Made available in DSpace on 2016-05-19T13:20:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 carla_honse_ipec_dout_2014.pdf: 2842248 bytes, checksum: 39c5ea2462ab403b73d9079b68c7156c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Foram avaliados quarenta e um cães adultos, machos e fêmeas, sem raça definida, provenientes de inquéritos sorológicos para leishmaniose visceral canina realizados pela Secretaria Municipal de Saúde do Rio de Janeiro. O objetivo deste estudo foi descrever as alterações citopatológicas da medula óssea e o perfil hematológico de cães naturalmente infectados por Leishmania (Leishmania) chagasi. A avaliação citológica da medula óssea incluiu a análise qualitativa e quantitativa. O perfil hematológico foi avaliado através de contador automático de células e esfregaços sanguíneos. Adicionalmente, foram realizadas a imunofenotipagem de linfócitos medulares, pesquisa de formas amastigotas na medula óssea e avaliação dos estoques de ferro medular. De acordo com os resultados obtidos, cães naturalmente infectados por L. (L.) chagasi apresentaram hiperplasia das séries mieloide, linfoide e monocítica, onde frequentemente foram observadas formas amastigotas, anemia normocítica normocrômica e aumento dos estoques de ferro medular Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas entre as populações de linfócitos T e linfócitos B medulares. Em conclusão, os cães naturalmente infectados por L. (L.) chagasi apresentaram alterações na medula óssea e no perfil hematológico independentemente da manifestação clínica apresentada pelo animal. Hiperplasia das linhagens hematopoiéticas, anemia, eritrofagocitose e aumento dos estoques de ferro medular possibilitaram uma melhor compreensão dos mecanismos fisiopatológicos envolvidos na doença e a pesquisa de formas amastigotas na medula óssea contribuiu como uma importante ferramenta diagnóstica da leishmaniose visceral canina / Fourty one adult mongrel dogs from the VL serol ogical surveys done by Secretaria Municipal de Saúde of Rio de Janeiro were studied. The purpose of this study was to evaluate the occurrence of cytopathologycal changes of bone marrow and hematological changes in dogs naturally infected by Leishmania (Lei shmania) chagasi . Evaluation of bone marrow included the qualitative and quantitative analysis and c omplete blood count was performed with an automated cell counter and blood smears. Additionally , immunophenotyping of lymphocytes, search of amastigotes an d iron stores of bone marrow were performed . According to the results, dogs naturally infected by L. (L.) chagasi showed hiperplasia of myeloid, lymphoide and monocytic series, that often showed amastigotes form, normocytic normochromic anemia and i ncrease iron stores of bone marrow. No significant difference was observed among the T lymphocytes and B lymphocytes populations of bone marrow. In conclusion, dogs naturally infected by L. (L.) chagasi showed changes in bone marrow and blood profile regardless of the clinical manifestations. Hyperplasia of hematopoietic lineages, anemia, erythrophagocytosis and increase iron stores allowed a better understanding of the physiopathological mechanisms involved in disease and the search of amastigotes in bone marro w contributed as an important diagnostic tool of canine visceral leishmaniasis.

Os objetivos gerais deste estudo foram avaliar o efeito suplementação de zinco (Zn), cobre (Cu) e selênio (Se) orgânicos para vacas leiteiras e os seus efeitos sobre a qualidade do leite, saúde da glândula mamária e consumo de alimentos. Os objetivos específicos foram avaliar: a contagem de células somáticas (CCS), a prevalência de mastite clínica e subclínica,a produção e composição de leite nos 80 primeiros dias de lactação; monitorar a atividade enzimática de superóxido dismutase (CuZnSOD), glutationa peroxidase (GSH-Px) e ceruloplasmina (CP); o consumo de alimentos; a concentração plasmática de Zn, Cu e Se; e as variações de peso e escore dos animais. Dezenove vacas leiteiras, com prenhez confirmada, foram selecionadas por peso, escore de condição corporal (ECC), número de lactações e produção de leite da lactação anterior, e distribuídas ao acaso em dois grupos para receber fontes de Zn, Cu e Se orgânica (n=9) ou inorgânica (n=10). As dietas foram formuladas para suprir os requerimentos nutricionais dos animais dos 60 dias antes da data prevista do parto aos 80 dias de lactação. Amostras dos alimentos fornecidos e das sobras foram coletadas diariamente para posterior análise de composição. O leite foi coletado semanalmente a partir da 3ª semana de lactação para determinação da composição e CCS, e nos dias 1 e 7 de lactação, e quando diagnosticados casos clínicos de mastite, para cultura microbiológica. Amostras de sangue foram coletadas aos -60, -21, 1, 21, 40 e 80 dias do período experimental para análises da concentração de CuZnSOD, GSH-Px e CP. Para determinação das concentrações plasmáticas de Zn, Cu e Se amostras de sangue foram coletas aos 60 dias antes da data prevista de parto, e no 1º, 40º e 80º dias de lactação. Avaliações do escore de condição corporal (ECC) e do peso corporal (PC) foram realizadas no início e final do experimento, no parto, e uma vez por semana durante todo o período experimental. A incidência (novos casos)e o total de casos de mastite subclínica foi menor para o grupo de vacas alimentadas com fontes orgânicas de Zn, Cu e Se em comparação com os animais que receberam fontes inorgânicas. A CCS durante os primeiros 80 dias de lactação foi menor (P = 0,056) para o grupo alimentado com Zn, Cu e Se orgânicos. Não foram observados efeitos de fontes orgânicas de Zn, Cu e Se sobre as concentrações de CuZnSOD , GSH-Px e CP, Zn, Cu e Se plasmáticos, produção e composição de leite, consumo de nutrientes, ECC, mudança de ECC e PC. Foi observado efeito (P=0,024) da fonte sobre a mudança de PC. / The general objectives of this study were to evaluate the effect organic zinc (Zn), copper (Cu) and selenium (Se) supplementationto dairy cows on milk quality, mammary gland health and feed intake. The specific objectives were to evaluate: the somatic cell count (SCC), clinical and subclinical mastitis prevalence, milk production and composition during the first 80 days of lactation; the superoxide dismutase (CuZnSOD), glutathione peroxidase (GSH-Px) and ceruloplasmin (CP) enzyme activity; the nutrients intake; Zn, Cu and Se plasmatic concentrations; changes in weight and body condition score. Nineteen dairy cows, with confirmed pregnancy, were selected by body weight (BW), body condition score (BCS), number of lactation, and milk yield in previous lactation, and randomly distributed among two groups to receive organic (n=9) or inorganic (n=10) sources of Zn, Cu and Se. The diets were formulated to meet the nutritional requirements of animals from 60 days before the expected date of calving up to 80 days of lactation. Every day, food samples and leftovers were collected for composition analysis. Milk samples was collected weekly after 15 days of lactation to determine the composition and CCS, on days 1 and 7 of lactation, and when a mastitis clinical case was diagnosed for microbiological culture. Blood samples were collected on -60, -21, 1, 21, 40 and 80 days of the experimental period for CuZnSOD, GSH-Px, and CP analysis. For plasma concentrations of Zn, Cu and Se blood samples were collected at 60 days before calving, and at 1st, 40th and 80th days of lactation. Assessments of body condition score (BCS) and body weight (BW) were performed at the beginning and at the end of the experiment, the day of calving, and once a week throughout the experimental period. The incidence (new cases) and total number of subclinical mastitis cases was lower for the group of cows fed organic Zn, Cu and Se in comparison with animals that received the inorganic sources. The SCC during the first 80 days of lactation was lower (P = 0,056) for the group fed organic Zn, Cu and Se. There were no effects of Zn, Cu and Se organic supply on concentrations of CuZnSOD, GSH-Px and CP, Zn, Cu and Se plasma, production and composition of milk, consumption of nutrients, BW, BCS and changes on BCS. It was observed effect of source on BW changes (P=0,024).

A lesão central de células gigantes (LCCG) é uma afecção benigna dos maxilares, de comportamento biológico incerto, variando de discreta tumefação assintomática e de crescimento lento à uma forma agressiva, associada a dor, reabsorção radicular e óssea, com destruição cortical. Sua etiologia permanece desconhecida, havendo controvérsias entre processo reacional, neoplásico ou genético. Mutações no gene SH3BP2 foram identificadas em pacientes com querubismo, condição que compartilha várias características clínicas, radiográficas e histopatológicas com a LCCG. Para testar a hipótese de que tais mutações seriam responsáveis por, ou estariam associadas a LCCG e na tentativa de melhor entender a diferenciação microscópica/morfométrica das lesões agressivas e não agressivas, vinte e cinco pacientes portadores de LCCG foram selecionados para o estudo. O DNA foi obtido através do sangue e de espécimes em blocos de parafina, oriundos de biópsias e tratamento cirúrgico. Um estudo microscópico morfométrico foi paralelamente realizado, para avaliar o número de células gigantes e densidade de volume das mesmas nas lesões agressivas e não agressivas. O sequenciamento genético dos treze exons do gene SH3BP2 nos vinte e cinco pacientes estudados evidenciou uma alteração no códon do exon 4 em 10 pacientes. A densidade de volume de células gigantes foi maior nas lesões agressivas quando comparadas às não agressivas (p=0,013). Não houve diferença significante quanto ao número de células gigantes/mm2 em lesões agressivas e não agressivas (p =0,245). / Central giant cell lesion (CGCL) is a benign disease of the jaws, with uncertain behavior, ranging from mild asymptomatic slow-growing swelling to an aggressive form, with pain, radicular and bone resorption and cortical destruction. Its aetiology is still unknown and there is discussion whether it is a reactive, neoplastic or genetic disease. Mutations on gene SH3BP3 were identified in patients with cherubism, which shares several clinical, radiographic and histopathological features with CGCL. In order to test the hypothesis that such mutations would be responsible for or would be related to CGCL and also in order to better understand microscopic morphometric differentiation of the aggressive and non-aggressive lesions, 25 patients with CGCL were selected to this study. DNA was extracted from blood samples and from tissue samples, obtained by biopsy or surgical treatment. Microscopic morphometric assessment was also performed, in order to evaluate the number and the volume density of the giant cells in aggressive and in non-aggressive lesions. Gene sequencing of all 13 exons in gene SH3BP3, performed on each of the 25 patients, showed an alteration in one codon from exon 4, in ten patients. Volume density of giant cells was greater in aggressive lesions than in non-aggressive ones (p=0,013). There was no significant difference on the number of giant cells per mm2 when comparing aggressive and non-aggressive lesions.

A mastite um dos grandes problemas relacionados com criação de ovinos de leite devido às perdas econômicas decorrentes da redução na produção, gastos com medicamento e perdas de animais. A Contagem de Células Somáticas (CCS) e o isolamento bacteriano são ferramentas diagnósticas indicativas da saúde da glândula mamária que pode ser determinada através de método automatizado e por método manual, através de contagem celular em microscópio, sobre o qual existem discussões quanto à coloração adequada ao leite de ovelhas devido a celularidade diferenciada nesta espécie. Esta tese compreende três estudos que visam realizar o diagnóstico de mastite subclínica em ovelhas leiteiras do Estado Rio Grande do Sul – Brasil em um total de 315 amostras de leite oriundos de casos desta enfermidade em ovelhas de leite. [Capítulo 2] Foram utilizadas 116 amostras com o objetivo de identificar e validar uma metodologia de CCS microscópica adequada à espécie ovina. Assim foram confeccionadas lâminas de esfregaços de 10 μL de leite em 1 cm2, onde foram testados os fixadores de xilol e solução de Carnoy e as colorações de May-Grünwald (MG), Broadhurst- Paley (BP), Wrigth (W) e Panótico (P). Elegeu-se a solução de Carnoy, pois esta permitiu uma melhor fixação do filme lácteo às lâminas de microscopia, e o corante BP, pois permitiu uma boa coloração e visualização das células, bem como a diferenciação dos corpúsculos citoplasmáticos. Os valores de CCS variaram de 2,6x104 a 4,4x106 células.mL-1 e de 1,9x104 a 8,1x106 células.mL-1, respectivamente, pelos métodos automático e microscópico. [Capítulo 3] O objetivo do presente capítulo foi determinar a ocorrência de mastite subclínica em rebanho ovino leiteiro, através do isolamento bacteriano e da CCS. Determinou-se, ainda, a composição (gordura, lactose, proteína e sólidos totais) do leite e a relação entre estes parâmetros e a presença de mastite. Para tanto, coletaram-se 315 amostras de leite, individualizadas por teto, das quais 85 (27%) foram identificadas como mastite subclínica, sendo Staphylococcus coagulase negativos o agente prevalente (64,7%), seguido por Staphylococcus coagulase positivas (19,1%). A CCS variou de 2,5x103 a 9,3x106. Verificou-se CCS significativamente maior (p<0,0001) nas amostras com isolamento bacteriano. Entretanto, o mesmo não foi observado entre os parâmetros de composição. Não foi determinada correlação entre os parâmetros de composição e a CCS. [Capítulo 4] Este capítulo teve como objetivos identificar as espécies de SCN em 32 isolados de casos de mastite subclínica em ovinos, através da técnica de PCR-RFLP e sequenciamento do gene gap, e determinar a suscetibilidade dos isolados frente a nove agentes antimicrobianos, pela técnica de disco difusão em ágar. Foram obtidos quatro perfis no sequenciamento, sendo observada a presença de três espécies de SCN: Staphylococcus epidermidis (59,4%), Staphylococcus chromogenes (34,4%) e Staphylococcus devriesei (6,2%), pela primeira vez descrita na região Sul do país em casos de mastite ovina. Todos os isolados foram suscetíveis a cefalotina, ceftiofur e penicilina+novobiocina. Vinte e um isolados (65,6%) apresentaram resistência a pelo menos um agente antimicrobiano e onze isolados (34,4%) mostraram-se suscetíveis a todos os agentes testados. Quatro isolados (12,5%) apresentaram multirresistência e, entre estes, um isolado da espécie S. epidermidis apresentou resistência à oxacilina, confirmada através da amplificação do gene mecA por PCR. Os estudos permitem concluir que os SCN são os agentes etiológicos mais prevalentes relacionados com mastite subclínica em ovelhas leiteiras e sua presença tem correlação com CCS elevada. A determinação da CCS através de método manual demonstra que esta é uma ferramenta aplicável à espécie ovina. Além de se constituir em problema de sanidade animal, a mastite ovina, tem como consequência perdas econômicas ao produtor, SCN possuem potencial zoonótico, destacando a importância destes micro-organismos na saúde pública, tornando primordial a identificação destes agentes, através de ferramentas genotípicas seguras e confiáveis. / The mastitis is one of the major problems related to breeding of milk sheep due to the economic losses arising from the reduction in production, expenditure on medication and loss of animals. The Somatic Cell Count (SCC) and bacterial isolation are diagnostic tools indicative of mammary gland’s health that can be determined by automated method and manual method, through the counting of cell under a microscope, whereupon there are discussions concerning the appropriated staining to the ewe’s milk due to different cellularity in this species. This thesis comprises three studies that aim to make the diagnosis of subclinical mastitis in dairy sheep in Rio Grande do Sul - Brazil in a total of 315 milk samples originated from cases of this disease in dairy sheep. [Chapter 2] It were used 116 samples to identify and validate a method for microscopic SCC suitable for ovine specie. Therefore, were made glass slides for smear of 10 μL of milk in 1 cm2, where were tested xylol fixers and Carnoy solution and May-Grünwald (MG), Broadhurst- Paley (BP), Wright (W) and Panotic (P) dyes. Carnoy solution was elected, because this one allowed a better fixation of the milk film to the microscope slides, and BP staining as it allowed a good staining and visualization of cells and the differentiation of cytoplasmic corpuscles. The SCC values ranged from 2,6x104 to 4,4x106 cells.mL-1 and 1,9x104 to 8,1x106 cells.mL-1, respectively by automatic and microscopic methods. [Chapter 3] The purpose of this chapter was to determine the occurrence of subclinical mastitis in dairy sheep flock, by bacterial isolation and SCC. It was determined also the composition (fat, lactose, protein and total solids) of milk and the relationship between these parameters and the presence of mastitis. In order to do that, were collected 315 milk samples, individualized by teat, of which 85 (27%) were identified as subclinical mastitis and Staphylococcus coagulase negative (SCN) was the prevalent agent (64.7%), followed by Staphylococcus coagulase positive (SCP) (19. 1%). The SCC ranged from 2,5x103 to 9,3x106. There was significant higher SCC (p <0.0001) in samples with bacterial isolation. However, the same was not observed between the composition parameters. There was no correlation between the composition parameters and SCC. [Chapter 4] This chapter aims to identify the species of CNS in 32 isolated from cases of subclinical mastitis in sheep by PCR-RFLP and sequencing of the gap gene and determine the susceptibility of isolates face to nine antimicrobials, by disk agar diffusion technique. Four profiles were obtained in sequencing, revealing the presence of three species of SCN: Staphylococcus epidermidis (59.4%), Staphylococcus chromogenes (34.4%) and Staphylococcus devriesei (6.2%), first described in the south region of the country in cases of sheep mastitis. All isolates were susceptible to cephalothin, ceftiofur and penicillin + novobiocin. Twenty-one isolates (65.6%) showed resistance to at least one antimicrobial agent and eleven isolates (34.4%) were susceptible to all tested agents. Four isolates (12.5%) had multidrug resistance and, among these, an isolated of S. epidermidis was resistant to oxacillin, confirmed by amplifying the mecA gene by PCR. The studies support the conclusion that the SCN are the most prevalent etiologic agents related to subclinical mastitis in dairy sheep and their presence correlates with high SCC. The determination of SCC through manual method demonstrates that this tool is applicable to the ovine species. Besides being an animal health problem, the sheep mastitis results in a economic losses to producers, SCN have zoonotic potential, highlighting the importance of these microorganisms in public health, making it crucial to identify these agents through secure and reliable genotypic tools.

Resumo: Com o objetivo de estabelecer valores de referência para os parâmetros hematotógicos de cutias (Dasyprocta azarae Lichtenstein, 1823), foram realizadas análises de hemograma de 42 exemplares, 29 machos e 13 fêmeas com idades variando entre 1 e 37 meses. Para fins de classificação, os animais foram divididos em duas faixas etárias: jovens quando tinham 8 meses ou menos, e adultos quando tinham mais de oito meses de idade. Para a colheita das amostras os animais foram contidos através de injeção da associação de cloridrato de cetamina, cloridrato de xilazina e de sulfato de atropina. Os resultados foram comparados quanto às variáveis sexo e idade, sendo que diferenças significativas foram observadas somente quanto a idade e não quanto ao sexo dos animais. Os parâmetros número total de eritrócitos, concentração de hemoglobina e concentração de hemoglobina globular média foram mais baixos nos animais jovens, enquanto o número total de leucócitos, número total de linfócitos e número total de monócitos foram mais baixos nos animais adultos. Quanto aos demais parâmetros avaliados, conclui-se que os animais jovens e adultos podem ser agrupados em intervalos de valores (média ± erro padrão) iguais, cujos resultados foram: volume globular: 50,52 ± 0,95 %; volume globular médio: 69,42 ± 1,37 fl; proteínas plasmáticas totais: 6,11 ± 0,11 g/dl; número total de neutrófilos segmentados: 2198,95 ± 244,91 /mm3; número total de neutrófilos bastonetes: 48,05 ± 8,58 /mm3; número total de eosinófilos: 61,28 ± 9,76 /mm3; número total de basófilos: 13,05 ± 2,50 /mm3. Nos parâmetros, onde a diferença estatística quanto a idade foi observada estabeleceu-se um intervalo de valor (média ± erro padrão) para cada faixa etária correspondente, com os seguintes resultados: número total de eritrócitos: 7,23 ± 0,18 x106 /mm3 para animais jovens e 7,91 ± 0,26 x106 /mm3 para animais adultos; concentração de hemoglobina: 14,22 ± 0,46 g/dl para animais jovens e 16,44 ± 0,28 g/dl para animais adultos; concentração de hemoglobina globular média: 28,55 ± 0,55 % para animais jovens e 31,16 ± 0,48 % para animais adultos; número total de leucócitos: 4,97 ± 0,32 x103 /mm3 para animais jovens e 3,14 ± 0,145 x103 /mm3 para animais adultos; número total de linfócitos: 2424,56 ± 130,00 /mm3 para animais jovens e 1238,76 ± 159,33 /mm3 para animais adultos; número total de monócitos: 81,09 ± 9,54 /mm3 para animais jovens e 43,59 ± 10,45 /mm3 para animais adultos. Palavras-chave: Dasyprocta azarae, hemograma; roedores.

Submitted by GUSTAV GUIMARÃES (DINTER) null (gustav@saolucas.edu.br) on 2016-11-25T15:10:43Z No. of bitstreams: 1 TESE GUSTAV Final.pdf: 701691 bytes, checksum: 5a36e117e77c5b5164011367f92fe48f (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-11-30T10:55:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 guimaraes_g_dr_araca.pdf: 701691 bytes, checksum: 5a36e117e77c5b5164011367f92fe48f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-30T10:55:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 guimaraes_g_dr_araca.pdf: 701691 bytes, checksum: 5a36e117e77c5b5164011367f92fe48f (MD5) Previous issue date: 2016-11-22 / O objetivo deste trabalho foi investigar a influência da extensão da doença periodontal no perfil sanguíneo de ratos Wistar. Foram utilizados 30 ratos divididos em 3 grupos de 10 animais: C- ratos controle; DP1- ratos com doença periodontal em 3 molares superiores; DP2 – ratos com doença periodontal em 3 molares superiores e 3 inferiores. A doença periodontal foi induzida por meio da confecção de ligadura em torno do colo dentário dos molares selecionados de acordo com cada grupo. Após 30 dias, os animais foram anestesiados e, por meio de uma punção cardíaca, foi coletado 5ml de sangue para as análises dos parâmetros do hemograma, creatinina, triglicérides e colesterol. Em seguida, os animais foram sacrificados e as maxilas removidas e processadas para análise histopatológica em coloração de H.E. para caracterizar o perfil da doença periodontal em cada animal. Os resultados obtidos a partir do tecido hematológico foram analisados estaticamente por meio dos testes de ANOVA e Tukey, com nível de significância de 5%. Pode-se observar nos grupos DP1 e DP2 presença de infiltrado inflamatório crônico, perda de inserção conjuntiva, perda de estrutura óssea cortical e alveolar, presença de reabsorções dentárias, presença de biofilme e sequestro ósseo. Quanto ao perfil sanguíneo, pode-se observar diferença estatisticamente significante entre o grupo controle e os grupos DP1 e DP2 em relação à quantidade de leucócitos e linfócitos (p<0,05). Ainda, o grupo DP2 apresentou maior quantidade de leucócitos e neutrófilos em relação ao grupo DP1 e controle (p<0,05). Pode-se concluir que a presença da doença periodontal eleva a quantidade de leucócitos, neutrófilo e linfócitos no sangue de ratos Wistar, e que, a extensão da doença periodontal influencia na quantidade de leucócitos e neutrófilos. / The aim of this study was to evaluate the influence of the periodontal disease extension on the blood profile of Wistar rats. Thirty rats were divided into 3 groups of 10 animals each: C control rats; DP1- rats with periodontal disease in 3 upper molars; DP2 - rats with periodontal disease in 3 upper and 3 lower molars. Periodontal disease was induced by ligature around the tooth according to each group. After 30 days, the animals were killed and 5ml of blood was collected for analyzes of blood count parameters, creatinine, triglycerides and cholesterol. Then the animals were sacrificed and the jaws removed and processed for histopathological analysis to characterize, in H.E. staining, the profile of periodontal disease in each animal. The results from the hematologic tissue were analyzed statistically by ANOVA and Tukey test, with 5% significance level. It can be observed in groups DP1 and DP2 presence of chronic inflammatory infiltrates, connective tissue attachment loss and alveolar bone cortical structure loss, presence of resorptions, presence of biofilm and bone sequestration. As for the blood profile, it is can observe a statistically significant difference between the control group and the groups DP1 and DP2 to the amount of leukocytes and lymphocytes (p <0.05). Further, DP2 group had a higher amount of leukocytes and neutrophils compared to DP1 and control group (p <0.05). It can be concluded that the presence of periodontal disease increases the amount of leukocytes, neutrophils, and lymphocytes in the blood of Wistar rats, and the extent of periodontal disease affects the quantification of leukocytes and neutrophils.

A mastite um dos grandes problemas relacionados com criação de ovinos de leite devido às perdas econômicas decorrentes da redução na produção, gastos com medicamento e perdas de animais. A Contagem de Células Somáticas (CCS) e o isolamento bacteriano são ferramentas diagnósticas indicativas da saúde da glândula mamária que pode ser determinada através de método automatizado e por método manual, através de contagem celular em microscópio, sobre o qual existem discussões quanto à coloração adequada ao leite de ovelhas devido a celularidade diferenciada nesta espécie. Esta tese compreende três estudos que visam realizar o diagnóstico de mastite subclínica em ovelhas leiteiras do Estado Rio Grande do Sul – Brasil em um total de 315 amostras de leite oriundos de casos desta enfermidade em ovelhas de leite. [Capítulo 2] Foram utilizadas 116 amostras com o objetivo de identificar e validar uma metodologia de CCS microscópica adequada à espécie ovina. Assim foram confeccionadas lâminas de esfregaços de 10 μL de leite em 1 cm2, onde foram testados os fixadores de xilol e solução de Carnoy e as colorações de May-Grünwald (MG), Broadhurst- Paley (BP), Wrigth (W) e Panótico (P). Elegeu-se a solução de Carnoy, pois esta permitiu uma melhor fixação do filme lácteo às lâminas de microscopia, e o corante BP, pois permitiu uma boa coloração e visualização das células, bem como a diferenciação dos corpúsculos citoplasmáticos. Os valores de CCS variaram de 2,6x104 a 4,4x106 células.mL-1 e de 1,9x104 a 8,1x106 células.mL-1, respectivamente, pelos métodos automático e microscópico. [Capítulo 3] O objetivo do presente capítulo foi determinar a ocorrência de mastite subclínica em rebanho ovino leiteiro, através do isolamento bacteriano e da CCS. Determinou-se, ainda, a composição (gordura, lactose, proteína e sólidos totais) do leite e a relação entre estes parâmetros e a presença de mastite. Para tanto, coletaram-se 315 amostras de leite, individualizadas por teto, das quais 85 (27%) foram identificadas como mastite subclínica, sendo Staphylococcus coagulase negativos o agente prevalente (64,7%), seguido por Staphylococcus coagulase positivas (19,1%). A CCS variou de 2,5x103 a 9,3x106. Verificou-se CCS significativamente maior (p<0,0001) nas amostras com isolamento bacteriano. Entretanto, o mesmo não foi observado entre os parâmetros de composição. Não foi determinada correlação entre os parâmetros de composição e a CCS. [Capítulo 4] Este capítulo teve como objetivos identificar as espécies de SCN em 32 isolados de casos de mastite subclínica em ovinos, através da técnica de PCR-RFLP e sequenciamento do gene gap, e determinar a suscetibilidade dos isolados frente a nove agentes antimicrobianos, pela técnica de disco difusão em ágar. Foram obtidos quatro perfis no sequenciamento, sendo observada a presença de três espécies de SCN: Staphylococcus epidermidis (59,4%), Staphylococcus chromogenes (34,4%) e Staphylococcus devriesei (6,2%), pela primeira vez descrita na região Sul do país em casos de mastite ovina. Todos os isolados foram suscetíveis a cefalotina, ceftiofur e penicilina+novobiocina. Vinte e um isolados (65,6%) apresentaram resistência a pelo menos um agente antimicrobiano e onze isolados (34,4%) mostraram-se suscetíveis a todos os agentes testados. Quatro isolados (12,5%) apresentaram multirresistência e, entre estes, um isolado da espécie S. epidermidis apresentou resistência à oxacilina, confirmada através da amplificação do gene mecA por PCR. Os estudos permitem concluir que os SCN são os agentes etiológicos mais prevalentes relacionados com mastite subclínica em ovelhas leiteiras e sua presença tem correlação com CCS elevada. A determinação da CCS através de método manual demonstra que esta é uma ferramenta aplicável à espécie ovina. Além de se constituir em problema de sanidade animal, a mastite ovina, tem como consequência perdas econômicas ao produtor, SCN possuem potencial zoonótico, destacando a importância destes micro-organismos na saúde pública, tornando primordial a identificação destes agentes, através de ferramentas genotípicas seguras e confiáveis. / The mastitis is one of the major problems related to breeding of milk sheep due to the economic losses arising from the reduction in production, expenditure on medication and loss of animals. The Somatic Cell Count (SCC) and bacterial isolation are diagnostic tools indicative of mammary gland’s health that can be determined by automated method and manual method, through the counting of cell under a microscope, whereupon there are discussions concerning the appropriated staining to the ewe’s milk due to different cellularity in this species. This thesis comprises three studies that aim to make the diagnosis of subclinical mastitis in dairy sheep in Rio Grande do Sul - Brazil in a total of 315 milk samples originated from cases of this disease in dairy sheep. [Chapter 2] It were used 116 samples to identify and validate a method for microscopic SCC suitable for ovine specie. Therefore, were made glass slides for smear of 10 μL of milk in 1 cm2, where were tested xylol fixers and Carnoy solution and May-Grünwald (MG), Broadhurst- Paley (BP), Wright (W) and Panotic (P) dyes. Carnoy solution was elected, because this one allowed a better fixation of the milk film to the microscope slides, and BP staining as it allowed a good staining and visualization of cells and the differentiation of cytoplasmic corpuscles. The SCC values ranged from 2,6x104 to 4,4x106 cells.mL-1 and 1,9x104 to 8,1x106 cells.mL-1, respectively by automatic and microscopic methods. [Chapter 3] The purpose of this chapter was to determine the occurrence of subclinical mastitis in dairy sheep flock, by bacterial isolation and SCC. It was determined also the composition (fat, lactose, protein and total solids) of milk and the relationship between these parameters and the presence of mastitis. In order to do that, were collected 315 milk samples, individualized by teat, of which 85 (27%) were identified as subclinical mastitis and Staphylococcus coagulase negative (SCN) was the prevalent agent (64.7%), followed by Staphylococcus coagulase positive (SCP) (19. 1%). The SCC ranged from 2,5x103 to 9,3x106. There was significant higher SCC (p <0.0001) in samples with bacterial isolation. However, the same was not observed between the composition parameters. There was no correlation between the composition parameters and SCC. [Chapter 4] This chapter aims to identify the species of CNS in 32 isolated from cases of subclinical mastitis in sheep by PCR-RFLP and sequencing of the gap gene and determine the susceptibility of isolates face to nine antimicrobials, by disk agar diffusion technique. Four profiles were obtained in sequencing, revealing the presence of three species of SCN: Staphylococcus epidermidis (59.4%), Staphylococcus chromogenes (34.4%) and Staphylococcus devriesei (6.2%), first described in the south region of the country in cases of sheep mastitis. All isolates were susceptible to cephalothin, ceftiofur and penicillin + novobiocin. Twenty-one isolates (65.6%) showed resistance to at least one antimicrobial agent and eleven isolates (34.4%) were susceptible to all tested agents. Four isolates (12.5%) had multidrug resistance and, among these, an isolated of S. epidermidis was resistant to oxacillin, confirmed by amplifying the mecA gene by PCR. The studies support the conclusion that the SCN are the most prevalent etiologic agents related to subclinical mastitis in dairy sheep and their presence correlates with high SCC. The determination of SCC through manual method demonstrates that this tool is applicable to the ovine species. Besides being an animal health problem, the sheep mastitis results in a economic losses to producers, SCN have zoonotic potential, highlighting the importance of these microorganisms in public health, making it crucial to identify these agents through secure and reliable genotypic tools.

A lesão central de células gigantes (LCCG) é uma afecção benigna dos maxilares, de comportamento biológico incerto, variando de discreta tumefação assintomática e de crescimento lento à uma forma agressiva, associada a dor, reabsorção radicular e óssea, com destruição cortical. Sua etiologia permanece desconhecida, havendo controvérsias entre processo reacional, neoplásico ou genético. Mutações no gene SH3BP2 foram identificadas em pacientes com querubismo, condição que compartilha várias características clínicas, radiográficas e histopatológicas com a LCCG. Para testar a hipótese de que tais mutações seriam responsáveis por, ou estariam associadas a LCCG e na tentativa de melhor entender a diferenciação microscópica/morfométrica das lesões agressivas e não agressivas, vinte e cinco pacientes portadores de LCCG foram selecionados para o estudo. O DNA foi obtido através do sangue e de espécimes em blocos de parafina, oriundos de biópsias e tratamento cirúrgico. Um estudo microscópico morfométrico foi paralelamente realizado, para avaliar o número de células gigantes e densidade de volume das mesmas nas lesões agressivas e não agressivas. O sequenciamento genético dos treze exons do gene SH3BP2 nos vinte e cinco pacientes estudados evidenciou uma alteração no códon do exon 4 em 10 pacientes. A densidade de volume de células gigantes foi maior nas lesões agressivas quando comparadas às não agressivas (p=0,013). Não houve diferença significante quanto ao número de células gigantes/mm2 em lesões agressivas e não agressivas (p =0,245). / Central giant cell lesion (CGCL) is a benign disease of the jaws, with uncertain behavior, ranging from mild asymptomatic slow-growing swelling to an aggressive form, with pain, radicular and bone resorption and cortical destruction. Its aetiology is still unknown and there is discussion whether it is a reactive, neoplastic or genetic disease. Mutations on gene SH3BP3 were identified in patients with cherubism, which shares several clinical, radiographic and histopathological features with CGCL. In order to test the hypothesis that such mutations would be responsible for or would be related to CGCL and also in order to better understand microscopic morphometric differentiation of the aggressive and non-aggressive lesions, 25 patients with CGCL were selected to this study. DNA was extracted from blood samples and from tissue samples, obtained by biopsy or surgical treatment. Microscopic morphometric assessment was also performed, in order to evaluate the number and the volume density of the giant cells in aggressive and in non-aggressive lesions. Gene sequencing of all 13 exons in gene SH3BP3, performed on each of the 25 patients, showed an alteration in one codon from exon 4, in ten patients. Volume density of giant cells was greater in aggressive lesions than in non-aggressive ones (p=0,013). There was no significant difference on the number of giant cells per mm2 when comparing aggressive and non-aggressive lesions.

A mastite um dos grandes problemas relacionados com criação de ovinos de leite devido às perdas econômicas decorrentes da redução na produção, gastos com medicamento e perdas de animais. A Contagem de Células Somáticas (CCS) e o isolamento bacteriano são ferramentas diagnósticas indicativas da saúde da glândula mamária que pode ser determinada através de método automatizado e por método manual, através de contagem celular em microscópio, sobre o qual existem discussões quanto à coloração adequada ao leite de ovelhas devido a celularidade diferenciada nesta espécie. Esta tese compreende três estudos que visam realizar o diagnóstico de mastite subclínica em ovelhas leiteiras do Estado Rio Grande do Sul – Brasil em um total de 315 amostras de leite oriundos de casos desta enfermidade em ovelhas de leite. [Capítulo 2] Foram utilizadas 116 amostras com o objetivo de identificar e validar uma metodologia de CCS microscópica adequada à espécie ovina. Assim foram confeccionadas lâminas de esfregaços de 10 μL de leite em 1 cm2, onde foram testados os fixadores de xilol e solução de Carnoy e as colorações de May-Grünwald (MG), Broadhurst- Paley (BP), Wrigth (W) e Panótico (P). Elegeu-se a solução de Carnoy, pois esta permitiu uma melhor fixação do filme lácteo às lâminas de microscopia, e o corante BP, pois permitiu uma boa coloração e visualização das células, bem como a diferenciação dos corpúsculos citoplasmáticos. Os valores de CCS variaram de 2,6x104 a 4,4x106 células.mL-1 e de 1,9x104 a 8,1x106 células.mL-1, respectivamente, pelos métodos automático e microscópico. [Capítulo 3] O objetivo do presente capítulo foi determinar a ocorrência de mastite subclínica em rebanho ovino leiteiro, através do isolamento bacteriano e da CCS. Determinou-se, ainda, a composição (gordura, lactose, proteína e sólidos totais) do leite e a relação entre estes parâmetros e a presença de mastite. Para tanto, coletaram-se 315 amostras de leite, individualizadas por teto, das quais 85 (27%) foram identificadas como mastite subclínica, sendo Staphylococcus coagulase negativos o agente prevalente (64,7%), seguido por Staphylococcus coagulase positivas (19,1%). A CCS variou de 2,5x103 a 9,3x106. Verificou-se CCS significativamente maior (p<0,0001) nas amostras com isolamento bacteriano. Entretanto, o mesmo não foi observado entre os parâmetros de composição. Não foi determinada correlação entre os parâmetros de composição e a CCS. [Capítulo 4] Este capítulo teve como objetivos identificar as espécies de SCN em 32 isolados de casos de mastite subclínica em ovinos, através da técnica de PCR-RFLP e sequenciamento do gene gap, e determinar a suscetibilidade dos isolados frente a nove agentes antimicrobianos, pela técnica de disco difusão em ágar. Foram obtidos quatro perfis no sequenciamento, sendo observada a presença de três espécies de SCN: Staphylococcus epidermidis (59,4%), Staphylococcus chromogenes (34,4%) e Staphylococcus devriesei (6,2%), pela primeira vez descrita na região Sul do país em casos de mastite ovina. Todos os isolados foram suscetíveis a cefalotina, ceftiofur e penicilina+novobiocina. Vinte e um isolados (65,6%) apresentaram resistência a pelo menos um agente antimicrobiano e onze isolados (34,4%) mostraram-se suscetíveis a todos os agentes testados. Quatro isolados (12,5%) apresentaram multirresistência e, entre estes, um isolado da espécie S. epidermidis apresentou resistência à oxacilina, confirmada através da amplificação do gene mecA por PCR. Os estudos permitem concluir que os SCN são os agentes etiológicos mais prevalentes relacionados com mastite subclínica em ovelhas leiteiras e sua presença tem correlação com CCS elevada. A determinação da CCS através de método manual demonstra que esta é uma ferramenta aplicável à espécie ovina. Além de se constituir em problema de sanidade animal, a mastite ovina, tem como consequência perdas econômicas ao produtor, SCN possuem potencial zoonótico, destacando a importância destes micro-organismos na saúde pública, tornando primordial a identificação destes agentes, através de ferramentas genotípicas seguras e confiáveis. / The mastitis is one of the major problems related to breeding of milk sheep due to the economic losses arising from the reduction in production, expenditure on medication and loss of animals. The Somatic Cell Count (SCC) and bacterial isolation are diagnostic tools indicative of mammary gland’s health that can be determined by automated method and manual method, through the counting of cell under a microscope, whereupon there are discussions concerning the appropriated staining to the ewe’s milk due to different cellularity in this species. This thesis comprises three studies that aim to make the diagnosis of subclinical mastitis in dairy sheep in Rio Grande do Sul - Brazil in a total of 315 milk samples originated from cases of this disease in dairy sheep. [Chapter 2] It were used 116 samples to identify and validate a method for microscopic SCC suitable for ovine specie. Therefore, were made glass slides for smear of 10 μL of milk in 1 cm2, where were tested xylol fixers and Carnoy solution and May-Grünwald (MG), Broadhurst- Paley (BP), Wright (W) and Panotic (P) dyes. Carnoy solution was elected, because this one allowed a better fixation of the milk film to the microscope slides, and BP staining as it allowed a good staining and visualization of cells and the differentiation of cytoplasmic corpuscles. The SCC values ranged from 2,6x104 to 4,4x106 cells.mL-1 and 1,9x104 to 8,1x106 cells.mL-1, respectively by automatic and microscopic methods. [Chapter 3] The purpose of this chapter was to determine the occurrence of subclinical mastitis in dairy sheep flock, by bacterial isolation and SCC. It was determined also the composition (fat, lactose, protein and total solids) of milk and the relationship between these parameters and the presence of mastitis. In order to do that, were collected 315 milk samples, individualized by teat, of which 85 (27%) were identified as subclinical mastitis and Staphylococcus coagulase negative (SCN) was the prevalent agent (64.7%), followed by Staphylococcus coagulase positive (SCP) (19. 1%). The SCC ranged from 2,5x103 to 9,3x106. There was significant higher SCC (p <0.0001) in samples with bacterial isolation. However, the same was not observed between the composition parameters. There was no correlation between the composition parameters and SCC. [Chapter 4] This chapter aims to identify the species of CNS in 32 isolated from cases of subclinical mastitis in sheep by PCR-RFLP and sequencing of the gap gene and determine the susceptibility of isolates face to nine antimicrobials, by disk agar diffusion technique. Four profiles were obtained in sequencing, revealing the presence of three species of SCN: Staphylococcus epidermidis (59.4%), Staphylococcus chromogenes (34.4%) and Staphylococcus devriesei (6.2%), first described in the south region of the country in cases of sheep mastitis. All isolates were susceptible to cephalothin, ceftiofur and penicillin + novobiocin. Twenty-one isolates (65.6%) showed resistance to at least one antimicrobial agent and eleven isolates (34.4%) were susceptible to all tested agents. Four isolates (12.5%) had multidrug resistance and, among these, an isolated of S. epidermidis was resistant to oxacillin, confirmed by amplifying the mecA gene by PCR. The studies support the conclusion that the SCN are the most prevalent etiologic agents related to subclinical mastitis in dairy sheep and their presence correlates with high SCC. The determination of SCC through manual method demonstrates that this tool is applicable to the ovine species. Besides being an animal health problem, the sheep mastitis results in a economic losses to producers, SCN have zoonotic potential, highlighting the importance of these microorganisms in public health, making it crucial to identify these agents through secure and reliable genotypic tools.

Os objetivos gerais deste estudo foram avaliar o efeito suplementação de zinco (Zn), cobre (Cu) e selênio (Se) orgânicos para vacas leiteiras e os seus efeitos sobre a qualidade do leite, saúde da glândula mamária e consumo de alimentos. Os objetivos específicos foram avaliar: a contagem de células somáticas (CCS), a prevalência de mastite clínica e subclínica,a produção e composição de leite nos 80 primeiros dias de lactação; monitorar a atividade enzimática de superóxido dismutase (CuZnSOD), glutationa peroxidase (GSH-Px) e ceruloplasmina (CP); o consumo de alimentos; a concentração plasmática de Zn, Cu e Se; e as variações de peso e escore dos animais. Dezenove vacas leiteiras, com prenhez confirmada, foram selecionadas por peso, escore de condição corporal (ECC), número de lactações e produção de leite da lactação anterior, e distribuídas ao acaso em dois grupos para receber fontes de Zn, Cu e Se orgânica (n=9) ou inorgânica (n=10). As dietas foram formuladas para suprir os requerimentos nutricionais dos animais dos 60 dias antes da data prevista do parto aos 80 dias de lactação. Amostras dos alimentos fornecidos e das sobras foram coletadas diariamente para posterior análise de composição. O leite foi coletado semanalmente a partir da 3ª semana de lactação para determinação da composição e CCS, e nos dias 1 e 7 de lactação, e quando diagnosticados casos clínicos de mastite, para cultura microbiológica. Amostras de sangue foram coletadas aos -60, -21, 1, 21, 40 e 80 dias do período experimental para análises da concentração de CuZnSOD, GSH-Px e CP. Para determinação das concentrações plasmáticas de Zn, Cu e Se amostras de sangue foram coletas aos 60 dias antes da data prevista de parto, e no 1º, 40º e 80º dias de lactação. Avaliações do escore de condição corporal (ECC) e do peso corporal (PC) foram realizadas no início e final do experimento, no parto, e uma vez por semana durante todo o período experimental. A incidência (novos casos)e o total de casos de mastite subclínica foi menor para o grupo de vacas alimentadas com fontes orgânicas de Zn, Cu e Se em comparação com os animais que receberam fontes inorgânicas. A CCS durante os primeiros 80 dias de lactação foi menor (P = 0,056) para o grupo alimentado com Zn, Cu e Se orgânicos. Não foram observados efeitos de fontes orgânicas de Zn, Cu e Se sobre as concentrações de CuZnSOD , GSH-Px e CP, Zn, Cu e Se plasmáticos, produção e composição de leite, consumo de nutrientes, ECC, mudança de ECC e PC. Foi observado efeito (P=0,024) da fonte sobre a mudança de PC. / The general objectives of this study were to evaluate the effect organic zinc (Zn), copper (Cu) and selenium (Se) supplementationto dairy cows on milk quality, mammary gland health and feed intake. The specific objectives were to evaluate: the somatic cell count (SCC), clinical and subclinical mastitis prevalence, milk production and composition during the first 80 days of lactation; the superoxide dismutase (CuZnSOD), glutathione peroxidase (GSH-Px) and ceruloplasmin (CP) enzyme activity; the nutrients intake; Zn, Cu and Se plasmatic concentrations; changes in weight and body condition score. Nineteen dairy cows, with confirmed pregnancy, were selected by body weight (BW), body condition score (BCS), number of lactation, and milk yield in previous lactation, and randomly distributed among two groups to receive organic (n=9) or inorganic (n=10) sources of Zn, Cu and Se. The diets were formulated to meet the nutritional requirements of animals from 60 days before the expected date of calving up to 80 days of lactation. Every day, food samples and leftovers were collected for composition analysis. Milk samples was collected weekly after 15 days of lactation to determine the composition and CCS, on days 1 and 7 of lactation, and when a mastitis clinical case was diagnosed for microbiological culture. Blood samples were collected on -60, -21, 1, 21, 40 and 80 days of the experimental period for CuZnSOD, GSH-Px, and CP analysis. For plasma concentrations of Zn, Cu and Se blood samples were collected at 60 days before calving, and at 1st, 40th and 80th days of lactation. Assessments of body condition score (BCS) and body weight (BW) were performed at the beginning and at the end of the experiment, the day of calving, and once a week throughout the experimental period. The incidence (new cases) and total number of subclinical mastitis cases was lower for the group of cows fed organic Zn, Cu and Se in comparison with animals that received the inorganic sources. The SCC during the first 80 days of lactation was lower (P = 0,056) for the group fed organic Zn, Cu and Se. There were no effects of Zn, Cu and Se organic supply on concentrations of CuZnSOD, GSH-Px and CP, Zn, Cu and Se plasma, production and composition of milk, consumption of nutrients, BW, BCS and changes on BCS. It was observed effect of source on BW changes (P=0,024).