram usados com sucesso contra microorganismos grampositivos e gram-negativos. Na síntese dos compostos, foram utilizados métodos clássicos em química orgânica. Todas as etapas da síntese estão resumidas no esquema abaixo. Os produtos foram facilmente preparados a partir da D-glucosamina em poucas etapas. Na primeira etapa, foram obtidas as iminas derivadas 2a ou 2b. As iminas resultantes foram protegidas nos grupamentos OH ligados nas posições C1, C3, C4 e C6, por grupos acetila. Desproteção seletiva do grupamento amino ligado na posição C2, e posterior acoplamento com ácido cinâmico, forneceu o composto 5. Todos os compostos foram testados como agentes antimicrobiannos contra microorganismos gram-positivos e gram-negativos. Os melhores resultados foram obtidos quando o composto 2b foi utilizado.

A enzima Glucosamina-6-fosfato desaminase (GlcN6P desaminase) é envolvida na conversão reversível da D-glucosamina-6-fosfato (GlcN6P) em Fru6P e amônia, como parte do caminho metabólico de aminoaçúcares como fonte de energia celular. A enzima hexamérica (peso mol. 178200) exibe uma cooperatividade homotrópica intensa em direção à GlcN6P a qual é modulada alostericamente pelo ativador N-acetil-D-glucosamina 6-fosfato (GlcNAc6P). A GlcN6P desaminase foi cristalizada no grupo espacial R32, com parâmetros de rede a = b = 125.9 &#197 e c = 223.2 &#197 e um conjunto de dados à 2.1 &#197 de resolução foi coletado usando radiação de luz síncrotron (Horjales et ai., 1992). A procura no banco de dados de seqüências OWL não mostrou homologia significante com qualquer outra família de proteína, desta maneira a determinação da estrutura foi feita pela técnica de substituição isomórfica múltipla (MIR) a partir de dois derivados, um composto de platina, o K2PtCl4 e um complexo de mercúrio, o ácido mersálico. O mapa MIR a 3 &#197 de resolução mostrou contornos claros e utilizando técnicas de nivelamento de solvente (solvent flattening) estendeu-se as fases até 2.5 &#197. A enzima cristaliza-se com dois monômeros na unidade assimétrica. A densidade eletrônica final foi interpretada com o auxílio do programa gráfico \'O\', sendo possível determinar sem ambigüidade 230 dos 266 resíduos de cada monômero; a partir daí foram usados subseqüentes mapas de Fourier diferença para a localização de todos os outros resíduos. O refinamento do modelo foi feito utilizando o programa X-PLOR (Brünger, 1993), usando a rotina simulated annealing, obtendo o fator R final de 17.4% com 348 moléculas de água e quatro íons inorgânicos de fosfato. O enovelamento do monômero tem uma estrutura do tipo &#945/&#946 com uma folha-&#946 pregueada paralela central com sete fitas com topologia 4x, 1x, 1x, -3x, -1x, -1x, envolvida por ambos os lados por oito hélices-&#945 e uma hélice 310 com duas voltas. A sexta fita da folha-&#946 central tem um prolongamento no C-terminal que faz parte de uma segunda folha-&#946 antiparalela de três fitas com topologia 2, -1. O hexâmero tem uma simetria local 32, com dois trímeros empacotados frente-a-frente com uma rotação relativa de 15&#176 em tomo do eixo de ordem 3 e ligados por pontes salinas e algumas interações hidrofóbicas em tomo do eixo não cristalográfico de ordem 2. As moléculas de cada trímero formam um contato não usual de três resíduos Cis 219 próximo ao eixo de ordem três. Os complexos com ativador alostérico (GlcNAc6P) e inibidor competitivo (2-desoxi 2-amino glucitol 6-fosfato) foram co-cristalizados isomorficamente com a estrutura nativa. Os mapas Fourier diferença mostram claramente densidades para os ligantes, definindo sem ambigüidade o sítio ativo e alostérico. O refinamento dos complexos produziu a mesma conformação da proteína nativa, na margem de erro experimental. Os sítios alostéricos (seis) estão localizados na interface adjacente dos monômeros de cada trímero e os sítios ativos (ou catalíticos) no lado externo de cada monômero, no C-terminal da folha-&#946 central. O monômero tem uma topologia com enovelamento similar a um domínio de ligação de NAD, excluindo os segmentos de aminoácidos 1-35, 145-188 e 243-266. As estruturas dos complexos e da nativa estão em um estado alostérico R em concordância com o modelo MWC para um sistema do tipo K (Monod et al, 1965). Um mecanismo alostérico similar ao da GlcN6P desaminase é encontrado na enzima fosfofrutoquinase (Evans, 1981). Um mecanismo catalítico é proposto para a reação de isomerisação-desaminação da enzima GlcN6P desaminase a partir do mecanismo geral para aldose-cetona isomerases. / The enzyme Glucosamine-6-phosphate deaminase (GlcN6P deaminase) is involved in the reversible conversion of D-glucosamine-6-phosphate (GlcN6P) into Fru6P and ammonia. The hexameric enzyme (mol.wt.=178200) exhibits an intense homotropic co-operativity towards GlcN6P which is allosterically modulated by the activator N-acetyl-D-glucosamine 6-phosphate (GlcNAc6P). The GlcN6P deaminase was crystallized in space group R32, with cell parameters a=b= 125.9 &#197 and c = 223.2 &#197 and a native dataset was collected to 2.1 &#197 resolution at a synchrotron source (Horjales et al, 1992). A search of the OWL sequences database has shown no significant homology with any other known protein family. Therefore, the structure determination will have to be achieved through the Multiple Isomorphous Replacement technique from two isomorphous derivatives, a platinum compound K2PtCl4 and a mercury complex, mersalyl acid. The MIR map at 3 &#197 resolution showed clear molecular boundaries and solvent flattening techniques (Wang, 1985) were used to extend the phase set to 2.5 &#197. The final electron density map was interpreted with the aid of the graphic program \'O\'. The enzyme crystallizes with a dimmer in the asymmetric unit and 230 out of the total 266 residues of each crystallographically independent monomer could be unambiguously identified in the map. The remaining residues were located after subsequent difference Fourier maps. The refinement was made with program X-PLOR (Brunger, 1993), using the simulated annealing routine, obtained R=17.4 % with 348 water molecules and four inorganic phosphate ions. The monomer fold shows an &#945/&#946 structure with a central 7-stranded &#946-sheet with topology 4x, 1x, 1x, -3x, -1x, -1x, surrounded on both sides by eight &#945-helices and 2-turn 310 -helix. The sixth strand of the central &#946-sheet is common to a second 3-stranded anti-parallel &#946-sheet with topology 2, -1. The hexamer has local 32 symmetry, with two trimmers packed in a face-to-face arrangement with a relative rotation of 15&#176 around the 3-fold axis, and linked together by salt-bridge and some hydrophobic contacts. The molecules of each trimmer have extensive contacts and show an unusual feature of the three Cys219 residues closely clustered around the 3-fold axis. The complexes with allosteric activator (GlcNAc6P) and inhibitor (2-deoxy-2-amino glucitol 6-phosphate) were co-crystallized isomorphously with the native structure. The difference Fourier maps shows clear density for the ligands, unambiguously defining the active and allosteric sites. The complexes refinement produced the same conformation of the native, within experimental error. The allosteric sites are located at the interfaces of adjacent monomers from each trimer and the active sites (or catalytic) lie at the external side of each monomer, at the C-terminal end of the central parallel &#946-sheet. The monomer has a similar folding topology as a typical NAD binding domain, excluding the segments of aminoacids 135, 145-188 and 243-266. The native and complexes structures are at the allosteric state R concerted with MWC model for a K-system (Monod et al, 1965). A similar allosteric mechanism is found in the enzyme phosphofructokinase (Evans, 1981). A catalytic mechanism is proposed for the isomerisation-deamination reaction of the enzyme from general mechanism for aldo-keto isomerases.