Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-29Bitstream added on 2014-06-13T20:59:31Z : No. of bitstreams: 1 monteiro_ba_me_botfmvz.pdf: 1690076 bytes, checksum: 2290265393e1a80a119df41bc5967502 (MD5) / Células-tronco embrionárias (CTEs) são células pluripotentes derivadas da massa celular interna, obtidas de blastocistos pré-implantados. Devido à sua pluripotência podem se diferenciar nos derivados das três camadas germinativas, endoderma, ectoderma e mesoderma, tanto in vitro como in vivo. O objetivo deste trabalho foi isolar e cultivar células da MCI de blastocistos equinos frescos e refrigerados, e caracterizar o cultivo destas células por meio da expressão dos marcadores Oct-4, SSEA-1, SSEA-3, SSEA-4, TRA-1-60 e TRA-1-81. Para tal foram utilizadas 10 éguas, das quais foram obtidos 40 embriões, divididos em dois grupos, sendo o Grupo 1 de embriões frescos, totalizando 26 embriões, e o Grupo 2 de embriões refrigerados, totalizando 14 embriões. No grupo 1 de embriões frescos, 73,1% das MCIs aderiram à monocamada dois dias após o cultivo, 65,4% mantiveram-se aderidas 4 dias após o cultivo, 19,2% foram submetidas à primeira passagem e nenhuma foi submetida à segunda passagem. Já no Grupo 2 de embriões refrigerados, 85,7% das MCIs aderiram á monocamada 2 dias após o cultivo, 85,7% das células permaneceram aderidas à monocamada 4 dias após o cultivo, 21,4% foram submetidas à primeira passagem, e 7,1% à segunda passagem. As colônias de CTEs equinas obtidas de embriões frescos foram marcadas com os anticorpos Oct-4, SSSEA-1, SSEA-4, TRA-1-60 e TRA-1-81. Já as colônias de CTEs obtidas de embriões refrigerados foram marcadas com os anticorpos Oct-4, SSEA-1, SSEA-3 e SSEA-4. As células da MCI quando isoladas dos blastocistos equinos frescos e refrigerados, foram capazes de formar colônias semelhantes à colônias de CTEs. Quando cultivadas sobre monocamada de fibroblastos equinos e inativadas com Mitomicina C, apresentaram crescimento celular e foram capazes de formar colônias de CTEs... / Embryonic stem cells are pluripotent cells, derived from inner cell mass, obtained from pre-implanted blastocysts. Because of their pluripotency, they can differentiate into derivatives of three germ layers, endoderm, ectoderm and mesoderm, both in vitro as in vivo. The aim of this study was to isolate and culture inner cell mass (ICM) cells from fresh and cooled equine blastocysts and characterize stem cells culture obtained from fresh and cooled equine embryos, by the expression of pluripotency markers as Oct-4, SSEA-1, SSEA-3, SSEA-4, TRA-1-60 and TRA-1-81. For this, 10 mares were used, from which were obtained 40 embryos, divided into two different groups, Group 1 from fresh embryos, with a total of 26 embryos, and Group 2 from cooled embryos, with a total of 14 embryos. In Group 1 of fresh equine embryos, 73,1% of ICM adhered to monolayer two days after culture, 65,4% maintained adhered four days after culture, 19,2% were submitted to first passage and none were submitted to second passage. Whereas in the Group 2 of cooled embryos, 85,7% of ICM adhered to monolayer two days after culture, 85,7% maintained adhred to the monolayer 4 days after culture, 21,4% were submitted to first passage and 7,1% to second passage. The equine embryonic like-stem cells obtained from fresh embryos were stained with the antibodies Oct-4, SSEA-1, SSEA-4, TRA-1-60 and TRA-1-81. While the embryonic like-stem cells obtained from cooled embryos were stained with the antibodies Oct-4, SSEA-1, SSEA-3 and SSEA-4. The ICM cells when isolated from fresh and cooled equine blastocysts were capable to form embryonic stem cells-like colonies. When they were cultured under an equine fibroblasts monolayer and inactivated with Mitomycin C, showed cellular development and were able to form colonies. Equine embryonic... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Mauro Dal Secco de Oliveira / Banca: Jane Maria Bertocco Ezequiel / Banca: Selma de Fátima Grossi / Banca: Paulo de Figueiredo Vieira / Banca: Márcia Saladini Vieira Salles / Resumo: O objetivo do trabalho foi avaliar o efeito de diferentes quantidades de levedura Saccharomyces cerevisiae na alimentação de vacas da raça Jersey e bovinos da raça Nelore canulados. No experimento 1, dezesseis vacas da raça Jersey distribuídas em quatro quadrados latino, receberam quatro tratamentos com diferentes quantidades de levedura S. cerevisiae (zero, 2, 4 e 6 g/anim.dia-1 - 1 x 1010 UFC/g), com silagem de milho e concentrado na proporção 50:50. Foram determinados o consumo dos nutrientes, o desempenho animal e os parâmetros sanguíneos. No experimento 2 verificou-se a digestibilidade in vitro da matéria seca, fibra em detergente neutro e da fibra em detergente ácido das rações experimentais, determinadas por meio do delineamento inteiramente casualizado com quatro tratamentos (zero, 2, 4 e 6 g/anim.dia-1 - 1 x 1010 UFC/g), avaliados no Fermentador Ruminal Ankom®. No experimento 3, foi avaliada a digestibilidade in vivo com cinco bovinos canulados distribuídos em um quadrado latino 5 x 5, nos quais receberam cinco tratamentos com diferentes quantidades de levedura S. cerevisiae (zero, 2, 4, 6 e 8 g/anim.dia-1 - 1 x 1010 UFC/g) com silagem de milho e concentrado na proporção 50:50. Determinaram-se o consumo dos nutrientes, a digestibilidade aparente e os parâmetros ruminais (pH ruminal, nitrogênio amoniacal e ácidos, graxos de cadeia curta). Todos os dados foram submetidos à análise de variância e as médias foram comparadas pelo teste Tukey a 5% de probabilidade, por ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This experiment aimed was to evaluate the effect of different amounts of Saccharomyces cerevisiae yeast in feeding Jersey cows and cannulated bovine Nelore breed. In experiment 1, sixteen Jersey cows divided into four Latin Square, received four treatments with different amounts of S. cerevisiae yeast (zero, 2, 4 and 6 g/anim.dia-1 - 1 x 1010 CFU/g), corn silage and concentrate on 50:50. Were determined consumption of nutrients, animal performance and blood parameters. In experiment 2 analyzed the in vitro digestibility of dry matter, neutral detergent fiber and acid detergent fiber of experimental diets, determined through a completely randomized design with four treatments (zero, 2, 4 and 6 g/anim.day-1 - 1 x 1010 CFU/g), evaluated in the fermenter Rumen Ankom®. In experiment 3, evaluated the in vivo digestibility with five cannulated bovine distributed in a Latin square 5 x 5, in which received five treatments with different amounts of yeast S. cerevisiae (zero, 2, 4, 6 and 8 g/anim.day-1 - 1 x 1010 CFU/g) with corn silage and concentrate in the ratio 50:50. Determined the intake of nutrients, digestibility and ruminal parameters (ruminal pH, ammonia and short chain fatty acids). All data were subjected to analysis of variance and means were compared by Tukey test at 5% probability, through the SAS 2001. The use of S. cerevisiae yeast, did not change the means intake of dry matter and nutrients, feed efficiency, production, chemical composition and quality of milk and bloo... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Fernanda da Cruz Landim / Banca: Cássia Maria Barroso Orlandi / Banca: Ian Martin / Resumo: Células-tronco embrionárias (CTEs) são células pluripotentes derivadas da massa celular interna, obtidas de blastocistos pré-implantados. Devido à sua pluripotência podem se diferenciar nos derivados das três camadas germinativas, endoderma, ectoderma e mesoderma, tanto in vitro como in vivo. O objetivo deste trabalho foi isolar e cultivar células da MCI de blastocistos equinos frescos e refrigerados, e caracterizar o cultivo destas células por meio da expressão dos marcadores Oct-4, SSEA-1, SSEA-3, SSEA-4, TRA-1-60 e TRA-1-81. Para tal foram utilizadas 10 éguas, das quais foram obtidos 40 embriões, divididos em dois grupos, sendo o Grupo 1 de embriões frescos, totalizando 26 embriões, e o Grupo 2 de embriões refrigerados, totalizando 14 embriões. No grupo 1 de embriões frescos, 73,1% das MCIs aderiram à monocamada dois dias após o cultivo, 65,4% mantiveram-se aderidas 4 dias após o cultivo, 19,2% foram submetidas à primeira passagem e nenhuma foi submetida à segunda passagem. Já no Grupo 2 de embriões refrigerados, 85,7% das MCIs aderiram á monocamada 2 dias após o cultivo, 85,7% das células permaneceram aderidas à monocamada 4 dias após o cultivo, 21,4% foram submetidas à primeira passagem, e 7,1% à segunda passagem. As colônias de CTEs equinas obtidas de embriões frescos foram marcadas com os anticorpos Oct-4, SSSEA-1, SSEA-4, TRA-1-60 e TRA-1-81. Já as colônias de CTEs obtidas de embriões refrigerados foram marcadas com os anticorpos Oct-4, SSEA-1, SSEA-3 e SSEA-4. As células da MCI quando isoladas dos blastocistos equinos frescos e refrigerados, foram capazes de formar colônias semelhantes à colônias de CTEs. Quando cultivadas sobre monocamada de fibroblastos equinos e inativadas com Mitomicina C, apresentaram crescimento celular e foram capazes de formar colônias de CTEs... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Embryonic stem cells are pluripotent cells, derived from inner cell mass, obtained from pre-implanted blastocysts. Because of their pluripotency, they can differentiate into derivatives of three germ layers, endoderm, ectoderm and mesoderm, both in vitro as in vivo. The aim of this study was to isolate and culture inner cell mass (ICM) cells from fresh and cooled equine blastocysts and characterize stem cells culture obtained from fresh and cooled equine embryos, by the expression of pluripotency markers as Oct-4, SSEA-1, SSEA-3, SSEA-4, TRA-1-60 and TRA-1-81. For this, 10 mares were used, from which were obtained 40 embryos, divided into two different groups, Group 1 from fresh embryos, with a total of 26 embryos, and Group 2 from cooled embryos, with a total of 14 embryos. In Group 1 of fresh equine embryos, 73,1% of ICM adhered to monolayer two days after culture, 65,4% maintained adhered four days after culture, 19,2% were submitted to first passage and none were submitted to second passage. Whereas in the Group 2 of cooled embryos, 85,7% of ICM adhered to monolayer two days after culture, 85,7% maintained adhred to the monolayer 4 days after culture, 21,4% were submitted to first passage and 7,1% to second passage. The equine embryonic like-stem cells obtained from fresh embryos were stained with the antibodies Oct-4, SSEA-1, SSEA-4, TRA-1-60 and TRA-1-81. While the embryonic like-stem cells obtained from cooled embryos were stained with the antibodies Oct-4, SSEA-1, SSEA-3 and SSEA-4. The ICM cells when isolated from fresh and cooled equine blastocysts were capable to form embryonic stem cells-like colonies. When they were cultured under an equine fibroblasts monolayer and inactivated with Mitomycin C, showed cellular development and were able to form colonies. Equine embryonic... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Luis Carlos Spolidorio / Banca: Ticiana Sidorenko de Oliveira Capone / Banca: Thallita Pereira Queiroz / Resumo: Os mecanismos de ação dos andrógenos sobre homeostase e regulação das células que participam do turnover ósseo em fêmeas ainda são pouco compreendidos. Este trabalho teve como principal objetivo avaliar a participação de andrógenos na diferenciação e atividade de osteoclastos in vitro. Células totais de medula óssea de fêmur e tíbia de camundongos fêmeas foram utilizadas como fonte de células precursoras de osteoclastos, sendo cultivadas utilizando-se α-MEM suplementado e em presença de RANK-L (30ng/mL) e M-CSF (50ng/mL). As células foram tratadas com testosterona (T) diidrotestosterona (DHT) e antagonistas de receptores de hormônios sexuais, como flutamida (FLU) e fulvestranto (FUL). O anastrozol (ANA) foi usado para inibição da enzima aromatase e o etanol (0,01%) foi utilizado como controle. Após cinco dias, as células foram fixadas, coradas com TRAP e contadas, considerando-se células TRAP-positivas com 3 ou mais núcleos. Para o ensaio de atividade, foram utilizadas placas revestidas com fosfato de cálcio inorgânico e a área de reabsorção foi calculada com o auxílio de software. O estágio de diferenciação osteoclástica foi avaliado por RT-qPCR e a modulação da expressão de receptores para hormônios sexuais foi avaliada por Western Blot. Os andrógenos (T e DHT) não exerceram efeitos sobre a diferenciação e atividade de osteoclastos (ANOVA; p>0,05). Por outro lado, os tratamentos com ANA, FLU e FUL, associados ou não a T, regularam positivamente a diferenciação e atividade d... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The action mechanisms of androgens on homeostasis and the regulation of cells that participate in bone turnover in females are still poorly understood. This study had as main objective to evaluate the participation of androgens in the differentiation and activity of in vitro osteoclasts. Total bone marrow cells from femur and tibia of female mice were used as a source of precursor cells of osteoclasts, they were cultivated using supplemented α-MEM and in the presence of RANK-L (30ng/mL) and M-CSF (50ng/mL). The cells were treated with testosterone (T), dihydrotestosterone (DHT) and antagonists of sexual hormone receptors such as flutamide (FLU) and fulvestrant (FUL). Anastrozole (ANA) was used for inhibiting the aromatase enzyme and ethanol (0.01%) was used as a control. After five days, the cells were fixed, colored with TRAP and counted, considering TRAP-positive cells those ones containing 3 or more nuclei. For the activity assay, were used plaques covered with inorganic calcium phosphate and the area of reabsorption was calculated with the assistance of a software. The osteoclast differentiation stage was evaluated by RT-qPCR and the modulation of the expression of receptors for sexual hormones was assessed by Western Blotting. The androgens (T and DHT) did not exert effects in differentiation and activity of osteoclasts (ANOVA, p> 0.05). On the other hand, the treatments with ANA, FLU and FUL, associated or not to T, positively regulated the differentiation and activity ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Coorientador: Fabiana Fernandes Bressan / Banca: Áureo Evangelista Santana / Banca: Camila de Paula Freitas Dell'Aqua / Resumo: A pele é um órgão extenso e de fácil acesso, e possui vários tiposcelulares diferentes que estão em constante renovação. Dentre estas células, algunstipos de células-tronco com potencial proliferativo, de autorrenovação e dediferenciação, são responsáveis pela manutenção da homeostase deste órgão epela cura de feridas. Estudos anteriores sugerem a existência de um nicho decélulas-tronco presente no "bulge" dos folículos pilosos, que contém populaçõespositivas para CD200 e CD34. Este trabalho foi realizado com o intuito de: 1- Obtertecidos derivados da pele de cães adultos e fetos, isolar e cultivar as células in vitroderivadas destes, empregando um método de isolamento celular através de digestãoenzimática simples 2- Comprovar a presença de células do "bulge", positivas paraCD200 e CD34 após cultivo celular in vitro, comparando com a análise do tecido;Uma coloração por hematoxilina e eosina foi realizada da pele de cães adultos efetos, e biopsias e células cultivadas in vitro foram caracterizadas pela presença dasproteínas CD200 e CD34 através de imunofluorescência, imunocitoquímica ecitometria de fluxo. Os resultados da imunofluorescência foram negativos paraambos CD200 e CD34 nas peles de feto e adulto. Na imunocitoquímica, as célulasforam positivas para CD34 e CD200, tanto em fetos quanto adultos. Adicionalmente,o marcador de pluripotência OCT4 foi testado, sendo expresso em células de feto.Por citometria de fluxo, a porcentagem média de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Skin is an extensive and easily accessible organ, possessing variouscell types which are in constant renovation. Some stem cell types found in the skinhave the potential of self-renewal, proliferation and differentiation, processes whichare responsible for the organ's maintenance of homeostasis and the healing ofwounds. Previous studies suggested the presence of a stem cell niche at the bulgeregion of the hair follicle, which contains cell populations positive for CD200 andCD34. Thus, this work sought to identify these cell populations in canine culturesusing the following methods: 1. 1- Collecting samples of adult and fetus canine skin,isolating and culturing these cells in vitro using a method of simple enzymaticdigestion; 2- Testing the cell cultures for CD200 and CD34 in vitro, comparing themwith analyzed tissue material. Hematoxylin and eosin staining were conducted for thebiopsies and analysis of fetal and adult canine skin, with the extracted cell culturesbeing characterized for the presence of the proteins CD200 and CD34 throughimmunofluorescence, immunocytochemistry and flow cytometry. In both adult andfetal tissue samples, CD200 and CD34 immunofluorescence results were negative.In immunocytochemistry, both fetal and adult cultures cells tested positive for CD34and CD200. The pluripotency marker OCT4 was also tested, and was positive forfetal culture cells. Flow cytometer results showed that, for samples with a doublestaining of CD... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Sérgio Luis Felisbino / Coorientador: Elenice Deffune / Banca: Sylvia Stuchi Maria-Engler / Banca: Rosana Rossi-Ferreira / Banca: Patrícia Pintor dos Reis / Banca: Wagner José Favaro / Banca: José Andrés Yunes / Banca: José Roberto Bosqueiro / Banca: José Carlos Souza Trindade Filho / Resumo: O câncer de próstata (CaP) é importante causa de morte no mundo. Além do óbvio impacto na vida pessoal do paciente e na sua família, no Brasil esta doença gera custos altíssimos para o Sistema Único de Saúde (SUS), desde o diagnóstico até o óbito. As terapias disponíveis, além de causarem complicações e efeitos colaterais indesejáveis, não proporcionam sobrevida alta ao paciente. Além disso, os casos de cura são restritos aos diagnosticados precocemente, e com intervenção rápida, antes que o tumor se torne resistente à castração química. Neste sentido, estratégias preventivas são desejáveis para a diminuição da incidência e óbitos e, dentre elas, o uso da finasterida, um fármaco inibitório da enzima 5-α-redutase, foi proposto como potencial agente quimiopreventivo após estudo conduzido pelo Prostate Cancer Prevention Trial, que demonstrou significante diminuição na incidência de CaP no grupo de pacientes tratados, em comparação ao grupo controle. No entanto, mesmo com resultados promissores, foi detectado aumento, também significante, do número de casos de cânceres mais agressivos (alto grau) no grupo de pacientes que recebeu finasterida, em comparação aos pacientes do grupo controle. Após intenso debate entre urologistas, biologistas e cancerologistas, ainda não há consenso sobre a natureza artefatual ou de real indução de cânceres mais agressivos pela finasterida. O órgão regulatório americano Food and Drugs Administration (FDA) declarou que o aumento dos casos agressivos pela finasterida não deve ser negligenciado, e recentemente proibiu o uso deste fármaco como quimiopreventivo para o CaP. Uma vez que casos agressivos de câncer estão comumente relacionados à superexpressão de enzimas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Prostate cancer (PCa) is an important death cause in Brazil and other countries. Besides the obvious impact at patient's life, and their relatives, this disease consumes exorbitant resources from the Sistema Único de Saúde (SUS), from diagnosis to death. The available therapies not only cause undesirable complications and side effects, but also are inefficient at providing good survival expectancies for those affected. Moreover, the cure is only possible when the tumors are readily found and when the intervention is fast enough to prevent that the tumor become castration-resistant. In this sense, preventive strategies are desirable in order to lower incidence and death, and amongst them, finasteride (Fin) treatment, an inhibitor of the 5-alpha reductase enzyme, was proposed as a potential chemopreventive agent after the study conducted by the Prostate Cancer Prevention Trial reported a significant lower incidence of PCa cases on Fin-treated patients, when compared to control patients. However, even though these results were promising, this study also reported a significant increase on more aggressive, high-grade PCa, amongst Fin-treated patients, compared to those not exposed to Fin. After an intense debate about factual or artifactual Fin-induced high-grade PCa cases, between urologists, biologists and oncologists, there are still no decisive conclusions on this matter. The regulatory USA organ, Food and Drugs Administration (FDA), has recently declared that the higher incidence of a more serious form of PCa at the Fin-treated patients must not be neglected, and prohibited its use as a chemopreventive agent. Given that the aggressive cancer cases are commonly associated with the super-expression of matrix metalloproteinases (MMPs) enzymes, with consequently higher invasion and migration potential of tumor... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Aparercida Conceição Boliani / Co-orientador: Flávia Dionísio Pereira / Banca: José Luis Susumu Sasaki / Banca: Sonia Maria Nalesso Marangoni / Resumo: O tamarindeiro (Tamarindus indica L., Fabaceae) é uma árvore comum em países tropicais e possui grande potencial para exploração, devido ao seu elevado valor nutritivo e suas importantes características farmacêuticas, justificando assim, sua potencialidade como uma cultura promissora. O objetivo deste trabalho foi desenvolver métodos de propagação vegetativa para produção de mudas de tamarindeiro. Foram avaliados os meios de cultivo Murashige e Skoog (MS) e Woody Plant Medium (WPM), adicionados ou não de 2g L-1 de carvão ativado, nas concentrações de macronutrientes e micronutrientes em 0, 25, 50, 75 e 100% no estabelecimento de segmentos nodais e na germinação e crescimento de embriões zigóticos de tamarindeiro; o enraizamento de alporques utilizando como substrato composto orgânico, esfagno, bagaço de cana e fibra de coco de textura fina e concentrações de AIB (0, 500, 750, 1000 e 1250mg L-1) e o enraizamento de estacas herbáceas, semi-lenhosas e lenhosas, submetidas a cinco concentrações de AIB (0, 500, 1000, 1500 e 2000mg Kg-1) nas estações de primavera, verão, outono e inverno. A cultura de tecidos é um método viável para produção de mudas, o meio MS + carvão ativado e a concentração de sais em 25% proporcionam melhores resultados na regeneração de segmentos nodais e na germinação de embriões zigóticos de tamarindeiro. A alporquia é um método viável para produção de mudas, o esfagno favorece a porcentagem de alporques enraizados mesmo sem aplicação de regulador vegetal. A estaquia não é um método de propagação viável para a produção de mudas de tamarindeiro nas condições testadas / Abstract: The tamarind (Tamarindus indica L., Fabaceae) is a common tree in tropical countries and has great potential for exploitation due to their high nutritional value and its major pharmaceutical characteristics, thus justifying its potential as a promising culture. The aim of this work was to develop methods for propagating seedlings of tamarind. The culture medium Murashige and Skoog (MS) and Woody Plant Medium (WPM) , added to 2 g L-1 activated charcoal, the concentrations of macronutrients and micronutrients at 0, 25, 50, 75 and 100% were evaluated establishment of nodes and the germination and growth of zygotic embryos of tamarind, the rooting of air layers as substrate using organic compost, sphagnum , bagasse and coconut fiber and fine texture IBA concentrations (0, 500, 750, 1000 and 1250 mg L-1) and rooting of semi-hardwood and hardwood softwood cuttings, received five IBA concentrations (0 , 500, 1000, 1500 and 2000 mg kg-1) in the spring, summer, autumn and winter. Tissue culture is a viable method for the production of seedlings, MS medium plus charcoal and salt concentration by 25% provide better results in the regeneration of nodal segments and germination of zygotic embryos of tamarind. The layering is a viable method for producing seedlings, sphagnum favors the percentage of rooted air layers without application of plant growth regulator. Cutting is not a viable method for propagating seedlings of tamarind in the conditions tested / Mestre

Orientador: Alexandre Lima de Andrade / Co-orientador: Tereza Cristina Cardoso da Silva / Banca: Sabryna Gouveia Calazans / Banca: Maria Gisela Laranjeira / Banca: Flávia de Rezende Eugênio / Banca: Paula Rahal / Resumo: A neoplasia mamária canina representa uma das maiores casuísticas na oncologia veterinária e o emprego de seus respectivos cultivos celulares são importantes, principalmente, na área terapêutica. Assim, o objetivo do presente estudo foi padronizar e estabelecer cultivos celulares de tumores mamários caninos para testes in vitro com doxorrubicina e, correlacionar imunomarcações com vimentina, citoqueratina, p53 e HER-2 no tumor original e nas células do seu cultivo. Tumor misto benigno e os carcinomas complexo, simples e espinocelular foram cultivados a partir de explantes com posterior exposição das células à doxorrubicina (controle-0,25-0,50-0,75-1,0-2,0μM). A viabilidade celular foi mensurada pelo azul de Tripan e os testes com imunomarcadores para cada espécie tumoral foram por imuno-histoquímica e, no cultivo, pela imunofluorescência. Do total de 39 amostras, 40% foram cultivadas até a quinta ou mais passagens. As imunomarcações não foram expressas de forma similar entre as técnicas, com diferença significativa na frequência de vimentina, p53 e HER-2, de forma aumentada nos cultivos. A doxorrubicina apresentou alta eficácia nas células tumorais, mas sem diferença entre os tipos histológicos, porém cada cultivo comportou-se distintamente quando analisado em isolado. Conclui-se que é possível cultivar primariamente diferentes tumores mamários caninos utilizando-se meio de cultivo básico; os testes de expressão gênicas são mais indicados para análises comparativas entre tumor e seu respectivo cultivo e, quanto maior a concentração do quimioterápico, menor a viabilidade celular / Abstract: Canine mammary tumors represent a high casuistry in veterinary oncology and few studies with cell culture are being employed, mainly with drug application. The purpose was to establish and standardize the cell culture of canine mammary tumors for in vitro efficacy of doxorubicin and to correlate the immunostaining of vimentin, cytokeratin, p53 and HER-2, in paraffin sections of original tumor and the cell cultures derivated. Benign mixed tumor, complex carcinoma, simple carcinoma and espinocelular carcinoma were cultivated from explants and the cells originated were incubated with doxorubicin in different concentrations (control-0.25-0.50-0.75-1.0-2.0μM). The percentual of viable cells were determined by the Trypan blue dye exclusion test and for immunoexpression, the immunohistochemistry was performed for the primary tumor and immunofluorescence, for the cells. A total of 39 tumor samples were collected and, 40% were cultivated up to fifth passages. A different imunnoexpression was observed between methodologies with higher expression at vimentin, p53 and HER-2 groups. It was observed that doxorubicin presented an elevated efficacy in canine mammary cell culture but without difference among the histological groups and each sample presented an individual responsiveness for the same treatment. So, it can be concluded that it was possible to realize a primary cell culture with a simple culture medium formulation; gene expression profiles in tumor tissue and cell culture derived from those tumors are better designated than immunoexpression tests and higher the concentration of doxorubicin, lower the cell viability / Doutor

Orientador: Alexandre Lima de Andrade / Co-orientador: Tereza Cristina Cardoso da Silva / Banca: Camila da Silva Frade / Banca: Maria Gisela Laranjeira / Banca: Debora Aparecida Pires de Campos Zuccari / Banca: Flávia de Rezende Eugênio / Resumo: Em medicina veterinária, os tumores mamários de cadelas possuem alta casuística e o seu prognóstico, em muitos casos, já desfavorável. Dessa forma, é imperioso desenvolver formas eficientes para estudar o comportamento dessa neoplasia, utilizando cultivos celulares para aplicação de testes quimioterápicos associados à expressão de indutores da apoptose. Assim o objetivo desse estudo foi realizar o cultivo, em 3D, de tumores mamários, mimetizando o ambiente tumoral "in vivo", em substituição aos testes experimentais com animais e cobaias de laboratório. Adicionalmente, pretendeuse analisar a expressão das proteínas caspase 2, 3, 8, 9, Bcl-2 e Bax em células após o tratamento com carboplatina (dose 1,25μM), e a p53 em cultivo monocamada em células de baixa e alta passagem (20 até 58, respectivamente). O cultivo em 3D demonstrou ser uma boa ferramenta para o estudo "in vitro". Os esferoides formados diminuíram de tamanho após tratamento com carboplatina. A expressão de Bcl-2, em duas amostras, indicou resistência à carboplatina em dois tipos histológicos (carcinoma solido e carcinoma espinocelular). As caspases 2 e 3 não foram expressas em amostras tratadas, indicando que a carboplatina não causa morte celular pela apoptose. A p53 foi marcada no núcleo e no citoplasma, indicando anormalidade nessa proteína, que pode estar associada à progressão maligna em neoplasias. Todos os ensaios desenvolvidos no cultivo 3D mostraram que é possível, com essa técnica, aprofundar os estudos sobre as neoplasias mamárias em cães, podendo contribuir para novas descobertas referente ao prognóstico e novos tratamentos / Abstract: In Veterinary Medicine canine mammary tumors have high casuistry and in many cases bad prognosis the prognosis is bad. Thus it is imperative to develop efficient ways to study the behavior of this tumor using tissue culture tests for applying chemotherapeutic associated with expression inducers of apoptosis. The aim of this study was to grow cells of breast tumors in 3D culture where can mimic the environment "in vivo". Additionally, analyze the expression of the caspase protein 2, 3, 8, 9, Bcl-2 and Bax and cells after treatment with carboplatin (dose 1.25 mM). Thus, analyse of p53 cells in monolayer culture in high-pass (up to 58 passages) and low-pass (up to 20 passages). The spheroids formed decreased in size after treatment with carboplatin. The expression of Bcl- 2 in both samples showed resistance to carboplatin in two histological types (solid carcinoma and squamous cell carcinoma). The caspase 2 and 3 not expressed in treated samples indicating that carboplatin does not cause cell death by apoptosis. P53 showed cytoplasmic and in the nucleus, indicating that abnormal protein may be associated with malignant progression in cancer. All assays developed in 3D culture showed that it is possible with this technique, further studies on mammary tumors in dogs that can contribute on new discoveries regarding the prognosis and treatments / Doutor

Orientador: Janaina Habib Jorge / Banca: Ana Cláudia Pavarina / Banca: Nara hellen Campanha Bombarda / Resumo: Estudos têm sido conduzidos com o intuito de prevenir a formação do biofilme em biomateriais ou buscar terapias alternativas para o tratamento de doenças decorrentes da instalação do biofilme. Como terapia alternativa, este estudo avaliou (1) a citotoxicidade da terapia fotodinâmica (PDT), através da utilização de queratinócitos humanos co-cultivados com Candida albicans. Em relação à prevenção da formação do biofilme, (2) foi avaliada a citotoxicidade de nanopartículas (NP) de tungstato de prata (Ag2WO4) e de molibdato de prata (Ag2MoO4), em solução e como revestimento de biomateriais. No estudo 1, a co-cultura foi realizada utilizando uma membrana Transwell, em que células e micro-organismos cresceram separadamente durante 24h, e ficaram em contato por mais 24h. Após este período, a PDT foi realizada utilizando-se a curcumina como fotossensibilizador. As seguintes condições foram testadas: P+ L+; P- L+; P+ L; P- L. Além disso, como controle negativo, três membranas de cada placa foram destinadas apenas ao crescimento de microorganismos e outros três poços para o crescimento de células separadamente, com seus respectivos meios. A proliferação celular, foi avaliada através dos testes Alamar Blue, MTT, XTT e UFC. Para o estudo 2, as NP foram sintetizadas e caracterizadas através de Microscopia Eletrônica de Varredura e Difração de Raios X. A partir da confecção das NP, foram feitas as soluções e o revestimento de titânio (Ti), zircônia (Zi), resina acrílica (RA) e silicone (Si). Para a realização do teste de citotoxicidade, 100 µL da suspensão composta por 1,5 x 104 células/ml (HaCat) foram colocados em cada compartimento de uma placa com 96 orifícios, incubada em estufa com 5% de CO2, a 37ºC por 24 horas. Após tal período de incubação, o meio de cultura foi desprezado, permanecendo as células aderidas no fundo da placa...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Studies have been conducted in order to prevent biofilm formation on biomaterials or seek alternative therapies for the treatment of diseases caused by biofilm installation. As an alternative therapy, this study evaluated (1) the cytotoxicity of photodynamic therapy (PDT) by the use of co-cultured human keratinocytes with Candida albicans (Ca). In relation to prevention of biofilm formation, (2) the cytotoxicity was evaluated nanoparticles (NP) silver tungstate (Ag2WO4) and silver molybdate (Ag2MoO4), in solution and as a biomaterial coating. In study 1, the co-culture was performed using a Transwell membrane, and cells in which micro-organisms grown separately for 24 h, and were in contact for a further 24h.After this period, PDT was performed using curcumin as a photosensitizer. The following conditions were tested: P+ L+; P- L+; P+ L; P- L. In addition, as a negative control, three membranes of each plate were assigned only to the growth of microorganisms and another three wells for cell growth separately with respective means. Cell proliferation was evaluated by testing the Alamar Blue, MTT, XTT, and CFU. For the study 2, the NP were synthesized and characterized by scanning electronic microscopy and X-ray diffraction. Since the making of the NP, they were made solutions and the titanium coating (Ti), zirconium (Zi), acrylic resin (RA) and silicon (Si). To perform the cytotoxicity assay, 100 µL of suspension composed of 1.5 x 104 cells / mL (HaCaT) were placed in each compartment of a plate with 96 wells, incubated in an incubator with 5% CO2 at 37 ° C for 24 hours. After this incubation period, the culture medium was discarded, remaining adhered cells at the bottom of the wells. 100 µL of culture medium containing the nanoparticles in solution and the extracts were placed on each plate hole. The plate was incubated for another 24 hours. Cell proliferation was assessed using the Alamar ... (Complete abstract electronic access below) / Mestre