No presente estudo avaliamos a influência do Metotrexato (MTX-3mg/kg/semana) e do Corticosteróide (CE- prednisona 1,05 mg/kg/semana), ministrados de forma isolada, associados entre si, ou associados ao Ácido Folínico (AF- 0,25 mg/kg/semana) e ao Ácido Zoledrônico (ZOL- 0,1mg/kg dose única) respectivamente, na osseointegração de implantes de titânio realizados 6 semanas após o início da administração das drogas, em coelhos NZW. Os animais (2,67 ± 0,67 Kg) foram tratados durante um total de 18 semanas com solução salina (CTL; n=6), MTX (n=6), CE (n=8), MTX-CE (n=6), MTX-AF (n=6) e CE-ZOL (n=6). Foram realizadas análises de densitometria mineral óssea (DMO) na tíbia e na coluna antes e após os tratamentos para avaliação da variação da DMO (Delta DMO). Os resultados revelaram perda de osso cortical nos grupos tratados com CE (Delta DMO tíbia: 0,018 ± 0,010 vs CTL: 0,040 ± 0,011 p= 0,001; Delta DMO coluna: 0,004± 0,011 vs CTL: 0,055 ± 0,009 p= 0,009). A adição de ZOL ao CE reverteu a perda de DMO (Delta DMO tíbia: 0,027 ± 0,003 p= 0,002 em relação ao CE; Delta DMO coluna: 0,043 ± 0,011 p= 0,02 em relação ao CE). O tratamento com MTX não promoveu alteração da DMO. As análises histomorfométricas das tíbias com e sem o implante, foram realizadas 12 semanas após a colocação dos implantes, e os resultados mostraram uma redução de espessura cortical e de tecido ósseo em função do tratamento com CE sendo que a adição de ZOL reverteu também esse parâmetro. Da mesma forma, o percentual de contato entre osso e o implante foi alterado pelo tratamento com CE (CE: 25,98% vs. CTL: 42,40%; p= 0,013) e o ZOL reverteu esse efeito (CE- ZOL: 38,95% vs. CE: 25,98%; p= 0,014). Em conjunto, nossos resultados mostraram que a terapia com MTX não alterou a osseointegração de implantes de titânio, enquanto que o CE promoveu uma diminuição de contato entre osso e implante que foi revertida pela administração de ZOL, comprovando a eficácia terapêutica dessa associação. / In this study we evaluated the influence of Methotrexate (MTX- 3mg/kg/week) and Corticosteroid (CE- prednisona 1, 05 mg/kg/week), alone and in association with Folinic Acid (FA- 0, 25 mg/kg/week) and Zoledronic Acid (ZOL-0,1mg/kg/week) respectively, on osseointegration of titanium dental implants performed 6 weeks after treatment started in adult male NZW rabbits. Six animals in each group and eight in CE, were treated with the drugs during 18 weeks with exception of ZOL, which was infused as a single dose, at the moment of surgery. Dual-energy X-ray absorptiometryies were performed before and after treatment to determine bone mineral density alterations (Delta BMD). After 12 weeks post-implant placement, the animals were sacrificed for histomorphometric analysis. The BMD was significantly reduced by treatment with CE (Delta tibia: 0.018±0.010 vs CTL: 0.040±0.011; Delta lumbar: 0.004±0.011 vs CTL: 0.055±0.009), with recovery of BMD after ZOL administration (Delta tibia: 0,027± 0,003 vs CE: 0,018±0,010; Delta lumbar: 0.043±0.011 vs CE: 0.004±0.011). The BMD was not altered by MTX treatment or MTX-FA. The histomorphometric analysis revealed cortical bone loss and reduction in bone tissue in tibia in animals treated with CE, and these parameters were reversed by ZOL. Similarly, the percentage of bone to implant contact was reduced in the group treated with CE (CE: 25.98% vs. CTL: 42.40%; p=0.013), and reverted by ZOL (CE+ZOL: 38.95% vs. CE: 25.98%; p=0.014).The MTX and MTX-FA treatments did not alter osseointegration of the implant (35.09% and 35.92% respectively). Together our results showed that therapy with MTX did not interfere on osseointegration of titanium implants, while the CE reduced the bone to implant contact. ZOL administration reversed this effect, showing the therapeutic importance of this association.

A maior parte dos distúrbios metabólicos da doença renal crônica (DRC) é revertida após um transplante renal bem-sucedido. Porém, alterações do metabolismo ósseo podem permanecer e estão associadas ao aumento de fraturas, calcificação vascular, perda de enxerto e mortalidade. A expressão óssea de proteínas osteocíticas está alterada na DRC e parece contribuir negativamente para a homeostase óssea. Há relatos de aumento da expressão óssea de FGF-23 e esclerostina em crianças que receberam transplante de órgãos sólidos em comparação com voluntários normais. Entretanto, análise da expressão destas proteínas em receptores adultos ainda não foi realizada. Avaliação de biopsia óssea em 31 pacientes uma semana antes e 1 ano após o transplante renal. Realizada histomorfometria óssea e avaliação das proteínas ósseas através de imunohistoquimica, multiplex e expressão gênica. Na avaliação das biópsias antes do transplante, houve concordância entre os achados de imunohistoquimica e multiplex para esclerostina e FGF-23. Um ano após o transplante renal bem-sucedido, observamos diminuição dos níveis séricos do PTH, TRAP5b, fosfatase alcalina óssea, FGF-23, OPG e esclerostina. Apesar da diminuição da esclerostina sérica, houve aumento de seu conteúdo ósseo pela imunohistoquimica, multiplex e expressão gênica. Também foi observado aumento do conteúdo proteico e da expressão gênica da beta-catenina fosforilada, confirmando a inibição da via Wnt. Esta inibição foi acompanhada do aumento do conteúdo ósseo de RANKL e diminuição da OPG. Em relação ao FGF-23, houve concordância entre níveis séricos e conteúdo proteico, confirmando sua menor síntese pelos osteócitos, e portanto, menor nível sérico, após o transplante renal. A recuperação da função renal após o transplante é acompanhada de mudanças nas proteínas séricas e ósseas. A esclerostina óssea aumentou, apesar da diminuição do nível sérico, acompanhada de mudanças em outras proteínas que confirmam a inibição da via Wnt. Esse achado pode ajudar a desvendar a fisiopatologia da doença óssea pós transplante e guiar a busca por novas terapias / Most of the metabolic disorders of chronic kidney disease (CKD) improve after kidney transplantation, although bone metabolism might remain compromised, which is evidenced by high rates of bone loss, fractures and vascular calcification. Osteocytic bone protein expression is altered in CKD, and this seems to contribute negatively to bone health in these patients. It has been described that FGF-23 and sclerostin expression is increased in children after solid organ transplantation. However, little is known about bone-related proteins expression in adult recipients, which were analyzed prospectively in this study. Transiliac bone biopsies were obtained from 31 adult patients one week before and one year after transplantation. Bone fragments were used for histomorphometric analysis, as well as for bone proteins expression, measured by immunohistochemistry (IH) and multiplex. At baseline, we observed a significant correlation between IH expression and multiplex concentrations for sclerostin and FGF-23. After a successful transplant, there was a decrease in PTH, TRAP5b, bone alkaline phosphatase, FGF-23, OPG and sclerostin. Although serum sclerostin decreased after the transplant, bone content of this protein increased through immunohistochemistry, multiplex and gene expression. We also observed an increase in the bone content and bone expression of phosphorylated beta-catenin, confirming the Wnt pathway inhibition, which was accompanied by RANKL increase and OPG decrease in the bone. A significant decrease in FGF-23 bone concentration was also seen, compatible with the serum decrease. Kidney function recovery after transplant is accompanied by significant changes in many bone proteins expression. Contradictory to the decrease in levels of serum sclerostin, its bone expression, actually, has increased, accompanied by the change of other proteins that confirm the Wnt pathway inhbition. This findings could help to unveil the patophysiology of post transplant bone disease and help to guide the search to new therapies

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:30:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 438871.pdf: 2788222 bytes, checksum: aa94bbb31ea254da3b082595c7658ecb (MD5) Previous issue date: 2011-12-02 / The aim of this work was to compare clodronate and zoledronic acid effect on the repair of surgical wounds induced by tooth extraction and oral soft tissue lesion. Thirty-four rats (Rattus novergicus, Wistar) were allocated into 3 groups: (1) 12 animals treated with zoledronic acid; (2) 12 animals treated with clodronate; and (3) 10 animals that were given saline solution. Elapsed 90 days from the beginning of the treatment, the animals were subjected to tooth extractions and surgical-induced soft tissue injury in maxillae. At 180 days of drug administration, they were euthanized. After macroscopic evaluation, maxillae were processed and histological cuts were stained with hematoxylin and eosin (H&E). Immunohistochemical expression of RANKL, OPG, von Willebrand and caspase-3 was also evaluated. Non-vital bone, inflammatory infiltrate, microbial colonies, epithelial tissue, connective tissue and vital bone were quantified at the tissue wound sites. At the tooth extraction site, root fragments were also evaluated. The variables were quantified with Image Pro Plus software. Macroscopic analysis at the tooth extraction site showed that zoledronic acid group was associated with loss of mucosal integrity (chi-square, residual adjusted analysis, p<0.001), whereas at the soft tissue wound site, no group showed this association (chi-square, p=0.151). At the tooth extraction site, the zoledronic acid group showed greater proportion of non-vital bone and microbial colonies in comparison with the other groups. At the soft tissue wound site, the proportions of non-vital bone and microbial colonies were greater in the zoledronic acid and clodronate groups than in the control group. There was no significant difference for epithelial tissue, inflammatory infiltrate and root fragments between the groups (Kruskal-Wallis test complemented by its multiple comparisons test, p>0.05). Immunohistochemical expression of RANKL, OPG, von Willebrand and caspase-3 at tooth extraction and soft tissue wound sites did not differ significantly between the three groups analyzed (Kruskal-Wallis test, p>0.05). According to the results, (1) both bisphosphonates zoledronic acid and clodronate are capable of inducing osteonecrosis; (2) the immunohistochemical analysis suggests that the involvement of soft tissues as the initiator of osteonecrosis development is less probable than has been pointed out. / A presente pesquisa teve por objetivo comparar a influ?ncia dos bisfosfonatos ?cido zoledr?nico e clodronato no reparo de feridas cir?rgicas induzidas por meio de exodontia e les?o de tecido mole oral. Trinta e quatro ratos (Rattus novergicus, linhagem Wistar) foram distribu?dos em tr?s grupos: (1) 12 animais tratados com ?cido zoledr?nico; (2) 12 animais tratados com clodronato; e (3) 10 animais que receberam solu??o salina. Decorridos 90 dias do in?cio do tratamento, os animais foram submetidos a exodontias e procedimentos cir?rgicos em tecido mole, ambos na maxila. Aos 180 dias de administra??o dos f?rmacos, foi realizada a eutan?sia. Ap?s avalia??o macrosc?pica, as maxilas foram processadas, e os cortes histol?gicos corados por hematoxilina e eosina (H&E), bem como submetidos a processamento imunoistoqu?mico com os marcadores RANKL, OPG, von Willebrand e caspase-3. Nas l?minas coradas por H&E, foram quantificadas as vari?veis osso n?o-vital, osso vital, infiltrado inflamat?rio, col?nias microbianas, tecido epitelial e tecido conjuntivo, sendo que, no s?tio das exodontias, os restos radiculares tamb?m foram avaliados. A an?lise histol?gica foi realizada por meio do programa Image Pro Plus. Na avalia??o macrosc?pica, no s?tio das exodontias o grupo ?cido zoledr?nico exibiu associa??o com solu??o de continuidade da mucosa (qui-quadrado, an?lise de res?duos ajustados, p<0,001), enquanto na ?rea de les?o de tecido mole, nenhum grupo exibiu essa associa??o (qui-quadrado, p=0,151). No s?tio das exodontias, o grupo ?cido zoledr?nico exibiu propor??o significativamente maior de osso n?o-vital e col?nias microbianas do que os demais grupos. Na les?o de tecido mole, a propor??o de osso n?o-vital e col?nias microbianas foi significativamente maior nos grupos ?cido zoledr?nico e clodronato do que no controle. N?o houve diferen?a significativa das vari?veis tecido epitelial, infiltrado inflamat?rio e resto radicular entre os grupos (Kruskal-Wallis teste de compara??es m?ltiplas, p>0,05). A express?o imunoistoqu?mica de RANKL, OPG, von Willebrand e caspase-3 tamb?m n?o diferiu significativamente entre os grupos (Kruskal-Wallis, p>0,05). Os resultados permitem concluir que (1) ambos, ?cido zoledr?nico e clodronato, s?o capazes de induzir osteonecrose; (2) de acordo com a an?lise imunoistoqu?mica, ? pouco prov?vel que eventos intr?nsecos ? mucosa oral sejam os iniciadores da osteonecrose.

A maior parte dos distúrbios metabólicos da doença renal crônica (DRC) é revertida após um transplante renal bem-sucedido. Porém, alterações do metabolismo ósseo podem permanecer e estão associadas ao aumento de fraturas, calcificação vascular, perda de enxerto e mortalidade. A expressão óssea de proteínas osteocíticas está alterada na DRC e parece contribuir negativamente para a homeostase óssea. Há relatos de aumento da expressão óssea de FGF-23 e esclerostina em crianças que receberam transplante de órgãos sólidos em comparação com voluntários normais. Entretanto, análise da expressão destas proteínas em receptores adultos ainda não foi realizada. Avaliação de biopsia óssea em 31 pacientes uma semana antes e 1 ano após o transplante renal. Realizada histomorfometria óssea e avaliação das proteínas ósseas através de imunohistoquimica, multiplex e expressão gênica. Na avaliação das biópsias antes do transplante, houve concordância entre os achados de imunohistoquimica e multiplex para esclerostina e FGF-23. Um ano após o transplante renal bem-sucedido, observamos diminuição dos níveis séricos do PTH, TRAP5b, fosfatase alcalina óssea, FGF-23, OPG e esclerostina. Apesar da diminuição da esclerostina sérica, houve aumento de seu conteúdo ósseo pela imunohistoquimica, multiplex e expressão gênica. Também foi observado aumento do conteúdo proteico e da expressão gênica da beta-catenina fosforilada, confirmando a inibição da via Wnt. Esta inibição foi acompanhada do aumento do conteúdo ósseo de RANKL e diminuição da OPG. Em relação ao FGF-23, houve concordância entre níveis séricos e conteúdo proteico, confirmando sua menor síntese pelos osteócitos, e portanto, menor nível sérico, após o transplante renal. A recuperação da função renal após o transplante é acompanhada de mudanças nas proteínas séricas e ósseas. A esclerostina óssea aumentou, apesar da diminuição do nível sérico, acompanhada de mudanças em outras proteínas que confirmam a inibição da via Wnt. Esse achado pode ajudar a desvendar a fisiopatologia da doença óssea pós transplante e guiar a busca por novas terapias / Most of the metabolic disorders of chronic kidney disease (CKD) improve after kidney transplantation, although bone metabolism might remain compromised, which is evidenced by high rates of bone loss, fractures and vascular calcification. Osteocytic bone protein expression is altered in CKD, and this seems to contribute negatively to bone health in these patients. It has been described that FGF-23 and sclerostin expression is increased in children after solid organ transplantation. However, little is known about bone-related proteins expression in adult recipients, which were analyzed prospectively in this study. Transiliac bone biopsies were obtained from 31 adult patients one week before and one year after transplantation. Bone fragments were used for histomorphometric analysis, as well as for bone proteins expression, measured by immunohistochemistry (IH) and multiplex. At baseline, we observed a significant correlation between IH expression and multiplex concentrations for sclerostin and FGF-23. After a successful transplant, there was a decrease in PTH, TRAP5b, bone alkaline phosphatase, FGF-23, OPG and sclerostin. Although serum sclerostin decreased after the transplant, bone content of this protein increased through immunohistochemistry, multiplex and gene expression. We also observed an increase in the bone content and bone expression of phosphorylated beta-catenin, confirming the Wnt pathway inhibition, which was accompanied by RANKL increase and OPG decrease in the bone. A significant decrease in FGF-23 bone concentration was also seen, compatible with the serum decrease. Kidney function recovery after transplant is accompanied by significant changes in many bone proteins expression. Contradictory to the decrease in levels of serum sclerostin, its bone expression, actually, has increased, accompanied by the change of other proteins that confirm the Wnt pathway inhbition. This findings could help to unveil the patophysiology of post transplant bone disease and help to guide the search to new therapies