INTRODUÇÃO: O endotélio corneal exerce papel primordial para a fisiologia da córnea. Seus dados morfológicos gerados pelo microscópio especular (MEC) como densidade endotelial (DE), área celular média (ACM), coeficiente de variação (CV) e porcentagem de células hexagonais (HEX) são importantes para avaliar sua vitalidade. Para interpretar estes dados de forma padronizada e reprodutível, foi utilizado um programa estatístico de análise amostral, Cells Analyzer PAT. REQ.(CA). OBJETIVO: Demonstrar valores de referência para DE, ACM, CV e HEX. Demonstrar o percentual de células endoteliais marcadas e desconsideradas no exame ao marcar-se 40, 100 e 150 células em uma única imagem do mosaico endotelial e o perfil do intervalo de confiança (IC) das variáveis estudadas ao se considerar 40, 100, 150 e tantas células quantas indicadas pelo CA. Demonstrar o erro amostral de cada grupo estudado. MÉTODOS: Estudo transversal. Os exames de MEC foram realizados com o aparelho Konan NONCON ROBO® SP-8000, nos 122 olhos de 61 portadores de catarata (63,97 ± 8,15 anos de idade). As imagens endoteliais caracterizaram se pelo número de células marcadas e consideradas para cálculo dos seguintes dados: DE, ACM, CV e HEX. Os grupos foram formados de 40, 100, 150 células marcadas numa única imagem endotelial e Grupo CA em que foram marcadas tantas células quanto necessárias em diferentes imagens, para obter o erro relativo calculado inferior ao planejado (0,05), conforme orientação do programa CA. Estudou-se o efeito do número de células sobre IC para as variáveis endoteliais utilizadas. RESULTADOS: A média dos valores de referência encontrados para DE foi 2395,37 ± 294,34 cel/mm2; ACM 423,64 ± 51,09 m2; CV 0,40 ± 0,04 e HEX 54,77 ± 4,19%. O percentual de células endoteliais desconsideradas no Grupo 40 foi 51,20%; no Grupo 100, 35,07% e no Grupo 150, 29,83%. O número médio de células calculado inicialmente pelo CA foi 247,48 ± 51,61 e o número médio de células efetivamente incluídas no final do processo amostral foi 425,25 ± 102,24. O erro amostral dos exames no Grupo 40 foi 0,157 ± 0,031; Grupo 100, 0,093 ± 0,024; Grupo 150, 0,075 ± 0,010 e Grupo CA, 0,037 ± 0,005. O aumento do número de células diminuiu a amplitude do IC nos olhos direito e esquerdo para a DE em 75,79% e 77,39%; ACM em 75,95% e 77,37%; CV em 72,72% e 76,92%; HEX em 75,93% e 76,71%. CONCLUSÃO: Os valores de referência da DE foi 2395,37 ± 294,34 cel/mm2; ACM foi 423,64 ± 51,09 m2; CV foi 0,40 ± 0,04 e HEX foi 54,77 ± 4,19%. O percentual de células endoteliais desconsideradas no Grupo 40 foi 51,20%; no Grupo 100 foi 35,07% e no Grupo 150 foi 29,83%. O programa CA considerou correto os exames nos quais 425,25 ± 102,24 células foram marcadas entre duas e cinco imagens (erro relativo calculado de 0,037 ± 0,005). O aumento do número de células diminuiu a amplitude do IC para todas as variáveis endoteliais avaliadas pela MEC / INTRODUCTION: Corneal endothelium plays an important role in physiology of the cornea. Morphological data generated from specular microscope such as endothelial cell density (CD), average cell area (ACA), coefficient of variance (CV) and percentage of hexagonal cells (HEX) are important to analyze corneal status. For a standard and reproducible analysis of the morphological data, a sampling statistical software called Cells Analyzer PAT. REC (CA) was used. PURPOSE: To determine normal reference values of CD, ACA, CV and HEX. To analyze the percentage of marked and excluded cells when the examiner counted 40, 100, 150 cells in one endothelial image. To analyze the percentage of marked and excluded cells according to the statistical software. To determine the confidence interval of these morphological data. METHODS: Transversal study of 122 endothelial specular microscope image (Konan, non-contact NONCON ROBO® SP- 8000 Specular Microscope) of 61 human individuals with cataract (63.97 ± 8.15 years old) was analyzed statistically using CA. Each image was submitted to standard cell counting. 40 cells were counted in study Group 40; 100 cells were counted in study Group 100; and 150 cells were counted in study Group 150. In study group CA, the number of counted cells was determined by the statistical analysis software in order to achieve the most reliable clinical information (relative error < 0,05). Relative error of the morphological data generated by the specular microscope were then analyzed by statistical analysis using CA software. For Group CA, relative planned error was set as 0.05. RESULTS: The average normal reference value of CD was 2395.37 ± 294.34 cells/mm2, ACA was 423.64 ± 51.09 m2, CV was 0.40 ± 0.04 and HEX was 54.77 ± 4.19%. The percentage of cells excluded for analysis was 51.20% in Group 40; 35.07% in Group 100; and 29.83% in Group 150. The average number of cells calculated initially by the statistical software was 247.48 ± 51.61 cells and the average number of cells included in the final sampling process was 425.25 ± 102.24 cells. The average relative error was 0.157 ± 0.031 for Group 40; 0.093 ± 0.024 for Group 100; 0.075 ± 0.010 for Group 150 and 0.037 ± 0.005 for Group CA. The increase of the marked cells decreases the amplitude of confidence interval (right and left eyes respectively) in 75.79% and 77.39% for CD; 75.95% and 77.37% for ACA; 72.72% and 76.92% for CV; 75.93% and 76.71% for HEX. CONCLUSION: The average normal reference value of CD was 2395.37 ± 294.34 cells/mm2, ACA was 423.64 ± 51.09 m2, CV was 0.40 ± 0.04 and HEX was 54.77 ± 4.19%. The percentage of excluded cells for analysis was 51.20% in Group 40; 35.07% in Group 100 and 29.83% in Group 150. CA software has considered reliable data when 425.25 ± 102.24 cells were marked by the examiner in two to five specular images (calculated relative error of 0.037 ± 0.005). The increase of the marked cells decreases the amplitude of confidence interval for all morphological data generated by the specular microscope

Submitted by Rosivalda Pereira (mrs.pereira@ufma.br) on 2017-05-15T17:37:00Z No. of bitstreams: 1 GieseleSilva.pdf: 1262459 bytes, checksum: 4110f17f9c7f709f8e6e08765eeae663 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-15T17:37:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 GieseleSilva.pdf: 1262459 bytes, checksum: 4110f17f9c7f709f8e6e08765eeae663 (MD5) Previous issue date: 2017-02-01 / Fundação de Amparo à Pesquisa e ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico do Maranhão (FAPEMA) / Objective: Early Childhood Caries (ECC) has been associated with systemic conditions such as obesity and other nutritional deficiencies. These associations have not been adequately studied yet. The present study aimed at evaluating systemic conditions that may be underlying the severity of caries in early childhood. The aim of this study was to evaluate the serum levels of interleukin- 1β (IL-1β), interleukin (IL-6), tumor necrosis factor-α (TNF-α) and lipocalin associated with human neutrophil gelatinase (NGAL) associated with higher caries severity in early childhood (number of cavities), in a theoretical model adjusted for social variables, BMI Z score and consumption of beverages with added sugar; and Chapter II aimed at comparing the mean hemoglobin, neutrophils and eosinophils in children with Severe Early Childhood Cavities (S-ECC) and carie-free children and also to analyze the association between these components of the hemogram with the presence of S-ECC, in models adjusted for socioeconomic variables and for the consumption of sugar rich beverages. Methods: A case-control study was carried out in São Luis, Maranhão, Brazil, from June 2015 to September 2016. The sample was obtained from the randomization of the original sample from a historical cohort; with 152 children aged between 4 and 5 years old, 72 cases (children with ECC) and 80 controls (caries free). The data were obtained through a structured and validated questionnaire containing socioeconomic, demographic and maternal schooling questions applied to mothers or caregivers; a Food Frequency Questionnaire (FFQ) and anthropometric examination, to evaluate the nutritional status; oral clinical examination of children for assessment of decayed teeth (ceo-d index); blood tests and reading of serum inflammatory markers and blood count. For Article 1, a Poisson regression model was suggested to evaluate the association between social factors, the BMI Z score (Body Mass Index), sugar consumption and severity of ECC; and for the analysis of the association between serum levels of IL-1β, IL-6, TNF-α and NGAL and severity of ECC with adjusted model for social variables, BMI Z score and consumption of added sugar beverages. The average ratio (AR) and the respective confidence intervals (95% CI) were estimated at a significance level of 5%. For Article 2, a comparison test of the hemogram (hemoglobin, neutrophils and eosinophils) of children with and without S-ECC was performed, and Logistic Regression models were applied to test the association between Levels of hemoglobin, neutrophils, and eosinophils and presence of S-ECC and adjusted for family income, mother's schooling, sex and consumption of sugar-rich beverages, with estimated coefficients in OR, 95% confidence intervals, Significance level of 5%. Results: In chapter 1, the highest tertiles of the serum levels of IL-6 (2nd tercil- AR = 1,55, CI = 1,14-2,10, p = 0.005, 3rd tercil- AR = 1,54, CI = 13-2.09, p = 0.006), TNF-α (3rd tercil- RM = 1.33, CI = 1.00-1.78, p = 0.040) and NGAL (2nd tercil- AR = 1.79, CI = 1.10-2.90, p ≤ 0.001, 3rd tercil- AR = 2.04, CI = 1.26- 3.30, p = 0.003) were associated with the highest severity of caries in early infancy, even after adjusting for BMI, however after adjusting the model for the consumption of beverages with added sugar, the associations were maintained for IL-6 the strength of association of NGAL was reduced, and for TNF-α there was no association. In Chapter 2, lower mean hemoglobin levels (p = 0.036), higher mean neutrophils (p = 0.040) and eosinophils (p = 0.034) were found in children with S-ECC compared to caries-free ; in the regression models adjusted for economic and socioeconomic variables, higher levels of hemoglobin were protective for SECC (OR 0.64; IC=0,41-0,97; p=0,040) while higher levels of neutrophils were indicators of risk of S-ECC (OR 1.03; IC=1,02-1,06; p=0,040), and after adjustment for frequency of consumption of sugar-rich beverages, the strength of association of these components with the S-ECC was reduced, suggesting that the higher frequency of consumption of these sugars are a common factor that bind blood-to-blood changes to S-ECC. Conclusion: Higher serum levels of IL-6, TNF-α and NGAL are associated with higher caries severity in children, suggesting the presence of underlying systemic inflammation and excessive consumption of added sugars seem to be implicated in the relationship between higher serum levels of TNF-α and NGAL with Severity of caries in children. Higher levels of neutrophils and eosinophils and lower levels of hemoglobin have been shown in children with S-ECC suggesting that systemic alterations such as iron deficiency and inflammation should be investigated in the presence of S-ECC by multidisciplinary health teams. / Objetivo: A Cárie na Primeira Infância (CPI) tem sido associada a condições sistêmicas como a obesidade e outras carências nutricionais; no entanto, as evidências ainda são frágeis. O presente estudo propôs-se a avaliar condições sistêmicas que possam estar subjacentes à gravidade de cárie na primeira infância. Assim sendo, esta tese foi dividida em dois capítulos: O capítulo I teve como objetivo avaliar os níveis séricos de interleucina- 1β (IL-1β), interleucina (IL- 6), fator de necrose tumoral- α (TNF-α) e lipocalina associada à gelatinase dos neutrófilos humanos (NGAL) associados a maior gravidade da cárie na primeira infância (número de cavidades), em modelo teórico ajustado para as variáveis socioeconômicas e demográficas, escore Z do IMC e consumo de bebidas com açúcar de adição; e o capítulo II teve como objetivo comparar as médias de hemoglobina, neutrófilos e eosinófilos em crianças com Cárie Grave na Primeira Infância (CPI-G) e livres de cárie e analisar a associação entre esses componentes do hemograma com a presença da CPI-G, em modelos ajustados para variáveis socioeconômicas e demográficas e para o consumo de bebidas ricas em açúcar. Métodos: Estudo caso-controle foi realizado em São Luis, Maranhão, Brasil, no período de junho de 2015 à setembro de 2016. A amostra foi obtida a partir da aleatorização da amostra original de uma coorte histórica; sendo selecionadas 152 crianças, entre 4 e 5 anos de idade, 72 casos (crianças com CPI) e 80 controles (crianças livres de cárie). Os dados foram obtidos por meio de um questionário estruturado e validado contendo questões socioeconômicas, demográfica aplicado às mães ou responsáveis; de um Questionário de Frequência Alimentar (QFA) e de exame antropométrico, para avaliação do estado nutricional; exame clínico bucal das crianças para aferição de dentes cariados (índice ceo-d); exames de sangue e leitura de marcadores inflamatórios séricos e do hemograma. Para o Artigo 1, foi sugerido modelo de regressão de Poisson para avaliar: a associação entre os fatores sociais, o escore Z do IMC (Índice de Massa Corpórea), consumo de açúcar e gravidade de CPI; e para análise da associação entre os níveis séricos de IL-1β, IL-6, TNF-α e NGAL e gravidade de CPI com modelo ajustado para variáveis socioeconômicas e demográfica, escore Z do IMC e consumo de bebidas com açúcar de adição. Estimou-se a razão das médias (RM) e os respectivos intervalos de confiança (IC 95%), a um nível de significância de 5%. Para o Artigo 2 foi feito um teste de comparação de médias (Teste T não pareado) das variáveis do hemograma (hemoglobina, neutrófilos e eosinófilos) em crianças com CPI-G e livres de cárie, e aplicados modelos de Regressão Logística para testar a associação entre os níveis de hemoglobina, de neutrófilos, e eosinófilos e presença de CPI-G e ajustados para renda familiar, escolaridade da mãe, sexo e consumo de bebidas ricas em açúcar, com os coeficientes estimados em OR, intervalos de confiança de 95%, a um nível de significância de 5%. Resultados: No capítulo 1, maiores tercis dos níveis séricos de IL-6 (2º tercil- RM= 1,55, IC= 1,14-2,10, p = 0,005; 3º tercil- RM=1,54, IC=1,13-2,09, p = 0,006), de TNF-α (3º tercil- RM=1,33, IC=1,00-1,78, p=0,040) e de NGAL (2º tercil- RM=1,79, IC= 1,10-2,90, p ≤ 0,001; 3º tercil- RM=2,04, IC=1,26-3,30, p = 0,003) se associaram com a maior gravidade da cárie na primeira infância, e se mantiveram associados mesmo após ajuste para IMC, entretanto após ajuste do modelo para o consumo de bebidas com açúcar de adição, as associações foram mantidas para IL-6, a força de associação do NGAL foi reduzida, e para TNF-α não houve associação. No capítulo 2, menores médias de hemoglobina (p=0,036), maiores médias de neutrófilos (p=0,040) e de eosinófilos (p=0,034) foram encontradas em crianças com CPI-G comparadas às livres de cárie; nos modelos de regressão ajustados para variáveis socioeconômicas, maiores níveis de hemoglobina foram protetores à CPI-G (OR 0,64; IC=0,41-0,97; p=0,040) enquanto maiores níveis de neutrófilos foram indicadores de risco da CPI-G (OR 1,03; IC=1,02-1,06; p=0,040), e após ajuste para a frequência de consumo de bebidas ricas em açúcares, a força de associação desses componentes do hemograma com a CPI-G foi reduzida, sugerindo que a maior frequência de consumo desses açúcares seja fator comum às alterações do hemograma em relação à CPI-G. Conclusão: maiores níveis séricos de IL-6, TNF-α e NGAL estão associados à maior gravidade de cárie em crianças, sugerindo presença de inflamação sistêmica subjacente e o excessivo consumo de açúcares de adição parece estar implicado na relação entre maiores níveis séricos TNF-α e NGAL com gravidade da cárie em crianças. Maiores níveis de neutrófilos e de eosinófilos e menores de hemoglobina foram mostrados em crianças com a CPI-G sugerindo que alterações sistêmicas como deficiência de ferro e inflamação devam ser pesquisadas na presença de CPI-G por equipes multidisciplinares de saúde.

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Os objetivos deste trabalho foram determinar a sensibilidade e especificidade do limiar de contagem de células somáticas (CCS) de vacas Gir para o diagnóstico de mastite subclínica causada por patógenos primários e secundários e avaliar os efeitos de rebanho, vaca, mês de coleta, quarto mamário, presença de infecção intramamária, tipo de microrganismo e suas interações sobre o logCCS e composição do leite. Avaliou-se a hipótese que o limiar da CCS para detecção de mastite subclínica é igual entre vacas Gir e Holandesas. Foram utilizadas 221 vacas Gir em lactação, provenientes de três fazendas comerciais. Foram coletadas amostras de leite individuais por quarto mamário e compostas uma vez por mês, durante um ano. Foram realizadas análises de CCS, composição do leite e cultura microbiológica. O quarto mamário e a vaca foram considerados unidades experimentais. Para determinar a sensibilidade, especificidade e odds ratio (OR) dos limiares da CCS para identificação de quartos infectados, foram utilizados quatro valores de CCS: 100, 200, 300 e 400 (x 103 células/mL), assim como a correlação entre a CCS e composição do leite. Não houve efeito do rebanho sobre o logCCS para amostras individuais de quartos mamários e compostas, mas vaca dentro de rebanho foi o principal fator responsável pela variação do logCCS. Houve efeito do rebanho sobre a composição do leite, assim como o mês de coleta apresentou efeito tanto sobre o logCCS quanto para a composição do leite, considerando as duas unidades experimentais. A presença de infecção intramamária afetou negativamente a composição do leite, exceto sobre o teor de gordura; sendo que os maiores teores de lactose, proteína e ESD foram encontrados em amostras sem isolamento bacteriano. Os maiores logCCS foram obtidos em amostras infectadas. O limiar da CCS de 100 x 103 células/mL apresentou, em ambas as unidades experimentais, maiores valores de sensibilidade e valor preditivo negativo. O limiar de 200 x 103 células/mL apresentou maior chance da ocorrência de mastite do que o limiar de 100 x 103 células/mL. Foi observada correlação negativa entre CCS com lactose e extrato seco desengordurado (ESD), mas a correlação foi positiva entre CCS com gordura e proteína, tanto em nível de quarto mamário quanto de vaca. Portanto, a composição do leite foi influenciada pela CCS, os teores de lactose e ESD diminuíram em altas CCS, enquanto que as concentrações de gordura e proteína aumentaram. / The aim of this study was to determine the sensibility and specificity of somatic cell count (SCC) threshold in Gyr cows to diagnosis the subclinical mastitis caused by primary and secondary pathogens, and to evaluate the effect of herd, cows, month, mammary quarter, intramammary infection, type of microorganism and their interactions on logSCC and milk composition. The hypothesis to be tested was that the SCC threshold to detection of subclinical mastitis is the same for Holstein and Gir cows. A total of 221 lactation Gir cows from three commercial dairy farms was selected. Composed and quarter individual milk samples were collected once a month, during one year for SCC, milk composition and bacteriological analysis. The mammary quarter and the cow were considered experimental units. To determine the sensibility, specificity and odds ratio (OR) from SCC threshold to identify the infected quarters four values of SCC: 100, 200, 300 and 400 (x 103 cells/mL) were used. It was also evaluated the correlation between SCC and milk composition. There was no effect of herd on logSCC in individuals and composed samples, but cow nested within herd was major factor responsible for the logSCC variation. The month of sampling presented significant effect on logSCC and milk composition in both experimental units. The intramammary infection presence affected negatively the milk composition, except of fat concentration. Higher lactose, protein and non-fat solids (NFS) percentages were found in negative samples and higher logSCC were observed in infected samples. The SCC threshold of 100 x 103 cells/mL presented the major sensibility and negative predictive value for subclinical mastitis detection. The threshold of 200 x 103 cells/mL had higher chance to have mastitis than the threshold of 100 x 103 cells/mL. It was observed a negative correlation between SCC with lactose and NFS; but the correlation was positive between SCC with fat and protein in mammary quarters and cow level. Milk composition was influenced by SCC, once the lactose and NFS percentages decreased in samples with high SCC and the protein and fat concentration increased.

Objetivou-se utilizar o controle estatístico de processo (CEP) como ferramenta de melhoria da qualidade do leite. O objetivo do primeiro estudo foi avaliar o CEP como ferramenta de identificação de variações não naturais, na qualidade do leite, passíveis de serem manipuladas. Para este estudo, foram utilizados dados de produção de leite, de contagem de células somáticas (CSS) e de contagem bacteriana total (CBT) de 384 fazendas, obtidos do banco de dados da Clínica do Leite - ESALQ/ USP no ano de 2009. Avaliou-se os efeitos naturais (época do ano e produção de leite) sobre a variação de CCS e CBT, e adicionalmente, foram gerados gráficos de controle para escore de células somáticas (ECS) e contagem bacteriana total transformada (tCBT), com a finalidade de identificar fontes de variação não naturais em um grupo de quatro fazendas. A variabilidade das informações foi avaliada pelo estimador do desvio padrão (sigma), calculado com base na amplitude móvel. Verificou-se que a época do ano influenciou significativamente o ECS e a tCBT. Os gráficos de controle, dentro de cada época, indicaram a presença de variações não naturais no ECS e na tCBT no grupo de fazendas avaliadas. Além disso, os gráficos de controle também caracterizaram fazendas em controle estatístico de processos. No segundo estudo objetivou-se utilizar o CEP como ferramenta de identificação e classificação de fazendas com maiores probabilidades de violarem os padrões de qualidade utilizados pela indústria. Foram utilizados dados de CCS e CBT de 452 fazendas, no período de janeiro de 2009 a março de 2010. Calcularam-se as proporções de violação nos padrões de qualidade, considerando os limites de CCS = 400.000 céls./ mL e CBT = 100.000 UFC/ mL. Foram calculados os índices de capacidade (Cpk) e classificaram-se as fazendas segundo quatro categorias de médias e de índices Cpk. As fazendas que apresentaram maiores médias e desvios obtiveram maiores frequências de violação. As fazendas com médias inferiores aos limites propostos para CCS e CBT representaram, respectivamente, 25,05 % e 97,78 % das fazendas. Entretanto, a proporção de fazendas que forneceram leite consistentemente dentro dos padrões de qualidade avaliados (Cpk 1) representou 4,65 % e 35,17 % das propriedades para CCS e CBT respectivamente. Portanto, a aplicação do CEP dentro das fazendas é uma ferramenta adicional para monitorar a qualidade do leite produzido, o índice Cpk pode ser utilizado em conjunto com os atuais modelos de caracterização da qualidade do leite de fazendas pelas indústrias, uma vez que identifica rebanhos mais consistentes em produzir leite dentro de um padrão de qualidade. / This study aimed to employ statistical process control (SPC) as a tool to improve milk quality. The first objective of the study was to evaluate SPC as tool to identify non-natural variation of milk quality that are possible to be manipulated. In this study, data on milk production, somatic cell count (SCC), and total bacterial count (TBC) of 384 farms were used, provided by database of Clínica do Leite ESALQ/ USP in 2009. Natural effects (time of year and milk production) trough SCC and TBC variation were evaluated, and additionally, control charts for score cell somatic (SCS) and total bacterial count transformed (TBCt) were built aiming to identify sources of non-natural variations in a group of four farms. The variability of information was evaluated trough standard deviation estimator (sigma), calculated with basis of moving range. It was observed that time of year influenced significantly SCS and TBCt. The control charts, in each period, indicated signs of non-natural variation in SCS and TBCt in the group of herds evaluated. Furthermore, the control charts characterized the farms in statistical process control. The second study aimed to use SPC as a tool for identification and rating farms with larger probabilities of infraction on quality standard used by industry. Data of SCC and TBC from 452 farms, from January 2009 to March 2010, were used. The proportion of violation in quality standard, regarding the limits of SCC = 4000,000 cells/ mL and TBC = 100,000 CFU/ mL was calculated. Capability indices (Cpk) were calculated and farms were categorized into four classes of Cpk means and indices. Farms that presented larger means and deviation shoed superior frequencies of violation. Herds with means below the proposed limits of SCC and TBC represented, respectively, 25.05 % and 97.78 % of farms. However, proportion of farms that delivered milk consistently within the standards of quality evaluated (Cpk 1) represented 4.65 % and 35.17 % of farms for SCC and TBC, respectively. Therefore, application of SPC on farms is an additional tool for monitoring milk quality produced, the index Cpk can be used, by industries, associated with the current models to characterize milk quality from farms, since it identifies herds more consistent in producing quality-standard milk.

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Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-10-25T10:01:48Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 271416 bytes, checksum: 9eef4e18d4f3b9c8bf531f243c48c65e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-25T10:01:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 271416 bytes, checksum: 9eef4e18d4f3b9c8bf531f243c48c65e (MD5) Previous issue date: 2002-07-12 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A partir da abertura comercial brasileira nos anos 90, com a inserção da economia do País no mercado mundial devido à globalização, o leite e os demais produtos lácteos produzidos no Brasil sofreram a concorrência de produtos de melhor qualidade vindos de outros países. Neste cenário, para que os produtos brasileiros possam ser competitivos em nível mundial, é necessário que haja uma melhoria do processo produtivo do leite nas fazendas, já que o setor primário desta cadeia constitui-se num dos elos mais fracos com relação à qualidade. Este trabalho analisa a relação entre fatores de risco de mastite, um dos principais problemas na produção leiteira. Essa doença causa o aumento da contagem de células somáticas (CCS), que é um indicador da saúde da glândula mamária e, conseqüentemente, da qualidade do leite. O estudo fundamentou-se na teoria da Gestão da Qualidade, sendo selecionados por meio da Análise de Perigos e Pontos Críticos de Controle (APPCC) os principais fatores que influenciam a CCS. Esses fatores de produção são os seguintes: idade das vacas em lactação (primeira cria, segunda cria, terceira cria e mais de três crias), sistema de produção (a pasto, semi-estabulado e free-stall), local de ordenha (curral e sala de ordenha), tipo de ordenha (manual e mecânica) e práticas de manejo que são utilizadas ou não pelas propriedades da amostra, que incluem o tratamento da água utilizada na ordenha, linha de ordenha, exame dos primeiros jatos, lavagem e secagem das tetas, desinfecção das tetas antes e após a ordenha, desinfecção do conjunto de teteiras, posição das vacas após ordenha (deitadas ou em pé), tratamento das vacas com antibiótico à secagem, manutenção da ordenhadeira, higiene dos ordenhadores e ambiente antes da ordenha. Foram analisados resultados em tabelas que relacionam a CCS média com os fatores críticos no controle da mastite. Também se verificou a relação desses fatores com a percentagem de propriedades com níveis de CCS que fornecem uma estimativa do problema de mastite, não havendo nenhum fator significativo estatisticamente. Concluiu-se que os fatores não influenciam isoladamente a mastite, sendo sua ocorrência devida a um conjunto de fatores. Isso corrobora a importância de cada etapa do processo de obtenção de leite na etapa seguinte, que é o princípio básico da Gestão da Qualidade. / Since brazilian mercantile opening in the 90`s, with economic insert of the country in world market due to globalization, milk and the other dairy products made in brazil had to compete with high-quality products from other countries. At these conditions, it is necessary to make an improvement in the milk productive process of the farms, so that brazilian products may be competitive in all over the world, since primary sector of this chain is one of the weakest link in relation to quality. This study analyzes the relationship between mastits risk factors, which are one of the most important problems in milk production. This disease makes somatic cells count (SCC) increase, which is a good indicator for mammary gland health condition and, consequently, for milk quality. The study has been based on Quality Management theory, and the main factors which influence SCC, were selected through Hazard Analysis and Critical Control Point (HACCP). These production factors are the following: age of lactating cows (first lactation, second lactation, third lactation and more than three lactations), production system (animals keep on pasture, mixed-system and free-stall), milking place (corral and milking installations), systems of milking (hand milking and machine milking) and management measures which are used or not by the sampled farms, what includes the treatment of the water used in milking, milking order, forestrip, teats wash and drying, pré-dipping and pós-dipping, cluster disinfection, cows position after milking (lying or standing), cows treatment with antibiotic at drying, milk machine maintenance, hygiene of milkers and environment before milking. The results were analyzed in tables which relates the SCC average with the critical control points in mastits control. It has been either verified the relationship of these factors with the percentage of real states whose SCC levels provide an estimate for mastitis problem, and no statistical significant factor has been found. It has been concluded that the factors do not influence mastits separately, considering that its occurrence is due to a whole of factors. It corroborates the importance of each stage of milk obtaining process in the following stage, which is the basic principle of Quality Management. / Dissertação importada do Alexandria

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INTRODUÇÃO: O endotélio corneal exerce papel primordial para a fisiologia da córnea. Seus dados morfológicos gerados pelo microscópio especular (MEC) como densidade endotelial (DE), área celular média (ACM), coeficiente de variação (CV) e porcentagem de células hexagonais (HEX) são importantes para avaliar sua vitalidade. Para interpretar estes dados de forma padronizada e reprodutível, foi utilizado um programa estatístico de análise amostral, Cells Analyzer PAT. REQ.(CA). OBJETIVO: Demonstrar valores de referência para DE, ACM, CV e HEX. Demonstrar o percentual de células endoteliais marcadas e desconsideradas no exame ao marcar-se 40, 100 e 150 células em uma única imagem do mosaico endotelial e o perfil do intervalo de confiança (IC) das variáveis estudadas ao se considerar 40, 100, 150 e tantas células quantas indicadas pelo CA. Demonstrar o erro amostral de cada grupo estudado. MÉTODOS: Estudo transversal. Os exames de MEC foram realizados com o aparelho Konan NONCON ROBO® SP-8000, nos 122 olhos de 61 portadores de catarata (63,97 ± 8,15 anos de idade). As imagens endoteliais caracterizaram se pelo número de células marcadas e consideradas para cálculo dos seguintes dados: DE, ACM, CV e HEX. Os grupos foram formados de 40, 100, 150 células marcadas numa única imagem endotelial e Grupo CA em que foram marcadas tantas células quanto necessárias em diferentes imagens, para obter o erro relativo calculado inferior ao planejado (0,05), conforme orientação do programa CA. Estudou-se o efeito do número de células sobre IC para as variáveis endoteliais utilizadas. RESULTADOS: A média dos valores de referência encontrados para DE foi 2395,37 ± 294,34 cel/mm2; ACM 423,64 ± 51,09 m2; CV 0,40 ± 0,04 e HEX 54,77 ± 4,19%. O percentual de células endoteliais desconsideradas no Grupo 40 foi 51,20%; no Grupo 100, 35,07% e no Grupo 150, 29,83%. O número médio de células calculado inicialmente pelo CA foi 247,48 ± 51,61 e o número médio de células efetivamente incluídas no final do processo amostral foi 425,25 ± 102,24. O erro amostral dos exames no Grupo 40 foi 0,157 ± 0,031; Grupo 100, 0,093 ± 0,024; Grupo 150, 0,075 ± 0,010 e Grupo CA, 0,037 ± 0,005. O aumento do número de células diminuiu a amplitude do IC nos olhos direito e esquerdo para a DE em 75,79% e 77,39%; ACM em 75,95% e 77,37%; CV em 72,72% e 76,92%; HEX em 75,93% e 76,71%. CONCLUSÃO: Os valores de referência da DE foi 2395,37 ± 294,34 cel/mm2; ACM foi 423,64 ± 51,09 m2; CV foi 0,40 ± 0,04 e HEX foi 54,77 ± 4,19%. O percentual de células endoteliais desconsideradas no Grupo 40 foi 51,20%; no Grupo 100 foi 35,07% e no Grupo 150 foi 29,83%. O programa CA considerou correto os exames nos quais 425,25 ± 102,24 células foram marcadas entre duas e cinco imagens (erro relativo calculado de 0,037 ± 0,005). O aumento do número de células diminuiu a amplitude do IC para todas as variáveis endoteliais avaliadas pela MEC / INTRODUCTION: Corneal endothelium plays an important role in physiology of the cornea. Morphological data generated from specular microscope such as endothelial cell density (CD), average cell area (ACA), coefficient of variance (CV) and percentage of hexagonal cells (HEX) are important to analyze corneal status. For a standard and reproducible analysis of the morphological data, a sampling statistical software called Cells Analyzer PAT. REC (CA) was used. PURPOSE: To determine normal reference values of CD, ACA, CV and HEX. To analyze the percentage of marked and excluded cells when the examiner counted 40, 100, 150 cells in one endothelial image. To analyze the percentage of marked and excluded cells according to the statistical software. To determine the confidence interval of these morphological data. METHODS: Transversal study of 122 endothelial specular microscope image (Konan, non-contact NONCON ROBO® SP- 8000 Specular Microscope) of 61 human individuals with cataract (63.97 ± 8.15 years old) was analyzed statistically using CA. Each image was submitted to standard cell counting. 40 cells were counted in study Group 40; 100 cells were counted in study Group 100; and 150 cells were counted in study Group 150. In study group CA, the number of counted cells was determined by the statistical analysis software in order to achieve the most reliable clinical information (relative error < 0,05). Relative error of the morphological data generated by the specular microscope were then analyzed by statistical analysis using CA software. For Group CA, relative planned error was set as 0.05. RESULTS: The average normal reference value of CD was 2395.37 ± 294.34 cells/mm2, ACA was 423.64 ± 51.09 m2, CV was 0.40 ± 0.04 and HEX was 54.77 ± 4.19%. The percentage of cells excluded for analysis was 51.20% in Group 40; 35.07% in Group 100; and 29.83% in Group 150. The average number of cells calculated initially by the statistical software was 247.48 ± 51.61 cells and the average number of cells included in the final sampling process was 425.25 ± 102.24 cells. The average relative error was 0.157 ± 0.031 for Group 40; 0.093 ± 0.024 for Group 100; 0.075 ± 0.010 for Group 150 and 0.037 ± 0.005 for Group CA. The increase of the marked cells decreases the amplitude of confidence interval (right and left eyes respectively) in 75.79% and 77.39% for CD; 75.95% and 77.37% for ACA; 72.72% and 76.92% for CV; 75.93% and 76.71% for HEX. CONCLUSION: The average normal reference value of CD was 2395.37 ± 294.34 cells/mm2, ACA was 423.64 ± 51.09 m2, CV was 0.40 ± 0.04 and HEX was 54.77 ± 4.19%. The percentage of excluded cells for analysis was 51.20% in Group 40; 35.07% in Group 100 and 29.83% in Group 150. CA software has considered reliable data when 425.25 ± 102.24 cells were marked by the examiner in two to five specular images (calculated relative error of 0.037 ± 0.005). The increase of the marked cells decreases the amplitude of confidence interval for all morphological data generated by the specular microscope

A mastite subclínica em caprinos é causada principalmente pelo Staphylococcus spp., sendo os estafilococos coagulase negativa (SCN) os patógenos de maior ocorrência e o S. aureus, a espécie de estafilococos mais pesquisada. Dessa forma, pouco se conhece sobre a patogenicidade de SCN e outros estafilococos coagulase positiva (SCP), além do S. aureus. Também há poucos estudos sobre a variação da viabilidade celular na mastite subclínica de cabras. Assim, o objetivo do presente estudo foi determinar os fatores de virulência de adesão e produção de biofilme de estirpes de Staphylococcus spp. isoladas de amostras de leite de cabras, verificando possíveis associações com a viabilidade celular. Para realizar a colheita das amostras, primeiramente, foi efetuada um exame físico da glândula mamária, com posterior realização dos testes da caneca de fundo preto e California mastitis test (CMT). A colheita do leite foi efetuada em três alíquotas: análises microbiológicas, contagem de células somáticas (CCS) e viabilidade celular. Realizou-se a identificação, teste de antibiograma e PCR (Reação em cadeia polimerase) dos Staphylococcus spp. isolados nas amostras de leite. Os genes de virulência pesquisados no PCR foram: cna, eno, ebpS, fnbA, fnbB, fib e bap. Avaliou-se a quantidade de CCS, em equipamento de citometria de fluxo, e a viabilidade celular, após centrifugações das amostras de leite e visualização das células em microscópio, utilizando o corante azul de Trypan. Os resultados foram: 122 amostras com crescimento bacteriano e dessas, 110 (90,2%) foram identificadas como Staphylococcus spp., sendo 90 (73,8%) de SCN e 12 (16,4%) de SCP. As espécies mais isoladas de estafilococos foram: S. epidermidis (24,55%), S. lugdunensis (15,40%) e S. intermedius (13,64%). As amostras apresentaram maior resistência aos antimicrobianos: penicilina (81,8%), oxacilina (60,0%) e ampicilina (55,5%). Observou-se maior sensibilidade para: enrofloxacina (99,1%), eritromicina (98,2%), gentamicina (98,2%) e vancomicina (98,2%). Com relação aos fatores de virulência pesquisados, foram encontradas amostras positivas para todos os genes, com exceção do gene fnbB: eno (53,6%), bap (43,7%), ebpS (19,1%), fnbA (18,2%) e fib (16,4%). Mais de um gene foi detectado em algumas estirpes, sendo que as associações de maior ocorrência foram: bap/eno em SCN e ebpS/eno/fib/fnbA em SCP. Os valores da CCS das amostras de leite com isolamento de Staphylococcus spp., SCN e SCP foram maiores do que nas amostras sem isolamento bacteriano e as estirpes com presença da associação de genes ebpS/eno/fib/fnbA apresentaram maior CCS do que bap/eno. Com relação à viabilidade celular, as amostras com isolamento de Staphylococcus spp. apresentaram maior viabilidade celular do que as amostras sem isolamento bacteriano e não houve associação dos genes identificados nas estirpes com a viabilidade celular. Concluiu-se que os genes eno e bap apresentaram maior ocorrência nas estirpes de Staphylococcus spp., sendo os mais encontrados nos isolados de SCN e os genes ebpS, fib e fnbA foram os mais detectados nos SCP. A viabilidade celular foi maior nas amostras com isolamento de Staphylococcus spp. em relação as sem isolamento bacteriano e não houve associação entre os fatores de virulência das estirpes de Staphylococcus spp. e a viabilidade celular. / Subclinical mastitis in goats is mainly caused by Staphylococcus spp., coagulase-negative staphylococci (CNS) is the most frequent pathogens and S. aureus, the most researched specie of staphylococci. Thus, little is known about the pathogenicity of SCN and other coagulase-positive staphylococci (CPS), beyond the S. aureus. There are few studies on the variation of cell viability in subclinical mastitis of goats. The aim of the present study was to determine the virulence factors of adhesion and biofilm production of Staphylococcus spp. strains isolated from milk samples of goats, verifying for possible associations with cell viability. To collect samples, firstly, was performed a physical examination of the mammary gland, with subsequent tests for mug of black background and California mastitis test (CMT). Three aliquots of milk were collected: microbiological analysis, somatic cell count (SCC) and cell viability. Identification, antibiotic susceptibility testing and PCR (polymerase chain reaction) were performed of Staphylococcus spp. isolated from milk samples. Virulence genes researched in PCR were: cna, eno, ebpS, fnbA, fnbB, fib and bap. Evaluation of CCS, using flow cytometry equipment, and cell viability, after centrifugation of milk samples and visualization the cells in the microscope using Trypan blue dye, were performed. The results were: from 122 samples with bacterial growth, 110 (90.2%) were identified as Staphylococcus spp., 90 (73.8%) of CNP and 12 (16.4%) of the CNP. The most isolated staphylococci species were: S. epidermidis (24.55%), S. lugdunensis (15.40%) and S. intermedius (13.64%). Samples showed higher resistance to antimicrobials: penicillin (81.8%), oxacillin (60.0%) and ampicillin (55.5%). We observed higher sensitivity to: enrofloxacin (99.1%), erythromycin (98.2%), gentamicin (98.2%) and vancomycin (98.2%). Regarding virulence factors researched, positive samples were found for all genes, except fnbB gene: eno (53.6%), bap (43.7%), ebpS (19.1%), fnbA (18.2%) and fib (16.4%). More than one gene were detected in some strains, with the most frequent associations were bap/eno in CNS and ebpS/eno/fib/fnbA in CNP. The values of SCC of milk samples with isolation of Staphylococcus spp., CNS and CNP were higher than samples without bacterial isolation and the isolation of strains with combination of ebpS/eno/fib/fnbA genes showed higher SCC than bap/eno. Regarding cell viability, samples with isolation of Staphylococcus spp. showed higher cell viability than samples without bacterial isolation and there was no association of the genes identified in strains with cell viability. In conclusion, eno and bap genes were more frequent in Staphylococcus spp. strains, eno and bap genes were mostly found in isolated CNS and ebpS, fib and fnbA genes were more detected in CNP. Cell viability was higher in samples with isolation of Staphylococcus spp. compared those without bacterial isolation and there was no association between the virulence factors of Staphylococcus spp. strains and cell viability.