O inseto vetor Diaphorina citri Kuwayama 1907 (Hemiptera: Liviidae) é considerado a principal praga da citricultura mundial. O controle desta praga é feito quase exclusivamente com inseticidas químicos, existindo a demanda por alternativas mais sustentáveis de controle. O desenvolvimento de um bioproduto a base de fungo entomopatogênico pode ser uma alternativa promissora para o manejo integrado de D. citri em pomares comerciais de citros. Assim, esse estudo teve como objetivo viabilizar a utilização do fungo entomopatogênico Isaria fumosorosea ESALQ-1296 para o controle de D. citri, avaliando: 1- a ação de adjuvantes na adesão e germinação de I. fumosorosea em ninfas e adultos de D. citri; 2- a relação entre a viabilidade dos conídios e a mortalidade de D. citri; 3- o efeito da umidade relativa do ar e da radiação ultravioleta na eficácia de I. fumosorosea em condições de laboratório; 4- o período entre a aplicação de fungicidas químicos e I. fumosorosea em campo; 5- a seletividade de I. fumosorosea aos inimigos naturais Tamarixia radiata e Ceraeochrysa cincta em condições de laboratório; 6- o volume de calda adequado para as aplicações de I. fumosorosea para o controle de D. citri em pomares comerciais; 7- a eficiência de I. fumosorosea no manejo de D. citri e seu efeito em outras espécies de artrópodes em dois sistemas de produção de citros. Análises por microscopia eletrônica de varredura revelaram que a adição dos adjuvantes KBRAdj e Silwet L-77 acelerou o desenvolvimento dos conídios de I. fumosorosea na cutícula de todos os estágios do inseto em comparação com o Tween 80. As formulações de I. fumosorosea com KBRAdj 0,075% apresentaram melhor desempenho no controle de D. citri em todos os níveis de umidade, mas especialmente em períodos de baixa umidade relativas (≤50%) e sob exposição à radiação UV-B (> 2 horas) em relação a aplicação com Tween. Os fungicidas Kumus® DF, Kocide® WDG, Nativo®, Flint 500® WG não influenciaram no desempenho do entomopatógeno quando esses foram pulverizados um dia antes ou após a aplicação do fungo sobre os adultos de D. citri. Nos estudos de seletividade foi demonstrado que a maioria das misturas de I. fumosorosea com os adjuvantes foi inócua para os adultos de T. radiata e as larvas neonatas de C. cincta. Em pomares comerciais, foi demostrado que as aplicações de I. fumosorosea foram mais eficientes no volume de 60 mL.m-3 de área de copa. Na área com produção orgânica de citros foi verificado que as aplicações de I. fumosorosea reduziram significativamente a população natural de D. citri e do ácaro da leprose (Brevipalpus spp.). Já na área com produção convencional de citros foi observado que as pulverizações de I. fumosorosea reduziram significativamente a população do ácaro da falsa ferrugem (Phyllocoptruta oleivora) e a população de D. citri foi extremamente baixa em todos os tratamentos. As aplicações de I. fumosorosea não apresentaram efeitos negativos nas populações dos predadores joaninhas, crisopídeos e hemerobídeos. Portanto, conclui-se que a utilização do fungo I. fumosorosea no manejo de D. citri pode ser uma tática sustentável para minimizar as aplicações sistemáticas de pesticidas, diminuindo seus impactos no agroecossistema. / The insect vector Diaphorina citri Kuwayama 1907 (Hemiptera: Liviidae) is the main citrus pest in the world. The control of this pest is done almost exclusively with chemical insecticides, and there is a demand for more sustainable control alternatives. The development of a bioproduct based on entomopathogenic fungi may be a promising alternative for the integrated management of D. citri in commercial citrus orchards. The objective of this study was to evaluate important parameters to increase efficiency of applications of the entomopathogenic fungus Isaria fumosorosea ESALQ-1296 for the control of D. citri. The following studies have been developed: 1- the action of adjuvants on adhesion and germination of I. fumosorosea on nymphs and adults of D. citri; 2- the relationship between the conidia viability and the mortality of D. citri; 3- the effect of relative air humidity and ultraviolet radiation on the efficacy of I. fumosorosea under laboratory conditions; 4 - the period between the application of chemical fungicides and I. fumosorosea in field; 5- the selectivity of I. fumosorosea to the natural enemies Tamarixia radiata and Ceraeochrysa cincta under laboratory conditions; 6 - the volume of syrup suitable for I. fumosorosea applications for the control of D. citri in commercial orchards; 7- the efficiency of I. fumosorosea to management of D. citri and its effect against other species of arthropods in two systems of citrus production. Scanning electron microscopy analysis revealed that the addition of the adjuvants KBRAdj and Silwet L-77 accelerated the development of I. fumosorosea conidia on the cuticle of all stages of the insect compared to Tween 80. The formulations of I. fumosorosea with KBRAdj 0.075% showed better performance in controling D. citri at all moisture levels, but especially in periods of low relative humidity (≤50%) and exposure to UV-B radiation (> 2 hours) compared to Tween application. The fungicides Kumus® DF, Kocide® WDG, Nativo®, Flint 500® WG did not influence the performance of the entomopathogen when they were sprayed the day before or after application of the fungus on D. citri adults. In the selectivity studies, it was shown that most of the mixtures of I. fumosorosea with the adjuvants were innocuous for the adults of T. radiata and the neonates of C. cincta. In commercial orchards, it was demonstrated that I. fumosorosea applications were more efficient in the volume of 60 mL.m-3 of leaves. In the area with organic citrus production it was verified that I. fumosorosea applications significantly reduced the natural population of D. citri and the false spider mite (Brevipalpus spp.). In the area with conventional citrus production it was observed that sprays of I. fumosorosea significantly reduced the population of the false rust mite (Phyllocoptruta oleivora) and D. citri population was extremely low in all treatments. The applications of I. fumosorosea did not present negative effects in the populations of the ladybirds, lacewings and hemerobide predators. Therefore, it is concluded that the use of I. fumosorosea fungus in the management of D. citri can be a sustainable tactic to minimize the systematic applications of pesticides, reducing their impacts on the agroecosystem.

A terapia fotodinâmica (TFD) é uma modalidade terapêutica baseada na interação entre uma substância fotossensibilizadora e luz, na presença do oxigênio, para causar morte celular. Sob iluminação de comprimento de onda específico, o fotossensibilizador é excitado e reage com oxigênio celular, dando origem a espécies reativas de oxigênio capazes de promover danos a biomoléculas da célula-alvo. O mesmo processo ocorre para micro-organismos, como bactérias, vírus e fungos. A Pitiose é uma doença causada por um micro-organismo semelhante a fungo denominado Pythium insidiosum. Por não ser um fungo verdadeiro, o agente não apresenta ergosterol em sua membrana plasmática e por isso, não responde à maioria das drogas antifúngicas disponíveis. Procedimentos cirúrgicos extensos, como amputação de membros, são indicados; porém as recidivas são frequentes. Neste trabalho, foi avaliado o efeito da TFD em modelo in vitro, em infecção experimental de pitiose e em pitiose equina. Além disso, foram realizados ensaios de cinética dos fotossensibilizadores utilizados, porfirina, clorinas e azuleno. As taxas de inibição de crescimento in vitro do P. insidiosum foram superiores a 95% para os ensaios com Photodithazine&reg. Photogem&reg apresentou inativação satisfatória e o azul de metileno se mostrou ineficiente para a inativação do patógeno. A cinética comprova os resultados obtidos in vitro, e revelou possível afinidade das clorinas com o oomiceto. Dez minutos após a incubação em solução de Photodithazine&reg e clorina e6 foi possível observar os compostos em estruturas intracelulares específicas. Para maiores tempos de incubação, a distribuição destes compostos se dá por toda a hifa e parede celular. O Photogem&reg mostrou distribuição heterogênea na cultura. Este fato explica o crescimento de algumas hifas após a TFD. O azul de metileno não penetrou na célula microbiana e por isso não foi eficiente na inativação do patógeno. Ao observar a estrutura morfológica da hifa do patógeno após a TFD com diferentes tempos de incubação, ficou evidente que a TFD é mais eficiente para maiores tempos de incubação. Apenas o azul de metileno não inativou o patógeno em nenhum dos parâmetros avaliados. Os estudos em pitiose experimental mostraram que o Photodithazine&reg concentra-se na lesão 4 horas após a administração por via endovenosa, o que não foi observado para o Photogem®. Altas fluências e intensidades luminosas foram necessárias para o tratamento das lesões. Foram avaliados 21 coelhos com aproximadamente 95% de cura. O tratamento de equinos naturalmente infectados mostrou resultados animadores. Foram avaliados quatro cavalos, realizando-se apenas duas sessões de TFD em cada animal e foi possível observar regiões de cicatrização tecidual e recuperação da função motora dos animais. Mais uma vez as clorinas mostraram maior eficiência quando comparadas aos outros fotossensibilizadores. Além disso, observou-se a relação entre os tempos de incubação e resposta tecidual que condizem aos observados no estudo farmacocinético. O protocolo para o tratamento da pitiose, provavelmente basear-se-á em tempos de incubação do composto maiores que 1 hora, altas fluências e intensidades luminosas e clorinas como agente fotossensibilizador. Neste trabalho, a TFD mostrou potencial terapêutico e pode vir a se tornar uma importante ferramenta no tratamento da pitiose. / Photodynamic Therapy (PDT) is a therapy based on the interaction of photosensitizer and light, in the presence of oxygen, to induce cellular death. Under the incidence of light, at an appropriated wavelength, these chemical compounds produce reactive oxygen species which affects the biomolecules of the target-cells. Pythiosis is a lifethreatening emerging disease caused by a fungus-like organism called Pythium insidiosum. Since it is not a true fungus, this microorganism does not present ergosterol in its plasmatic membrane, and so, does not respond satisfactorily to most antifungal drugs. Extensive surgical debridements are required, such as limb amputation, however, reccurence frequently occurs. In this study the PDT effect was investigated in an in vitro model, experimental in vivo infection and naturally occurred equine pythiosis. Besides, pharmacokinetic assays with chlorine, porphyrin and methylene blue were also carried out. It was observed inhibition rates greater than 95% for chlorine, while porphyrin showed satisfactory inhibition and methylene blue was inefficient to inactivate the pathogen. Pharmacokinetics assays corroborate with obtained in vitro results and demonstrated a possible affinity between chlorine and oomicetes. After ten minutes of incubation, for both chlorine and clorin e6 solutions, it was observed that these compounds were concentrated in intracellular specific structures. For longer incubation times the distribution of these compounds was observed along the hyphae and cellular wall. Porphyrin has shown heterogeneous distribution on cell culture. This fact may explain hyphal growth observed after PDT with this photossensitizer. Methylene blue was present only in the cell surface and so, did not inhibit the pathogen. By observing the morphological structure of the pathogen after PDT with different incubation times, it was evident that PDT is more efficient when employing longer incubation times. Only methylene blue did not inactivate the pathogen in none of the evaluated protocols. Concerning experimental infection, it was observed that chlorine concentrates in lesion 4 hours after intravenous administration, while the same was not observed for porphyrin. High light doses and irradiances were necessary for treating the lesions. It was evaluated 21 rabbits with complete response around 95%. The treatment of naturally infected equines showed promising results. Four horses were treated with two PDT sessions. Treated regions of healing and recovery of motor function of the animals were observed. Once again, chlorins showed improved results when compared to the other photosensitizers. Besides, it was observed the relation between incubation time and tissue response correlated to those observed in the kinetics study. The protocol for treating pythiosis, probably will be based on chlorine incubation time greater than 1 hour, high light dose and irradiance, that the results of the present study demonstrate that PDT is a potential treatment option for pythiosis.

Os fungos entomopatogênicos do gênero Metarhizium e Beauveria compreendem um importante grupo de patógenos de artrópodes-praga. A seleção de isolados de fungos promissores é a primeira e uma das mais importantes etapas no desenvolvimento de um biopesticida, pois alguns isolados podem apresentar alta virulência e não necessariamente boa produção em substrato e vice-versa, sendo interessante a combinação desses dois parâmetros para a viabilidade comercial de um produto. A dificuldade de criação ou manutenção de algumas espécies de pragas em laboratório é um limitante para a condução de testes de virulência, tornando-se interessante a utilização de espécies modelo, de fácil criação, nas etapas preliminares de seleção. Nesse sentido, este estudo objetivou selecionar isolados com alta produção de conídios e virulência, comparando a eficiência de controle de M. anisopliae e B. bassiana às pragas alvo Mahanarva fimbriolata e Bemisia tabaci Biótipo B, respectivamente, com a mortalidade em Tenebrio molitor. Inicialmente, foram selecionados 50 isolados a partir de 100 isolados de cada gênero, baseado em avaliações visuais do crescimento e esporulação em meio de cultivo em placas de Petri. Estes isolados selecionados foram cultivados em arroz parboilizado para quantificação do rendimento produtivo de conídios. Os 25 isolados mais produtivos de cada espécie de fungo foram utilizados nos bioensaios com T. molitor. Posteriormente, os cinco isolados que causaram maior e menor mortalidade de cada gênero, foram utilizados nos bioensaios com as respectivas pragas-alvo. A variação no rendimento de conídios de Beauveria spp., foi de 0,3 a 7,7 x 109 conídios.grama de arroz-1 e de Metarhizium spp. foi de 0,1 a 2,5 x 109 conídios.grama de arroz-1. A mortalidade confirmada de larvas de T. molitor por Beauveria spp., variou de 5,5 a 96,4% e por M. anisopliae variou de 29,1 a 89,1%. Alguns isolados causaram mortalidade elevada tanto no inseto modelo quanto na praga-alvo, porém, não foi verificada uma relação entre a virulência para as duas espécies. Da mesma forma, não foi observada associação entre os parâmetros produção de conídios e virulência. O isolado ESALQ 4958 de B. bassiana se destacou nos dois bioensaios apresentando mortalidades elevadas de ninfas de B. tabaci Biótipo B. Nos bioensaios utilizando ninfas de M. fimbriolata, ESALQ 1641 foi o isolado que apresentou os maiores percentuais de mortalidade nos dois bioensaios. Analisando conjuntamente as variáveis produção de conídios e virulência a T. molitor e a espécie alvo, os isolados ESALQ 540 (B. bassiana) e ESALQ 1116 (M. anisopliae) se destacaram por apresentarem valores elevados para todas as variáveis de interesse. Os resultados reforçam a necessidade de uma análise conjunta destas variáveis com um peso diferenciado para cada variável na seleção de isolados para utilização em produtos microbianos para o controle de pragas. / The genus Metarhizium spp. and Beauveria spp. are important entomopathogenic fungi used to control arthropod pests. The selection of promising fungal isolates is the first and one of the most important steps on the development of a biopesticide, since some isolates may present high virulence and not necessarily good production in substrate and vice-versa, being the combination of these two parameters important for the commercial viability. Difficulties of rearing or maintaining some species of pests in laboratory are limitations for the conduction of virulence tests, justifying the use of easy to breed model species on the preliminary steps of selection. Therefore, this study aimed to select isolates with high conidia production and virulence, comparing the control efficiency of M. anisopliae and B. bassiana to the target pests, Mahanarva fimbriolata and Bemisia tabaci biotype B, respectively, with mortality in Tenebrio molitor. At first, 50 isolates were selected from 100 isolates of each genus, based on growth and sporulation in culture medium on Petri dishes. These isolates were grown in parboiled rice to quantify the yield of conidia. The 25 most productive isolates of each fungus species were used in the bioassays with T. molitor. After, the five isolates that caused higher and lower mortality of each genus were used in the bioassays with the respective target pests. Beauveria spp. conidia yield ranged from 0.3 to 7.7 x 109 conidia.grams of rice-1 and Metarhizium spp. from 0.1 to 2.5 x 109 conidia.gram of rice-1. The confirmed mortality of T. molitor larvae by Beauveria spp. varied from 5.5 to 96.4% and M. anisopliae varied from 29.1 to 89.1%. Some isolates caused high mortality in both, model insect and the target pest; however, no relationship between the virulence of both species was observed. Similarly, there was no association between the parameters conidia production and virulence. The B. bassiana isolate ESALQ 4958 in both bioassays presented high mortalities of B. tabaci Biotype B. In bioassays using M. fimbriolata nymphs, ESALQ 1641 was the isolate that presented the highest mortalities in both bioassays. Analyzing the variables, conidia production and virulence to T. molitor and the target species, the isolates ESALQ 540 (B. bassiana) and ESALQ 1116 (M. anisopliae) showed high values for all variables of interest. The results reinforce the necessity of a joint analysis of these variables with different weight for each one in the selection of isolates, aiming to use them in microbial products for pest control.

As formigas-cortadeiras (Hymenoptera: Formicidae), gêneros Atta e Acromyrmex, são as pragas mais importantes da silvicultura, encontradas exclusivamente nas Américas. Sua importância econômica se deve ao seu hábito alimentar de cortar material vegetal fresco – sendo algumas importantes espécies cultivadas - que serve de substrato para o fungo simbionte mutualista Leucoagaricus gongylophorus (Basidiomycota: Agaricales) o qual é cultivado em câmaras subterrâneas. As fêmeas fecundadas são responsáveis pela fundação de uma nova colônia e sofrem influência direta de microrganismos presentes no solo, assim existem evidências que fêmeas de Atta spp. recém-fecundadas evitam solos férteis, com alta carga microbiana e mesmo as áreas de matas para fundação dos seus ninhos. Os fungos entomopatogênicos e fungos antagonistas de L. gongylophorus, presentes naturalmente no solo, podem ser usados no controle biológico de formigas-cortadeiras. Os objetivos deste trabalho foram avaliar em laboratório o desenvolvendo de colônias jovens de Atta sexdens em contato com solos de área de mata e de área desnuda, realizar a bioprospecção de isolados de fungos antagonistas de L. gongylophorus (Trichoderma spp.), em solos da região de Gurupi - TO, e testar o efeito antagônico desses fungos contra L. gongylophorus. Após 106 dias da revoada, as operárias de A. sexdens das 36 colônias, logo que iniciado o experimento, removeram o solo em todos os tratamentos, e esse comportamento favoreceu a sobrevivência das colônias, apresentando uma taxa de sobrevivência de 91,67% durante as 13 semanas. Verificou-se que, após as colônias terem passado pelo período crítico de fundação, o tipo de solo parece exercer pouca influência na sobrevivência das operárias e das colônias. O solo de área de mata apresenta maior quantidade e diversidade de fungos filamentosos que o solo de área desnuda; A utilização de Tenebrio molitor como isca-viva é eficiente para bioprospecção por fungos entomopatogênicos. Todos os isolados de Trichoderma foram capazes de inibir o crescimento in vitro de L. gongylophorus; Trichoderma spirale isolado 2 apresentou crescimento micelial lento em placa de Petri e inibição contra L. gongylophorus, podendo este ser um isolado promissor em testes em campo. / The leaf-cutting ants (Hymenoptera: Formicidae), Atta and Acromyrmex genera, are the most important forest pests. They are found exclusively in Americas. Its economic importance is due to behavior to cut fresh plant material that serves as a substrate for the mutualistic symbiotic fungus Leucoagaricus gongylophorus (Basidiomycota: Agaricales) that are grown in underground chambers. Fertilized females are responsible for the founding of a new colony and they suffer direct influence of soil microorganisms. Therefore, newly fertilized females of Atta spp. should avoid fertile soils with high microbial load and even forested areas to found their nests. Entomopathogenic fungi and antagonists of L. gongylophorus are naturally present in the soil and they could be used in biological control of leaf-cutting ants. The objectives of this study were to evaluate and to compare the developing of young colonies of Atta sexdens in contact with soil from forested area and in contact with bare soils. Also, this and others procedures served to bioprospect antagonistic fungi of L. gongylophorus (Trichoderma spp.) from Gurupi region soil, and test the antagonistic effect of Trichoderma spp. against L. gongylophorus. In the first hours of start of experiments, Atta workers removed soil from colony recipients. This behavior could have favored colony survival, with a survival rate of 91,67 % during the 13 weeks. It was found that after the colonies have passed the critical period of foundation, the soil appears to exert little influence on the survival of workers and colonies. The soil from forested area had greater quantity and diversity of filamentous fungi than that from bare soil. The use of Tenebrio molitor as bait alive is efficient for bioprospecting by entomopathogenic fungi. All isolates of Trichoderma were able to inhibit in vitro growth of L. gongylophorus. Trichoderma spirale isolated 2 showed slow mycelial growth in Petri dish and strong level of inhibition against L. gongylophorus in vitro. So, this isolate is promising and should be tested in field.

Diversos estudos evidenciam dezenas de espécies de fungos de diferentes gêneros nas colônias de formigas-cortadeiras. No entanto, a procedência desses microrganismos ainda é incerta. Alguns desses podem ser endofíticos oriundos do material vegetal transportado para o ninho. Assim sendo, determinados fungos endofíticos possuem a capacidade de contaminar a colônia das cortadeiras ou influenciar no seu microbioma simbiótico. Com isso, os endófitos fúngicos têm potencial no controle de formigas-cortadeiras como parceiros mutualistas das plantas. Esse sistema simbiótico pode se tornar uma estratégia no manejo dessa importante praga dentro do ecossistema florestal. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial de colonização endofítica de mudas de Eucalyptus urophylla pelos fungos Escovopsis sp., Metarhizium anisopliae e Trichoderma strigosellum, e analisar, por meio da avaliação de características biométricas, a influência da inoculação desses microrganismos sobre o desenvolvimento das plantas. O delineamento adotado foi o inteiramente casualizado, usandose o esquema fatorial 4 x 3, com 15 repetições, sendo cada parcela constituída por uma muda. Os fatores foram: três espécies de fungos (Escovopsis sp., M. anisopliae, T. strigosellum) mais um controle e três métodos de inoculação (inoculação via foliar, inoculação via solo e inoculação via plântula). Para avaliação da colonização endofítica, utilizaram-se dez mudas, sendo cinco destinadas para avaliação das características biométricas. No método de inoculação via plântula, o fungo T. strigosellum foi isolado apenas nas raízes. Contudo, no método de inoculação via solo, além das raízes, esse fungo colonizou também o caule. As plantas de E. urophylla não foram colonizadas endofiticamente quando inoculadas pelo método de inoculação via foliar. As plantas inoculadas com o fungo T. strigosellum, pelo método de inoculação via plântula, apresentaram maiores valores nas características altura de plantas, número de folhas, massa seca da parte aérea e massa seca total quando comparado com os outros métodos de inoculação. Houve incremento também, por esse método, para a variável altura de plantas, quando comparadas às plantas controle e às inoculadas pelos fungos Escovopsis sp. e M. anisopliae. Dentre os fungos estudados, o isolado T. strigosellum colonizou endofiticamente o E. urophylla e influenciou positivamente no seu desenvolvimento, quando inoculado via plântula. / Several studies evidenced dozens of fungus species of different genera in the colonies of leafcutting ants. However, the origin of these microorganisms is still uncertain. Some of these may be endophytes from plant material transported to the nest. Thus, certain endophytic fungi have the ability to contaminate the leaf-cutting ant colony or influence its symbiotic microbiome. Thus, fungal endophytes have the potential to control leaf-cutting ants as mutual plant partners. This symbiotic system could become a strategy in the management of this important forest pest. The objective of this work was to evaluate the potential of endophytic colonization of Eucalyptus urophylla plants by fungi Escovopsis sp., Metarhizium anisopliae e Trichoderma strigosellum, and to analyze, by means of the evaluation of biometric characteristics, the influence of the inoculation of these microorganisms on the plant development. Experimental design was completely randomized, using the factorial scheme 4 x 3, with 15 replicates, each plot consisting of one plant. The factors were: three fungi species (Escovopsis sp., M. anisopliae, T. strigosellum) plus one control and three methods of inoculation (foliar inoculation, inoculation via soil and seedling inoculation). For the evaluation of endophytic colonization, ten plants were used; five of them were destined to evaluate the biometric characteristics. In the seedling inoculation method, the T. strigosellum fungus was isolated only in the roots. However, in the soil inoculation method, besides the roots, this fungus also colonized the stem. E. urophylla plants were not colonized endophiatically when inoculated by foliar inoculation method. The plants inoculated with T. strigosellum by the seedling inoculation method had higher values in the characteristics of plant height, number of leaves, root dry mass and total dry mass when compared to the other inoculation methods. There was also an increase, by this method, for the plant height variable, when compared to the control plants and those inoculated by the fungi Escovopsis sp. and M. anisopliae. Among the fungi studied, the isolate T. strigosellum endofitically colonized E. urophylla and positively influenced its development when inoculated via seedling.

A cultura dos citros é considerada de muita importância para a economia brasileira. Atualmente, o inseto Diaphorina citri tem sido considerado como o principal problema dessa cultura, por ser vetor da bactéria Candidatus Liberibacter asiaticus (?-Proteobacteria) causadora da doença conhecida como Greening. Além de D. citri, a cultura dos citros apresenta inúmeras espécies de insetos e ácaros pragas que reduzem a qualidade e a produção dos frutos e requerem medidas de controle. O controle das espécies pragas tem sido realizado quase exclusivamente por aplicações frequentes de pesticidas químicos. Recentemente, isolados dos fungos entomopatogênicos Isaria fumosorosea e Beauveria bassiana foram selecionados para o controle de D. citri. Nesse estudo investigou-se a patogenicidade destes isolados associados a adjuvantes no controle de ninfas e adultos dos insetos Diaphorina citri, Toxoptera citricida, Aleurocanthus woglumi, Praelongorthezia praelonga e adultos dos ácaros Brevipalpus phoenicis e Panonychus citri em condições de laboratório. Notou-se que os fungos estudados foram patogênicos para quase todas as espécies de pragas, com a execção do fungo B. bassiana para ninfas e adultos de P. praelonga. As maiores mortalidade provocadas pelos fungos entomopatogênicos foram obtidas para ninfas e adultos de D. citri (>86% e 55,7%, respectivamente) e T. citricida (>90% e 90,8%, respectivamente), onde também foi encontrado o maior nível de esporulação por indivíduo. Essas duas espécies pragas foram selecionadas para os ensaios de transmissão horizontal, onde foi avaliada a transferência de conídios dos fungos entomopatogênicos entre indivíduos esporulados e não infectados. Nos experimentos de laboratório foi observado que I. fumosorosea e B. basssiana apresentaram transmissão horizontal entre cadáveres e adultos não infectados de D. citri (intra-específica) e adultos de T. citricida para D. citri (inter-específica). Os mesmos resultados foram obtidos nos experimentos em semi-campo com adultos de D. citri. Podemos concluir que os fungos entomopatogênicos I. fumosorosea e B. bassiana apresentam potencial como agentes de controle de D. citri, T. citricida, A. woglumi, B. phoenicis, P. citri. A transmissão horizontal dos fungos apartir de T. citricida e D. citri infectados para adultos sadios de D. citri pode contribuir para o controle desta praga em campo. / The citrus crops are considered of great importance to the Brazilian economy. Currently, the insect Diaphorina citri is considered as the major pest of this crop, as a vector of the bacterium Candidatus Liberibacter asiaticus (? - Proteobacteria) causing the disease known as Greening. Besides D. citri, the orange crop has numerous species of insect and mites pests that reduce the quality and yield of fruits and require control. The control of pest species is carried out almost exclusively by frequent applications of chemical pesticides. Recently, isolates of the entomopathogenic fungi Isaria fumosorosea and Beauveria bassiana were selected for the control of D. citri. This study investigated the pathogenicity of the entomopathogenic fungi Beauveria bassiana and Isaria fumosorosea associated adjuvants on nymphs and adults of the insects Diaphorina citri, Toxoptera citricida, Aleurocanthus woglumi, Praelongorthezia praelonga and adult mites and B. phoenicis, Panonychus citri in laboratory conditions. The fungi studied were pathogenic to almost all pests species, with exception of the fungus B. bassiana against nymphs and adults of P. praelonga. The highest mortality caused by the entomopathogenic fungi were obtained for nymphs and adults of D. citri (> 86% and 55.7%, respectively) and T. citricida (> 90% and 90.8%, respectively), where we also found the highest level of sporulation per individual. These two pest species were selected to test horizontal transmission, which evaluated the transmission of disease between sporulated and healthy individuals. In the laboratory experiments, we observed that I. fumosorosea and B. basssiana showed horizontal transmission between cadavers and healthy adults of D. citri (intraspecific) and adults of T. citricida to D. citri (interspecific). Similar results were obtained in experiments in semi-field conditions with adults of D. citri. The results show that the potential of the entomopathogenic fungi I. fumosorosea and B. bassiana to control D. citri, T. citricida, A. woglumi, B. phoenicis, P. citri. Horizontal transmission of the disease from infected T. citricida and D. citri to health adults of D. citri may improve the control of D. citri in fields.

A terapia fotodinâmica é a combinação do agente fotossensibilizador, da fonte de luz e do oxigênio que pode resultar na oxidação de biomoléculas e gerar danos celulares. Esta técnica é aplicada em diversas situações, desde o controle microbiológico até o tratamento de câncer. A maioria dos estudos utiliza as fontes de luz tradicionais, ou seja, lasers, sistemas à LED e lâmpadas. No entanto, poucos são os estudos que se concentram em propostas de fonte de luz alternativas. Iluminação portátil, flexível e independente de energia elétrica são características de grande interesse, principalmente, aos países em desenvolvimento no qual há uma grande parcela da população não assistida por hospitais de referência, além de cidades que não possuem o fornecimento de energia elétrica. Neste estudo, foi avaliada a viabilidade do uso, in vitro, da quimiluminescência como uma fonte de luz para a terapia fotodinâmica, induzindo a redução microbiana de Staphylococcus aureus. A quimiluminescência é uma reação química onde por meio da mistura de reagentes líquidos ocorre a emissão de luz sem a necessidade de qualquer ativação externa. Previamente aos estudos da aplicação terapia fotodinâmica in vitro, foram avaliadas diversas reações de quimiluminescência no intuito de estabelecer as características mais viáveis ao efeito fotodinâmico. Através de um modelo similar a teoria de Förster, foi estabelecida a relação espectral entre a banda de emissão da quimiluminescência e o espectro de absorção do fotossensibilizador Photogem®. Na análise in vitro, o agente fotossensível foi utilizado em quatro concentrações entre 6 e 75 g/ml e iluminação entre 60 minutos até 240 minutos. Longos tempos de irradiação são necessários devido a baixa intensidade de luz oriunda da quimiluminescência (intervalo de algumas dezenas de W/cm²). Os resultados demonstraram que o longo tempo de experimento não gerou redução microbiana nos grupos em que foi avaliado o efeito isolado da fonte de luz e do fotossensibilizador. Porém, quando foi avaliado o efeito fotodinâmico na combinação da reação química e o fotossensibilizador, atingiu-se redução da bactéria próxima de 98% (redução de duas ordens logarítmicas, aproximadamente) nas maiores concentrações de Photogem® e de dose de luz aplicada. Este estudo demonstra a possibilidade do uso da quimiluminescência como uma fonte de luz alternativa no controle microbiano através do efeito fotodinâmico, além de apresentar as vantagens de irradiação portátil, flexível entre outras quando comparada com as fontes de luz convencionais. / Photodynamic therapy is a combined action of the photosensitizer, a light source and the oxygen that may result in an oxidation of biomolecules and cellular damage. This technique is used for several applications, from microbial control to cancer treatment. The majority of the studies use conventional light sources as lasers, LED systems and lamps, just a few focuse on the proposal of alternative light sources. Portable, flexible and non-wired illumination are duired characteristics especially for developing countries where still great part of the population is not assisted by hospitals and several regions do not have electricity. In this study, the viability of chemiluminescence use a PDT light source was evaluated in the in vitro microbial reduction of Staphylococcus aureus. Chemiluminescence is a chemical reaction where after the reagents mixture a light emission occurs. Previously to the microorganism experiment, several chemiluminescence protocols were tested for the determination of the best reaction for this study photodynamic effect. Using a mathematical model similar to the Förster theory, the spectral relation of chemiluminescence emission and Photogem® absorption band was calculated. The photosensitizer was tested at four concentrations between 6 an 75 g/ml and illumination at exposure times between 60 and 240 minutes. Long exposure times were needed due to the low irradiances of about dozens of W/cm².The results showed that the experiment long procedure did not result in microbial reduction, which was verified at the individual effect of light and of photosensitizer. On the other hand, the photodynamic effect produced by the combination of the photosensitizer and chemiluminescence resulted in 98% microorganism reduction for the higher Photogem® concentrations and light dose. This study shows the viability of the chemiluminescence as a light source for the microbial control by PDT, associated with the characteristics of a portable and flexible illumination device.

Orientador: Antonio Batista Filho / Banca: Wilson Badiali Crocomo / Banca: José Eduardo Marcondes Almeida / Resumo: Neste trabalho estudou-se a patogenicidade de alguns isolados de Metarhizium anisopliae à cigarra do cafeeiro Fidicinoides pronoe. Além disso, utilizou-se o isolado IBCB 348 para determinação da CL90 e avaliação da compatibilidade do fungo com produtos fitossanitários empregados na cultura do café. Todos os isolados de M. anisopliae testados em cigarras do café foram patogênicos, causando mortalidades confirmadas de 50 %, com exceção dos isolados IBCB 410 e IBCB 348, que atingiram mortalidade de 60 %. Observou-se que a mortalidade foi maior nos 5 primeiros dias, havendo diminuição da mesma a partir do 6o dia. No teste de compatibilidade com produtos fitossanitários verificou-se que o fungicida oxicloreto de cobre, nas duas doses avaliadas (5.000g/ha e 2.000g/ha), resultou em maior produção de conídios e redução do crescimento vegetativo. O thiabendazole (35g/ha concentração mínima) e o hidróxido de cobre (5.000g/ha concentração máxima) não diferiram da testemunha quanto à produção de conídios. Já os produtos thiabendazole (1.500g/ha concentração máxima), benomyl (1.000g/ha), tebuconazole (100mL/ha), cyproconazole (200mL/ha) e mancozeb (5.000g/ha e 3.500g/ha) foram estatisticamente iguais entre si, mas apresentaram menor produção de conídios do que a testemunha. Através da fórmula de T, que avalia a compatibilidade dos produtos e sua toxicidade, o oxicloreto de cobre (2.000g/ha) e o thiabendazole (35g/ha) foram considerados compatíveis com M. anisopliae. Os demais fungicidas avaliados foram classificados como muito tóxicos e não apresentaram produção de conídios e crescimento vegetativo, com exceção de thiabendazole (1.500g/ha), que apresentou crescimento vegetativo. Quanto aos herbicidas avaliados, todos os produtos foram classificados como muito tóxicos nas concentrações testadas, afetando o crescimento vegetativo e a produção de conídios... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This paper deals with the pathogenicity of some isolates of Metarhizium anisopliae to the coffee cicada, Fidicinoides pronoe. Also, the isolate IBCB 348 were used to determine the LC90 and to evaluate the compatibility of this fungus with the pesticides used on the coffee crop. All M. anisopliae isolates were pathogenic to the coffee cicada, causing at least 50 % of confirmed mortality. The virulence of the fungus was higher in the first five days, decreasing after the sixth day. The fungicide copper oxicloreto, in both concentrations, resulted in higher production of conidia and reduction of vegetative growth. Thiabendazole (minimum concentration) and copper hydroxide (maximum concentration) led to conidia production similar to the control. Thiabendazole (maximum concentration), benomyl, tebuconazole, cyproconazole and mancozeb (both concentrations) showed lower production of conidia than the control. By using the T formula, which evaluate the compatibility of the pesticides and their toxicity, copper oxicloreto and thiabendazole were considered compatibles with M. anisopliae. The remaining fungicides were classified as very toxic and showed neither production of conidia nor vegetative growth, excepting thiabendazole (maximum concentration), which resulted in vegetative growth. All herbicides were very toxic to the fungus. Among the insecticides, thiamethoxam were considered compatible to M. anisopliae; the other products resulted in lower production of conidia and were considered from moderately to very toxic. / Mestre

Made available in DSpace on 2017-07-10T17:37:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Andre_Luis_Pereira_Fanti.PDF: 2167859 bytes, checksum: fb4bf9e136d45a3f830fbc1f56387147 (MD5) Previous issue date: 2011-08-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Yerba mate is a typical culture of southern Brazil, Argentina and Paraguay, with socio-economic and environmental importance. Its market is expanding and is consumed in various parts of the world. Due the lack of native culture, yerba mate has become a monoculture, and as a consequence, insects have become problematic, like that causes further damage, the borer, Hedypathes betulinus. The control is based on the pruning of attacked branches and collection of insects, but there is very potential in the use of the fungus Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. to control this insect. In order to improve biological control in the culture, this work aims to select in laboratory, isolates of fungi, being 32 isolates of B. bassiana (Bals.) Vuill and 19 isolates of Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorok., and also isolates of entomopathogenic nematodes of Heterorhabditidae family. The work with fungi was done in two steps, first evaluating the pathogenicity of the isolates, and subsequently the best were selected evaluating the virulence and other biological parameters (production of fungi: vegetative growth and conidial production in the middle of culture, rice and insects cadavers). It was selected three isolates of B. bassiana (UNIOESTE 4, UNIOESTE 52 e UNIOESTE 64), highlighting the B. bassiana isolate UNIOESTE 52, and one isolate of M. anisopliae (IBCB 352), this, causing the highest confirmed mortality. Due de seasonality of the borer, and problems with the nematodes creation, were made only pathogenic evaluation, whose mortality rates ranged from zero to 75%, being the isolate NEPET 11, of Heterorhabditis sp. the most efficient / A erva-mate é uma cultura típica da região sul do Brasil, Argentina e Paraguai, tendo grande importância sócio-econômica e ambiental. Seu mercado encontra-se em expansão e é consumida em diversas partes do mundo. Com a escassez de ervais nativos, a cultura da erva-mate passou a ser cultivada em sistema de monocultivo, e como conseqüência alguns insetos tornaram-se pragas, sendo a broca, Hedypathes betulinus, a de maior expressão. Seu controle é baseado na poda dos ramos atacados e coleta de insetos, havendo perspectiva de uso do fungo Beauveria bassiana (Bals.) Vuill.. A fim de incrementar o controle biológico na cultura, este trabalho visou selecionar em laboratório, isolados dos fungos entomopatogênicos, sendo 32 isolados de B. bassiana e 19 isolados de Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorok.. e também isolados de nematoides entomopatogênicos, da família Heterorhabditidae. O trabalho com fungos foi realizado em duas etapas, primeiramente avaliando a patogenicidade dos isolados, e posteriormente os melhores foram selecionados, avaliando-se a virulência e outros parâmetros biológicos (produção de fungos: crescimento vegetativo e produção de conídios em meio de cultura, arroz e em cadáveres de broca). Foram selecionados 3 isolados de B. bassiana (UNIOESTE 4, UNIOESTE 52 e UNIOESTE 64), destes destacando o isolado UNIOESTE 52, e um isolado de M. anisopliae (IBCB 352), este, causando a maior mortalidade confirmada. Devido à sazonalidade da broca da erva-mate, e a problemas na criação de nematoides, foram feitas apenas avaliações de patogenicidade, cujas mortalidades variaram de 0 a 75%, sendo o isolado NEPET 11, do gênero Heterorhabditis sp. o mais eficiente.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004-07-27Bitstream added on 2014-06-13T20:58:37Z : No. of bitstreams: 1 cintra_err_me_botfca.pdf: 215151 bytes, checksum: 7ae1761f27a1919df5207f8df40e958d (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária (EMBRAPA) / Neste trabalho estudou-se a patogenicidade de alguns isolados de Metarhizium anisopliae à cigarra do cafeeiro Fidicinoides pronoe. Além disso, utilizou-se o isolado IBCB 348 para determinação da CL90 e avaliação da compatibilidade do fungo com produtos fitossanitários empregados na cultura do café. Todos os isolados de M. anisopliae testados em cigarras do café foram patogênicos, causando mortalidades confirmadas de 50 %, com exceção dos isolados IBCB 410 e IBCB 348, que atingiram mortalidade de 60 %. Observou-se que a mortalidade foi maior nos 5 primeiros dias, havendo diminuição da mesma a partir do 6o dia. No teste de compatibilidade com produtos fitossanitários verificou-se que o fungicida oxicloreto de cobre, nas duas doses avaliadas (5.000g/ha e 2.000g/ha), resultou em maior produção de conídios e redução do crescimento vegetativo. O thiabendazole (35g/ha concentração mínima) e o hidróxido de cobre (5.000g/ha concentração máxima) não diferiram da testemunha quanto à produção de conídios. Já os produtos thiabendazole (1.500g/ha concentração máxima), benomyl (1.000g/ha), tebuconazole (100mL/ha), cyproconazole (200mL/ha) e mancozeb (5.000g/ha e 3.500g/ha) foram estatisticamente iguais entre si, mas apresentaram menor produção de conídios do que a testemunha. Através da fórmula de T, que avalia a compatibilidade dos produtos e sua toxicidade, o oxicloreto de cobre (2.000g/ha) e o thiabendazole (35g/ha) foram considerados compatíveis com M. anisopliae. Os demais fungicidas avaliados foram classificados como muito tóxicos e não apresentaram produção de conídios e crescimento vegetativo, com exceção de thiabendazole (1.500g/ha), que apresentou crescimento vegetativo. Quanto aos herbicidas avaliados, todos os produtos foram classificados como muito tóxicos nas concentrações testadas, afetando o crescimento vegetativo e a produção de conídios... / This paper deals with the pathogenicity of some isolates of Metarhizium anisopliae to the coffee cicada, Fidicinoides pronoe. Also, the isolate IBCB 348 were used to determine the LC90 and to evaluate the compatibility of this fungus with the pesticides used on the coffee crop. All M. anisopliae isolates were pathogenic to the coffee cicada, causing at least 50 % of confirmed mortality. The virulence of the fungus was higher in the first five days, decreasing after the sixth day. The fungicide copper oxicloreto, in both concentrations, resulted in higher production of conidia and reduction of vegetative growth. Thiabendazole (minimum concentration) and copper hydroxide (maximum concentration) led to conidia production similar to the control. Thiabendazole (maximum concentration), benomyl, tebuconazole, cyproconazole and mancozeb (both concentrations) showed lower production of conidia than the control. By using the T formula, which evaluate the compatibility of the pesticides and their toxicity, copper oxicloreto and thiabendazole were considered compatibles with M. anisopliae. The remaining fungicides were classified as very toxic and showed neither production of conidia nor vegetative growth, excepting thiabendazole (maximum concentration), which resulted in vegetative growth. All herbicides were very toxic to the fungus. Among the insecticides, thiamethoxam were considered compatible to M. anisopliae; the other products resulted in lower production of conidia and were considered from moderately to very toxic.