Orientador: Maria Beatriz Puzzi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-17T10:25:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dinato_MarceloMattose_M.pdf: 4803476 bytes, checksum: eb9d2db304929302cdd47c38064634bb (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Grande parte das úlceras diabéticas em extremidades inferiores tem difícil cicatrização, representando a causa mais comum de amputação não traumática no mundo. Para pacientes sem resposta à terapêutica clássica como desbridamentos, curativos e antibioticoterapia sistêmica, pode ser excelente indicação a terapia celular. O propósito deste estudo foi avaliar a eficácia de implantes autólogos de células da pele (fibroblastos e queratinócitos) cultivadas "in vitro" e aplicadas com cola de fibrina autóloga em úlceras cutâneas crônicas de 5 pacientes diabéticos (4 DM2 e 1 DM1) com diagnóstico variando de 9 a 34 anos. Foram tratadas 6 úlceras de 4,0 a 36.62 cm2 de tamanho com duração de 4 meses a 20 anos, localizadas em membros inferiores, sem resposta a diversos tratamentos convencionais. Observou-se cicatrização completa em 5 úlceras (83,3%) entre 21 e 120 dias, sendo que a média dos Índices de Cicatrização das Úlceras (ICU) foi de 62%, 75%, 78% e 83%, no 30º; 60º; 90º e 120º dias de evolução, respectivamente. Existe uma correlação entre a velocidade de cicatrização, o tamanho da úlcera e o seu tempo de duração. Não ocorreram reações adversas decorrentes do tratamento. Concluiu-se que, a terapia celular (queratinócitos-fibroblastos) associada à cola de fibrina autóloga mostrou-se uma opção terapêutica eficaz, autóloga, de realização ambulatorial minimamente invasiva que acelerou significativamente o processo de cicatrização das úlceras diabéticas crônicas / Abstract: A great part of diabetic ulcers on the lower extremities have difficult healing and represent the most common cause of amputation worldwide. For patients unresponsive to the classical therapy with debridement, dressings and systemic antibiotic therapy, cell therapy may be an excellent indication. The objective of this study was to assess the efficacy of autologous skin cell (fibroblasts and keratinocytes) implants cultivated in vitro and applied with autologous fibrin glue to chronic skin ulcers of 5 diabetic patients (4 DM2 and 1 DM1) who had been diagnosed between 9 and 34 years before. There were 6 ulcers from 4.0 to 36.62 cm2 in size, with onset between 4 months and 20 years before, located on the lower limbs and unresponsive to several conventional treatments. Complete healing was observed in 5 ulcers (83.3%), after 21 to 120 days and the average of ulcer healing indices (UHI) were 62%, 75%, 78% and 83%, on the 30th, 60th, 90th and 120th days, respectively. There is a correlation between healing time, ulcer size and duration. No adverse reactions derived from the treatment occurred. It was concluded that cell therapy (keratinocytes, fibroblasts) associated with autologous fibrin glue proved to be an effective therapeutic option, minimally invasive and performed on an outpatient basis, that has significantly accelerated the healing of chronic diabetic ulcers / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica

Orientadores: Cecilia Amelia de Carvalho Zavaglia, Eliana Aparecida de Rezende Duek / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Mecanica / Made available in DSpace on 2018-08-05T03:14:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barbantini_SamuelHilsdorf_D.pdf: 12141806 bytes, checksum: 0b989130cb636eca30c7bf3da9bc69f8 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A utilização de polímeros bioreabsorvíveis como suporte para cultura de células tem se destacado como alternativa para tratamento de lesões e perda de tecidos. O objetivo deste trabalho foi obter e caracterizar suportes densos e porosos de poli(E-caprolactona) (PCL) e poli(D,L-ácido lático-co-ácido glicólico) (50/50) (PLGA50), preparados pelo método de fusão com adição e lixiviação de citrato de sódio. As amostras foram avaliadas em estudos de degradação in vitro para o estudo do efeito da retirada do sal, e em meio tampão fosfato (pH 7,4) e alcalino com NaOH (pH 12, 13 e 13,7). Os materiais foram utilizados como suporte para cultura de osteoblastos e o estudo in vivo foi realizado pelo implante em noia de ratos. Os resultados obtidos através de análises morfológicas, térmicas e de propriedades mecânicas, mostram que amostras de PCL são mais estáveis quando comparadas às suas análogas de PLGASO.A cultura de células mostrou um padrão de adesão e proliferação satisfatório, com intensa atividade celular. No estudo in vivo as amostras de PCL mostram uma degradação mais acentuada quando comparada com os resultados obtidos no estudo in vitro. Os resultados mostraram que a técnica utilizada no preparo das amostras é útil na confecção de suportes altamente porosos. Em função do tempo de degradação e das propriedades mecânicas, as amostras de PLGA5O foram os suportes mais indicados para aplicações na engenharia de tecidos ósseos / Abstract: The use of bioresorbable polymers as sca:ffolds for the cells culture has received special attention as an alternative for the treatment of lesions and the loss of tissue. The aim of this work was to obtain and to characterize dense and porous scaffolds of poly(e-caprolactone) (PCL) and poly(D,L-lactic acid-co-glycolic acid) (50/50) (PLGA50), prepared by melting method with addition and leaching of sodium citrate. The samples were evaluated in studies of in vitro degradation, in phosphate bufIer solution (pH 7.4) and alkaline medium ofNaOH (pH 12, 13 and 13.7). Scaffolds samples were used in osteoblast culture and the in vivo study was evaluated by implant in mouse tibia. The results of morphologic, thermal and of mechanical analyses, showed that the PCL samples are stable compared to their similar of PLGA50. The culture of cells showed a satisfactory adhesion and proliferation, with intense cellular activity. In the in vivo study, the samples of PCL showed a higher degradation when it is compared to the results obtained in vitro study. The results showed that the proposed technique allowed the preparation of highly porous scaffoldsa nd in function of time degradation and mechanics properties, the samples of PLGA50 were the most suitable scaffolds for applications in the bone tissue engineering / Doutorado / Materiais e Processos de Fabricação / Doutor em Engenharia Mecânica

Orientadores: João Ernesto de Carvalho, Mary Ann Foglio / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-06T02:42:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Denny_Carina_D.pdf: 2044243 bytes, checksum: 37d9912d0a46cbfff8c47cde834817fd (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Modelos de avaliação da citotoxicidade têm proporcionado a obtenção de importantes dados preliminares, ajudando a selecionar extratos de plantas com propriedade antitumoral para estudos futuros. Como parte de um programa de screening de plantas medicinais brasileiras e produtos naturais com propriedades anticâncer, o presente trabalho apresenta a atividade da Virola sebifera (Myristicaceae), uma árvore endêmica do Cerrado brasileiro. O objetivo geral desse trabalho foi avaliar as propriedades in vitro e in vivo de amostras da V. sebifera. além de isolar e identificar seus compostos ativos. O primeiro estudo descreve a atividade antiproliferativa em cultura de células tumorais humanas de duas lignanas e dois policetídeos isolados das folhas da V. sebifera. Assim, reportamos o isolamento e elucidação estrutural de um novo policetídeo 3,5-diidro-2-(l'-oxo-3'-hexadecenil)-2-ciclohexano-l-ona com alta atividade antiproliferativa contra 8 linhagens de células tumorais humanas. No segundo estudo, purificamos a fração ativa (FR4) a partir do extrato bruto diclorometânico, com atividade in vitro (IC50- 5,19-10,57 (xg/mL - ensaio do SRB) pãrã âs mesmas linhagens celulares. Pãrã ãvãliãr ã atividade in vivo da fração ativa utilizamos o ensaio da hollow fiber. Assim, foram estabelecidas as condições de crescimento para as linhagens celulares MCF-7, NCI-ADR e OVCAR03 em fibras (hollow fibers) implantadas no abdômen (i.p.) e no dorso (s.c.) de camundongos imunocompetentes. Os animais foram tratados com FR4 (500mg/kg), doxorubicina (6mg/kg) ou veículo intraperitonealmente. Após 14 dias de tratamento, as fibras foram retiradas, seguindo-se a coloração do MTT para determinação da densidade de células viáveis. A fração FR4 demonstrou efeito significante contra células de mama (MCF-7) e ovário (OVCAR03). A confirmação das propriedades anticâncer in vitro e in vivo da Virola sebifera apresentadas nesse estudo, nos permite avançar em pesquisas futuras, orientando a seleção de outros modelos e estudos de mecanismo de ação / Abstract: Cytotoxicity screening models provide important preliminary data to help select plant extracts with potential antitumor properties for future work. As part of a screen program searching for Brazilian medicinal plants and natural products with anticancer properties, the present investigation reports the anticancer activity the Virola sebifera (Myristicaceae), an endemic tree from the Brazilian Cerrado. The overall aim of this work was the evaluation of in vitro and in vivo properties of samples from V. sebifera, there for the isolation and identification of the active compounds. The first study describes the antiproliferative properties against human cell lines of two lignans and two polyketides isolated from leaves of V. sebifera. Herein we report the isolation and structure elucidation of a novel polyketide 3,5-dihydro-2-(r-oxo-3J-hexadecenyl)-2-cyclohexen-l-one with high antiproliferative activity against 8 human cancer cell lines. In the second study, we purified the active fraction (FR4) from the crude dichloromethanic extract with in vitro activity (IC5ri=5.19 - 10.57 pg/mL - SRB assay) against the same cell lines. In addition, the hollow fiber assay was used to study the effect in vivo of the active fraction (FR4). Using this model, we have established growth conditions for MCF-7, NCI-ADR and OVCAR03 cells implanted at the intraperitoneal (i.p.) and subcutaneous (s.c.) compartments of immunocompetent mice. Then, the animals were treated with FR4 (500 mg/kg). doxorubicin (6mg/kg) or vehicle only intraperitoneally. After 14 days the fibers were retrieved, followed by determination of living cell density by MTT staining. FR4 showed significant effect against breast (MCF-7) and ovarian (OVCAR03) tumor cells. The anticancer properties of Virola sebifera in vitro and in vivo was confirmed in this study. These findings may guide future studies in other models and detailed studies on the mechanisms of action / Doutorado / Farmacologia, Anestesiologia e Terapeutica / Doutor em Odontologia

Orientador: Adilson Leite / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-21T19:39:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Turcinelli_SilviaRegina_M.pdf: 5122448 bytes, checksum: f181f23e777e96ab7baab2729be3de58 (MD5) Previous issue date: 1996 / Mestrado / Genetica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Rolf Dieter Illg / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-23T13:18:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Siqueira_WalterJose_D.pdf: 11194906 bytes, checksum: fce62283a5b049541786b1b739673dae (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: Bulbinhos obtidos em 1987 do cultivo in vitro de ápices caulinares (meristemas) dos cultivares Lavínia 1632, Amarante e Roxinho 5063 foram plantados inicialmente em casa-de-vegetação (1988) e, posteriormente, em condições de campo (1989 a 1995), com a finalidade de avaliar o desempenho agronômico, a estabilidade e adaptabilidade fenotípicas. De 1988 a 1991, os plantios sucessivos para multiplicação dos materiais foram realizados individualmente, bulbo a bulbo, como progênies ou linhas clonais, procedendo-se da mesma forma para os cultivares controles. No ciclo de multiplicação de 1990, cinco plantas de cada progênie clonal foram amostradas ao acaso e avaliadas para os seguintes caracteres de parte aérea: comprimento (CF) e largura de folha (LF), diâmetro do pseudo-caule (DC) e sintomas de viroses nas folhas(VIR). Os bulbos colhidos nas cinco plantas amostradas foram pesados em dois períodos (PB1 e PB2).No ano de 1991, os bulbos de cada planta amostrada constituíram-se em novas progênies clonais, avaliando-se o vigor das plantas (VIG), VIR e peso médio de bulbo (PM). As correlações fenotípicas nos anos de 1990 e 1991 e entre os dois anos, para os grupos de progênies clonais formados (n° 5, n° 6, n° 8, n° 19 e n° 34) e os controles, mostraram uma estreita associação de caracteres de parte aérea, tanto dentro, como entre os ciclos estudados. O caráter VIR mostrou no plantio de 1990, coeficientes de correlação fenotípica negativos e significativos com DC (r=44,91 a -57,48) e com PBl (r=-46,48 a -56,32). No ano seguinte, o caráter VIR correlacionou-se também com VIG e PM. As correlações fenotípicas de pares de caracteres entre os dois anos ou ciclos de multiplicação, foram significativas e de média magnitudes para a maioria das progênies estudadas. O caráter DC/90, foi o que apresentou maior grau de associação com os caracteres VIR, VIG e PM avaliados no ciclo de 1991. Concluiu-se que, a seleção no campo de plantas com maior DC, num determinado ciclo, produziu uma descendência clonal visualmente mais sadia e mais produtiva no ciclo subseqüente. Observou-se neste trabalho que, a avaliação visual de sintomas de vírus nas folhas, mostrou-se adequada para indicar o comportamento dos caracteres ligados ao vigor e peso de bulbo dentro e entre ciclos de multiplicação. As correlações fenotípicas obtidas para os clones experimentais nos ensaios de 1992 a 1995, mantiveram esta mesma tendência. Sobressaíram-se nestes ensaios os clones experimentais Ct 19, ct 34 e ct Rx, além do cultivar controle Gigante de Curitibanos. A seleção massal de plantas de maior vigor no campo, em especial para o diâmetro do pseudo-caule, ou de bulbos maiores mostrou-se eficiente na recuperação da produtividade dos cultivares controles Lavínia 1632 e Amarante. O clone experimental Ct 19 apresentou redução de produtividade ano a ano de tal forma que, em 1995 a produção relativa média igualou-se ao do cultivar controle Lavínia 1632 com seleção. Fato este, não observado para o clone Ct 34 que manteve o rendimento elevado ao longo de quatro anos de multiplicação. A melhor razão de multiplicação em termos de peso de bulbilhos plantados e peso de bulbos colhidos por metro quadrado de parcela, ficou ao redor de 1:12 (Ct 34, Ct 19) enquanto que os respectivos controles, cv Amarante e Lavínia 1632, tiveram os valores de 1:9,4 e 1:9,8. O estudo sobre a influência do tamanho de bulbilhos plantados no peso de bulbo colhido mostrou uma maior resposta para os clones experimentais derivados de ápices caulinares do que os cultivares controles, exceto para o cultivar Gigante de Curitibanos. Finalmente, o estudo da estabilidade fenotípica dos materiais, por dois modelos estatísticos, revelou os clones Ct 34 e cv Gigante de Curitibanos como os mais responsivos às modificações do ambiente e com maior estabilidade fenotípica. O ct 19, por sua vez, foi mais responsivo aos ambientes desfavoráveis do que nos favoráveis, muito embora, neste ultimo, o patamar de produção inicial tenha sido superior do que os demais / Abstract: Bulblets obtained in 1987 from in vitro culture of stem shoot tip (meristems) of cultivars Lavinia 1632, Amarante and Roxinho 5063 were mul tiplied ini tially in greenhouse (1988) and, later, in field condi tions (1989 to 1995) in order to evaluate the agronomic performance and phenotypic stability as compared to each other and to control cultivars. From 1988 to 1991, the plantings for multiplication were made bulb by bulb, as clonal progenies. The same procedures were observed for the original control cultivars, Lavinia 1632, Amarante and Roxinho 5063. In the 1990 cycle of multiplication, five plants were sampled from each progeny and evaluated for the following vegetative characters: lenght (LF) and width (WF)of the foliar blade, diameter of the pseudo-stem (DS) and leaf vírus symptoms (VS). The bulbs harvested from the five plants sampled were weighed individually after 50 days (BW1) and 160 days (BW2) after harvest. The follow year, progenies from such bulbs were grown and vigor of plant (VP), meam bulb weight (MW)and VS were recorded. The phenotypic correlations obtained from the characters within and between years (199O and 1991) for the each formed groups of clonal progenies (nºs 5, 6, 8, 19 and 34) and the controls showed a close association of the vegetative characters, either within or between the cycles studied, especially for clones 19 and 34. In 1990, VS showed highly significant phenotypic correlation coefficients with DS (r= -44,91 to -57,48) and BWl (r= -46,48 to -56,32). In 1991, VS was also strongly correlated with VP and MW. The phenotypic correlations of the paired characters between both years or cycles of multiplication were significant and of medium magnitude in most of the progenies studied. The character DS/90 showed the highest associations with the three characters evaluated in the 1991 cycle, VIR, VIG and MW. It was concluded that field selection of plants with larger DS, in a given cycle, greatly contributed to obtain healthier plants and with higher yields in the next cycle. It was observed that the visual evaluation of virus symptoms in leaves, made in a practical way in field conditions, provided a reasonable indication about the influence of characters associated to vigor and bulb weight, within and between cycles of multiplication. The phenotypic correlations with the data collected in experiments from 1992 to 1995, maintained the same tendency. In these trials, the best performances were observed for Ct 19, Ct 34 and Ct Rx experimental clones, and the control cultivar Gigante de Curitibanos. Mass selection for plants with higher vigor in the field or with larger bulbs was efficient in recovering yield of controls cvs. Lavinia 1632 and Amarante. The clone ct 19 showed such an year-to year yield reduction that, in 1995, its mean relative yield was close to that of control cultivar Lavinia 1632, after mass selection of the later. In the other hand, Ct34 did not show decrease in mean yield along the years or cycles of multiplication. The best multiplication ratio, as to the weight of planted bulblets and harvested bulbs per meter square of plot, remained at around 1:12 (Ct 34, ct 19), while the respective controls, cv Amarante and Lavinia 1632 showed values of 1:9,4 and 1:9,8. The preliminary study about the influence of size of bulblets planted on harvested bulb weight showed a higher response of experimental clones derived from in vitro culture as compared to the control cul ti vars. The study of phenotypic stability, through two statistical models, indicated clones ct 34 and cv. Gigante de Curitibanos as the most responsive to environmental improvement, as well as showing the greatest phenotypic stability and adaptability. Clone Ct 19 was more responsive in unfavorable than in favorable environments, although, in the later, its initial yield level was higher than the others / Doutorado / Doutor em Ciências

Orientador: Denise Pontes Cavalcanti / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-26T08:28:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_GloriaMariaGellede_M.pdf: 4843279 bytes, checksum: 27aef7da5d82c9c4e1eaa77724b3ca53 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: o presente trabalho teve como objetivos: a avaliação da eficiência de uma técnica que permitisse o estudo citogenético de tecidos fatais de recém-nascidos cujos óbitos ocorressem no período perinatal , incluindo os fetos macerados; a avaliação da freqüência de anomalias cromossômicas entre esses fetos e a avaliação dos dados clínicos da população estudada. Essa investigação foi realizada através do estudo desses recém-nascidos cujos nascimentos ocorreram no CAISM-UNICAMP. O material para a investigação consistiu dos seguintes tecidos: sangue, pele ou cartilagem. Nos fetos macerados coletou-se somente cartilagem, enquanto que, nos não macerados procedeu.se a coleta de sangue ou pele e cartilagem. Para os estudos citogenéticos, a partir de linfócitos de sangue e de fibroblastos de pele, utilizou-se técnicas estandartizadas enquanto que para os condrócitos seguiu-se a técnica descrita por Urioste (Am J Med Genet 46:123, 1993) com modificações. A presente amostra foi formada predominantemente por fetos do sexo masculino, no entanto, a razão de sexo entre os fetos com cariótipos alterados foi de 1:3. A maioria dos fetos apresentou uma idade gestacional entre 28 e 36 semanas, pesou entre 500 e 1.500 g; 80% das idades maternas foram iguais ou inferiores a 30 anos. A maioria dos fetos dessa amostra era portadora de defeitos congênitos, 54,4%, e os principais defeitos estruturais acometiam os sistemas nervoso e urinário. Os resultados da avaliação citogenética indicaram uma freqüência total de anomalias cromossômicas de 11,0% (17,1 % entre os recém-nascidos malformados e 3,1 % entre os nãomalformados), sendo essa freqüência de 18,7% entre os natimortos e de 8,8% entre os óbitos neonatais. A taxa de sucesso com as culturas de condrócitos foi de 51,2%, a maioria das perdas ocorreram com as amostras de tecidos oriundos de fetos macerados. A alta freqüência de aberrações cromossômicas nessa amostra é decorrente de um viés de amostragem - coleta preferencial de material de malformados. Sobre a cultura de condrócitos, os dados do presente trabalho permitem concluir a sua ineficácia no estudo do fetos macerados delonga data, bem como, a sua utilidade como método complementar na investigação citogenética desses fetos / Abstract: The aims of the present study were the evaluation of a technic that rnakes possible the cytogenetic study of newbom babies' foetal tissue whose death happened in perinatal period including the macereted foetus, the estimate of their chromosomal aberration and the clinical data of the investigated population. That investigation carried out by the methodical study of those newbom babies whose births have taken place at CAISMUNICAMP. The material for the investigation was the following tissues: blood, skin or cartilage. Only cartilage was collected from the macerated foetus, while blood and skin were coIlected from non-macerated ones. For the cytogenetic studies, standard technics were used with Iymphocytes from blood and fibroblasts from the skin, while the technic related by Urioste, with some changes, (Am J Med Genet 46:123,1993) was used with chondrocytes. Male foetus constituted predominantly the present sample, but the proportion of female foetus eith changed karyotype was about three female foetus to one male fO9tus. The majority of foetus were between 28 and 36 weeks old, weighted between 500 and 1500 grams and 80% of their mothers aged 30 years or younger. The greater number of foetus from that sample had congenital abnormality (54,4%) and the main abnorrnalities were in relation to the nervous system and urinary system. The results of the cytogenetic estimate showed a total frequency of genetic abnorrnalities of 11,0% (17,1% belongs malformed babies and 3,1% in the group of non-malformed), from which 18,7% belongs to the stillbom babies and 8,8% to the neonatal deaths. The success rate for the chondrocytes cultures were 51,2% and the majority of losses owe to the samples of macerated foetus' tissues. The increasing frequency of genetic abnormalities in that sample happens because there were a preferential collect of malformed babies' material. About the cultures of chondrocytes, the data of the present study allow to conclude its inefficacy on the study about the Iong date macerated foetus and its usefulness asa complementary method on the cytogenetic investigation of those foetus / Mestrado / Genetica Humana e Medica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Mauro Faber de Freitas Leitão / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-26T10:57:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zacarchenco_PatriciaBlumer_M.pdf: 17769563 bytes, checksum: 08109a10c7352f9e406cf56e29bd58d9 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Nos últimos anos, em nível internacional, o microrganismo Bacillus sporothermodurans (BSP) vem sendo isolado a partir de leite processado pelo sistema UAT/UHT (Ultra Alta TemperaturalUltra High Temperature). Também no Brasil, mais recentemente, o microrganismo foi isolado a partir de amostras de leite UAT produzido em unidades industriais do Estado de São Paulo e Paraná. As amostras contaminadas apresentaram contagens em torno de 105UFC/ml sem evidências maiores de alterações organolépticas. No entanto, nestas condições, o leite UAT fica fora dos padrões exigidos pela legislação para o produto quanto a contagem de microrganismos aeróbios mesófilos, que é de 102UFC/ml(portaria SVSIMS n12451/97). Na primeira parte desta pesquisa, procurou-se avaliar e otimizar a metodologia para detecção de BSP, usando-se como referência a cepa DSMZ 10599, da Coleção Alemã de Microorganismos e Culturas Celulares (Deutsche Sammlug von Mikroorganismen und Zellkulturen). Em uma primeira etapa, avaliou-se qualitativa e quantitativamente o desempenho do ágar Infusão de Cérebro e Coração (BHI), ágar Padrão de Contagem (PCA) e o ágar Nutriente (NA) na contagem de BSP. Além disso, comparou-se as técnicas de inoculação em profundidade (pour p/ate) e espalhamento superficial (spread plate). Os melhores resultados foram obtidos pelo uso do ágar BHI (colônias mais diferenciadas e com melhor crescimento) e o uso da técnica de espalhamento superficial (maior uniformidade e crescimento das colônias). Numa segunda etapa formulou-se o meio diferencial (ágar BHI-E), com base na adição de 1g/I de esculina e 0,5gl1 de citrato férrico amoniacal, permitindo, assim, a melhor caracterização das colônias de BSP pelo seu enegrecimento e formação de halo escuro pela hidrólise da esculina. Numa terceira etapa, comprovou-se que a adição destes componentes não ocasionou quaisquer efeitos inibitórios comparativamente ao ágar BHI. Finalmente, numa última etapa, avaliou-se a eficiência da ágar BHI-E na diferenciação de BSP frente a outros Bacillus spp de ocorrência comum em produtos lácteos, caso de Bacillus cereus, Bacillus subtilis e Bacillus firmus. Na segunda parte da pesquisa, analisaram-se 100 amostras de leite UAT de 3 regiões do Brasil (Centro-Oeste, Sudeste e Sul) utilizando o ágar BHI-E desenvolvido na primeira fase. Verificou-se que 45% das amostras estavam fora dos padrões da Portaria SVS/MS no 451/97 e que 55% delas apresentavam esporos mesófilos termo-resistentes. Isolaram-se 300 colônias que hidrolisaram esculina e tinham aspecto semelhante às colônias do Bacillus sporothermodurans em ágar BHI-E. A maior parte dos isolados apresentou morfologia típica e produzia oxidase, sendo que poucos não fermentaram a glicose. Vinte e quatro cepas, da segunda etapa da pesquisa, tiveram o seu DNA cromossômico avaliado pelo método RAPD ("random amplified polymorphic DNA"). Os perfis de DNA obtidos permitiram dividí-Ias em 3 grupos que apresentaram perfiJde DNA muito semelhantes ao do BSP. / Abstrat: Bacillus sporothermodurans - BSP - has been isolated worldwide in milk processed by the ultra high temperature system (UHT-milk). More recently BSP has also been isolated in Brazil, partieularly in industrial samples processed in São Paulo and Paraná states. Ali the samples showed total counts around 105cfu/ml without any organoleptie ehanges. However based on Brazilian microbiological standards (Portaria SVS/MS nQ451/97) fixing a limit of 1& cfu/ml, the samples were eonsidered inadequate, being rejected. The objective of the first part of this research was the evaluation and improvement of the methodology for Bsp detection, employing as reference the strain DSMZ 10599 from Germany Colection of Microorganisms and Cells Cultures (Deutsche Sammlug von Mikroorganismen und Zellkulturen). In a first step, the performanee of Brain Heart Infusion agar (BHI agar), Total Plate Count Agar (PCA) e Nutrient agar (NA) were comparatively evaluated, considering tooa the inoculation methods (pour plate compared to spread plate). The results showed the best performance of BHI agar with more uniform and better growth of Bsp, the same being valid eoncerning the use of spread plate compared to the pour plate method. In a seeond step, it was formulated a differential medium named BHI-E agar, based on addition of 19/1 of esculin and 0,5gl1 of ferrie ammonium eitrate; with this modification, BSP showed typical black colonies with a black halo due to esculin hydrolisis. In a third step, it was concluded that BHI-E agar did not show any inhibitory effect when compared to BHI agar. Finally, in a last step, BHI-E agar was evaluated in relation to the other Bacillus spp commonly found em milk products, particularly Bacillus cereus, Bacillus subtilis and Bacillus firmus. In the second part of the research work, a total of 100 comercial samples of UHT milk produced in 3 different Brazilian regions (Center-east, southern and southeast) were analysed using BHI-E agar previously developed and tested. The results showed that 45% of the examined samples did not attend the Brazilian standards (Portarja SVS/MS nQ451197)and 55% were contamined with mesophilic thermoresistant bacterial species. A total of 300 esculin positive cultures were isolated with morphological and cultural aspects similar to BSP besides being oxidase positive but generally showing a slow glucose fermenting activity. Twenty four strains isolated at the second part of this research were sub-tiped by molecular typing (RAPO). These 24 strains could be separated in 2 groups according to their ONA pattern. The profiles of 3 groups were very similar to that ONA pattern of Bacillus sporothermodurans (BSP). / Mestrado / Mestre em Tecnologia de Alimentos

Orientador : Maria Lucia Furlan Wada / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T07:23:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SantosJunior_ArnaldoRodriguesdos_D.pdf: 11814677 bytes, checksum: 2777c85159ecc85a70f9d31eef949284 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Os biornateriais poliméricos são compostos desenvolvidos para serem utilizados como substitutos de tecidos danificados. Urna classe de biomateriais poliméricos utilizados são os bioabsorvíveis, que são compostos que se decompõe tanto in vitro quanto in vivo, e são utilizados em tecidos que necessitam de um suporte temporário até que a recomposição tecidual se concretize. Dentre os vários polímeros bioabsorvíveis, se destacam os dispositivos a base do poli(L-ácido láctico) [PLLA] por apresentar boa biocompatibilidade e os produtos de sua decomposição serem eliminados do corpo por vias metabólicas. Membranas densas de PLLA ou com poros de diferentes diâmetros (> que 451lm, entre 180-2501lm e entre 250-350Ilm) foram avaliadas quanto a adesão, crescimento e diferenciação de células fibroblásticas em cultura. Observamos que as células aderem lentamente às membranas de PLLA. Uma vez aderi das, as células apresentaram variações em seus padrões morfológicos de acordo com as características estruturais do substrato no qual elas cresceram. Em todos os substratos de PLLA estudados, as células não apenas foram capazes de proliferar sobre a superficie dos mesmos como também foram hábeis em produzir uma matriz extracelular rica em colágeno tipo IV e fibronectina. Avaliamos também o comportamento das células fibroblásticas sobre blendas de PLLA com poli(hidroxibutirato-co-hidroxivalerato) [pHBV] em diferentes proporções (100/0, 60/40, 50/50, 40/60, 0/100). Nas blendas de PLLAlPHBV, também observamos a adesão celular lenta e uma morfologia variável, variando de células arredondadas à completamente achatadas e unidas por prolongamentos, de acordo com as características fisicas e topográficas do substrato. Também observamos que os substratos foram capazes de estimular a proliferação celular e a produção de um matriz extracelular rica em colágeno tipo IV e fibronectina. A análise conjunta dos resultados mostra que os diferentes substratos a base de PLLA estudados não apresentam toxicidade, uma vez que as células são capazes de crescer e proliferar sobre eles. Sobretudo, as células foram capazes de se diferenciarem sobre os diferentes polímeros, uma vez que passam a produzir uma matriz extracelular rica em colágeno IV, comportamento incomum a células fibroblástica / Abstract: Polymeric biomaterials are developed compounds used as substitutes for damaged tissue. A c1ass of biomaterials is the bioabsorbable ones, which are polymers that degrade in vitro as well as in vivo and are used in tissues that need a temporary support until its tissue regeneration happens. Among the several bioabsorbable polymers, the poly (L-acid lactic) [PLLA] based devices are eminent because their decomposition products are eliminated ITom the body by metabolic ways and due to their good biocompatibility. PLLA dense membranes or with different diameter pores (smaller than 45 Ilm, between 180-2501lm and 250-350Ilm) were evaluated by their ability of stimulating adhesion, growth and differentiation of tibroblastic cells in culture. We observed that the cells adhere slowly to the dense and porous PLLA membranes. Once adhered, they presented a differentiated morphological pattern in accordance with the substrate characteristics that they had grown. In ali the PLLA substrates studied, the cells were not on1y capable of proliferating over the substrates but also producing an extracellular matrix, rich in type IV collagen and tibronectin. We also evaluated the tibroblastic cells behavior over the different proportions blends of PLLA with poly(hydroxybutirate-co-hydroxyvalerate) [pHBV] (100/0, 60/40, 50/50, 40/60, 0/100). At the PLLA/PHBV blends, we also noticed a slowly cellular adhesion and a variable morphology according to the physical and surface substrate characteristics. We also observed that the substrate were capable of stimulating cell proliferation and the production of an extracellular matrix rich in type IV collagen and tibronectin. The results analysis show that the different PLLA based substrates studied, do not present toxicity, once the cells could differentiate over the different polymers, which was demonstrated by the production of an extracellular matrix rich in type IV collagen, an uncommon behavior to tibroblastic cells / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Liana Maria Cardoso Verinaud / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-12T14:30:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Machado_CamilaMariaLongo_D.pdf: 7157144 bytes, checksum: 5e608dc117fd0920bfcd8bdf16a6ccd0 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Gliomas malignos são tumores de Sistema Nervoso Central extremamente freqüentes, correspondendo a 46% dos casos diagnosticados de Neoplasias Cerebrais. Segundo a Organização Mundial de saúde o glioblastoma multiforme representa aproximadamente 3,9% dos óbitos a cada 100.000 habitantes nos Estados Unidos da América e Europa. Este tipo tumoral é extremamente agressivo e os pacientes acometidos apresentam média de vida de apenas um a dois anos após ressecção cirúrgica. Os tratamentos posteriores à retirada da massa tumoral são a quimioterapia e radioterapia. Assim, há um grande interesse na busca por novas estratégias terapêuticas que se mostrem eficazes no tratamento de pacientes acometidos por glioblastomas. Neste sentido, a utilização de linhagens celulares, estabelecidas à partir de tumores brutos extraídos de pacientes, tem-se mostrado uma ferramenta útil tanto ao avanço nos conhecimentos biológicos sobre tumores primários; quanto ao desenvolvimento de novos agentes terapêuticos. Foi estabelecida em nosso laboratório uma nova linhagem derivada de glioma humano, denominada NG97. Estudos preliminares confirmaram a origem astrocitária das células e a preservação de malignização, demonstrada pelo desenvolvimento de massa tumoral a partir do xenotransplante de células cultivadas in vitro em camundongos atímicos. O presente trabalho teve como objetivo ampliar os conhecimentos biológicos acerca desta linhagem tumoral. Assim foram atribuídas as células da linhagem ultraestruturas típicas de células indiferenciadas e tumores astrocíticos. Também, elucidaram-se características mofológicas atribuídas a linhagens tumorais astrocíticas como a expressão de proteínas GFAP, vimentina, integrina a5ß1, fibronectina, laminina e CD44. Combinada a expressão destas moléculas responsáveis pela adesão célula ao substrato, foi demonstrado que as células uma vez desprovidas do contato adesivo desenvolvem uma estrutura tridimensional organotipica. Quanto a expressao de moléculas envolvidas no processo de resposta imune das células in vivo, não foram detectadas nas células NG97: HLA I,HLAII, B7 (CD80), TGF-ß e Fas (CD95). Em cultura, as células NG97 apresentam variadas aberrações numéricas com cariótipo hiperplóide e inumeros cromossomos aneuploides classificados como um de lote cromossomos murinos associados. Este ultimo, pode ser representado por um lote próximo ao triploide murino (neartriploid, i.e.; 30 cromossomos murinos mais ou menos 11 cromossomos murinos). Finalmente demonstrou-se a sensibilidade das células NG97 ao quimioterapico Cisplatina tanto in vitro quanto in vivo. Portanto a caracterização da linhagem NG97 aqui realizada fundamenta a sua utilização como modelo biológico aos mais diversos estudos. / Abstract: Astrocytomas are extremely aggressive malignancies of the Central Nervous System (CNS) and account for 46% of all primary malignant brain tumors. The perspective for patients with malignant gliomas is poor and the average survival expectancy is less than a year. Progression to a worsened prognosis occurs in 85% of the cases due to changes in cell tumor microenvironment and through biological pathways that are still unclear. These neoplasias grow rapidly and contain high cellularity with marked hyperchromatism and pleomorphism. The hystophatological identity of glioblastoma is the prominent vascularity as well as the area of necrosis surrounded by neoplastic pseudopalisading cells, as a result of microenvironment hypoxic conditions. In order to clarify those issues, cultured cell lines are valuable tools to be employed on tumor related assays as long as they are established and well characterized. Our laboratory set up the NG97 cell line derived from a human astrocytoma grade III, which was injected in the athymic nude mice flank and turned to develop and express phenotypic characteristics of an astrocytoma grade IV. This study aimed to expand the biological knowledge about this tumor cell line. In this way, clarified morphological, immunophenotypic, and cytogenetic characteristics as well as confirmed sensitivity to cisplatin chemotherapeutic agent in cells NG97. These features attributed to NG97 cell line are unique qualities that make them an important model for the study of biology and therapeutic strategies in astrocytomas. / Doutorado / Imunologia / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Orientador: Carlos Alberto Petta / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-14T05:22:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cossiello_RaquelDiFalco.pdf: 3774222 bytes, checksum: 96b4cbfa6f25f58d8240f552b5c83617 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Objetivo: comparar os efeitos de quatro diferentes meios de cultura na morfologia dos zigotos e embriões. Materiais e métodos: estudo retrospectivo conduzido no Centro de Reprodução Humana de Campinas, em que 2.289 embriões de 319 ciclos de ICSI foram avaliados de setembro de 2006 a setembro de 2008. O protocolo longo foi usado para estimulação ovariana em todos os casos. Todos os oócitos foram cultivados em dois meios diferentes. O meio HTF (Irvine Scientific) foi usado como meio-padrão, enquanto que os meios Universal IVF Médium (Medicult), Global (LifeGlobal) e IVF-30 (Vitrolife) foram usados como secundários. A separação dos oócitos em meios diferentes foi realizada alternadamente após ICSI. A presença e a posição de pronúcleos e Nuclear Precusror Bodies (NPBs) foram checadas 18 a 20 horas após ICSI. Baseado na classificação descrita por Gianaroli et al., os zigotos foram identificados como: (A1) pronúcleos justapostos e centralizados com NPBs grandes e alinhados; (A2) pronúcleos justapostos e centralizados com NPBs grandes e dispersos. Os embriões foram avaliados 44 a 46 horas após ICSI, de acordo com o número de blastômeros, porcentagem de fragmentação e multinucleação. Os embriões considerados top apresentaram quatro blastômeros regulares, fragmentação menor que 20% do volume embrionário e blastômeros não multinucleados. Para a análise dos dados foram utilizados Z-test, odds ratio simples e múltiplo através de regressão logística com seu respectivo intervalo de confiança a 95%. Resultados: quando a classificação dos zigotos foi analisada, o meio IVF-30 mostrou maior porcentagem (55,2%) de zigotos A1+A2, em relação ao HTF, Global e Universal IVF Medium (49,1%, 44,7% e 44,2%, respectivamente). A porcentagem de embriões top foi significativamente maior no meio Global (40,4%) comparado com HTF (21,1%), IVF-30 (25,0%) e Universal IVF Medium (11,1%). No segundo dia de desenvolvimento, Medicult produziu mais embriões com três células em relação aos outros meios que produziram mais embriões com quatro células. Conclusão: Houve diferenças significativas entre os quatro meios de cultura sobre a morfologia dos zigotos e a morfologia embrionária. IVF-30 (Vitrolife) resultou em maior número de zigotos com pronúcleos centralizados e nucléolos justapostos e dispersos. Global (LifeGlobal) sustentou maior formação de embriões top no dia 2 e maiores taxas de clivagem em relação aos demais meios / Abstract: Objective: compare the effects of four different culture media on the quality of zygotes and embryos. Methods: This retrospective study, performed at the Center for Human Reproduction of Campinas-Brazil analyzed 2289 embryos were assessed from September 2006 to September 2008. Long protocol was used for ovarian stimulation in all cases. The oocytes of each patient were cultivated in two different culture media. The medium HTF - Irvine was set as the default for all cycles and IVF Medium - Medicult, GGG 20 - Global and IVF 30 - Vitrolife defined as secondary media. The sibling oocytes were divided in the two culture media after ICSI. The confirmation of fertilization and classification as described by Gianaroli were evaluated 18-20 hours after ICSI. On the second day (day 2) of development, the embryos were evaluated according the number of cells, percentage of fragmentation and number of nuclei. On day 2, the embryos that had four cells with less than 20% of fragmentation and were mononucleated embryos were classified as Top. Z-test and Odds ratios were used for statistical analysis. Results: IVF-30 showed a higher percentage (55.2) of zygotes A1 + A2 when compared to HTF, Global and Universal IVF Medium media (49.1%; 44.7%; 44.2% respectively) The percentage of Top embryos was significantly higher in Global medium (40.4%) compared to HTF (21.1%), IVF-30 (25.0%) and Universal IVF medium (11.1%). On day 2 Universal IVF Medium produced more embryos with three blastomeres when compared to other media that produced more embryos with four blastomeres. Conclusions: The use of IVF- 30 medium resulted in a higher number of zygotes with centralized pronuclei with juxtaposed or scattered nucleoli. Meanwhile, Global medium produced a greater number of morphologically good embryos (TOP) and higher cleavage rate on the second day of development / Universidade Estadual de Campi / Tocoginecologia / Mestre em Tocoginecologia